CN112007162B

CN112007162B - Ezh2抑制剂与免疫检查点抑制剂、vegfr抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途

Info

Publication number: CN112007162B
Application number: CN202010471673.0A
Authority: CN
Inventors: 张岚; 张曼; 朱福香; 廖成; 张连山; 孙飘扬
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd; Suzhou Suncadia Biopharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd; Suzhou Suncadia Biopharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2019-05-30
Filing date: 2020-05-29
Publication date: 2023-05-12
Anticipated expiration: 2040-05-29
Also published as: CN112007162A

Abstract

本申请涉及EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。具体而言，本申请涉及的EZH2抑制剂为式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐，免疫检查点抑制剂为抗PD‑1抗体或者其抗原结合片段，VEGFR抑制剂为阿帕替尼或其可药用盐。

Description

EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途

技术领域

本申请涉及EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

背景技术

蛋白质程序性死亡1(PD-1)是CD28受体家族的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达。根据加入单克隆抗体后对提升T细胞增殖的功能性影响发现了家族最初的成员，CD28和ICOS。通过在凋亡细胞中筛选差异表达发现了PD-1。目前，已有小野公司的Nivolumab及Merck公司的Pembrolizumab成功获批上市，用于治疗不可切除或转移性黑色素瘤、非小细胞肺癌、晚期肾细胞癌、霍奇金淋巴瘤、复发性或转移性鳞状细胞癌等。PD-1有两个配体，分别为PD-L1和PD-L2。PD-L1主要表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞(dendritic cell,DC)上，在活化后细胞上的表达能够进行上调。PD-L1通过和PD-1及B7-1的结合抑制免疫系统，很多肿瘤细胞及肿瘤组织微环境的免疫细胞表达PD-L1。新的研究发现乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌及肝癌等人类肿瘤组织中检测到高PD-L1蛋白的表达，且PD-L1的表达水平和患者的临床及预后紧密相关。

EZH2基因编码的组蛋白甲基转移酶是多梳蛋白抑制性复合体2(PRC2)的催化组分。与正常组织相比，EZH2水平在癌组织异常升高，而在癌症晚期或不良预后中，EZH2的表达水平最高。在一些癌症类型中，EZH2表达过剩与EZH2基因的扩增同时发生。大量si/shRNA实验研究发现在肿瘤细胞系中减少EZH2表达，可抑制肿瘤细胞的增殖，迁移和侵袭或血管生成，并导致细胞凋亡。

目前已有进入临床开发阶段的EZH2抑制剂，以下简要列举，卫材开发的Tazemetostat(EPZ-6438)用于治疗非霍奇金B细胞淋巴瘤，目前处于临床Ⅱ期阶段，Constellation公司开发的CPI-1205用于治疗B细胞淋巴瘤，目前处于临床Ⅰ期阶段，葛兰素史克公司开发的GSK-2816126用于治疗弥漫大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤，目前处于临床Ⅰ期阶段

WO2017084494A中提供了一种EZH2抑制剂，结构如下所示：

Lu Gan等的综述中提到了EZH2在肿瘤免疫中的新兴作用(Biomarker Research，December 2018,6:10)。

Russell W Jenkins等通过对新出现的临床和临床前数据，确定先天和获得性免疫检查点抑制的新机制(British Journal of Cancer volume 118,pages 9–16(2018))。

WO2018068691公开了一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途。

发明内容

本申请中提供一种EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

本申请中所述EZH2抑制剂可选式(I)所示化合物或其复合物或其可药用盐，

本申请中所述的免疫检查点抑制剂可以为抗PD-1抗体或者其抗原结合片段。

在一些实施方案中，本申请中所述的PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

其中，前面所述的各CDR序列如下表所示：

名称	序列	编号
			HCDR1	SYMMS	SEQID NO：1
HCDR2	TISGGGANTYYPDSVKG	SEQID NO：2
			HCDR3	QLYYFDY	SEQID NO：3
LCDR1	LASQTIGTWLT	SEQID NO：4
			LCDR2	TATSLAD	SEQID NO：5
LCDR3	QQVYSIPWT	SEQID NO：6

优选的，所述的PD-1抗体为人源化抗体或其片段。

在可选实施方案中，本申请中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的组的抗体片段。

免疫球蛋白可以来源于任何通常已知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的Ab种类或亚类(例如，IgM或IgG1)。在一些可选实施方案中，本申请中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区，优选包含IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。

