CN111699187A

CN111699187A - 用于治疗和预防病毒感染的新的砜化合物和衍生物

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Publication number: CN111699187A
Application number: CN201980011786.8A
Authority: CN
Inventors: 梁春根; 苗坤; 王剑平; 贠红英
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2018-02-12
Filing date: 2019-02-11
Publication date: 2020-09-22
Also published as: US20200369664A1; JP2021512927A; WO2019155042A1; EP3752505A1; EP3752505B1; JP7328977B2; US11220502B2

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物及其前药或其可药用盐、对映体或非对映体，以及包含该化合物的组合物和使用该化合物的方法，其中R¹、R²和R³如文中所定义。

Description

用于治疗和预防病毒感染的新的砜化合物和衍生物

本发明涉及具有Toll-样受体激动活性的新的磺亚氨酰基嘌呤酮衍生物以及它们的制备、包含它们的药物组合物及其作为药物的潜在用途。

发明领域

本发明涉及式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，

其中R¹至R³如下所述。

Toll样受体(TLR)识别范围广泛的保守的病原相关分子模式(PAMP)。它们在探测入侵病原体和随后启动先天免疫应答中起着重要的作用。人体中存在10种已知的TLR家族成员，它们是I型跨膜蛋白，以富含亮氨酸的胞外结构域和包含保守的Toll/白细胞介素(IL)-1受体(TIR)结构域的胞质尾区为特征。在该家族中，TLR3、TLR7、TLR8和TLR9位于内体内。TLR7可以通过结合特异性小分子配体(即TLR7激动剂)或其天然配体(即单链RNA、ssRNA)被活化。在ssRNA结合TLR7后，认为二聚化形式的该受体发生结构改变，导致随后衔接蛋白质募集在其胞质结构域处，包括髓样分化初级应答基因88(MyD88)。在通过MyD88途径启动受体信号传导级联后，胞质转录因子例如干扰素调节因子7(IRF-7)和核因子κB(NF-κB)被激活。这些转录因子随后转位至核并且启动各种基因的转录，例如IFN-α和其它抗病毒细胞因子基因。TLR7主要在浆细胞样细胞上表达并且还在B-细胞上表达。改变的免疫细胞应答性可能与慢性病毒感染过程中天然免疫应答的下降有关。激动剂诱导的TLR7活化由此可能代表用于治疗慢性病毒感染的新方法(D.J Connolly和L.AJ O’Neill,CurrentOpinion in Pharmacology 2012,12：510-518,P.A.Roethle等人,J.Med.Chem.2013,56,7324-7333)。

目前慢性HBV感染的疗法基于两种不同类型的药物：传统的抗病毒核苷(酸)类似物和更近期的聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)。口服核苷(酸)类似物通过抑制HBV复制起作用。这是终生的治疗过程，在此期间，药物耐受性经常发生。作为另一种选择，聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)已被用于在有限的治疗期间内治疗一些慢性感染的HBV患者。尽管已在至少一小部分的HBV患者中实现了HBeAg的血清转化，但是不良反应使得它难以耐受。值得注意的是，以HBsAg血清转化定义的功能性治愈在目前的这两种疗法中均极为罕见。因此，迫切需求新一代的治疗选择以功能性治愈HBV患者。使用口服TLR7激动剂治疗代表了一种富有前景的解决方案，以提供更高的效能和更好的耐受性。聚乙二醇化IFN-α(PEG-IFN-α)目前用于治疗慢性HBV并且是潜在需要终生使用抗病毒核苷(酸)类似物治疗的可替代选择。在一小组慢性HBV患者中，PEG-IFN-α疗法可以在有限的治疗过程后诱导对病毒的持续性免疫控制。然而，使用干扰素疗法实现血清转化的HBV患者的百分比较低(对于HBeAg-阳性患者最高为27％)，且该治疗通常耐受性差。此外，功能性治愈(定义为HBsAg消失和血清转化)在使用PEG-IFN-α和核苷(酸)治疗时也是极不常见的。由于这些局限性，对于治疗和诱导慢性HBV功能性治愈的改良的治疗选择存在迫切需求。使用口服的小分子TLR7激动剂进行治疗是一种富有前景的方法，其具有提供更高的效能和耐受性的潜能(T.Asselah等人,Clin Liver Dis 2007,11,839-849)。

