CN113166163A

CN113166163A - 7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺衍生物

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Publication number: CN113166163A
Application number: CN201980081444.3A
Authority: CN
Inventors: 陈招根; T·C·杰瑟普
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2018-12-10
Filing date: 2019-12-04
Publication date: 2021-07-23
Anticipated expiration: 2039-12-04
Also published as: US20220024933A1; AR117177A1; TWI800696B; TW202039497A; US12060356B2; ES2939856T3; WO2020123225A1; EP3894412A1; EP3894412B1; CN113166163B; JP7148728B2; JP2022510357A

Abstract

本发明提供了用于治疗银屑病或系统性红斑狼疮的式(I)的化合物:

其中R是(II)或(III)

Description

7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-A]嘧啶-3-甲酰胺衍生物

本发明涉及某些新化合物，其结合TYK2的假激酶(pseudokinase)结构域(JH2)并且抑制某些细胞因子信号传导，特别是IL-23和IFNα信号传导，还涉及包含所述化合物的药物组合物、使用所述化合物治疗某些自身免疫疾病例如银屑病的方法、以及用于合成所述化合物的中间体和方法。

本发明属于治疗银屑病和/或其它自身免疫疾例如糖尿病领域，认为这些疾病由某些促炎细胞因子的TYK2信号传导介导(参见例如J.S.Tokarski等人,J.Biol.Chem.,vol.290(17),第11061-11074页(2015)；和L.Marroqui等人,Diabetes,vol.64,第3808-3817页(2015))。银屑病是慢性皮肤病，据估计其影响全部人群的约2％。银屑病的治疗选择包括：例如，局部治疗例如皮质类固醇、光疗法例如紫外线B(UVB)光、和全身治疗例如甲氨蝶呤和阿普斯特(apremilast)。令人遗憾的是，这类活性剂始终无法提供有效治疗，并且可能与多种不希望的副作用相关。因此，在治疗自身免疫疾病例如银屑病、系统性红斑狼疮(SLE)和糖尿病方面存在尚未得到满足的需求，需要新的治疗选择。

WO 2017/087590公开了某些咪唑丙哒嗪化合物，其通过调节IL-12、IL-23和/或IFNα而可用于治疗自身免疫性障碍例如银屑病或SLE，所述调节是通过作用于TYK2以导致信号转导抑制来实现的。美国专利No.7,557,110公开了某些吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物，其作为激酶抑制剂可用于治疗激酶介导的障碍，例如炎性疾病和自身免疫性疾病。某些咪唑并[1,2-b]哒嗪TYK2假激酶配体被R.Moslin等人,Med.Chem.Commun.,vol.8,第700-712页(2017)公开，为TYK2信号传导的有效的选择性抑制剂。

需要作用于TYK2 JH2结构域并且抑制IL-23和IFNα信号转导的另外的化合物。本发明提供了某些结合TYK2 JH2结构域的新化合物。此外，本发明提供了抑制IL-23和IFNα信号传导的某些新化合物。因此，本发明提供了可用于治疗自身免疫性疾病例如银屑病和SLE的某些新化合物。

相应地，本发明提供了式I的化合物:

其中R是

或其药学上可接受的盐。

本发明还提供了在需要治疗的患者中治疗银屑病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了在需要治疗的患者中治疗SLE的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了在需要治疗的患者中治疗选自炎症性肠病、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、银屑病关节炎、类风湿性关节炎(RA)、斑秃、特应性皮炎、轴性脊椎关节炎(axialspondyloarthritis)、多发性硬化(MS)、1型糖尿病、2型糖尿病和成人隐匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes of adults,LADA)的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于疗法，特别是用于治疗银屑病。另外，本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗SLE。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗选自炎症性肠病、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、银屑病关节炎、RA、斑秃、特应性皮炎、轴性脊椎关节炎、MS、1型糖尿病、2型糖尿病和成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的疾病。

本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗银屑病的药剂中的用途。另外，本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗SLE的药剂中的用途。本发明还提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗选自炎症性肠病、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、银屑病关节炎、RA、斑秃、特应性皮炎、轴性脊椎关节炎、MS、1型糖尿病、2型糖尿病和成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)的疾病的药剂中的用途。

本发明还提供了药物组合物，其包含式I的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还提供了用于制备药物组合物的方法，所述方法包括将式I的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。本发明还涵盖用于合成式I的化合物的新中间体和方法。

如本文所用，术语“治疗”包括抑制、减缓、终止或逆转现存症状或障碍的进展或严重程度。

如本文所用，术语“患者”是指哺乳动物，特别是人。

如本文所用，术语“有效量”是指在单剂量或多剂量施用于患者后在被诊断或治疗的患者中提供所需作用的本发明的化合物或其药学上可接受的盐的量或剂量。

本领域技术人员可以通过使用已知技术以及通过观察在类似情况下获得的结果来确定有效量。在确定患者的有效量时，主治医生会考虑多种因素，包括但不限于：患者的种属；其大小、年龄和总体健康状况；所涉及的具体疾病或障碍；疾病或障碍的程度或参与或严重性；个体患者的响应；所施用的具体化合物；施用方式；所施用的制剂的生物利用度特征；所选择的剂量方案；伴随用药的使用；以及其它相关情况。

