CN113166140A - Cdk8/19抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及表现出CDK8/19抑制剂的性质的式(I)的新的化合物、包含所述化合物的药物组合物及其作为药物用于治疗疾病或病症的用途。

Description

CDK8/19抑制剂

技术领域

本发明涉及新的CDK8/19抑制剂、其制备方法、包含本发明的化合物的药物组合物和使用所述化合物或所述组合物在治疗疾病和病症中的方法。

背景技术

CDK8以及其关于结构和功能的密切相关的同种型CDK19是致瘤转录调节激酶(Xu,W.&Ji,J.Y.(2011)Dysregulation of CDK8 and CyclinСin tumorigenesis,J.Genet.Genomics 38,439-452；Galbraith,M.D.等人(2010)；Firestein,R.&Hahn,W.C.(2009))。与CDK1、CDK2和CDK4/6激酶对比，CDK8在细胞周期调节中不起作用，并因此阻断CDK8不抑制正常细胞的生长(Adler,A.S.等人(2012)CDK8 maintains tumor de-differentiation and embryonic stem cell pluripotency,Cancer Res.72,2129-2139；Kapoor,A.等人(2010)The histone variant macroH2A suppresses melanomaprogression through regulation of CDK8,Nature 468,1105-1109)。然而，由于其在形成多能干细胞表型中的基本作用(Firestein,R.等人(2008))，胚胎干细胞中的CDK8敲除防止胚胎发育(Adler,A.S.等人(2012))。CDK8在癌发生中的作用是由于其作为若干转录程序的调节剂的独特的功能(Xu,W.&Ji,J.Y.(2011))。在50％的结肠癌(Firestein,R.等人(2010))、黑素瘤(Kapoor,A.等人(2010))、乳腺癌(Broude E.等人(2015))中已经观察到CDK8过表达，并且与预后差相关(Gyorffy,В.等人(2010))。

CDK8的致癌作用由Wnt/[β]信号传导途径的正调节(Kapoor,A.等人(2010)；Alarcon,C等人(2009)Nuclear CDKs drive Smad transcriptional activation andturnover in BMP and TGF-beta pathways,Cell 139,757-769)、生长因子NF-kB诱导的转录(DiDonato,J.A.等人(2012)NF-kappaB and the link between inflammation andcancer,Immunol.Rev.246,379-400)和TGF-β信号传导途径的激活(Acharyya,S.等人(2012)A CXCL1 paracrine network links cancer chemoresistance and metastasis,Cell 150,165-178)介导。已知化疗药物有助于DNA损伤、TNFα诱导、转录因子NFkB的激活(Fabian等人(2005)A small molecule–kinase interaction map for clinical kinaseinhibitors,Nat.Biotechnol.23,329-336)。基质衍生的TNFa作用于肿瘤细胞，在这里其诱导促进肿瘤细胞生长的细胞因子CXCL1和CXCL2的NFkB-介导的产生。通过结合髓样细胞表面上的CXCR2受体，CXCL 1/2将髓样细胞吸引到肿瘤。髓样细胞进而分泌与慢性炎症和肿瘤生长相关的S 100A8/9蛋白质(Huang等人(2012)MED12 Controls the response tomultiple cancer drugs through regulation of TGF-βreceptor signaling,Cell 151,937-950)。还证明CDK8可以保持胚胎干细胞的多能表型并且可以与癌症干细胞表型相关(Firestein,R.等人(2008)CDK8 is a colorectal cancer oncogene that regulatesbeta-catenin activity,Nature 455,547-551)。

抑制细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的新的化合物的研究是目前感兴趣的。

发明内容

以下出现在本发明的描述中使用的术语。

“烷基”是指具有1-12个碳原子(更优选1-6个碳原子)的脂族直链或支链烃基。“支”链是指具有一个或多个“低级烷基”取代基的烷基链。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、新戊基、正己基。烷基可以具有可以是相同或不同结构的取代基。

“烯基”是指含有一个或多个碳-碳双键的具有1-12个碳原子(更优选1-6个碳原子)的直链或支链脂族烃基。烯基可以具有可以是相同或不同结构的取代基。示例性烯基有但不限于乙烯基、烯丙基、1-甲基乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、1-甲基丙-1-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、2-甲基丙-2-烯基。

“炔基”是指含有一个或多个碳-碳三键的具有2-12个碳原子(更优选2-6个碳原子)的直链或支链烃基。炔基可以具有可以是相同或不同结构的取代基。炔基的实例包括但不限于乙烯基、炔丙基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基。

“环烷基”是指含有3-10个碳环原子的饱和碳环。环烷基的实例包括但不限于单环基团(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基)、双环基团(例如双环庚基或双环辛基)。环烷基可以具有可以是相同或不同结构的取代基。

“环烯基”是指在环中包含3-10个碳原子的非芳族碳环体系，所述环含有一个或多个碳-碳双键。环烯基可以具有可以是相同或不同结构的取代基。环烯基的实例包括但不限于单环基团，例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、环壬烯基或环癸烯基。

“芳基”是指具有6-14个碳原子(更优选6-10个碳原子)的芳族单环或多环体系。芳基可以具有可以是相同或不同结构的环状体系取代基。芳基可以与环烷基、杂环或杂芳基增环。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基(anthranil)等。

“烷基氧基”或“烷氧基”是指烷基-О-基团，其中烷基在该部分中定义。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和正丁氧基。

“氨基”是指R'R"N-基团。

R′和R″的实例包括但不限于选自如本文所定义的氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基、杂芳基的取代基，或者R′和R″与它们连接的氮原子一起形成4-7元杂环基或5-10元杂芳基。

“烷基磺酰基”(-S(O)₂-С₁-С₆烷基)是指通过磺酰基-SO₂-连接于适当的分子片段的如上定义的“烷基”。烷基磺酰基的实例包括但不限于甲基磺酰基、乙基磺酰基等。

“低级烷基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。

“卤代”或“卤素”(Hal)是指氟、氯、溴和碘。

“杂环(heterocycle)”、“杂环基”、“杂环(heterocyclic ring)”是指具有3-11个碳原子的单环或多环非芳族体系，其中一个或多个碳原子被一个或多个杂原子(例如，氮、氧、硫)取代。杂环可以与芳基或杂芳基稠合。杂环可以具有一个或多个可以是相同或不同结构的取代基。杂环的氮和硫原子可以被氧化为Ν-氧化物、S-氧化物或S-二氧化物。杂环可以是完全饱和的、部分饱和的和不饱和的。杂环的实例包括但不限于氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷、哌嗪、吗啉等。

“杂芳基”是指具有5-11个碳原子(优选5-10个碳原子)的芳族单环或多环体系，其中一个或多个碳原子被一个或多个杂原子(例如，氮、硫或氧)取代。杂环的氮原子可以被氧化为Ν-氧化物。杂芳基可以具有一个或多个可以是相同或不同结构的取代基。杂芳基可以与环烷基、杂环或芳基增环。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异噁唑基、异噻唑基、四唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、三唑基、1,2,4-噻二唑基、喹喔啉基、酞嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[2,1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻嗪基(benzothiazenyl)、喹啉基、咪唑基、吡唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、萘啶基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1,2,4-三嗪基、噻吩并吡咯基、呋喃并吡咯基等。

“部分饱和的”是指包括至少一个双键或三键的环体系。术语“部分饱和的”涉及具有许多用于饱和的位点并且不包括如上定义的芳基和杂芳基体系的环。

在本文件中使用的术语“氧代”涉及基团＝O。

“取代基”是指连接于支架(片段)的化学基团。

“溶剂化物”为由本发明的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种溶剂分子组成的分子聚集体。溶剂分子是已知对接受者安全的常见药物溶剂的分子，例如水、乙醇、乙二醇等。可以使用其它溶剂(例如甲醇、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、(R)-丙二醇或(S)-丙二醇、1,4-丁二醇等)以形成用于获得优选的溶剂化物的中间体溶剂化物。

