CN111303180A - 一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物提取领域，具体涉及一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：S1.将东革阿里块根粉碎并分散到水中，加入复合酶酶解；S2.在步骤S1过滤之后得到的滤渣中，加入乙醇水溶液回流提取；S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取；S4.合并滤液，纯化即得。本发明首先采用复合酶酶解利于宽缨酮的释放，再利用乙醇‑水混合溶剂，乙醇‑乙酸乙酯混合溶剂依次进行提取，提高了对宽缨酮的提取率，最佳的宽缨酮的提取率达97.8％以上，纯度为99.7％。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取领域，具体涉及一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法。
技术背景
东革阿里为苦木科东革阿里属植物，广泛分布于马来西亚、印度尼西亚、越南等东南亚国家。在原产地被称为马来西亚人参、天然伟哥等，与燕窝、锡器一起并称为马来西亚三大国宝。东革阿里除了具有抗癌、抗疟疾、改善男性性功能障碍等功效外，还能提升人体机能、抗焦虑、抗骨质疏松、镇痛抗炎、抗菌、抗寄生虫、调节免疫力及治疗糖尿病。苦木素类化合物是东革阿里的主要活性成分，宽缨酮是苦木素类化合物中最具代表性的一种，有研究表明宽缨酮在东革阿里中的含量较高，达到了1.64‰。
关于从东革阿里中提取宽缨酮的方法已有多篇专利文献公开，如CN103408564B公开了一种东革阿里植物中宽缨酮的提取工艺，但其步骤复杂，用到乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿等多种有机溶剂，且重复使用，溶剂消耗大，且产物纯度不高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中从东革阿里中提取宽缨酮的工艺步骤繁多，提取产物纯度不高的问题，提供了一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：(20-25)mL，将东革阿里块根粉碎并分散到水中；按照每克东革阿里块根粉末加入10-15U的复合酶，在38-45℃温度下酶解2-3h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比(3-5)：1混合而成；
S2.在步骤S1酶解之后的混合物中，按照料液比为1g：(10-20)mL，加入乙醇水溶液回流提取1-2h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为93％-97％；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：(10-20)mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1-2h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为28％-32％；
S4.合并步骤S2和S3过滤所得到的滤液，纯化即得。
植物细胞壁主要由纤维和多糖组成，采用复合酶对东革阿里进行处理可以使细胞壁破裂，进而便于有效成分的释放。东革阿里中含有多种化学成分，以苦木素与生物碱两类化合物为主。宽缨酮属于苦木素类物质，其分子式为C20H24O9。东革阿里中含有许多与宽缨酮结构相近且物理性质也相近的物质，例如东革阿里中发现含有27种C20类物质、22种C19类物质。在提取过程中，这些物质相互作用，难以将宽缨酮一次性提取完全。本发明通过复合酶酶解促进有效成分的释放，再通过不同的混合溶剂进行分级提取(利用乙醇-水混合溶剂，乙醇-乙酸乙酯混合溶剂依次进行提取)，以克服不同提取阶段宽缨酮与不同分子结合的情况，从而更充分地提取东革阿里中的宽缨酮。
优选地，所述步骤S1中复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比为4:1混合而成。
优选地，所述步骤S1复合酶酶解之后，步骤S2之前，对酶解之后的混合物进行超声提取。在超声的作用下，更有利于东革阿里植物细胞中的有效成分进入溶剂中。
优选地，所述超声提取的条件为：提取温度45-50℃，50-100Hz超声，提取时间30-40min。
优选地，所述步骤S1中将东革阿里块根粉碎为10-30目的粉末。
优选地，所述步骤S4中纯化包括以下步骤：
(1)将步骤S4合并所得到的滤液以20000-25000r/min的转速离心15-20min；过滤，保留上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液在50-55℃进行蒸发浓缩，至浓缩液的浓度为30°Be'，得浓缩液；
(3)在浓缩液中加入无水乙醇搅拌至浓缩液的浓度为10°Be'，再置于2-4℃温度下结晶，将所得到的结晶洗涤后真空干燥即得。
对宽缨酮提纯过程中先通过离心脱脂，再通过重结晶对宽缨酮进一步提纯，有效提高了宽缨酮的纯度。
优选地，所述步骤(2)中洗涤是采用1-2℃的冰水对晶体进行洗涤。
优选地，所述步骤(2)中真空干燥的温度为52-54℃、真空度为-0.05MPa。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
本发明提供的一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，首先采用复合酶对东革阿里细胞的细胞壁进行酶解便于宽缨酮的释放。再利用超声提取的方式对东革阿里中的宽缨酮提取，再利用乙醇-水混溶溶剂，乙醇-乙酸乙酯混溶溶剂依次进行提取。提高了宽缨酮的提取率，最佳的宽缨酮的提取率达97.8％以上，纯度为99.7％。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例、对比例将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
除特殊说明，本实施例、对比例以及实验例中所用的设备均为常规实验设备，所用的材料、试剂无特殊说明均为市售得到。
实施例1
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：20mL，将东革阿里块根粉碎为10目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入10U的复合酶，在45℃温度下酶解2h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比5：1混合而成；