实际上，几种经鉴定的TLR7激动剂已经被考虑用于治疗目的。迄今为止，咪喹莫德(ALDARA^TM)是美国FDA批准的用于治疗人乳头瘤病毒导致的皮肤损伤的TLR7激动剂。已经对TLR7/8双重激动剂瑞喹莫德(R-848)和TLR7激动剂852A分别用于治疗人生殖器疱疹和化疗顽固性转移性黑素瘤进行了评估。ANA773是一种口服的前药TLR7激动剂，研发它是为了治疗患有慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染和慢性乙型肝炎感染的患者。GS-9620是一种口服有效的TLR7激动剂。Ib期研究证实，使用GS-9620治疗是安全的、良好耐受的并且可在患有慢性乙型肝炎的患者中导致剂量依赖性ISG15 mRNA诱导(E.J.Gane等人,Annu Meet Am AssocStudy Liver Dis(11月1-5日,Washington,D.C.)2013,摘要946)。因此，对于研发有效和安全的TLR7激动剂作为新的HBV治疗方法以提供更多的治疗方案或替代现存的部分有效的治疗手段存在非常迫切的临床需求。

发明概述

本发明提供了一系列新的具有Toll-样受体激动活性的砜化合物。本发明还提供了这类化合物通过活化Toll-样受体、例如TLR7受体来诱导SEAP水平增加的生物活性、在人肝细胞的存在下将前药代谢转化成母体化合物，以及这类化合物和包含这些化合物作为前药的药物组合物在治疗或预防感染性疾病如HBV或HCV中的治疗或预防用途。本发明使我们有了一个新发现，即GALT中TLR7的局部活化更有可能限制耐受性，并且可以用本文公开的前药克服该问题。因此，发现了一系列独特和罕见的尿素前药，它们在药理上无活性，在胃肠道中稳定并且在肝中迅速转化为母体化合物，所述母体化合物在体内显示Toll样受体激动活性，并且可能用于治疗和预防HBV感染。本发明还提供了具有优异活性的化合物。此外，式(I)化合物还表现出良好的溶解度和药物动力学特性。

本发明涉及式(I)的新化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，

其中

R¹是C_1-6烷基；

R²是苯基C_1-6烷基，所述苯基是未取代的或被一个、两个或三个独立地选自卤素、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基的取代基取代；

R³是-NR⁴R⁵，其中

R⁴和R⁵独立地选自C_1-6烷基或C_1-6烷氧基C_1-6烷基；或者

R⁴和R⁵与它们所连接的氮一起形成杂环基。

本发明还涉及它们的制备方法、基于本发明化合物的药物及其生产方法和式(I)化合物作为TLR7激动剂的用途。因此，式(I)化合物可用于利用Toll-样受体激动作用来治疗或预防HBV和/或HCV感染。

发明详述

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。此外，列出下列定义以阐述和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。

定义

术语“C_1-6烷基”表示包含1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔丁基等。具体的“C_1-6烷基”基团是甲基、乙基和正-丙基。

术语“C_1-6烷氧基”表示式C_1-6烷基-O-的基团。C_1-6烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基和叔丁氧基。具体的“C_1-6烷氧基”是甲氧基、乙氧基和异丙氧基。更具体的C_1-6烷氧基是乙氧基。

术语“卤素”和“卤代”在本文中互换使用并且表示氟、氯、溴或碘。

术语“杂环基”表示具有3至10个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环或双环环系，其包含1至5个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。在特定的实施方案中，杂环基是具有4至7个环原子的单价饱和单环环系，包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。单环饱和杂环基的实例是氮杂环丙基、氧杂环丙基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、二甲基吡咯烷基、乙氧基羰基吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、

唑烷基、异

唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、二氧代硫代吗啉基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基或氧氮杂环庚烷基。单环饱和杂环基可以进一步被1-3个取代基取代，所述取代基独立地选自卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基羰基。取代的单环饱和杂环基的实例是4-甲基哌嗪基、二甲基吡咯烷基、乙氧基羰基吡咯烷基、二氟吡咯烷基、氟代(甲基)吡咯烷基。双环饱和杂环基的实例是氮杂双环[3.2.1]辛基、奎宁环基、氧氮杂双环[3.2.1]辛基、氮杂双环[3.3.1]壬基、氧氮杂双环[3.3.1]壬基、硫氮杂双环[3.3.1]壬基、氮杂螺[3.3]庚基和氧氮杂螺[3.3]庚基。部分不饱和杂环基的实例是二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢

唑基、四氢吡啶基和二氢吡喃基。

术语“对映体”表示化合物的两种彼此为不能重叠的镜像的立体异构体。

术语“非对映异构体”表示具有两个或多个手性中心且其分子彼此不为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。

术语“可药用盐”表示不在生物学或其它方面不合需要的盐。可药用盐包括酸和碱加成盐。

术语“可药用酸加成盐”表示与无机酸和有机酸形成的那些可药用盐，所述无机酸为例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，所述有机酸选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和有机磺酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。

术语“可药用碱加成盐”表示与有机碱或无机碱形成的那些可药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括如下的盐：伯、仲和叔胺类；取代的胺类，包括天然存在的取代的胺类、环胺类和碱性离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺(trimethamine)、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤类、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和聚胺树脂。