“水合物”是指其中水作为溶剂的溶剂化物。

溶剂化物和/或水合物优选以结晶形式存在。

术语“键”、“化学键”或“单键”是指当将通过键结合的原子视为较大子结构的一部分时两个原子或两个部分(即，基团、片段)的化学键合。

术语“保护基”是指用于阻断官能团(例如氨基、羧基或羟基)的反应性的基团。保护基的实例包括但不限于叔丁氧基羰基(Boc)、苄氧基羰基(Cbz)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基缩醛(SEM)、三烷基甲硅烷基、烷基(二芳基)甲硅烷基或烷基。

术语“赋形剂”在本文中用于描述除本发明的一种或多种化合物之外的任何成分。

“药物组合物”是指包含本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物。赋形剂可以选自药学上可接受的和药理学上相容的填料、溶剂、稀释剂、载体、助剂、分布剂和感觉剂、递送剂，例如防腐剂、稳定剂、填料、崩解剂、湿润剂、乳化剂、助悬剂、增稠剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、杀真菌剂、润滑剂和延长递送控制剂，其选择和合适的比例取决于给药的类型和方式以及剂量。合适的助悬剂的实例有但不限于乙氧基化的异十八烷醇、聚氧乙烯、山梨糖醇和山梨糖醇醚、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶及其混合物。防止微生物作用的保护可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、山梨酸和类似化合物)提供。组合物还可以含有等渗剂，例如糖、氯化钠和类似化合物。组合物的延长作用可以通过减缓活性成分的吸收的试剂实现，例如单硬脂酸铝和明胶。合适的载体、溶剂、稀释剂和递送剂的实例包括但不限于用于注射的水、乙醇、多元醇及其混合物、天然油(例如橄榄油)和有机酯(例如油酸乙酯)。填料的实例有但不限于乳糖、奶糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钙等。崩解剂和分布剂的实例有但不限于淀粉、藻酸及其盐、硅酸盐等。合适的润滑剂的实例有但不限于硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、滑石和高分子量的聚乙二醇。单独地或与另一种活性化合物组合的用于经口、舌下、经皮、肌内、静脉内、皮下、局部或直肠给予活性成分的药物组合物可以以标准给药形式、与传统的药物载体的混合物给予人和动物。合适的标准给药形式包括但不限于经口形式，例如片剂、明胶胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、咀嚼胶和经口溶液剂或混悬剂；舌下和穿颊给药形式；气雾剂；植入物；局部、经皮、皮下、肌内、静脉内、鼻内或眼内形式和直肠给药形式。

“药学上可接受的盐”是指在本发明中公开的酸和碱的相对无毒的有机盐和无机盐两者。本文提供的化合物的盐可以由无机或有机酸和碱获得。采用这种方式制备的盐的实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙二酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、氨基磺酸盐等；钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐、伯、仲和叔胺盐、取代的胺盐，包括天然存在的取代的胺盐、环状胺盐，例如异丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶(这样的盐性质的详细描述在Berge S.M.等人“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.1977,66:1-19中给出)。氨基酸可以选自赖氨酸、鸟氨酸和精氨酸。

“药物(Medicament)(药物(medicine))”是片剂、胶囊剂、注射剂、软膏剂形式和旨在用于恢复、改进或改变人类和动物的生理功能的其它即用形式，并且用于治疗和预防疾病、用于诊断、麻醉、避孕、美容等的化合物(或作为药物组合物的化合物的混合物)。

“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指缓解或消除生物病症和/或其至少一种伴随症状的方法。术语“缓解”疾病、病症或病况是指减少疾病、病症或病况的症状的严重性和/或发生频率。此外，本文中提及“治疗”包括提及治愈、缓解和预防性治疗。

在一方面，治疗的受试者或患者为哺乳动物，优选人受试者。所述受试者可以是任何年龄的男性或女性。

术语“病症”是指将受益于用本发明的化合物治疗的任何病况。这是指慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所讨论的病症的那些病理病况。本文中待治疗的病症的非限制性实例包括肿瘤疾病，特别是乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、卵巢癌、转移性卵巢癌、胃癌、转移性胃癌、子宫内膜癌、唾腺癌、肺癌、肾癌或结肠癌；结肠直肠癌、黑素瘤、转移性黑素瘤、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌或膀胱癌；血液-肿瘤疾病、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病和淋巴恶性肿瘤、神经元病症、神经胶质病症、星形细胞病症、下丘脑病症和其它腺体病症、巨噬细胞病症、上皮病症、基质病症和囊胚腔病症；炎症病症、血管源性病症和免疫病症。

“治疗有效量”是指一定程度上将减轻待治疗的疾病/病症的一种或多种症状的待给予的治疗剂的量。

在本说明书和在所附权利要求书中，除非上下文另外提供，否则词语“包含(comprise)”、“具有(have)”、“包括(include)”或变体例如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”或“包括(including)”及其所有语法变体将理解为暗示包括所陈述的整数或整数的组但不排除任何其它整数或整数的组。

具体实施方式

在一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物：

或其药学上可接受的盐或立体异构体，

其中L为-[СН₂]_0-3-、-[СH₂]_0-2-C(O)-、-С(O)-[CH₂]_0-2-；

R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

R¹为-NR²R³；

R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁰取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹¹取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基，或者

R²和R³与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R²和R³形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代；

R⁴和R⁵独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁵取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁶取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基，或者

R⁴和R⁵与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R⁴和R⁵形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代；

R⁶为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁷取代的C_1-6烷基；

各个R⁷和R¹²独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(＝O)R¹⁸、-NR²¹C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R⁹和R¹⁴独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(＝O)R¹⁸、-NR²¹C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、氧代基团、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁵和R¹⁶独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(＝O)R¹⁸、-NR²¹C(＝O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰和R²¹独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₂-С₆烯基、С₂-С₆炔基、С₃-С₇环烷基；或者

R¹⁹和R²⁰与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R¹⁹和R²⁰形成的杂环可以是未取代的或被1个或2个选自以下的取代基取代：氧代基团、卤素、OH、NH₂、CN、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中L为-C(O)-、-СН₂-。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R¹为-NR²R³，

其中R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁰取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹¹取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基，

R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹具有以上含义；或者

其中R¹为：

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁶、R²⁷、R²⁸为H、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

各个R⁴和R⁵独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁵取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁶取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基；

R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶具有以上含义；或者

其中R⁴和R⁵与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R⁴和R⁵形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代；

其中所述4-7元杂环为

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁸为H、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3；

R⁶为未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁷取代的C_1-6烷基；

R¹⁷具有以上含义。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R¹为-NR²R³，

其中R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁰取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹¹取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基；

各个R⁷和R⁹独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰；

各个R⁸、R¹⁰和R¹¹独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基；

各个R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₃-С₇环烷基；或者

其中R¹为：

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁶、R²⁷、R²⁸为H、CN、OH、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

各个R⁴和R⁵独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁵取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁶取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基；

各个R¹²和R¹⁴独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰；

各个R¹³、R¹⁵和R¹⁶独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(＝O)R¹⁸、-C(＝O)NR¹⁹R²⁰、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基；

各个R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₃-С₇环烷基；或者

其中R⁴和R⁵与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R⁴和R⁵形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代，其中所述4-7元杂环为

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁸为H、CN、OH、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3；

R⁶为未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R¹为-NR²R³，

其中R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；

R⁷为H、卤素、-OR¹⁸、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

R¹⁸为H、С₁-С₆烷基；或者

其中R¹为：

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁶和R²⁸为H、OH、C_1-6烷基、C_1-4烷氧基；

n为0、1。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

各个R⁴和R⁵独立地为H、未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；或者

R⁶为未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基；

R¹²为H、卤素、-OR¹⁸、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R¹⁸独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基；

