CN1290707A - 核苷5’－硫代磷酰氨基酸酯化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种核苷5’－硫代磷酰氨基酸酯化合物,其结构式为右式,制备方法为:首先将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中,加入氨基酸甲酯盐酸盐,搅拌后滴加缚酸剂,反应完成后,过滤,旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质,最后用氨水进行水解,用硅胶柱进行柱层析分离,即可得到本发明的产物。本发明的化合物,可用于开发抗病毒、抗肿瘤、抗HIV活性药物。

Description

核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物

本发明涉及一类新型的核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，该类化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗肿瘤、抗HIV等药物活性，可在临床应用中发展成为一种核苷类抗病毒、抗肿瘤、抗HIV前药(prodrugs)。

硫代磷酸在磷原子上含有一个硫取代氧的结构，虽然这个结构仍然保留着原来的电荷，保留着高水溶性的性质，但硫代磷酸的寡聚脱氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物学属性均与天然的磷酸二酯原型有很大的差别。最显著的差别之一是硫代磷酸对核酸酶具有抵抗性。由于细胞内外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯类反义寡聚核苷酸，使其丧失作用功能。

本发明的目的是研制一类核苷-硫代磷酰氨基酸酯化合物，通过合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸类化合物，合成寡聚脱氧核糖核酸，以用于开发抗病毒、抗肿瘤、抗HIV活性药物。

本发明制备的核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物共有以下四种，

其中第一种为腺苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤：1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。2)向上述溶液中加入相同物质量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。

其中的第二种化合物为鸟苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₃。

上述化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。

其中的第三种化合物为胞苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。

其中的第四种化合物为尿苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙安，N-甲基咪唑)。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥THF中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。

上述合成的系列化合物经CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验发现均有不同程度的活性，可以用于开发抗病毒、抗肿瘤、抗HIV活性药物。

以下是本发明的实施例：

实施例1：腺苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物腺苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为68．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(DMSO-d₆，δ：ppm，J：Hz)：δ59．38，58．62；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ9．26，9．22(bs，1H，NH)，8．43(1H，s，H-2)，8．23(1H，s，H-8)，7．40(2H，s，NH₂)，6．44(1H，m，H-1′)，4，50(2H，m，H-2′，3′)，3．97(1H，m，H-4′)，3．88(3H，s，

OCH₃)，3．64(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)；¹³C NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ173．24(COOMe)，163．70(C-2)，150．43(C-4)，140．76(C-6)，101．76(C-1′)，87．74(C-5)，84．83(C-2′)，73．54(C-3′)，69．80(C-4′)，60．87(C-5′)，54．78(OCH₃)，45．86(C-α)；ESI-MS(pos．)：m／z 435(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m/z 433(M-H)^-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

HIV=Human immunodeficiency virus

MT-4=Human leukenia T cell

CEM=Human lymphoblastoid T cell

ED₅₀=抗病毒活性指标

CD₅₀=细胞毒性指标

ED₅₀   CEM-TK-       5×10^-4M       (CD₅₀ 7×10^-6M)

        CEM-SS        4×10^-3M       (CD₅₀ 9×10^-5M)

       MT 4           2×10^-1M    (CD₅₀  8×10^-6M)

实施例2：腺苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3。化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物腺苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为66．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(DMSO-d₆，δ：ppm，J：Hz)：δ59．86，58．53；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．89(1H，s，H-2)，8．67(1H，s，H-8)，7．67(2H，s，NH₂)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH₃)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(2H，m，H-α)，1．31，1．30(3H，d，³J=6，β-CH₃)；¹³C NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ180．24(COOMe)，170．70(C-2)，156．43(C-4)，l49．76(C-6)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)：m/z 449(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m/z 447(M-H)^-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀    CEM-TK-        8×10^-3M        (CD₅₀  3×10^-6M)

         CEM-SS         6×10^-3M        (CD₅₀  9×10^-5M)

         MT 4            8×10^-4M        (CD₅₀  6×10^-6M)

实施例3：腺苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C₆H₅CH₂。化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物腺苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为69．7％。波谱数据如下：³¹P NMR(DMSO-d₆，δ：ppm，J：Hz)：δ60．64，60．33；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ9．21，9．15(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．88(2H，s，NH₂)，7．15-7．35(5H，m，Ph)，6．59(1H，m，H-1′)，4，55(2H，m，H-2′，3′)，4．37(1H，m，H-4′)，3．79(3H，s，OCH₃)，3．66(2H，m，H-5′)，3．48(2H，m，H-α)，2．32(2H，m，H-β)；¹³C NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ174．24(COOMe)，170．60(C-2)，159．43(C-4)，148．36(Ph-Jpso)，136．11(C-6)，135．12(Ph-para)，130．42(Ph-ortho)，119．91(Ph-meta)，108．23(C-1′)，89．65(C-5)，87．87(C-2′)，76．23(C-3′)，72．66(C-4′)，61．23(C-5′)，56．82(C-β)，56．78(OCH₃)，52．73(C-α)；ESI-MS(pos．)：m/z 527(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m/z 525(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        8×10^-2M        (CD₅₀  4×10^-5M)