在另一些可选实施方案中，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含κ或λ的轻链恒定区的轻链恒定区。

进一步地，优选人源化抗体轻链可变区序列为如SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。

前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：

重链可变区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSS

SEQID NO：9

轻链可变区

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIK

SEQID NO：10

优选的，所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基酸变化；所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。

在另一实施方案中，所述人源化抗体的轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。

所述人源化抗体重、轻链的序列如下所示：

重链

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQID NO：7

轻链

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQID NO：8

在一些实施方案中，VEGFR抑制剂选自VEGFR-2抑制剂，所述VEGFR-2可选阿帕替尼或其可药用盐。

一些实施方案中，阿帕替尼可药用盐选自甲磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、醋酸盐、二氟醋酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、萘磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、以及磷酸盐，在优选方案中，阿帕替尼的可药用盐为甲磺酸盐。

在一些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自1-1600mg、10-800mg，例如：10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、310mg、320mg、330mg、340mg、350mg、360mg、370mg、380mg、390mg、400mg、410mg、420mg、430mg、440mg、450mg、460mg、470mg、480mg、490mg、500mg、510mg、520mg、530mg、540mg、550mg、560mg、570mg、580mg、590mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1025mg、1050mg、1075mg、1100mg、1125mg、1150mg、1175mg、1200mg、1225mg、1250mg、1275mg、1300mg、1325mg、1350mg、1375mg、1400mg、1425mg、1450mg、1475mg、1500mg、1525mg、1550mg、1575mg、1600mg，优选50mg、100mg、200mg、400mg、800mg，给药频率为每日两次、每日一次、每两日一次、每三日一次、每四日一次、每五日一次、每六日一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次，优选每两日一次或每日一次。

在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的给药剂量可以在以下范围内：0.1-10.0mg/kg、0.1-5mg/kg、1-5mg/kg、2-5mg/kg，例如，剂量可以是0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg，给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月或更长一次的给药频次施用。

在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的剂量范围选自1-1000mg、80-800mg、80-700mg、80-600mg、80-500mg、80-400mg、80-300mg、100-300mg或200-300mg。例如，剂量可以是1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.2mg、2.4mg、2.6mg、2.8mg、3.0mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4.0mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5.0mg、5.2mg、5.4mg、5.6mg、5.8mg、6.0mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7.0mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8.0mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9.0mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10.0mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg，给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月或更长一次的给药频次施用。

可选的实施方案中，免疫检查点抑制剂的剂量为80mg、100mg、160mg、200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg，给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月或更长一次的给药频次施用。

可选的实施方案中，免疫检查点抑制剂的量为200mg，给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月或更长一次的给药频次施用。

在可选的实施方案中，所述免疫检查点抑制剂的给药频次为每两周一次或每三周一次。

在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为100-500mg，可以为100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、500mg，优选200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg；给药频次为一日一次、两日一次、三日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，优选250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为250mg或375mg，给药频次为一日一次。

在某些实施案中，所述VEGFR抑制剂的剂量为250mg或375mg，给药频次为给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自50mg、100mg、200mg、400mg、800mg，给药频率为每日两次、每日一次、每两日一次、每三日一次、每四日一次、每五日一次、每六日一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自80mg、100mg、160mg、200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg，给药频次为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自50mg、100mg、200mg、400mg、800mg，给药频率为每日两次或每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg，给药频次为每两周一次、每三周一次、每四周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自50mg、100mg、200mg、400mg、800mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg、或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自50mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自100mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自200mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自400mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自800mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg或300mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自50mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自100mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自200mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自400mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

在某些实施方案中，所述EZH2抑制剂的给药剂量选自800mg，给药频率为每日一次；所述免疫检查点抑制剂的剂量选自200mg，给药频次为每两周一次、每三周一次；所述VEGFR抑制剂的剂量250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

