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CN119894878A - 芳香酰胺类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

芳香酰胺类衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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CN119894878A
CN119894878A CN202380065871.9A CN202380065871A CN119894878A CN 119894878 A CN119894878 A CN 119894878A CN 202380065871 A CN202380065871 A CN 202380065871A CN 119894878 A CN119894878 A CN 119894878A
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CN202380065871.9A
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仇宗兴
曹海
彭记磊
汪泽峰
张盼盼
叶成
郭泽
徐代旺
周厚江
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Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Shanghai Aryl Pharmtech Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Shanghai Aryl Pharmtech Co Ltd
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Abstract

本发明涉及一种芳香酰胺类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的芳香酰胺类衍生物、其制备方法及其可药用的盐，以及它们作为治疗剂，特别是KIF18A抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

芳香酰胺类衍生物及其制备方法和用途 技术领域
本发明涉及一种芳香酰胺类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为KIF18A抑制剂的用途。
背景技术
驱动蛋白分子是以微管为轨道的马达蛋白，在细胞器迁移、组织器官发育、信号传导、有丝分裂、减数分裂等过程中发挥了重要作用。驱动蛋白kinesin-8家族的多种微管结合蛋白(microtubule-associatedprotein，MAP)通过影响微管的聚合和解聚行使着调控微管动态不稳定性的功能。KIF18A是kinesin-8家族的一员，能够以微管为轨道向正极运动，倾向结合较长的微管，其活性具有长度依赖性并影响着纺锤体的长度，可保障姐妹染色体整列的及时顺利完成，且在不同物种中的功能非常相似，具有保守性。
KIF18A是一个以微管为轨道向微管正极末端运动的分子马达蛋白，通过影响微管末端动态不稳定性调控染色体的中板集合，在有丝分裂期发挥功能。在有丝分裂后期，该蛋白被泛素化降解，保证有丝分裂过程中染色体的精确分离，促使有丝分裂及胞质分裂的顺利完成。有丝分裂早期，KIF18A在靠近动粒的微管正极末端定位是其功能发挥的必要条件，定位不仅依赖其N端的马达活性，具有微管结合能力的尾部结构域也起到关键作用。KIF18A还受到可逆的蛋白磷酸化/去磷酸化修饰，但该蛋白翻译后修饰如何调控KIF18A的功能尚缺乏系统研究。雌激素受体ERɑ可与KIF18A结合并促进其转录，但KIF18A是否还受其他转录因子的调控仍不清楚，因此KIF18A的基因转录调控机制研究尚待深入。在减数分裂过程中，缺少KIF18A的细胞将不能完成减数分裂，进而会导致雄性动物精子形成障碍和睾丸发育不良。
研究发现，KIF18A蛋白在多种癌症中均有高表达，包括但不限于肝细胞癌、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤等，这预示着KIF18A与肿瘤的发生、发展密切相关，可成为多种肿瘤分子诊断和治疗的靶标。KIF18A的表达与临床大肠癌发展有关。研究发现，KIF18A能够诱导Akt磷酸化，小鼠中敲除KIF18A可明显促进细胞凋亡，推测KIF18A能通过激活PI3K-Akt信号通路促进结直肠癌的发生发展。KIF18A在人乳腺癌细胞中也高表达，且其过表达与乳腺肿瘤的分级、迁移和预后有关。对乳腺癌细胞进行研究，发现过表达KIF18A会导致多核细胞的产生，低表达在体内外则均能大幅度减弱细胞增生能力，这是通过KIF18A在微管末端稳定微管以及PI3K-Akt信号转导途径的失活而诱导了细胞凋亡。另外，肺腺癌中KIF18A在转录和翻译水平均上调，KIF18A的异常表达与临床病理恶性程度相关。在肺腺癌中能够观察到KIF18基因突变，其表达也受DNA拷贝数的 调控，KIF18A基因敲除能够抑制肺腺癌细胞的体内和体外增殖，诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞。与KIF18A同时高表达的基因都集中在细胞周期信号通路中，因此深入研究KIF18A在肿瘤中的作用机制具有重要临床意义。
针对KIF18A靶点的抑制剂还没有新款药物上市，目前只有美国安进公司的AMG-650这一款化合物进入临床Ⅰ期。作为比较前沿的研究方向，KIF18A靶点的相关研究还有巨大的探索空间，很有必要继续研究其作用机制和开发新的抑制剂。
发明内容
针对上述的技术问题，本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
其中：
环A选自5～7元杂环基、C3-C6环烷基、5～7元芳基或5～7元杂芳基；
X1、X2、X3各自独立地选自CRa或N原子，且X1、X2、X3中至多有两个原子同时为N原子；
Ra选自氢原子、卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
L1选自键或C1-C6亚烷基，其中所述的亚烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基或烷氧基的取代基所取代，且其中所述的亚烷基的一个或多个亚甲基任选被一个或多个O、S(O)r、C(O)或NRb所替代；其中所述的“一个或多个亚甲基”包括C1-C6亚烷基中的任意一个，多个或全部的亚甲基。
L2选自
Rb选自氢原子或烷基；
R1选自氢原子、氰基、卤素、烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝 基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R2相同或不同，各自独立地选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
R3各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基或烷氧基的取代基所取代；R3优选为氢原子；
R4相同或不同，各自独立地选自氰基、卤素、烷基、烯基、炔基、羟基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自RA的取代基所取代；
RA选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、OR8、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自氰基、卤素、烷基、羟基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-；
R5各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
m为0，1或2；m优选为0；
n为0，1，2，3或4；且
r各自独立地为0，1或2。
本发明的优选方案，一种通式(I)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
环A、R1、R3、R4、L1和n的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自：
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
L1选自键或C1-C6亚烷基，其中所述的亚烷基任选进一步被一个或多个羟基取代，且其中所述的亚烷基的一个或多个亚甲基任选被一个或多个O、S(O)r、C(O)或NRb所替代；
r为2；
Rb选自氢原子或甲基。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中L1选自键、-NHSO2CH2CH2-、-NHSO2CH2CH2O-、-NHSO2CH2CH2NH-、-SO2NHCH2CH2-、-SO2-、-CH2SO2-、-NHSO2-、-SO2NH-、-NHC(CH3)2CH2-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)NHC(CH3)2CH2-、-C(O)N(CH3)CH2CH2-、-C(CH3)(OH)CH2-、-NHSO2CH(CH3)CH2-、-SO2NHC(CH3)2CH2-、-C(O)NH-、-NHCH2CH2或-CH2SO2CH2CH2-。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自氢原子、羟基、烷基、杂环基、环烷基或杂芳基，其中所述的烷基、杂环基、环烷基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基或烷基的取代基所取代。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中选自
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3为氢原子。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R4相同或不同，各自独立地选自卤素、烷基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5或-NR6R7；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个RA取代；
或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-。
RA选自卤素、氰基、烷基、环烷基、杂环基、-OR8、-NR9R10，其中所述的烷基、环烷基、杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、卤代烷基的取代基所取代；
R5各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、卤代环烷基、杂环基或卤代杂环基；
R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、烷氧基、环烷基、卤代环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，
R8各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、卤代环烷基、杂环基或卤代杂环基；
R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基。
本发明的优选方案，一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构 体或其可药用的盐，其中R4选自甲基、二氟甲基、环丙基、
或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-。
在本发明的优选方案中，通式所述的化合物选自：
或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐。
注：如果在画出的结构和给出的该结构的名称之间有差异，则画出的结构将给予更大的权重。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备KIF18A抑制剂中的用途。
本发明还提供一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗由KIF18A介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由KIF18A介导的疾病优选癌症；其中所述的由KIF18A介导的疾病选自肝细胞癌、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、大肠癌和肺腺癌。
本发明进一步提供一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
本发明提供一种通式(I)、(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或其药物组合物在制备治疗肝细胞癌、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、大肠癌和肺腺癌的药物中的用途。
发明的详细说明
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指包括C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C10烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“亚烷基”指饱和C1-C20直链或者带有支链的脂肪烃基团，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，优选为C1-C10亚烷基，更优选为C1-C6亚烷基。亚烷基基团的实施例包括但不限于亚甲基、1,1-亚乙基、1,2-亚乙基、1,1-亚丙基、1,2-亚丙基、1,3-亚丙基、1,4-亚丁基等。亚烷基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指非芳香性环状烷基，其中一个或多个成环的原子是碳原子，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环，优选具有5至7元单环或7至10元双环或三环。“环烷基”的实例包括但不限于环丙基、环戊基、环丁基。环烷基可以是取代或未取代的。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：螺[4.5]癸基、螺[4.4]壬基、螺[3.5]壬基、螺[2.4]庚基。
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：二环[3.1.0]己基、二环[3.2.0]庚-1-烯基、二环[3.2.0]庚基、十氢化萘基或十四氢菲基。
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全 共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：(1s,4s)-二环[2.2.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、(1s,5s)-二环o[3.3.1]壬基、二环[2.2.2]辛基、(1r,5r)-二环[3.3.2]癸基。
“杂环基”、“杂环烷基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，都是指非芳香性杂环基，其中一个或多个成环的原子自氮、氧或S(O)t(其中t选自0、1或2)的杂原子，包括单环、多环、稠环、桥环和螺环。优选具有5至7元单环或7至10元双环或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基、氧杂环丁烷基、硫代吗啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、1，1-二氧代-硫代吗啉基、哌啶基、2-氧代-哌啶基、吡咯烷基、2-氧代-吡咯烷基、哌嗪-2-酮、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、哌嗪基、六氢嘧啶、
杂环基可以是取代或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)t(其中t选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：1,7-二氧杂螺[4.5]癸基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬基、7-氧杂螺[3.5]壬基、5-氧杂螺[2.4]庚基、
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此共用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)t(其中t选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢-1H-异吲哚基，3- 氮杂二环[3.1.0]己基，八氢苯并[b][1,4]二噁英(dioxine)。
“桥杂环基”指5至14元，5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)t(其中t选自0、1或2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：2-氮杂二环[2.2.1]庚基，2-氮杂二环[2.2.2]辛基、2-氮杂二环[3.3.2]癸基。
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括单环或双环的芳基，比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为C6-C10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为萘基。芳基可以是取代或未取代的。
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或8至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基、吡啶基、2-氧代-1，2-二氢吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四氮唑基、噻唑基、异噻唑基、1，2，3-噻二唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、1，3-二氧代-异吲哚基、喹啉基、吲唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、1H-1,2,4-三唑基、4H-1,2,4-三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪-2(1H)-酮基、嘧啶-4(3H)-酮基、哒嗪-3(2H)-酮基、1H-吲哚基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、异喹啉基、喹唑啉基、2H-异吲哚基、呋喃[3,2-b]吡啶基、呋喃[2,3-c]吡啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、2H-吡咯并[3,4-c]吡啶基、 杂芳基可以是取代或未取代的。
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“硝基”指-NO2基团。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“苄基”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“羟烷基”指羟基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“氨烷基”指氨基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤代烷基”指卤素取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤代烷氧基”指卤素取代的烷氧基，其中烷氧基的定义如上所述。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“BOC”指叔丁氧基羰基。
“Bn”指苄基。
“THP”指2-四氢吡喃基。
“TFA”指三氟醋酸。
“Ts”指对甲苯磺酰基。
“离去基团(leaving group)”，或称离去基，在化学反应中从一较大分子中脱离的原子或官能基，是亲核取代反应与消除反应中应用的术语。在亲核取代反应中，被亲核试剂进攻的反应物称为底物(substrate)，而从底物分子中带着一对电子断裂出去的原子或原子团称为离去基团。易接受电子、承受负电荷能力强的基团是好的离去基团。当离去基团共轭酸的pKa越小，离去基团越容易从其他分子中脱离。原因是因为当其共轭酸的pKa越小，相应离去基团不需和其他原子结合，以阴离子(或电中性离去基团)的形式存在的趋势也就增强。常见的离去基团包括但不限于卤素、甲磺酰基、-OTs或-OH。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5的取代基所取代；
R5各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、 -C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；r选自0、1或2；
本发明化合物可以含有不对称中心或手性中心，因此以不同的立体异构体形式存在。所预期的是，本发明化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体(atropisomer)和几何(构象)异构体及它们的混合物，如外消旋体混合物，均在本发明的范围内。
除非另外指出，本发明描述的结构还包括此结构的所有异构体(如，非对映异构体、对映异构体和阻转异构体和几何(构象)异构体形式；例如，各不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此本发明化合物的单个立体异构体以及对映体混合物、非对映异构体混合物和几何(构象)异构体混合物均在本发明范围内。
“可药用的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。通式(I)所表示的化合物的可药用的盐可以为金属盐、与合适的酸形成的胺盐。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐的制备方法，所述方法包括：
通式(IA)化合物与(IB)化合物发生缩合反应，任选进一步进行取代反应，得到通式(I)化合物
其中：
L2选自
Y选自羟基或氯；
环A、X1、X2、X3、L1、R1～R2、m和n的定义如通式(I)中所述。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
实施例
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式可为ESI或APCI。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
在下列实施例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，广赞化工科技有限公司和景颜化工科技有限公司等处购买。
CD3OD：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜。
氩气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
对化合物进行纯化，采用硅胶柱层析法和反相柱层析法，其中洗脱剂体系选自：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；D：三氟乙酸水溶液和乙腈体系。其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
实施例1
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺
第一步
6-nitro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazole
6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑
25℃下,向5-硝基-1H-苯并咪唑1a(2.50g,15.3mmol,市售)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液中加入碳酸铯(9.99g,30.7mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(5.34g,23.0 mmol)。25℃下反应2小时。将混合物倒入水(300mL)中并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑1c-1和5-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑1c-2的混合物(3.30g)，产率：88％。
MS m/z(ESI):246.0[M+1]
第二步
1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-6-amine
1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺
室温下，将6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑1c-1和5-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑1c-2的混合物(3.30g,13.5mmol)的乙醇(30mL)溶液加入10％的钯碳(1.50g,14.1mmol)，氢气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物过滤后减压浓缩，得到粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺1d-1(600mg)，产率：21％；1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-胺1d-2(1.00g)，产率：35％。
MS m/z(ESI):216.1[M+1]
第三步
4-bromo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)benzamide
4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺
室温下，将1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-胺1d-1(100mg,0.460mmol)，4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(216mg,0.700mmol，采用公知的方法“专利WO-2020132648”制备而得)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶解，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(134mg,0.700mmol)，N-甲基吗啡啉(70.5mg,0.700mmol)和1-羟基苯并三唑(94.2mg,0.700mmol)加入上述反应液，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺1f(120mg)，产率：51％。
MS m/z(ESI):507.0/509.0[M+1]
第四步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2，2，2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺1f(120mg,0.240mmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(59.2mg,0.470mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，将磷酸钾(100mg,0.473mmol),碘化亚铜(52.5mg,0.240mmol)和反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(16.8mg,0.120mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯(60mL)提取。将有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯甲酰胺1(37.0mg)，产率：28％。
MS m/z(ESI):550.2[M-1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),8.25(d,J＝1.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),7.27(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H),6.89(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),5.19(m,2H),3.62(m,2H),3.18(s,2H),2.85(m,4H),1.39(m,4H),0.20(s,4H)
实施例2
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺
第一步
4-bromo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)benzamide
4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺
室温下，将1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-胺1d-2(100mg,0.460mmol)，4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(216.2mg,0.700mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)， 将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(134mg,0.700mmol)，N-甲基吗啡啉(70.5mg,0.700mmol)和1-羟基苯并三唑(94.2mg,0.700mmol)加入上述反应液，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)提取。合并有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺2a(120mg)，产率：51％。
MS m/z(ESI):507.0/509.0[M+1]
第二步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺2a(120mg,0.240mmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(59.2mg,0.470mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，将磷酸钾(100mg,0.473mmol)，碘化亚铜(52.5mg,0.240mmol)和反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(16.8mg,0.120mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，用乙酸乙酯(60mL)萃取。将有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干燥，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)苯甲酰胺2(39mg)，产率：30％。
MS m/z(ESI):552.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.57(s,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝2.0Hz,1H),7.84(d,J＝8.6Hz,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.62(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.02(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),5.35(m,2H),3.76(m,2H),3.33(m,2H),3.00(m,4H),1.53(m,4H),0.35(s,4H).