S2.在步骤S1酶解之后的混合物中，按照料液比为1g：20mL，加入乙醇水溶液回流提取1h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为95％；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：20mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为28％；
S4.合并步骤S2和S3过滤所得到的滤液，纯化即得。
上述步骤S4中纯化包括以下步骤：
(1)将步骤S4合并所得到的滤液以20000r/min的转速离心15min；过滤，保留上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液在50℃进行蒸发浓缩至浓度为30°Be'，得浓缩液；
(3)在浓缩液中加入无水乙醇搅拌至浓度为10°Be'，再置于2-4℃温度下结晶，将所得到的结晶用1-2℃的水对晶体进行洗涤，然后在52℃、真空度为-0.05MPa条件下真空干燥。
实施例2
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：20mL，将东革阿里块根粉碎为10目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入10U的复合酶，在45℃温度下酶解2h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比5：1混合而成；
S2.将经由步骤S1酶解之后的混合物，在50℃条件下，50Hz超声30min，然后进行过滤；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：20mL，加入乙醇水溶液回流提取1h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为95％；
S4.在步骤S3过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：20mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为28％；
S5.合并步骤S2、S3和S4过滤所得到的滤液，纯化即得。
上述步骤S5中纯化包括以下步骤：
(1)将步骤S5合并所得到的滤液以20000r/min的转速离心15min；过滤，保留上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液在50℃进行蒸发浓缩至浓度为30°Be'，得浓缩液；
(3)在浓缩液中加入无水乙醇搅拌至浓度为10°Be'，再置于2-4℃温度下结晶，将所得到的结晶用1-2℃的水对晶体进行洗涤，然后在52℃、真空度为-0.05MPa条件下真空干燥。
实施例3
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：25mL，将东革阿里块根粉碎未30目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入15U的复合酶，在38℃温度下酶解3h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比3：1混合而成；
S2.将经由步骤S1酶解之后的混合物，在45℃条件下，100Hz超声40min，然后进行过滤；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：10mL，加入乙醇水溶液回流提取2h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为97％；
S4.在步骤S3过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：10mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取2h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为32％；
S5.合并步骤S2、S3和S4过滤所得到的滤液，纯化即得。
上述步骤S5中纯化包括以下步骤：
(1)将步骤S5合并所得到的滤液以25000r/min的转速离心20min；过滤，保留上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液在55℃进行蒸发浓缩至浓度为30°Be'，得浓缩液；
(3)在浓缩液中加入无水乙醇搅拌至浓度为10°Be'，再置于2-4℃温度下结晶，将所得到的结晶用1-2℃的水对晶体进行洗涤，然后在54℃、真空度为-0.05MPa条件下真空干燥。
对比例1
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：22mL，将东革阿里块根粉碎为25目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入12U的复合酶，在40℃温度下酶解2.5h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比4：1混合而成；
S2.将经由步骤S1酶解之后的溶液混合物，在48℃条件下，80Hz超声35min，然后进行过滤；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：15mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1.5h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为30％；
S4.合并步骤S2、S3过滤所得到的滤液，纯化即得。纯化方法同实施例3。
与实施例3相比，本对比例未采用乙醇和水混合溶剂进行回流提取。
对比例2
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：22mL，将东革阿里块根粉碎为25目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入12U的复合酶，在40℃温度下酶解2.5h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比4：1混合而成；