包含一个或多个手性中心的通式(I)的化合物及其前药可以以外消旋体、非对映异构体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。

术语“前药”表示化合物的一种形式或衍生物，其在施用后在体内例如被个体的生物学液体或酶代谢成化合物的药理学活性形式以便产生期望的药理学作用。前药描述在例如“The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action”,Richard B.Silverman,Academic Press,San Diego,2004,第8章：Prodrugs and Drug Delivery Systems,497-558页中。

“药物活性代谢物”是指通过在体内代谢具体的化合物或其盐产生的药理学活性产物。在进入体内后，大部分药物是可以改变其物理性质和生物作用的化学反应的底物。这些代谢转化通常会影响本发明化合物的极性，改变药物在体内分布和从体内排出的方式。然而，在一些情况中，药物的代谢是产生治疗作用所需的。

术语“治疗有效量”表示本发明化合物或分子在施用于个体时产生如下作用的用量：(i)治疗或预防特定疾病、病症或障碍；(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状；或(iii)预防或延缓本文所述的特定疾病、病症或障碍的一种或多种症状的发作。治疗有效量将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病严重性、个体的年龄和相对健康状况、施用途径和形式、主治医师或兽医从业人员的判断和其它因素而改变。

术语“药物组合物”表示准备施用于有此需要的哺乳动物、例如人的包含治疗有效量的活性药物成分与可药用赋形剂的混合物或溶液。

TLR7激动剂和前药

其中

R¹是C_1-6烷基；

R³是-NR⁴R⁵，其中

R⁴和R⁵独立地选自C_1-6烷基或C_1-6烷氧基C_1-6烷基；或者

R⁴和R⁵与它们所连接的氮一起形成杂环基。

本发明的另一个实施方案是(ii)根据(i)的式(I)化合物，其中

R¹是C_1-6烷基；

R²是苯基C_1-6烷基，所述苯基是未取代的或被卤素、C_1-6烷氧基或C_1-6烷基取代；

R³是吡咯烷基或-NR⁴R⁵，其中

R⁴和R⁵独立地选自C_1-6烷基或C_1-6烷氧基C_1-6烷基；

或其可药用盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施方案是(iii)根据(i)或(ii)的式(I)化合物，其中

R¹是乙基或丙基；

R²是苄基、溴苄基、氯苄基、氟苄基、甲基苄基或甲氧基苄基；

R³是吡咯烷基；或-NR⁴R⁵，其中R⁴和R⁵独立地选自甲基、乙基、丙基或甲氧基乙基。

本发明的另一个实施方案是(iv)根据(i)至(iii)任意一项的式(I)化合物，其中R³是吡咯烷基、甲基(乙基)氨基、甲基(丙基)氨基、甲基(甲氧基乙基)氨基或二甲基氨基。

本发明的另一个实施方案是(v)根据(i)至(iv)任意一项的式(I)化合物，其中R²是被卤素或C_1-6烷基取代的苄基。

本发明的另一个实施方案是(vi)根据(i)至(v)任意一项的式(I)化合物，其中R²是溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基。

本发明的另一个实施方案是(vii)根据(i)至(vi)任意一项的式(I)化合物，其中R²是溴苄基、氯苄基或氟苄基。

本发明的另一个实施方案是(viii)根据(i)至(vii)任意一项的式(I)化合物，其中R³是-NR⁴R⁵，其中R⁴是C_1-6烷基；R⁵是C_1-6烷基。

本发明的另一个实施方案是(ix)根据(i)至(viii)任意一项的式(I)化合物，其中R³是甲基(丙基)氨基或甲基(乙基)氨基。

本发明的另一个实施方案是(x)根据(i)至(ix)任意一项的式(I)化合物，其中

R¹是C_1-6烷基；

R²是苄基，所述苄基被卤素或C_1-6烷基取代；

R³是-NR⁴R⁵，其中R⁴是C_1-6烷基，R⁵是C_1-6烷基。

本发明的另一个实施方案是(xi)根据(i)至(x)任意一项的式(I)化合物，其中

R¹是乙基或丙基；

R²是溴苄基、氯苄基或氟苄基；

R³是甲基(丙基)氨基或甲基(乙基)氨基。

本发明的另一个实施方案是(xii)，式(I)的化合物选自如下化合物：

6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-苄基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N,N-二甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N,N-二乙基-2-乙基磺酰基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；

6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-N-乙基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺；

6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-N-丙基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；和

6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；

或其可药用盐、对映体或非对映体。

合成

本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R¹至R¹¹如上所定义。此外，除非另有明确说明，所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。

流程1

通过使式II化合物(合成参考JP1999193282(JP11193282A))与氨基甲酰氯在混合碱如吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA的存在下反应，获得式I化合物。

