CN111304119B - 一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用，属于微生物与饲料添加剂制备技术领域。本发明提供的饲用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)命名为AH02，保藏编号为CGMCC NO.18923，该菌能够耐95℃的高温、可在pH值2.0以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强，同时具有降解伏马毒素的作用，将枯草芽孢杆菌AH02制成菌剂后用于饲喂动物效果安全可靠，在降低腹泻率，提高饲料转化效率，促进生长方面有积极作用。
Description
技术领域
本发明涉及微生物及饲料添加剂领域，具体地涉及一种具有降解伏马毒素效果的饲用枯草芽孢杆菌及其菌剂在动物养殖领域的应用。
背景技术
霉菌毒素的污染对全球畜禽养殖业而言是个很大的挑战，饲料中所含有的霉菌毒素大多数是来自于饲料原料、生产加工以及储存等过程中霉菌的污染。而且霉菌的生长繁殖以及毒素的产生都很难人为进行控制，给畜牧业的经济效益带来很大影响。全球范围内，在80％的地区，霉菌毒素对畜牧行业的生产形成了严重的威胁。
伏马毒素(Fumonisins，FB)是一种由串珠镰刀菌等真菌代谢产生的霉菌毒素，是一种污染很广泛的霉菌毒素，可以污染玉米、小麦等多种动物饲料原料。伏马毒素对多种动物具有毒性作用，主要造成动物器官损伤，大剂量或长期低剂量摄入会引起动物急性或慢性中毒，降低动物的生长性能，造成免疫抑制，甚至导致动物死亡。另一方面，由于毒素在体内代谢后产生一些次级代谢产物，通过动物的肌肉、蛋、奶以及内脏等可食用途径进入人体内，间接损害人体健康。还可能通过尿液或粪便排泄至环境中，导致毒素在环境中蓄积，污染土壤及植物。
目前降解饲料中霉菌毒素的方法主要有物理方法、化学方法及生物学方法。物理方法需要较大的场地和空间，因此投入人力物力成本较高，而且效果相对一般，化学方法在降解霉菌毒素的同时，破坏了饲料的营养特性，因此较少使用，微生物降解霉菌毒素是一类近年来兴起的方法，具有施用条件温和，对饲料营养物质影响较小，操作简单方便等优点。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降解伏马毒素作用的饲用枯草芽孢杆菌及其应用。
为了实现本发明的目的，本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是从中国农业大学肉牛饲养基地的肉牛瘤胃液中筛选得到，命名为AH02。经基因序列分析，该菌株AH02为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株已于2019年11月8日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，保藏号为CGMCC No.18923。
本发明提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02的微生物学特性为：革兰氏阳性菌，细胞形态为杆状，长度不超过2μm，宽度不超过0.8μm，具有芽孢且芽孢不膨大；单菌落大小约为3mm，颜色呈米白色，不透明，菌落表面平整，边缘不规则。枯草芽孢杆菌AH02在高温95℃下处理20min后的活菌数均大于1010CFU/ml。AH02可在pH值2.0以上的酸性环境生长，耐胆盐能力强。且具有降解伏马毒素的能力，枯草芽孢杆菌AH02在pH 7.4-7.6，37℃下处理发霉饲料3h后对伏马毒素的降解率达到47.62％。且3h后的枯草芽孢杆菌AH02活菌数量级不变。
本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02，其16S rDNA序列如SEQ IDNO.1所示。其保藏编号为CGMCC NO.18923。
本发明提供含有该枯草芽孢杆菌AH02的菌剂。
本发明还提供一种含有该枯草芽孢杆菌AH02的动物饲料添加剂。该饲料添加剂含有的枯草芽孢杆菌AH02活菌数为5×108CFU/g～5×1012CFU/g；优选地，含有的枯草芽孢杆菌AH02饲料添加剂的活菌数为5×1010CFU/g～5×1011CFU/g。
本发明还提供一种含有该枯草芽孢杆菌AH02的动物饲料。其中，所述动物饲料中枯草芽孢杆菌AH02的活菌数为5×107CFU/kg～5×109CFU/kg，优选的5×108CFU/kg。
本发明对枯草芽孢杆菌AH02的益生效果进行了体外法鉴定，结果显示，枯草芽孢杆菌AH02能够耐酸、酸胆盐，能抵抗胃肠道的内环境，具备益生菌的潜力。
本发明的一个重要发现在于枯草芽孢杆菌AH02具有降解伏马毒素的能力，因此本发明提供了含有枯草芽孢杆菌AH02的抑制伏马毒素的药物，以及提供了枯草芽孢杆菌AH02在降低食品或饲料中伏马毒素污染中的应用。本发明实施例中，验证了枯草芽孢杆菌AH02对伏马毒素的降解率达到47.62％。本领域技术人员能够基于本发明提供的枯草芽孢杆菌AH02，用于验证其对其他霉菌毒素的降解效果，这不超出本领域技术人员的基本能力范围，因此枯草芽孢杆菌AH02具有降解霉菌毒素并用于制备降解霉菌毒素的药物、以及在降低食品或饲料中霉菌毒素污染中的应用均属于本发明的保护范围。