其中R为：

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁸为H、OH、C_1-6烷基、C_1-4烷氧基；

n为0、1。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R¹为：

-NR²R³，

各个R²和R³独立地为Н、未取代的或被卤素取代的C_1-6烷基、-OR¹⁸、C_3-7环烷基、C_3-7环烷基；

R¹⁸为H、C_1-6烷基。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R¹为：

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R为：

-NR⁴R⁵、-O-R⁶；其中

各个R⁴和R⁵独立地为H、C_1-6烷基；

R⁶为C_1-6烷基。

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中R为：

在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物，其中-L-R为：

本发明中所述的化合物可以形成为和/或用作药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的类型包括但不限于：通过游离碱形式的化合物与药学上可接受的无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等)；或与有机酸(例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、三氟乙酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]辛-2-烯-l-甲酸、葡庚糖酸、4,4’-亚甲基双-3-羟基-2-烯-l-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等)的反应形成的酸式盐。

药学上可接受的盐的相应的平衡离子可以使用各种方法来分析和鉴定，包括但不限于离子交换色谱法、离子色谱法、毛细管电泳、感应耦合等离子体、原子吸收光谱法、质谱法或其任何组合。

通过使用至少一种以下方法回收盐：过滤，使用非溶剂沉淀随后过滤，蒸发溶剂，或者在水性溶液的情况下，冻干。应理解，提及药学上可接受的盐包括其溶剂加成形式或结晶形式，特别是溶剂化物或多晶形。溶剂化物含有化学计量或非化学计量量的溶剂，并且在与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇等)结晶过程期间可以形成溶剂化物。当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为醇时形成醇化物。本文所述的化合物的溶剂化物可以在本文所述的过程期间方便地制备或形成。此外，本文提供的化合物可以以未溶剂化的以及溶剂化的形式存在。通常，就本文提供的化合物和方法的目的，认为溶剂化的形式等同于未溶剂化的形式。

本文所述的化合物可以采用各种形式，包括但不限于无定形形式、研磨形式和纳米颗粒形式。此外，本文所述的化合物包括结晶形式，也称为多晶形。多晶形包括化合物的相同元素组成的不同的晶体堆积排列。多晶形通常具有不同的X射线衍射图案、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光学和电学性质、稳定性和溶解度。各种因素(例如再结晶溶剂、结晶速率和储存温度)可以引起一种晶体形式占优势。

药学上可接受的盐、多晶形和/或溶剂化物的筛选和表征可以使用多种技术来完成，包括但不限于热分析、x射线衍射、光谱法、蒸气吸附和显微法。热分析方法涉及热化学降解或热物理过程的分析，包括但不限于多晶形转变，并且这样的方法用于分析多晶形形式之间的关系，以确定重量损失，以发现玻璃化转变温度，或者用于赋形剂相容性研究。这样的方法包括但不限于差示扫描量热法(DSC)、调制的差示扫描量热法(MDCS)、热重分析(TGA)、热重和红外分析(TG/IR)。X射线衍射方法包括但不限于单晶和粉末衍射计和同步加速器源。所用的各种光谱技术包括但不限于拉曼、FTIR、UVIS和NMR(液态和固态)。各种显微法技术包括但不限于偏振光显微法、具有能量分散X射线分析(EDX)的扫描电子显微法(SEM)、具有EDX的环境扫描电子显微法(在气体或水蒸气气氛中)、IR显微法和拉曼显微法。

在另一个实施方案中，本发明涉及选自以下的化合物：

本发明还涉及用于抑制受试者的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的生物活性的方法，所述方法包括使所述细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19与本文所述的化合物接触。

在一个实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含治疗有效量的至少一种本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物旨在治疗或预防由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症。在另一个实施方案中，本发明涉及药物组合物，用于预防或治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症，其中所述由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症为肿瘤的或血液-肿瘤的。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物旨在治疗或预防结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。

本发明的药物组合物包含例如约10％至约100％的活性成分，优选约20％至约60％的活性成分。应理解，每个剂量单位可能不包含有效量的一种或多种活性成分，因为通过多次给药可以实现足够的有效量。

典型的组合物通过将本文所述的化合物与一种或若干种赋形剂混合而制备。赋形剂的实例包括但不限于稀释剂、载体、填料。合适的载体、稀释剂和填料是本领域技术人员公知的并且包括但不限于各种材料，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可溶胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。所用的特定的载体、稀释剂或填料将取决于施用本发明的化合物的手段和目的。通常基于本领域技术人员公认给予哺乳动物安全的溶剂来选择溶剂。通常，安全的溶剂是无毒的水性溶剂，例如水和在水中可溶或混溶的其它无毒的溶剂。合适的水性溶剂包括水作为主要组分、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG400、PEG300)等及其混合物。组合物还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助滑剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、调味剂和其它已知的添加剂，以提供药物(即，本发明的化合物或其药物组合物)的精致外观或有助于制造药物产品(即，药物)。

药物组合物还包括本发明的化合物的溶剂化物和水合物或化合物的稳定的形式(例如，与环糊精衍生物或其它已知的络合剂络合)。

本发明的药物组合物可以配制用于口服途径给药。口服给药可以涉及吞咽药物，使得化合物进入胃肠道，和/或经颊、经舌或舌下给药，通过此方式化合物直接从口腔进入血流。

适用于口服给药的制剂包括固体、半固体和液体体系，例如片剂；颗粒剂；含有多颗粒或纳米颗粒、液体或粉末的软或硬胶囊剂；锭剂(包括液体填充的)；咀嚼剂；凝胶剂；快速分散剂型；膜；卵形栓剂(ovules)；喷雾剂；和经颊贴剂/粘膜粘着贴剂。

液体制剂包括混悬剂、溶液剂、糖浆剂和酏剂。这样的制剂可以在软或硬胶囊剂(例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制成)中用作填料，并且通常包含载体(例如，水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油)和一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过固体(例如，来自囊)的重构制备。

本发明的药物组合物可以用于肠胃外给药。如本文所用，药物组合物的“肠胃外给药”包括任何给药途径，其特征在于受试者组织的物理突破和通过组织中的裂口给予药物组合物，因此通常导致在血流、肌肉或内部器官中直接给药。因此，肠胃外给药包括但不限于通过注射组合物、通过手术切口而施用组合物、通过组织渗透非手术伤口而施用组合物等给予药物组合物。特别是，预期肠胃外给药包括但不限于皮下、腹膜内、肌内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、颅内、滑膜内注射或输注；和肾透析输注技术。瘤内递送(例如，瘤内注射)也可能是有利的。还预期区域灌注。

适合用于肠胃外给药的药物组合物的制剂通常包含活性成分与药学上可接受的载体(例如无菌水或无菌等渗盐水)的组合。这样的制剂可以以适合用于推注给药或连续给药的形式制备、包装或出售。可注射制剂可以在单位剂型中制备、包装或出售，例如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂量容器中。用于肠胃外给药的制剂包括但不限于在油性或水性溶媒中的混悬剂、溶液剂、乳液剂、糊剂等。

制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调节释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、受控释放、靶向释放和程序释放。

在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要其的受试者治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物的步骤。

在另一个实施方案中，本发明涉及用于治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症的方法，所述疾病或病症为肿瘤的或血液-肿瘤的，所述方法包括给予需要这样的治疗的受试者治疗有效量的本文所述的任何化合物或本发明的药物组合物的步骤。

在另一个实施方案中，本发明涉及上述方法，其中肿瘤疾病和血液-肿瘤疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。

应理解，本发明的化合物可以用于如上所述的治疗方法、用于如上所述的治疗和/或用于制造用于治疗性应用的药物。

如本文所用，提及化合物与一种或多种其它治疗剂的术语“共同给药”、“共同给予”和“组合”旨在是指并且确实涉及并包括以下：

·当这样的组分一起配制成在基本上相同的时间向所述患者释放所述组分的单一剂型时，同时给予需要治疗的患者本发明的化合物和一种或多种治疗剂的这样的组合，

·当这样的组分彼此分开配制成在基本上相同的时间被所述患者服用的单独的剂型时，基本上同时给予需要治疗的患者本发明的化合物和一种或多种治疗剂的这样的组合，因此所述组分在基本上相同的时间向所述患者释放，

·当这样的组分彼此分开配制成在连续的时间被所述患者服用(其中每次给药之间具有显著的时间间隔)的单独的剂型时，顺序给予需要治疗的患者本发明的化合物和一种或多种治疗剂的这样的组合，因此所述组分在基本上不同的时间向所述患者释放，和