将本发明的化合物配制成通过任何使化合物生物可利用的途径施用的药物组合物。最优选地，此类药物组合物用于口服施用。此类药物组合物及其制备方法是本领域公知的(参见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,L.V.Allen编辑,第22版,Pharmaceutical Press,2012)。

式I的化合物或其药学上可接受的盐在本发明的治疗方法中特别有用，在本发明的范围内包括所有构型，包括对映体及其混合物，包括外消旋物。应当理解的是，这些构型既适用于治疗方法，又适用于本发明的化合物。

本发明的化合物包括:

及其药学上可接受的盐。

优选式Ia(ii)和式Ib(ii)的化合物，特别优选式Ia(ii)的化合物及其药学上可接受的盐。

在下面的制备例中描述的某些中间体可以含有一个或多个氮保护基。应当理解，保护基可以根据本领域技术人员的理解而变化，这取决于具体的反应条件和要进行的具体转化。保护和脱保护条件是本领域技术人员公知的，在文献中有描述(参见例如“Greene’sProtective Groups in Organic Synthesis”,第4版,Peter G.M.Wuts和TheodoraW.Greene,John Wiley and Sons,Inc.2007)。

本领域普通技术人员可以在本发明化合物的合成中的任何方便的点通过例如选择性结晶技术或手性色谱法等方法分离或拆分各个异构体，包括对映体(参见例如J.Jacques等人,"Enantiomers,Racemates,and Resolutions",John Wiley and Sons,Inc.,1981，以及E.L.Eliel和S.H.Wilen,“Stereochemistry of Organic Compounds”,Wiley-Interscience,1994)。

本发明的化合物的药学上可接受的盐可以例如通过使本发明化合物的适宜的游离碱、适宜的药学上可接受的酸在适合的溶剂例如乙醚中在本领域公知的标准条件下反应来形成。另外，在氮保护基脱保护时可同时形成这类药学上可接受的盐。参见例如Gould,P.L.,“Salt selection for basic drugs,”International Journal of Pharmaceutics,33:201-217(1986)；Bastin,R.J.等人“Salt Selection and Optimization Proceduresfor Pharmaceutical New Chemical Entities,”Organic Process Research andDevelopment,4:427-435(2000)；和Berge,S.M.等人,“Pharmaceutical Salts,”Journalof Pharmaceutical Sciences,66:1-19,(1977)。

某些缩写定义如下：“BINAP”是指(±)-2,2′-双(二苯基膦基)-1,1′-联萘；“BOP”是指六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻；“BrettPhos”是指二环己基[3,6-二甲氧基-2',4',6'-三(1-甲基乙基)[1,1'-联苯]-2-基]膦；“t-BuOH”是指叔丁醇和叔丁基醇；“BSA”是指牛血清白蛋白；“CDI”是指1,1’-羰基二咪唑；“DCC”是指1,3-二环己基碳二亚胺；“DCE”是指二氯乙烷；“DCM”是指二氯甲烷；“DEM”是指丙二酸二乙酯；“DIC”是指1,3-二异丙基碳二亚胺；“DIEA”是指N,N-二异丙基乙胺；“DMAP”是指二甲基氨基吡啶；“DMEM”是指达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“DPPA”是指叠氮基磷酸二苯酯；“EDCI”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇和乙基醇；“FBS”是指胎牛血清；“Grubbs第二代催化剂”是指(1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-亚咪唑烷基)二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦)钌；“HATU”是指六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓-3-氧化物；“HBTU”是指六氟磷酸(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)-N,N-二甲基甲亚铵((1H-benzotriazol-1-yloxy)(dimethylamino)-N,N-dimethylmethaniminium hexafluorophosphate)；“HEPES”是指4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸；“HOAt”是指1-羟基-7-偶氮苯并三唑；“HOBt”是指1-羟基苯并三唑水合物；“HPLC”是指高效液相色谱法；“IFNα”是指干扰素α；“IL-12”是指白细胞介素12；“IL-23”是指白细胞介素23；“IPA”是指异丙醇和异丙基醇；“JAK”是指詹纳斯激酶；“LiHMDS”是指六甲基二硅基胺基锂(lithium hexamethyldisilazide)；“MeI”是指碘甲烷；“MeNH₂”是指甲胺；“MeOH”是指甲醇和甲基醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“NaOEt”是指乙醇钠；“Ni NTA”是指镍-氨三乙酸；“PBS”是指磷酸盐缓冲盐水；“Pd(dppf)Cl₂“是指二氯化(1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁)钯(II)；“Pd(OAc)₂”是指乙酸钯(II)；“PyBOP”是指(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷子基鏻)；“PyBrOP”是指六氟磷酸溴(三-吡咯烷基)鏻；“RPM”是指每分钟转数；“RPMI”是指Roswell Park Memorial Institute；“SPA”是指闪烁亲近测定法；“TEA”是指三乙胺；“TFA”是指三氟乙酸；“THF”是指四氢呋喃；“TYK2”是指酪氨酸激酶2；“UVB”是指紫外线B；“STAT”是指转录蛋白的信号转导物和激活物；“YSI”是指硅酸钇。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以通过本领域普通技术人员已知的多种操作来制备，其中一些操作在下面的方案、制备例和实施例中进行了举例说明。下面的方案中每个步骤的产物可以通过本领域公知的常规方法回收，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱法、过滤、研磨和结晶。在下面的方案中，除非另有说明，否则所有取代基均如前所定义。试剂和起始原料对于本领域普通技术人员而言是容易获得的。在不限制本发明的范围的情况下，提供了下面的方案、制备例和实施例以进一步对本发明进行举例说明。

