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CN119585409A - 用于液体配制品中酶稳定的烷醇胺甲酸盐 - Google Patents

用于液体配制品中酶稳定的烷醇胺甲酸盐 Download PDF

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CN119585409A
CN119585409A CN202380053645.9A CN202380053645A CN119585409A CN 119585409 A CN119585409 A CN 119585409A CN 202380053645 A CN202380053645 A CN 202380053645A CN 119585409 A CN119585409 A CN 119585409A
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methyl
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D·帕特瓦尔丹-胡贝尔
R·埃特尔
L·巴尔图利
S·沃尔韦茨
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BASF SE
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Abstract

用于使酶、优选地水解酶在液体环境中稳定的包含烷醇胺甲酸盐的酶制剂或洗涤剂配制品。在第一方面，本发明涉及液体酶制剂，其包含a)按重量计0.5％至15％的至少一种水解酶(EC 3)和b)按重量计2％至70％的至少一种烷醇胺甲酸盐。在另外的方面，本发明提供了一种液体洗涤剂配制品，其包含(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)、(B)按重量计4％至20％的烷醇胺甲酸盐和(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。

Description

用于液体配制品中酶稳定的烷醇胺甲酸盐
技术领域
本发明涉及液体配制品中酶稳定的技术领域。需要使液体配制品(LF)(诸如液体酶制剂(LEP)或液体洗涤剂配制品(LDF))中包含的酶稳定以避免功能丧失。因此，本发明提供了一种已经被识别为使酶、优选地水解酶在液体环境(例如液体酶制剂(LEP)和/或液体洗涤剂配制品(LDF))中稳定的化合物。进一步提供了制备这样的LEP或LDF的方法及其用途。
背景技术
在液体配制品中，酶倾向于是不稳定的并且在储存时易于丧失活性。因此，持续需要识别改进液体配制品中酶(尤其是水解酶，诸如蛋白酶)的稳定的化合物。通常，液体酶配制品含有稳定体系以改进酶稳定性。这些酶稳定剂通常含有昂贵的酶抑制剂，特别是当存在蛋白酶时。因此，需要识别改进液体配制品中酶的稳定的替代性化合物以减少或替代对昂贵的酶抑制剂的需求，尤其是当存在蛋白酶时。
对于LDF中酶稳定的特别挑战是包含在LDF中倾向于络合存在于所述配制品中的盐的阴离子化合物，诸如络合阴离子化合物(也称为助洗剂)和/或表面阴离子化合物(也称为阴离子表面活性剂)。然而，LDF中需要盐以使酶、优选地蛋白酶和/或脂肪酶稳定。通常，盐含量不能任意升高，因为，依赖于盐的类型，盐的饱和浓度可以在没有足够的酶稳定的情况下实现。常用盐是选自包含以下的盐的盐：
(a)单价阳离子，诸如Na+、K+和NH4 +，以及
(b)1-6个碳的单价有机阴离子，其优选地是1-6个碳的小单羧酸，诸如甲酸根、乙酸根、丙酸根或乳酸根。
甲酸钠被认为以相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计约0.1％至5％的量增加LDF中的枯草杆菌蛋白酶(subtilisin protease)稳定性。然而，在相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计约≥2.5％的浓度下，甲酸钠倾向于在LDF中沉淀或引起浑浊和相分离。当液体洗涤剂配制品的水含量相对于洗涤剂配制品的总重量低于按重量计50％时，尤其如此。因此，进一步提高甲酸钠的浓度不进一步增加枯草杆菌蛋白酶稳定性。
因此，本发明的额外的目的是找到一种盐，当以良好的稳定量使用时，其不仅改进LDF中酶诸如水解酶、优选地枯草杆菌蛋白酶和/或三酰甘油脂肪酶的稳定性，而且也不在LDF中沉淀。
发明内容
因此，为了解决以上所述，本发明提供了一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0，
其已经被识别为使水解酶在液体环境(例如液体酶制剂(LEP)和/或液体洗涤剂配制品(LDF))中稳定。
根据式(I)的化合物，如本文所描述的烷醇胺甲酸盐(AAF)，已经被额外地且出人意料地发现单独或与盐组合、优选地与相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计0.5％-2.5％的盐组合，当以良好的稳定量使用时，增加酶、优选地水解酶、甚至更优选地枯草杆菌蛋白酶和/或三酰甘油脂肪酶在LDF中的稳定性，而不将LDF内的总盐浓度增加至饱和浓度，因此不在LDF中沉淀，该盐选自包含以下的盐
(a)单价阳离子，诸如Na+、K+和NH4 +，以及
(b)1-6个碳的单价有机阴离子，其优选地是1-6个碳的小单羧酸，诸如甲酸根、乙酸根、丙酸根或乳酸根。
因此，在第一方面，本发明涉及液体酶制剂，其包含a)按重量计0.5％至15％的至少一种酶、优选地水解酶(EC 3)和b)按重量计2％至70％的至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物，其中水解酶的量是指100％活性水解酶。
在另外的方面，本发明提供了一种液体洗涤剂配制品，其包含(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种酶、优选地水解酶(EC 3)，(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物和(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。
具体实施方式
根据本发明，液体配制品(LF)意指包含至少一种水解酶(EC 3)和根据式(I)的化合物的产品，例如，液体酶制剂(LEP)或液体洗涤剂配制品(LDF)。根据本发明，液体配制品含有至少一种根据式(I)的化合物，导致所包含的至少一种水解酶的稳定。
因此，在一个实施例中，本发明涉及液体酶制剂(LEP)，其包含
a.按重量计0.5％至15％的至少一种酶、优选地水解酶(EC 3)，以及
b.按重量计2％至70％的至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
其中水解酶的量是指100％活性水解酶。
在另一方面，本发明涉及液体洗涤剂配制品(LDF)，其包含：
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种酶、优选地水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；以及
(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。
组分a./(A)–水解酶(EC 3)
本发明的液体配制品(LF)包含至少一种酶、优选地水解酶(EC 3)。
水解酶意指发挥酶活性的酶。酶活性与水解酶降解相应底物的能力有关。该至少一种水解酶优选地起源自发酵生产。
“发酵生产”意指培养重组细胞的过程，这些重组细胞在允许重组宿主细胞生长和表达期望水解酶的合适的水基营养培养基中表达期望水解酶。在发酵结束时，通常收集发酵液，并且将液体级分与固体级分分离。取决于水解酶是否已经分泌到液体级分中，可以从发酵液的液体级分或从细胞裂解物中回收期望的水解酶。期望的水解酶的回收使用本领域技术人员已知的方法。用于从发酵液回收水解酶的合适方法包括但不限于收集、离心、过滤、萃取和沉淀。
在一个实施例中，液体配制品含有“酶浓缩物”，意味着含有水解酶的发酵液已经被纯化和浓缩。液体酶浓缩物通常包含最高达按重量计40％或最高达按重量计30％或最高达按重量计25％的量的水解酶，全部相对于酶浓缩物的总重量。
由发酵产生的酶浓缩物包含水和潜在地另外的残留组分，诸如源自发酵培养基的盐、源自生产宿主细胞的细胞碎片、在发酵期间由生产宿主细胞产生的代谢物。残留组分可以以相对于酶浓缩物的总重量小于按重量计20％的量包含在液体酶浓缩物中。优选地，残留组分以小于按重量计10％、更优选地小于按重量计5％的量包含，全部相对于酶浓缩物的总重量。
在另一方面，液体配制品含有至少一种固体水解酶(EC 3)，其溶解于至少一种选自水和有机溶剂的溶剂中。优选地，所述液体配制品包含低于水解酶的饱和浓度的量的水解酶，意味着水解酶溶解于液体配制品中并且不发生沉淀。
水解酶可以是亲本水解酶或其变体。“亲本水解酶”或“亲本序列”(亲本蛋白质或多肽的)是用于向序列引入变化(例如，通过引入一个或多个氨基酸取代、插入、缺失、或其组合)的起始序列，产生亲本序列的“变体”。术语亲本酶(或亲本序列)包括野生型酶(序列)和合成生成序列(酶)，其用作起始序列用于引入(进一步)变化。术语“水解酶变体”或“序列变体”或“变体水解酶”是指其氨基酸序列在一定程度上与亲本水解酶不同的水解酶。如果没有另外指明，变体酶“具有酶活性”意指这种变体酶具有与相应亲本酶相同类型的酶活性。
在描述水解酶变体时，在与亲本序列相比时，通常发生取代、缺失和插入。在本文中使用本领域技术人员已知的命名法。氨基酸取代通常通过提供原始氨基酸，随后是氨基酸序列内的位置编号，随后是取代的氨基酸来描述。氨基酸缺失通常通过提供原始氨基酸，随后是氨基酸序列内的位置编号，随后是*来描述。氨基酸插入通常通过提供原始氨基酸，随后是氨基酸序列内的位置编号，随后是原始氨基酸和额外的氨基酸来描述。在可以在某个位置处引入不同的改变的情况下，这些不同的改变用斜线分隔。
在与亲本水解酶相比时，水解酶变体通常由其序列同一性来定义。序列同一性通常以“序列同一性％”或“同一性％”的形式提供。为了计算序列同一性，在第一步骤中，必须产生序列比对。根据本发明，必须产生成对的全局比对，这意指两个序列必须在它们的完整长度上进行比对，这通常通过使用被称为比对算法的数学方法产生。根据本发明，通过使用Needleman和Wunsch的算法(J.Mol.Biol.[分子生物学期刊](1979)48,第443-453页)生成比对。优选地，程序“NEEDLE”(欧洲分子生物学开放软件套件(EMBOSS))用于本发明的目的，其中使用程序默认参数(空位开放(gap open)＝10.0、空位延伸(gap extend)＝0.5以及矩阵＝EBLOSUM62)。根据本发明，应用以下％同一性的计算：同一性％＝(相同残基/显示完整长度的本发明的相应序列的比对区域的长度)*100。
根据本发明，水解酶变体被描述为与相应亲本水解酶的氨基酸序列具有至少n％同一性的氨基酸序列，其中“n”是在10与100之间的整数。在一个实施例中，当与亲本水解酶的全长氨基酸序列相比时，越来越优选地变体水解酶具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％同一性，其中酶变体具有酶活性。
“酶活性”通常与水解酶目标底物的降解有关。“酶活性”意指由水解酶发挥的催化效果，其通常以单位/毫克酶(比活性)表示，其与每个酶分子每分钟转化的底物分子(分子活性)有关。
在优选实施例中，水解酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、DNA酶、分散素(dispersin)、果胶酶和角质酶，优选地选自枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)和三酰甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)。
蛋白酶
蛋白酶(EPr)是酶类别EC 3.4的成员。蛋白酶包括氨基肽酶(EC 3.4.11，EPr1)、二肽酶(EC 3.4.13，EPr2)、二肽基-肽酶和三肽基-肽酶(EC 3.4.14，EPr3)、肽基-二肽酶(EC3.4.15，EPr4)、丝氨酸型羧肽酶(EC 3.4.16，EPr5)、金属羧肽酶(EC 3.4.17，EPr6)、半胱氨酸型羧肽酶(EC 3.4.18，EPr7)、ω肽酶(EC 3.4.19，EPr8)、丝氨酸内肽酶(EC 3.4.21，EPr9)、半胱氨酸内肽酶(EC 3.4.22，EPr10)、天冬氨酸内肽酶(EC 3.4.23，EPr11)、金属内肽酶(EC 3.4.24，EPr12)、苏氨酸内肽酶(EC 3.4.25，EPr13)、或未知催化机制的内肽酶(EC3.4.99，EPr14)。
蛋白酶意指发挥蛋白水解活性的酶。蛋白水解活性与蛋白酶降解蛋白质的能力有关。
蛋白酶可以是亲本酶或其变体，其中亲本蛋白酶包括野生型蛋白酶以及用于进一步突变的起始蛋白酶。变体蛋白酶意指突变的亲本蛋白酶。亲本蛋白酶以及变体蛋白酶必须具有蛋白水解活性才是根据本披露的蛋白酶。
当与亲本蛋白酶相比时，蛋白酶变体可以具有小于、基本上等于、或增加的蛋白水解活性。变体的蛋白水解活性优选地是相应亲本蛋白酶的蛋白水解活性的至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％。当与相应亲本蛋白酶相比时，变体的增加的蛋白水解活性意指大于100％、优选地至少105％的蛋白水解活性。
本文所披露的LEP或LDF可以包含至少一种选自丝氨酸蛋白酶(EC 3.4.21，EPr9)的蛋白酶。丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶的特征在于在催化活性位点具有丝氨酸，其在催化反应期间与底物形成共价加合物。在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自由以下组成的组的EPr9：胰凝乳蛋白酶(EPr9a；EC 3.4.21.1)、降钙因子(EPr9b；EC 3.4.21.2)、弹性蛋白酶(EPr9c；EC 3.4.21.36，EC 3.4.21.37，EC 3.4.21.70，EC 3.4.21.71)、颗粒酶(EPr9d；EC 3.4.21.78或EC 3.4.21.79)、激肽释放酶(EPr9e；EC 3.4.21.34，EC3.4.21.35，EC 3.4.21.118，EC 3.4.21.119)、血纤维蛋白溶酶(EPr9f；EC 3.4.21.7)、胰蛋白酶(EPr9g；EC 3.4.21.4)、凝血酶(EPr9h，EC 3.4.21.5)和枯草杆菌蛋白酶(EPr9i)。EPr9i也被称为枯草杆菌肽酶，例如EC 3.4.21.62，后者在后文中也被称为“枯草杆菌蛋白酶”。
枯草杆菌蛋白酶(EPr9i)和胰凝乳蛋白酶(EPr9a)是都具有包含天冬氨酸、组氨酸和丝氨酸的催化三联体的相关丝氨酸蛋白酶。在EPr9i中，这些氨基酸的相对顺序，从氨基末端至羧基末端读取，是天冬氨酸-组氨酸-丝氨酸。在EPr9a中，相对顺序是组氨酸-天冬氨酸-丝氨酸。已经识别了多种EPr9i，并且已经确定了许多枯草杆菌酶(subtilase)的氨基酸序列。对于此类枯草杆菌酶及其氨基酸序列的更详细描述，参考Siezen等人(1997),Protein Science[蛋白质科学]6:501-523。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种EPr9i，其是细菌枯草杆菌蛋白酶。所述细菌蛋白酶可以是革兰氏阳性细菌多肽，诸如芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、或链霉菌属(Streptomyces)蛋白酶，或革兰氏阴性细菌多肽，诸如弯曲杆菌属(Campylobacter)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(llyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、或脲原体属(Ureaplasma)蛋白酶。例如，由R.Bott和C.Betzel编辑的“Subtilisin enzymes[枯草杆菌蛋白酶酶]”,纽约,1996中第75-95页中，R.Siezen的“Subtilases:Subtilisin-like Proteases[枯草杆菌酶：类枯草杆菌蛋白酶的蛋白酶]”提供了该家族的综述。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自枯草杆菌蛋白酶的EPr9i，该枯草杆菌蛋白酶源自嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)、吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)。
具体地，至少一种EPr9i可以选自以下：来自解淀粉芽孢杆菌BPN'的枯草杆菌蛋白酶(由Vasantha等人(1984)J.Bacteriol.[细菌学期刊]第159卷,第811-819页和Wells等人(1983)在Nucleic Acids Research[核酸研究],第11卷,第7911-7925页描述)；来自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶(subtilisin Carlsberg[芽胞杆菌源枯草杆菌蛋白酶]；披露于Smith等人(1968)的J.Biol Chem[生物化学杂志],第243卷,第2184-2191页中，和Jacobs等人(1985)的Nucl.Acids Res[核酸研究],第13卷,第8913-8926页中)；枯草杆菌蛋白酶PB92(碱性蛋白酶PB92的原始序列在EP 283075A2中描述)；枯草杆菌蛋白酶147如WO 89/06279中所披露的枯草杆菌蛋白酶309(参见WO 89/06279的表I)；来自如WO 91/02792中披露的迟缓芽孢杆菌，诸如来自如WO 95/23221中所描述的迟缓芽孢杆菌DSM 5483或迟缓芽孢杆菌DSM 5483的变体的枯草杆菌蛋白酶；来自DE 10064983中披露的嗜碱芽孢杆菌(DSM 11233)的枯草杆菌蛋白酶；来自如WO 2003/054184中披露的吉氏芽孢杆菌(DSM 14391)的枯草杆菌蛋白酶；来自WO 2003/056017中披露的芽孢杆菌属(DSM14390)的枯草杆菌蛋白酶；来自WO 2003/055974中披露的芽孢杆菌属(DSM 14392)的枯草杆菌蛋白酶；来自WO 2003/054184中披露的吉氏芽孢杆菌(DSM 14393)的枯草杆菌蛋白酶；具有如WO 2005/063974中所描述的SEQ ID NO:4的枯草杆菌蛋白酶；具有如WO 2005/103244中所描述的SEQ ID NO:4的枯草杆菌蛋白酶；具有如WO 2005/103244中所描述的SEQID NO:7的枯草杆菌蛋白酶；以及具有如申请DE 102005028295.4中所描述的SEQ ID NO:2的枯草杆菌蛋白酶。