·当这样的组分一起配制成以受控方式释放所述组分的单一剂型时，顺序给予需要治疗的患者本发明的化合物和一种或多种治疗剂的这样的组合，因此它们在相同的和/或不同的时间向所述患者同时、连续和/或重叠释放，其中各部分可以通过相同或不同的路径给药。

如本领域技术人员公知的，当药物用于组合治疗时，治疗有效剂量可以不同。用于组合治疗方案的通过实验确定药物和其它药剂的治疗有效剂量的方法在文献中描述。例如，已经在文献中描述了使用节拍式给药，即，提供更频繁的较低剂量，以使毒性副作用最小化。组合治疗进一步包括周期性治疗，其在不同的时间开始和停止，以帮助患者的临床管理。对于本文所述的组合疗法，共同给予的化合物的剂量当然将根据采用的共同药物的类型、采用的具体药物、待治疗的病况或病症等而变。

此外，本文所述的化合物也可以与可以向受试者提供另外的或协同益处的程序组合使用。仅通过实例的方式，预期受试者在本文所述的方法中找到治疗性和/或预防性益处，其中本发明的药物组合物和/或与其它治疗剂的组合与基因测试组合，以确定个体是否是已知与某些疾病或病况相关的突变基因的载体。

为CDK8/19抑制剂的化合物可以以单一疗法形式或与手术或辐射疗法或药物疗法组合而用于上述治疗方法。

这样的药物疗法可以包括给予一种或多种抗癌剂。抗癌剂的实例包括但不限于以下药剂中的任一种：烷基化剂、烷基磺酸酯、亚硝基脲或三氮烯；抗代谢物激素和拮抗剂；铂化合物；抗癌抗生素；拓扑异构酶抑制剂。

抗代谢物的实例包括但不限于叶酸类似物(例如甲氨蝶呤、三甲曲沙、培美曲塞、普拉曲沙(pralatrexate)、雷替曲塞、左亚叶酸钙)或嘧啶类似物(例如阿糖胞苷、替加氟、氟尿嘧啶、卡培他滨、氟尿苷、阿扎胞苷、依诺他滨(enocitabine)、卡莫氟、吉西他滨、sapacitabine、艾西拉滨(elacytarabine)、去氧氟尿苷)或嘌呤类似物(例如巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、氟达拉滨、克拉屈滨、奈拉滨、硫唑嘌呤、氯法拉滨(clofarabine))或天冬酰胺酶。

烷基化剂的实例包括但不限于氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、苯达莫司汀、六甲蜜胺、塞替派、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、laromustine、司莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、异环磷酰胺、英丙舒凡、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、曲奥舒凡、卡波醌、apaziquone、福莫司汀、六甲蜜胺、葡磷酰胺、哌泊溴烷、曲磷胺、乌拉莫司汀、evofosfamide、VAL-083。

激素和拮抗剂的实例包括但不限于泼尼松、泼尼松龙、己酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮、己烯雌酚(diethlystilbestrol)、雌二醇、他莫昔芬、丙酸睾酮、氟甲睾酮、氟他胺、亮丙立德、阿巴瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡普睾酮、氯烯雌醚、地加瑞克(degarelix)、地塞米松、氟可龙、氟维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮丙瑞林、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肽、雷洛昔芬、促甲状腺素α、托瑞米芬、曲普瑞林、己烯雌酚、阿考比芬(acolbifene)、达那唑、地洛瑞琳、环硫雄醇、orteronel、恩杂鲁胺(enzalutamide)、氨鲁米特、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、来曲唑、睾内酯、福美坦。

铂化合物的实例包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂、依他铂、miriplatine水合物、洛铂、奈达铂、吡铂(picoplatin)、沙铂。

抗肿瘤抗生素的实例包括但不限于多柔比星、柔红霉素(daunurobicin)、伊达比星、卡柔比星、戊柔比星、佐柔比星、阿柔比星、吡柔比星、奈莫柔比星、氨柔比星、表柔比星、博来霉素、放线菌素D、普卡霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、净司他丁、链佐星。

拓扑异构酶抑制剂的实例包括但不限于伊立替康、托泊替康、贝洛替康(belotecan)、替尼泊苷、依托泊苷、voreloxin、氨萘非特。

抗癌剂的实例包括但不限于以下药剂中的任一种：微管定向的药物，例如紫杉烷(例如，紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛(cabazitaxel)、tezetaxel)、长春花生物碱(例如，长春瑞滨、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁)；有丝分裂原激活的蛋白激酶信号传导抑制剂(例如，U0126、PD98059、PD184352、PD0325901、ARRY-142886、SB239063、SP600125、BAY43-9006、渥曼青霉素或LY294002)；mTOR抑制剂(例如，西罗莫司、替西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司、地磷莫司(ridaforolimus))；抗体(例如，利妥昔单抗、曲妥单抗、阿仑单抗、贝索单抗(besilesomab)、西妥昔单抗、地诺单抗(denosumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、贝伐单抗、帕妥珠单抗(pertuzumab)、纳武单抗(nivolumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗(panitumumab)、托西莫单抗、katumaksomab、艾洛珠单抗(elotuzumab)、依帕珠单抗、farletuzumab、mogamulizumab、耐西妥珠单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、obinutuzumab、okaratuzumab、奥格伐单抗(oregovomab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、rilotumumab、司妥昔单抗(siltuximab)、托珠单抗(tocilizumab)、zalutumumab、zanolimumab、马妥珠单抗(matuzumab)、dalotuzumab、onartuzumab、racotumomab、tabalumab、EDM-525797)；激酶抑制剂(fostamatinib、entospletenib、埃罗替尼(erlotinib)、伊马替尼、拉帕替尼(lapatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、维莫非尼(vemurafenib)、吉非替尼(gefitinib)、克唑替尼(crizotinib)、达沙替尼(dasatinib)、瑞戈非尼(regorafenib)、鲁索替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、凡德他尼(vandetanib)、博舒替尼(bosutinib)、阿昔替尼(axitinib)、阿法替尼(afatinib)、alisertib、达拉非尼(dabrafenib)、达克替尼(dacomitinib)、dinaciklib、多韦替尼(dovitinib)、尼达尼布(nintedanib)、乐伐替尼(lenvatinib)、linifanib、linsitinib、马赛替尼(masitinib)、莫特塞尼(motesanib)、来那替尼(neratinib)、orantinib、帕纳替尼(ponatinib)、radotinib、替吡法尼(tipifarnib)、tivantinib、tivozanib、曲美替尼(trametinib)、阿帕替尼(apatinib)、依鲁替尼(ibrutinib)、acalabrutinib、考比替尼(cobimetinib)、fedratinib、丙氨酸布立尼布(brivanib alaninate)、西地尼布(cediranib)、卡博替尼(cabozantinib)、埃克替尼(icotinib)、cipatinib、rigosertib、pimasertib、buparlisib、idelalisib、米哚妥林、哌立福新、XL-647)；光敏剂(例如，他拉泊芬、替莫泊芬、卟吩姆钠)；细胞因子(例如，阿地白介素、干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、西莫白介素、他索纳明、重组白介素-2、奥普瑞白介素、重组干扰素β-1a)；疫苗(例如，溶血性链球菌制剂、sipuleucel-T、vitespen、emepepimut-S、oncoVAX、rindopepimut、troVAX、MGN-1601、MGN-1703)；比生群(bisanthrene)、地西他滨、米托蒽醌、丙卡巴肼、曲贝替定(trabectedin)、安吖啶、brostallicin、米替福新、罗米地辛(romidepsin)、plitidepsin、艾日布林(eribulin)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、fosbretabulin、地尼白介素diftitox、替伊莫单抗、泼尼莫司汀、曲妥单抗emtansine、雌莫司汀、吉姆单抗奥佐米星、阿柏西普(aflibercept)、oportuzumabmonatox、cintredekin besudotox、edotreotide、inotuzumab奥佐米星、naptumomabestafenatox、vintafolide、本妥昔单抗(brentuximab)vedotin、硼替佐米(bortezomib)、伊沙佐米(Ixazomib)、卡非佐米(carfilzomib)、来那度胺(lenalidomide)、沙利度胺、泊马度胺(pomalidomide)、唑来膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿里维A酸、维A酸、peretinoin、贝沙罗汀、他米巴罗汀、咪喹莫特、香菇多糖、米伐木肽(mifamurtide)、罗莫肽、培门冬酶、喷司他丁、内皮生长抑素、西佐喃、vismodegib、伏立诺他(vorinostat)、恩替诺特(entinostat)、帕比司他(panobinostat)、塞来考昔、西仑吉肽、ethanidazole、ganetespib、idronoksil、Iniparib、氯尼达明、尼莫唑、丙考达唑、他喹莫德(tasquinimod)、telotrystat、贝利司他(belinostat)、胸腺法新、替拉扎明、托舍多特(tosedostat)、trabedersen、乌苯美司、伐司朴达、今又生(gendicine)、reolysin、瑞他霉素(retaspimycin)、trebananib、维鲁利泰。