        CEM-SS         9×10^-3M        (CD₅₀  4×10^-6M)

        MT 4            6×10^-5M        (CD₅₀  5×10^-6M)

实施例4：腺苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CHCH。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物腺苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为59．2％。波谱数据如下：³¹P NMR(DMSO-d₆，δ：ppm，J：Hz)：δ56．32，56．14；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH₂)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH₃)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．61(3H，s，CH₃)，1．42(3H，s，CH₃)；¹³C NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ172．24 (COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5’)，54．78(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．40(CH₃)，26．86(CH₃)；ESI-MS(pos．)：m/z 518(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m/z 516(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        7×10^-3M        (CD₅₀  8×l0^-6M)

        CEM-SS         6×10^-3M        (CD₅₀  5×10^-6M)

        MT 4            8×10^-4M        (CD₅₀  6×10^-5M)

实施例5：腺苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CHCH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物腺苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为65．2％。波谱数据如下：³¹p NMR(DMSO-d₆，δ：ppm，J：Hz)：δ58．32，57．68；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ9．31，9．27(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH₂)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH₃)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(1H，m，H-γ)，1．61(3H，s，CH₃)，1．42(3H，s，CH₃)；¹³C NMR(500MHz，DMSO-d₆)：δ172．24(COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，109．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，46．35(C-γ)；ESI-MS(pos．)：m／z 492(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 490(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-       5×10^-4M        (CD₅₀  2×10^-6M)

        CEM-SS        2×10^-4M        (CD₅₀  5×10^-5M)

        MT 4           5×10^-3M        (CD₅₀  8×10^-6M)

实施例6：鸟苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物鸟苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为63．4％。

波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ57．68，57．39；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ8．18(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，³J=6．0，H-1′)，4，89(1H，m，H-2′)，4．23(1H，m，H-3′)，3．23(1H，m，H-4′)，3．54(3H，s，OCH₃)，3．65(2H，m，H-5′)，3．54(2H，m，H-α)，1．66，1．65(3H，d，³J=6．0，β-CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ172．31(COOMe)，165．81(C-2)，158．67(C-6)，152．34(C-4)，139．66(C-8)，118．71(C-5)，89．42(C-4′)，86．25(C-1′)，73．55(C-3′)，70．82(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，50．62(C-β)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)：m／z 451(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 449(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-       8×10^-4M       (CD₅₀  6×10^-5M)

        CEM-SS        3×10^-4M       (CD₅₀  4×10^-6M)

        MT 4           6×10^-4M       (CD₅₀  3×10^-5M)

实施例7：鸟苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH₃。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．140g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物鸟苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为65．3％。

波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ58．88，58．37；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ8．07(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，¹J=6．0，H-1′)，4，51(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH₃)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)：m／z 466(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 464(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        6×10^-4M        (CD₅₀  7×10^-5M)

        CEM-SS         9×10^-3M        (CD₅₀  6×10^-5M)

        MT 4            2×10^-4M        (CD₅₀  8×10^-5M)

实施例8：鸟苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C₆H₅CH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物鸟苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为70．3％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm．J：Hz)：δ57．18，56．89；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ8．07(1H，s，H-8)，7．25-7．41(5H，m，Ph)，5．79，5．78(1H，d，³J=6．0，H-1′)，4，41(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH₃)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，2．27(2H，m，H-β)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ180．31(COOMe)，166．81(C-2)，161．67(C-6)，158．34(C-4)，151．26(Ph-jpso)，135．66(C-8)，130．07(Ph-para)，128．23(Ph-ortho)，118．45(Ph-meta)，96．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，57．22(C-β)，54．62(OCH₃)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)：m／z 541(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 539(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-    8×10^-3M    (CD₅₀  6×10^-5M)

        CEM-SS     6×10^-4M    (CD₅₀  5×10^-5M)

        MT 4        2×10^-4M    (CD₅₀  8×10^-5M)

实施例9：鸟苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CH。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．170g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物鸟苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为66．2％。

波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ59．86，59．27；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，³J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH₃)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．16，1．15(3H，d，³J=6．0，CH₃)，1．06，1．05(3H，d，³J=6．0，CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，23．66(CH₃)，23．15(CH₃)；ESI-MS(pos．)：m／z 493(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 491(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-     5×10^-3M      (CD₅₀  3×10^-5M)

        CEM-SS      5×10^-3M      (CD₅₀  8×10^-5M)