方案1

方案1的步骤A描绘了将DEM添加至化合物(1)中，随后使用适合的碱例如NaOEt或叔丁醇钾在约80℃在溶剂例如EtOH中环化成化合物(2)。

在步骤B中，可以使用适合的氯源例如POCl₃和适合的有机碱例如吡啶在约50-100℃在适合的溶剂例如乙腈中将化合物(2)的7-羟基和5-氧代基团氯化，得到化合物(3)。

在步骤C中，可以在本领域公知的条件下使用亲核体例如1-(4-甲氧基苯基)-N-甲基-甲胺和适合的有机碱例如DIEA在适合的溶剂例如1,4-二噁烷中在环境温度进行化合物(3)的7-氯基团上选择性亲核芳香取代，得到化合物(4)。

在步骤D中，可以在本领域公知的条件下使用适合的催化剂和配体组合例如Pd(OAc)₂和BrettPhos以及适合的碱例如碳酸钾在溶剂例如1,4-二噁烷中在微波加热下于约130℃进行化合物(4)与胺例如色满-8-胺盐酸盐或6-甲基吡啶-2-胺的Buchwald偶联，形成化合物(5)。

可以用NaOH水溶液在溶剂例如1,4-二噁烷和MeOH中在约50-80℃处理化合物(5)，通过如步骤E中所示的酯的碱性水解得到化合物(6)。

在步骤F中，可以在化合物(6)与胺例如(3R)-3-氨基-1-甲基-吡咯烷基-2-酮之间使用适合的有机碱例如DIEA和适合的偶联剂例如BOP在溶剂例如DMF中进行酰胺偶联，得到化合物(7)。本领域技术人员将认识到，存在多种适宜的方法用于由羧酸和胺的反应形成酰胺。例如，胺化合物与适宜的羧酸在偶联试剂存在下、在存在或不存在有机碱例如DIEA或TEA的情况下反应可得到步骤F的化合物。偶联试剂包括碳二亚胺例如DCC、DIC、EDCI或羰基二咪唑例如CDI。酰胺偶联添加剂例如HOBt和HOAt也可用于促进反应。另外，可以使用非亲核阴离子的脲鎓或鏻盐例如HBTU、HATU、PyBOP和PyBrOP替代更传统的偶联剂。可以使用添加剂例如DMAP来促进反应。

在步骤G中，将化合物(7)在标准条件下使用适合的酸例如TFA在适合的溶剂例如DCE中在约50℃脱保护，得到式I的化合物。

方案2

在方案2的步骤A中，给出了使用适合的催化剂例如Pd(dppf)Cl₂和适合的碱例如碳酸钾在适合的溶剂系统例如1,4-二噁烷和水中在约90℃进行化合物(8)与乙烯基三氟硼酸钾之间的Suzuki-Miyaura交叉偶联形成化合物(9)。

在步骤B中，描绘了在本领域公知的条件下使用适宜的碱例如碳酸钾在约60℃进行化合物(9)与烯丙醇之间的亲核芳香取代，得到化合物(10)。

在步骤C中，给出了使用适宜的催化剂例如Grubbs第二代催化剂在适宜的溶剂例如DCM中进行化合物(10)的催化闭环易位(metathesis)，得到化合物(11)。

在步骤D中，描绘了在本领域公知的条件下使用适宜的催化剂例如10％披Pd碳在氢气气氛下在适合的溶剂系统例如MeOH和THF中进行化合物(11)的钯催化的硝基/烯烃还原，得到化合物(12)。

方案3

在方案3的步骤A中，给出了在本领域公知的条件下、通常如方案1的步骤F中所述、在化合物(13)与MeNH₂之间使用适合的有机碱例如DIEA和适合的偶联剂例如HATU在溶剂例如DMF中在0-22℃进行的酰胺偶联，形成化合物(14)。

在步骤B中，将MeI添加至化合物(14)中，形成碘化二甲基锍盐，然后用适合的碱例如LiHMDS在适合的溶剂例如THF中在0-22℃处理，可用于得到环化的化合物(15)。

在步骤C中，在标准条件下使用适合的酸例如4-甲基苯磺酸在适合的溶剂例如乙腈中在约55℃将化合物(15)脱保护，然后添加溶剂例如MTBE，以沉淀化合物(16)。

方案4

式I的化合物、例如式Ia(ii)和Ib(ii)的化合物也可以如方案4中所给出的那样使用本领域技术人员理解的适宜的相应起始材料制备。更具体地，例如，在方案4的步骤A中，可以在本领域公知的条件下使用适宜的亲核体例如MeNH₂在适合的溶剂例如THF中在环境温度下在化合物(3)的7-氯基团上进行选择性亲芳香取代，得到化合物(17)。

在方案4的步骤A中，可以在本领域公知的条件下使用适宜的亲核体例如MeNH₂在适合的溶剂例如THF中在环境温度下在化合物(3)的7-氯基团上进行选择性亲核芳香取代，得到化合物(17)。

