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CN112603978A - 一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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CN112603978A CN202110007158.1A CN202110007158A CN112603978A CN 112603978 A CN112603978 A CN 112603978A CN 202110007158 A CN202110007158 A CN 202110007158A CN 112603978 A CN112603978 A CN 112603978A
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Guanganmen Hospital of CACMS
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Abstract

本发明公开了一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物及其制备方法。该中药组合物主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪50‑80份、水蛭15‑25份、枳实15‑25份、太子参15‑25份、五味子15‑25份、益智仁5‑15份。本发明还提供了上述中药组合物的制备方法及包含其的药物制剂。本发明的中药组合物能有效治疗2型糖尿病合并冠心病，且疗效优于原糖心平胶囊，同时其毒理学研究表现出更加安全。

Description

一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中医药技术领域。更具体地，涉及一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物及其制备方法。
背景技术
糖尿病心脏病是糖尿病的一种慢性血管并发症，涉及到心脏的大、中、小、微血管。糖尿病人并发冠心病为非糖尿病人的2-4.5倍，糖尿病患者平均病史6.5年，冠心病发生率为12％，糖尿病心肌梗塞死亡率为非糖尿病患者的2倍。随着人口老龄化程度加剧，老年糖尿病合并冠心病患者的发病率也越来越高。糖心平胶囊是中国中医科学院广安门医院林兰主任，潜心50多年临床经验，根据糖尿病并发心脏病的中医病因病机特点，经过临床实践而确立的，能有效控制糖尿病的发展，降低糖尿病引起冠心病发生的时间和几率。前期工作经验通过科学实验和临床实践得以证实，并通过了国家知识产权局批准的专利(专利号：200910085330.4)。因原处方中五加皮经现代毒理学研究，发现期存在服用过量可引起恶心呕吐，头昏头晕，心动过缓等不良反应。为了临床治疗中能更长时间服用中药，并且更加安全，寻求替代方成为需要解决的问题。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明的一个目的在于提供一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物及其制备方法。
本发明的另一个目的在于提供利用上述中药组合物制成的药物制剂。
为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：
第一方面，本发明提供一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物，主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪50-80份、水蛭15-25份、枳实15-25份、太子参15-25份、五味子15-25份、益智仁5-15份。
优选的，所述中药组合物主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪64.5份、水蛭21.5份、枳实21.5份、五味子21.5份、太子参21.5份和益智仁12份。
本发明提供的治疗2型糖尿病冠心病的中药物组合物是在糖心平胶囊原方的基础上，结合中医辨证和药物特性，用益智仁替代五加皮入药，解决五加皮服用过量引起的恶心呕吐，头昏头晕，心动过缓等不良反应。研究表明益智仁能增强人体免疫力、调节内分泌功能、增加体质、扩张血管，可以有效预防动脉硬化，预防和治疗冠心病，心绞痛，心肌缺血，心律失常等疾病的发生。且该药温而不燥，补而不峻，涩而不滞，性平缓和，适宜长期服用，且安全有效。