附图说明
图1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02 CGMCC No.18923的菌落形态图。
图2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02 CGMCC No.18923的革兰氏染色图。
图3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02 CGMCC No.18923的耐酸性检测结果。
图4为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02 CGMCC No.18923的耐胆盐检测结果。
图5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02 CGMCC No.18923的生长曲线。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中所使用的材料、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所使用的培养基如无特殊说明配方如下：LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，用蒸馏水定容至1L，用5mol/L的氢氧化钠将pH调至7.0。
本发明中伏马毒素的检测方法参照《GB 5009.240-2016食品安全国家标准食品中伏马毒素的测定》。伏马毒素降解率检测方法参考文献：(1)陈亭亭,张巧艳,王坡,林琳,杨华,杨兰花,杨胜利,袁玉伟.基于羧酸酯酶降解伏马毒素研究.饲料工业,2018,39(8):48-53.(2)BINDER E M,BINDER J,ELLEND N,et al.Microbiological degradation ofdeoxynivalenol and 3-acetyl-deoxynivalenol。Mycotoxins and phycotoxins-developments in chemistry,toxicology and food safety.Fort Collins:AlakenInc.,1998:279-285.(3)FUCHS E,BINDER E M,HEIDLER D,et al.Structuralcharacterization of metabolites after the microbial degradation of type atrichothecenes by the bacterial strain BBSH797.Food Additives andContaminants,2002,19(4):379-386。
实施例1 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02的分离与鉴定
一、菌株AH02的分离
1.菌株的分离培养
取1ml中国农业大学肉牛养殖基地的肉牛瘤胃液装入有9ml生理盐水的试管中，漩涡器震荡混匀，即为1：10稀释液，再取稀释液进行10倍递增稀释，然后选择3个适宜梯度的稀释液各1ml涂布于LB培养基上。37℃培养48-72小时，观察并记录菌落形态，挑取长势良好的单菌落，进行划线分离纯化。
2.菌株的紫外诱变与初筛
将灭菌后的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后取步骤1所得的菌悬液涂布于平板上，每个培养皿控制菌落在60个左右，培养12小时后，距离紫外灯20cm，诱变30s。
将诱变后的菌株分别接种在2ml含有40μg/ml伏马毒素的液体LB培养基中，37℃培养3天，进一步提高浓度重复试验，3天后采用高效液相色谱方法检测培养基中伏马毒素的浓度，将出现伏马毒素浓度下降的菌株筛选出来，稀释至适宜浓度，涂布于LB培养基中。在37℃恒温培养箱中培养至24小时，进行下一步革兰氏染色。
3.菌株的革兰氏染色
在载玻片上滴一滴经灭菌的蒸馏水，随机挑取一个初筛后生长速度较快的单菌落(菌落形态图见图1)在水中溶解，经刮片后，在酒精灯上烘干固定。滴加结晶紫染色液，染2min，水洗，自然晾干；滴加碘液媒染2min，水洗，自然晾干；滴加碱性品红乙醇溶液50S，水洗，自然晾干；在普通光学显微镜上观察，若菌体呈紫色为阳性，菌体呈红色为阴性，结果见图2。选取革兰氏阳性杆菌进行下一步芽孢染色实验。
4.菌株的芽孢染色
取经步骤2筛选后生长速度较快的菌株，在载玻片上滴一滴经灭菌的蒸馏水，挑取一个单菌落在水中溶解，经刮片后，在酒精灯上烘干固定。滴加5％孔雀石绿溶液3-5滴，在酒精灯上加热3-5min，注意不能使液体沸腾或者干枯，水洗，自然晾干；滴加蕃红溶液染色2min，水洗，自然晾干；在普通光学显微镜下观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