本申请中所述肿瘤是选自上腺皮质癌、肛门癌、肛门直肠癌、肛管癌、阑尾癌、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、基底细胞癌、皮肤癌(非黑色素瘤)、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌、骨关节癌、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脑癌、脑肿瘤、脑干胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤、神经系统癌、神经系统淋巴瘤、中枢神经系统癌、中枢神经系统淋巴瘤、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白血病、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、结直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴肿瘤、蕈样真菌病、Sezary综合征、子宫内膜癌、食管癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、眼癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞瘤、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、胰岛细胞瘤、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、毛细胞白血病、唇和口腔腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、Waldenstroem巨球蛋白血症、黑色素瘤、间皮瘤、转移性鳞癌、舌癌、多发性内分泌肿瘤综合征、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体瘤、垂体瘤、浆细胞肿瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤文家族肉瘤、卡波西肉瘤、滑膜肉瘤、子宫癌、子宫肉瘤、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤、尿道癌、子宫内膜异位症、阴道癌、外阴癌或威尔姆氏肿瘤，优选结直肠癌或结肠癌。

可以将本申请的免疫检查点抑制剂构成在组合物中，例如，含有抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。本文中使用的“药学上可接受的载体”包括生理学上相容的任意的和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。在一个实施方案中，用于含有抗体的组合物的载体适合静脉、肌肉、皮下、胃肠外、腹腔、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)，本申请的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的盐、抗氧化剂、水性和非水性载体，和/或佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。

在本申请中优选的实施方案中，所述的PD-1抗体或其抗原结合片段以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射或腹腔，注射前需将PD-1抗体或其抗原结合片段配制成可注射的形式。本申请特别优选的实施方案中抗PD-1抗体的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含PD-1抗体或其抗原结合片段、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的PD-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式包含PD-1抗体或其抗原结合片段、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。

本申请中所述EZH2抑制剂可以是盐酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、乙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、戊酸盐、谷氨酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、双羟萘酸盐、水杨酸盐、香草酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐或月桂基磺酸盐等。

本申请提供一种治疗肿瘤的方法，包括给与患者治疗有效量的上述EZH2抑制剂、免疫检查点抑制剂和VEGFR抑制剂。

可选的实施方案中，本申请提供的治疗肿瘤的方法，包括施与患者有效剂量的上述式(I)所示化合物、免疫检查点抑制剂和甲磺酸阿帕替尼。

本申请中所述的“联合”是一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂量的免疫检查点抑制剂、EZH2抑制剂和VEGFR抑制剂，其中三种药物都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，例如4周内，3周内，2周内，1周内，或24小时以内。可以同时或不分先后顺序给予免疫检查点抑制剂、EZH2抑制剂和VEGFR抑制剂。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予免疫检查点抑制剂、EZH2抑制剂和VEGFR抑制剂。

本申请中所述“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。在本申请中一个优选的实施方案中，所述的PD-1人源化抗体的CDR序列选自SEQ ID NO:1，2，3，4，5，6。

本申请中所述“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及与人PD-1结合的Fv片段sFv片段；包含本申请中所述抗体的选自SEQ IDNO:1至SEQ ID NO:6中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本申请中的术语“与PD-1结合”，指能与人PD-1相互作用。本申请中的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本申请中抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

附图说明

附图1.各组小鼠体重变化曲线；

附图2.联合用药协同效果分析量效关系图；

附图3.CT26小鼠移植模型右侧肿瘤体积变化曲线；

附图4.CT26小鼠移植模型左侧肿瘤体积变化曲线。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本申请，但这些实施例并非限制本申请的范围。

实施例1、验证式(I)所示化合物(药物A)、PD-1抗体(药物B)及甲磺酸阿帕替尼在结直肠癌细胞系CT-26的huPD-1小鼠同种移植模型上的单独/联合用药药效。

1、实验材料

肿瘤细胞

CT-26：来源，中科院；癌症类型，结直肠癌；代次，F3；细胞量，1×10E8。

实验动物

huPD-1BALB/c小鼠，购买于江苏集萃药康生物科技有限公司；6-8周龄；体重为18-20g，订购数量80只。

受试药信息

药物A，依据专利申请WO2017084494A中提供方法制备；

药物B，WO2017054646A公开的PD-1抗体，重、轻链的序列分别如SEQID NO：7、SEQIDNO：8所示；

hIgG4，上海恒瑞医药有限公司提供。

2、实验方法及步骤

1)细胞重悬，稀释至5×10E6细胞/mL；剔除接种部位体毛后，用酒精棉球消毒小鼠接种部位，用1mL注射器在小鼠双侧肩胛处皮下各接种0.1mL细胞悬液，5×10E5细胞/点。

2)接种后，每工作日观察动物发病及死亡情况。日常观察包括，肿瘤生长及药物对实验动物造成的影响，如活动变化、摄食饮水变化、消瘦情况、毛发、眼的外观变化、死亡及其他临床症状。接种后至分组前，每周一次测量实验动物体重。分组后每周2-3次测量实验动物体重或根据客户要求变更测量小鼠体重频率。

接种后至分组前，当肿瘤可见时，每周一次测量实验动物肿瘤体积，接种分组后，实验中的动物肿瘤体积每周测量三次。肿瘤体积测量采用双向测量法，首先利用游标卡尺测量肿瘤长短径，再使用公式TV＝0.5×a×b²计算肿瘤体积。其中a是肿瘤的长径，b是肿瘤的短径。

3)分组信息如表1.