实施例3
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
第一步
methyl 2-(bromomethyl)-4-nitrobenzoate
2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯
将2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯3a(2.0g,10.25mmol)溶解于1,2-二氯乙烷(10mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(2.19g,12.30mmol)，过氧化苯甲酰(248.22mg,1.02mmol)，100℃下搅拌20小时。反应降至室温后浓缩，加入乙酸乙酯(5mL)和石油醚(15mL)，析出固体后过滤，滤饼干燥得到2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯3b(2.6g)，产率：92.58％。
MS m/z(ESI):273.9[M+1]
第二步
5-nitro-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-1-one
5-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮
室温下，将2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯3b(4.10g,14.9mmol)溶于甲醇(50mL)，依次加入三乙胺(6.06g,59.8mmol)和2,2,2-三氟乙胺3c(1.78g,17.9mmol,市售)，反应在闷罐中于80℃反应18小时得到棕色溶液。将冷却后的反应液旋干，之后倒入水中(80mL)，用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到5-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮3d(3.80g)，产率：97％。粗品直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):261.1[M+1]
第三步
5-amino-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-1-one
5-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮
室温下，将5-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮3d(3.80g,14.6mmol)溶于乙醇(50 mL)和水(10mL)中，依次加入铁粉(3.26g,58.4mmol)和氯化铵(3.18g,58.4mmol)，反应于84℃反应3小时得到黑色溶液。LCMS检测原料反应完全，产物生成。将冷却后的反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝9后过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，合并的滤液用水(100mL)稀释，乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮3e(1.00g)，产率：29％。
MS m/z(ESI):231.0[M+1]
第四步
2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-amine
2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-胺
0℃下,向5-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮3e(250mg,1.09mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中滴入硼烷的四氢呋喃溶液(1M,5.43mmol,5.43mL)。65℃下反应18小时。将混合物减压浓缩，得到粗产物用乙醇(10mL)溶解，85℃下搅拌2小时后将混合物减压浓缩，得到2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-胺3f(200mg)，产率：85％。
MS m/z(ESI):217.1[M+1]
第五步
4-bromo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)benzamide
4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
25℃下，将2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-胺3f(200mg,0.925mmol)，4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(430mg,1.39mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，将(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(724mg,1.39mmol)，N,N-二异丙基乙胺(478mg,3.70mmol)加入上述反应液，65℃下反应18小时。将混合物倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺3g(180mg)，产率：38％。
MS m/z(ESI):508.0/510.0[M+1]
第六步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺3g(180mg,0.354mmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(88.6mg,0.708mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，将磷酸钾(150mg,0.708mmol)，碘化亚铜(78.6mg,0.354mmol)和反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(25.2mg,0.177mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下 反应18小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(60mL)萃取。将有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)苯甲酰胺3(125mg)，产率：64％。
MS m/z(ESI):553.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.42(s,1H),10.08(s,1H),7.85(m,2H),7.46(m,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),7.02(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),4.96(s,1H),4.09(d,J＝17.0Hz,4H),3.76(t,J＝6.6Hz,2H),3.56(m,2H),3.32(t,J＝6.6Hz,2H),2.97(t,J＝5.4Hz,4H),1.51(t,J＝5.4Hz,4H),0.35(s,4H).
实施例4
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
4-bromo-N-(1-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将5-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮3e(200mg,0.869mmol)，4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(296mg,0.956mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，将(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(907mg,1.74mmol)，N,N-二异丙基乙胺(449mg,3.48mmol)加入上述反应液，65℃下反应18小时。将混合物倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟 乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺4a(230mg)，产率：51％。
MS m/z(ESI):552.0/524.0[M+1]
第二步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺4a(100mg,0.190mmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(47.9mg,0.383mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(4mL)，将磷酸钾(81.3mg,0.383mmol)，碘化亚铜(42.5mg,0.191mmol)和反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(13.6mg,0.0957mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(60mL)萃取。将有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺4(40.0mg)，产率：37％。
MS m/z(ESI):567.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),10.12(s,1H),8.26(s,1H),7.78(m,2H),7.70(m,1H),7.15(d,J＝2.2Hz,1H),7.02(m,1H),4.99(s,1H),4.64(s,2H),4.37(q,J＝9.8Hz,2H),3.76(m,2H),3.32(s,2H),2.99(t,J＝5.6Hz,4H),1.50(s,4H),0.34(s,4H)
实施例5
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
methyl 2-(bromomethyl)-5-nitrobenzoate
2-(溴甲基)-5-硝基苯甲酸甲酯
室温下，将2-甲基-5-硝基苯甲酸甲酯5a(2.00g,10.3mmol)加入四氯化碳(20mL)中，将N-溴代丁二酰亚胺(2.74g,15.4mmol)和偶氮二异丁腈(168mg,1.02mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，80℃下反应18小时。反应液过滤，减压浓缩至干燥，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(溴甲基)-5-硝基苯甲酸甲酯5b(1.80g)，产率：64％。MS m/z(ESI):274.2[M+1]
第二步
6-nitro-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-1-one
6-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮
室温下，将2-(溴甲基)-5-硝基苯甲酸甲酯5b(1.80g,6.57mmol)加入无水甲醇(20mL)中，加入三乙胺(1.99g,19.7mmol)和2,2,2-三氟乙胺3c(1.95g,19.7mmol)，氮气置换三次，70℃下反应18小时。将反应液过滤，减压浓缩至干燥，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮5c(500mg)，产率：29％。
MS m/z(ESI):261.0[M+1]
第三步
6-amino-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-1-one
6-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮
室温下，将6-硝基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮5c(500mg,1.92mmol)加入无水甲醇(10mL)中，将10％的钯碳(102mg,0.961mmol)加入反应液中，氢气置换三次，25℃下反应2小时。反应液过滤，用无水甲醇(3mL×3)洗涤滤饼，收集滤液减压浓缩，得到6-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮5d(400mg)，产率：90.4％。
MS m/z(ESI):231.0[M+1]
第四步
4-bromo-N-(3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将6-氨基-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-1-酮5d(200mg,0.869mmol)和4-溴 -2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(296mg,0.956mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，将1-羟基苯并三唑(176mg,1.30mmol)，N-甲基吗啡(132mg,1.30mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(250mg,1.30mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，60℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)提取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干燥，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺5e(210mg)，产率：46.3％。
MS m/z(ESI):522.2[M+1]
第五步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(3-oxo-2-(2,2,2-trifluoroethyl)isoindolin-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺5e(100mg,0.191mmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(43.0mg,0.191mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，将碘化亚铜(48.0mg,0.383μmol)，反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(14mg,0.096mmol)和磷酸钾(81.0mg,0.383mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)提取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干燥，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)异吲哚啉-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺5(30.0mg)，产率：27.7％。
MS m/z(ESI):567.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),8.32(d,J＝2.0Hz,1H),7.90-7.83(m,1H),7.77(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.14-7.08(m,1H),7.03-6.96(m,1H),4.59(s,2H),4.45-4.35(m,2H),3.75(t,J＝6.4Hz,2H),3.32-3.28(m,2H),3.02-2.93(m,4H),1.48(s,4H),0.33(s,4H).
实施例6
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)benzo[d]isoxazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
2-hydroxy-5-nitrobenzoic acid
2-羟基-5-硝基苯甲酸
向2-羟基-5-硝基苯甲酸甲酯6a(5.50g,27.9mmol)的水(15mL)、四氢呋喃(15mL)和甲醇(15mL)溶液中加入氢氧化锂(1.34g,55.8mmol)，将混合物在30℃下搅拌4小时。形成无色溶液。将混合物减压浓缩至干以除去甲醇和四氢呋喃，溶液用盐酸(4M)调节pH＝2并过滤。滤饼用水(20mL×3)洗涤，滤液减压浓缩至干，得到2-羟基-5-硝基苯甲酸6b(4.20g)，产率：82％。粗产物直接用于下一步。
MS m/z(ESI):182.0(M+1)
第二步
2-hydroxy-5-nitrobenzoyl chloride
2-羟基-5-硝基苯甲酰氯
在0℃下，向2-羟基-5-硝基苯甲酸6b(4.00g,21.8mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中加入草酰氯(13.9g,109mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(159.66mg,2.18mmol)，混合物在0℃下搅拌1小时得到无色溶液。将混合物减压浓缩至干，得到2-羟基-5-硝基苯甲酰氯6c(4.40g)，产率：99％。粗产物无需进一步纯化，直接用于下一步。
第三步
N,2-dihydroxy-5-nitrobenzamide
N,2-二羟基-5-硝基苯甲酰胺
在0℃下，向羟胺(42.8g,648mmol,50％纯度)水溶液中加入2-羟基-5-硝基苯甲酰氯6c(4.40g,21.8mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液，将反应液在30℃搅拌1小时，形成黄色悬浮 液。过滤得到的粗产物用四氢呋喃(30mL)打浆并过滤，滤饼用乙酸乙酯(30mL)洗涤，然后减压干燥，得到N,2-二羟基-5-硝基苯甲酰胺6d(4.70g)，产率：85％。
MS m/z(ESI):197.0(M-1)
第四步
5-nitrobenzo[d]isoxazol-3(2H)-one
5-硝基苯并[d]异噁唑-3(2H)-酮
向N,2-二羟基-5-硝基苯甲酰胺6d(4.70g,23.7mmol)的四氢呋喃(45mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(7.79g,94.9mmol)，将混合物在65℃下搅拌1小时后得到黄色悬浊液。将反应液用盐酸(1M)调节pH至5并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-硝基苯并[d]异噁唑-3(2H)-酮6e(2.50g)，产率：58％。
MS m/z(ESI):179.0(M-1)
第五步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-5-nitrobenzo[d]isoxazole
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯并[d]异噁唑
向5-硝基苯并[d]异噁唑-3(2H)-酮6e(500mg,2.78mmol)和4,4-二氟哌啶盐酸盐6f(370mg,3.05mmol,市售)在四氢呋喃(30mL)的溶液中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.69g,11.1mmol)和苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(1.84g,4.16mmol)，反应液在30℃搅拌16小时，形成棕色悬浮液。将混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯并[d]异噁唑6g(490mg)，产率：61.88％。
MS m/z(ESI):284.0(M+1)
第六步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)benzo[d]isoxazol-5-amine
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-胺
向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基苯并[d]异噁唑6g(490mg,1.72mmol)的四氢呋喃(10mL)和甲醇(40mL)的溶液中加入10％的钯碳(91.40mg,85.89μmol)，将所得反应液用氢气置换3次，并在氢气氛下30℃搅拌16小时，形成黑色悬浮液。过滤混合物并用甲醇(100mL)洗涤固体，将滤液减压浓缩至干，得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-胺6h(420mg)，产率：95％。
MS m/z(ESI):254.1(M+1)
第七步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)benzo[d]isoxazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-胺6h(130mg,0.513mmol)、4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸6i(191mg,0.539mmol,采用公知的方法“专利WO-2020132648”制备而得)和N,N-二异丙基乙胺(1329mg,1.03mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2.78mg,0.770mmol)，30℃下搅拌16小时，形成棕色悬浊液。将混合物倒入水(30mL)中并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯并[d]异噁唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺6(29.3mg)，产率：9％。
MS m/z(ESI):590.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),10.10(s,1H),8.50(d,J＝1.76Hz,1H),7.85–7.77m,2H),7.66(d,J＝9.2Hz,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.02(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.98(s,1H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.68–3.56(m,4H),3.33-3.29(m,2H),3.05–2.93(m,4H),2.26-2.11(m,4H),1.51(s,4H),0.34(s,4H).
实施例7
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
3-bromo-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-溴-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
冰浴下，将氢化钠(717mg,16.5mmol,60％纯度)加入到3-溴-5-硝基吲唑7a(2.00g,8.26mmol,市售)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，反应液在冰浴下搅拌半小时后，加入碘甲烷(1.76g,12.4mmol)。反应液在室温下反应4小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(100mL)淬灭，乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产品用乙酸乙酯(30mL)打浆，得到3-溴-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7b(2.00g)，产率：95％。
MS m/z(ESI):255.8[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝1.8Hz,1H),8.34–8.27(m,1H),7.96(d,J＝9.2Hz,1H),4.12(s,3H)
第二步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
室温下，将醋酸钯(158mg,0.70mmol)，R-(+)-1,1'-联萘-2,2’-双二苯膦(438mg,0.70mmol)和碳酸铯(6.87g,21.1mmol)加入至3-溴-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7b(1.8g,7.03mmol)和4,4-二氟哌啶盐酸盐6f(1.28g,10.5mmol)的甲苯(30mL)溶液中,氮气置换三次，100℃下反应16小时。混合物过滤，滤饼用乙酸乙酯(1500mL)冲洗，滤液减压浓缩。粗产品用乙酸乙酯(30mL)打浆，得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7c(1.10g)，产率：53％。
MS m/z(ESI):297.0[M+1]
第三步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
室温下，将钯碳(100.00mg,10％)加入至3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7c(1g,3.38mmol)的甲醇(50mL)溶液中,用氢气球置换气体三次，然后室温下反应4个小时。将反应液过滤，滤饼用甲醇(300mL)冲洗，滤液减压浓缩。粗产物直接用于下一步不 做更多处理。得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺7d(850mg)，产率：95％。MS m/z(ESI):267.0[M+1]
第四步
4-bromo-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(857mg,2.25mmol)和N,N-二异丙基乙胺(388mg,3.00mmol)加入至3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺7d(400mg,1.50mmol)和4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(699mg,2.25mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中。反应液在65℃下反应16小时。将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺7f(650mg)，产率：77％。MS m/z(ESI):560.2[M+1]
第五步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(89.6mg,0.72mmol)，碘化亚铜(68.2mg,0.36mmol)，磷酸钾(152mg,0.72mmol)，反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(25.5mg,0.18mmol)加入到4-溴-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺7f(200mg,0.36mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，氮气置换三次，90℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺7(84mg)，产率：39％。
MS m/z(ESI):603.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),10.08(br s,1H),8.32(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.65–7.57(m,1H),7.52(d,J＝9.2Hz,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.07–6.98(m,1H),4.96(s,1H),3.84(s,3H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.52–3.40(m,4H),3.31-3.32(m,2H),3.06–2.90(m,4H),2.24–2.08(m,4H),1.52(s,4H),0.36(s,4H).
实施例8
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺7d(615.05mg,2.31mmol)和2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(750mg,2.10mmol,采用公知的方法“专利WO-2020132648”制备而得)溶解于乙腈(2mL)，加入1-甲基咪唑(517.19mg,6.30mmol)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(1.77g,6.30mmol)，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全，过滤得到N-(3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺8b(0.74g)，产率58.21％。
MS m/z(ESI):605.2.2[M+1]
第二步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺8b(100mg,165.16μmol)和乙磺酰胺8c(36.05mg,330.33μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，加入2-(甲氨基)乙酸(14.7mg,165.16μmol)，磷酸三钾三水合物(219.93mg,825.82μmol)和碘化亚铜(15.73mg,82.58μmol)，氩气置换，升温到110℃，搅拌6小时，质谱显示反应完全，向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并的 有机相减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺8(65.7mg)，产率67.53％。
MS m/z(ESI):587.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),10.09(s,1H),8.31(d,J＝1.7Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(dd,J＝9.0,1.8Hz,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,1H),7.17(d,J＝2.1Hz,1H),7.03(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),3.86(s,3H),3.46(t,J＝5.7Hz,4H),3.19(q,J＝7.3Hz,2H),2.98(t,J＝5.3Hz,4H),2.16(tt,J＝13.7,5.5Hz,4H),1.61–1.45(m,4H),1.21(t,J＝7.3Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例9
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-methoxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-甲氧基乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
tert-butyl
(4-((3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamoyl)-3-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)phenyl)carbamate
4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺8b(300mg,495.49μmol)和氨基甲酸叔丁酯9a(116.09mg,990.98μmol)溶解于甲苯(10mL)，加入二环己基(2,4,6-三(1-甲基乙基)苯基)膦(47.24mg,99.10μmol)，碳酸铯(484.32mg,1.49mmol)和双(二亚芐基丙酮)钯(45.37mg,49.55μmol)，氩气置换3次，升温到100℃，搅拌16小时，质谱显示反应完全，降到室温，向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干 燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析(洗脱剂：A体系)纯化，得到4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯9b(230.4mg)，产率77.02％。
MS m/z(ESI):595.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),9.66(s,1H),8.30(d,J＝1.6Hz,1H),7.86(d,J＝8.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.62(dd,J＝9.1,1.7Hz,1H),7.54(d,J＝9.0Hz,1H),7.25(d,J＝8.6Hz,1H),3.86(s,3H),3.46(t,J＝5.6Hz,4H),2.98(t,J＝5.3Hz,4H),2.15(dq,J＝13.6,6.7,5.3Hz,4H),1.56(s,4H),1.50(s,9H),0.37(s,4H).