通过步骤1-4的分离筛选，最终获得一株革兰氏染色阳性，具有芽孢且芽孢不膨大的菌株。将该菌株编号为AH02。
二、菌株AH02的鉴定
1.形态学鉴定
对处于对数生长期且菌落大小稳定的菌株AH02进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、菌落表面状态及菌落边缘状态。所得单菌落大小约为3mm，颜色呈米白色，不透明，菌落表面平整，边缘不规则。
其次对处于对数生长期的菌株AH02进行染色，采用光学显微镜观察菌体形态。分离并筛选到的菌株AH02，革兰氏染色呈阳性，细胞形态为杆状，直径不超过2μm，有荚膜，有芽孢生成且芽孢不膨大。
2.16S DNA序列同源性分析
细菌总DNA的提取采用天根生化科技有限公司的细菌基因组DNA提取试剂盒提取。提取后的样品送到上海美吉生物医药科技有限公司进行测序。将测定结果在GenBank数据库中进行BLAST同源性比对，确定菌种类别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。其16SrDNA序列如SEQ ID NO.1所示
上述实验结果表明，该菌为枯草芽孢杆菌。该菌株已于2019年11月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，保藏号为CGMCC No.18923。
实施例2 枯草芽孢杆菌AH02的抗逆性检测
1.耐热性检测
将枯草芽孢杆菌AH02菌液至于水浴锅内20分钟，分别用75℃、85℃、95℃处理，每个处理3个重复，处理结束后采用倾注法测定其活菌数，活菌数芽孢存活率为符合实际生产中要求益生菌所具备的加工特性的最低要求。
结果显示，初始大于1010CFU/ml的枯草芽孢杆菌AH02分别在75℃、85℃、95℃处理20分钟后，活菌数可保持在1010CFU/ml以上；枯草芽孢杆菌AH02在高温95℃下处理后活菌数仍能保持在95％以上。
2.耐酸性检测
将108CFU/ml枯草芽孢杆菌AH02分别接种到pH值为2.0、3.0、4.0的LB培养基中，分别在1h、2h、3h、4h采用平板倾注法测定其活菌数。
结果见图3，当pH为2或3时基本不影响枯草芽孢杆菌AH02的正常生长，当pH为4时枯草芽孢杆菌AH02仍然正常生长只是生长速度减缓，说明该菌种对酸的耐受能力较强。说明枯草芽孢杆菌AH02可以耐受胃酸的影响。
3.耐胆盐检测
将活化好的枯草芽孢杆菌AH02用无菌生理盐水做倍比稀释，选取合适的稀释梯度并吸取1ml稀释液放于无菌培养皿里，做6个重复，然后用含不同浓度牛胆酸钠(0.1％、0.2％、0.3％、0.4％)的LB培养基倾注平板，37℃培养4小时，每隔1小时菌落计数，同时用不含牛胆酸钠的LB培养基倾注平板，37℃培养48小时，菌落计数，作为对照组，见图4，结果显示当胆盐浓度达到0.4％时，2h后枯草芽孢杆菌AH02停止生长，0.1％、0.2％、0.3％胆盐作用对枯草芽孢杆菌AH02的影响比较微弱，几乎不影响其正常生长，说明枯草芽孢杆菌AH02的耐胆盐能力较强。
实施例3 枯草芽孢杆菌AH02的生长曲线测定
生长曲线代表了细菌在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。将枯草芽孢杆菌AH02按10％(v/v)的接种量，接种到LB培养基中，37℃培养36小时，以不加菌液的LB培养基作为空白对照，每隔2-6小时测定OD600值，从而计算活菌数。实验设三次重复，结果取其平均值，记录数据并绘制生长曲线。如图5所示，在0-18小时，枯草芽孢杆菌AH02处于对数生长阶段，繁殖速率较高。在18-24小时枯草芽孢杆菌AH02数目趋于稳定处于静止期。24小时以后进入生长率下降阶段。
实施例4 枯草芽孢杆菌AH02对伏马毒素的降解效果验证
1、常规条件下AH02对伏马毒素的降解能力检测
取发霉饲料若干，粉碎混匀，并用无霉饲料与其混合，将伏马毒素的浓度调制60000μg/kg，pH调至7.4-7.6；将活化好的枯草芽孢杆菌AH02离心，弃上清取活菌体并用无菌蒸馏水将其浓度调制1012CFU/ml；取伏马毒素浓度为60000μg/kg的发霉饲料100g，按5％比例将枯草芽孢杆菌AH02均匀喷洒于饲料上后置于37℃恒温箱静置培养，每间隔1h取饲料样测定其中剩余的伏马毒素浓度，直至三次降解浓度稳定(即每次测量误差＜0.02)，取三次测定均值评定为枯草芽孢杆菌AH02正常条件下降解伏马毒素的能力。枯草芽孢杆菌AH02在pH 7.4-7.6，37℃下处理发霉饲料3h后对伏马毒素的降解率达到47.62％。且3h后的枯草芽孢杆菌AH02活菌数量级不变。
伏马毒素降解率的计算方式为(霉菌毒素添加量-霉菌毒素残留量)/霉菌毒素添加量×100％。
2、pH2-4条件下AH02对伏马毒素降解能力的检测