此外，本发明通过各个药味相互协同，在治疗大鼠糖尿病合并冠心病的药效学研究中，疗效优于原糖心平胶囊，同时其毒理学研究表现出更加安全。
第二方面，本发明提供一种上述中药组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
将配方量的水蛭粉碎成细粉；
将配方量的五味子和枳实用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩至50℃条件下相对密度为1.20-1.25的稠膏1；
将配方量的黄芪、太子参和益智仁分别加水煎煮，合并煎煮液，浓缩至40℃条件下相对密度为1.10-1.20的稠膏2；然后加乙醇至乙醇的含量为60％，静置36小时，滤过，得到的滤液浓缩至40℃条件下相对密度为1.12-1.45的稠膏3；
将稠膏1和稠膏3合并，加入水蛭细粉，混匀、干燥、粉碎成细粉，即得。
可选的，所述乙醇回流提取的具体条件为：加入原料药8-12倍重量的75％乙醇提取2-4次，每次1-3h。
可选的，所述水煎煮的具体条件为：加入原料药6-10倍重量的水煎煮2-4次，每次1-3h。
本发明还要求保护由上述中药组合物制成的药物制剂，该药物制剂可以包括药学上可接受的辅料，按照常规制剂工艺，制成各种制剂，如颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、口服液等剂型。
可选的，为了便于长期服用，所述药物制剂为胶囊剂。
本发明的有益效果在于：
本发明中药组合物能有效治疗2型糖尿病合并冠心病，且疗效优于原糖心平胶囊，同时其毒理学研究表现出更加安全。
另外，如无特殊说明，本发明中药组合物各原料药均可通过市售商购获得，本发明所记载的任何范围包括端值以及端值之间的任何数值以及端值或者端值之间的任意数值所构成的任意子范围的中药组合物均可以达到预防和治疗糖尿病合并冠心病的目的。
附图说明
图1为各组大鼠心肌组织HE染色病理切片图(200x)。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1新糖心平胶囊治疗糖尿病合并冠心病的药效学研究
研究优化后的新糖心平胶囊(黄芪64.5份、水蛭21.5份、枳实21.5份、五味子21.5份、太子参21.5份和益智仁12份)与原糖心平胶囊在治疗加高糖高脂膳食诱发大鼠糖尿病合并冠心病(心肌病变)动物模型中的药效学差异。原糖心平胶囊(以下简称为TXP)中为五加皮，新糖心平胶囊(以下简称为n-TXP)中将五加皮去除，加入益智仁。
1.1药品及试剂制备
①STZ缓冲液制备：使用2.1％g/ml的柠檬酸与2.94％g/ml的柠檬酸按照1：1.32的比例制备成缓冲液，PH:4.2～4.5。
②Met药液制备：成人(70kg)每日常用剂量为1.5g，根据《人和动物按体表面积折算的等效剂量比值表》，以成人(70kg)每日每公斤体重用药量的7倍作为大鼠等效剂量。临用时用0.9％生理盐水配制成混悬液，灌胃体积10ml/kg。
③TXP、n-TXP药粉溶液制备：TXP、n-TXP药粉与蒸馏水均匀混合，按照所需比例，制备药粉水溶液。
1.2动物模型制备
取上述SD大鼠90只，在适应性饲养1周后，随机分为正常饮食组10只和高脂饲料饮食组80只，高脂饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司提供，配料：68％常规饲料、10％蔗糖、10％蛋黄粉、10.1％猪油、1.5％胆固醇，0.4％胆酸盐)，各组大鼠分别喂养四周后，高脂饮食组大鼠一次性予35mg/Kg STZ缓冲液腹腔注射，正常饮食组大鼠予35mg/Kg STZ缓冲液腹腔注射。STZ缓冲液注射72h后，(禁食12h)尾静脉采血测定FBG水平，FBG≥11.1mmol/L，且出现多饮、多尿、多食现象，即认为T2DM模型成功，按照此标准高脂组有60只大鼠造模成功。
1.3分组及给药
将上述造模成功的60只大鼠，按照血糖值随机分成5组，即模型组、TXP组、n-TXPD(新糖心平低剂量)组、n-TXPG(新糖心平高剂量)组及Met组，每组各12只。正常对照组大鼠10只。分组后连续给药6周，每周测一次体重，按照体重计算灌胃量。①正常对照组：每日0.9％生理盐水1mL/100g灌胃，普通词料自由饮水；②模型对照组：每日0.9％生理盐水1mL/100g灌胃，普通词料自由饮水；③TXP组：每日0.84g/kg TXP药粉水溶液水1mL/100g灌胃，相当于成人每日给药剂量的14倍；④n-TXPD组：每日0.42g/kg TXP药粉水溶液水1mL/100g灌胃，相当于成人每日给药剂量的7倍；⑤n-TXPG组：每日0.84g/kg TXP药粉水溶液水1mL/100g灌胃，相当于成人每日给药剂量的14倍；⑥Met组：每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液水1mL/100g灌胃。