包含在LEP或LDF中的枯草杆菌蛋白酶的实例包括但不限于以下中所描述的变体：WO 92/19729、WO 95/23221、WO 96/34946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/11768、WO01/44452、WO 02/088340、WO 03/006602、WO 2004/03186、WO 2004/041979、WO 2007/006305、WO 2011/036263、WO 2011/036264和WO 2011/072099。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种枯草杆菌蛋白酶，其与如EP 1921147中所描述的根据SEQ ID NO:22的多肽序列(其是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的成熟碱性蛋白酶的序列；100％同一性的序列在本文中可以被称为BLAP WT)具有至少80％同一性。优选地，所述枯草杆菌蛋白酶在位置Asp32、His64和Ser221(根据BPN’编号)处没有突变。与如EP1921147中所描述的根据SEQ ID NO:22的多肽序列具有至少80％同一性的枯草杆菌蛋白酶在本文中可以被称为EPr9iA。
在一个实施例中，EPr9iA在位置101(优选地选自R101E、R101D和R101S)(根据BPN’编号)处至少具有取代。
在一个实施例中，EPr9iA具有一个或多个选自3T、4I、63A/T/R、156D/E、194P、199M、205I和217D/E/G的取代，任选地连同在位置101(选自R101E、R101D和R101S)处的取代，其中编号根据BPN’编号。
在一个实施例中，EPr9iA具有一个或多个选自S156D、L262E、Q137H、S3T、R45E/D/Q、P55N、T58W,Y,L、Q59D/M/N/T、G61D/R、S87E、G97S、A98D/E/R、S106A/W、N117E、H120V/D/K/N、S125M、P129D、E136Q、S144W、S161T、S163A/G、Y171L、A172S、N185Q、V199M、Y209W、M222Q、N238H、V244T、N261T/D和L262N/Q/D的取代，以及任选地在位置101(选自R101E、R101D和R101S)处的取代，并且其中编号根据BPN’编号。
在一个实施例中，本发明的LF包含
(A)至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA，其至少具有R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)，以及
(B)至少一种如本文所描述的根据式(I)的烷醇胺甲酸盐。
在一个实施例中，本发明的LEP包含
a.至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA，其至少具有R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)，以及
b.至少一种如本文所描述的根据式(I)的烷醇胺甲酸盐。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA，其至少具有R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)，以及
(B)至少一种如本文所描述的根据式(I)的烷醇胺甲酸盐，以及
(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。
在一个实施例中，组分a./(A)包含至少一种EPr9iA，其具有一个或多个选自3T、4I、63A/T/R、156D/E、194P、199M、205I和217D/E/G的取代，并且任选地进一步具有取代R101E或R101D或R101S，其中编号根据BPN’编号。
在一个实施例中，组分a./(A)包含至少一种EPr9iA，其具有一个或多个选自S156D、L262E、Q137H、S3T、R45E/D/Q、P55N、T58W/Y/L、Q59D/M/N/T、G61D/R、S87E、G97S、A98D,E,R、S106A/W、N117E、H120V/D/K/N、S125M、P129D、E136Q、S144W、S161T、S163A/G、Y171L、A172S、N185Q、V199M、Y209W、M222Q、N238H、V244T、N261T/D和L262N/Q/D的取代，并且任选地进一步具有取代R101E或R101D或R101S，其中编号根据BPN’编号。
在一个实施例中，组分a./(A)包含至少一种EPr9iA，其具有选自S3T+V4I+V205I、S3T+V4I+R101E+V205I和S3T+V4I+V199M+V205I+L217D(根据BPN’编号)的突变。
在一个实施例中，组分a./(A)包含至少一种EPr9iA，其具有突变S3T+V4I+S9R+A15T+V68A+D99S+R101S+A103S+I104V+N218D(根据BPN’编号)。
EPr9、优选地EPr9i、更优选地EPr9iA可以通过至少一种选自含硼稳定剂和肽稳定剂的酶稳定剂来稳定。
因此，在一个实施例中，除了至少一种蛋白酶之外，LEP或LDF还包含至少一种选自以下的含硼稳定剂(PSB)
(a)硼酸或其衍生物，
(b)硼酸或其衍生物，诸如芳基硼酸或其衍生物，
(c)(a)或(b)的盐，以及
(d)其混合物。
本文中的硼酸可以被称为原硼酸。在一个实施例中，含硼稳定剂选自由苯硼酸(BBA)(其也被称为苯基硼酸(PBA))、其衍生物及其混合物组成的组。
在一个实施例中，至少一种苯基-硼酸衍生物选自4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA，PSB1)、4-羧基苯基硼酸(4-CPBA，PSB2)、4-(羟基甲基)苯基硼酸(4-HMPBA，PSB3)和对甲苯基硼酸(p-TBA，PSB4)，其中PSB1是优选的。
因此，在一个实施例中，除了至少一种蛋白酶之外，LEP或LDF还包含至少一种为肽稳定剂(PSP)的酶稳定剂，该肽稳定剂优选地选自包含选自甘氨酸、缬氨酸、丙氨酸、酪氨酸和亮氨酸的三个氨基酸的三肽化合物。三肽稳定剂优选地选自肽醛、肽缩醛和肽醛亚硫酸氢盐加合物。通常，三肽稳定剂携带N-末端保护基团。优选地，三肽稳定剂选自包含甘氨酸-丙氨酸-酪氨酸(GAY，PSP1，优选地Z-GAY-H)和缬氨酸-丙氨酸-亮氨酸(VAL，PSP2，优选地Z-VAL-H)与N-末端保护基团诸如苄氧基羰基(Cbz)的组合的化合物。具有CbZ保护基团的三肽稳定剂VAL在本文中可以被称为Z-VAL。
在另一个实施例中，除了至少一种蛋白酶之外，LEP或LDF还包含至少一种为肽稳定剂(PSP)的酶稳定剂和至少一种为含硼稳定剂的稳定剂。
具体地，LDF可以包含以下组合(C-PrPS)之一：
id 实际组合
C-PrPS1 EPr9iA+PSB1
C-PrPS2 EPr9iA+PSB2
C-PrPS3 EPr9iA+PSB3
C-PrPS4 EPr9iA+PSB4
C-PrPS5 EPr9iA+PSP1
C-PrPS6 EPr9iA+PSP2
然而优选地，肽稳定剂是肽醛、肽醛亚硫酸氢盐加合物、或肽缩醛，优选地肽醛，最优选地Z-GAY-H或Z-VAL-H。优选地，C-PrPS1至C-PrPS6中的EPr9iA是在位置101(优选地选自R101E、R101D和R101S，优选地R101E)处至少具有取代的EPr9iA。在一个实施例中，C-PrPS6中的PSP2意指Z-VAL、优选地Z-VAL-H。
在一个实施例中，LEP或LDF包含多于一种蛋白酶。具体地，可以包含以下组合之一：
淀粉酶
淀粉酶意指发挥“淀粉分解活性”或“淀粉酶活性”的酶。淀粉分解活性与淀粉酶水解多糖中、优选地在内-位置处的糖苷键的能力有关。淀粉酶可以是亲本淀粉酶或其变体。亲本淀粉酶以及变体淀粉酶必须具有淀粉分解活性才是根据本发明的淀粉酶。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种α-淀粉酶(EC 3.2.1.1；Amyα)。优选地，LEP或LDF包含至少一种选自以下的Amyα：
·来自具有如WO 95/10603中所描述的SEQ ID NO:2和与其具有至少95％同一性的变体的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的淀粉酶(Amyα1)。WO 95/10603中描述了合适的变体，其包含以下位置处的一个或多个取代：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444，其具有淀粉分解活性。变体描述于WO 94/02597、WO 94/018314、WO 97/043424以及WO99/019467的SEQ ID NO:4中。
·来自具有如WO 02/10355中所披露的SEQ ID NO:6和与其具有至少95％同一性的变体的嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)的淀粉酶(Amyα2)。所述淀粉酶可以在C-末端处被截短(Amyα2a)。合适的SEQ ID NO:6的变体包括包含位置181和/或182处的缺失和/或位置193处的取代的那些。
·来自具有如WO 99/19467中所披露的SEQ ID NO:6和与其具有至少95％同一性的变体的芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)707的淀粉酶(Amyα3)。优选的SEQ NO:6的变体是在以下位置的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。
·来自具有如WO 96/23872中所描述的SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)的淀粉酶，本文中也描述为SP-722(Amyα4)。优选的变体描述于WO 97/3296、WO 99/194671及WO 2013/001078中。
·来自具有如WO 00/22103中所披露的SEQ ID NO:4和与其具有至少95％同一性的变体的芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)DSM 12649的淀粉酶(Amyα5)。
·来自芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)A 7-7(DSM 12368)的淀粉酶(Amyα6)，该芽孢杆菌属物种具有与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的氨基酸序列，特别是在根据SEQID NO:2的氨基酸32至516的区域上，如WO 02/10356中所披露的。
·来自具有如WO 2009/061380中所披露的SEQ ID NO:2和与其具有至少95％同一性的变体的芽孢杆菌属(Bacillus)菌株TS-23的淀粉酶(Amyα7)。
·来自具有如WO 2013/184577中所披露的SEQ ID NO:1和与其具有至少95％同一性的变体的噬细胞菌属物种(Cytophaga sp.)的淀粉酶(Amyα8)。
·来自具有如WO 2010/104675中所披露的SEQ ID NO:1和与其具有至少95％同一性的变体的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)DSM 90的淀粉酶(Amyα9)。
·来自包含如WO 00/60060中所描述的SEQ ID NO:2的氨基酸1至485和与其具有至少95％同一性的变体的芽孢杆菌属物种(Bacillussp.)的淀粉酶(Amyα10)。
·来自解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)或与其具有至少95％同一性的变体的淀粉酶(优选地选自如WO 2016/092009中所描述的根据SEQ ID NO:3的淀粉酶)(Amyα11)。
·具有如WO 2006/002643中所描述的SEQ ID NO:12的淀粉酶或与其具有至少95％同一性的淀粉酶变体(Amyα12)，其优选地包含所述SEQ ID NO:12内的取代Y295F和M202L/I/T/V。
·具有如WO 2011/098531中所描述的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与其具有至少95％同一性的淀粉酶变体(Amyα13)，其优选地包含所述SEQ ID NO:6内的一个或多个在选自193G/A/S/T/M、195F/W/Y/L/I/V、197F/W/Y/L/I/V、198Q/N、200F/W/Y/L/I/V、203F/W/Y/L/I/V、206F/W/Y/N/L/I/V/H/Q/D/E、210F/W/Y/L/I/V、212F/W/Y/L/I/V、213G/A/S/T/M和243F/W/Y/L/I/V位置处的取代。
·具有如WO 2013/001078中所描述的SEQ ID NO:1的淀粉酶或与其具有至少95％同一性的淀粉酶变体(Amyα14)，其优选地包含在两个或更多个(若干个)对应于所述SEQ IDNO:1内的位置G304、W140、W189、D134、E260、F262、W284、W347、W439、W469、G476和G477的位置处的改变。
·具有如WO 2013/001087中所描述的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与其具有至少95％同一性的淀粉酶变体(Amyα15)，其优选地包含所述SEQ ID NO:2内的位置181+182或182+183或183+184的缺失；任选地所述序列包含一个或两个或更多个在选自所述SEQ ID NO:2内的W140、W159、W167、Q169、W189、E194、N260、F262、W284、F289、G304、G305、R320、W347、W439、W469、G476和G477的任何位置处的修饰。
·淀粉酶，其是来自以上所提及的淀粉酶的杂合α-淀粉酶，如例如WO 2006/066594中所描述的(Amyα16)。
·根据WO 2014/183920，具有A和B结构域以及C结构域的杂合淀粉酶，该A和B结构域与WO 2014/183920的SEQ ID NO:2具有至少90％的同一性，该C结构域与WO 2014/183920的SEQ ID NO:6具有至少90％的同一性；优选地，杂合α-淀粉酶与WO 2014/183920的SEQ IDNO:23具有至少95％的同一性(Amyα17)。
·根据WO 2014/183921，具有A和B结构域以及C结构域的杂合淀粉酶，该A和B结构域与如WO 2014/183921中所披露的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:39具有至少75％的同一性，该C结构域与WO 2014/183921的SEQ ID NO:6具有至少90％的同一性；优选地，杂合α-淀粉酶与如WO 2014/183921中所披露的SEQ ID NO:30具有至少95％的同一性(Amyα18)。
·根据WO 2021/032881的杂合淀粉酶，其包含源自α淀粉酶(来自芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)A 7-7(DSM 12368))的A和B结构域以及源自α淀粉酶(来自蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus))的C结构域，其中杂合淀粉酶具有淀粉分解活性；优选地，A和B结构域与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少95％的同一性，并且C结构域与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少95％的同一性，两个序列均如WO 2021/032881中所披露；更优选地，杂合淀粉酶是如WO 2021/032881中所披露的SEQ ID NO:54(Amyα19)。
在一个实施例中，LEP或LDF包含多于一种Amyα。优选地，LEP包含两种或更多种选自Amyα3、Amyα6、Amyα10、Amyα13、Amyα14、Amyα15、Amyα17、Amyα18和Amyα19的Amyα。
在一个实施例中，LEP或LDF包含多于一种淀粉酶。具体地，可以包含以下组合之一：
脂肪酶