在步骤B中，可以使用适合的催化剂和配体系统例如氯化烯丙基钯(II)二聚体和BINAP与适合的碱例如乙酸钾在适宜的溶剂系统例如1,4-二噁烷和2-甲基-2-丁醇中在加热下于125℃进行化合物(17)与化合物(12)的Buchwald偶联。

可以用适合的碱例如LiOH水溶液在适合溶剂系统例如MeOH和THF中在回流下处理化合物(18)，通过酯的碱性水解得到化合物(19)，如在步骤C中所示。

步骤D描绘了通过在本领域公知的条件下、通常如方案1的步骤F中所述的那样、使用适合的有机碱例如DIEA和适合的偶联剂例如BOP在溶剂例如DMF中在化合物(19)与化合物(16)之间进行酰胺偶联，形成式Ia(ii)。

制备例1

7-羟基-5-氧代4H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案1的步骤A:将5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(12.5g,80.6mmol)和DEM(18.5mL,121mmol)溶于EtOH(90mL)。向该混合物中加入NaOEt(在EtOH中21质量％,45.1mL,121mmol)，将反应在90℃搅拌24小时。此后，将反应冷却至环境温度。然后用5N HCl水溶液使混合物呈酸性，过滤得到的沉淀物，得到标题化合物，为白色固体(11.7g,65.1％)。ES/MSm/z 224(M+H).

可选的制备例1

方案1的步骤A:在25℃、氮气气氛下，向5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(400g,2.58mol)和DEM(584mL,3.87mol)在EtOH(6.00L)中的溶液中加入叔丁醇钾(578g,5.16mol)。将溶液在80℃搅拌12小时，然后将反应冷却至22℃。用0.1N HCl(2L)稀释反应混合物，用5N HCl将pH调至3。过滤混合物，用水(800mL)洗涤滤饼。将固体真空干燥至恒重，得到标题化合物，为灰白色固体(460g,81％)。ES/MS m/z 224(M+H).

制备例2

5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案1的步骤B:将7-羟基-5-氧代4H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(11.7g,52.4mmol)混悬在乙腈(50mL)中，用氮气净化5分钟。在50℃向混合物中加入POCl₃(14.8mL,157mmol)，然后加入吡啶(4.28mL,52.4mmol)，然后将反应在100℃搅拌5小时。此后，将反应冷却至环境温度，倾入冰/水混合物中。用饱和碳酸氢钠水溶液中和混合物，过滤得到的沉淀物，得到标题化合物，为白色固体(13g,95.3％)。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl)260/262[M+H]⁺.

可选的制备例2

方案1的步骤B:在50℃、氮气气氛下，向7-羟基-5-氧代4H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(400g,1.79mol)在乙腈(2L)中的混悬液中滴加POCl₃(416mL,4.48mol)和吡啶(217mL,2.69mol)。将反应在80℃搅拌12小时。蒸发反应混合物，将残余物倾入水(2L)中。过滤反应混合物，用水(800mL)洗涤固体。将固体真空干燥至恒重，得到标题化合物，为橙色固体(360g,66％)。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl)260/262[M+H]⁺.

制备例3

5-氯-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案1的步骤C:将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(5g,19.2mmol)溶于1,4-二噁烷(40mL)。向该混合物中加入1-(4-甲氧基苯基)-N-甲基-甲胺(3.5g,20mmol)，然后加入DIEA(6.7mL,38.4mmol)，将反应在环境温度下搅拌2小时。此后，用水(100mL)淬灭反应，用EtOAc(3×100mL)萃取。然后用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法(0-70％EtOAc的己烷溶液)纯化残余物，得到标题化合物，为浓稠的澄清的油状物，其经静置固化为白色固体(3.55g,49.3％)。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl)375/377[M+H]⁺.

制备例3a

5-氯-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案4的步骤A:将5,7-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(50.0g,192mmol)加入到THF(250mL)中，将溶液冷却至10℃。然后加入MeNH₂溶液(33％w/w的EtOH溶液)(79mL,634mmol)，保持温度低于20℃。搅拌反应混合物，温热至22℃，搅拌4小时。然后加入水(300mL)，将混合物再搅拌1小时。

通过过滤收集得到的固体，用THF/水混合物(2:3)(100mL)和水(400mL)洗涤。然后将固体真空干燥(10mbar/50℃)至恒重，得到标题化合物，为浅棕色固体(49.5g,90％)。ES/MS m/z(³⁵Cl/³⁷Cl)255/257[M+H]⁺.

制备例4

2-氟-1-硝基-3-乙烯基-苯

方案2的步骤A:向烧瓶中加入乙烯基三氟硼酸钾(17g,120.6mmol)、碳酸钾(40g,286.5mmol)和Pd(dppf)Cl₂(2g,2.7mmol)。将烧瓶排空空气并回充氮气3次。加入1,4-二噁烷(450mL)、水(140mL)和1-溴-2-氟-3-硝基-苯(20g,90.1mmol)。再次将烧瓶排空空气并回充氮气。将反应混合物加热至90℃达3.5小时，然后冷却至室温。分离各层，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法(0-10％EtOAc的己烷溶液)纯化残余物，得到标题化合物，为淡黄色油状物(13.1g,84％)。¹H NMR(d₆-DMSO)δ8.09-8.03(m,2H),7.44(t,J＝8.0Hz,1H),6.91(dd,J＝11.2,17.7Hz,1H),6.08(d,J＝17.7Hz,1H),5.62(d,J＝11.2Hz,1H).