第二步
4-amino-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-氨基-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯9b(220mg,369.94μmol)被溶解于三氟乙酸(8.89g,77.94mmol,5.79mL)中，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全，反应液浓缩后加水(20mL)和乙酸乙酯(30mL)，饱和碳酸氢钠溶液调pH＝8-9，分离有机相，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到4-氨基-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺9c(220mg)，产率96.25％。
MS m/z(ESI):495.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,1H),7.53(d,J＝8.9Hz,1H),6.76(s,1H),6.55(s,1H),3.86(s,3H),3.46(t,J＝5.7Hz,4H),3.16(s,4H),2.16(tt,J＝13.7,5.5Hz,4H),1.62(s,4H),0.42(s,4H).
第三步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-methoxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-甲氧基乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将4-氨基-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺9c(34mg,68.75μmol)溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三乙胺(13.91mg,137.49μmol)，滴加2-甲氧基乙基磺酰氯9d(26.16mg,185.0μmol)，室温搅拌18小时，质谱显示反应完全。向反应液中加入水(30mL)，二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，浓缩后，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-甲氧基乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺9(5.1mg)，产率：11.97％。
MS m/z(ESI):617.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),10.14(s,1H),8.30(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(d,J＝9.1Hz,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,1H),7.16(s,1H),7.03(d,J＝8.6Hz,1H),3.86(s,3H),3.68(t,J＝5.9Hz,2H),3.45(m,6H),3.18(s,3H),2.99(t,J＝5.2Hz,4H),2.16(tt,J＝13.8,5.4Hz,4H),1.53(t,J＝5.2Hz,4H),0.34(s,4H).
实施例10
4-((2-aminoethyl)sulfonamido)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-氨乙基)磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-4-(vinylsulfonamido)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-(乙烯基磺酰胺基)苯甲酰胺
将4-氨基-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺9c(800mg,1.62mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，加入三乙胺(327.35mg,3.24mmol)，室温滴加2-氯乙基磺酰氯10a(316.44mg,1.94mmol,市售)，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全。向反应液中加入水(30mL)，二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠洗涤，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-(乙烯基磺酰胺基)苯甲酰胺10a(872mg)，产率：92.20％。
MS m/z(ESI):585.3[M+1]
第二步
4-((2-aminoethyl)sulfonamido)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-氨乙基)磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-(乙烯基磺酰胺基)苯甲酰胺10a(100mg,171.03μmol)溶解在氨水(0.4M,10mL)中，升温到60℃，搅拌18小时，质谱检测反应完全，反应液减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-氨乙基)磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺10(15.0mg)，产率：10.61％。
MS m/z(ESI):602.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),10.46(s,1H),8.31(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,3H),7.61(d,J＝9.0Hz,1H),7.54(d,J＝9.0Hz,1H),7.15(s,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),3.86(s,3H),3.47(t,J＝9.8Hz,6H),3.23–3.10(m,2H),2.99(d,J＝5.5Hz,4H),2.16(tt,J＝13.8,5.4Hz,4H),1.53(d,J＝5.7Hz,4H),0.35(s,4H).
实施例11
4-(azetidine-3-sulfonamido)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(氮杂环丁烷-3-磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
tert-butyl 3-(acetylthio)azetidine-1-carboxylate
3-(乙酰硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯11a(0.5g,1.77mmol)和碳酸铯(1.15g,3.53mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入乙硫代硫酸11b(268.87mg,3.53mmol)，升温到70℃，搅拌2小时。质谱显示反应完全，向反应液中加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(乙酰硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯11c(0.27g)，产率：66.09％。
MS m/z(ESI):254.1[M+1]
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.36(t,J＝8.7Hz,2H),4.21–4.09(m,1H),3.81(dd,J＝9.3,5.5Hz,2H),2.33(s,3H),1.43(s,9H).
第二步
tert-butyl 3-(chlorosulfonyl)azetidine-1-carboxylate
3-(氯磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将3-(乙酰硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯11c(260mg,1.12mmol)溶解于水(1mL)和乙酸(10mL)中，加入N-氯代丁二酰亚胺(450.27mg,3.37mmol)，室温搅拌反应1小时，质谱显示反应完全。加水(20mL)，二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压过滤，滤液直接用于下一步。
第三步
tert-butyl 3-sulfamoylazetidine-1-carboxylate
3-氨磺吡啶-1-羧酸叔丁酯
将上述溶液滴加到氨水(7.0M,8.03mL)中，室温搅拌1小时，减压浓缩，加二氯甲烷(20mL)，搅拌30分钟，过滤，滤液浓缩后将粗品溶解于乙酸乙酯(50mL)，水(20mL)，用2M氢氧化钠溶液调节pH至9-10，分层，水相用乙酸乙酯(20mL)提取，合并有机相，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到3-氨磺吡啶-1-羧酸叔丁酯11e(36mg)，产率：13.55％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.27-4.10(m,4H),4.00(ddd,J＝8.3,5.3,3.1Hz,1H),1.45(s,9H).
第四步
tert-butyl
3-(N-(4-((3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamoyl)-3-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)phenyl)sulfamoyl)azetidine-1-carboxylate
3-(N-(4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯基)氨磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将N-(3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺8b(40mg,66.07μmol)和3-氨磺吡啶-1-羧酸叔丁酯11e(31.22mg,132.13μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(甲氨基)乙酸(5.89mg,66.07μmol)，三水合 磷酸三钾(87.97mg,330.33μmol)和碘化亚铜(6.29mg,33.03μmol)，氩气置换5分钟，升温到100℃，搅拌18小时，质谱显示反应完全。向反应液中加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到3-(N-(4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯基)氨磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯11f(45mg)，产率：95.42％。
MS m/z(ESI):714.4[M+1]
第五步
4-(azetidine-3-sulfonamido)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(氮杂环丁烷-3-磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将3-(N-(4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)苯基)氨磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯11f(45mg,63.04μmol)溶解于甲醇(5mL)中，随后加入盐酸(4.0M,157.60μL)，升温到60℃，搅拌10小时，质谱显示反应完全。浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-(氮杂环丁烷-3-磺酰胺基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺11(10.8mg)，产率：23.54％。
MS m/z(ESI):614.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),10.57(s,1H),9.22(d,J＝60.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.8Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(dd,J＝9.0,1.8Hz,1H),7.54(d,J＝9.0Hz,1H),7.15–7.07(m,1H),7.02(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),4.51(p,J＝7.4Hz,1H),4.32(m,2H),4.13(m,2H),3.86(s,3H),3.46(t,J＝5.6Hz,4H),2.99(t,J＝5.2Hz,4H),2.16(tt,J＝13.8,5.4Hz,4H),1.53(t,J＝5.2Hz,4H),0.34(s,4H).
实施例12
4-(azetidin-3-ylsulfonyl)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(氮杂环丁烷-3-基磺酰基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
methyl 4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzoate
4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸甲酯
将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(500mg,1.40mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中，加入N,N-二甲基甲酰胺(10.23mg,139.98μmol)，室温下，滴加草酰氯(266.52mg,2.10mmol)搅拌1小时。将反应液滴加到甲醇(20mL)中，搅拌30分钟，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩后加入水(20mL)，用碳酸氢钠溶液调pH至7-8。乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸甲酯12a(0.5g)，产率：96.22％。
MS m/z(ESI):372.0[M+1]
第二步
tert-butyl
3-((4-(methoxycarbonyl)-3-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)phenyl)thio)azetidine-1-carboxylate
3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸甲酯12a(500mg,1.35mmol)和3-硫烷基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12b(509.88mg,2.69mmol)溶解于1,4-二氧六环(2mL)中，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(123.34mg,134.69μmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(77.94mg,134.69μmol)和N,N-二异丙基乙胺(522.24mg,4.04mmol)，氩气置换3次，升温到100℃，搅拌18小时，质谱显示反应完全。向反应液中加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12c(464mg)，产率：79.64％。
MS m/z(ESI):433.2[M+1]
第三步
tert-butyl
3-((4-(methoxycarbonyl)-3-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)phenyl)sulfonyl)azetidine-1-carboxylate
3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)硫代)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12c(410mg,947.81μmol)溶解于1,4-二氧六环(5mL)中，加入过氧单磺酸钾(1.17g,1.90mmol)的水(2.5mL)溶液，室温搅拌18小时，质谱显示反应完全。加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12d(264mg)，产率：59.96％。
MS m/z(ESI):465.2[M+1]
第四步
4-((1-(tert-butoxycarbonyl)azetidin-3-yl)sulfonyl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzoic acid
4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)磺酰基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸
将3-((4-(甲氧羰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12d(264mg,568.26μmol)被溶解于四氢呋喃(2mL)和甲醇(2mL)中，加入lithium；hydroxide；hydrate(238.46mg,5.68mmol)水(2mL)溶液，室温搅拌18小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩后加水(15mL)。用2N盐酸溶液调至pH＝3，二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁-3-基)磺酰基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸12e(242mg)，产率：94.52％。
MS m/z(ESI):451.3[M+1]
第五步
tert-butyl
3-((4-((3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamoyl)-3-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)phenyl)sulfonyl)azetidine-1-carboxylate
3-((4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺7d(106.39mg,399.51μmol)和4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁-3-基)磺酰基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸12e(150mg,332.93μmol)溶解于乙腈(2mL)中，加入1-甲基咪唑(54.67mg,665.86μmol)和[chloro(dimethylamino)methylene]-dimethyl-ammonium；hexafluorophosphate(186.83mg,665.86μmol)，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-((4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12f(200mg)，产率：85.96％。
MS m/z(ESI):699.4[M+1]
第六步
4-(azetidin-3-ylsulfonyl)-N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(氮杂环丁烷-3-基磺酰基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将3-((4-((3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酰基)-3-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯基)磺酰基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯12f(200mg,286.20μmol)溶解于甲醇(5mL)中，加入盐酸(4M,715.49μL)，升温到60℃，搅拌5小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-(氮杂环丁烷-3-基磺酰基)-N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺12(147.9mg)，产率：71.78％。
MS m/z(ESI):599.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.83(s,1H),9.37(d,J＝29.3Hz,1H),8.26(d,J＝1.8Hz,1H),7.88(d,J＝7.9Hz,1H),7.66-7.58(m,3H),7.53(d,J＝9.0Hz,1H),4.83(qd,J＝8.3,7.6,4.3Hz,1H),4.36-4.16(m,4H),3.86(s,3H),3.46(dd,J＝7.0,4.4Hz,4H),3.19-3.08(m,4H),2.16(tt,J＝13.9,5.6Hz,4H),1.45(t,J＝5.2Hz,4H),0.30(s,4H).
实施例13
N-(1-cyclopropyl-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
3-bromo-5-nitro-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazole
3-溴-5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑
将3-溴-5-硝基吲唑7a(500mg,2.07mmol)和4-甲基苯磺酸(35.57mg,206.59μmol)溶解于二氯甲烷(10mL)，滴加3,4-二氢2H吡喃(208.53mg,2.48mmol)，室温搅拌4小时。加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅柱层析(洗脱剂：A体系)分离纯化，得到3-溴-5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑13a(0.62g)，产率：92.02％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝2.1Hz,1H),8.36(dd,J＝9.3,2.2Hz,1H),8.05(d,J＝9.3Hz,1H),6.00(dd,J＝9.5,2.2Hz,1H),3.93–3.74(m,2H),2.32(tdd,J＝12.6,8.3,3.1Hz,1H),2.08–1.97(m,2H),1.80–1.70(m,1H),1.60(dq,J＝9.4,5.1,4.3Hz,2H).
第二步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-5-nitro-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazole
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑
将3-溴-5-硝基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑13a(300mg,919.83μmol)和4,4-二氟哌啶(122.56mg,1.01mmol)溶解于甲苯(20mL)，加入醋酸钯(20.65mg,91.98μmol)，R-(+)-1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(114.55mg,183.97μmol)，叔丁醇钠(265.19mg,2.76mmol)，氩气置换，升温到100℃，搅拌18小时，质谱显示反应完全。加水(20mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑13b(300mg)，产率：89.02％。
MS m/z(ESI):367.1[M+1]
第三步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-5-nitro-1H-indazole
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑
将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑13b(300mg,818.86μmol)溶解于甲醇(10mL)，滴加盐酸(4M,818.86μL)，升温到60℃，搅拌6小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩，加入乙酸乙酯(30mL)，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至8-9，加水(10mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑13c(230mg)，产率：99.52％。
MS m/z(ESI):283.1[M+1]
第四步
1-cyclopropyl-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-5-nitro-1H-indazole
1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑
将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑13c(250mg,885.75μmol)和环丙基硼酸(152.17mg,1.77mmol)溶于1,2-二氯乙烷(5mL)，加入无水醋酸铜(160.88mg,885.75μmol)，2,2'-联吡啶(138.34mg,885.75μmol)和碳酸钠(281.64mg,2.66mmol)，升温至80℃，搅拌18小时，质谱显示反应完全。加水(10mL)，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑13d(160mg)，产率：56.04％。
MS m/z(ESI):323.2[M+1]
第五步
1-cyclopropyl-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-amine
1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-胺
将1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑13d(160mg,496.42μmol)溶于乙醇(3mL)，加入氯化铵(185.88mg,3.47mmol)的水溶液(1mL)，加入锌粉(162.30mg,2.48mmol)，氩气置换3次，升温至80℃，搅拌2小时，质谱显示反应完全。反应液过滤，减压浓缩，加水(20mL)，用饱和碳酸氢钠调pH至8-9。乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-胺13e(60mg)，产率：41.35％。
MS m/z(ESI):293.2[M+1]
第六步
N-(1-cyclopropyl-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-胺13e(58.52mg,200.18μmol)和2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(65mg,181.98μmol)溶解于乙腈(5mL)，加入1-甲基咪唑(45.37mg,545.93μmol)和N,N,N’,N’-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(153.18mg,545.93μmol)，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺13f(100mg)，产率：87.02％。
MS m/z(ESI):316.7[M/2+1]
第七步
N-(1-cyclopropyl-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺13f(100mg,158.35μmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(39.64mg,316.71μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，加入2-(甲氨基)乙酸(14.11mg,158.35μmol)，磷酸三钾三水合物(210.86mg,791.77μmol)和碘化亚铜(15.08mg,79.18μmol)，氩气置换，升温到110℃，搅拌6小时，质谱显示反应完全。反应液减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(1-环丙基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺13(48.2mg)，产率：47.40％。
MS m/z(ESI):629.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.59(s,1H),10.07(s,1H),8.29(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J＝9.0Hz,1H),7.59(d,J＝8.9Hz,1H),7.17(d,J＝2.1Hz,1H),7.06–7.00(m,1H),4.97(s,1H),3.76(t,J＝6.6Hz,2H),3.47(m,5H),3.35(s,2H),2.99(t,J＝5.3Hz,4H),2.16(td,J＝14.4,13.8,6.7Hz,4H),1.53(t,J＝5.3Hz,4H),1.05(d,J＝5.2Hz,4H),0.34(s,4H).