“脂肪酶”、“脂解酶”和“脂质酯酶”都是指EC类别3.1.1的酶(“羧酸酯水解酶”)。脂肪酶意指具有脂肪酶活性或脂解活性(三酰甘油脂肪酶，EC 3.1.1.3)、角质酶活性(EC3.1.1.74；具有角质酶活性的酶在本文中可以被称为角质酶)、甾醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蜡-酯水解酶活性(EC 3.1.1.50)的酶。脂肪酶可以是亲本脂肪酶或其变体。亲本脂肪酶以及变体脂肪酶必须具有脂肪酶活性才是根据本发明的脂肪酶。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自三酰甘油脂肪酶的脂肪酶(EC类别3.1.1.3)。优选地，三酰甘油脂肪酶选自绵毛嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosa)的脂肪酶。在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自根据US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269的三酰甘油脂肪酶及其变体，优选地当与US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269的全长多肽序列相比时具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的变体的脂肪酶(Lip1)。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种脂肪酶，该脂肪酶选自具有与US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％同一性的多肽序列、至少包含氨基酸取代T231R和N233R的脂肪酶(Lip1a)。当与US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269相比时，所述脂肪酶变体可以进一步包含以下氨基酸交换中的一种或多种：Q4V、V60S、A150G、L227G、P256K(Lip1b)。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种与WO 2015/010009的SEQ ID NO:1的氨基酸1-269的全长多肽序列具有至少95％的同一性的脂肪酶(Lip2)，其优选地至少包含氨基酸取代N11K+A18K+G23K+K24A+V77I+D130A+V154I+V187T+T189Q(Lip2a)或
N11K+A18K+G23K+K24A+L75R+V77I+D130A+V154I+V187T+T189Q(Lip2b)。
蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的组合
在一个实施例中，LEP或LDF包含选自蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的不同类型的水解酶的组合，优选地至少一种蛋白酶和至少一种淀粉酶、或至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶或至少一种蛋白酶、至少一种淀粉酶和至少一种脂肪酶的组合。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种淀粉酶、优选地至少一种EPr9和至少一种淀粉酶、更优选地至少一种EPr9i和至少一种Amyα。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶、优选地至少一种EPr9和至少一种Lip1、更优选地至少一种EPr9i和至少一种Lip1a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种脂肪酶、优选地至少一种EPr9和至少一种Lip2、更优选地至少一种EPr9i和至少一种Lip2a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种脂肪酶和至少一种淀粉酶、优选地至少一种Lip1和至少一种淀粉酶、更优选地至少一种Lip1a和至少一种Amyα。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种脂肪酶和至少一种淀粉酶、优选地至少一种Lip2和至少一种淀粉酶、更优选地至少一种Lip2a和至少一种Amyα。
具体地，LEP或LDF可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，组合C-Hyd172至C-Hyd190、C-Hyd200和C-Hyd210中的EPr9iA在位置101(优选地选自R101E、R101D和R101S)(根据BPN’编号)处至少具有取代。
在一个实施例中，组合C-Hyd172至C-Hyd190、C-Hyd200和C-Hyd210中的EPr9iA具有一个或多个选自3T、4I、63A/T/R、156D/E、194P、199M、205I和217D/E/G的取代，任选地连同在位置101(选自R101E、R101D和R101S)处的取代，其中编号根据BPN’编号。
在一个实施例中，组合C-Hyd172至C-Hyd190、C-Hyd200和C-Hyd210中的EPr9iA具有一个或多个选自S156D、L262E、Q137H、S3T、R45E/D/Q、P55N、T58W,Y,L、Q59D/M/N/T、G61D/R、S87E、G97S、A98D/E/R、S106A/W、N117E、H120V/D/K/N、S125M、P129D、E136Q、S144W、S161T、S163A/G、Y171L、A172S、N185Q、V199M、Y209W、M222Q、N238H、V244T、N261T/D和L262N/Q/D的取代，以及任选地在位置101(选自R101E、R101D和R101S)处的取代，并且其中编号根据BPN’编号。
组分b./(B)-烷醇胺甲酸盐
本发明的液体配制品(例如，LEP或LDF)包含至少一种根据式(I)的化合物，烷醇胺甲酸盐(AFF)：
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R2是H，其在本文中被称为AAF1。优选地，m、n、o是0(即AAF1a)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1、R2和R3是H，m和o是0，并且n是1(即AAF1b)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R2是H，R3是甲基，m和o是0，并且n是1(即AAF1c)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1是H并且R2是C2H4OH，其在本文中被称为AAF2。优选地，m、n、o各自单独地是0(即AAF2a)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R3是H，R2是C2H4OH，m是0，并且n和o是1(即AAF2b)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1是H，R2是C2H4OH，R3是甲基，m是0，并且n和o是1(即AAF2c)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R2是C2H4OH，其在本文中被称为AAF3。优选地，m、n、o是0(即AAF3a，也称为三乙醇胺甲酸盐)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R2是C2H4OH，R3是H，并且m、n、o都是1(即AAF3b)。
在一个实施例中，通式(I)中的R1和R2是C2H4OH，R3是甲基，并且m、n、o都是1(即AAF3c)。
组分a./(A)+组分b./(B)
根据本发明的LEP或LDF可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种选自AAF1b、AAF2b和AAF3b的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种蛋白酶和至少一种选自AAF1c、AAF2c和AAF3c的AAF。
具体地，LEP或LDF可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含组合C-Pr1至C-Pr44之一和至少一种选自AAF1a、AAF2a和AAF3a的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含组合C-Pr1至C-Pr44之一和至少一种选自AAF1b、AAF2b和AAF3b的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含组合C-Pr1至C-Pr44之一和至少一种选自AAF1c、AAF2c和AAF3c的AAF。
在一个实施例中，LEP或LDF包含
(A)至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA，其至少具有取代R101E或R101D或R101S(根据BPN’编号)，以及
(B)AAF3a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含
(A)至少一种EPr9iA，其具有一个或多个选自3T、4I、63A/T/R、156D/E、194P、199M、205I和217D/E/G的取代，任选地连同取代R101E或R101D或R101S(其中编号根据BPN’编号)，以及
(B)AAF3a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含
(A)至少一种EPr9iA，其具有一个或多个选自S156D、L262E、Q137H、S3T、R45E/D/Q、P55N、T58W/Y/L、Q59D,M,N,T、G61D/R、S87E、G97S、A98D/E/R、S106A/W、N117E、H120V/D/K/N、S125M、P129D、E136Q、S144W、S161T、S163A/G、Y171L、A172S、N185Q、V199M、Y209W、M222Q、N238H、V244T、N261T/D和L262N/Q/D的取代，以及任选地连同取代R101E或R101D或R101S(其中编号根据BPN’编号)，以及
(B)AAF3a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含
(A)至少一种EPr9iA，其具有选自S3T+V4I+V205I、S3T+V4I+R101E+V205I和S3T+V4I+V199M+V205I+L217D(根据BPN’编号)的突变的组合，以及
(B)AAF3a。
在一个实施例中，LEP或LDF包含
(A)至少一种EPr9iA，其具有突变S3T+V4I+S9R+A15T+V68A+D99S+R101S+A103S+I104V+N218D(根据BPN’编号)，以及
(B)AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种淀粉酶和至少一种选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种淀粉酶和至少一种选自AAF1b、AAF2b和AAF3b的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种淀粉酶和至少一种选自AAF1c、AAF2c和AAF3c的AAF。
具体地，LEP或LDF可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含组合C-Amyα1至C-Amyα171之一和至少一种选自AAF1a、AAF2a、AAF3a、AAF1b、AAF2b、AAF3b、AAF1c、AAF2c和AAF3c的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种脂肪酶和至少一种选自AAF1、AAF2和AAF3(优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a)的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种脂肪酶和至少一种选自AAF1b、AAF2b和AAF3b的AAF。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种脂肪酶和至少一种选自AAF1c、AAF2c和AAF3c的AAF。
具体地，LEP或LDF可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，LEP或LDF包含不同类型的水解酶的组合(优选地根据组合C-Hyd1至C-Hyd248之一)和至少一种选自AAF1、AAF2和AAF3(优选地选自AAF1a、AAF2a、AAF3a、AAF1b、AAF2b、AAF3b、AAF1c、AAF2c和AAF3c)的AAF。
优选地，LEP或LDF包含以下组合之一：
在一个实施例中，如以上所披露的LF280至LF469的组合进一步包含Lip1a。
在一个实施例中，如以上所披露的LF1至LF527的组合包含至少一种不同于蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的另外的水解酶。所述不同于蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的水解酶优选地选自纤维素酶和甘露聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种纤维素酶、优选地至少一种β-1,4-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)，其在本文中也被称为内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种特异腐质霉(Humicola insolens)DSM1800内切葡聚糖酶，其与WO 91/17244的图14A-E中所披露的氨基酸序列、优选地与根据氨基酸20-434的序列具有至少80％同一性。优选地，所述内切葡聚糖酶在选自182、223和231，最优选地选自P182S、A223V和A231V的位置处具有一个或多个取代。在一个实施例中，LF1至LF498包含至少一种与根据WO 95/02675的SEQ ID NO:2的多肽具有至少80％同一性的内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种与WO 2004/053039的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少80％同一性的芽孢杆菌属物种内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种与WO 2004/053039的SEQ ID NO:4的位置1至位置299的氨基酸序列具有至少80％同一性的太瑞斯梭孢壳霉(Thielaviaterrestris)内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种甘露聚糖酶、优选地至少一种β-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种选自GH5家族甘露聚糖酶的β-甘露聚糖酶。在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:12具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶。在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:16具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶。在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶。优选地，LF1至LF527包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:20的多肽序列具有95％同一性的甘露聚糖酶，该至少一种甘露聚糖酶具有至少一个选自A101V、E405G和Y459F的取代。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种源自木霉属(Trichoderma)生物体的β-甘露聚糖酶，诸如WO 93/24622中所披露的那些。优选地，至少一种β-甘露聚糖酶与WO2008/009673的SEQ ID NO:1具有80％同一性。更优选地，根据WO 2008/009673的SEQ IDNO:1的β-甘露聚糖酶包含至少一个选自S3R、S66P、N113Y、V181H、L207F、A215T和F274L的取代。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种具有与如WO 2018/185367中所披露的SEQ ID NO:16具有至少85％同一性的多肽序列的β-甘露聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种具有与如WO 2018/185367中所披露的SEQ ID NO:12具有至少85％同一性的多肽序列的β-甘露聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种具有与如WO 2018/185367中所披露的SEQ ID NO:20具有至少85％同一性的多肽序列的β-甘露聚糖酶。
在一个实施例中，LF1至LF527包含至少一种具有与如WO 2005/003319中所披露的SEQ ID NO:388具有至少85％同一性的多肽序列的β-甘露聚糖酶。
在一个实施例中，根据本发明的LEP基本上不含表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物。“基本上不含表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物”意指不有意地添加此种化合物，意味着含有优选地不超过0.5％、更优选地不超过0.01％、最优选地0％的表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物。表面活性阴离子化合物优选地意指阴离子表面活性剂。
络合阴离子化合物优选地意指柠檬酸盐和氨基羧酸盐。
在一个实施例中，根据本发明的LEP或LDF，优选地包含蛋白酶诸如LF1至LF90(优选地LF82至LF90)和LF280至LF489(优选地LF451至LF469、LF479和LF489)的那些，包含至少一种选自含硼稳定剂和肽稳定剂的酶稳定剂。
在一个实施例中，LF82至LF90包含4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)。优选地，LF82至LF90中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)。