表1.

注：1：BID间隔8小时；

2：p.o.:口服给药；i.p.:腹腔给药；

3：第1组为对照组。

4)受试药配置信息如表2.

表2.

5)评估指标及数据统计分析

给药开始后，小鼠每周3次测量体重及肿瘤体积，在试验第14天结束试验，收集血液及左右两侧肿瘤。

肿瘤体积和荷瘤鼠体重测量：使用游标卡尺每周二次测量，肿瘤体积计算公式为V＝0.5a x b²，a，b分别代表肿瘤的长度和宽度；

％T/C＝(T-T0)/(V-V0)x 100：

V0和T0分别是对照组和给药组内每只小鼠刚开始给药时的肿瘤体积大小，

V和T是分别是对照组和给药组给药后每次测量的肿瘤体积大小。

Mean％ΔInhibition(TGI％)

Mean％ΔInhibition＝((mean(C)-mean(C0))-(mean(T)-mean(T0)))/(mean(C)-mean(C0))*100％

T-给药组肿瘤体积

T0-给药组初始肿瘤体积

C-对照组肿瘤体积

C0-对照组初始肿瘤体积

实验结束后肿瘤块的重量。

对于两组互相比较的实验，采用T-Test分析方法。对于比较潜在的协同效应，采用双因素方差分析(Two-Way ANOVA)。所有的数据使用SPSS 24.0及Excel分析。p值小于0.05视为有显著差异。

3、实验结果

1)体重数据

表3.实验过程中小鼠体重数据

注：a平均值±标准误

2)体重变化

表4.实验过程中小鼠体重变化百分比

注：a平均值±标准误

各组小鼠体重变化曲线如图1所示。

3)肿瘤体积数据

各个处理组右侧及左侧肿瘤在各时间点的体积如表5、6所示。

表5.实验中的各组右侧平均肿瘤体积数据

注：a平均值±标准误

表6.实验中的各组左侧平均肿瘤体积数据

注：a平均值±标准误

4)肿瘤生长抑制情况

各组右侧及左侧肿瘤生长抑制情况见表7、8。

表7.受试药CT26模型中的右侧肿瘤中的抑瘤效果

注：a平均值±标准误

其中，第4组联合用药与其对应单药组及两药联用组(第2、3组)比较，p值分别为0.001和0.005，显著低于单药组及两药联用组。

表8.受试药在CT26模型中的左侧肿瘤中的抑瘤效果

注：a平均值±标准误

其中，第4组联合用药与其对应单药组及两药联用组(第2，第3组)比较，p值分别为<0.001和0.011，显著低于单药组及两药联用组。

5)联合用药协同效果分析

左侧肿瘤Two Way Anova显示各组间具有显著交互作用(P＝0.009)，量效关系曲线(图2)显示随着剂量增加单药与联合用药药效呈分离趋势，说明药物为协同作用。右侧肿瘤Two Way Anova显示各组间交互作用不显著(P＝0.067)。

图2为量效关系曲线。

CT26小鼠移植模型右侧肿瘤体积变化曲线如图3所示

CT26小鼠移植模型左侧肿瘤体积变化曲线如图4所示。

4、实验结果讨论

本实验检测了药物A 100mg/kg BID(第2组)；药物B和甲磺酸阿帕替尼联合用药(第3组)；及第2、3组治疗方案联合用药(第4组)在CT26接种的PD-1人源化基因工程小鼠huPD-1BALB/c中的药效。

药物A 100mg/kg BIW p.o.(第2组)在给药后第13天右侧平均肿瘤体积为1942.5±358.23mm³，与对照组(第13天肿瘤体积为1730.1±205.04mm³)相比无显著差(TGI％＝-13％，P>0.05)。同日左侧肿瘤体积为2428.4±347.8mm³，与对照组(第13天肿瘤体积为1746.7±288.75mm³)相比无显著差异(TGI％＝-41％，P>0.05)。