实施例14
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazol-5-amine
3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-胺
室温下，向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑13b(100mg,272.95μmol)的乙醇(2mL)和水(1mL)溶液中加入锌粉(35.70mg,545.91μmol)和氯化铵(14.60mg,272.95μmol)，在78℃条件下搅拌1小时，反应完全，将反应液倒入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到产物3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-胺14a(60mg)，产率：65.35％。
MS m/z(ESI):337.3[M+1]
第二步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(60mg,167.98μmol)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(47.13mg,167.98μmol)加入N-甲基咪唑(27.58mg,335.96μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液中，室温搅拌30分钟后加入3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-胺14a(56.50mg,167.98μmol)，继续搅拌16小时，反应完全。将反应液倒入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺14b(40mg)，产率：35.25％。
MS m/z(ESI):676.5[M+1]
第三步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺14b(40mg,59.21μmol)和乙磺酰胺8c(6.46mg,59.21μmol)加入碘化亚铜(5.64mg,29.61μmol)，肌氨酸(5.28mg,59.21μmol)和磷酸钾(62.84mg,296.06μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，在氮气氛围下100℃搅拌16小时，反应完全，将反应液倒入水中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺14c(30mg)，产率：77.14％。
MS m/z(ESI):657.7[M+1]
第四步
N-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下将N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1-(四氢2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺14c(30mg,45.68μmol)加入氯化氢的乙酸乙酯溶液(1mL，4M)中，在室温条件下搅拌1小时，反应完全。粗品用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺14(2mg)，产率：6.66％。
MS m/z(ESI):573.3[M+1]
实施例15
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-methyl-3-(methyl(2,2,2-trifluoroethyl)amino)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
1-methyl-5-nitro-N-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazol-3-amine
1-甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺
将3-溴-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7b(300mg,1.17mmol)，2,2,2-三氟乙胺15a(232.11mg,2.34mmol,市售)溶解于甲苯(5mL)中，加入醋酸钯(26.30mg,117.16μmol)，R-(+)-1,1'-联萘-2,2’-双二苯膦(145.91mg,234.32μmol)和碳酸铯(1.15g,3.51mmol)，氩气置换3次，升温到100℃，搅拌20小时，质谱显示反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺15b(235mg)，产率：73.15％。
MS m/z(ESI):275.1[M+1]
第二步
N,1-dimethyl-5-nitro-N-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazol-3-amine
N,1-二甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺
将1-甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺15b(215mg,784.10μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，降温到0℃，加入氢化钠(62.72mg,1.57mmol,60％purity)，0℃搅拌30分钟，加入碘甲烷(166.94mg,1.18mmol)，0℃搅拌1小时，质谱显示反应完全。将反应液倒入水(20mL)中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N,1-二甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺15c(220mg)，产率：97.35％。
MS m/z(ESI):289.1[M+1]
第三步
N3,1-dimethyl-N3-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazole-3,5-diamine
N3,1-二甲基-N3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3,5-二胺
将N,1-二甲基-5-硝基-N-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3-胺15c(120mg,416.34μmol)溶解于甲醇(10mL)，加入钯碳(10％)(4.43mg,41.63μmol)，室温搅拌4小时，质谱显示反应完全。过滤，减压浓缩，得到N3,1-二甲基-N3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3,5-二胺15d(100mg)，产率：93.01％。
MS m/z(ESI):259.1[M+1]
第四步
4-iodo-N-(1-methyl-3-(methyl(2,2,2-trifluoroethyl)amino)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-碘-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将N3,1-二甲基-N3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-3,5-二胺15d(99.41mg,384.95μmol)和2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(125.00mg,349.96μmol)溶解于乙腈(5mL)，加入1-甲基咪唑(87.26mg,1.05mmol)和N,N,N’,N’-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(294.57mg,1.05mmol)，室温搅拌1小时，质谱显示反应完全。减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-碘-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺15e(160mg)，产率76.53％。
MS m/z(ESI):598.2[M+1]
第五步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-methyl-3-(methyl(2,2,2-trifluoroethyl)amino)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将4-碘-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺15e(160mg,267.82μmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(67.03mg,535.64μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入肌氨酸(23.86mg,267.82μmol)，磷酸三钾三水合物(356.62mg,1.34mmol)和碘化亚铜(25.50mg,133.91μmol)，氩气置换，升温到110℃，搅拌6小时，质谱显示反应完全。反应完全，将反应液倒入水中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺15(58.0mg)，产率36.27％。
MS m/z(ESI):595.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),10.08(s,1H),8.32(d,J＝1.8Hz,1H),7.83(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(dd,J＝9.1,1.8Hz,1H),7.51(d,J＝9.1Hz,1H),7.16(d,J＝2.1Hz,1H), 7.02(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),4.96(s,1H),4.25(q,J＝9.6Hz,2H),3.83(s,3H),3.79-3.72(m,2H),3.35-3.29(m,2H),3.19(s,3H),2.98(t,J＝5.3Hz,4H),1.57-1.44(m 4H),0.33(s,4H).
实施例16
4-(ethylsulfonamido)-N-(1-methyl-3-(methyl(2,2,2-trifluoroethyl)amino)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
将4-碘-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺15e(160mg,267.82μmol)和乙磺酰胺8c(67.03mg,535.64μmol)溶解于N,N-二氯甲烷(5mL)中，加入肌氨酸(23.86mg,267.82μmol)，磷酸三钾三水合物(356.62mg,1.34mmol)和碘化亚铜(25.50mg,133.91μmol)，氩气置换，升温到110℃，搅拌6小时，质谱显示反应完全。反应完全，将反应液倒入水中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-(乙基磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺16(21mg)，产率13.56％。
MS m/z(ESI):579.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),10.10(s,1H),8.31(d,J＝1.8Hz,1H),7.84(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(dd,J＝9.1,1.8Hz,1H),7.50(d,J＝9.0Hz,1H),7.17(d,J＝2.2Hz,1H),7.03(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),4.25(q,J＝9.6Hz,2H),3.83(s,3H),3.23-319(m,3H),3.19-3.12(m,2H),3.03-2.94(m,4H),1.59-1.46(m,4H),1.21(t,J＝7.3Hz,3H),0.33(s,4H).
实施例17
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazol-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-基)苯甲酰胺
第一步
6-nitro-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazole
6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑
室温下，将6-硝基-1H-吲唑17a(500mg,3.06mmol,市售)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，将碳酸铯(2.00g,6.13mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(1.07g,4.60mmol,市售)加入上述反应液，氮气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将组合有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干燥，得到粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑17b(200mg)，产率：26.62％。
MS m/z(ESI):246.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(s,1H),8.47(d,J＝1.2Hz,1H),8.11-7.99(m,2H),5.73-5.64(m,2H)。
第二步
1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazol-6-amine
1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-胺
室温下，将6-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑17b(200mg,0.816mmol)加入无水甲醇(5mL)中，随后加入钯碳(10％)(43.4mg,0.408mmol)，氢气置换三次，30℃下反应2小时。反应液过滤，用无水甲醇(5mL×3)洗涤滤饼，收集有机相减压浓缩至干燥，得到1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-胺17c(170mg)，产率：96.84％。
MS m/z(ESI):216.0[M+1]
第三步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1H-indazol-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-基)苯甲酰胺
室温下，将1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-胺17c(100mg,0.465mmol)和4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸6i(164.71mg,0.465mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，随后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(353mg,0.929mmol)和N,N-二异丙基乙胺(180mg,1.39mmol)，氮气置换三次，70℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲唑-6-基)苯甲酰胺17(50mg)，产率：19.51％。
MS m/z(ESI):552.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(s,1H),10.13(s,1H),8.45(s,1H),8.13(d,J＝1.2Hz,1H),7.88-7.79(m,2H),7.36-7.30(m,1H),7.21-7.17(m,1H),7.07-7.03(m,1H),5.43-5.34(m,2H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.35-3.32(m,2H),3.04-2.96(m,4H),1.60-1.47(m,4H),0.34(s,4H).
实施例18
N-(1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazol-6-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
6-bromo-1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazole
6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑
0℃下，将6-溴-1H-吲唑18a(1.00g,5.08mmol,市售)和4,4-二氟环己烷-1-醇18b(760mg,5.58mmol,市售)加入四氢呋喃(10mL)中，随后加入偶氮二甲酸二异丙酯(1.54g,7.61mmol)和三苯基膦(2.00g,7.61mmol)，氮气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑18c(500mg)，产率：31.26％。
MS m/z(ESI):315.0[M+1]
第二步
tert-butyl(1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazol-6-yl)carbamate
(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑18c(300mg,0.952mmol)和氨基甲酸叔丁酯(123mg,1.05mmol)加入1,4-二氧六环(8mL)中，随后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(87.2mg,0.0952mmol)，碳酸铯(930mg,2.86mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(68.1mg,0.143mmol)，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯18d(330mg)，产率：98.66％。
MS m/z(ESI):352.2[M+1]
第三步
1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazol-6-amine
1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-胺
室温下，将(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯18d(200mg,569.17μmol)加入二氯甲烷(5mL)中，随后加入盐酸(1,4-二氧六环溶液,4M)(2.5mL)，25℃下反应18小时。将混合物减压浓缩，得到1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-胺18e(140mg)，产率：97.89％。
MS m/z(ESI):252.0[M+1]
第四步
4-bromo-N-(1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazol-6-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-胺18e(180mg,716.35μmol)和4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(244.42mg,787.98μmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，随后加入(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(746.98mg,1.43mmol)和N,N-二异丙基乙胺(277.74mg,2.15mmol)，氮气置换三次，70℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺18f(150mg)，产率：38.53％。
MS m/z(ESI):543.2[M+1]
第五步
N-(1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1H-indazol-6-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将4-溴-N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺18f(100mg,184.01μmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(25.33mg,202.41μmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，随后加入碘化亚铜(35.04mg,184.01μmol)，反式-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(2.62mg,18.40μmol)和磷酸钾(78.12mg,368.02μmol)，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(1-(4,4-二氟环己基)-1H-吲唑-6-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺18(30mg)，产率：27.74％。
MS m/z(ESI):588.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H),8.49(s,1H),8.01(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.20–7.13(m,2H),7.06–7.01(m,1H),4.85–4.73(m,1H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.35–3.33(m,2H),3.04–2.94(m,4H),2.25–2.20(m,2H),2.19–2.11(m,4H),2.06–1.99(m,2H),1.61–1.48(m,4H),0.35(s,4H).
按照本发明实施例18的合成方法合成实施例19。实施例19的图谱参数如下表所示：
实施例20
N-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-3-(difluoromethyl)-1H-indazole
5-溴-3-(二氟甲基)-1H-吲唑
冰浴下，将二乙胺基三氟化硫(1.97g,12.22mmol)滴加到5-溴-1H-吲唑-3-甲醛20a(1.1g,4.89mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，室温搅拌4小时。反应液用饱和的碳酸钠水溶液(20mL)淬灭，二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到5-溴-3-(二氟甲基)-1H-吲唑20b(0.8g)，产率：66％。
MS m/z(ESI):249.0[M+1]
第二步
5-bromo-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑
冰浴下，氢化钠(259.07mg,6.48mmol,60％purity)加入到5-溴-3-(二氟甲基)-1H-吲唑20b(0.8g,3.24mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，冰浴下搅拌30分钟后加入碘甲烷(919.29mg,6.48mmol)。室温搅拌4小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(20mL)淬灭，，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑20c(632mg)，产率：75％。
MS m/z(ESI):263.0[M+1]
第三步
tert-butyl(3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将5-溴-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑20c(158mg,605.21μmol)，氨基甲酸叔丁酯(158mg,605.21μmol)，碘化亚铜(57.63mg,302.61μmol)，磷酸钾三水(483.52mg,1.82mmol)和外消旋-(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(86.09mg,605.21μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，氮气置换三次，100℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯20d(110mg)，产率：61％。
MS m/z(ESI):298.2[M+1]
第四步
3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(二氟甲基)-1-甲基1H-吲唑-5-胺
室温下，将三氟乙酸(1mL)加入到(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯20d(110mg,370.00μmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩，剩余物溶于乙酸乙酯(5mL)，加入饱和碳酸钠水溶液(5mL)，水相用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(二氟甲基)-1-甲基1H-吲唑-5-胺20e(55mg)，产率：75％。
MS m/z(ESI):198.2[M+1]
第五步
N-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将3-(二氟甲基)-1-甲基1H-吲唑-5-胺20e(48.58mg,246.37μmol)，2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(80mg,223.97μmol)，1-甲基咪唑(55.84mg,671.92μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，室温搅拌10分钟后加入N,N,N’,N’-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(188.53mg,671.92μmol)，室温搅拌4小时。将反应液投入水中，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺20f(110mg)，产率：36％。
MS m/z(ESI):537.1[M+1]
第六步
N-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺20f(40mg,74.58μmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(10.27mg,82.04μmol)，2-(甲氨基)乙酸(9.97mg,111.87μmol)，碘化亚铜(4.26mg,22.37μmol)和磷酸钾三水(99.30mg,372.89μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中，氮气置换三次，90℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺20(6mg)，产率：14.82％。
MS m/z(ESI):534.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.30(s,1H),9.87(s,1H),8.34(s,1H),7.58(dd,J＝11.4,8.7Hz,2H),7.45–7.33(m,1H),7.25–6.92(m,2H),6.81(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),3.86(s,3H),3.53(t,J＝6.6Hz,2H),3.11(t,J＝6.5Hz,2H),2.85-2.72(m,4H),2.31-2.22(m,5H),1.37-1.22(m,4H).
实施例21
N-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺20f(40mg,74.58μmol)，乙磺酰胺8c(8.95mg,82.04μmol)，2-(甲氨基)乙酸(9.97mg,111.87μmol)，碘化亚铜(4.26mg,22.37μmol)和磷酸钾三水(99.30mg,372.89μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气置换三次，90℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺21(13mg)，产率：31.0％。
MS m/z(ESI):518.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H),10.15(s,1H),8.58(s,1H),7.81(t,J＝8.4Hz,2H),7.62(dd,J＝9.1,1.9Hz,1H),7.48–7.15(m,2H),7.05(dd,J＝8.5,2.0Hz,1H),4.10(s,3H),3.20(q,J＝7.3Hz,2H),3.08-2.91(m,4H),1.61-1.45(m,4H),1.22(t,J＝7.3Hz,3H),0.37-0.29(m,4H).
实施例22
N-(3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
1-methyl-5-nitro-1H-indazole-3-carbaldehyde
1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-甲醛
向5-硝基1H-吲唑-3-甲醛22a(2.0g,10.46mmol)和碘甲烷(1.49g,10.46mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，加入碳酸钾(2.17g,15.70mmol)，室温搅拌2小时，质谱监控反应完全，将反应液投入水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-甲醛22b(2.12g)，产率：98.8％。
MS m/z(ESI):206.1[M+1]
第二步
3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
向3,3-二氟氮杂环丁烷(226.82mg,2.44mmol)的甲醇(1mL)溶液中，加入1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-甲醛22b(500mg,2.44mmol)和乙酸(14.63mg,243.70μmol)，室温搅拌30分钟后，加入氰基硼氢化钠(153.14mg,2.44mmol)，室温搅拌1小时，质谱监控，反应完全。将反应液投入水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑22c(500mg)，产率：72.69％。MS m/z(ESI):283.2[M+1]
第三步
3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
室温下，将3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑22c(400mg,1.42mmol)和锌粉(92.67mg,1.42mmol)加入氯化铵(75.81mg,1.42mmol)的乙醇(3mL)和水(1mL)溶液中，80℃搅拌2小时，将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物直接用于 下一步反应得到3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺22d(220mg)，产率：61.54％。
MS m/z(ESI):253.1[M+1]
第四步
N-(3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(300mg,839.90μmol)和3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺22d(65.59mg,279.97μmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(161.01mg,839.90μmol)和1-羟基苯并三唑(113.49mg,839.90μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶剂中，在室温条件下搅拌16小时，将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺22e(202mg)，产率：40.66％。
MS m/z(ESI):592.2[M+1]
第五步
N-(3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺22e(200.00mg,338.16μmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(84.64mg,676.32μmol)加入2-(甲氨基)乙酸(30.13mg,338.16μmol)，碘化亚铜(64.40mg,338.16μmol)和磷酸钾(71.78mg,338.16μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶剂中，氮气置换三次，100℃下搅拌16小时，将反应液投入水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺22(80mg)，产率：31.02％。
MS m/z(ESI):589.1[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.50(s,1H),10.08(s,1H),8.62(s,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,1H),7.52(d,J＝9.1Hz,1H),7.17(d,J＝2.1Hz,1H),7.04(dd,J＝ 8.5,2.1Hz,1H),4.78(s,3H),4.58(s,4H),4.06(s,3H),3.77(t,J＝6.6Hz,2H),3.34(t,J＝6.6Hz,2H),3.00(m,4H),1.52(s,4H),0.34(s,4H).