在一个实施方案中，本发明涉及本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物在治疗需要其的受试者由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症中的用途。

在另一个实施方案中，本发明涉及本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物在治疗需要其的受试者由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症中的用途，所述疾病或病症为肿瘤的或血液-肿瘤的。

在另一个实施方案中，本发明涉及上述化合物或其药学上可接受的盐或本发明的药物组合物在治疗需要这样的治疗受试者的肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病中的用途，所述疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、转移性黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。在所有这些实施方案中，受试者可以是人。

本发明的化合物将以治疗所讨论的病况的有效量给药，即，以实现期望的结果所需的剂量和时间段。治疗有效量可以根据多种因素而变，例如待治疗的具体病况、患者的年龄、性别和体重，以及待给予的化合物是作为独立治疗还是与一种或多种另外的治疗的组合给予。

可以调节剂量方案以提供最优期望的响应。例如，可以给予单一剂量，可以随时间给予若干分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急性按比例减少或增加剂量。特别有利的是在单位剂型中配制口服组合物以易于给药和剂量的均匀性。如本文所用，单位剂型是指适合用作待治疗的患者/受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有预定量的活性化合物，其经计算与所需的药物载体关联产生期望的治疗性作用。

应进一步理解，对于任何特定受试者，具体剂量方案应根据个体需求和给予或监控组合物给药的人的专业判断而随时间调节，并且本文阐述的剂量范围仅为示例性的，并且不旨在限制呈现的组合物的范围或实践。此外，本发明的组合物的剂量方案可以基于多种因素，包括疾病类型、患者的年龄、体重、性别、医疗状况、病况的严重性、给药途径以及采用的特定化合物。因此，剂量方案可以宽泛地变化，但是可以使用标准方法常规地确定。例如，可以基于药代动力学或药效学参数(其可以包括临床作用如毒性作用和/或实验室值)来调节剂量。因此，本发明包括本领域技术人员确定的患者内剂量增加。确定适当的剂量和方案是相关领域公知的，并且一旦提供本文公开的教导，将理解为是本领域技术人员所涵盖的。

通常，成人的标准日剂量在0.02mg至5000mg/天或约1mg至约1500mg/天范围内。

一旦已经发生改进患者的病况，则如果需要，给予维持剂量。随后，作为症状的函数可以将剂量或给药频率或两者降低至维持改进的疾病或病症的水平。在任何症状复发后，患者可能需要基于长期的周期性治疗。

前述范围仅为建议性的，因为关于个体治疗方案的变量数是大的，并且与这些推荐值显著偏离不常见。这样的剂量可以根据变量数而变，不限于所用的化合物的活性、待治疗的病症或病况、给药方法、个体受试者的要求、待治疗的病症或病况的严重性以及医师的判断。

本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文。尽管出于清楚理解的目的通过说明和实例的方式已经相当详细地描述了前述发明，但是鉴于本发明的教导，对于本领域普通技术人员显而易见的是，在不偏离所附实施方案的精神或范围下可以进行某些改变和修改。

为了可以更好地理解本发明，阐述以下实施例。这些实施例仅为了说明的目的，并且不应看做是以任何方式限制本发明的范围。

在本说明书(包括在说明性流程和以下描述的实施例)中的缩写为本领域普通技术人员公知的。一些缩写如下：

二甲亚砜—DMSO

(±)-2.2′-双(二苯基膦基)-1.1′-二萘—BINAP

N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐—EDC×HCl

1-羟基苯并三唑水合物—HOBt

N,N-二甲基甲酰胺—DMF

四(三苯基膦)合钯(0)—Pd(PPh₃)₄

四氢呋喃—THF

四甲基乙二胺—TMEDA

双(三甲基甲硅烷基)胺基钠—NaHMDS

[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯靶(II)，与二氯甲烷络合—PddppfCl₂×DCM。

4-二甲基氨基吡啶—DMAP。

实施例

实施例1.制备化合物1.0的方法。

步骤1.在氮气流下，在-10℃下，将50ml的THF中的3-氨基-2-氯吡啶(5.00g，39mmol)的溶液逐滴加入到43ml的THF中的NaHMDS(86mmol)的2M溶液中。将反应混合物在0℃下孵育10分钟，然后逐滴加入20ml的THF中的二碳酸二叔丁酯(8.91g，41mmol)的溶液，其速率使得温度不超过8℃。30分钟后，加入150ml的1M盐酸水溶液和50ml乙酸乙酯。有机层用水洗涤并真空浓缩。通过柱色谱法在硅胶上使用己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(8:2:0.5)作为洗脱液分离产物1.0.6，为浅黄色粉末。产率：8.10г(91％)。

步骤2.在氮气流下，将4.33ml的TMEDA(29mmol)加入到50ml的THF中的1.0.6(3.00g，13mmol)的溶液，将11.5ml的己烷中的2.5M丁基锂溶液(29mmol)冷却至-78℃并逐滴加入。在加入结束时，将反应混合物在-70℃下保持40分钟并在-20℃下保持20分钟。再次冷却至-78℃之后，逐滴加入DMF(2.03ml，26mmol)。将反应混合物在-70℃下保持1小时后，将其加热至-20℃，并加入50ml饱和NH₄Cl水溶液。将20ml水和50ml乙酸乙酯加入到所得混合物中。分离有机层，用水洗涤并真空浓缩。通过柱色谱法在硅胶上使用己烷-乙酸乙酯(8:2)作为洗脱液分离产物1.0.5，为黄色油状物。产率：2.86г(85％)。

步骤3.将3,3-二乙氧基丙酸乙酯(1.14ml，5.79mol)和三氟乙酸(3.54ml，46mmol)加入到10ml氯仿中的化合物1.0.5(1.00g，3.86mol)的溶液中，然后将溶液沸腾30分钟。将反应混合物冷却至室温后，在减压下蒸馏除去溶剂。然后将混合物在5ml亚硫酰氯中沸腾1小时。将NaHCO₃饱和溶液加入到反应混合物中至pH为9，通过乙酸乙酯进行萃取。合并有机萃取物，在减压下蒸发溶剂。通过柱色谱法在硅胶上使用己烷-乙酸乙酯(8:2)作为洗脱液分离产物1.0.4，为浅黄色粉末。产率：502mg(55％)。

步骤4.将Cs₂CO₃(5.97g，18.1mol)、BINAP(570mg，0.10当量)、乙酸钯(II)(103mg，0.05当量)、1.2ml的1M氨基甲酸叔丁酯溶液(13.6mol，1.50当量)加入到30ml的1,4-二氧杂环己烷中的化合物1.0.4(2.16g，9.06mol)的溶液中，然后将溶液加热至100℃保持1.5小时。将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土过滤。真空蒸馏除去溶剂，将残余物溶解于二氯甲烷中，用水洗涤并真空浓缩。通过柱色谱法在硅胶上使用二氯甲烷-乙酸乙酯(96:4)作为洗脱液分离产物1.0.3。产率：2.73г(95％)。