        MT 4         4×10^-3M      (CD₅₀  6×10^-5M)

实施例10：鸟苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CHCH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．180g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物鸟苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为62．2％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ58．86，58．27；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，³J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH₃)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．22(1H，m，H-γ)，1．16，1．15(3H，d，³J=6．0，CH₃)，1．06，1．05(3H，d，³J=6．0，CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．31(COOMe)，166．81(C-2)，159．67(C-6)，156．34(C-4)，134．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，41．24(C-γ)；ESI-MS(pos．)：m／z 508(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 506(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-       6×10^-4M       (CD₅₀  6×10^-5M)

        CEM-SS        6×10^-4M       (CD₅₀  5×10^-5M)

        MT 4           8×10^-4M       (CD₅₀  7×10^-5M)

实施例11：胞苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物胞苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为61．4％。

波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ57．88，56．16；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．90，7．89(1H，d，³J=5．5，H-6)，6．24(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，³J=6，H-5)，4．28(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH₃)，3．65(2H，m，H-5′)，2．69(2H，m，H-α)，2．15(1H，H-2′)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ177．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，140．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)：m／z 411(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 409(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-       8×10^-4M       (CD₅₀  6×10^-5M)

        CEM-SS        6×10^-3M       (CD₅₀  4×10^-5M)

        MT 4           6×10^-4M       (CD₅₀  3×10^-6M)

实施例12：胞苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH₃。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物胞苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为68．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ57．66，57．31；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．90，7．89(1H，d，³J=5．5，H-6)，6．88(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，³J=6，H-5)，4．68(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH₃)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，1．45(3H，d，³J=6，H-β)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)：m／z 424(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 422(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-         5×10^-3M        (CD₅₀  5×10^-5M)

        CEM-SS          5×10^-3M        (CD₅₀  8×10^-6M)

        MT 4            7×10^-4M        (CD₅₀  3×10^-6M)

实施例13：胞苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制奋，其中R为C₆H₅CH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物胞苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为66．7％。

波谱数据如下：³¹p NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ58．71，58．13；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ8．22，8．21(1H，d，³J=5．5，H-6)，7．29-7．41(5H，m，Ph)，7．03(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，³J=6，H-5)，4．66(1H，m，H-3′)，3．82(1H，m，H-4′)，3．58(3H，s，OCH₃)，3．44(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．27(1H，m，H-β)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ180．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，146．36(Ph-jpso)，117．02，136．11(C-6)，137．12(Ph-para)，136．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)：m／z 500(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 498(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        5×10^-4M       (CD₅₀  8×10^-5M)

        CEM-SS         6×10^-4M       (CD₅₀  8×10^-5M)

        MT 4           8×10^-4M       (CD₅₀  7×10^-5M)

实施例14：胞苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CH。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物胞苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为63．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ59．98，59．21；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．90，7．89(1H，d，³J=5．5，H-6)，6．63(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，³J=6，H-5)，4．61(1H，m，H-3′)，3．69(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH₃)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．14(1H，m，H-β)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH₃)，50．86(C-β)，49．89(C-α)，46．21(C-β)，39．82(C-2)，ESI-MS(pos．)：m／z 466(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 464(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-     5×10^-4M    (CD₅₀  5×10^-5M)

        CEM-SS      5×10^-4M    (CD₅₀  9×10^-5M)

        MT 4        8×10^-3M    (CD₅₀  3×10^-5M)

实施例15：胞苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CHCH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物胞苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为65．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ56．36，56．56；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．96，7．95(1H，d，³J=6，H-6)，6．36(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，³J=6，H-5)，4．78(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH₃)，3．65(2H，m，H-5′)，3．22(2H，m，H-α)，2．96(1H，H-2′)，2．77(1H，m，H-β)，2．39(1H，m，H-γ)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，88．25(C-1′)，85．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．88(OCH₃)，50．86(C-β)，48．89(C-α)，46．21(C-γ)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)：m／z 468(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 466(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-      5×10^-3M     (CD₅₀  6×10^-6M)

        CEM-SS       8×10^-3M     (CD₅₀  9×10^-6M)

        MT 4         7×10^-3M     (CD₅₀  8×10^-6M)

实施例16：尿苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物尿苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为68．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ57．68，56．89；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．79，7．78(1H，dd，³J=4．5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．93(2H，m，H-2′，3′)，4．52(1H，m，H-4′)，4．00(2H，m，H-5′)，3．63(3H，s，OCH₃)，3．57(2H，m，H-α)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ177．08(COOMe)，169．02(C-4)，153．99(C-2)，145．39，145．36(C-6)，104．33，104．22(C-5)，95．83，95．16(C-1′)，87．97(C-4′)，87．20，87．13(C-2′)，83．64，83．51(C-3′)，67．24(C-5′)，55．09(OCH₃)，45．80，45．73(C-α)；ESI-MS(pos．)：m／z 413(M+H)⁺；ESI-MS (neg．)：m／z 411(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        8×10^-3M       (CD₅₀  9×10^-5M)