在一个实施例中，LF451至LF469、LF479和LF489包含4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)。优选地，LF451至LF469、LF479和LF489中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S(根据BPN’编号)。
在一个实施例中，LF82至LF90包含Z-VAL、优选地Z-VAL-H。优选地，LF82至LF90中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S(根据BPN’编号)。
在一个实施例中，LF451至LF469、LF479和LF489包含Z-VAL、优选地Z-VAL-H。优选地，LF451至LF469、LF479和LF489中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)。
在优选实施例中，LEP包含减少量的选自含硼稳定剂和/或肽稳定剂的酶稳定剂。在优选实施例中，LEP基本上不含选自含硼稳定剂和肽稳定剂的酶稳定剂。“基本上不含酶稳定剂”意指不有意地向LEP中添加此种化合物，意味着含有优选地不超过0.5％、更优选地不超过0.01％、最优选地0％的酶稳定剂。
在优选实施例中，LEP包含越来越优选地不超过按重量计50％、40％、30％、20％、或15％的量的水。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含单价阳离子和1-6个碳、优选地C1-3个碳的单价阴离子的至少一种盐。优选地，单价阳离子选自Na+(SALT1)、K+(SALT2)和NH4 +(SALT3)。优选地，单价阴离子选自甲酸根(SALT#a)、乙酸根(SALT#b)、丙酸根(SALT#c)和乳酸根(SALT#d)。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自NaCl(SALT4)、KCl(SALT5)、CaCl2(SALT6)和Na2SO4(SALT7)的盐。
在一个实施例中，LF1至LF527包含甲酸钠(SALT1a)或SALT6。优选地，LF82至LF90中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S(根据BPN’编号)。优选地，LF451至LF469、LF479和LF489中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S(根据BPN’编号)。
在优选实施例中，LDF包含按重量计≤3％、优选地按重量计≤2％、更优选地按重量计≤1％的甲酸钠。
在一个实施例中，本发明的LEP或LDF包含至少一种选自水(SOL1)和有机溶剂的溶剂。在一个实施例中，相对于LEP的总重量，包含按重量计约30％至60％的量的有机溶剂。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种选自一元醇(SOL2)、二元醇(也称为二醇)(SOL3)、三元醇(也称为三醇)(SOL4)和糖醇(SOL5)的有机溶剂。
至少一种一元醇(SOL2)选自C2H6O、1-丙醇、丙-2-醇、1-丁醇、2-甲基-1-丙醇、丁-2-醇、乙二醇甲基醚、乙二醇乙基醚、乙二醇丙基醚和乙二醇苯基醚。
至少一种二元醇(SOL3)选自丁烷-1,3-二醇、戊烷-1,4-二醇、戊烷-1,5-二醇、戊烷-2,4-二醇、己烷-2,5-二醇、邻二醇(邻位C处的OH-基团；SOL3a)和α-ω二醇(位于直链分子(HO-R-OH)的末端之一处的OH-基团，SOL3b)。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种邻二醇(SOL3a)，其优选地选自乙-1,2-二醇、丙烷-1,2-二醇、丁烷-1,2-二醇、丁烷-2,3-二醇、戊烷-1,2-二醇、戊烷-2,3-二醇、己烷-2,3-二醇、己烷-3,4-二醇、庚烷-1,2-二醇、庚烷-2,3-二醇、庚烷-3,4-二醇、辛烷-1,2-二醇、辛烷-2,3-二醇、辛烷-3,4-二醇和辛烷-4,5-二醇。
在一个实施例中，LEP或LDF包含至少一种α-ω二醇(SOL3b)，其优选地选自丁烷-1,4-二醇、己烷-1,6-二醇、丙烷-1,3-二醇、2-(2-羟基乙氧基)乙醇、2-(2-丙氧基乙氧基)乙醇、2-(2-丁氧基乙氧基)乙醇和2-甲基-2,4-戊二醇。
作为三元醇(SOL4)，可以包含丙烷-1,2,3-三醇。
在一个实施例中，LEP包含至少一种糖醇(醛糖醇，SOL5)，诸如山梨糖醇、甘露糖醇和赤藓糖醇，其中山梨糖醇是优选的。
在一个实施例中，LF1至LF527包含SOL2(优选地乙二醇苯基醚)、SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL3b、SOL4或SOL5(优选地山梨糖醇)。在一个实施例中，LF1至LF527包含两种选自SOL2(优选地乙二醇苯基醚)、SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL3b、SOL4和SOL5(优选地山梨糖醇)的溶剂的混合物。优选地，LF82至LF90中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)。优选地，LF451至LF469、LF479和LF489中的至少一种丝氨酸蛋白酶EPr9iA至少具有取代R101E或R101D或R101S、优选地R101E(根据BPN’编号)。
在一个实施例中，LEP包含按重量计0.5％至15％、1％至15％、2％至15％、0.5％至10％、0.5％至8％、0.5％至6％、或2％至6％的至少一种水解酶。
在一个实施例中，LEP越来越优选地包含按重量计5％至70％、10％至70％、20％至70％、30％至70％、40％至70％、10％至60％、20％至60％、30％至60％、40％至60％、10％至55％、10％至50％、20％至50％、30％至50％或40％至50％的至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物。
在一个实施例中，LEP包含
a.按重量计0.5％至15％的如以上所披露的至少一种水解酶(EC 3)
b.按重量计2％至70％、优选地按重量计10％至50％的至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
约30％的至少一种选自SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL4和SOL5(优选地山梨糖醇)的溶剂。
在另一个实施例中，LEP包含
a.按重量计0.5％至15％的如以上所披露的至少一种水解酶(EC 3)
b.按重量计2％至70％、优选地按重量计10％至50％的至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物，
c.不超过按重量计15％的量的水，以及
d.约30％的至少一种选自SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL4和SOL5(优选地山梨糖醇)的溶剂。
在一个实施例中，LEP可以包含至少两种选自SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL4和SOL5(优选地山梨糖醇)的溶剂，其中SOL3a:SOL4或SOL3a:SOL5的重量比是2:1。
在一个实施例中，LEP包含如本文所描述的根据式(I)的组分作为有机溶剂，并且无如以上所披露的另外的有机溶剂。
因此，在优选实施例中，本发明涉及液体酶制剂(LEP)，其包含
a.按重量计0.5％至15％的至少一种水解酶(EC 3)，优选地选自蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶，最优选地如本文所描述的蛋白酶，以及
b.按重量计2％至70％、优选地按重量计20％-60％的至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；优选地其中化合物(b)是三乙醇胺甲酸盐，
其中水解酶的量是指100％活性水解酶；以及
优选地不超过按重量计15％的量的水，以及
优选地约30％的至少一种选自SOL3a(优选地丙烷-1,2-二醇)、SOL4和SOL5(优选地山梨糖醇)的溶剂；
并且优选地进一步包含至少一种选自单价阳离子和1-6个碳的单价阴离子的盐、NaCl、KCl、CaCl2和Na2SO4
其中LEP优选地不含表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物；以及
其中LEP优选地不含酶抑制剂、优选地不含含硼化合物和肽稳定剂。
如以上所描述的LEP可以根据以下方法制备：将至少一种水解酶(EC 3)与至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物混合。
在优选实施例中，用于制备LEP的方法包括将该至少一种水解酶与至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物混合，其中该至少一种水解酶在与该至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物混合之前包含在液体酶浓缩物中，其中液体酶浓缩物优选地源自发酵酶生产。
在优选实施例中，在与至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物混合之前，将该至少一种水解酶溶解于选自水和有机溶剂、优选地水的溶剂中。
在优选实施例中，使用至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物来提供液体酶制剂，当与缺少如本文所描述的根据式(I)的化合物的液体酶制剂相比时，其在其外观上是均匀的并且至少一种水解酶的稳定性增加。
在优选实施例中，包含在LEP或LDF中的一种如本文所描述的根据式(I)的化合物是三乙醇胺甲酸盐。
组分(C)–阴离子化合物
与LEP相比，LDF额外地包含至少5％的至少一种阴离子化合物。因此，根据本发明的LDF包含：
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；以及
(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。
优选地，所述LDF包含按重量计0.001％至0.4％、0.01％至0.2％、或0.01％至0.1％的至少一种水解酶。
优选地，所述LDF包含按重量计5％至20％、6％至20％、5％至18％、或5％至16％的至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物。
优选地，所述LDF包含按重量计5％至80％、10％至70％、20％至60％、或30％至50％的至少一种阴离子化合物。
优选地，所述LDF包含小于按重量计80％、优选地小于按重量计60％-70％、更优选地小于按重量计50％的量的水，全部相对于洗涤剂配制品的总重量。
所述LDF通常还包含至少一种选自流变改性剂、芳香剂和着色剂的化合物。
LDF可以根据以下方法制备：将至少一种水解酶(EC 3)与至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物和至少一种阴离子化合物在一个或多个步骤中混合，其中该至少一种水解酶优选地在与该至少一种阴离子化合物混合之前包含在液体酶制剂中。
在优选实施例中，使用至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物以使包含在包含至少一种选自表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物的阴离子化合物的液体洗涤剂配制品中的至少一种水解酶稳定，或提供液体洗涤剂配制品，当与缺少根据式(I)的化合物的液体洗涤剂配制品相比时，其在其外观上是均匀的并且具有至少一种水解酶的增加的稳定性。
在优选实施例中，描述了一种通过向含水解酶的液体洗涤剂配制品中添加至少一种如本文所描述的根据式(I)的化合物的步骤来改进液体洗涤剂配制品的去污力的方法，其中去污力优选地针对至少一种选自蛋白酶敏感性污渍、淀粉酶敏感性污渍和脂肪酶敏感性污渍的污渍得到改善。
洗涤剂组合物可以是液体和固体洗涤剂组合物的组合。液体洗涤剂组合物可以是凝胶洗涤剂组合物。
洗涤剂组合物可以是单位剂量或多剂量组合物。洗涤剂组合物可以呈小袋(包括多隔室小袋)的形式。洗涤剂组合物可以是适合用于家庭护理和/或工业与公共机构(industrial and institutional)(I&I)清洁的衣物或硬表面清洁组合物。优选地，硬表面清洁组合物可以是餐具洗涤剂组合物。硬表面清洁组合物可以是医疗清洁组合物、优选地医疗装置清洁组合物。硬表面清洁组合物可以是农用化学装置清洁组合物、优选地喷雾罐清洁组合物。衣物和餐具洗涤组合物两者可以呈手洗或自动洗涤组合物的形式。
因此，本发明因此还涉及一种用于清洁、优选地衣物或硬表面清洁的方法，其包括使受试物、优选地纺织品或硬表面与包含如本文所描述的组合物的组合物接触的步骤，优选地其中组合物包含至少一种额外的洗涤剂组分、优选地表面活性剂和/或助洗剂。
根据本发明的阴离子化合物包括但不限于表面活性阴离子化合物(也称为阴离子表面活性剂，C1)和络合阴离子化合物(也称为助洗剂，C2)。
组分(C1)–表面活性阴离子化合物
本文中的阴离子表面活性剂包括但不限于含有疏水基团和至少一个水溶性阴离子基团(通常选自硫酸根、磺酸根和羧酸根以形成水溶性化合物)的表面活性化合物。
AS1
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自通式(AS1)的化合物的阴离子表面活性剂：
通式(AS1)中的变量定义如下：
R1选自C1-C23-烷基和C2-C23-烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的；实例是n-C7H15、n-C9H19、n-C11H23、n-C12H25、n-C13H27、n-C14H29、n-C15H31、n-C16H33、n-C17H35、n-C18H37、i-C9H19、i-C12H25。
R2选自H、C1-C20-烷基和C2-C20-烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的。
R3和R4各自独立地选自C1-C16-烷基，其中烷基是直链(直链；n-)或支链的；实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、正己基、异己基、仲己基、正庚基、正辛基、2-乙基己基、正壬基、正癸基、异癸基。
A-选自-RCOO-、-SO3 -和-RSO3 -，其中R选自直链(直链；n-)或支链C1-C8-烷基和C1-C4羟基烷基。当A-是-SO3 -时，化合物可以被称为(脂肪)醇/烷基(乙氧基/醚)硫酸盐[(F)A(E)S]，当A-是-RCOO-时，化合物可以被称为(脂肪)醇/烷基(乙氧基/醚)羧酸盐[(F)A(E)C]。
M+选自H和盐形成阳离子。盐形成阳离子可以是单价或多价的；因此，M+等于1/v Mv +。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵，以及单-、二和三乙醇胺的铵盐。
通式(AS1)的整数定义如下：
m在零至200、优选地1-80、更优选地3-20的范围内；n和o各自独立地在零至100的范围内；n优选地在0至10、更优选地1至6的范围内；o优选地在1至50、更优选地4至25的范围内。m、n和o的总和至少是一，优选地m、n和o的总和在5至100的范围内、更优选地在从9至50的范围内。
通式(AS1)的阴离子表面活性剂可以具有任何结构、嵌段共聚物或无规共聚物。
在一个实施例中，LDF包含至少一种根据式(AS1)的阴离子表面活性剂，其中R1是n-C10至n-C18，R2是H，A-是SO3 -，m、n和o是0。M+优选地是Na+。此类化合物在本文中可以被称为仲烷烃磺酸盐(SAS)或链烷烃磺酸盐。
在一个实施例中，LDF包含至少一种根据式(AS1)的阴离子表面活性剂，其中R1是n-C11H23，R2是H，A-是SO3 -，m、n和o是0。M+优选地是NH4 +。此类化合物在本文中可以被称为月桂基硫酸铵(ALS)或AS1a。
在一个实施例中，LDF包含至少一种根据式(AS1)的阴离子表面活性剂，其中R1是n-C11H23，R2选自H，A-是SO3 -，m是2-5、优选地3，并且n和o是0。M+优选地是Na+。此类化合物在本文中可以被称为月桂基醚硫酸盐(LES)或月桂基醚硫酸钠(SLES)或AS1b。
另外的合适的阴离子表面活性剂包括C12-C18磺基脂肪酸烷基酯(诸如C12-C18磺基脂肪酸甲基酯)、C10-C18-烷基芳基磺酸(诸如n-C10-C18-烷基苯磺酸)和C10-C18烷基烷氧基羧酸酯的盐。
在一个实施例中，LDF包含至少两种阴离子表面活性剂，两者均选自通式(AS1a)的化合物，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R1是C11，R2是H，m是2，n和o＝0，A-是SO3 -，盐形成阳离子(M+)是Na+，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是C13，R2是H，m是2，n和o＝0，A-是SO3 -，M+是Na+。所述阴离子表面活性剂在本文中可以被称为AS1c。
AS2
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自通式(AS2)的化合物的阴离子表面活性剂：
其中式(AS2)中的R1是C10-C16烷基。LDF可以包含根据式(AS2)的化合物的盐、优选地钠盐。
在一个实施例中，根据式(AS2)的化合物意指苯基烷烃磺酸盐，其中R1是C12-、C13-、C14-、或C16-烷基。
在一个实施例中，LDF包含烷基苯磺酸盐。在一个方面，这意指根据式(AS2)的化合物，其中R1是支链C12烷基，其在本文中可以被称为BABS。在一个方面，这意指根据式(AS2)的化合物，其中R1是直链C12烷基，其在本文中可以被称为AS2a。