取发霉饲料若干，粉碎混匀，并用无霉饲料与其混合，将伏马毒素的浓度调制60000μg/kg，将活化好的枯草芽孢杆菌AH02离心，弃上清取活菌体并用无菌蒸馏水将其浓度调制1012CFU/ml。取伏马毒素浓度为60000μg/kg的饲料100g，分别将饲料调至pH 2、pH 3、pH 4后按5％比例将1012CFU/ml枯草芽孢杆菌AH02均匀喷洒于饲料上后置于37℃恒温箱培养，分别于3h后测定其伏马毒素的浓度。3h后接种枯草芽孢杆菌AH02菌液的pH 2、pH 3、pH4的饲料伏马毒素的浓度分别为53904μg/kg、48720μg/kg、40620μg/kg，即枯草芽孢杆菌AH02在37℃下处理pH 2、pH 3、pH 4发霉饲料3h对伏马毒素的降解率分别为10.16％、18.8％、32.3％。且枯草芽孢杆菌AH02菌液喷洒于pH 2、pH 3、pH 4的伏马毒素饲料3h后的活菌数均大于5×106CFU/g。伏马毒素降解率的计算方式同上。
实施例5 枯草芽孢杆菌制剂的制备
1.发酵培养基配方：红糖60g/L、豆粕35g/L、氯化钠4g/L、磷酸二氢钾0.8g/L、硫酸锰0.3g/L、硫酸镁0.03g/L、消泡剂0.05％(v/v)加水充分溶解，控制pH在6.5-6.9的范围内制成发酵培养基。
2.121℃高温蒸汽消毒30min。
3.待发酵培养基降温至30℃时，接种菌龄12小时的菌液7％(v/v)。
4.在37℃条件下，保持转速220rpm搅拌，发酵培养24小时，放罐，得到枯草芽孢杆菌的活菌数大于5×1010cfu/ml，芽孢率达95％以上。
5.将菌泥用无菌水稀释后，放入喷雾干燥器中干燥，收集产品，得到枯草芽孢杆菌制剂。
实施例6 枯草芽孢杆菌AH02制剂的安全性评价
本实施例以小鼠作为实验动物，采用灌胃试验的方法，评价枯草芽孢杆菌的安全性，具体方法如下：
1.实施例5方法制得的枯草芽孢杆菌菌剂，经平板计数测定，其枯草芽孢杆菌AH02菌数为5×109cfu/g。
2.选取8周龄左右的小鼠72只，随机分为4组(A组为对照组灌服无菌生理盐水，B组为高剂量组按照5×109cfu/只的量灌服菌液，C组为中剂量组按照5×108cfu/只的量灌服菌液，D组为低剂量组按照5×107cfu/只的量灌服菌液)，每组3个重复，每个重复6只鼠。
3.每天上午九点灌胃一次，连续灌服21天。
实验鼠房控制温度湿度恒定，自然光照，小鼠自由采食、饮水，每7天清扫鼠笼一次。实验过程中，每天观察并记录小鼠的状态，存活情况，有无临床异常症状等。
检测指标：
(1)于实验结束当天采用心脏取血的方式，取得实验小鼠血液样品，经静止离心后获得血清，用于检测血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等血液生化指标。
(2)取完整的心、肝、脾、肾(双侧)称湿重，分别计算心脏指数＝(心脏湿重/体重)×100％、肝脏指数＝(肝脏湿重/体重)×100％、脾脏指数＝(脾脏湿重/体重)×100％、肾脏指数＝(肾脏湿重/体重)×100％。
表1不同处理组小鼠存活情况
从表1可以看出，使用枯草芽孢杆菌AH02给小鼠灌胃21天后，实验各处理组小鼠均存活，说明上述枯草芽孢杆菌对动物安全。
表2不同处理组小鼠的脏器系数
| A组 | B组 | C组 | D组 | |
| 心脏 | 0.59 | 0.61 | 0.68 | 0.65 |
| 肝脏 | 5.58 | 5.32 | 5.26 | 5.49 |
| 脾脏 | 0.41 | 0.43 | 0.41 | 0.40 |
| 肾脏 | 1.23 | 1.29 | 1.37 | 1.31 |
从表2可以看出，处理组小鼠的脏器指数与对照组相比没有明显变化，说明上述枯草芽孢杆菌没有造成小鼠各脏器异常。
利用生化分析仪检测小鼠血清中白蛋白、总蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇、尿素、肿瘤细胞坏死因子等，结果均显示正常，说明本发明实施例5提供的枯草芽孢杆菌制剂对小鼠的生理指标不构成影响。
实施例7 枯草芽孢杆菌AH02 CGMCC No.18923制剂的应用
为验证本发明所得的枯草芽孢杆菌AH02在降解伏马毒素方面的作用，开展雏鸡饲养实验。具体实施方案如下：
将产伏马毒素的串珠镰刀菌接种于马铃薯-葡萄糖-琼脂(PAD)培养基中培养，然后将菌株接种于粉碎玉米中培养，培养条件26-28℃，培养时间10-12天，即得含有伏马毒素的玉米。
按照雏鸡饲养的营养需求，将含有伏马毒素的玉米添加到饲料里作为对照组，在此基础上另外加入0.2％枯草芽孢杆菌剂作为实验组。对照组与实验组分别取样用酶联免疫试剂盒测定伏马毒素含量。对照组与实验组的测定值分别为46ppm和42ppm。
将20只1日龄雏鸡随机分为2组，对照组实验组各10只。从7日龄开始试验，试验持续30天，自由采食，饮水充足。每天观察雏鸡精神状态，粪便及被毛情况。结果显示实验组雏鸡的日增重显著高于对照组雏鸡，说明本发明的枯草芽孢杆菌AH02具有在体内的益生作用并能在一定程度上抵御伏马毒素的危害。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 江苏澳华生物科技研究院有限公司
<120> 一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用