药物B 3mg/kg Q3D i.p.与甲磺酸阿帕替尼25mg/kg QD p.o.联合给药组(第3组)在给药后第13天右侧平均肿瘤体积为933±181.22mm³，显著低于对照组(第13天肿瘤体积为1730.1±205.04mm³，TGI％＝48％，P＝0.013)。同日左侧肿瘤体积为1255.8±235.55mm³，低于对照组(第13天肿瘤体积为1746.7±288.75mm³)，但无显著差异(TGI％＝30％，P>0.05)。

第4组在给药后第13天给药侧(右侧)平均肿瘤体积为269.4±70.46mm³，显著低于对照组(第13天肿瘤体积为1730.1±205.04mm³，TGI％＝89％，P＝0.001)。且显著低于两个用药方案单独给药组(第2组，第3组)的肿瘤体积(P＝0.001及P＝0.005)。

第4组与第1、2和3组右侧肿瘤进行Two Way ANOVA分析，交互作用不显著(P＝0.067)，说明两种治疗方案联合用药在给药侧肿瘤中的药效为叠加作用。

同日对侧(左侧)肿瘤体积为443.3±130.11mm³，显著低于对照组(1746.7±288.75mm³，TGI％＝79％，P<0.001)。且显著低于两个给药方案单独给药组(第2组和第3组)的肿瘤体积(p<0.001及P＝0.011)。

第4组与第1、2和3组左侧肿瘤进行Two Way ANOVA分析，交互作用显著(P＝0.009)，量效曲线分析显示两治疗方案在对侧肿瘤中的药效为协同作用。

给药期间各治疗方案均无显著毒性，各组给药期间均未出现死亡及体重下降情况。药物耐受良好。

序列表

<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司

上海恒瑞医药有限公司

苏州盛迪亚生物医药有限公司

<120> EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤药物中的用途

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 1

Ser Tyr Met Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 2

Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 3

Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 4

Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 5

Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 6

Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(443)

<223> 重链序列

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn

260 265 270

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

340 345 350

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

405 410 415

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

420 425 430

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 8

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(214)

<223> 轻链序列

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 9

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(116)

<223> 重链可变区

<400> 9

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(10)

<223> 轻链可变区

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

Claims

1.一种EZH2抑制剂与免疫检查点抑制剂、VEGFR抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途，所述的EZH2抑制剂为式(I)所示化合物或其可药用盐，

所述的免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体或者其抗原结合片段，所述抗PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；

所述VEGFR抑制剂选自VEGFR-2抑制剂，所述VEGFR-2为阿帕替尼或其可药用盐；

所述的肿瘤选自直肠癌或结肠癌。

2.根据权利要求1所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体或其片段。

3.根据权利要求1所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的重链恒定区。

4.根据权利要求3所述的用途，所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含人源IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。

5.根据权利要求2所述的用途，其中所述人源化抗体的轻链可变区序列为如SEQ IDNO:10所示的序列或其变体，所述人源化抗体的重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体。

6.根据权利要求2所述的用途，其中所述人源化抗体的轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述人源化抗体的重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体。

7.根据权利要求2所述的用途，其中所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。

8.根据权利要求1所述的用途，所述VEGFR抑制剂为甲磺酸阿帕替尼。

9.根据权利要求1所述的用途，所述EZH2抑制剂为式(I)所示化合物

10.根据权利要求1所述的用途，所述EZH2抑制剂的剂量选自1-1600mg，给药频率为每日两次、每日一1次、每两日一次、每三日一次、每四日一次、每五日一次、每六日一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次。

11.根据权利要求10所述的用途，所述EZH2抑制剂的给药频率选自每日两次或每日一次。

12.根据权利要求10所述的用途，所述免疫检查点抑制剂的剂量选自0.1-10.0mg/kg或1-1000mg，给药频率为每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、一个月一次、每三-六个月一次。

13.根据权利要求12所述的用途，所述免疫检查点抑制剂给药频率选自每两周一次或每三周一次。

14.根据权利要求12所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量为100-500mg，给药频次为一日一次、两日一次、三日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。

15.根据权利要求14所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量为200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、500mg。

16.根据权利要求15所述的用途，所述VEGFR抑制剂的剂量选自250mg或375mg，给药频次为一日一次、给药五天停药两天、给药七天停药七天。