S2.将经由步骤S1酶解之后的混合物，在48℃条件下，80Hz超声35min，然后进行过滤；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：15mL，加入乙醇水溶液回流提取1.5h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为95％；
S4.合并步骤S2、S3过滤所得到的滤液，纯化即得。纯化方法同实施例3。
与实施例3相比，本对比例未采用乙醇和乙酸乙酯混合溶剂提取。
对比例3
一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：22mL，将东革阿里块根粉碎为25目粉末并分散到水中，按照每克东革阿里块根粉末加入12U的复合酶，在40℃温度下酶解2.5h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比4：1混合而成；
S2.将经由步骤S1酶解之后的混合物，在48℃条件下，80Hz超声35min，然后进行过滤；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：15mL，加入质量分数为60％乙醇水溶液回流提取1.5h，然后进行过滤；
S4.在步骤S3过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：15mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1.5h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为50％；
S5.合并步骤S2、S3和S4过滤所得到的滤液，纯化即得。纯化方法同实施例3。
与实施例3相比，本对比例采用乙醇和水混合溶剂的比例不在本发明的范围内，乙醇和乙酸乙酯混合溶剂不在本发明的范围内。
实验例1
东革阿里采购三批分别购自宁夏华柯农业生态开发有限公司、福建省昌顺生物技术有限公司、云南广正生物科技有限公司。测定各批次东革阿里药材中宽缨酮含量。测定方法参照，《HPLC法测定东革阿里中宽缨酮的含量》，福建分析测试，2019,28(3)。测试结果如表1所示。
表1原料中宽缨酮含量情况
取市售东革阿里药材按照实施例、对比例组的方法提取宽缨酮并计算宽缨酮的提取率并测定提取的宽缨酮的纯度。测定方法参照：《HPLC法测定东革阿里中宽缨酮的含量》，福建分析测试，2019,28(3)。结果如表2所示。
表2宽缨酮提取产物情况表
| 组别 | 实施例1 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 |
| 提取率 | 96.8％ | 97.7％ | 97.2％ | 97.8％ | 82.1％ | 82.3％ | 90.2％ |
| 纯度 | 99.5％ | 99.6％ | 98.9％ | 99.7％ | 98.3％ | 98.1％ | 87.6％ |
从表1可以看出实施例各组的提取方法或得的宽缨酮的提取率明显高于对比例各组的提取率。对比例1未采用乙醇水混合溶剂提取，对比例2未采用乙醇-乙酸乙酯混合溶剂提取，未采取分级提取的方法，使得提取过程中，与宽缨酮结构近似的分子不能较好的分离，使其提取率降低，说明分级提取对宽缨酮物质的提取有明显的改善作用。对比例3采用乙醇水溶液比例不在本发明的范围内，虽然对比例3的提取率达到90％以上，但是纯度较其他实施例和对比例要低。说明本发明中乙醇、水混合溶剂以及乙醇、乙酸乙酯混合溶剂协同提高了宽缨酮的提取率和纯度。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.按照料液比为1g：(20-25)mL，将东革阿里块根粉碎并分散到水中；按照每克东革阿里块根粉末加入10-15U复合酶，在38-45℃温度下酶解2-3h，其中，复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比(3-5)：1混合而成；
S2.在步骤S1酶解之后的混合物中，按照料液比为1g：(10-20)mL，加入乙醇水溶液回流提取1-2h，然后进行过滤，其中，乙醇水溶液中的乙醇的质量分数为93％-97％；
S3.在步骤S2过滤之后得到的滤渣中，按照料液比为1g：(10-20)mL，加入乙醇和乙酸乙酯的混合液进行回流提取1-2h，然后进行过滤，其中，混合液中的乙醇质量分数为28％-32％；
S4.合并步骤S2和S3过滤所得到的滤液，纯化即得。
2.根据权利要求1所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤S1中复合酶为果胶酶和纤维素酶按照活性单位比为4:1混合而成。
3.根据权利要求1所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤S1复合酶酶解之后，步骤S2之前，对酶解之后的混合物进行超声提取。
4.根据权利要求3所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述超声提取的条件为：提取温度45-50℃，50-100Hz超声，提取时间30-40min。
5.根据权利要求1所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤S1中将东革阿里块根粉碎为10-30目的粉末。
6.根据权利要求1所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤S4中纯化包括以下步骤：
(1)将步骤S4合并所得到的滤液以20000-25000r/min的转速离心15-20min；过滤，保留上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液在50-55℃进行蒸发浓缩至浓度为30°Be'，得浓缩液；
(3)在浓缩液中加入无水乙醇搅拌至浓度为10°Be'，再置于2-4℃温度下结晶，将所得到的结晶洗涤后真空干燥即得。
7.根据权利要求6所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤(3)中洗涤是采用1-2℃的水对晶体进行洗涤。
8.根据权利要求6所述从东革阿里中提取宽缨酮的方法，其特征在于，所述步骤(3)中真空干燥的温度为52-54℃、真空度为-0.05MPa。
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