本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，该方法包括以下反应：

将式(II)化合物

与氨基甲酰氯在混合碱的存在下反应；

其中R¹和R²如上所定义。

在上述步骤中，混合碱可以是例如吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA。

按照上述方法制备的式(I)化合物也是本发明的目的之一。

药物组合物和给药

另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。

组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑的控制，并且是活化TLR7受体并导致INF-α和其它细胞因子产生所需的最低量，其可用于(但不限于)治疗或预防乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒感染的患者。

在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.1至50mg/kg，或者约0.1至30mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊优选含有约20至约1000mg的本发明化合物。

本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。

本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。

典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的，并且详细记载于例如Ansel,Howard C.等人,Ansel’sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人,Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,PharmaceuticalPress,2005。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。

适合的口服剂型的实例是包含约20至1000mg的本发明的化合物、约30至90mg无水乳糖、约5至40mg交联羧甲基纤维素钠、约5至30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1至10mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如20至1000mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。

因此，一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体。

在另一个实施方案中，包括药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体，以及可药用载体或赋形剂。

另一个实施方案包括用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐或对映体或非对映体。

适应症和治疗方法

本发明提供了用于在有需要的患者中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法。

本发明还提供了用于将治疗有效量的式(I)化合物或本发明的其它化合物引入到患者血流中来治疗和/或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法。

本发明的方法特别适合于人类患者。具体而言，本发明的方法和剂量可用于但不限于HBV和/或HCV感染的患者。本发明的方法和剂量还可用于正在进行其他抗病毒治疗的患者。本发明的预防方法特别适用于有病毒感染风险的患者。这些患者包括，但不限于医护人员，如医生、护士、临终关怀者；军事人员；教师；保育员；旅行至或生活在国外、特别是第三世界地区的患者，包括社会援助工作者、传教士和外交官。最后，所述的方法和组合物包括对难治性患者或对治疗耐受的患者、例如对逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂等耐受的患者的治疗。

另一个实施方案包括一种在需要所述治疗的哺乳动物中治疗或预防乙型肝炎病毒感染和/或丙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其对映体、非对映体、前药或可药用盐。

实施例

通过参照以下实施例可以更完整地理解本发明。然而，不应将它们视为限定本发明的范围。

缩写

DCM: 二氯甲烷

DIEPA: N,N-二乙基丙基胺

DMAP: 4-二甲基氨基吡啶

EC₅₀: 产生50％该激动剂最大可能响应值的激动剂的摩尔浓度

EtOAc或EA: 乙酸乙酯

hr(s): 小时

HPLC: 高效液相色谱

MS(ESI): 质谱(电子喷雾电离)

obsd. 实测值

PE: 石油醚

PMB: 对甲氧基苄基

QOD 每隔一天

QW 每周一次

RT或rt: 室温

sat. 饱和的

TFA: 三氟乙酸

TEA: 三乙胺

V/V 体积比

通用实验条件

中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL

粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。

中间体和最终化合物通过使用X Bridge^TM Perp C₁₈(5μm,OBD^TM30×100mm)柱或SunFire^TM Perp C₁₈(5μm,OBD^TM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。

LC/MS光谱使用Waters UPLC-SQD Mass获得。标准LC/MS条件如下(运行时间3分钟)：

酸性条件：A：0.1％甲酸和1％乙腈的H₂O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；

碱性条件：A：0.05％NH₃·H₂O的H₂O溶液；B：乙腈。

质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)⁺。

NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。

所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。

制备实施例

实施例1

6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

向6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(55mg,158μmol,化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)、DMAP(19.3mg,158μmol)和Et₃N(80.1mg,110μL,792μmol)的DCM(2mL)溶液中在室温下加入N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯(96.2mg)。将该混合物在室温下搅拌4小时然后真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(53mg,实施例1)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.38(m,5H),7.06(br s,2H),5.00(s,2H),3.37-3.53(m,4H),3.06(s,2H),3.01(s,1H),1.64(sxt,J＝7.6Hz,2H),1.10-1.25(m,3H),0.94(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:433。

实施例2

6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例2按照类似于实施例1的方式，通过使用N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(50mg,实施例2)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.40(m,5H),7.04(br s,2H),5.00(s,2H),3.39-3.51(m,2H),3.27-3.35(m,2H),3.06(s,2H),3.03(m,1H),1.54-1.71(m,4H),0.89-0.98(m,5H),0.76(t,J＝7.3Hz,1H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:447。

实施例3

6-氨基-9-苄基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例3按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物3a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第4行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(70mg,实施例3)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.40(m,5H),7.06(brs,2H),5.00(s,2H),3.37-3.56(m,4H),3.06(s,2H),3.01(s,1H),1.14-1.22(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:419。