除正常组(普通饲料)外，其余实验组大鼠均使用高脂饲料喂养，自由饮水。
1.4血清及组织的留取
1.4.1血样标本的制备
各组大鼠干预6周后，禁食12h，30mg/kg 3％戊巴比妥钠腹腔注射实施麻醉。3-5min麻醉满意后，分离腹主动脉取血，将血样置于EP管中室温静置30min，随后在4℃条件下，3000rpm离心10min，取上清分装，-80℃保存，用于生化分析。
1.4.2组织样本的制备
各组大鼠处死后，暴露心脏，迅速将心脏周围组织分离干净，取下整个心脏，各组分别从大鼠心脏中相同部位迅速剪取部分心肌组织，生理盐水漂洗干净，浸泡于10％的福尔马林中固定，行心肌组织HE染色。剩余心脏组织置于-80℃保存备用。
1.5观测指标
1.5.1一般情况
给药前及给药后同一时间观察、记录大鼠一般状态，包括大鼠的精神状态、毛色、进食活动、对外界刺激的反应以及死亡率等情况。
1.5.2血液检查指标
1.5.2.1空腹血糖(FBG)测定
各组大鼠给药前、给药后2周、4周、6周各测FBG—次。测定FBG前禁食水8h，鼠尾部采血，用罗氏活力型血糖仪及配套血糖试纸检测。
1.5.2.2空腹胰岛素(FINS)测定
各组大鼠干预6周末，按照Mercodia大鼠超敏胰岛素定量检测试剂盒说明，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测FINS，采用HOMA-IR评估IR。HOMA-IR＝FBG(mmol/L)×FINS(nU/mL)/22.5。
1.5.2.3丙二醛(MDA)活力测定
按照MDA试剂盒说明，采用TBA法测定血清MDA活力。
1.5.2.4血脂四项测定
由优科卓业生物医学技术(北京)有限公司采用全自动生化分析仪检测各组大鼠的血脂四项(TC、TG、HDL、LDL)。
1.5.2.5 CK-MB测定
使用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验，来检测血清中CK-MB的量。固相载体吸附抗体后与样本以及标记了辣根过氧化物酶(HRP)的抗体反应，四甲基联苯胺(TMB)与HRP反应后的产物呈蓝色，并在酸的作用下转化为黄色。然后再450nm处检测OD值，从而计算样品浓度。
1.5.2.6 6KPG测定
本实验采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法。将标准品、待测样本加入到预先包被6酮前列腺素(6-K-PG)单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中6酮前列腺素(6-K-PG)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中6酮前列腺素(6-K-PG)含量。
1.5.2.7 BNP测定
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
1.5.2.8 CRP、TXB2测定
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血栓素B2(TXB2)水平。
1.5.2.9 ET-1、HBDH测定
ET-1、HBDH的测定都应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素1(ET-1)、羟基丁酸脱氢酶(αHBDH)水平。用纯化的大鼠内皮素1(ET-1)、HBDH抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内皮素1(ET-1)、HBDH再与HRP标记的ET-1、HBDH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠内皮素1(ET-1)、HBDH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素1(ET-1)、HBDH浓度。
1.6 HE染色