在一个实施例中，LDF包含至少两种阴离子表面活性剂，两者均选自通式(AS2)的化合物，其中所述阴离子表面活性剂之一的特征在于R1是C10，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是C13。所述组合在本文中可以被称为AS2b。在一个实施例中，所述化合物的所述钠盐包含在LDF中并且在本文中称为AS2c。
AS3
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自通式(AS3)的化合物(其可以被称为N-酰基氨基酸表面活性剂)的阴离子表面活性剂：
通式(AS3)中的变量定义如下：
R6选自直链(直链；n-)或支链C6-C22-烷基和直链(直链；n-)或支链C6-C22-烯基，诸如油烯基。
R7选自H和C1-C4-烷基。
R8选自H、甲基、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-(CH2)2C(O)NH2、-(CH2)2C(O)OH、(咪唑-4-基)-甲基、-CH(CH3)C2H5、-CH2CH(CH3)2、-(CH2)4NH2、苄基、羟基甲基、-CH(OH)CH3、(吲哚-3-基)-甲基、(4-羟基-苯基)-甲基、异丙基、-(CH2)2SCH3和-CH2SH。
R9选自–COOX和–CH2SO3X，其中X选自Li+、Na+和K+。
合适的N-酰基氨基酸表面活性剂的非限制性实例是N-酰基化谷氨酸的单羧酸盐和二羧酸盐(例如钠、钾、铵和单-、二和三乙醇胺的铵盐)，例如，椰油酰基谷氨酸钠、月桂酰基谷氨酸钠、肉豆蔻酰基谷氨酸钠、棕榈酰基谷氨酸钠、硬脂酰基谷氨酸钠、椰油酰基谷氨酸二钠、硬脂酰基谷氨酸二钠、椰油酰基谷氨酸钾、月桂酰基谷氨酸钾和肉豆蔻酰基谷氨酸钾；N-酰基化丙氨酸的羧酸盐(例如钠、钾、铵和单-、二和三乙醇胺的铵盐)，例如，椰油酰基丙氨酸钠和三乙醇胺月桂酰基丙氨酸盐；N-酰基化甘氨酸的羧酸盐(例如钠、钾、铵和单-、二和三乙醇胺的铵盐)，例如，椰油酰基甘氨酸钠和椰油酰基甘氨酸钾；N-酰基化肌氨酸的羧酸盐(例如钠、钾、铵和单-、二和三乙醇胺的铵盐)，例如，月桂酰基肌氨酸钠、肉豆蔻酰基肌氨酸钠、油酰基肌氨酸钠和月桂酰基肌氨酸铵。
AS4
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自皂(AS4)的组的阴离子表面活性剂。在一个实施例中，皂选自饱和和不饱和C12-C18脂肪酸(诸如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、(水合)芥酸)的盐。盐形成阳离子(M+)可以是单价或多价的；因此，M+等于1/vMv+。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵，以及单-、二和三乙醇胺的铵盐。
合适的皂的另外的非限制性实例包括衍生自天然脂肪酸诸如牛脂、椰子油、棕榈仁油、月桂油、橄榄油、或卡诺拉油的皂混合物。取决于皂所衍生自的天然脂肪酸，此类皂混合物包含不同量的月桂酸和/或肉豆蔻酸和/或棕榈酸和/或硬脂酸和/或油酸和/或亚油酸的皂。
合适的阴离子表面活性剂的另外的非限制性实例包括衍生自天然脂肪酸诸如牛脂、椰子油、棕榈仁油、月桂油、橄榄油、或卡诺拉油的硫酸盐、磺酸盐或羧酸盐。取决于皂所衍生自的天然脂肪酸，此类阴离子表面活性剂包含不同量的月桂酸和/或肉豆蔻酸和/或棕榈酸和/或硬脂酸和/或油酸和/或亚油酸的硫酸盐、磺酸盐、或羧酸盐。
A+B+C1
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS1，其优选地选自AS1a、AS1b和AS1c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS2，其优选地选自AS2a、AS2b和AS2c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS3和
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS4和
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少两种不同的阴离子表面活性剂和
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
优选地，至少两种不同的阴离子表面活性剂选自AS1c、AS2b和AS4。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS1，其优选地选自AS1a、AS1b和AS1c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS2，其优选地选自AS2a、AS2b和AS2c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS3和
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS4和
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少两种不同的阴离子表面活性剂和
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
优选地，至少两种不同的阴离子表面活性剂选自AS1c、AS2b和AS4。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS1，其优选地选自AS1a、AS1b和AS1c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS2，其优选地选自AS2a、AS2b和AS2c，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS3和
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种AS4和
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少两种不同的阴离子表面活性剂和
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
优选地，至少两种不同的阴离子表面活性剂选自AS1c、AS2b和AS4。
具体地，LDF可以包含以下组合(LDF)之一：
在一个实施例中，LDF1至LDF90中的EPr9i是在位置101(根据BPN’编号)(优选地选自R101E、R101D和R101S，优选地R101E)处至少具有取代的EPr9iA。
在一个实施例中，LDF包含以下组合之一：
在一个实施例中，LDF91至LDF126中的EPr9Ai在位置101(根据BPN’编号)(优选地选自R101E、R101D和R101S，优选地R101E)处至少具有取代。
在优选实施例中，LDF基本上不含选自含硼稳定剂和肽稳定剂的酶稳定剂。“基本上不含酶稳定剂”意指在液体洗涤剂配制品中酶与选自含硼稳定剂和肽稳定剂的酶稳定剂的摩尔比至少是高于1、更优选地高于5并且更优选地高于10。
组分(C2)–络合阴离子化合物
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0，以及
(C)至少一种络合阴离子化合物(C2)。
本文中的络合阴离子化合物(在本文中也称为“助洗剂(builder)”或“助洗剂(building agents)”)意指选自络合剂(螯合剂(chelating agents)、螯合剂(sequestrating agents))、沉淀剂和离子交换化合物的化合物，其可以与钙和镁形成水溶性络合物。术语不旨在将此类化合物在LDF的最终应用中限制为所述功能。
优选地，本文所披露的LDF基本上不含基于磷酸盐的助洗剂(PBB)。PBB包括但不限于偏磷酸钠、正磷酸钠、磷酸氢钠、焦磷酸钠、磷酸三钠、偏磷酸六钠和多聚磷酸盐，诸如三聚磷酸五钠(STP)。
“基本上不含PBB”意指不有意地向LDF中添加基于磷酸盐的助洗剂，通过重量测定法所确定的，优选地LDF中的PBB含量总计低于按重量计0.2％、优选地不超过10ppm。按重量计％相对于洗涤剂配制品的总重量。
在一个实施例中，LDF包含至少一种非基于磷酸盐的助洗剂(NPB)，其包括葡糖酸钠、一种或多种柠檬酸钠、一种或多种硅酸钠、一种或多种碳酸钠、一种或多种膦酸钠、一种或多种氨基羧酸钠、一种或多种聚羧酸钠、一种或多种聚磺酸钠和一种或多种聚膦酸钠。
柠檬酸盐(NPB1)
在一个实施例中，LDF包含一种或多种柠檬酸盐(NPB1)。NPB1包括单碱金属盐和二碱金属盐，并且特别是柠檬酸的单钠盐并且优选地三钠盐、柠檬酸的铵盐或取代的铵盐以及柠檬酸本身。柠檬酸盐可以被用作无水化合物或用作水合物，例如用作柠檬酸钠二水合物。
碳酸盐(NPB2)
在一个实施例中，LDF包含一种或多种碳酸盐(NPB2)。NPB2包括碱金属碳酸盐和碱金属碳酸氢盐，优选的是钠盐。特别合适的是碳酸钠(Na2CO3)。
氨基羧酸盐(NPB3)
在一个实施例中，LDF包含一种或多种氨基羧酸盐(NPB3或NPBAC)。NPB3或NPBAC包括但不限于：二乙醇甘氨酸(DEG)、二甲基甘氨酸(DMG)、次氮基三乙酸(nitrilitriaceticacid)(NTA)、N-羟基乙基氨基二乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、N-(2羟基乙基)亚氨基二乙酸(HEIDA)、羟基乙二胺三乙酸、N-羟基乙基-乙二胺三乙酸(HEDTA)、羟基乙二胺四乙酸、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)和甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-二乙酸(GLDA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、羟基亚氨基二琥珀酸、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、天冬氨酸-二乙酸及其碱金属盐或铵盐。另外的合适的是天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、N-(2-磺基甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺基乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺基甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺基乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺基甲基-N,N-二乙酸(SMDA)及其碱金属盐或铵盐。如在该上下文中所用的术语“铵盐”是指具有至少一个携带被永久地或暂时地季铵化的氮原子的阳离子的盐。携带至少一个被永久地季铵化的氮原子的阳离子的实例包括四甲基铵、四乙基铵、二甲基二乙基铵和n-C10-C20-烷基三甲基铵。携带至少一个被暂时地季铵化的氮原子的阳离子的实例包括质子化胺和氨，诸如单甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、单乙基铵、二乙基铵、三乙基铵、n-C10-C20-烷基二甲基铵2-羟基乙基铵、双(2-羟基乙基)铵、三(2-羟基乙基)铵、N-甲基2-羟基乙基铵、N,N-二甲基-2-羟基乙基铵，并且尤其是NH4 +。
优选地，LDF含有按重量计小于0.2％、或按重量计0.01％至0.1％的次氮基三乙酸(NTA)，全部相对于洗涤剂配制品的总重量。
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自亚氨基二琥珀酸(IDS；NPBAC1)、甲基甘氨酸二乙酸盐(MGDA，NPBAC2)、谷氨酸二乙酸盐(GLDA，NPBAC3)及其相应盐的化合物。
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自甲基甘氨酸二乙酸盐(MGDA)、谷氨酸二乙酸盐(GLDA)及其相应盐的氨基羧酸盐，例如其碱金属(诸如钠)盐，其量为相对于洗涤剂组合物的总重量在按重量计0.1％至25.0％的范围内、按重量计1.0％至18.0％的范围内、按重量计3.0％至15.0％的范围内、按重量计3.0％至10.0％的范围内、或按重量计5.0％至8.0％的范围内。MGDA和GLDA的合适的盐包括MGDA的三碱金属盐(式NPBAC2)和GLDA的四碱金属盐(式NPBAC3)：
[CH3-CH(COO)-N(CH2-COO)2]M3(NPBAC2)
[OOC-(CH2)2-CH(COO)-N(CH2-COO)2]M4(NPBAC3)
其中式(NPBAC2)和(NPBAC3)中的变量定义如下：
M选自相同或不同的碱金属阳离子，例如锂、钠、钾、铷、铯的阳离子和前述中至少两种的组合。碱金属阳离子的优选实例是钠和钾以及钠和钾的组合。更优选的是钠盐。
在一个实施例中，MGDA的碱金属盐选自[CH3-CH(COO)-N(CH2-COO)2]Na3-yHy和[CH3-CH(COO)-N(CH2-COO)2]Na3-x-y(NH4)xHy，其中：
x选自0.0至1.0、优选地0.1至0.5、更优选地0.1至0.3；
y选自0.0至1.0、优选地0.0005至0.5。
实例包括Na3-yHy、[Na0.7(NH4)0.3]3-yHy、[(NH4)0.7Na0.3]3-yHy。优选实例选自Na3-yHy。
在一个实施例中，MGDA选自外消旋MGDA的至少一种碱金属盐以及选自根据式(NPBAC2)的L-和D-对映异构体的混合物的碱金属盐，所述混合物主要含有相应的L-异构体，具有在从5％至99％、优选地5％至95％、更优选地从10％至75％并且甚至更优选地从10％至66％的范围内的对映异构体过量(ee)。
在一个实施例中，MGDA的总碱中和度在从0.80mol-％至0.98mol-％的范围内，优选的是0.90％至0.97％。总碱中和度不考虑用铵进行的任何中和。
在一个实施例中，GLDA的碱金属盐选自
[OOC-(CH2)2-CH(COO)-N(CH2-COO)2]Na4--yHy和[OOC-(CH2)2-CH(COO)-N(CH2-COO)2]M4-x-y(NH4)yHx，其中：
x选自0.0至2.0、优选地选自0.02至0.5、更优选地选自0.1至0.3，y选自0.0至1.0、优选地选自0.0005至0.5。
在一个实施例中，GLDA的碱金属盐可以选自根据式(NPBAC3)的L-和D-对映异构体的碱金属盐，所述混合物含有外消旋混合物或优选地主要含有相应的L-异构体，例如具有在从5％至99％、优选地5％至95％的范围内的对映异构体过量(ee)。
对映异构体过量可以例如通过测量偏振(偏振测定)或优选地通过色谱法，例如通过用手性柱(例如用一种或多种环糊精作为固定相)进行的HPLC来确定。优选的是通过用固定的光学活性铵盐(诸如D-青霉胺)进行的HPLC确定对映异构体过量。
通常，在本披露的上下文中，少量的MGDA和/或GLDA还可以携带除了碱金属之外的阳离子。因此，可以的是少量的助洗剂(诸如总助洗剂的0.01％至5mol-％)可以携带碱土金属阳离子(诸如，例如Mg2+或Ca2+)、或过渡金属阳离子(诸如，例如Fe2+或Fe3+阳离子)。本文中的MGDA和/或GLDA的“少量”是指相对于相应的助洗剂总计0.1％至1w/w％。
在一个实施例中，本发明的LDF包含多于一种氨基羧酸盐(NPB3)。具体地，LDF可以包含以下组合(C-NPBAC)之一：
id 实际组合
C-NPBAC1 NPBAC1+NPBAC2
C-NPBAC2 NPBAC1+NPBAC3
C-NPBAC3 NPBAC2+NPBAC3
C-NPBAC4 NPBAC1+NPBAC2+NPBAC3
A+B+C2
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB3，其优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
选自C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB3，其优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
选自C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
至少一种NPB3，其优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，
选自C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
在一个实施例中，助洗剂的以下组合(C-NPB)之一可以包含在本发明的LDF中：
在一个实施例中，LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，组合C-NPB1至C-NPB22中的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1、AAF2和AAF3，优选地选自AAF1a、AAF2a和AAF3a。
在一个实施例中，LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，组合C-NPB1至C-NPB22中的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1b、AAF2b和AAF3b。
在一个实施例中，LDF包含
至少一种EPr9、优选地至少一种EPr9i、更优选地至少一种EPr9iA，组合C-NPB1至C-NPB22中的至少一种，以及
至少一种AAF，其选自AAF1c、AAF2c和AAF3c。
具体地，LDF可以包含以下组合(LDF)之一：
在一个实施例中，LDF127至LDF207中的EPr9i是在位置101(根据BPN’编号)(优选地选自R101E、R101D和R101S，优选地R101E)处至少具有取代的EPr9iA。
在一个实施例中，LDF包含以下组合之一：
在一个实施例中，LDF208至LDF261中的EPr9Ai在位置101(根据BPN’编号)(优选地选自R101E、R101D和R101S，优选地R101E)处至少具有取代。