步骤5.将化合物1.0.3(2.80g，7.50mol)溶解于二氯甲烷中并加入18ml的1,4-二氧杂环己烷中的HCl溶液。2小时后，在减压下蒸馏除去溶剂，将饱和NaHCO₃溶液加入到残余物中。过滤沉淀物，并且用己烷-乙酸乙酯(1:1)的混合物洗涤，获得产物1.0.2，为白色粉末。产率：1.60г(98％)。

步骤6.将N-溴琥珀酰亚胺(1.38g，7.73mol)加入到15ml的DMF中的化合物1.0.2(1.60g，7.37mol)的悬浮液中，然后将溶液在室温下搅拌1小时。将100ml水和5ml饱和NaHCO₃溶液加入到所得溶液中。滤除产物1.0.1的沉淀物。产率：1.95г(89％)。

步骤7.将7ml水中的LiOH×H₂O(156mg，3.68mmol，1.1当量)的溶液加入到7ml的THF中的化合物1.0.1(1.00g，3.34mmol，1.00当量)的溶液中。在室温下搅拌1小时后，在减压下蒸馏除去THF，用1M HCl溶液将溶液的pH调节至4，滤除产物1.0的褐色沉淀物，用水洗涤，并在加热和减压下干燥。产率：870mg(97％)。

实施例2.制备化合物1.1、1.2、1.3、1.4、1.5的方法。

在冰浴中冷却下，将EDC×HCl(212mg，1.11mmol)分批加入到3ml的DMF中的化合物1.0(200mg，0.739mmol)、环丙烷甲胺(128μl，1.48mmol)、HOBt(170mg，1.11mmol)和三乙胺(206μl，1.48mmol)的悬浮液中。15小时后，在减压下蒸馏除去溶剂。通过柱色谱法在硅胶上使用己烷-二氯甲烷-甲醇(5:4:1)作为洗脱液分离产物1.1。产率：178mg(75％)。

由相应的初始化合物类似地制备化合物1.2、1.3、1.4和1.5。

实施例3.制备化合物2.0的方法。

步骤1.将4-(4-溴苯基)吡唑(500mg，2.23mmol)和2-溴乙酸甲酯(340mg，2.23mmol)在无水丙酮中混合并脱气。然后将压碎的无水K₂CO₃加入到反应混合物中，将混合物在搅拌下沸腾8小时。滤除反应物质，通过硅胶，真空浓缩，并用己烷-二氯甲烷(1:1)的混合物重结晶。获得产物2.0.1，为黄色粉末。产率：480mg(73％)。

步骤2.将醚2.0.1(1.07g，3.63mmol)和LiOH×H₂O(225mg，5.37mmol)在THF-水的混合物中在室温下搅拌1小时。然后用甲基叔丁基醚处理反应混合物，将水层酸化至pH＝1.5，滤除产物2.0的白色沉淀物并空气干燥。产率：720mg(80％)。

实施例4.制备化合物2.1和2.2的方法。

步骤1.将酸2.0(720mg，2.56mmol)、二甲胺盐酸盐(250mg，3.07mmol)、EDC×HCl(589mg，3.07mmol)、DMAP(78mg，0.64mmol)和三乙胺(357μl，2.56mmol)在二氯甲烷中的混合物在氮气气氛下搅拌2小时。然后在减压下浓缩反应混合物，并通过柱色谱法使用二氯甲烷-甲醇(9:1)的混合物作为洗脱液分离产物2.1.1，为白色粉末。产率：420mg(53％)。

由相应的初始化合物类似地制备化合物2.2.1。

步骤2.将化合物2.1.1(680mg，2.19mmol)、双频哪醇二硼烷(690mg，2.64mmol)和无水乙酸钾(650mg，6.59mmol)在10ml的1,4-二氧杂环己烷中的混合物用氮气脱气15分钟。然后将PddppfCl₂×DCM(90mg，0.01mmol)加入到混合物中，将混合物在氮气气氛下在搅拌下沸腾12小时。然后将反应混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩。混合物用水洗涤，用二氯甲烷进行萃取。通过柱色谱法使用乙酸乙酯-甲醇(9:1)的混合物分离产物2.1。产率：350mg(45％)。

由相应的初始化合物类似地制备化合物2.2。

实施例5.制备化合物2.3的方法。

步骤1.将3-溴-1H-吡唑(5.00g，33.7mmol)溶解于25ml乙醇中，加入1-溴-2-甲氧基乙烷(4.71ml，50.5mmol)和KOH(2.86g，50.5mmol)。将反应混合物在搅拌下沸腾6小时。然后将反应混合物真空浓缩，用水处理，并且通过萃取分离产物2.3.2，为黄色油状物。产率为6.23g(90％)。

步骤2.将氮气通过溴吡唑2.3.2(6.19g，29.9mmol)、双频哪醇二硼烷(9.11g，35.8mmol)和无水乙酸钾(8.80g，89.7mmole)在50ml的1,4-二氧杂环己烷中的混合物中15分钟。然后将PddppfCl₂×DCM(1.26mg，1.49mmol)加入到混合物中，将混合物在氮气气氛下在搅拌下沸腾5小时。然后加入1,4-二溴苯(14.1g，59.8mmol)、50ml水中的Cs₂CO₃(19.5g，59.8mmol)的溶液，并将反应混合物用氮气脱气15分钟。将Pd(PPh₃)₄(1.73g，15.9mmol)加入到反应物质中，将反应物质在氮气气氛下在搅拌下沸腾4小时。然后将反应混合物通过硅藻土过滤，在减压下浓缩，用水处理，通过乙酸乙酯萃取，并且通过柱色谱法使用己烷-乙酸乙酯(1:1)作为洗脱液分离溴苯基吡唑2.3.1。产率：3.11г(38％)。

步骤3.采用与化合物2.1(实施例4，步骤2)类似的方式制备化合物2.3。

实施例5.制备化合物3.43、3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49、3.50、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56、3.57的方法。

将10ml的1,4-二氧杂环己烷和5ml水的混合物中的化合物1.1(200mg，0.623mmol)、化合物2.1(355mg，0.747mmol)和NaHCO₃(157mg，1.87mmol)的溶液用氮气流脱气，然后加入Pd(PPh₃)₄(72mg，0.1当量)。将反应物质在90℃下加热5小时，之后在减压下蒸发挥发性化合物。将残余物溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤并真空浓缩。通过柱色谱法在硅胶上使用二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4:6:1)作为洗脱液分离产物。通过制备色谱法进一步纯化化合物3.43。产率：150mg(51％)。

采用类似的方式制备化合物3.44、3.45、3.46、3.47、3.48、3.49、3.50、3.51、3.52、3.53、3.54、3.55、3.56和3.57。

实施例6.制备化合物3.49×2HCl的方法。

在氮气流下将乙醚中的0.4M HCl溶液(188μl，0.075mmol，2.5当量)逐滴加入到二氯甲烷-甲醇(10:1)的混合物中的化合物3.49(15mg，0.030mmol)的溶液中。在减压下蒸馏除去挥发性组分，所得固体残余物用乙醚研磨。滤除黄色沉淀物，用醚洗涤两次，真空干燥。产率：16mg(100％)。

实施例7.制备的化合物的分析。

通过液相色谱法-质谱法(LC-MS)和¹H NMR光谱法(表1)证实制备的化合物纯度和结构。

表1.候选物的物理化学性质

实施例8.确定化合物在人血浆中的稳定性。

为了评估化合物的血浆稳定性，我们使用取自10名健康供体的合并的人血浆。初始候选物溶液(10mM，在DMSO中)用合并的血浆稀释至10μm的浓度(测试溶液)。将测试溶液在干燥块恒温器(dry block thermostat)中在37℃下孵育4小时。采用具有Agilent 1200液相色谱法系统(Agilent,USA)的HPLC来确定测试样品中的化合物的峰面积，所述峰面积相应于初始测试时间(孵育前)和最终测试时间(在干燥块恒温器中在37℃下孵育4小时后)，蛋白质用乙腈初步沉淀。在梯度洗脱方案中进行色谱法分析，其中流速为1mL/分钟。确定恒温后样品中物质的量，以％计。