⑴大鼠心脏组织的石蜡包埋与切片：将新鲜取下的心脏组织，放入含有4％多聚甲醛EP管中固定24h，开始后续操作。①将心脏组织沿心肌横轴切取3mm×3mm大小组织块，清水冲洗；②脱水与透明：80％酒精2h-95％酒精12h-95％酒精II2 h-100％酒精I1h-100％酒精II1h→二甲苯I30min-二甲苯I130min；③浸蜡与包埋：蜡杯I(52-58℃)1h-蜡杯II(52-58℃)1h-蜡杯III(52-58℃)1h，将组织块放入包埋框石蜡内，调整组织块位置，冷却；④使用切片机连续切片保持在5mn左右厚度，使用30％乙醇展平后，移入展片仪水盒内。待切片充分展平后，用载玻片捞取，45℃烤片1h备用。⑵HE染色：①80℃中烤片1h；②脱赌：加入二甲苯2次，每次约10-15min，每次均用吸水纸吸干；③至水：加入100％乙醇2次，均5min，吸水纸吸干95％乙醇3min，入流水2min，吸水纸吸干；④苏木素染色5min，自来水冲洗；⑤1％盐酸水溶液分化5-10s(切片由蓝变红)，自来水返蓝15-30min；⑥伊红染色0.5-1.5min，95％乙醇脱水5min×2次，100％乙醇脱水5min×2次；⑦加入二甲苯3-5min×2次，用自动灯片机封片；⑧光学显微镜观察，并扫描图片。
1.7大鼠心电图的操作及观察指标
⑴动物麻醉：用10％水合氯醛(以生理盐水溶解过滤)以300mg/Kg计量麻醉4min后立即检测。⑵检测：将大鼠麻醉固定后，心电图机的参数设置为：走纸速度50mm/s，电压2mv。将针电极插入四肢皮下作为肢导联的电极，在大鼠剑突上移一个助间隙，将V1放置于胸骨右缘，V2导联放于胸骨左缘，V5导联则放置在大鼠腋中线位置。记录大鼠正常心电图，然后大鼠舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg，注射垂体后叶素后出现下列指征1项者即为心肌缺血阳性：J点升高1.5mV以上；ST水平升高0.1mV以上，T波降低50％以上、双向、倒置，心律不齐。依据上述指标判断是否造成急性心肌缺血模型，考察给药对模型的影响。连续观察并描计给予垂体后叶加压素后15s、30s、1min、3min、5min、10min大鼠标准Ⅱ导联心电图的变化情况。
1.8实验结果
1.8.1新糖心平对T2DM大鼠血糖的影响
与正常组相比，模型组血糖明显升高，差异具有统计意义(p＜0.01)，提示造模成功。两周时，与模型组相比，Met组血糖降低明显，差异具有统计学意义(p＜0.01)；四周时，与模型组相比，n-TXPD、n-TXPG组及Met组血糖均明显下降，差异具有统计学意义(p＜0.01)。六周时，与模型组相比，各给药组血糖均有明显的下降。其具体情况如下表1所示：
表1糖心平对T2DM大鼠血糖(mmol/L)的影响
Figure BDA0002883502830000071
注：与Normal组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与Model组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与TXP组相比，^P＜0.05，^^P＜0.01；与Met组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
1.8.2糖心平对T2DM大鼠HBDH、INS、TXB2、CRP的影响
与正常组相比，模型组HBDH明显升高，差异具有统计学意义(p＜0.01)；与模型组相比，各组HBDH均明显降低，差异具有统计意义(p＜0.01)，n-TXPD、n-TXPG组较TXP组降低更明显。与正常组相比，模型组INS水平明显升高，差异具有统计学意义(p＜0.01)；与模型组相比，Met组及n-TXPG组INS水平明显降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。与正常组相比，模型组TXB2水平明显升高，差异具有统计学意义(p＜0.01)；与模型组相比，TXP组和n-TXPD、n-TXPG组TXB2水平下降明显，差异具有统计学意义(p＜0.01)。与正常组相比，模型组CRP显著增高(p＜0.01)，与模型组相比，n-TXP及Met组下降明显，差异具有统计学意义(p＜0.01)。其具体情况如下表6所示：
表2糖心平对T2DM大鼠HBDH、INS、TXB2、CPR的影响
Figure BDA0002883502830000081
注：与Normal组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与Model组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与TXP组相比，^P＜0.05，^^P＜0.01；与Met组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
1.8.3糖心平对T2DM大鼠ET-1、BNP、CKMB、6KPG的影响