A+B+C1+C2
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
(C)至少5％的阴离子化合物，其中阴离子化合物包含至少一种阴离子表面活性剂(C1)和至少一种助洗剂(C2)。
组分(A)、(B)、(C1)和(C2)具有如以上所披露的优选。
在一个实施例中，本发明的LDF包含组合LDF1至LDF126中的至少一种，以及至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物。
在一个实施例中，本发明的LDF包含组合LDF1至LDF126中的至少一种，以及至少一种NPB2、优选地Na2CO3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含组合LDF1至LDF126中的至少一种，以及至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含组合LDF1至LDF126中的至少一种，以及组合C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4中的至少一种。
在一个实施例中，LDF包含组合LDF1至LDF126中的至少一种，以及组合C-NPB1-C-NPB22中的至少一种。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF28和至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF58和至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF88和至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF28和至少一种NPB2、优选地Na2CO3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF58和至少一种NPB2、优选地Na2CO3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF88和至少一种NPB2、优选地Na2CO3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF28和至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF58和至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF88和至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF28和组合C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4中的至少一种。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF58和组合C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4中的至少一种。
在一个实施例中，本发明的LDF包含LDF88和组合C-NPBAC1、C-NPBAC2、C-NPBAC3和C-NPBAC4中的至少一种。
在一个实施例中，LDF包含优选地选自LAS(直链烷基苯磺酸盐)或AES(烷基醚硫酸盐)的表面活性阴离子化合物和优选地选自柠檬酸盐(NPB1)和氨基羧酸盐(NPB3)的络合阴离子化合物。
因此，优选地，根据本发明的LDF包含：
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)、优选地如本文所描述的蛋白酶，
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物、优选地三乙醇胺甲酸盐；以及
(C)至少5％的至少一种阴离子化合物，其中阴离子化合物选自表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物，优选地其中表面活性阴离子化合物选自LAS或AES，并且优选地其中络合阴离子化合物选自柠檬酸盐(NPB1)和氨基羧酸盐(NPB3)；
其中优选地液体洗涤剂配制品包含按重量计≤3％、优选地按重量计≤2％的甲酸钠。
组分(D)–另外的洗涤剂组分
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
(C)至少一种阴离子化合物，其中阴离子化合物选自表面活性阴离子(C1)化合物和络合阴离子化合物(C2)，以及
(D)至少一种另外的洗涤剂组分。
组分(A)、(B)、(C1)和(C2)如以上所披露，具有如以上所披露的优选。
至少一种另外的洗涤剂组分可以选自：
·至少一种非离子表面活性剂(D1)
·至少一种额外的水解酶，其选自淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和甘露聚糖酶(D2)
·至少一种溶剂(D3)
·至少一种聚合物(D4)
·至少一种抗微生物剂(D5)
组分D1–非离子表面活性剂
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
(C)至少一种阴离子化合物，其中阴离子化合物选自表面活性阴离子(C1)化合物和络合阴离子化合物(C2)，以及
(D)至少一种非离子表面活性剂(D1)。
NIS1
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自通式(NIS1a)和(NIS1b)的化合物的非离子表面活性剂：
通式(NIS1a)和(NIS1b)的变量定义如下：
R1选自C1-C23烷基和C2-C23烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的；实例是n-C7H15、n-C8H17、n-C9H19、n-C11H23、n-C13H27、n-C15H31、n-C17H35、i-C9H19、i-C12H25。
R2选自H、C1-C20烷基和C2-C20烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的。
R3和R4各自独立地选自C1-C16烷基，其中烷基是直链(直链；n-)或支链的；实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、正己基、异己基、仲己基、正庚基、正辛基、2-乙基己基、正壬基、正癸基、异癸基。
R5选自H和C1-C18烷基，其中烷基是直链(直链；n-)或支链的。
通式(NIS1a)和(NIS1b)的整数定义如下：
m在零至200、优选地1-80、更优选地3-20的范围内；n和o各自独立地在零至100的范围内；n优选地在1至10、更优选地1至6的范围内；o优选地在1至50、更优选地4至25的范围内。m、n和o的总和至少是一，优选地m、n和o的总和在5至100的范围内、更优选地在从9至50的范围内。
根据式(NIS1a)的化合物在本文中可以被称为烷基聚乙二醇醚(AEO)。根据式(NIS1b)的化合物在本文中可以被称为烷基酚聚乙二醇醚(APEO)。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(NIS1a)的化合物的非离子表面活性剂，其中R1是n-C13H27，R2和R5是H，m是3-20，n和o＝0。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(NIS1a)的化合物的非离子表面活性剂，其中R1是直链或支链C10烷基，R2和R5是H，m是3-14，n和o＝0。
在一个实施例中，LDF包含至少两种非离子表面活性剂，两者均选自通式(NIS1a)的化合物，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R1是n-C15H31，R2和R5是H，m是9-80，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是n-C17 H35，R2和R5是H，m是9-80，n和o＝0。在一个实施例中，两种非离子表面活性剂中的m均是9-80、优选地25-80。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a1。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(NIS1a)的非离子表面活性剂，其中m在3至11、优选地不超过10、更优选地不超过7的范围内；n和o是0，R1是直链C9-C17烷基，R2和R5是H。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少两种非离子表面活性剂，两者均选自通式(NIS1a)的化合物，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R1是n-C12H25，R2和R5是H，m是3-30、优选地7，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是n-C14H29，R2和R5是H，m是3-30、优选地7，n和o＝0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a2。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少两种非离子表面活性剂，两者均选自通式(NIS1a)的化合物，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R1是n-C11H23，R2和R5是H，m是4-10，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R1选自n-C11H23和n-C17H35，R2和R5是H，m是4-10，n和o＝0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a3。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少两种非离子表面活性剂，两者均选自通式(NIS1a)的化合物，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R1是n-C9H19，R2和R5是H，m是5-7，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是n-C17H35，R2和R5是H，m是5-7，n和o＝0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a4。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少两种非离子表面活性剂，两者均选自通式(NIS1a)的化合物，其中所述非离子表面活性剂之一的特征在于R1是n-C11H23，R5是H，m是7，n和o＝0，并且另一种表面活性剂的特征在于R1是C13H27，R5是H，m是7，n和o＝0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a5。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种根据通式(NIS1a)的非离子表面活性剂，其中R1是C3至C18直链烷基，R2是H，R3和R4各自独立地选自
·甲基，其中n或o是2-25，或
·乙基，并且n或o是1-3，或
·丙基，并且n或o是1-3，
并且其中m+n+o等于5-50。在一个实施例中，R5是H。在一个实施例中，R5选自甲基、丁基、苄基和叔丁基。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a6。
通式(NIS1a)和(NIS1b)的非离子表面活性剂可以具有任何结构，其是嵌段或无规结构，并且不限于所显示的式(NIS1a)和(NIS1b)的序列。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种根据通式(NIS1a)的化合物，其中R2是H，m是10-50，R3是直链或支链C8-C12烷基，n是1或2，其中1是优选的，o是0或1并且R5是H。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种根据通式(NIS1a)的化合物，其中R2是H，m是10-50，R3是直链或支链C8-C12烷基，n是1或2，其中1是优选的，o是0或1并且R5是H。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自根据式(NIS1a)的化合物的非离子表面活性剂，其中R1是n-C8烷基，R2是H，R3是支链C11烷基，R5是H，m是22，n是1并且o是0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a7。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自根据式(NIS1a)的化合物的非离子表面活性剂，其中R1是n-C8烷基，R2是H，R3是支链C11烷基，R5是H，m是19，n是1并且o是0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a8。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自根据式(NIS1a)的化合物的非离子，其中R1是n-C8烷基，R2是H，R3是n-C8-C10烷基，R5是H，m是40，n是1并且o是0。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a9。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自根据式(NIS1a)的化合物的非离子表面活性剂，其中R1是n-C8烷基，R2是H，R3是甲基，R4是n-C10烷基，R5是H，m是22，n是1并且o是1。所述NIS在本文中可以被称为NIS1a10。
NIS2
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(NIS2)的化合物(其在本文中可以被称为烷基-多糖苷(APG))的非离子表面活性剂：
通式(NIS2)中的R1选自C1-C17烷基和C2-C17烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的；实例是n-C7H15、n-C9H19、n-C11H23、n-C13H27、n-C15H31、n-C17H35、i-C9H19、i-C12H25。
通式(NIS2)中的R2选自H、C1-C17烷基和C2-C17烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的。
通式(NIS2)中的G1选自具有4至6个碳原子的单糖，诸如葡萄糖和木糖。
通式(NIS2)的整数w在从1.1至4的范围内，w是平均数。
NIS3
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(NIS3)的化合物的非离子表面活性剂：
通式(NIS3)的变量定义如下：
AO选自环氧乙烷(EO)、环氧丙烷(PO)、环氧丁烷(BO)及其混合物。
R6选自C5-C17烷基和C5-C17烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的。
R7选自H、C1-C18烷基，其中烷基是直链(直链；n-)或支链的。
通式(NIS3)的整数y是在1至70、优选地7至15的范围内的数。
NIS4
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自脱水山梨糖醇酯(NIS4a)和/或乙氧基化(NIS4b)或丙氧基化(NIS4c)脱水山梨糖醇酯的非离子表面活性剂。非限制性实例是以商标名SPAN和TWEEN销售的产品。
NIS5
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自烷氧基化单烷基胺或二烷基胺(NIS5a)、脂肪酸单乙醇酰胺(FAMA，NIS5b)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA，NIS5c)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM，NIS5d)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM，NIS5e)、多羟基烷基脂肪酸酰胺(NIS5f)、或葡糖胺(NIS5g)的N-酰基N-烷基衍生物(诸如葡糖酰胺(GA)、脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))及其组合的非离子表面活性剂。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)至少一种丝氨酸蛋白酶，
(B)至少一种烷醇胺甲酸盐，
(C)至少一种阴离子表面活性剂(C1)和/或至少一种助洗剂(C2)，以及
(D)至少一种非离子表面活性剂(D1)，其选自NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4和NIS5。
优选地，相对于LDF的总重量，此种LDF包含范围从按重量计10％至30％、优选地按重量计12％至25％的量的C1。C2优选地以相对于LDF的总重量范围从按重量计1％至5％的量包含。D1优选地以相对于LDF的总重量范围从按重量计5％至15％的量包含。