实施例4

6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例4按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物3a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第4行)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(90mg,实施例4)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.40(m,5H),7.04(br s,2H),5.00(s,2H),3.38-3.55(m,2H),3.27-3.40(m,2H),3.06(s,2H),3.03(s,1H),1.52-1.70(m,2H),1.15-1.24(m,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,2H),0.76(t,J＝7.3Hz,1H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:433。

实施例5

6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮

实施例5按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物3a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第4行)和吡咯烷-1-羰基氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮(21.5mg,实施例5)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.39(m,5H),7.01-7.24(br s,2H),5.00(s,2H),3.43-3.64(m,6H),1.81-1.95(m,4H),1.14-1.25(m,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:431

实施例6

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例6按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物6a,JP1999193282(JP11193282A),175页,表4,第4行)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(15mg,实施例6)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.35-7.46(m,4H),7.04(brs,2H),5.00(s,2H),3.38-3.46(m,2H),3.24-3.35(m,2H),3.06(s,2H),3.02(s,1H),1.52-1.69(m,4H),0.88-0.96(m,5H),0.76(t,J＝8.0Hz,1H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:481。

实施例7

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例7按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物6a,JP1999193282(JP11193282A),175页,表4,第4行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(187mg,实施例7)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.36-7.45(m,4H),7.07(br s,2H),4.99(s,2H),3.38-3.47(m,2H),3.27-3.35(m,2H),3.06(s,2H),3.01(m,1H),1.62(sxt,J＝7.6Hz,2H),1.09-1.25(m,3H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:467。

实施例8

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例8按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物8a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第4行)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(164mg,实施例8)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.49-7.32(m,4H),7.25-6.91(m,2H),5.00(s,2H),3.47(q,J＝7.28Hz,2H),3.33(s,2H),3.11-3.00(m,3H),1.71-1.51(m,2H),1.25-1.14(m,3H),0.97-0.70(m,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:467。

实施例9

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例9按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物8a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第4行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(60mg,实施例9)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.36-7.45(m,4H),7.07(br s,2H),4.99(s,2H),3.37-3.55(m,2H),3.30-3.37(m,2H),3.05(s,2H),3.01(s,1H),1.11-1.24(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:453。

实施例10

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N,N-二甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例10按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物8a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第4行)和N,N-二甲基氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N,N-二甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(37mg,实施例10)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.37-7.40(m,4H),7.14(br s,2H),4.99(s,2H),3.37-3.55(m,2H),3.06(s,3H),3.03(s,3H),1.18(t,J＝7.4Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:439。

实施例11

6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例11按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-9-(4-氯苄基)-2-乙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物8a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第4行)和N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-氯苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-(2-甲氧基乙基)-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(25mg,实施例11)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.36-7.45(m,4H),7.06(br s,2H),4.99(s,2H),3.57-3.68(m,2H),3.43-3.51(m,2H),3.31-3.37(m,2H),3.29(s,2H),3.14(s,1H),3.10(s,2H),3.05(s,1H),1.18(t,J＝8.0Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:483

实施例12

6-氨基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺

6-氨基-2-(丙基磺酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物12a)的制备

化合物12a按照JP1999193282(JP11193282A)中公开的方法制备。得到白色固体状6-氨基-2-(丙基磺酰基)-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(127mg,化合物12a)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:10.67(br.s.,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),7.13(d,J＝8.0Hz,2H),6.98(br.s.,2H),4.91(s,2H),3.34-3.27(m,2H),2.26(s,3H),1.67-1.62(m,2H),0.92(t,J＝8.0Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:362。

6-氨基-2-丙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺的制备

实施例12按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物12a)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-甲基-N-乙基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(37mg,实施例12)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.19-7.31(m,2H),7.15(d,J＝7.58Hz,2H),7.03(br s,2H),4.95(s,2H),3.35-3.62(m,4H),3.01-3.08(m,3H),2.26(s,3H),1.44-1.75(m,4H),0.60-1.06(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:461。

实施例13

6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺

实施例13按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物12a)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-N-乙基-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(50mg,实施例13)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.25(d,J＝7.95Hz,2H),7.14(d,J＝7.95Hz,2H),6.94-7.09(m,2H),4.94(s,2H),3.36-3.54(m,4H),3.00-3.08(m,3H),2.26(s,3H),1.64(sxt,J＝7.58Hz,2H),1.11-1.23(m,3H),0.95(t,J＝7.46Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:447

实施例14

6-氨基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺

6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物14a)的制备

化合物14a按照JP1999193282(JP11193282A)中公开的方法制备。得到黄色固体状6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(37mg,化合物14a)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:348

6-氨基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺的制备

实施例14按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(3.5g,化合物14a)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-N-丙基-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(87.9mg,实施例14)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.26(t,J＝12Hz,2H),7.15(d,J＝7.6Hz,2H),7.04(br s,2H),4.95(s,2H),3.46-3.51(m,4H),3.05(s,3H),2.27(s,3H),1.62-1.64(m,2H),1.18-1.23(m,3H),0.74-0.93(m,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:447。