        CEM-SS         9×10^-3M       (CD₅₀  8×10^-5M)

        MT 4           8×10^-4M       (CD₅₀  5×10^-6M)

实施例17：尿苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH₃。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物尿苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为71．4％。波谱数据如下：31P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ58．32，57．68；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．88，7．87(1H，dd，³J=5，H-6)，5．89(2H，m，H-1′，5)，4．98(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH₃)，3．57(2H，m，H-α)，1．31，1．30(3H，d，³J=6，β-CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ175．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)：m／z 426(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 424(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-         8×10^-4M        (CD₅₀  6×10^-5M)

        CEM-SS          7×10^-4M        (CD₅₀  6×10^-5M)

        MT 4            8×10^-4M        (CD₅₀  5×10^-5M)

实施例18：尿苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C₆H₅CH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(1NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物尿苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为72．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ60．32，59．68；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．88，7．87(1H，dd，³J=5，H-6)，7．22-7．46(5H，m，Ph)，6．08(2H，m，H-1′，5)，5．15(2H，m，H-2′，3′)，4．71(1H，m，H-4′)，4．34(2H，m，H-5′)，3．93(3H，s，OCH₃)，3．57(2H，m，H-α)，2．37(2H，m，H-β)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，148．39(Ph-jpso)，148．36，148．32(C-6)，139．12(Ph-para)，129．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，110．62，110．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，83．27，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)：m／z 522(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 520(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        8×10^-4M       (CD₅₀  7×10^-5M)

        CEM-SS         7×10^-4M       (CD₅₀  6×10^-5M)

        MT 4           6×10^-4M       (CD₅₀  6×10^-5M)

实施例19：尿苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CH。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物尿苷5’-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为65．4％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ58．32，57．55；¹H NMR(500MHz，D₂O)：δ7．89，7．88(1H，dd，³J=5，H-6)，5．99(2H，m，H-1′，5)，4．96(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH₃)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．31，1．30(2H，d，2CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，146．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，22．45(CH₃)，22．55(CH₃)；ESI-MS(pos．)：m／z 454(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 452(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-        9×10^-3M       (CD₅₀  8×10^-5M)

        CEM-SS         6×10^-3M       (CD₅₀  8×10^-5M)

        MT 4           8×10^-4M       (CD₅₀  2×10^-5M)

实施例20：尿苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH₃)₂CHCH₂。

化合物的结构式：

化合物的合成步骤：

1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。

2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。

3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。

4)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。

5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到产物尿苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为67．5％。波谱数据如下：³¹P NMR(D₂O，δ：ppm，J：Hz)：δ59．66，59．10；¹H NMR(500MHz，D2O)：δ7．89，7．88(1H，dd，³J=5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．86(2H，m，H-2′，3′)，4．41(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH₃)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(2H，m，H-γ)，1．31，1．30(2H，d，2CH₃)；¹³C NMR(500MHz，D₂O)：δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，152．28(C-2)，146．36，146．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，67．44(C-5′)，58．54(OCH₃)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，35．68(C-γ)，22．45(CH₃)，22．55(CH₃)；ESI-MS(pos．)：m／z 468(M+H)⁺；ESI-MS(neg．)：m／z 466(M-H)^-。

该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验

ED₅₀   CEM-TK-       5×10^-5M       (CD₅₀  6×10^-4M)

        CEM-SS         6×10^-5M       (CD₅₀  4×10^-5M)

        MT 4           7×10^-5M       (CD₅₀  7×10^-5M)

核苷5’-硫代磷酰氨基酸甲酯是一类全新的具有抗HIV药物活性的化合物，通过合成不同种类的核苷-氨基酸缀合物，并进行活性实验，初步得到了满意的结果，为进一步研制和开发新型抗HIV药物提供了基础研究成果。

Claims (4)

1、一种腺苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物的结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤如下：

(1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；

(2)向上述溶液中加入相同物质量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；

(3)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；

(4)反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；

(5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。

2、一种鸟苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物的结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤为：

(1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；

(2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；

(3)用核磁共振仪；跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；

(4)；反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；

(5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。

3、一种胞苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物的结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤为：

(1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；

(2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；

(3)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；

(4)反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；

(5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。

4、一种尿苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，该化合物的结构式为：

上述结构式中R为H，CH₃，C₆H₅CH₂，(CH₃)₂CH₂，(CH₃)₂CHCH₂。

上述化合物的合成步骤为：

(1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；

(2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；

(3)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将已溶于干燥THF中的尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；

(4)反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；

(5)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物；