制备例5

2-烯丙基氧基-1-硝基-3-乙烯基-苯

方案2的步骤B:将烯丙醇(18.8g,323mmol)、2-氟-1-硝基-3-乙烯基-苯(12.2g,69.3mmol)和碳酸钾(31g,224mmol)的混合物加热至60℃达16小时，然后冷却至室温。用EtOAc(300mL)稀释混合物，过滤出固体，弃去。蒸发滤液，通过硅胶色谱法(0-15％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到标题化合物，为油状物(13.4g,88％)。ES/MS m/z 206(M+H).

制备例6

8-硝基-2H-色烯

方案2的步骤C:向在DCM(500mL)中的2-烯丙基氧基-1-硝基-3-乙烯基-苯(13.4g,65.3mmol)中加入Grubbs第二代催化剂(300mg,0.3mmol)。用氮气净化烧瓶，在室温搅拌6小时。然后蒸发混合物，通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到标题化合物，为蜡状黄色固体(10.6g,91％)。ES/MS m/z178(M+H).

制备例7

色满-8-胺

方案2的步骤D:将8-硝基-2H-色烯(22.2g,125mmol)和10％披Pd碳(600mg,0.53mmol)在MeOH(350mL)和THF(350mL)中的混合物在一大气压的氢气下在室温搅拌。4小时后，加入10％披Pd碳(450mg,0.4mmol)在EtOAc(15mL)中的浆液，将混合物在室温在一个大气压的氢气下再搅拌16小时。过滤混合物，蒸发滤液，得到标题化合物，为油状物(17.6g,92％)。ES/MS m/z 150(M+H).

制备例8

N-[(1R)-1-(甲基氨基甲酰基)-3-甲基硫基-丙基]氨基甲酸叔丁酯

方案3的步骤A:将(叔丁氧基羰基)-D-甲硫氨酸(400g,1.6mol)、甲胺盐酸盐(162.47g,2.4mol)和DIEA(700mL,4.01mol)在DMF(4L)中的溶液冷却至0℃，加入HATU(732.1g,1.92mol)。将反应温热至环境温度。搅拌2小时后，蒸发溶剂。然后加入水(10L)，用DCM(2×3L)萃取水溶液。合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(3L)洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化得到的产物，用EtOAc的己烷溶液洗脱，得到标题化合物，为白色固体(368g,87％)。ES/MS m/z 263(M+H).

制备例9

N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯

方案3的步骤B:将N-[(1R)-1-(甲基氨基甲酰基)-3-甲基硫基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(368g,1.40mol)和MeI(3.68L,59.11mol)的混合物在环境温度下搅拌18小时。然后蒸发混合物。将一份得到的粗品碘化二甲基锍盐(210g,0.52mol)溶于THF(4.7L)，在氮气气氛下冷却至0℃，滴加LiHMDS(1.00M的THF溶液,1.16L,1.16mol)。然后将反应混合物温热至环境温度。4小时后，加入水(2.4L)，蒸发溶剂至一半体积。用DCM(2×3L)萃取混合物。合并有机层，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物，用MeOH的DCM溶液洗脱，得到标题化合物，为白色固体(50g)。ES/MS m/z 215(M+H)。手性HPLC:Rt(保留时间)＝9.13分钟；LC柱:手性PAc IAOD 4.6×250mm 5μm；等度:0.1％二乙胺/己烷/乙醇(85/15)；柱温:25℃；流速:1.0mL/min.旋光度:[α]_D ²⁰＝+53°(C＝0.5,MeOH).

制备例10

(3R)-3-氨基-1-甲基-吡咯烷-2-酮；对甲苯磺酸盐

方案3的步骤C:将N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(46g,214.69mmol)和4-甲基苯磺酸(74.5g,433mmol)在乙腈(500mL)中的混合物在55℃加热，搅拌4小时。然后加入MTBE(1L)，将混合物冷却至22℃。通过过滤收集得到的固体，用另外的MTBE洗涤，真空干燥至恒重，得到标题化合物，为白色固体(60g,95％)。ES/MS m/z 115(M+H)。旋光度:[]_D ²⁰＝+31.3°(C＝0.5,MeOH).

制备例11

5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案1的步骤D:向火焰干燥的微波小瓶中加入5-氯-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(400mg,1.1mmol)、色满-8-胺盐酸盐(240mg,1.2mmol)、碳酸钾(450mg,3.3mmol)、BrettPhos(60mg,0.1mmol)和Pd(OAc)₂(20mg,0.1mmol)。将小瓶排空空气并回充氮气三次。加入1,4-二噁烷(4.5mL)，再次用氮气净化小瓶。将混合物微波处理至130℃达25分钟，冷却至室温，用MeOH(20mL)稀释。通过硅藻土过滤，蒸发。通过硅胶色谱法(0-40％EtOAc的己烷溶液)纯化得到的残余物，得到标题化合物，为油状物(232mg,42％)。ES/MS m/z 488(M+H).