实施例15

6-氨基-N,N-二乙基-2-乙基磺酰基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺

实施例15按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物14a)和N,N-二乙基氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-N,N-二乙基-2-乙基磺酰基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(111mg,实施例15)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.25(m,J＝7.95Hz,2H),7.15(d,J＝7.95Hz,2H),6.99(br s,2H),4.94(s,2H),3.34-3.58(m,6H),2.26(s,3H),1.10-1.24(m,9H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:447。

实施例16

6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺

实施例16按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物14a)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-9-(对-甲苯基甲基)嘌呤-7-甲酰胺(17mg,实施例16)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.25(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(d,J＝7.9Hz,2H),7.05(br s,2H),4.94(s,2H),3.37-3.56(m,2H),3.27-3.35(m,2H),3.05(s,2H),3.01(s,1H),2.26(s,3H),1.12-1.24(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:433。

实施例17

6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮

实施例17类似于实施例1，方法A，步骤5，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7H-嘌呤-8-酮(化合物14a)和吡咯烷-1-羰基氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-2-乙基磺酰基-9-(对-甲苯基甲基)-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮(63mg,实施例17)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.25(d,J＝8.07Hz,2H),7.11-7.20(m,2H),4.95(s,2H),3.37-3.63(m,6H),2.26(s,3H),1.81-1.95(m,4H),1.19(t,J＝7.34Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:445。

实施例18

6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例18按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物18a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第7行))和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-嘌呤-7-甲酰胺(95.7mg,实施例18)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.32-7.52(m,2H),7.13-7.26(m,2H),6.83-7.13(m,2H),4.88-5.11(m,2H),3.42-3.55(m,2H),3.28-3.35(m,2H),3.00-3.08(m,3H),0.91(s,3H),1.49-1.71(m,2H),1.19(s,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:451。

实施例19

6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例19按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物18a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第7行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-N-乙基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(59mg,实施例19)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.38-7.46(m,2H),7.10-7.24(m,2H),6.89-7.10(m,2H),4.98(s,2H),3.37-3.56(m,4H),3.00-3.08(m,3H),1.14-1.23(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:437。

实施例20

6-氨基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例20类似于实施例1，方法A，步骤5，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物20a,JP1999193282(JP11193282A),Page 175,表4,第16行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-N-丙基-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(28mg,实施例20)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.28-7.35(m,2H),7.03(br s,2H),6.87-6.93(m,2H),4.92(s,2H),3.71(s,3H),3.38-3.49(m,2H),3.27-3.38(m,2H),3.05(s,2H),3.02(s,1H),1.53-1.71(m,4H),0.89-0.99(m,5H),0.75(t,J＝7.3Hz,1H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:477。

实施例21

6-氨基-N-乙基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺

实施例21按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-氟苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物20a,JP1999193282(JP11193282A),175页,表4,第16行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-N-乙基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-丙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(64mg,实施例21)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.27-7.34(m,2H),7.04(br s,2H),6.87-6.93(m,2H),4.92(s,2H),3.71(s,3H),3.35-3.50(m,2H),3.29-3.34(m,2H),3.05(s,2H),3.01(m,1H),1.66(sxt,J＝7.6Hz,2H),1.11-1.23(m,3H),0.96(t,J＝7.5Hz,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:463。

实施例22

6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-N-丙基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例22按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-溴苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物22a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第10行)和N-甲基-N-丙基-氨基甲酰氯代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)和N-乙基-N-甲基-氨基甲酰氯进行制备。得到白色固体状6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-2-乙基磺酰基-N-甲基-N-丙基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺(18mg,实施例22)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.49-7.60(m,2H),7.33(br d,J＝8.44Hz,2H),7.05(br s,2H),4.97(s,2H),3.35-3.54(m,2H),3.28-3.33(m,2H),3.01-3.09(m,3H),1.52-1.69(m,2H),1.14-1.23(m,3H),0.67-0.99(m,3H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:511

实施例23

6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺

实施例23按照类似于实施例1的方式，通过使用6-氨基-2-乙基磺酰基-9-[(4-溴苯基)甲基]-7H-嘌呤-8-酮(化合物22a,JP1999193282(JP11193282A),173页,表4,第10行)代替6-氨基-9-苄基-2-丙基磺酰基-7H-嘌呤-8-酮(化合物1a,JP1999193282(JP11193282A),164页,表4,第5行)进行制备。得到白色固体状6-氨基-N-乙基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-甲基-8-氧代-2-乙基磺酰基-嘌呤-7-甲酰胺(11.5mg,实施例23)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm:7.55(d,J＝8.44Hz,2H),7.33(br d,J＝8.31Hz,2H),7.08(br s,2H),4.97(s,2H),3.37-3.54(m,4H),2.99-3.08(m,3H),1.12-1.23(m,6H)。MS实测值(ESI⁺)[(M+H)⁺]:497。