<130> KHP201110021.8
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1103
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gacgtgcggc gtgctataca tgcaagtcga gcggacagat gggagcttgc tccctgatgt 60
tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgcctg taagactggg ataactccgg 120
gaaaccgggg ctaataccgg atggttgttt gaaccgcatg gttcaaacat aaaaggtggc 180
ttcggctacc acttacagat ggacccgcgg cgcattagct agttggtgag gtaacggctc 240
accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300
cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360
cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt aaagctctgt tgttagggaa 420
gaacaagtac cgttcgaata gggcggtacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480
aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg aattattggg 540
cgtaaagggc tcgcaggcgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccccggc tcaaccgggg 600
agggtcattg gaaactgggg aacttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag 660
cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca ccagtggcga aggcgactct ctggtctgta 720
actgacgctg aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg atgagtgcta agtgttaggg ggtttccgcc ccttagtgct gcagctaacg 840
cattaagcac tccgcctggg gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg 900
ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960
gtcttgacat cctctgacaa tcctagagat aggacgtccc cttcgggggc agaatgacag 1020
gtggtgcatg gttgtcgtca gctccggtct ggaaagttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1080
cacccttgat cttattgcca cat 1103
Claims (7)
1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02，其16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，其保藏编号为CGMCC NO.18923。
2.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02的菌剂、饲料添加剂或动物饲料。
3.含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02的药物；所述药物为抑制伏马毒素的药物。
4.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02在降低食品或饲料中伏马毒素污染中的应用。
5.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02在制备饲料添加剂中的应用。
6.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02在提高饲料转化率中的应用。
7.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AH02在促进动物生长或提高动物体重中的应用。
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