按照基本上与制备例11方法类似的方式制备了下列化合物。

表1

制备例11a

5-(色满-8-基氨基)-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯

方案4的步骤B:向压力烧瓶中加入5-氯-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(14g,55mmol)、BINAP(2.1g,3.3mmol)、氯化烯丙基钯(II)二聚体(620mg,1.7mmol)和乙酸钾(10.8g,110mmol)，然后用氮气净化。将已经用氮气搅动10分钟的色满-8-胺(9g,60mmol)在1,4-二噁烷(160mL)中的溶液加入到该混合物中，然后加入2-甲基丁烷-2-醇(20mL)。用氮气净化烧瓶，在125℃加热。2小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc(300mL)稀释。通过硅藻土过滤混合物，蒸发。使残余物在EtOAc与饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发至得到红色半固体。向该残余物中加入DCM(85mL)，将混合物搅拌5分钟。收集得到的固体，用另外的DCM洗涤，在室温真空干燥，得到轻微桃颜色的物质。将滤液浓缩至60mL总体积，搅拌5分钟。收集得到的固体，用另外的DCM洗涤，与上一批固体合并，真空干燥，得到11.2g产物。通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc的己烷溶液)纯化剩余的滤液，得到另外3.8g产物。合并全部收集的固体，得到标题化合物(15.0g,74％)。ES/MS m/z 368.0(M+H).

制备例13

5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸

方案1的步骤E:将5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(232mg,0.45mmol)、5N NaOH(1mL,5mmol)、MeOH(4mL)和1,4-二噁烷(4mL)的混合物在50℃搅拌。16小时后，将反应冷却至室温，蒸发。向残余物中加入DCM(25mL)、水(10mL)和5N HCl(1mL)。5分钟后，分离各层。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物，为微弱桃颜色的固体(184mg,88％)。ES/MS m/z460(M+H).

制备例13a

5-(色满-8-基氨基)-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸

方案4的步骤C:向在MeOH(200mL)和THF(25mL)中的5-(色满-8-基氨基)-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(21.8g,59mmol)中加入LiOH(5.7g,240mmol)的水(120mL)中的溶液。将混合物在氮气下加热至回流达1小时，然后冷却至室温。通过添加5NHCl将pH调节至～2。向混合物中加入冰(125g)，将烧瓶置于冰水浴中。搅拌30分钟后，过滤得到的固体，用冰冷的水(75mL)洗涤，在室温真空干燥，得到标题化合物，为淡黄褐色(light tan)固体(18.2g,90％).ES/MS m/z 340.0(M+H).

制备例14

7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]-5-[(6-甲基-2-吡啶基)氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸

方案1的步骤E:将7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]-5-[(6-甲基-2-吡啶基)氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(538mg,1.1mmol)、5N NaOH(0.8mL,4mmol)、MeOH(5mL)和1,4-二噁烷(5mL)的混合物在80℃搅拌。4小时后，将混合物冷却至室温，搅拌过夜。然后用水(50mL)稀释混合物，用5N HCl将pH调节至～3。过滤得到的固体，在室温真空干燥，得到标题化合物，为米黄色固体(493mg,99+％)。ES/MS m/z 419(M+H).

制备例15

5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]-N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺

方案1的步骤F:向5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(188mg,0.4mmol)、(3R)-3-氨基-1-甲基-吡咯烷-2-酮(75mg,0.6mmol)和DIEA(0.15mL,0.9mmol)在DMF(4mL)中的混合物中加入BOP(300mg,0.7mmol)。在室温搅拌30分钟后，将反应混合物在EtOAc与水之间分配。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法(0-40％MeOH的EtOAc溶液)纯化得到的残余物，得到标题化合物，为白色固体(191mg,84％)。ES/MS m/z 556(M+H).

基本上按照与制备例15的方法类似的方式制备了下列化合物。

表2

制备例17

用于TYK2-JH2示踪剂结合测定的示踪剂的制备

(2E)-2-[(2E,4E)-5-[3-[6-[4-[4-[[5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-6-(甲基氨基甲酰基)-1,2,4-三嗪-3-基]氨基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]-6-氧代-己基]-3-甲基-5-磺酸根合(sulfonato)-1-(3-磺酸根合丙基)吲哚-1-鎓-2-基]戊-2,4-二烯亚基]-3,3-二甲基-1-(3-磺酸根合丙基)二氢吲哚-5-磺酸盐；三乙基铵

将2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺(5.95g,29.1mmol)加入到在NMP(20mL)中的5-氯-3-甲基硫基-1,2,4-三嗪-6-甲酸乙酯(6.8g,29.0mmol)中，在室温搅拌。90分钟后，加入乙醚(100mL)，将混合物搅拌15分钟。过滤得到的固体，用乙醚洗涤。将固体在DCM与饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。用饱和氯化钠水溶液进一步洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-3-甲基硫基-1,2,4-三嗪-6-甲酸乙酯，为微黄色固体(10.12g,82％)。ES/MS m/z 402.2(M+H).

在室温将5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-3-甲基硫基-1,2,4-三嗪-6-甲酸乙酯(10.12g,23.7mmol)在2M MeNH₂的THF溶液(75mL,150mmol)中搅拌4小时，加入乙醚(100mL)，将混合物搅拌15分钟。收集得到的固体，用乙醚(50mL)洗涤，真空干燥，得到5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-N-甲基-3-甲基硫基-1,2,4-三嗪-6-甲酰胺，为淡黄色固体(8.03g,78％)。ES/MS m/z 387.0(M+H).