实施例24

化合物和实施例在HEK293-hTLR-7试验中的活性HEK293-Blue-hTLR-7细胞试验：

稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(目录号：hkb-htlr7,SanDiego,California,USA)。这些细胞被设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR7的刺激。将SEAP(分泌型胚胎碱性磷酸酶)报道基因置于与5个NF-κB和AP-1-结合位点融合的IFN-β最小启动子控制下。通过经用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞活化NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在刺激人TLR720小时时，NF-κB启动子将调节报道基因表达。用QUANTI-Blue^TM试剂盒(目录号：rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长处测定细胞培养物上清液的SEAP报道基因活性，这是一种在碱性磷酸酶的存在下变为紫色或蓝色的检测培养液。

将HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度在96-孔板中的Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)中以180μL的体积温育24小时，所述Dulbecco改良的Eagle培养液(DMEM)包含4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mLNormocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活胎牛血清。然后将HEK293-Blue-hTLR-7细胞与添加的20μL系列稀释的测试化合物一起在最终浓度为1％的DMSO的存在下温育，并且在37℃下、在CO₂温育箱中温育20小时。然后将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液一起在37℃下温育2小时，然后在620～655nm下用分光光度计读取吸光度。TLR7活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广为接受，因此类似的报道基因试验也被广泛地应用于评价TLR7激动剂(Tsuneyasu Kaisho和Takashi Tanaka,Trends inImmunology,第29卷，第7期，2008年7月，329页起；Hiroaki Hemmi等人,Nature Immunology3,196-200(2002))。

按照本文中的描述在HEK293-hTLR-7试验中测试本发明的化合物和实施例的TLR7激动活性，结果列于表1中。发现作为前药的实施例具有约2.3μM至约494μM的EC₅₀，发现作为活性形式的化合物具有小于0.1μM的EC₅₀。计算的EC_50(前药)/EC_{50(活性形式)}比值在27.7至约8233的范围内。

表1：本发明的实施例和化合物在HEK293-hTLR-7试验中的活性

实施例25

前药式(I)化合物的代谢

进行研究以评价前药式(I)化合物向其相应的活性形式的代谢转化。如果作为前药给药，式(I)的化合物在体内可以被代谢成活性化合物或本发明的其它化合物。通常用人肝微粒体来评价前药在动物或人体内的代谢转化程度。

材料

包含β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、异柠檬酸和异柠檬酸脱氢酶的NADPH辅因子系统购自Sigma-Aldrich Co.(St.Louis,MO,USA)。人肝微粒体(目录号452117，批号38290)获自Corning(Woburn,MA,USA)。从Xenotech获得小鼠肝微粒体(目录号M1000，批号1310028)。

化合物的工作溶液和其他溶液

将化合物溶于DMSO制成10mM储备溶液。将10μL储备溶液用乙腈(990μL)稀释得到100μM工作溶液。

孵育

将微粒体与测试化合物在37℃下在pH 7.4的100mM磷酸钾缓冲液中预孵育10分钟。通过添加NADPH再生系统引发反应，使最终孵育体积为200μL，并在37℃的水浴中摇动。孵育混合物由肝微粒体(0.5mg微粒体蛋白/mL)、底物(1.0μM)和NADP(1mM)、异柠檬酸脱氢酶(1单位/mL)、异柠檬酸(6mM)组成。

分析样品的制备

在30分钟时，通过添加600μL冷乙腈(包含100ng/mL甲苯磺丁脲和100ng/mL拉贝洛尔作为内标)来淬灭反应。将样品以4000rpm离心20分钟，并将所得上清液进行LC-MS/MS分析。

校准曲线的样品按如下制备。将100μL/孔肝微粒体和98μL/孔NADPH再生系统溶液分配到96孔板中。首先加入600μL猝灭溶液，然后加入2μL标准曲线和QC工作溶液。

生物分析

在ESI-正MRM模式下，在API4000 LC-MC/MC仪器上定量化合物。

进行研究以评估前药(1μM)实施例1至23在人肝微粒体存在下向相应的活性形式化合物1a、化合物3a、化合物6a、化合物8a、化合物12a、化合物14a、化合物18a、化合物20a、化合物22a的代谢转化。结果总结并显示在表2中。