与正常组相比，模型组ET-1明显升高，差异具有统计意义(p＜0.01)。与模型组相比，各组ET-1均明显降低，其中n-TXPG及Met组降低显著(p＜0.01)；与正常组相比，模型组BNP明显升高(p＜0.01)。与模型组相比，TXP、n-TXPD、n-TXPG组及Met组BNP明显降低(p＜0.05)；与正常组相比，模型组CKMB明显升高(p＜0.01)。与模型组相比，TXP、n-TXPD、n-TXPG、Met组CKMB水平明显降低(p＜0.05)；与正常组相比，模型组6KPG明显降低(p＜0.01)，与模型组相比，n-TXPD、n-TXPG组及Met组6KPG明显降低(p＜0.05)。具体如下表3所示：
表3糖心平对T2DM大鼠ET-1、BNP、CKMB、6KPG的影响
Figure BDA0002883502830000082
注：与Normal组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与Model组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与TXP组相比，^P＜0.05，^^P＜0.01；与Met组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
1.8.4糖心平对T2DM大鼠TG、TC、HDL、LDL的影响
与正常组相比，模型组TG明显升高，差异具有统计意义(p＜0.01)，与模型组相比，n-TXPD、n-TXPG组及Met组TG均显著降低。与正常组相比，模型组TC明显升高，差异具有统计意义(p＜0.01)，与模型组相比，各组TC均降低显著，差异具有统计意义；与正常组相比，模型组LDL-C明显升高，差异具有统计意义(P＜0.01)，与模型组相比，各组LDL-C均降低，差异具有统计学意义；与正常相比，模型组HDL-C显著下降(p＜0.01)，与模型组相比，n-TXPD、n-TXPG组HDL-C显著升高。其具体情况如下表4所示：
表4糖心平对T2DM大鼠TC、TG、HDL、LDL(mmol/L)的影响
Figure BDA0002883502830000091
注：与Normal组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与Model组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与TXP组相比，^P＜0.05，^^P＜0.01；与Met组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
1.8.5糖心平治疗后T2DM大鼠病理切片结果
通过观察从HE染色结果可以看出，见图1，正常组心肌细胞排列整齐，未见肿胀，心肌纤维完整，染色均匀；与正常组大鼠相比，模型组组大鼠心肌区域性坏死，损伤严重，间质水肿，可见炎性细胞和大量红细胞浸润，肌纤维排列紊乱、肿胀，心肌纤维断裂，染色不均；TXP组、n-TXPD组、n-TXPG组、Met组可见心肌细胞排列相对整齐，心肌纤维较为完整，水肿较轻，间质轻度水肿，炎性细胞浸润较模型组明显减少。
1.8.6糖心平治疗后T2DM大鼠心电图变化
与正常组相比，模型组在15s、30s时S-T段上抬明显(P＜0.01)，与模型组相比，各组S-T段位移差异显著，均低于模型组(P＜0.01)，且n-TXPG组位移最小，优于各组。1min时，与正常组相比，模型组S-T段上抬明显(P＜0.01)，与模型组相比各组S-T段位移差异显著，均低于模型组(P＜0.01)，n-TXPG组S-T段上抬较少，差异具有统计意义(P＜0.05)。3min时，与正常组相比，模型组模型组S-T段上抬明显(P＜0.01)，与模型组相比各组S-T段位移差异显著，均低于模型组(P＜0.01)。5min时，与正常组相比，模型组S-T段上抬明显(P＜0.01)，与模型组相比各组S-T段位移差异显著，均低于模型组(P＜0.01)，n-TXPG组优于Met组和低剂量组。10min时，与正常组相比，模型组S-T段上抬明显(P＜0.01)，与模型组相比各组S-T段位移差异显著，均低于模型组(P＜0.01)，n-TXPG组效果显著，与各组之间差异具有统计意义。其具体情况如下表5所示：
表5垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血心电图S-T段位移表(mv)(x±s，n)
Figure BDA0002883502830000101
注：与Normal组相比，*P＜0.05，**P＜0.01；与Model组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与TXP组相比，^P＜0.05，^^P＜0.01；与Met组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
1.9结论