在一个实施例中，LDF1至LDF261包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF28包含至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF58包含至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF88包含至少一种NPB1、优选地柠檬酸钠二水合物，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF28包含至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF58包含至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF88包含至少一种NPB2、优选地Na2CO3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF28包含至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF58包含至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，LDF88包含至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3。
在一个实施例中，LDF88包含至少一种NPB3，优选地选自NPBAC1、NPBAC2和NPBAC3，以及NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5。
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)至少一种丝氨酸蛋白酶，
(B)至少一种烷醇胺甲酸盐，
(C)至少一种助洗剂(C2)，以及
(D)至少一种非离子表面活性剂(D1)，其选自NIS1a1、NIS1a6、NIS1a7、NIS1a8、NIS1a9和NIS1a10。
优选地，此种LDF基本上不含C1。C2优选地以相对于LDF的总重量范围从按重量计5％至20％的量包含。D1优选地以相对于LDF的总重量低于按重量计5％的量包含。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含NIS1a1、NIS1a6、NIS1a7、NIS1a8、NIS1a9或NIS1a10，其中LDF127至LDF261基本上不含C1。
组分D2–另外的水解酶
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)、优选地如本文所描述的蛋白酶，
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
(C)至少一种阴离子化合物，其中阴离子化合物选自表面活性阴离子化合物(C1)和络合阴离子化合物(C2)，以及
(D)至少一种不同于水解酶EC 3的水解酶，优选地其中不同于水解酶EC 3的水解酶选自由如本文所描述的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、甘露聚糖酶组成的组，优选地其中水解酶EC 3是如本文所描述的蛋白酶并且不同于水解酶EC 3的水解酶优选地是淀粉酶、优选地至少一种α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。
优选地，LDF包含至少一种选自杂合淀粉酶的α-淀粉酶。在一个实施例中，LDF包含至少一种杂合淀粉酶，其与WO 2014/183920的SEQ ID NO:23具有至少95％同一性(Amy1)。在一个实施例中，LDF包含至少一种杂合淀粉酶，其与WO 2014/183921的SEQ ID NO:30具有至少95％同一性(Amy2)。在一个实施例中，LDF包含至少一种杂合淀粉酶，其与WO 2021/032881的SEQ ID NO:54具有至少95％同一性(Amy3)。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种杂合淀粉酶Amy1、Amy2或Amy3，并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含至少一种杂合淀粉酶Amy1、Amy2、或Amy3。所述LDF优选地基本上不含C1。在一个实施例中，所述LDF包含NIS1a1、NIS1a6、NIS1a7、NIS1a8、NIS1a9、或NIS1a10。
在一个实施例中，LDF包含至少一种脂肪酶、优选地至少一种如本文所描述的三酰甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)。
优选地，LDF包含至少一种三酰甘油脂肪酶，其与US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269具有至少80％同一性。在一个实施例中，所述脂肪酶至少包含氨基酸取代T231R和N233R(Lip1)。在一个实施例中，LDF包含至少一种脂肪酶，当与US5869438的SEQ ID NO:2的氨基酸1-269相比时，该脂肪酶包含T231R和N233R以及以下氨基酸交换中的一种或多种：Q4V、V60S、A150G、L227G、P256K。
在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2015/010009的SEQ ID NO:1的氨基酸1-269的全长多肽序列具有至少95％的同一性的脂肪酶，其优选地至少包含氨基酸取代N11K+A18K+G23K+K24A+V77I+D130A+V154I+V187T+T189Q(Lip2a)或
N11K+A18K+G23K+K24A+L75R+V77I+D130A+V154I+V187T+T189Q(Lip2b)。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种三酰甘油脂肪酶Lip1并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种三酰甘油脂肪酶Lip2a并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，LDF包含至少一种纤维素酶(D2c)，优选地至少一种β-1,4-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)，在本文中也称为内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LDF包含至少一种特异腐质霉(Humicola insolens)DSM 1800内切葡聚糖酶，其与WO 91/17244的图14A-E中所披露的氨基酸序列、优选地与根据氨基酸20-434的序列具有至少80％同一性(Cel1)。优选地，所述内切葡聚糖酶在选自182、223和231，最优选地选自P182S、A223V和A231V的位置处具有一个或多个取代。在一个实施例中，LDF包含至少一种与根据WO 95/02675的SEQ ID NO:2的多肽具有至少80％同一性的内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2004/053039的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少80％同一性的芽孢杆菌属物种内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2004/053039的SEQ ID NO:4的位置1至位置299的氨基酸序列具有至少80％同一性的太瑞斯梭孢壳霉(Thielavia terrestris)内切葡聚糖酶。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种内切葡聚糖酶Cel1并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个方面，LDF包含至少一种甘露聚糖酶、优选地至少一种β-甘露聚糖酶(EC3.2.1.78)。
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自GH5甘露聚糖酶家族的β-甘露聚糖酶。在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:12具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶(Man1)。在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ IDNO:16具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶(Man2)。在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:20具有至少90％同一性的β-甘露聚糖酶(Man3)。优选地，LDF包含至少一种与WO 2018/184767的SEQ ID NO:20的多肽序列具有95％同一性的甘露聚糖酶，该至少一种甘露聚糖酶具有至少一个选自A101V、E405G和Y459F的取代。
在一个实施例中，LDF包含至少一种具有与WO 2021/058452的SEQ ID NO:1的氨基酸29-324具有至少90％同一性的多肽序列的β-甘露聚糖酶(Man4)。
在一个实施例中，LDF包含至少一种源自木霉属(Trichoderma)生物体的β-甘露聚糖酶，诸如WO 93/24622中所披露的那些。优选地，至少一种β-甘露聚糖酶与WO 2008/009673的SEQ ID NO:1具有80％同一性(Man5)。更优选地，根据WO 2008/009673的SEQ IDNO:1的β-甘露聚糖酶包含至少一个选自S3R、S66P、N113Y、V181H、L207F、A215T和F274L的取代。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种β-甘露聚糖酶Man1、Man2、Man3、Man4、或Man5并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个方面，LDF1至LDF126包含至少一种DNA酶。
在一个实施例中，LDF包含至少一种与WO 2019/081724和WO 2019/081721的SEQID NO:1-24和SEQ ID NO:27-28具有至少80％同一性的DNA酶。优选地，LDF包含至少一种DNA酶，该至少一种DNA酶包含一个或两个选自WO 2019/081724的SEQ ID NO:25和SEQ IDNO:26的基序。
在一个实施例中，LDF包含至少一种DNA酶，该至少一种DNA酶包含一个或多个选自WO 2017/060493的SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75的基序。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含至少一种DNA酶并且任选地包含NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4、或NIS5和任选地如本文所披露的C2。
组分D3-溶剂
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，以及
(C)至少一种阴离子表面活性剂(C1)和/或至少一种助洗剂(C2)，以及
(D)至少一种溶剂(D3)，其选自水(SOL1)和有机溶剂。
优选地，至少一种有机溶剂选自水混溶性有机溶剂。有机溶剂的“水混溶性”意指有机溶剂与水混合以形成均匀溶液的特性。因此，在该上下文中的“溶液”意指两种或更多种有机溶剂在水中的均匀混合物。当溶液中的这些溶剂之一是水时，溶液可以被称为“水性溶液”。“均匀性”通常是指溶液或混合物内两种或更多种组分的均匀配制品。
在一个实施例中，LDF包含至少一种选自一元醇(SOL2)、二元醇(SOL3)、三元醇(SOL4)和糖醇(SOL5)的有机溶剂。
至少一种一元醇(SOL2)选自C2H6O、1-丙醇、丙-2-醇、1-丁醇、2-甲基-1-丙醇、丁-2-醇、乙二醇甲基醚、乙二醇乙基醚、乙二醇丙基醚和乙二醇苯基醚。
水混溶性SOL2优选地选自C2H6O和丙-2-醇。
至少一种二元醇(SOL3)选自丁烷-1,3-二醇、戊烷-1,4-二醇、戊烷-1,5-二醇、戊烷-2,4-二醇、己烷-2,5-二醇、邻二醇(邻位C处的OH-基团；SOL3a)和α-ω二醇(位于直链分子(HO-R-OH)的末端之一处的OH-基团，SOL3b)。
在一个实施例中，LDF包含至少一种邻二醇(SOL3a)，其优选地选自乙-1,2-二醇、丙烷-1,2-二醇、丁烷-1,2-二醇、丁烷-2,3-二醇、戊烷-1,2-二醇、戊烷-2,3-二醇、己烷-2,3-二醇、己烷-3,4-二醇、庚烷-1,2-二醇、庚烷-2,3-二醇、庚烷-3,4-二醇、辛烷-1,2-二醇、辛烷-2,3-二醇、辛烷-3,4-二醇和辛烷-4,5-二醇。
在一个实施例中，LDF包含至少一种α-ω二醇(SOL3b)，其优选地选自丁烷-1,4-二醇、己烷-1,6-二醇、丙烷-1,3-二醇、2-(2-羟基乙氧基)乙醇、2-(2-丙氧基乙氧基)乙醇、2-(2-丁氧基乙氧基)乙醇和2-甲基-2,4-戊二醇。
水混溶性SOL3优选地选自丁烷-1,3-二醇、丙烷-1,2-二醇、戊烷-1,4-二醇、戊烷-1,5-二醇、戊烷-2,4-二醇、丁烷-1,4-二醇和1,6-己烷二醇。
作为三元醇(SOL4)，可以包含丙烷-1,2,3-三醇。
在一个实施例中，LDF包含至少一种糖醇(醛糖醇，SOL5)，诸如山梨糖醇、甘露糖醇和赤藓糖醇，其中山梨糖醇是优选的。
此外，LDF可以包含至少一种选自化合物诸如2-丁氧基乙醇、异丙醇和d-柠檬烯的有机溶剂。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含SOL2、优选地乙二醇苯基醚。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含SOL3a、优选地丙烷-1,2-二醇。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含SOL4、优选地丙烷-1,2,3-三醇。
在一个实施例中，LDF1至LDF126包含SOL5、优选地山梨糖醇。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS1a2和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS1a3和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS1a4和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS1a5和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS2和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS3和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS4和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF1至LDF126包含NIS5和任选地如本文所披露的C2。
在一个实施例中，所述LDF进一步包含SOL1。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含SOL2、优选地乙二醇苯基醚。所述LDF优选地基本上不含C1。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含SOL3a、优选地丙烷-1,2-二醇。所述LDF优选地基本上不含C1。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含SOL4、优选地丙烷-1,2,3-三醇。所述LDF优选地基本上不含C1。
在一个实施例中，LDF127至LDF261包含SOL5、优选地山梨糖醇。所述LDF优选地基本上不含C1。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a1。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a6。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a7。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a8。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a9。
在一个实施例中，包含SOL2、SOL3a、SOL4、或SOL5的所述LDF127至LDF261包含NIS1a10。
在一个实施例中，所述LDF进一步包含SOL1。
组分D4-聚合物
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)，
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，
(C)至少一种阴离子表面活性剂(C1)和/或至少一种助洗剂(C2)，以及
(D)至少一种聚合物(D4)。
在一个实施例中，至少一种聚合物选自“聚羧酸酯”(其包括聚羧酸酯的盐)的组。盐形成阳离子可以是单价或多价的。合适的实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵，以及单-、二-和三乙醇胺的铵盐。
聚羧酸酯包括包含选自通式(CoC)的不饱和羧酸的单体的化合物：
通式(CoC)中的变量定义如下：
R1、R2和R3独立地选自H；直链或支链C1-C12烷基、直链或支链C2-C12烯基，其中烷基和/或烯基可以被以下取代：-NH2、-OH、或-COOH；-COOH；以及-COOR5，其中R5选自直链或支链C1-C12烷基和直链或支链C2-C12烯基。
R4可以是间隔基基团，其任选地选自–(CH2)n-(其中n在0至4的范围内)、-COO-(CH2)k-(其中k在1至6的范围内)、-C(O)-NH-和-C(O)-NR6-，其中R6选自直链或支链C1-C22烷基、直链或支链C2-C22烯基和C6-C22芳基。