实施例23
N-(3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑
室温下，将5-溴-1-甲基-吲唑-3-甲醛23a(100mg,418.29μmol)和4,4-二氟哌啶(101.33mg,836.58μmol)加入乙酸(2.51mg,41.83μmol)的甲醇(0.5mL)溶液中，室温搅拌30分钟后加入氰基硼氢化钠(105.14mg,1.67mmol)，继续搅拌1小时,将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑23b(120mg)，产率：83.35％。
MS m/z(ESI):346.0[M+1]
第二步
tert-butyl(3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将5-溴-3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑23b(120mg,348.64μmol)和氨基甲酸叔丁酯(81.68mg,697.27μmol)加入三二亚苄基丙酮二钯(31.93mg,34.86μmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(20.17mg,34.86μmol)和叔丁醇钠(67.01mg,697.27μmol)的甲苯(1mL)溶液中，100℃下搅拌16小时，将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。得到(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯23c(100mg)，粗产物直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):381.1[M+1]
第三步
3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
室温下，将(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯23c(100mg,262.86μmol)和三氟乙酸(1mL)混合体系搅拌1小时，质谱监控反应完全。减压浓缩有机相，得到3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺23d(39.24mg)，粗品直接投下一步。
MS m/z(ESI):281.1[M+1]
第四步
N-(3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(50mg,139.98μmol)和3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺23d(39.24mg,139.98μmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(53.67mg,279.97μmol)和1-羟基苯并三唑(37.83mg,279.97μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，室温搅拌4小时，将反应液投入水(10mL)中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺23e(70mg)，产率：80.72％。MS m/z(ESI):620.1[M+1]
第五步
N-(3-((4,4-difluoropiperidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺23e(70mg,113.00μmol)和2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(42.42mg,338.99μmol)加入2-(甲氨基)乙酸(20.13mg,225.99μmol)，碘化亚铜(43.04mg,225.99μmol)和磷酸钾(47.97mg,225.99μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，氮气置换三次，100℃下搅拌16小时，将反应液投入水(10mL)中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-((4,4-二氟哌啶-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺23(5mg)，产率：7.17％。
MS m/z(ESI):618.1[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.57(s,1H),10.11(s,1H),8.68(s,1H),7.81(dd,J＝18.4,8.7Hz,2H),7.51(dd,J＝9.0,1.9Hz,1H),7.20–7.12(m,1H),7.08–6.98(m,1H),4.78(s,2H),4.11(s,3H),3.77(s,2H),3.75(s,2H),3.34(t,J＝6.6Hz,4H),3.00(t,J＝5.2Hz,4H),2.32(s,4H),1.52(t,J＝5.2Hz,4H),1.24(s,1H),0.35(s,4H).
实施例24
N-(3-((3,3-difluoroazetidin-1-yl)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺22e(100mg,169.08μmol)和乙磺酰胺8c(36.91mg,338.16μmol)加入2-(甲氨基)乙酸(30.13mg,338.16μmol)，碘化亚铜(64.40mg,338.16μmol)和磷酸钾(71.78mg,338.16μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，氮气置换三次，100℃ 下搅拌16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-((3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺24(5.0mg)，产率：3.96％。
MS m/z(ESI):573.2[M+1]
按照本发明实施例22-24的合成方法合成实施例25-27。实施例25-27的图谱参数如下表所示：
实施例28
N-(3-(((2,2-difluoroethyl)amino)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(((2,2-二氟乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
2,2-difluoro-N-((1-methyl-5-nitro-1H-indazol-3-yl)methyl)ethan-1-amine
2,2-二氟-N-((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)乙-1-胺
室温下，将2,2-二氟乙胺(79.02mg,974.8μmol)，1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-甲醛22b(200mg,974.8μmol)加入乙酸(5.85mg,97.48μmol)的甲醇(2mL)溶剂中，搅拌30分钟后加入氰基硼氢化钠(61.26mg,974.8μmol)，继续搅拌1小时,将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到2,2-二氟-N-((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)乙-1-胺28a(240mg)，产率：91.116％。
MS m/z(ESI):271.2[M+1]
第二步
tert-butyl(2,2-difluoroethyl)((1-methyl-5-nitro-1H-indazol-3-yl)methyl)carbamate
(2,2-二氟乙基)((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将2,2-二氟-N-((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)乙-1-胺28a(200mg,740.10μmol)和二碳酸二叔丁酯(161.53mg,740.10μmol)加入4-二甲氨基吡啶(9.04mg,74.01μmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，室温搅拌2小时，将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗 产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(2,2-二氟乙基)((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28b(170mg)，产率：62.02％。
MS m/z(ESI):371.3[M+1]
第三步
tert-butyl((5-amino-1-methyl-1H-indazol-3-yl)methyl)(2,2-difluoroethyl)carbamate
(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)(2,2-二氟乙基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(2,2-二氟乙基)((1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28b(170mg,459.02μmol)和铁粉(51.27mg,918.05μmol)加入氯化铵(49.11mg,918.05μmol)的乙醇(2mL)和水(1mL)混合溶液中，75℃下搅拌2小时,将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)(2,2-二氟乙基)氨基甲酸叔丁酯28c(100mg)，产率：64.01％。
MS m/z(ESI):341.3[M+1]
第四步
tert-butyl
(2,2-difluoroethyl)((5-(4-iodo-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamido)-1-methyl-1H-indazol-3-yl)methyl)carbamate
(2,2-二氟乙基)((5-(4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(100mg,279.97μmol)和(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)(2,2-二氟乙基)氨基甲酸叔丁酯28c(95.29mg,279.97μmol)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(107.34mg,559.93μmol)和1-羟基苯并三唑(75.66mg,559.93μmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，将反应液滴加入冰水中，有固体析出。收集滤饼，得到(2,2-二氟乙基)((5-(4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28d(170mg)，粗产品直接用于下一步反应。MS m/z(ESI):680.1[M+1]
第五步
tert-butyl
(2,2-difluoroethyl)((5-(4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamido)-1-methyl-1H-indazol-3-yl)methyl)carbamate
(2,2-二氟乙基)((5-(4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(2,2-二氟乙基)((5-(4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28d(170mg,250.17μmol)和乙磺酰胺8c(54.61mg,500.34μmol)加入肌氨酸(22.29mg,250.17μmol)，碘化亚铜(23.82mg,125.09μmol)和 磷酸钾(265.52mg,1.25mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，氮气置换三次100℃下搅拌16小时将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到(2,2-二氟乙基)((5-(4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28e(108mg)，产率：65.33％。
MS m/z(ESI):661.0[M+1]
第六步
N-(3-(((2,2-difluoroethyl)amino)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(((2,2-二氟乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将(2,2-二氟乙基)((5-(4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯28e(108mg,163.44μmol)加入氯化氢的乙酸乙酯溶液(1mL，4M)的溶液中，室温下搅拌1小时，将反应液投入水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到N-(3-(((2,2-二氟乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺28(30mg)，产率：32.38％。
MS m/z(ESI):560.9[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.52(s,1H),10.13(s,1H),8.41(d,J＝1.8Hz,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.66–7.50(m,2H),7.18(d,J＝2.1Hz,1H),7.04(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),4.05(d,J＝6.3Hz,2H),3.99(s,3H),3.20(q,J＝7.3Hz,2H),3.03–2.88(m,7H),1.53(s,4H),1.21(t,J＝7.4Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例29
N-(3-(((2,2-difluoroethyl)(methyl)amino)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(((2,2-二氟乙基)(甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将N-(3-(((2,2-二氟乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺28(15mg,26.75μmol)加入多聚甲醛(2.41mg,80.26μmol)的甲醇(0.5mL)溶液中，室温下搅拌2小时，将反应液投入水中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(((2,2-二氟乙基)(甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺29(12mg)，产率：76.98％。
MS m/z(ESI):575.3[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.63(s,1H),8.29(d,J＝1.9Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(dd,J＝9.1,1.9Hz,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,1H),7.18(d,J＝2.2Hz,1H),7.03(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H),6.21(dt,J＝55.9,4.3Hz,1H),4.00(s,3H),3.92(s,2H),3.18(q,J＝7.2Hz,2H),2.99(t,J＝5.3Hz,4H),2.85(d,J＝15.4,4.3Hz,2H),2.32(s,3H),1.53(t,J＝6.0Hz,3H),1.25–1.18(m,4H),0.34(s,4H).
按照本发明实施例7的合成方法合成实施例30-34。实施例30-34的图谱参数如下表所示：
实施例35&实施例36
(S)-N-(3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
(S)-N-(3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
(R)-N-(3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
(R)-N-(3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
1-(1-methyl-5-nitro-1H-indazol-3-yl)ethan-1-one
1-(1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)乙-1-酮
向1-(1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙-1-酮35a(1g,5.74mmol,市售)的三氟乙酸(9mL)溶液中加入硝酸(1.04g，16.53mmol)，将所得混合物在25℃下搅拌5小时。将反应混合物加入水(50mL)中，并用饱和碳酸氢钠溶液将pH调节至7，用乙酸乙酯(100mL×2)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-(1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)乙-1-酮35b(667mg)，产率：55.0％。
MS m/z(ESI):220.0[M+1]
第二步
3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
向1-(1-甲基-5-硝基-1H-吲唑-3-基)乙-1-酮35b(550mg，2.51mmol)，3,3-二氟三甲叉亚胺盐酸盐(1.25g，7.53mmol)和乙酸(30mg，0.502mmol)在甲醇(12mL)中的溶液中加入氰基硼氢化钠(473mg，7.53mmol)，将所得混合物在60℃下搅拌5小时。将反应混合物浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑35c(530mg)，产率：71.1％。
MS m/z(ESI):297.0[M+1]
第三步
3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
向3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑35c(530mg，1.79mmol)在甲醇(10mL)中的悬浮液中加入钯碳(57mg，0.054mmol，10％纯度)，用氢气置换3次，并在25℃氢气氛围下(15psi)搅拌16小时，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺35d(476mg)，产率：99％。
MS m/z(ESI):267.0[M+1]
第四步
4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzoic acid
4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸
2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(1.0g,2.80mmol)和乙磺酰胺8c(458.36mg,4.20mmol)溶解于DMF(10mL)中，加入碘化亚铜(266.60mg,1.40mmol),肌氨酸(249.43mg,2.80mmol)和磷酸钾(3.73g,14.00mmol)，氩气置换，升温到110℃，搅拌6小时。降至室温，反应液倒入冰水(200mL)中，稀盐酸(2M)调至pH＝6。加入二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(0.75g)，产率：79.16％。
MS m/z(ESI):339.4[M+1]
第五步
(S)-N-(3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
(S)-N-(3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
(R)-N-(3-(1-(3,3-difluoroazetidin-1-yl)ethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
(R)-N-(3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
向3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺35d(476mg，1.79mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(696mg，2.06mmol)和N,N-二异丙基乙胺(693mg,5.36mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(1.40g,2.68mmol)，将所得混合物在60℃下搅拌16小时。将反应液倒入水中(50mL)并用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤,用无水硫酸钠干燥，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)乙基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(500mg)，产率：47％。所得产物经SFC(Column:Chiralpak AD-3 50I.D.,3um Mobile phase:A:CO2B:Methanol(0.05％DEA)Gradient:from 5％to 40％of B in 4min and from 40％to 5％of B in 0.2min,then hold 5％of B for1.8minFlow rate:3mL/minColumn temp.:351500psi)分离，得到单一构型化合物(较短保留时间)和单一构型化合物(较长保留时间)。
单一构型化合物(较短保留时间)：
157mg；保留时间：2.50分钟，手性纯度：100％ee。
MS m/z(ESI):587.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),10.15(s,1H),8.40(s,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),3.98(s,3H),3.96(d,J＝6.8Hz,1H),3.68-3.56(m,2H),3.54-3.42(m,2H),3.20(q,J＝7.2Hz,2H),3.04-294(m,4H),1.55(s,4H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),0.34(s,4H).
单一构型化合物(较长保留时间)：
149mg；保留时间：2.676分钟，手性纯度：98.4％ee。
MS m/z(ESI):587.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),10.16(s,1H),8.41(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.76–7.68(m,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,2.0 Hz,1H),3.98(s,3H),3.96-3.91(m,1H),3.70-3.56(dd,J＝22.4,11.6Hz,2H),3.54-3.42(dd,J＝22.1,11.3Hz,2H),3.20(q,J＝7.2Hz,2H),3.04-2.92(t,J＝5.0Hz,4H),1.55(s,4H),1.38(d,J＝6.4Hz,3H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),0.34(s,4H).
按照本发明实施例35-36的合成方法合成实施例37。实施例37的图谱参数如下表所示：
实施例38
4-(ethylsulfonamido)-N-(1-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
1-methyl-5-nitro-1,2-dihydro-3H-indazol-3-one
1-甲基-5-硝基-1,2-二氢-3H-吲唑-3-酮
室温下，将甲基肼硫酸盐(2.17g,15.1mmol)和三乙胺(3.05g,30.1mmol)加入到2-氟-5-硝基苯甲酸甲酯38a(2g,10mmol)的乙醇(40mL)溶液中。反应液80℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(150mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用(乙酸乙酯/甲醇体系)的混合溶液打浆，过滤，滤饼用乙酸乙酯(10mL)清洗三次。得到1-甲基-5-硝基-1,2-二氢-3H-吲唑-3-酮38b(1.8g)，产率：93％。
MS m/z(ESI):194.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),8.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.40–7.94(m,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),3.88(s,3H).
第二步
1-methyl-5-nitro-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)-1H-indazole
1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑
室温下，将碳酸钾(286mg,2.07mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(360mg,1.55mmol)加入到1-甲基-5-硝基-1,2-二氢-3H-吲唑-3-酮38b(200mg,1.04mmol)的二甲基亚砜(5mL)溶液中，反应液80℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑38c(270mg)，产率：95％。
MS m/z(ESI):276.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝1.6Hz,1H),8.30–8.16(m,1H),7.74(d,J＝9.6Hz,1H),5.25–4.80(m,2H),3.97(s,3H).
第三步
1-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)-1H-indazol-5-amine
1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-胺
室温下，将钯碳(50.00mg,10％)加入至1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑38c(370mg,1.34mmol)的甲醇(20mL)溶中,用氢气球置换气体三次，然后室温下反应2小时。将反应液过滤，滤饼用甲醇(100mL)冲洗，滤液减压浓缩。得到1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-胺38d(300mg)，产率：91％。粗产物直接用于下一步。
MS m/z(ESI):246.0[M+1]
第四步
4-bromo-N-(1-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(465mg,1.22mmol)和N,N-二异丙基乙胺(211mg,1.63mmol)加入至1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-胺38d(200mg,0.82mmol)和4-溴-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(329mg,1.06mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中。反应液在60℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺38e(300mg)，产率：68％。
MS m/z(ESI):537.2[M+1]
第五步
4-(ethylsulfonamido)-N-(1-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)-1H-indazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将乙磺酰胺8c(24.4mg,0.22mmol)，碘化亚铜(28.4mg,0.15mmol)，磷酸钾(63.2mg,0.3mmol)，(1R,2R)-(-)-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(10.6mg,0.07mmol)加入到4-溴-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺38e(80mg,0.15mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，氮气置换三次，100℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到4-(乙基磺酰胺基)-N-(1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1H-吲唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺38(19.7mg)，产率：23％。
MS m/z(ESI):566.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.43(s,1H),10.12(s,1H),8.32(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(d,J＝9.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(s,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),5.10–4.91(m,2H),3.88(s,3H),3.25–3.13(m,2H),2.98(s,4H),1.50(s,4H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H),0.33(s,4H).
实施例39
N-(3-(3,3-difluorocyclobutoxy)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
3-(3,3-difluorocyclobutoxy)-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
室温下，将1-甲基-5-硝基-1,2-二氢-3H-吲唑-3-酮38b(200mg,1.04mmol),三苯基膦(473mg,1.55mmol)，3,3-二氟环丁醇39a(168mg,1.55mmol,市售)加入到超干四氢呋喃(5mL)中，混合液在25℃下搅拌5分钟，缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(270mg,1.55mmol)，反应液25℃下反应16小时。将反应液减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑39b(210mg)，产率：72％。
MS m/z(ESI):284.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(s,1H),8.17(d,J＝9.2,1.7Hz,1H),7.64(d,J＝12.4Hz,1H),5.19–4.92(m,1H),3.92(s,3H),3.30–3.11(m,2H),3.04–2.72(m,2H).
第二步
3-(3,3-difluorocyclobutoxy)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
室温下，将钯碳(30.0mg,10％)加入至3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑39b(210mg,0.74mmol)的甲醇(30mL)溶液中,用氢气球置换气体三次，然后室温下反应1小时。将反应液过滤，滤饼用甲醇(100mL)冲洗，滤液减压浓缩。得到3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺39c(160mg)，产率：85.1％。
MS m/z(ESI):254.0[M+1]
第三步
N-(3-(3,3-difluorocyclobutoxy)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(90.1mg,0.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(40.8mg,0.32mmol)加入至3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺39c(40mg,0.16mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(53.5mg,0.16mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中。反应液在25℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(3,3-二氟环丁氧基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺39(19.6mg)，产率：22％。
MS m/z(ESI):574.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),10.07(s,1H),8.34(s,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(d,J＝9.2Hz,1H),7.48(d,J＝9.2Hz,1H),7.14(s,1H),7.02(d,J＝8.4Hz,1H),5.21–4.89(m,1H),3.85(s,3H),3.29–3.07(m,4H),2.98(s,4H),2.91–2.75(m,2H),1.49(s,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),0.33(s,4H).