估计化合物的稳定性。本文所述的化合物显示至少90％的化学稳定性，即，它们在人血浆中是化学稳定的(表2)。

表2.确定化合物在人血浆中的稳定性的结果。结果以在若干次测试中获得的化合物的稳定性(％)的平均值呈现。

实施例9.确定酶稳定性。

测量本发明的化合物的酶稳定性使得能够估计它们对I期生物转化酶的作用的稳定性。

通过在干燥块加热器(dry block heater)中在37℃下孵育反应混合物，检测化合物的酶促分解速率；反应混合物含有0.5mg/ml的合并的人肝微粒体(XenoTech,USA，目录号H6010)、10μM的化合物、2mМβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Carbosynth,UK，目录号NN10871)和4mM的氯化镁在0.1M磷酸钠缓冲液(pH＝7.4)中。反应用乙腈(100μL乙腈/100μL反应混合物)猝灭。猝灭后，将样品以10000rpm离心10分钟。使用Agilent1200(Agilent,USA)通过色谱法技术测试上清液流体。在梯度洗脱方案中进行色谱法分析，其中流速为1mL/分钟。制作物质的峰面积的对数作为时间的函数的图。线的制约因子(dependent factor)对应于消除速率常数K，基于该消除速率常数K计算药物的半衰期T1/2和降解速率CL_int：

消除速率常数(k)＝(-梯度)

基于所获得的数据，确定候选物在人肝微粒体中的酶稳定性。根据本发明的化合物显示对I期生物转化酶的作用的足够的稳定性，并且酶降解速率CL_int小于47μL/min/mg。结果示于表3中。

测量本发明的化合物的酶稳定性使得能够估计它们对II期生物转化酶的作用的稳定性。

通过在干燥块恒温器中在37℃下孵育反应混合物，测量酶降解速率，所述反应混合物包含0.5mg/ml的合并的人肝S9级分(XenoTech,USA，目录号H6010)、10μM化合物、2mМβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Carbosynth,UK，目录号NN10871)和4mM氯化镁在0.1M磷酸钠缓冲液(pH＝7.4)中。反应用乙腈(100μL乙腈/100μL反应混合物)猝灭。猝灭后，将样品以10000rpm离心10分钟。使用Agilent1200(Agilent,USA)通过色谱法技术测试上清液流体。在梯度洗脱方案中进行色谱法分析，其中流速为1mL/分钟。制作物质的峰面积的对数作为时间的函数的图。线的制约因子对应于消除速率常数K，基于该消除速率常数K计算药物的半衰期T1/2和降解速率CL_int：

消除速率常数(k)＝(-梯度)

基于所获得的数据，确定候选物在人肝S9级分中的酶稳定性。化合物表明足够的微粒体稳定性，并且它们的酶促分解速率CL_int小于24μL/min/mg。结果示于表3中。

表3.测量化合物的酶稳定性的结果。结果以在若干次测试中获得的化合物的稳定性(CL_int，μL/min/mg)的平均值呈现。

实施例10.估计化合物通过Caco-2细胞单层的渗透性。

估计通过Caco-2细胞单层的渗透性使得能够评估物质借助主动和被动运输两者渗透通过生物膜的能力。

使肠上皮细胞Caco-2在过滤器插入物(孔径0.4μm，具有高密度的BD Falcon)上生长21天；然后根据标准方案使用Lucifer Yellow(Sigma-Aldrich,USA)检查单层完整性。在A→B转移(“肠内腔”-“血流”转移)中，将测试物质在缓冲液(pH 6.5)(HBSS、10mM HEPES、15mM葡萄糖)中的溶液以10μM的浓度加入到上面的室中；而下面的室填充缓冲液(pH 7.4)(HBSS、10mM HEPES、15mM葡萄糖、1％BSA)。在B→A转移(“血流”-“肠内腔”转移)中，上面的室填充缓冲液(pH 6.5)，而将测试物质在缓冲液(pH 7.4)中的溶液以10μM的浓度加入到下面的室中。高度可渗透的物质普萘洛尔(propranolol)用作对照。

在含有5％CO₂的气氛下在37℃下孵育2小时后，使用Agilent1200 HPLC系统(Agilent,USA)通过HPLC测量在上面的室和下面的室中测试物质的量，蛋白质用乙腈初步沉淀。在梯度洗脱方案中进行色谱法分析，其中流速为1mL/分钟。在色谱图上检测相应于化合物的峰面积。基于校准标准物中化合物的峰面积，测量初始溶液中和来自上面的室孔和下面的室孔的样品中的化合物的浓度。

细胞渗透性系数Papp通过下式计算：

P_app＝(C_a(t)*Va)/(C_d(0)*t*Area)，其中

P_app为有效渗透性常数，m/s

V为溶液的体积(在A→B测试中为0.8ml，在B→A测试中为0.2ml)，ml Area为膜表面积(0.33cm²),cm²

t为孵育时间(7200秒)，秒

C_d(0)为初始溶液浓度，μM

C_a(t)为2小时后溶液的浓度(在A→B测试中来自下面的室的孔中的样品的浓度；在B→A测试中来自上面的室的孔中的样品的浓度)，μM

流出系数显示细胞能够从血流消除物质。通过下式计算值：

流出＝P_{app B-A}/P_{app A-B}，其中

P_{app A-B}—直接A→B测试渗透性值

P_{app B-A}—逆向B→A测试渗透性值

本发明的化合物显示高速率的直接运输，流出系数不大于2。基于该结果，我们可以假定Pgp转运蛋白不对物质的生物利用度强加限制。结果示于表4中。

表4.通过Caco-2细胞单层的渗透性的测量结果。结果以在若干次测试中获得的直接运输(A→B，Paap 10^-6cm/s)和化合物的流出的平均值呈现。

实施例11.化合物对体外重组CDK8蛋白质-细胞周期蛋白C复合物的亲和力。

使用LanthaScreen(ThermoFisher)测定检测本发明的的化合物结合CDK8蛋白质的能力。我们检测了与CDK8-结合的荧光标记的配体(示踪剂236)的量成比例的FRET信号，该配体与抑制剂竞争ATP结合位点。我们使用384孔板(Corning，#CLS4513)在15μl反应体积中进行了测量。将酶CDK8/细胞周期蛋白C(ThermoFisher，#PR7261B)与抗体抗-His-标签-生物素(ThermoFisher，#PV6090)、链霉亲和素-Eu(ThermoFisher，#PV6025)混合，将所得混合物加入到板孔中(5мкл/孔)中。物质的最终浓度如下：CDK8/细胞周期蛋白C是5nM，链霉亲和素-Eu是3nM，抗-His-标签-生物素是3nM。星孢素(S4400,Sigma)用作参考抑制剂，并且二甲亚砜(DMSO)在反应缓冲液中的0.1％溶液用作空白，该反应缓冲液包含250mM HEPES(pH 7.5)、50mM MgCl₂、5mM EGTA和0.05％Brij-35。

将所讨论的抑制剂和对照加入到相应的孔中(5μl/孔)。将板在室温下孵育20分钟。孵育后，将5μl/孔的示踪剂溶液Alexa Fluor-647(激酶示踪剂236，ThermoFisher，#PV5592))加入到孔中。示踪剂的最终浓度为10nM。反应缓冲液(而不是示踪剂溶液)用作阴性对照。将板在25℃下孵育40分钟，然后根据制造商的指南在SPARK20读板器(Tecan，Switzerland)上测量TR-FRET信号，并将值转化为激酶-结合的示踪剂的量。使用SparkControl Magellan 1.2软件(Tecan，Switzerland)计算IC₅₀值，通过四参数逻辑模型接近实验点，其中通过Levenberg-Marquardt优化(表5)。

表5.化合物与CDK8/细胞周期蛋白C蛋白质的结合的生物化学测定的结果。数据以在若干次测试中获得的IC₅₀的平均值呈现。

实施例12.针对体外CDK8敏感性细胞系的抗增殖活性。

使用活体染料AlamarBlue(ThermoFisher，#DAL1100)在基于细胞的测试中测量根据本发明的CDK8抑制剂对连续细胞培养物MV4-11(双表型髓单核细胞白血病，