糖尿病性心肌病(DCM)是2型糖尿病的主要并发症之一，也是晚期糖尿病心力衰竭和死亡的主要原因之一。脂质代谢异常引起的心肌脂毒性损伤在DCM的发生和发展中起着重要作用，例如心肌炎症和纤维化，最终导致心肌重塑和心脏功能不全。
通过实验，我们发现TXP和n-TXPD、n-TXPG组均能够调节糖尿病心肌病模型大鼠的血糖、血脂代谢，能够降低模型糖尿病大鼠血清中ET-1、INS、TXB2、CRP、HBDH表达的水平，适度调节模型大鼠血清中的BNP、CKMB表达的水平，同时提高血清中的6KPG，在调节糖尿病大鼠的血管内皮功能，抗氧化应激及炎症损伤中发挥着心肌保护的作。从实验结果可以看出，改良后的n-TXPD、n-TXPG胶囊在调节模型大鼠上述指标更优于改良前的TXP胶囊，n-TXPG组作用更强。
实施例2糖心平胶囊急性毒性实验研究
对优化后的新糖心平胶囊与原糖心平胶囊之间的急性毒性评价研究。原糖心平胶囊(以下为TXP)中为五加皮，新糖心平胶囊(n-TXP，同实施例1的配方)中将五加皮去除，加入益智仁。
1.实验方法
1.1最大给药量预实验
⑴取上述小鼠60只，雌雄各半，禁食不禁水12h后按体质量随机分为TXP组、n-TXP组和对照组，雌雄分开10只一笼饲养。
⑵取TXP、n-TXP生药药粉溶解于蒸馏水中，按照灌胃针可吸取的最大液体浓度测得最大给药浓度为0.18g/ml。
⑶采用0.18g/ml的浓度TXP、n-TXP药粉溶液，按照0.4ml/10g的最大给药量，对给药组小鼠进行一次性灌胃，对照组给同等体积的蒸馏水灌胃，观察7天。
1.2最大给药量正式实验
⑴取上述小鼠60只，禁食不禁水12h后按体质量随机分为TXP组、n-TXP组和对照组，每组20只，雌雄各半分笼饲养。
⑵TXP组、n-TXP组采用最大给药浓度0.18g/ml的药液，按照0.4mL/10g小鼠体重的最大给药量进行灌胃，灌胃给药3次，间隔8h，对照组按照同样的方法，每次给予同等体积的蒸馏水灌胃。最后一次给药2h后，恢复正常饮食，连续观察14天。
1.3毒性实验观察方法
⑴各组灌胃给药后，雌雄分开每笼10只，正常饲养。最后一次给药后2h之内，每15min观察1次；药后2～4h之内，每30min观察1次；药后4～8h之内，每1h观察1次；药后8～24h之内，每4h观察1次；药后第2天起，每天观察1次，称取体质量及进食量，密切观察各小鼠的呼吸和运动状态等，记录观察周期之内可能出现的毒性反应和死亡情况。
⑵对死亡和实验结束时存活小鼠进行大体剖检，肉眼观察各脏器有无异常，如有肉眼可见病变，进行组织病理学检查。
2.急性毒性实验结果
2.1预实验结果
预实验在末次给药后连续观察的7天内，对照组动物一般状态良好，未见明显由于灌胃引起的异常症状；TXP组小鼠出现轻度的恶心、怠动的症状，4h后症状基本消失，一般状态良好，未出现动物死亡；n-TXP组小鼠出现轻度的恶心、怠动症状，2h后症状基本消失，一般状态良好，未出现动物死亡，故以该最大浓度进行最大给药量实验。
2.2最大给药量实验结果
⑴本研究给药日及药后连续观察14天，实验当TXP组和n-TXP组动物出现一定程度的倦怠和俯卧不动症状，TXP组症状较n-TXP组症状严重，持续时间更长，后逐渐消失恢复正常。TXP组4h后，n-TXP组2h后症状基本消失，一般状态良好。对照组动物一般状态良好，未见明显由于灌胃引起的异常症状，其具体情况如下表6所示：
表6毒性实验观察指标及小鼠行为记录
Figure BDA0002883502830000121
⑵小鼠体质量测定结果
实验期间给药组及对照组小鼠体质量数值符合正态分布，在满足方差齐检验的情况下，各组动物体重均匀增长，组间数差异不具有统计学意义(P＞0.05)，其具体体质量变化情况如下表7所示：
表7最大给药量实验各组小鼠体重记录
Figure BDA0002883502830000122
Figure BDA0002883502830000123
注：与同时期正常组比较，*P＜0.05；同时期TXP组与n-TXP组比较，#P＜0.05。
⑶小鼠进食量测定结果
实验期间给药组及对照组小鼠的进食及饮水活动未见明显异常，各组当日及总体进食量间差异无统计学意义(P＞0.05)，具体情况如下表8所示：
表8最大耐受量实验小鼠进食量记录
Figure BDA0002883502830000131
Figure BDA0002883502830000132
注：与同时期正常组比较，*P＜0.05；同时期TXP组与n-TXP组比较，#P＜0.05。
⑷大体解剖结果
实验期间各组小鼠一般情况良好，未出现明显毒性反应及死亡。实验结束后对正常存活的小鼠进行大体解剖，肉眼可见心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏颜色、大小、形态均正常，未见大体外观改变。