按照本发明实施例39的合成方法合成实施例40-42。实施例40-42的图谱参数如下表所示：
实施例43
N-(3-((3,3-difluorocyclobutoxy)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
tert-butyl 2-(3,3-difluorocyclobutoxy)acetate
2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸叔丁酯
0℃下，将3,3-二氟环丁醇39a(1.00g,9.25mmol)的甲苯(15mL)和水(7mL)混合溶液中加入溴乙酸叔丁酯43a(1.50g,7.71mmol),氢氧化钠(3.08g,77.1mmol)和四丁基硫酸氢铵(262mg,0.771mmol)。25℃下反应4小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取。将合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸叔丁酯43b(1.70g)，产率：99％。
第二步
2-(3,3-difluorocyclobutoxy)acetic acid
2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸
25℃下，将2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸叔丁酯43b(1.00g,9.25mmol)加入甲酸(15mL)中，搅拌1小时。将混合物减压浓缩，得到粗产物2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸43c(1.00g)。
第三步
2-(3,3-difluorocyclobutoxy)-N-methoxy-N-methylacetamide
2-(3,3-二氟环丁氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺
5℃下，将2-(3,3-二氟环丁氧基)乙酸43c(1.00g,粗品)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入二甲羟胺盐酸盐(330mg,5.40mmol)和N,N'-羰基二咪唑(777mg,5.40mmol)。25℃下反应3小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(100mL)萃取。将合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到粗产物2-(3,3-二氟环丁氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺43d(700mg)，产率：74％。
MS m/z(ESI):210.0[M+1]
第四步
1-(5-bromo-2-fluorophenyl)-2-(3,3-difluorocyclobutoxy)ethan-1-one
1-(5-溴-2-氟苯基)-2-(3,3-二氟环丁氧基)乙-1-酮
0℃下，将2-碘-4-溴氟苯43e(1.21g,4.02mmol,市售)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入异丙基氯化镁-氯化锂的四氢呋喃溶液(3.1mL,1.3M)，0℃下反应1小时，随后加入将2-(3,3-二氟环丁氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺43d(700mg,3.35mmol)的四氢呋喃溶液。将混合物加饱和的氯化铵水溶液(5mL)淬灭后，将混合物倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到1-(5-溴-2-氟苯基)-2-(3,3-二氟环丁氧基)乙-1-酮43f(550mg)，产率：51％。
MS m/z(ESI):323.0/325.0[M+1]
第五步
5-bromo-3-((3,3-difluorocyclobutoxy)methyl)-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑
25℃下,向1-(5-溴-2-氟苯基)-2-(3,3-二氟环丁氧基)乙-1-酮43f(200mg,0.619mmol)的N-甲基吡咯烷酮(10mL)溶液中加入甲基肼(171mg,3.71mmol)，对甲苯磺酸一水合物(10.7mg,0.0619mmol)和三乙胺(626mg,6.19mmol)。150℃微波下反应1小时。将混合物倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑43g(180mg)，产率：88％。
MS m/z(ESI):331.0/333.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(d,J＝1.6Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.52(dd,J＝8.8,1.6Hz,1H),4.72(s,2H),4.18–4.06(m,1H),4.02(s,3H),2.93-2.80(m,2H),2.62–2.51(m,2H).
第六步
tert-butyl(3-((3,3-difluorocyclobutoxy)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
25℃下，将5-溴-3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑43g(150mg,0.453mmol)的1,4-二氧六环(5mL)溶液中加入氨基甲酸叔丁酯(106mg,0.906mmol)，碳酸铯(443mg,1.36mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(41.5mg,0.0453mmol)和2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(64.8mg,0.136mmol)。氮气置换三次，90℃下反应2小时。将混合物过滤后减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯43h(150mg)，产率：90％。
MS m/z(ESI):368.2[M+1
第七步
3-((3,3-difluorocyclobutoxy)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
25℃下，将(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯43h(150mg,0.408mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三氟乙酸(1mL)，25℃下反应2小时。将混合物减压浓缩，得到粗产物3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺43i(109mg)。MS m/z(ESI):268.0[M+1]
第八步
N-(3-((3,3-difluorocyclobutoxy)methyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
25℃下，将3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺43i(150mg,0.561mmol)，4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(285mg,842mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，将(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(586mg,1.12mmol)，N,N- 二异丙基乙胺(290mg,2.24mmol)加入上述反应液，65℃下反应2小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到N-(3-((3,3-二氟环丁氧基)甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺43(96.0mg)，产率：29％。
MS m/z(ESI):586.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.53(s,1H),10.17(s,1H),8.37(d,J＝2.0Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.70–7.57(m,2H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.03(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.73(s,2H),4.17-4.06(m,1H),4.01(s,3H),3.19(q,J＝7.2Hz,2H),2.99(t,J＝5.2Hz,4H),2.95–2.83(m,2H),2.64–2.51(m,2H),1.52(t,J＝5.2Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例44
N-(3-(3,3-difluoroazetidine-1-carbonyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-1-methyl-1H-indazole-3-carboxylic acid
5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-羧酸
室温下，将氢氧化锂一水合物(233.92mg,5.57mmol)加入到5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-羧酸甲酯44a(500mg,1.86mmol,市售)的水(5mL)，四氢呋喃(5mL)和甲醇(5mL)混合溶液中，反应液25℃下反应16个小时。反应液用稀盐酸调节PH至2，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-羧酸44b(450mg)，产率：95％。
MS m/z(ESI):257.0[M+1]
第二步
(5-bromo-1-methyl-1H-indazol-3-yl)(3,3-difluoroazetidin-1-yl)methanone
(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.01g,2.65mmol)和N,N-二异丙基乙胺(684mg,5.29mmol)加入至5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-羧酸44b(450mg,1.76mmol)和3,3-二氟三甲叉亚胺盐酸盐(343mg,2.65mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中。反应液在25℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，萃取液合并，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮44c(550mg)，产率：94％。
MS m/z(ESI):332.0[M+1]
第三步
tert-butyl(3-(3,3-difluoroazetidine-1-carbonyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将三二亚苄基丙酮二钯(139mg,0.15mmol),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(87.6mg,0.15mmol)和碳酸铯(987mg,3.03mmol)加入到(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮44c(500mg,1.51mmol)和氨基甲酸叔丁酯(266mg,2.27mmol)的二氧六环(20mL)中。氮气置换三次，反应液在100℃下反应2小时。将反应液过滤，滤饼用二氯甲烷(50mL)冲洗三次，滤液合并减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯44d(230mg)，产率：41％。
MS m/z(ESI):367.0[M+1]
第四步
(5-amino-1-methyl-1H-indazol-3-yl)(3,3-difluoroazetidin-1-yl)methanone
(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮
室温下，将(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯44d(230mg,0.63mmol)加入到盐酸的二氧六环溶液(5mL,4M)中。反应液在25℃下反应2小时。将反应液减压浓缩，得到(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮44e(180mg)，粗产物直接用于下一步。
MS m/z(ESI):267.0[M+1]
第五步
N-(3-(3,3-difluoroazetidine-1-carbonyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(85.7mg,0.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(58.3mg,0.45mmol)加入至(5-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮44e(40mg,0.15mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(50.8mg,0.15mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中。反应液在25℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(3mL)萃取三次，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺44(31.0mg)，产率：35％。
MS m/z(ESI):587.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.51(s,1H),10.14(s,1H),8.79(d,J＝1.2Hz,1H),7.80(t,J＝8.4Hz,2H),7.69(d,J＝9.2,1.7Hz,1H),7.16(s,1H),7.04(d,J＝8.4,1.8Hz,1H),4.96(t,J＝12.4Hz,2H),4.53(t,J＝12.4Hz,2H),4.11(s,3H),3.25–3.14(m,2H),3.01(s,4H),1.50(s,4H),1.22(t,J＝7.2Hz,3H),0.33(s,4H).
实施例45
N-(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-3-iodo-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-碘-1-甲基-1H-吲唑
将5-溴-1-甲基-1H-吲唑45a(2.00g,9.48mmol,市售)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中，加入N-碘代丁二酰亚胺(5.33g,23.69mmol)，氮气置换三次，反应于100℃反应18小时得到黄色悬浊液。质谱检测原料反应完全，产物生成。将反应液用水(150mL)稀释，乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-碘-1-甲基-1H-吲唑45b(2.20g)，产率：68.9％。
MS m/z(ESI):336.8/338.8[M+1]
第二步
5-bromo-3-(4,4-difluorocyclohex-1-en-1-yl)-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑
将5-溴-3-碘-1-甲基-1H-吲唑45b(1.00g,2.97mmol)溶于1.4-二氧六环(10mL)和水(3mL)溶液中，依次加入碳酸铯(2.90g,8.90mmol)，4,4-二氟环己-1-烯基硼酸频那醇酯45c(724.39mg,2.97mmol)和1,1-双(二苯基膦)二荗铁二氯化钯(430.71mg,2.97mmol)，氮气置换三次。反应于100℃下搅拌18小时。检测检测原料反应完全，将反应液倒入水(150mL)中，乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑45d(939.00mg)，产率：96.71％。
MS m/z(ESI):327.0/329.0[M+1]
第三步
tert-butyl(3-(4,4-difluorocyclohex-1-en-1-yl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将5-溴-3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑45d(939.00mg,2.87mmol)溶于1.4-二氧六环(10mL)溶液中，依次加入碳酸铯(2.81g,8.61mmol)，氨基甲酸叔丁酯 (336.22mg,2.87mmol)，2-二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(273.64mg,0.57mmol)和三(二亚苄基-丙酮)二钯(262.82mg,0.28mmol)，氮气置换三次后。反应于100℃反应18小时，质谱检测原料反应完全。将反应液倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯45e(896.00mg)，产率：85.91％。
MS m/z(ESI):364.2[M+1]
第四步
tert-butyl(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯45e(100.00mg,0.28mmol)溶于甲醇(10mL)溶液中，加钯碳(38.64mg,0.27mmol)，氢气置换三次后。反应于氢气氛围下室温反应18小时，质谱检测原料反应完全。将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯45f(99.00mg)，直接用于下一步。
MS m/z(ESI):366.2[M+1]
第五步
3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
室温下，将(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯45f(99.00mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(1mL)溶液中，滴加三氟乙酸(0.5mL)。反应于25℃下反应0.5小时。质谱检测原料反应完全。将反应液减压浓缩，得到3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺45g(70.00mg)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):266.2[M+1]
第六步
N-(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺45g(70.00mg,0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(136.40mg,1.06mmol)，4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(98.22mg,0.29mmol)，(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(206.35mg,0.39mmol)，氮气置换三次后。反应于25℃反应18小时，质谱检测原料反应完全。将反应液倒入(100mL)水中，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制 备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺45(53.05mg)，产率：34.33％。
MS m/z(ESI):586.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),10.19(s,1H),8.38(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.64–7.56(m,2H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.04(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),3.97(s,3H),3.26–3.15(m,3H),2.98(t,J＝5.0Hz,4H),2.04(ddt,J＝34.3,23.0,9.5Hz,8H),1.53(s,4H),1.21(t,J＝7.3Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例46
N-(3-cyclopropyl-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
3-cyclopropyl-1-methyl-5-nitro-1H-indazole
3-环丙基-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑
向3-溴-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑7b(100mg，0.390mmol)，环丙基硼酸46a(40mg，0.470mmol)和碳酸铯(382mg,1.17mmol)在二氧六环(1mL)和水(0.1mL)的悬浊液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(36mg,0.039mmol)和三环己基膦(22mg,0.078mmol),该反应液在100℃氮气保护下搅拌4小时，反应液减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到3-环丙基-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑46b(80mg)，产率：94％。
MS m/z(ESI):281.2[M+1]
第二步
3-cyclopropyl-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
向3-环丙基-1-甲基-5-硝基-1H-吲唑46b(80mg，0.368mmol)在乙醇(5mL)中的混合物中加入还原铁粉(165mg，2.95mmol)，将所得混合物在80℃下搅拌2小时，得到黑色悬浮液。过滤混合物并用乙酸乙酯(20mL×3)洗涤固体，在减压下将滤液浓缩至干，得到粗产物，粗产物加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-胺46c(55mg)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):188.1[M+1]
第三步
N-(3-cyclopropyl-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
向3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-胺46c(35mg，0.187mmol)，4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(63mg，0.187mmol)和N,N-二异丙基乙胺(60mg，0.467mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的溶液中加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(107mg，0.280mmol)，将所得混合物在50℃下搅拌2小时。将混合物倒入水(20mL)中，并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-环丙基-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺46(7.04mg)，产率：7.42％。
MS m/z(ESI):508.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),10.86–9.73(m,1H),8.39(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(dd,J＝8.8,1.7Hz,1H),7.15(d,J＝1.6Hz,1H),7.02(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),3.916(s,3H),3.17(q,J＝7.2Hz,2H),2.99(t,J＝4.8Hz,4H),2.23–2.13(m,1H),1.53(s,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H),1.02–0.96(m,2H),0.95–0.90(m,2H),0.34(s,4H).
实施例47
N-(3-(cyclopropylmethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-N-methoxy-N-methyl-1H-indazole-3-carboxamide
5-溴-N-甲氧基-N-甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺
将5-溴-1H-吲唑-3-羧酸47a(2.00g,8.30mmol,市售)和二甲羟胺盐酸盐(1.13g,11.62mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)溶液中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.39g,12.45mmol)，4-二甲氨基吡啶(1.52g,12.45mmol)，氮气置换三次后，反应于25℃反应18小时。质谱检测原料反应完全，将反应液用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-N-甲氧基-N-甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺47b(2.20g)，产率：93.33％。
MS m/z(ESI):284.0/286.0[M+1]
第二步
5-bromo-N-methoxy-N,1-dimethyl-1H-indazole-3-carboxamide
5-溴-N-甲氧基-N,1-二甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺
室温下，将5-溴-N-甲氧基-N-甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺47b(2.20g,7.74mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中，加氢化钠(402.87mg,15.49mmol)，氮气置换三次后，反应于25℃搅拌0.5小时。随后冰浴下滴加碘甲烷(1.65g,11.62mmol)，氮气置换三次，25℃反应1小时。质谱检测原料反应完全，将反应液用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-N-甲氧基-N,1-二甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺47c(1.61g)，产率：69.74％。
MS m/z(ESI):298.0/300.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.18(d,J＝1.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,1H),7.60(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),4.14(s,3H),3.78(s,3H),3.45(s,3H).
第三步
(5-bromo-1-methyl-1H-indazol-3-yl)(cyclopropyl)methanone
(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲酮
将5-溴-N-甲氧基-N,1-二甲基-1H-吲唑-3-甲酰胺47c(1.61g,5.40mmol)溶于四氢呋喃(15mL)溶液中，冰浴下滴加格氏试剂环丙基溴化镁(3.92g,27.00mmol)，氮气置换三次后。反应移至25℃搅拌1小时。质谱检测原料反应完全。将反应液倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲酮47d(1.22g)，产率：80.94％。
MS m/z(ESI):279.0/281.0[M+1]
第四步
(5-bromo-1-methyl-1H-indazol-3-yl)(cyclopropyl)methanol
(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲醇
将(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲酮47d(716.82mg,2.57mmol)溶于四氢呋喃(3mL)溶液中，冰浴下滴加硼烷-四氢呋喃(2.21g,25.68mmol)。氮气置换三次，反应于60℃下反应24小时，质谱检测原料反应完全。向反应液缓慢加入甲醇(30mL)淬灭硼烷，然后反应液减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲醇47e(700.0mg)，产率：96.95％。
MS m/z(ESI):281.0/283.0[M+1]
第五步
5-bromo-3-(cyclopropylmethyl)-1-methyl-1H-indazole
5-溴-3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑
将(5-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)(环丙基)甲醇47e(700.0mg,2.49mmol)溶于二氯甲烷(5mL)和三乙氧基硅烷(5mL)溶液中，冰浴下滴加三氟乙酸(2.5mL)。氮气置换三次，反应于25℃下反应3小时。质谱检测原料反应完全，产物生成。反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑47f(1.1g),粗品。
MS m/z(ESI):265.0/267.0[M+1]
第六步
tert-butyl(3-(cyclopropylmethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)carbamate
(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将5-溴-3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑47f(1.30g,3.43mmol)溶于1.4-二氧六环(5mL)溶液中，依次加入碳酸铯(3.35g,10.30mmol)，氨基甲酸叔丁酯(442.25mg,3.78mmol)，2- 二环己基膦-2’,4’,6’-三异丙基联苯(327.22mg,0.69mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(314.28mg,0.34mmol)。氮气置换三次，反应于100℃下反应18小时。质谱检测原料反应完全，产物生成。反应液冷却后倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯(60mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯47g(400.00mg)，产率：38.67％。
MS m/z(ESI):302.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.02(s,1H),7.67(s,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.9Hz,1H),3.69(s,3H),2.28–2.27(m,2H),1.26(s,9H),0.95(t,J＝7.1Hz,1H),0.28–0.21(m,2H),-0.01(q,J＝4.9Hz,2H).