表2.前药在人肝微粒体中的代谢转化

实施例26

在雄性Wister-Han大鼠中的单剂量PK研究

在雄性Wister-Han大鼠中进行单剂量PK以评估测试化合物的药代动力学性质。通过管饲(POE)相应的化合物对两组动物进行给药。在给药后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、7小时和24小时，通过颈静脉或替代部位收集血样(约20μL)。将血液样品置于含有EDTA-K2抗凝剂的管中，并在4℃下以5000rpm离心6分钟以从样品中分离血浆。离心后，将得到的血浆转移到干净的试管中，用于在LC/MS/MS上对前药和活性形式进行生物分析。在给药前药的组中，血浆样品中前药的浓度低于检测限。表8中的“测试化合物”用作测试“给药化合物”的体内代谢物(活性形式)的内标。使用

Professional 6.2的非隔室模块计算药代动力学参数。直接从实验观察结果记录峰值浓度(C_max)。使用线性梯形法则计算直至最后可检测浓度的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC_0-t)。

C_max和AUC_0-最后是与测试化合物的体内功效相关的两个关键PK参数。具有更高C_max和AUC_0-最后的化合物将导致更好的体内功效。口服给药活性形式和竞争性化合物后PK参数的结果在表7中给出。前药的PK参数列于表8中。

口服给药前药后，在血浆中观察到活性形式，并因此进行了测试。与本发明中提到的化合物(化合物8a，其为活性形式)相比，本发明的示例性前药(实施例8)出人意料地显示出大大改善的AUC_0-最后(增加14.5倍)。结果清楚地证明了前药与活性形式相比在PK参数上的出人意料的优越性，这导致更好的体内功效。

表8. 5mg/kg口服给药后前药和活性形式的PK参数

Claims

1.式(I)化合物或其可药用盐、对映体或非对映体

其中

R¹是C_1-6烷基；

R³是-NR⁴R⁵，其中

R⁴和R⁵独立地选自C_1-6烷基或C_1-6烷氧基C_1-6烷基；或者

R⁴和R⁵与它们所连接的氮一起形成杂环基。

2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中

R¹是C_1-6烷基；

R³是吡咯烷基或-NR⁴R⁵，其中

R⁴和R⁵独立地选自C_1-6烷基或C_1-6烷氧基C_1-6烷基。

3.根据权利要求1或2的化合物，其中

R¹是乙基或丙基；

4.根据权利要求3的化合物，其中R³是吡咯烷基、甲基(乙基)氨基、甲基(丙基)氨基、甲基(甲氧基乙基)氨基或二甲基氨基。

5.根据权利要求1或2或3的化合物，其中R²是被卤素或C_1-6烷基取代的苄基。

6.根据权利要求5的化合物，其中R²是溴苄基、氯苄基、氟苄基或甲基苄基。

7.根据权利要求6的化合物，其中R²是溴苄基、氯苄基或氟苄基。

8.根据权利要求5的化合物，其中R³是-NR⁴R⁵，其中R⁴是C_1-6烷基；R⁵是C_1-6烷基。

9.根据权利要求8的化合物，其中R³是甲基(丙基)氨基或甲基(乙基)氨基。

10.根据权利要求1或2的化合物，其中

R¹是C_1-6烷基；

R²是苄基，所述苄基被卤素或C_1-6烷基取代；

R³是-NR⁴R⁵，其中R⁴是C_1-6烷基，R⁵是C_1-6烷基。

11.根据权利要求10的化合物，其中

R¹是乙基或丙基；

R²是溴苄基、氯苄基或氟苄基；

R³是甲基(丙基)氨基或甲基(乙基)氨基。

12.化合物，选自：

6-氨基-9-苄基-2-乙基磺酰基-7-(吡咯烷-1-羰基)嘌呤-8-酮；

6-氨基-9-[(4-溴苯基)甲基]-N-乙基-2-乙基磺酰基-N-甲基-8-氧代-嘌呤-7-甲酰胺；或其可药用盐、对映体或非对映体。

13.根据权利要求1至12任意一项的化合物的制备方法，包括如下步骤：

将式(II)化合物

与氨基甲酰氯在混合碱的存在下反应；

其中的混合碱是吡啶和三乙胺、吡啶和DIPEA、DMAP和三乙胺或DMAP和DIPEA；R¹和R²如权利要求1至11任意一项所定义。

14.用作治疗活性物质的根据权利要求1至12任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。

15.包含根据权利要求1至12任意一项的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。

16.根据权利要求1至12任意一项的化合物用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。

17.根据权利要求1至12任意一项的化合物在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。

18.根据权利要求1至12任意一项的化合物作为TLR7激动剂的用途。

19.根据权利要求1至12任意一项的化合物用于诱导干扰素-α产生的用途。

20.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的根据权利要求1至12任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。

21.根据权利要求13的方法制备的根据权利要求1至12任意一项的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。

22.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，该方法包括施用治疗有效量的权利要求1至12任意一项所定义的化合物。

23.如上文所述的本发明。