3结论
通过本实验发现，TXP和n-TXP给药小鼠24h内灌胃三次，每日最大给药量可达到21.6g/kg，相当于成人每日推荐用药剂量的360倍，未出现动物死亡，未发现药物引起的明显毒副作用。但从小鼠灌胃后的表现和初期饮食量可以看出，改良后的糖心平胶囊(n-TXP)比原糖心平胶囊(TXP)具有更好的耐受性，安全性更高。
实施例3
一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物，由以下重量配比的原料药制成：黄芪50份、水蛭15份、枳实15份、太子参15份、五味子15份、益智仁5份。
通过以下制备方法制备：
将配方量的水蛭粉碎成细粉；
将配方量的五味子和枳实分别用乙醇回流提取，加入原料药10倍重量的75％乙醇提取2次，每次2h合并提取液，浓缩至50℃条件下相对密度为1.20的稠膏1；
将配方量的黄芪、太子参和益智仁分别加水煎煮，加入原料药8倍重量的水煎煮3次，每次2h合并煎煮液，浓缩至40℃条件下相对密度为1.10的稠膏2；然后加乙醇至乙醇的含量为60％，静置36小时，滤过，得到的滤液浓缩至40℃条件下相对密度为1.15的稠膏3；
将稠膏1和稠膏3合并，加入水蛭细粉，混匀、干燥、粉碎成细粉。
最后，按照胶囊剂的常规制剂工艺，制成胶囊。
实施例4
一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物，主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪80份、水蛭25份、枳实25份、太子参25份、五味子25份、益智仁15份。
通过以下制备方法制备：
将配方量的水蛭粉碎成细粉；
将配方量的五味子和枳实用乙醇回流提取，加入原料药12倍重量的75％乙醇提取3次，每次2h合并提取液，浓缩至50℃条件下相对密度为1.25的稠膏1；
将配方量的黄芪、太子参和益智仁分别加水煎煮，加入原料药10倍重量的水煎煮3次，每次2h合并煎煮液，浓缩至40℃条件下相对密度为1.10的稠膏2；然后加乙醇至乙醇的含量为60％，静置36小时，滤过，得到的滤液浓缩至40℃条件下相对密度为1.25的稠膏3；
将稠膏1和稠膏3合并，加入水蛭细粉，混匀、干燥、粉碎成细粉。
最后，按照胶囊剂的常规制剂工艺，制成胶囊。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (7)

1.一种治疗2型糖尿病合并冠心病的中药组合物，其特征在于，主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪50-80份、水蛭15-25份、枳实15-25份、太子参15-25份、五味子15-25份、益智仁5-15份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，主要由以下重量配比的原料药制成：黄芪64.5份、水蛭21.5份、枳实21.5份、五味子21.5份、太子参21.5份和益智仁12份。
3.一种权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
将配方量的水蛭粉碎成细粉；
将配方量的五味子和枳实用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩至50℃条件下相对密度为1.20-1.25的稠膏1；
将配方量的黄芪、太子参和益智仁分别加水煎煮，合并煎煮液，浓缩至40℃条件下相对密度为1.10-1.20的稠膏2；然后加乙醇至乙醇的含量为60％，静置36小时，滤过，得到的滤液浓缩至40℃条件下相对密度为1.12-1.45的稠膏3；
将稠膏1和稠膏3合并，加入水蛭细粉，混匀、干燥、粉碎成细粉，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇回流提取的具体条件为：加入原料药8-12倍重量的75％乙醇提取2-4次，每次1-3h。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述水煎煮的具体条件为：加入原料药6-10倍重量的水煎煮2-4次，每次1-3h。
6.一种治疗2型糖尿病合并冠心病的药物制剂，其特征在于，由权利要求1或2所述的中药组合物或权利要求3-5任一权利要求所述制备方法制备的中药组合物和药学上可接受的辅料制成。
7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为胶囊剂。
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