CRL-9591^TM)、KG-1(急性髓细胞样白血病，

CCL-246^TM)的抗增殖活性。将细胞在加入10％FBS(Gibco，#16140-071)的RPMI-1640(PanEco，#C330p)培养基中生长；洗涤，并再悬浮于96孔培养板(Corning，#3599)中的具有10％FBS(Gibco，#16140-071)的培养基中，其中每孔100μm培养基中具有约10×10³个细胞。将所讨论的化合物溶解于DMSO中，并用具有10％FBS(Gibco，#16140-071)的培养基稀释至0-100μM范围的最终浓度。然后将50μM的经稀释的化合物加入到每个孔中(最终DMSO浓度小于1％)，并在5％CO₂气氛下在37℃下孵育120小时。孵育后，加入15μL/孔的AlamarBlue(ThermoFisher，#DAL1100)试剂，将板的内含物在轨道振荡器(Biosan,Latvia)中混合，并在5％CO₂气氛下在37℃下进一步孵育3-5小时。使用在540nm的激发波长(λEx)和590nm的发射波长(λEm)下测量荧光信号的微板分光光度计(Tecan Infinite M200Pro，Switzerland)估计活细胞的数量。

使用Magellan 7.2软件(Tecan，Switzerland)计算IC₅₀值，通过四参数逻辑模型接近实验点，其中通过Levenberg-Marquardt优化(表6)。

在针对HepG2细胞(肝细胞癌，

HB-8065^TM)的一般细胞毒性的测试中确定CC₅₀值。以在100μL培养基中约20×10³个细胞的浓度在96孔板(Corning，#3599)中每孔接种细胞，并孵育72小时，其中加入的化合物的浓度在200-0.78μM范围内。使用上述方法评估细胞存活力。结果在表6中给出。

表6.在使用靶细胞系小组(MV-4-11)的基于细胞的抗增殖测试中化合物的特异性活性的评估结果和使用HepG2细胞系的一般毒性的评估结果。数据以在若干次测试中获得的IC₅₀的平均值呈现。

Claims (17)

1.式I的化合物：

或其药学上可接受的盐或立体异构体，

其中L为-[СН₂]_0-3-、-[СH₂]_0-2-C(O)-、-С(O)-[CH₂]_0-2-；

R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

R¹为-NR²R³；

R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁰取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹¹取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基，或者

R²和R³与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R²和R³形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代；

R⁴和R⁵独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_2-6炔基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烯基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁵取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁶取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基，或者

R⁴和R⁵与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R⁴和R⁵形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代；

R⁶为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁷取代的C_1-6烷基；

各个R⁷和R¹²独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(=O)R¹⁸、-NR²¹C(=O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R⁹和R¹⁴独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(=O)R¹⁸、-NR²¹C(=O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、氧代基团、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R⁸、R¹⁰、R¹¹、R¹³、R¹⁵和R¹⁶独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰、-NR²¹C(=O)R¹⁸、-NR²¹C(=O)NR¹⁹R²⁰、-SO₂R²²、-SO₂NR²³R²⁴、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的C_3-7环烷基；

各个R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰和R²¹独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₂-С₆烯基、С₂-С₆炔基、С₃-С₇环烷基；或者

R¹⁹和R²⁰与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R¹⁹和R²⁰形成的杂环可以是未取代的或被1个或2个选自以下的取代基取代：氧代基团、卤素、OH、NH₂、CN、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷基氨基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中L为-C(O)-、-СН₂-。

3.根据权利要求1-2所述的化合物，其中R¹为-NR²R³，

其中R²和R³独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R⁷取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁸取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R⁹取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁰取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹¹取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基；

各个R⁷和R⁹独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰；

各个R⁸、R¹⁰和R¹¹独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基；

各个R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₃-С₇环烷基；或者

其中R¹为：

、

、

、

、

，

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁶、R²⁷、R²⁸为H、CN、OH、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3。

4.根据权利要求1-3所述的化合物，其中R为-NR⁴R⁵、-OR⁶；

各个R⁴和R⁵独立地为H；未取代的或被一个或若干个取代基R¹²取代的C_1-6烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹³取代的C_3-7环烷基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代的具有1-2个选自N、O和/或S的杂原子的5-6元杂环基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁵取代的芳基；未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁶取代的具有1-4个选自N、O和/或S的杂原子的杂芳基；

各个R¹²和R¹⁴独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰；

各个R¹³、R¹⁵和R¹⁶独立地为H、卤素、CN、-OR¹⁸、-NR¹⁹R²⁰、-C(=O)R¹⁸、-C(=O)NR¹⁹R²⁰、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基；

各个R¹⁸、R¹⁹和R²⁰独立地为H、未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-C₆烷基、未取代的或被一个或若干个选自C_1-6烷基、卤素的基团取代的С₃-С₇环烷基；或者

其中R⁴和R⁵与它们连接的氮原子一起形成具有1-3个选自N和/或O的杂原子的4-7元杂环，其中通过R⁴和R⁵形成的杂环可以是未取代的或被一个或若干个取代基R¹⁴取代，

其中所述4-7元杂环为

、

、

，

R²⁵为H、C_1-6烷基；

R²⁸为H、CN、OH、C_1-4烷氧基；

n为0、1、2、3；

R⁶为未取代的或被一个或若干个卤素取代的C_1-6烷基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为：

。

6.根据权利要求1所述的化合物，其中R为：

。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中所述化合物为：

8-氨基-N-(环丙基甲基)-5-(4-(1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.43)；

8-氨基-N-(环丙基甲基)-5-(4-(1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.44)；

8-氨基-N-(环丙基甲基)-5-(4-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.45)；

8-氨基-N-环丙基-5-(4-(1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.46)；

8-氨基-N-环丙基-5-(4-(1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.47)；

8-氨基-N-环丙基-5-(4-(1-(2-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.48)；

2-(4-(4-(8-氨基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1,7-萘啶-5-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)-N,N-二甲基乙酰胺(3.49)；

2-(4-(4-(8-氨基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1,7-萘啶-5-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)-N,N-二甲基乙酰胺二盐酸盐(3.49×2HCl)

2-(4-(4-(8-氨基-3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1,7-萘啶-5-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-酮(3.50)；

(8-氨基-5-(4-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(3.51)；

2-(4-(4-(8-氨基-3-(氮杂环丁烷-1-羰基)-1,7-萘啶-5-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)-N,N-二甲基乙酰胺(3.52)；

2-(4-(4-(8-氨基-3-(氮杂环丁烷-1-羰基)-1,7-萘啶-5-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-酮(3.53)；

(8-氨基-5-(4-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-基) (氮杂环丁烷-1-基)甲酮(3.54)；

8-氨基-5-(4-(1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.55)；

8-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-5-(4-(1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.56)；

8-氨基-N-(2-甲氧基乙基)-5-(4-(1-(2-甲氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯基)-N-甲基-1,7-萘啶-3-甲酰胺(3.57)。

8.用于抑制受试者的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的生物活性的方法，所述方法包括使所述细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19与权利要求1-7中任一项所述的化合物接触。

9.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述药物组合物配制用于预防或治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，用于预防或治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症，其中所述由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症为肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。

12.用于治疗由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症的方法，所述方法包括给予需要其的受试者治疗有效量的权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求9所述的药物组合物。

13.根据权利要求12所述的用于治疗疾病或病症的方法，其中所述由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症为肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病。

14.根据权利要求13所述的用于治疗疾病的方法，其中所述肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。

15.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求9所述的药物组合物用于治疗需要其的受试者由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症中的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述由细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK8/19的激活介导的疾病或病症为肿瘤疾病或血液-肿瘤疾病。

17.根据权利要求16所述的用途，其中所述肿瘤疾病和/或血液-肿瘤疾病选自结肠直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、前列腺癌、转移性卵巢癌、转移性胃癌、造白细胞组织增生、急性髓细胞样白血病、胰腺癌。