在0℃向5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-N-甲基-3-甲基硫基-1,2,4-三嗪-6-甲酰胺(500mg,1.26mmol)在DMF(12.5mL)中的混悬液中加入间-氯过苯甲酸(703mg,3.14mmol)，温热至室温。30分钟后，加入4-(4-氨基吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(520mg,1.89mmol)，将混合物在室温搅拌。24小时后，将混合物在DCM与饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。用硫酸镁干燥有机层，过滤，蒸发。将得到的固体与乙醚研磨几次，真空干燥，得到4-[4-[[5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-6-(甲基氨基甲酰基)-1,2,4-三嗪-3-基]氨基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯，为86％纯度的黄色固体(720mg,81％)。ES/MS m/z 605.2(M+H).

将4N HCl的二噁烷溶液(2.5mL,10mmol)加入到4-[4-[[5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-6-(甲基氨基甲酰基)-1,2,4-三嗪-3-基]氨基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(720mg,1.0mmol)在MeOH(5mL)中的混悬液中，在室温搅拌。72小时后，蒸发混合物。使得到的物质在DCM(100mL)与水(20mL)之间分配。通过添加1N NaOH将水层的pH调节至>8，用3:1氯仿/异丙醇萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。将得到的固体与乙醚一起研磨，然后真空干燥，得到5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-N-甲基-3-[[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]氨基]-1,2,4-三嗪-6-甲酰胺，为86％纯度的黄色固体(585mg,97％)。ES/MS m/z 505.0(M+H).

将(2E)-2-[(2E,4E)-5-[3-[6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基-6-氧代-己基]-3-甲基-5-磺酸根合-1-(3-磺酸根合丙基)吲哚-1-鎓-2-基]戊-2,4-二烯亚基]-3,3-二甲基-1-(3-磺酸根合丙基)二氢吲哚-5-磺酸盐三乙基铵(10mg,0.008mmol)在DMSO(1mL)中的溶液加入到5-[2-甲氧基-3-(1-甲基-1,2,4-三唑-3-基)苯胺基]-N-甲基-3-[[1-(4--哌啶基)吡唑-4-基]氨基]-1,2,4-三嗪-6-甲酰胺(4.5mg,0.008mmol)和TEA(0.002mL,0.014mmol)在DMSO(1mL)中的溶液中。用铝箔包裹反应小瓶以避光，在室温搅拌过夜。通过制备型HPLC(Kinetix EVO C18 30mm x 100mm,5υm)纯化得到的残余物，用0-20％乙腈的水溶液洗脱，得到标题化合物，为亮蓝色固体(8.5mg,65％)。ES/MS m/z 673.4(M+H).

实施例1

5-(色满-8-基氨基)-7-(甲基氨基)-N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺

方案1的步骤G:向在DCE(3mL)中的5-(色满-8-基氨基)-7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]-N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(191mg,0.3mmol)中加入TFA(1.5mL,20mmol)。将混合物加热至50℃达4小时，冷却至室温，搅拌过夜。蒸发混合物，在DCM与饱和碳酸氢钠溶液之间分配。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。通过高pH LC/MS纯化得到的残余物，得到标题化合物，为白色固体(31mg,21％)。ES/MS m/z 436(M+H).

制备实施例1的可选方法

方案4的步骤D:向在DMF(200mL)中的(3R)-3-氨基-1-甲基-吡咯烷-2-酮4-甲基苯磺酸盐(15g,51mmol)中加入DIEA(29mL,166mmol)。搅拌5分钟后，加入5-(色满-8-基氨基)-7-(甲基氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(14g,41mmol)，然后加入BOP(24g,53mmol)。搅拌30分钟后，加入水(200mL)，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(400mL)，用冰水浴冷却烧瓶。搅拌90分钟后，过滤得到的固体，用另外的水洗涤，真空干燥。将固体溶于氯仿:异丙醇的3:1混合物，用2N NaOH和饱和氯化水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法(0-8％MeOH的DCM溶液)纯化该物质，得到标题化合物，为灰白色固体(6.7g)。ES/MS m/z 436.0(M+H).

实施例2

7-(甲基氨基)-N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]-5-[(6-甲基-2-吡啶基)氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺

方案1的步骤G:将TFA(1mL,13.2mmol)加入到在DCE(2mL)中的7-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-氨基]-N-[(3R)-1-甲基-2-氧代-吡咯烷-3-基]-5-[(6-甲基-2-吡啶基)氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(93mg,0.18mmol)中，将混合物加热至50℃。1小时后，将混合物冷却至室温，蒸发。向残余物中加入DCM和饱和碳酸氢钠溶液。将混合物搅拌10分钟，收集得到的固体。用水和乙醚洗涤固体，然后真空干燥，得到标题化合物，为米黄色固体(72mg)。ES/MS m/z 395(M+H).