第七步
3-(cyclopropylmethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-amine
3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺
将(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯47g(400.00mg,1.33mmol)溶于二氯甲烷(5mL)溶液中，缓慢滴加三氟乙酸(1mL)。反应置于25℃下反应1小时。质谱检测原料反应完全。反应液减压浓缩至干，得到3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺47h(320.00mg)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):202.2[M+1]
第八步
N-(3-(cyclopropylmethyl)-1-methyl-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-胺47h(32.00mg,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)溶液中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(821.94mg,6.36mmol)，4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(538.06mg,1.59mmol)，(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(1.24g,2.38mmol)。氮气置换三次后，反应于25℃反应18小时。质谱检测原料反应完全，产物生成。将反应液倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(环丙基甲基)-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺47(73.89mg)，产率：8.91％。
MS m/z(ESI):522.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),10.13(s,1H),8.32(s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.65–7.56(m,2H),7.18(s,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,1H),3.96(s,3H),3.20(q,J＝7.4Hz, 2H),2.99(s,4H),2.80(d,J＝6.8Hz,2H),1.53(m,4H),1.21(t,J＝7.4Hz,3H),1.15–1.04(m,1H),0.53–0.47(m,2H),0.34(s,4H),0.29–0.24(m,2H).
按照本发明实施例46-47的合成方法合成实施例48-51。实施例48-51的图谱参数如下表所示：
实施例52
N-(1-(cyanomethyl)-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-(氰甲基)-3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
2-(3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-5-nitro-1H-indazol-1-yl)acetonitrile
2-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1H-吲唑-1-基)乙腈
室温下，将3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基1H-吲唑13c(50.0mg,0.177mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，将溴乙腈(42.5mg,0.354mmol)和碳酸铯(115mg,0.354mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，100℃下反应18小时。将混合物过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到2-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1H-吲唑-1-基)乙腈52a(50.0mg)，产率：87.85％。
MS m/z(ESI):322.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(d,J＝2.0Hz,1H),8.34–8.30(m,1H),7.85(d,J＝9.2Hz,1H),5.71(s,2H),3.62–3.58(m,4H),2.24–2.13(m,4H).
第二步
2-(5-amino-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-1-yl)acetonitrile
2-(5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙腈
室温下，将2-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基-1H-吲唑-1-基)乙腈52a(40.0mg,0.125mmol)加入无水甲醇(1mL)中，将钯碳10％(13.3mg,0.125mmol)加入上述反应液，氢气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物过滤，减压浓缩得到2-(5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙腈52b(35.0mg)，产率：96.51％。
MS m/z(ESI):292.1[M+1]
第三步
N-(1-(cyanomethyl)-3-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-1H-indazol-5-yl)-4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(1-(氰甲基)-3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将2-(5-氨基-3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-1-基)乙腈52b(35.0mg,0.120mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(48.8mg,0.144mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，将(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(94.0mg,0.180mmol)和N,N-二异丙基乙胺(31.1mg,0.240mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，65℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到N-(1-(氰甲基)-3-(4，4-二氟哌啶-1-基)-1H-吲唑-5-基)-4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺52(5.00mg)，产率：6.8％。
MS m/z(ESI):612.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),10.16(s,1H),8.38–8.35(m,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.75–7.68(m,2H),7.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.05–7.01(m,1H),5.56(s,2H),3.55–3.49(m,4H),3.23–3.16(m,2H),3.01–2.95(m,4H),2.23–2.15(m,4H),1.58–1.47(m,4H),1.21(t,J＝7.6Hz,3H),0.34(s,4H).
按照本发明实施例52的合成方法合成实施例53。实施例53的图谱参数如下表所示：
实施例54
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(2-氧代-3-(2，2，2-三氟乙基)-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
tert-butyl(3-fluoro-4-nitrophenyl)carbamate
(3-氟-4-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将二碳酸二叔丁酯(21.0g,96.1mmol)，N,N-二异丙基乙胺(16.6g,128mmol)和4-二甲氨基吡啶(783mg,6.41mmol)加入到3-氟-4-硝基苯胺54a(10g,64.1mmol,市售)的二氯甲烷(200mL)溶液中，反应液25℃下反应16小时。反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-氟-4-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯54b(2.50g)，产率：15％。
MS m/z(ESI):257.0[M+1]
第二步
tert-butyl(4-nitro-3-((2,2,2-trifluoroethyl)amino)phenyl)carbamate
(4-硝基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将2,2,2-三氟乙基胺(2.90g,29.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.78g,29.3mmol)加入至(3-氟-4-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯54b(2.5g,9.76mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中,反应液在微波下反应2小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(50mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到(4-硝基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯54c(3.00g)，粗品直接用于下一步。MS m/z(ESI):334.0[M+1]
第三步
tert-butyl(4-amino-3-((2,2,2-trifluoroethyl)amino)phenyl)carbamate
(4-氨基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将钯碳(200.00mg,10％)加入至(4-硝基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯54c(3g,30％纯度)的甲醇(50mL)溶液中,用氢气球置换气体三次，然后室温下反应4小时。将反应液过滤，滤饼用甲醇(300mL)冲洗，滤液减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(4-氨基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯54d(800mg)，两步总产率：26.8％。
MS m/z(ESI):306.0[M+1]
第四步
tert-butyl(2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)carbamate
(2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将N,N'-羰基二咪唑(598mg,3.68mmol)加入到(4-氨基-3-((2,2,2-三氟乙基)氨基)苯基)氨基甲酸叔丁酯54d(750mg,2.46mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中，反应液在70℃下回流16小时。反应液减压浓缩，粗品用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯54e(683mg)，产率：84％。
MS m/z(ESI):332.0[M+1]
第五步
6-amino-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
6-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮
室温下，将(2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯54e(700mg,2.11mmol)加入到盐酸(4mol/L)的二氧六环溶液(10mL)中。反应液室温下反应4小时。反应液减压浓缩，得到6-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮54f(600mg,80％纯度)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):231.8[M+1]
第六步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(2-氧代-3-(2，2，2-三氟乙基)-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(185mg,0.487mmol)和N,N-二异丙基乙胺(83.86mg,0.649mmol)加入至6-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮54f(75mg,80％纯度)和4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸6i(115mg,0.324mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中。反应液在65℃下反应16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(15mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗产物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(2-氧代-3-(2，2，2-三氟乙基)-2，3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺54(35.9mg)，产率：20％。
MS m/z(ESI):568.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),11.10(s,1H),10.04(br s,1H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.82(s,1H),7.38–7.30(m,1H),7.20(d,J＝2.0Hz,1H),7.09–6.99(m,2H),4.96(s,1H),4.79–4.57(m,2H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.32(s,2H),3.07–2.87(m,4H),1.54(s,4H),0.34(s,4H).
实施例55
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-methyl-2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
1-methyl-5-nitro-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
1-甲基-5-硝基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮
25℃下,向N1-甲基-4-硝基-1,2-苯二胺55a(500mg,2.99mmol,市售)的四氢呋喃(15mL)溶液中加入N,N'-羰基二咪唑(582mg,3.59mmol)。60℃下反应2小时。将混合物过滤，滤渣用四氢呋喃(20mL)洗涤，干燥后得到1-甲基-5-硝基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮55b(500mg)，产率：86％。
MS m/z(ESI):194.0[M+1]
第二步
1-methyl-5-nitro-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮
25℃下,向1-甲基-5-硝基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮55b(250mg,1.29mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入碳酸铯(1.27g,3.88mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(601mg,2.59mmol)。25℃下反应18小时。将混合物倒入水(200mL)中并用乙酸乙酯(100mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用石油醚/乙酸乙酯(5:1,20mL)打浆，过滤后得到1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮55c(300mg)，产率：84％。
MS m/z(ESI):276.0[M+1]
第三步
5-amino-1-methyl-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
5-氨基-1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮
25℃下，将1-甲基-5-硝基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮55c(250mg,0.908mmol)加入无水甲醇(6mL)中，随后加入钯碳(104mg,0.984mmol)，氢气置换3 次，反应2小时。将混合物过滤后，滤液减压浓缩，得到5-氨基-1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮55d(200mg)，产率：90％。
MS m/z(ESI):246.0[M+1]
第四步
4-bromo-N-(1-methyl-2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
25℃下，将5-氨基-1-甲基-3-(2,2,2-三氟乙基)-1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮55d(200mg,0.816mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入4-溴-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(316mg,1.02mmol)，(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(639mg,1.22mmol)和N,N-二异丙基乙胺(422mg,3.26mmol)。65℃下反应2小时。将混合物倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺55e(400mg)，产率：91％。
MS m/z(ESI):537.2/539.2[M+1]
第五步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(1-methyl-2-oxo-3-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
25℃下，将4-溴-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺55e(200mg,0.372mmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(93mg,0.744mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，随后加入磷酸钾(158mg,0.744mmol),碘化亚铜(82.7mg,0.372mmol)和(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(26.5mg,0.186mmol)，氮气置换三次，90℃下反应2小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(1-甲基-2-氧代-3-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺55(90mg)，产率：42％。
MS m/z(ESI):582.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H),7.90(d,J＝1.6Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.23(d,J＝8.4Hz,1H),7.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.03(dd,J ＝8.4,2.0Hz,1H),4.76(q,J＝9.2Hz,2H),3.76(t,J＝6.4Hz,2H),3.36(s,3H),3.35-3.32(m,2H),2.98(t,J＝5.2Hz,4H),1.53(t,J＝5.2Hz,4H),0.34(s,4H).
实施例56
N-(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
5-bromo-N-(4,4-difluorocyclohexyl)-2-nitroaniline
5-溴-N-(4,4-二氟环己基)-2-硝基苯胺
将4-溴-2-氟-1-硝基苯56a(3.00g,13.64mmol,市售)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)，再加入碳酸铯(13.33g,40.91mmol)和4,4-二氟环己烷-1-胺盐酸盐56b(3.51g,20.45mmol,市售)到混合溶液中，氮气置换三次后，反应于20℃反应18小时。质谱检测原料反应完全。得到的产品倒入水中(150mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到5-溴-N-(4,4-二氟环己基)-2-硝基苯胺56c(3.50g)，粗品直接用于下一步。
MS m/z(ESI):335.0/337.0[M+1]
第二步
5-bromo-N1-(4,4-difluorocyclohexyl)benzene-1,2-diamine
5-溴-N1-(4,4-二氟环己基)苯-1,2-二胺
将5-溴-N-(4,4-二氟环己基)-2-硝基苯胺56c(3.50g,10.44mmol)溶于乙醇(10mL)和水(10mL)的混合溶液中，依次加入铁粉(1.75g,31.33mmol)和氯化铵(2.23g,41.77mmol)，反应于60℃反应2小时。质谱检测原料反应完全，将反应液用水(150mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-N1-(4,4-二氟环己基)苯-1,2-二胺56d(1.70g)，产率：53.34％。
MS m/z(ESI):305.0/307.0[M+1]
第三步
6-bromo-1-(4,4-difluorocyclohexyl)-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮
室温下，将N,N'-羰基二咪唑(873.55mg,5.39mmol)加到5-溴-N1-(4,4-二氟环己基)苯-1,2-二胺56d(1.37g,4.49mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液中，室温下反应3小时，质谱检测原料反应完全。将混合物倒入水中(100mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56e(1.34g)，产率：90.12％。
MS m/z(ESI):331.0/333.0[M+1]
第四步
5-bromo-3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
5-溴-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮
0℃下,向6-溴-1-(4,4-二氟环己基)-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56e(300mg,0.906mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入氢化钠(78.6mg,1.81mmol,60％纯度)和碘甲烷(257mg,1.81mmol)。25℃下反应18小时。将混合物加饱和氯化铵溶液(5mL)淬灭后，将混合物倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-溴-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56f(230mg)，产率：74％。
MS m/z(ESI):345.0/347.0[M+1]
第五步
tert-butyl
(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)carbamate
(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯
25℃下，将5-溴-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56f(50mg,0.145mmol)的1,4-二氧六环(3mL)溶液中加入氨基甲酸叔丁酯(33.94mg,0.290mmol)，碳酸铯(142mg,0.435mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(13.3mg,0.0145mmol)和2-二环己基膦 -2',4',6'-三异丙基联苯(20.7mg,0.0435mmol)。氮气置换三次，100℃下反应18小时。将混合物过滤后滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯56g(50mg)，产率：91％。
MS m/z(ESI):382.2[M+1]
第六步
5-amino-3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-1,3-dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one
5-氨基-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮
25℃下，将(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)氨基甲酸叔丁酯56g(50.0mg,0.131mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(4M,1mL)，25℃下反应2小时。将混合物减压浓缩，得到5-氨基-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56h(40.0mg)，粗品直接用于下一步
MS m/z(ESI):282.2[M+1]
第七步
4-bromo-N-(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-溴-N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
25℃下，将5-氨基-3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-1,3-二氢2H-苯并[d]咪唑-2-酮56h(50.0mg,0.178mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入4-溴-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸1e(82.7mg,0.267mmol)，(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(139mg,0.267mmol)和N,N-二异丙基乙胺(91.9mg,0.711mmol)。65℃下反应2小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-溴-N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺56i(50.0mg)，产率：49％。
MS m/z(ESI):573.3/575.3[M+1]
第八步
N-(3-(4,4-difluorocyclohexyl)-1-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)-4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
5℃下，将4-溴-N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺56i(50.0mg,0.0872mmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(21.8mg,0.174mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，随后加入磷酸钾(37.0mg,0.174 mmol),碘化亚铜(19.4mg,0.0872mmol)和(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(6.20mg,0.0436mmol)，氮气置换三次，90℃下反应2小时。将混合物倒入水中(50mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到N-(3-(4,4-二氟环己基)-1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺56(14.0mg)，产率：26％。
MS m/z(ESI):618.4[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),7.88–7.77(m,2H),7.43(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.21–7.11(m,2H),7.02(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.49-4.44(m,1H),3.76(t,J＝6.8Hz,2H),3.33(t,J＝6.8Hz,2H),3.31(s,3H),2.98(t,J＝5.2Hz,4H),2.42-2.39(m,2H),2.23–2.06(m,4H),1.83-1.80(m,2H),1.54(t,J＝5.2Hz,4H),0.34(s,4H).
按照本发明实施例54-56的合成方法合成实施例57-64。实施例57-64的图谱参数如下表所示：
实施例64
4-(ethylsulfonamido)-N-(4-oxo-5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-N-(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
(E)-6-bromochroman-4-one oxime
(E)-6-溴色满-4-酮肟
室温下，将6-溴色满-4-酮64a(5.00g,22.02mmol,市售)加入无水甲醇(50mL)中，随后加入无水醋酸钠(3.61g,44.04mmol)和盐酸羟胺(3.06g,44.04mmol)，氮气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(50mL)，混合物搅拌1小时后过滤，减压浓缩至干燥，得到(E)-6-溴色满-4-酮肟64b(5.00g)，产率：93.08％。
MS m/z(ESI):242.1[M+1]
第二步
7-bromo-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]oxazepin-4(5H)-one
7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮
室温下，将(E)-6-溴色满-4-酮肟64b(3.00g,12.39mmol)加入多聚磷酸(30mL)中,125℃下反应1小时。反应冷却并后入冰水(100mL)，混合物用二氯甲烷(30mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，产物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64c(500mg)，产率：16.67％。
MS m/z(ESI):242.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),7.24(d,J＝2.4Hz,1H),7.18–7.10(m,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),4.34(t,J＝5.6Hz,2H),2.73(t,J＝5.6Hz,2H).