TYK2-JH2示踪剂结合测定

使具有N-末端His6标签的人JAK(Janus胞质酪氨酸激酶家族)家族酪氨酸激酶2(TYK2)(Genbank NP_003322)的假激酶结构域(JH2)在杆状病毒中表达并通过HisPur Ni-NTA亲和力和Superdex 200尺寸排阻色谱法纯化。在制备例17中制备的化合物、即AlexaFluor 647染料(Thermo Fisher Scientific)和适合的TYK2 JH2结合剂的缀合物在本文中称作“示踪剂”。使用声学液体处理方法，在100％DMSO中制备实施例1和实施例2的化合物的3倍、10点系列稀释液并以50nL/孔转移到Proxiplate-384F白色板(PerkinElmer 6008280)中。用于确定抑制百分数的对照孔含有100％DMSO(50nL)以及含示踪剂(2.00nM终浓度)(最小，低FRET)或者稀释的TYK2-JH2酶(0.200nM终浓度)和示踪剂(2.00nM终浓度)(最大，高FRET)的测定缓冲液。

将在测定缓冲液(50mM HEPES pH 7.5,10mM氯化镁,1mM乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,N,N′,N′-四乙酸,0.01％Brij-35和Milli-Q)水中的5.0μL His-标记的TYK2-JH2(0.402nM)和LanthaScreen Eu-抗-HIS Ab(4.02nM,LifeTech,PV5597)加入到Proxiplate-384板中，该板含有50nL稀释的化合物和对照孔。将5.0μL在测定缓冲液中的示踪剂(2.00nM终浓度)加入板中，在室温下平衡30分钟。30分钟后，在具有如下设置的PerkinElmerEnvision上对板进行计数：激发(340nm)，示踪剂发射(665nm)和LanthaScreen Eu-抗-His抗体发射(615nm)。测定示踪剂发射(665nm)与LanthaScreen Eu-抗-His抗体发射(615nm)之比。使用最大和最小对照孔计算每种抑制剂浓度下的比例的抑制百分数，与GeneData

中的四参数非线性逻辑方程拟合，得到实施例1的化合物的IC₅₀<0.000254μM(n＝2)以及实施例2的化合物的IC₅₀<0.000254μM(n＝1)。该结果证明了实施例1和实施例2的化合物在体外与TYK2-JH2伪激酶结构域结合。

TF1细胞中通过pSTAT1的IFNα信号传导的抑制

使TF1细胞(ATCC，CL-2003)在补充有10％透析的FBS、0.1mg/mL氨苄西林和2ng/mL粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的RPMI 1640(GIBCO)中生长。将TF1细胞(每孔100K)接种在96-孔聚-D-赖氨酸包被的板中的无血清DMEM中，在5％CO₂下于37℃温育过夜。将实施例1在DMSO中系列稀释，加入到细胞中，于37℃温育1hr。然后于37℃用10ng/mL IFNα2刺激细胞20分钟。除去培养基后，将细胞在室温下在含有Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(ThermoScientific#78441)的缓冲液中裂解30分钟。按照供应商推荐的方案，使用AlphaLISASureFire Ultra p-Stat1(Tyr701)测定试剂盒(Perkin Elmer#ALSU-PST1-A50K)将p-Stat1(Tyr701)的量定量为615nm处的光发射。使用Genedata

计算每种抑制剂浓度下的抑制百分数并拟合为四参数非线性对数方程，得到实施例1的化合物的IC₅₀为0.007μM(±0.002μM,n＝4)，实施例2的化合物的IC₅₀为0.100μM(±0.014μM,n＝4)，表示为GeoMetric平均值与平均值标准误差(SEM)。该结果表明，实施例1和实施例2的化合物为TF1细胞中通过pSTAT1的IFNα信号传导的抑制剂。

IL23 pSTAT3 AlphaLISA测定

用与萤火虫荧光素酶(SABiosciences CLS-6028L)连接的Lenti STAT3Reporter稳定转导表达内源性IL23受体的IL2-依赖性Kit225细胞(University of Texas MDAnderson Cancer Center)。将这些细胞用于通过使用AlphaLISA技术(TGR BiosciencesALSU-TST3-A50K)在IL2存在下用IL23诱导后通过STAT3磷酸化导致的基因表达进行定量来监测TYK2活性。使细胞在补充有10％FBS(Invitrogen 10082)、1×Pen/Strep(Gibco15140-122)、200ng/ml嘌呤霉素(Sigma P9620)和新鲜的10ng/ml重组人IL2(R&D Systems202-IL-50)的RPMI 1640(Gibco 22400)中生长。

为了测定准备，将细胞以300,000个细胞/孔分配到在Biocoat黑色聚-d-赖氨酸包被的透明底的384-孔板(Becton Dickinson Bio-Coat 35-4640)中的DMEM(Sigma D5796)中，在37℃温育过夜。将溶解在DMSO中的化合物按1:3系列稀释，以产生10-点浓度响应曲线(最终DMSO＝0.1％)。将细胞与实施例1一起于37℃预温育1小时，然后用IL23(最终25ng/mL)刺激30分钟。在以2000rpm离心10分钟后，用1:1裂解缓冲液(TGR Biosciences)和HaltProtease&Phosphatase抑制剂混合物(Thermo Scientific 1861281)的混合物裂解细胞沉淀30分钟。按照供应商推荐的方案进行AlphaLISA反应，使用Envision读板仪(PerkinElmer)测量萤光素酶水平。使用4-参数非线性逻辑方程(GeneData Screener 13.0.5)计算相对IC₅₀，得到实施例1化合物的IC₅₀为0.007μM(±0.001μM，n＝3)，实施例2的化合物的IC₅₀为0.066μM(±0.014μM,n＝3)，表示为GeoMetric平均值与平均值的标准误差(SEM)。该结果证明，在基于细胞的测定中，实施例1和实施例2的化合物是IL-23信号传导的抑制剂。