第三步
7-bromo-5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]oxazepin-4(5H)-one
7-溴-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮
室温下，将7-溴-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64c(250mg,1.03mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，随后加入碳酸铯(673mg,2.07mmol)和2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(360mg,1.55mmol)，氮气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(20mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到7-溴-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64d(100mg)，产率：29.88％。MS m/z(ESI):324.0[M+1]
第四步
tert-butyl
(4-oxo-5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-yl)carbamate
(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将7-溴-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64d(100mg,0.309mmol)和氨基甲酸叔丁酯(43.4mg,0.370mmol)加入1,4-二氧六环(5mL)中，将2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(22.1mg,0.0463mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(28.3mg,0.0309mmol)和碳酸铯(201mg,0.617mmol)加入上述反应液，氮气置换三次，90℃下反应18小时。将混合物减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)氨基甲酸叔丁酯64e(70.0mg)，产率：62.96％。
MS m/z(ESI):361.3[M+1]
第五步
7-amino-5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]oxazepin-4(5H)-one
7-氨基-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮
室温下，将(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)氨基甲酸叔丁酯64e(70.0mg,0.194mmol)加入二氯甲烷(1mL)中，将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(1mL)加入上述反应液，25℃下反应18小时。将混合物减压浓缩至干燥，得到7-氨基-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64f(50.0mg)，产率：98.91％。
MS m/z(ESI):261.2[M+1]
第六步
4-(ethylsulfonamido)-N-(4-oxo-5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-N-(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将7-氨基-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64f(38.5mg,0.148mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(50.0mg,0.148mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，随后加入N,N-二异丙基乙胺(57.3mg,0.443mmol)和(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(154mg,0.295mmol)，氮气置换三次，70℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-(乙基磺酰胺基)-N-(4-氧代-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺64(20.0mg)，产率：23.31％。
MS m/z(ESI):581.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),10.18(s,1H),7.96(d,J＝2.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.62–7.54(m,1H),7.26–7.15(m,2H),7.06–7.00(m,1H),4.68–4.53(m,2H),4.46(t,J＝6.4Hz,2H),3.24–3.16(m,2H),3.03–2.92(m,4H),2.64(t,J＝6.8Hz,2H),1.60–1.42(m,4H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例65
4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)苯甲酰胺
第一步
5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-amine
5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-胺
室温下，将7-氨基-5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-4(5H)-酮64f(70.0mg,0.269mmol)加入硼烷四氢呋喃络合物(1mL)中氮气置换三次，65℃下反应18小时。将混合物过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析法纯化(洗脱剂：A体系)，得到5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-胺65a(40.0mg)，产率：60.39％。
MS m/z(ESI):247.2[M+1]
第二步
4-(ethylsulfonamido)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)-N-(5-(2,2,2-trifluoroethyl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]oxazepin-7-yl)benzamide
4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)苯甲酰胺
室温下，将5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-胺65a(40.0mg,0.163mmol)和4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸35e(50.0mg,0.148mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，随后加入N,N-二异丙基乙胺(57.3mg,0.443mmol) 和(7-氮杂苯并三唑-1-氧)三吡咯磷六氟磷酸盐(154mg,0.295mmol)，氮气置换三次，25℃下反应18小时。将混合物倒入水中(10mL)，混合物用乙酸乙酯(10mL×3)提取。合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％TFA+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-(乙基磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(5-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氢苯并[b][1,4]氧杂氮杂-7-基)苯甲酰胺65(25.0mg)，产率：29.86％。
MS m/z(ESI):567.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.55(s,1H),10.13(s,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.36(d,J＝2.4Hz,1H),7.32–7.27(m,1H),7.18(d,J＝2.4Hz,1H),7.06–7.00(m,1H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),4.10–3.98(m,4H),3.47–3.42(m,2H),3.22–3.15(m,2H),3.00–2.91(m,4H),2.04–1.96(m,2H),1.62–1.44(m,4H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H),0.34(s,4H).
实施例66
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(3-oxo-4-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
第一步
6-nitro-4-(2,2,2-trifluoroethyl)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-one
6-硝基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮
冰浴下，将双三甲基硅基胺基锂(1M,7.73mL)滴加到6-硝基-4H-1,4-苯并噁嗪-3-酮66a(1g,5.15mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中,冰浴下搅拌30分钟,加入2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯1b(1.43g,6.18mmol)，室温搅拌3小时。反应液用饱和的氯化铵溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到6-硝基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮66b(850mg)，产率：60％。
MS m/z(ESI):277.1[M+1]
第二步
6-amino-4-(2,2,2-trifluoroethyl)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-one
6-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮
室温下，将氯化铵(559.35mg,10.55mmol)和铁粉(589.38mg,10.55mmol)加入到6-硝基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮66b(291.46mg,1.06mmol)的水(20mL)和乙醇(20mL)混合溶液中，加热80℃搅拌2小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到6-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮66c(192mg)，粗产物直接用于下一步。
MS m/z(ESI):247.1[M+1]
第三步
4-iodo-N-(3-oxo-4-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-碘-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将6-氨基-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮66c(66.17mg,268.77μmol)，2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘-苯甲酸8a(80mg,223.97μmol)，1-甲基咪唑(55.84mg,671.92μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，室温搅拌10分钟，N,N,N’,N’-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(188.53mg,671.92μmol)加入其中，室温搅拌4小时。将反应液投入水中，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。粗产物用硅胶层析纯化(洗脱剂：A体系)，得到4-碘-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺66d(95mg)，产率：72％。
MS m/z(ESI):586.1[M+1]
第四步
4-((2-hydroxyethyl)sulfonamido)-N-(3-oxo-4-(2,2,2-trifluoroethyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-yl)-2-(6-azaspiro[2.5]octan-6-yl)benzamide
4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺
室温下，将4-碘-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺66d(95mg,162.29μmol)，2-羟基乙烷-1-磺酰胺1g(24.37mg,194.75μmol)，2-(甲氨基)乙酸(21.69mg,243.44μmol)，碘化亚铜(9.27mg,48.69μmol)和磷酸钾三水(129.66mg,486.88μmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氩气置换后加热100℃搅拌16小时。将反应液投入水中，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并的有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备液相分离(分离柱AKZONOBEL Kromasil；250×21.2mm I.D.；5μm，20mL/min；流动相A：0.05％NH4HCO3+H2O，流动相B：CH3CN)，得到4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-N-(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]恶嗪-6-基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺66(39mg)，产率：39％。
MS m/z(ESI):583.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.57(s,1H),10.13(s,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,1H),7.71(d,J＝2.2Hz,1H),7.55(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.19(d,J＝2.1Hz,1H),7.14–7.01(m,2H),4.90–4.72(m,3H),3.34(t,J＝6.5Hz,2H),3.0–2.95(m,4H),2.53–2.48(m,4H),1.60–1.42(m,4H),0.40–0.30(m,4H).
按照本发明实施例66的合成方法合成实施例67-73。实施例67-73的图谱参数如下表所示：
生物学评价
测试例1、本发明化合物对OVCAR-3细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对OVCAR-3细胞增殖的影响。OVCAR-3细胞(含有TP53R248Q突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中。细胞活力通过Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在1000nM-0.015nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养72小时。培养结束后，向每孔加入50uL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表1。
表1本发明化合物对OVCAR-3细胞增殖抑制的IC50数据
结论:：本发明化合物对于OVCAR-3细胞增殖IC50<50nM，具有显著的抑制作用。
备注：AMG 650的结构(根据公开专利WO2020132648A1，实施例4制备而得)如下：
测试例2、本发明化合物对HT-29细胞增殖抑制测定
以下方法用于测定本发明化合物对HT-29细胞增殖的影响。HT-29细胞(含有TP53R273H突变)购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，培养于含10％胎牛血清、100U青霉素和100μg/mL链霉素的McCOY's 5A培养基中。细胞活力通过Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，货号G7573)进行测定。
实验方法按照试剂盒说明书的步骤操作，简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为10mM贮存液，随后以培养基进行稀释，配制成测试样品，化合物的终浓度范围在1000nM-0.015nM。将处于对数生长期的细胞以1000个细胞每孔的密度接种至96孔细胞培养板中，在37℃，5％CO2培养箱中培养过夜，随后加入受试化合物后继续培养120小时。培养结束后，向每孔加入50uL体积的CellTiter-Glo检测液，震荡5分钟后静置10分钟，随后在酶标仪上使用Luminescence模式读取样品各孔发光值。通过与对照组(0.3％DMSO)的数值进行比较计算化合物在各浓度点的百分比抑制率，之后在GraphPad Prism 5软件中以化合物浓度对数-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物抑制细胞增殖的IC50值，见表2。
表2本发明化合物对HT-29细胞增殖抑制的IC50数据
结论:本发明化合物对于HT-29细胞增殖IC50<50nM，具有显著的抑制作用。
测试例3、本发明化合物对KIF18A酶活抑制的测试
以下方法用于测定本发明化合物在体外条件下对重组人源KIF18A酶活性的抑制程度。本方法使用Promega公司的ADP-GloTM Kinase Assay试剂盒(货号V9102)。详细实验操作可参考试剂盒说明书。
将实验流程简述如下：受试化合物首先溶解于DMSO中制备为贮存液，随后使用反应缓冲液A(15mM Tris,pH 7.5,10mM MgCl2,0.01％Pluronic F-68)进行梯度稀释，受试化合物在反应体系中的终浓度范围为10000nM～0.15nM；使用反应缓冲液B(15mM Tris,pH 7.5,10mM MgCl2,0.01％Pluronic F-68，37.5ug/ml tubulin，1.25uM paclitaxel)配置KIF18A蛋白和ATP工作液。反应在384孔微孔板中进行，首先向孔中加入化合物和重组人源KIF18A蛋白(终浓度100nM，委托金斯瑞表达)，并在室温下孵育20分钟，随后向反应液中加入ATP溶液(来自ADP-GloTM Kinase Assay试剂盒组分V915A，终浓度60uM)，并在室温下孵育20分钟。随后向反应体系中加入5μL ADP-Glo Reagent，并在室温下孵育50分钟。之后向反应体系中加入10μL Kinase Detection Reagent，并在室温下孵育30分钟。孵育结束后，在酶标仪以Luminescence模式测定各孔的化学发光强度值。通过与对照组(0.1％DMSO)的发光强度比值进行比较计算化合物在各浓度下的百分比抑制率，并通过GraphPad Prism 5软件以化合物浓度对数值-抑制率进行非线性回归分析，获得化合物的IC50值，见表3。
表3本发明化合物抑制KIF18A酶活性的IC50数据
结论:本发明化合物对于KIF18A酶活性抑制IC50<200nM，具有显著的抑制作用。
测试例4、本发明化合物的小鼠药代动力学测试
1、实验目的
以ICR小鼠为受试动物，采用LC/MS/MS法测定灌胃给与对照化合物AMG650与本发明化合物8、39和45后，测定其不同时刻血浆中的药物浓度，研究本发明化合物在小鼠体内的药代动力学特征。
2、实验方案
2.1实验药品与动物；
对照化合物AMG650、化合物8、39和45；
ICR小鼠，雄性，27.1-30.4g，购买于维通利华实验动物技术有限公司。
2.2药物配制
称取适量药物化合物，依次加入适量DMA,CrEL和5％GS，超声涡旋混匀，配制成1mg/mL的给药制剂。其中DMA,CrEL和5％GS＝10：10：80(v:v:v)。
2.3给药
ICR小鼠，每个待测化合物注射组(每组9只)，禁食过夜后灌胃给药(PO，化合物给药剂量为剂量10mg/kg，给药体积10mL/kg)，给药4小时后进食。
3、操作
于给药前和给药后0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、8小时、10小时和24小时经眼眶采约0.1mL血液，全血样品置于含EDTA-K2的抗凝管中。血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(离心条件：1500g，10分钟)。收集的血浆分析前存放于–40～–20℃。
用LC-MS/MS测定灌胃给药后小鼠血浆中待测化合物含量。
4、药代动力学参数结果
本发明的化合物的药代动力学参数如下表4所示。
表4本发明化合物的小鼠药代动力学参数
结论：本发明化合物8、39和45的血药浓度和曲线下面积均较高，具有较好的药代动力学性质。

Claims (17)

  1. 一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    其中：
    环A选自5～7元杂环基、C3-C6环烷基、5～7元芳基或5～7元杂芳基；
    X1、X2、X3各自独立地选自CRa或N原子，且X1、X2、X3中至多有两个原子同时为N原子；
    Ra选自氢原子、卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    L1选自键或C1-C6亚烷基，其中所述的亚烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基或烷氧基的取代基所取代，且其中所述的亚烷基的一个或多个亚甲基任选被一个或多个O、S(O)r、C(O)或NRb所替代；
    L2选自
    Rb选自氢原子或烷基；
    R1选自氢原子、氰基、卤素、烷基、羟基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    R2相同或不同，各自独立地选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基；其中所述的烷基或烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、烷基或烷氧基的取代基所取代；
    R3各自独立地选自氢原子或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基或烷氧基的取代基所取代；R3优选为氢原子；
    R4相同或不同，各自独立地选自氰基、卤素、烷基、烯基、炔基、羟基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5、-C(O)OR5、-NHC(O)R5、-NHC(O)OR5、-NR6R7、-C(O)NR6R7、-CH2NHC(O)OR5、-CH2NR6R7或-S(O)rR5；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自RA的取代基所取代；
    RA选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、OR8、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自氰基、卤素、烷基、羟基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-；
    R5各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    R6和R7各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    或者，R6和R7与它们相连接的原子一起形成一个4～8元杂环基，其中4～8元杂环基内含有一个或多个N、O或S(O)r，并且所述的4～8元杂环基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、＝O、-C(O)R8、-C(O)OR8、-OC(O)R8、-NR9R10、-C(O)NR9R10、-SO2NR9R10或-NR9C(O)R10的取代基所取代；
    R8、R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、氨基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；
    m为0，1或2；m优选为0；
    n为0，1，2，3或4；且
    r各自独立地为0，1或2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其为通式(II)或(III)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐：
    环A、R1、R3、R4、L1和n的定义如权利要求1中所述。
  3. 根据权利要求1或2任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中环A选自：
  4. 根据权利要求1～3任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中：
    L1选自键或C1-C6亚烷基，其中所述的亚烷基任选进一步被一个或多个羟基取代，且其中所述的亚烷基的一个或多个亚甲基任选被一个或多个O、S(O)r、C(O)或NRb所替代；
    r为2；
    Rb选自氢原子或甲基。
  5. 根据权利要求4所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中L1选自键、-NHSO2CH2CH2-、-NHSO2CH2CH2O-、-NHSO2CH2CH2NH-、-SO2NHCH2CH2-、-SO2-、-CH2SO2-、-NHSO2-、-SO2NH-、-NHC(CH3)2CH2-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)NHC(CH3)2CH2-、-C(O)N(CH3)CH2CH2-、-C(CH3)(OH)CH2-、-NHSO2CH(CH3)CH2-、-SO2NHC(CH3)2CH2-、-C(O)NH-、-NHCH2CH2或-CH2SO2CH2CH2-。
  6. 根据权利要求1～5任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R1选自氢原子、羟基、烷基、杂环基、环烷基或杂芳基，其中所述的烷基、杂环基、环烷基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基或烷基的取代 基所取代。
  7. 根据权利要求5～6任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中选自
  8. 根据权利要求1～7任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R3为氢原子。
  9. 根据权利要求1～8任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R4相同或不同，各自独立地选自卤素、烷基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-C(O)R5或-NR6R7；其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个RA取代；
    或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-。
    RA选自卤素、氰基、烷基、环烷基、杂环基、-OR8、-NR9R10，其中所述的烷基、环烷基、杂环基任选进一步被一个或多个选自卤素、卤代烷基的取代基所取代；
    R5各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、卤代环烷基、杂环基或卤代杂环基；
    R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、烷氧基、环烷基、卤代环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，
    R8各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、卤代环烷基、杂环基或卤代杂环基；
    R9和R10各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基
  10. 根据权利要求9所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中R4选自甲基、二氟甲基、环丙基、
    或者，两个R4与其所连接的同一个碳原子形成一个-C(O)-。
  11. 根据权利要求1～10中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，其中所述的化合物为：
  12. 一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～11中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，及可药用的 载体、赋形剂或它们的组合物。
  13. 根据权利要求1～11中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求12所述的药物组合物在制备KIF18A抑制剂中的用途。
  14. 根据权利要求1～11中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求12所述的药物组合物在制备治疗由KIF18A介导的疾病的药物中的用途，其中所述的由KIF18A介导的疾病优选为癌症。
  15. 根据权利要求14所述的用途，其中所述的癌症选自肝细胞癌、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、大肠癌和肺腺癌。
  16. 根据权利要求1～11中任何一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其可药用的盐，或根据权利要求12所述的药物组合物在制备治疗癌症药物中的用途。
  17. 根据权利要求16所述的用途，其中所述的癌症选自肝细胞癌、胶质母细胞瘤、结肠癌、乳腺癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌、卵巢癌、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、大肠癌和肺腺癌。
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