合适的不饱和羧酸的非限制性实例包括丙烯酸、甲基丙烯酸、2-乙基丙烯酸、2-苯基丙烯酸、丙二酸、巴豆酸、马来酸(或马来酸酐)、富马酸、衣康酸、乌头酸、中康酸、柠康酸、山梨酸、肉桂酸、亚甲基丙二酸、不饱和C4-C10二羧酸及其混合物。
聚羧酸酯可以通过具有K-值来表征，即根据Fikentscher’s K-值确定的分子量，该K-值是经由在所定义的聚合物含量和所定义的粘度测量条件下的水性溶液的粘度所测量的值，并且因此与给定聚合物类别的聚合物的分子量相关。测量优选地根据ISO 1628-1进行。
聚羧酸酯可以通过其重均分子质量(Mw)来表征。优选地，Mw通过凝胶渗透色谱法使用标准方法来确定。实例包括具有在约500g/mol至约500,000g/mol的范围内、在约1,000g/mol至约100,000g/mol的范围内、或在约3,000g/mol至约80,000g/mol的范围内的重均分子量(Mw)的聚羧酸酯。
聚羧酸酯可以是具有作为根据式CoC的相同不饱和羧酸的重复单体的均聚物。此类均聚物在本文中可以被称为“HP”。
在一个实施例中，LDF包含至少一种丙烯酸的均聚物，在本文中其可以被称为“HP1”。本文中的HP1包括聚丙烯酸的盐。盐形成阳离子可以是单价或多价的，包括钠、钾、镁、钙、铵和单-、二-和三乙醇胺的铵盐，其中钠是优选的。因此，HP1可以通过盐形成完全地或仅部分地中和。
在一个实施例中，LDF包含至少一种HP1、优选地聚丙烯酸的钠盐，其具有在约800g/mol至约12,000g/mol的范围内、优选地在约900g/mol至约10,000g/mol的范围内、更优选地在约1,000g/mol至约9,000g/mol的范围内的重均分子质量(Mw；用凝胶渗透色谱法测量)。至少一种CoHP1可以具有选自约1,200g/mol(HP1a)、约2,500g/mol(HP1b)、约4,000g/mol(HP1c)和约8,500g/mol(HP1d)的平均摩尔质量。
在一个实施例中，LDF包含至少一种HP1、优选地聚丙烯酸的钠盐，其具有在约10至约50的范围内、优选地在约15至约30的范围内的K-值，其中K-值用蒸馏水中约1％干物质确定。至少一种HP1可以具有选自约15(HP1a)、约20(HP1b)、约25(HP1c)和约30(HP1d)的K-值。
在一个实施例中，LDF包含至少一种HP1。具体地，可以包含以下组合之一：
在一个实施例中，LDF262至LDF343中的EPr9iA是具有R101E的EPr9iA。
在一个实施例中，LDF262至LDF343进一步包含PSB1、PBS2、Amy1、Amy2、Amy3、Cel1、Lip1、或Lip2a。
在一个实施例中，LDF262至LDF343进一步包含Man1或Man2或Man3或Man4或Man5，优选地Man4。
在一个实施例中，LDF262至LDF343进一步包含至少一种选自NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4和NIS 5的NIS。
在一个实施例中，LDF包含以下组合之一：
在一个实施例中，LDF344至LDF432基本上不含阴离子表面活性剂。
在一个实施例中，LDF344至LDF432中的EPr9iA是具有R101E的EPr9iA。
在一个实施例中，LDF344至LDF432进一步包含PSB1、PSP2、Amy1、Amy2、或Amy3。
在一个实施例中，LDF344至LDF432进一步包含至少一种选自NIS1a1、NIS1a6、NIS1a7、NIS1a8、NIS1a9和NIS1a10的NIS。
在一个实施例中，LDF包含至少一种丙烯酸和马来酸的共聚物，在本文中其可以被称为“CP1”。本文中的CP1包括丙烯酸和马来酸的共聚物的盐。盐形成阳离子可以是单价或多价的，包括钠、钾、镁、钙、铵和单-、二-和三乙醇胺的铵盐，其中钠是优选的。因此，CP1可以通过盐形成完全地或仅部分地中和。
在一个实施例中，CP1包含按重量计50％至90％的丙烯酸和按重量计50％至10％的马来酸。
在一个实施例中，LDF包含至少一种CP1、优选地丙烯酸和马来酸的共聚物的钠盐，其具有在约30,000g/mol至约100,000g/mol的范围内、优选地在约50,000g/mol至约90,000g/mol的范围内、更优选地在约70,000g/mol至约85,000g/mol的范围内的重均分子质量(Mw；用凝胶渗透色谱法测量)。至少一种CP1可以具有约70,000g/mol的平均摩尔质量。
在一个实施例中，LDF包含至少一种CP1、优选地丙烯酸和马来酸的共聚物的钠盐，其具有在约10至约100的范围内、优选地在约30至约80的范围内、更优选地在约45至约60的范围内的K-值，其中K-值用蒸馏水中约1％干物质确定。至少一种CP1可以具有约55的K-值。
在一个实施例中，LDF包含至少一种由丙烯酸和至少一种疏水性单体组成的共聚物，在本文中其可以被称为“CP2a”。合适的疏水性单体是例如异丁烯，二异丁烯，丁烯，戊烯，己烯和苯乙烯，具有10个或更多个碳原子的烯烃或其混合物，例如像1-癸烯、1-十二碳烯、1-十四碳烯、1-十六碳烯、1-十八碳烯、1-二十碳烯、1-二十二碳烯、1-二十四碳烯和1-二十六碳烯，C22-α-烯烃，C20-C24-α-烯烃的混合物以及每分子平均具有12至100个碳原子的聚异丁烯。此类共聚物在本文中可以被称为CoCP2并且包括其部分地或完全地中和的形式。中和优选地通过使用合适的碱诸如NaOH或KOH以形成此种聚合物的碱金属盐来实现。
在一个实施例中，LDF包含至少一种由马来酸和至少一种如以上所披露的疏水性单体组成的共聚物。疏水性单体优选地选自由异丁烯、二异丁烯、丁烯、或其混合物组成的组。中和优选地通过使用合适的碱诸如NaOH或KOH以形成此种聚合物的碱金属盐来实现。
在一个实施例中，共聚物包含1:1的比率的马来酸和疏水性单体、优选地二异丁烯，在本文中其可以被称为“CP2b”。优选地，所述CP2b是马来酸和二异丁烯的共聚物的钠盐。CP2b可以具有在约20至约80的范围内、优选地在约0至约50的范围内、更优选地在约35至约45的范围内的K-值，其中K-值用蒸馏水中约1％干物质确定。
在一个实施例中，LDF包含至少一种由至少一种根据式CoC的单体和至少一种具有至少一个磺酸酯基团的单体组成的共聚物。所述共聚物在本文中可以被称为“CP3”并且优选地由丙烯酸和AMPS组成。本文中的CP3包括所述共聚物的盐。盐形成阳离子可以是单价或多价的，包括钠、钾、镁、钙、铵和单-、二-和三乙醇胺的铵盐，其中钠是优选的。因此，CP3可以通过盐形成完全地或仅部分地中和。
在一个实施例中，CP3包含按重量计约60％至80％的丙烯酸和按重量计20％至40％的AMPS。优选地，重量比丙烯酸:AMPS是约70:30。CP3可以具有约40的K-值。
在一个实施例中，LDF包含至少一种共聚物，该共聚物包含至少一种来自由如式CoC中所定义的不饱和羧酸组成的组的单体与至少一种选自具有羟基官能团或环氧烷基团的非离子单体的亲水性单体。此类共聚物在本文中可以被称为“CP4”并且包括所述聚合物的盐。盐形成阳离子可以是单价或多价的，包括钠、钾、镁、钙、铵和单-、二-和三乙醇胺的铵盐，其中钠是优选的。因此，CP4可以通过盐形成完全地或仅部分地中和。
具有羟基官能团或环氧烷基团的此类非离子单体的实例包括但不限于烯丙醇、异戊二烯醇、甲氧基聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚丙二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚丁二醇(甲基)丙烯酸酯、甲氧基聚(环氧丙烷-共聚-环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚丙二醇(甲基)丙烯酸酯、乙氧基聚丁二醇(甲基)丙烯酸酯和乙氧基聚(环氧丙烷-共聚-环氧乙烷)(甲基)丙烯酸酯。此处聚亚烷基二醇可以包含3个环氧烷单元(AO)至50个AO/分子、5个AO至40个AO/分子、或10个AO至30个AO/分子。
在一个实施例中，LDF包含至少一种聚羧酸酯，其通过烷氧基化诸如乙氧基化和/或丙氧基化衍生。此类聚羧酸酯在本文中可以被称为“CP5”。
烷氧基化聚羧酸酯包含具有一个乙氧基侧链/每2至8个丙烯酸酯单元的聚丙烯酸酯。在一个实施例中，烷氧基化聚羧酸酯包含具有一个乙氧基侧链/每7至8个丙烯酸酯单元的聚丙烯酸酯。侧链通过酯连接至聚丙烯酸酯“主链”以提供“梳状”聚合物型结构。分子量可以在约2,000g/mol至约50,000g/mol的范围内。
在一个实施例中，LDF包含至少一种两性聚合物，该两性聚合物包含
(a)至少一种烯键式不饱和羧酸，其选自丙烯酸和甲基丙烯酸，
(b)至少一种酰胺，其选自N-C1-C10-烷基(甲基)丙烯酰胺、丙烯酰胺和甲基丙烯酰胺，以及
(c)至少一种共聚单体，其选自DADMAC(聚二烯丙基二甲基氯化铵)、MAPTAC(3-甲基丙烯酰胺基-N,N,N-三甲基丙-1-氯化铵)和APTAC((3-丙烯酰胺基丙基)-三甲基氯化铵)。
此类两性聚合物在本文中可以被称为“CP6”。
在一个实施例中，LDF包含一种或多种选自聚天冬氨酸及其盐的组的化合物，其在本文中可以被称为“CP7”。盐形成阳离子可以是单价或多价的。合适的实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵，以及单-、二-和三乙醇胺的铵盐。
CP7可以由天冬氨酸、马来酸或马来酸酐或富马酸制备，使其反应以获得第一聚琥珀酰亚胺(其转而可以被水解为聚天冬氨酸或直接水解为聚天冬氨酸的盐)或直接获得聚天冬氨酸或直接获得其盐。优选的是使用L-天冬氨酸作为用于制备热聚天冬氨酸的唯一起始原料。
在一个方面，CP7包括通过天冬氨酸和其他羧酸诸如氨基酸的缩聚产生的化合物。在另一个方面，CP7包括通过天冬氨酸、二胺和氨基醇的缩聚产生的化合物。因此，CP7包括天冬氨酸的共聚物及其盐。
在一个实施例中，LDF包含一种或多种选自烷氧基化聚亚烷基亚胺或烷氧基化多胺的组的化合物，其在本文中可以被称为“CP8”。“CP8”还包括WO 2021/165468中、特别是WO2021/165468的权利要求1中和第2至4页上所披露的结构，以及通过分别在WO 2022/136408中和WO 2022/136409中、特别是在WO 2022/136408和WO 2022/136409的权利要求1中和第3页上所描述的方法所获得的结构。烷氧基化聚亚烷基亚胺或烷氧基化多胺的结构可以由通式(CP8a)进一步描述
其中变量各自定义如下：
R表示相同或不同的
i)直链或支链C2-C12-亚烷基基团或
ii)以下式(CP8b)的醚烷基单元：
其中变量各自定义如下：
R10、R11、R12表示相同或不同的直链或支链C2-C6-亚烷基，以及
d是具有在0至50范围内的值的整数，或
iii)任选地被至少一个C1-C3-烷基取代的C5-C10-亚环烷基；
B表示烷氧基化聚亚烷基亚胺通过支化的附加部分
y和z各自是具有在0至150的范围内的值的整数，前提是，在R是任选地被至少一个C1-C3-烷基取代的C5-C10-亚环烷基的情况下，z和y两者都是0
E1、E2、E3、E4、E5氢或表示根据式(CP8c)的相同或不同的残基，
其中根据式(CP8c)的残基是如下定义的亚烷氧基单元
其中变量各自定义如下：
R1表示C2-C22-(1,2-亚烷基)基团；
R2表示氢和/或C1-C22-烷基和/或C7-C22-芳烷基，假如在通式(CP8b)内z是≥1的整数的话，或
R2表示氢和/或C1-C4-烷基和/或C7-C22-芳烷基，假如在通式(CP8b)内z是0的话；
n是具有至少5至100的值的整数；
其中通式(CP8a)中E1、E2、E3、E4和E5的总量的20％至100％是根据式(CP8c)的残基。
在一个实施例中，使存在于CP8中的氮原子季铵化，以便将烷氧基化聚亚烷基亚胺或烷氧基化多胺调节至特定配制品以实现配制品的更好的相容性和/或相稳定性。
LDF可以包含相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计从0.1％至10％、优选地按重量计从约0.25％至5％、更优选地按重量计从约0.5％至3％并且最优选地按重量计从约1％至3％的范围的量的CP8。
在一个实施例中，LDF包含以下组合中的至少一种：
在一个实施例中，LDF433至LDF497中的EPr9iA是具有R101E的EPr9iA。
在一个实施例中，LDF433至LDF497进一步包含PSB1、PSP2、Amy1、Amy2、Amy3、Cel1、Lip1、或Lip2a。
在一个实施例中，LDF433至LDF497进一步包含Man1或Man2或Man3或Man4或Man5，优选地Man4。
在一个实施例中，LDF433至LDF497进一步包含至少一种选自NIS1a2、NIS1a3、NIS1a4、NIS1a5、NIS2、NIS3、NIS4和NIS 5的NIS。
在一个实施例中，LDF包含以下组合之一：
在一个实施例中，LDF498至LDF608基本上不含阴离子表面活性剂。
在一个实施例中，LDF498至LDF608中的EPr9iA是R101E。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含PSB1。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含PSP2。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含Amy1。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含Amy2。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含Amy3。
在一个实施例中，LDF498至LDF608进一步包含至少一种选自NIS1a1、NIS1a6、NIS1a7、NIS1a8、NIS1a9和NIS1a10的NIS。
组分D5-抗微生物剂
在一个实施例中，本发明的LDF包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)，
(B)按重量计4％至20％的如本文所描述的根据式(I)的化合物，
(C)至少一种阴离子表面活性剂(C1)和/或至少一种助洗剂(C2)，以及
(D)至少一种抗微生物剂(D5)。
在一个实施例中，本发明的LDF包含至少一种选自2-苯氧基乙醇(AMic1；CAS-号122-99-6)、2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇(AMic2)、呈酸形式或作为其盐的甲酸(AMic3)、4,4’-二氯2-羟基二苯基醚(AMic4；CAS-号3380-30-1)和异噻唑-3-酮(AMic5)的D5。
在一个实施例中，LDF1至LDF608包含相对于液体配制品的总重量范围从按重量计0.1％至2％的量的AMic1。
在一个实施例中，LDF1至LDF608包含范围从20ppm至1000ppm的量的AMic2。
在一个实施例中，LDF1至LDF608包含相对于液体配制品的总重量范围从按重量计0.05％至0.5％的量的AMic3。
在一个实施例中，LDF1至LDF608包含范围从按重量计0.001％至3％、按重量计0.002％至1％、或按重量计0.01％至0.6％的量的AMic4，全部相对于液体配制品的总重量。
组分D6–其他成分
在一个实施例中，本文所披露的LDF进一步包含至少一种选自AMS1、AMS2、AMS3和AMS4的两性表面活性剂。
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(AMS1)的化合物(其可以被称为氨基酸)(蛋白原的以及非蛋白原的)的两性表面活性剂：
通式(AMS1)中的变量定义如下：
R8选自H、C1-C4烷基、C2-C4烯基，其中烷基和/或是直链(直链；n-)或支链的。
R9选自C1-C22烷基、C2-C22烯基、C10-C22烷基羰基和C10-C22烯基羰基。
R10选自H、甲基、-(CH2)3NHC(NH)NH2、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-(CH2)2C(O)NH2、-(CH2)2C(O)OH、(咪唑-4-基)-甲基、-CH(CH3)C2H5、-CH2CH(CH3)2、-(CH2)4NH2、苄基、羟基甲基、-CH(OH)CH3、(吲哚-3-基)-甲基、(4-羟基-苯基)-甲基、异丙基、-(CH2)2SCH3和-CH2SH。
Rx选自H和C1-C4-烷基。
AMS2
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(AMS2a)、(AMS2b)、或(AMS2c)的化合物的两性表面活性剂(其可以被称为甜菜碱和/或磺基甜菜碱)(AMS2)：
通式(AMS2a)、(AMS2b)和(AMS2c)中的变量定义如下：
R11选自直链(直链；n-)或支链C7-C22烷基和直链(直链；n-)或支链C7-C22烯基。
R12各自独立地选自直链(直链；n-)C1-C4烷基。
R13选自C1-C5烷基和羟基C1-C5烷基，例如，2-羟基丙基。
A-选自羧酸根和磺酸根。
通式(AMS2a)、(AMS2b)和(AMS2c)中的整数r在2至6的范围内。
AMS3
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(AMS3)的化合物的两性表面活性剂(其可以被称为烷基-两性羧酸酯)：
通式(AMS3)中的变量定义如下：
R11选自C7-C22烷基和C7-C22烯基，其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的、优选地直链的。
R14选自-CH2C(O)O-M+、-CH2CH2C(O)O-M+和-CH2CH(OH)CH2SO3 -M+。
R15选自H和-CH2C(O)O-
通式(AMS3)中的整数r在2至6的范围内。
M+选自盐形成阳离子。盐形成阳离子可以是单价或多价的；因此，M+等于1/v Mv+。实例包括但不限于钠、钾、镁、钙、铵，以及单-、二和三乙醇胺的铵盐。
AMS4
在一个实施例中，洗涤剂配制品包含至少一种选自通式(AMS4)的化合物的两性表面活性剂(其可以被称为胺氧化物(AO))：
通式(AMS4)中的变量定义如下：
R16选自C8-C18烷基、羟基C8-C18烷基、酰基酰胺基丙酰基和C8-C18烷基苯基；其中烷基和/或烯基是直链(直链；n-)或支链的
R17选自C2-C3亚烷基、羟基C2-C3亚烷基及其混合物
R18选自C1-C3烷基和羟基C1-C3烷基
通式(AMS4)中的整数x在0至5、优选地从0至3的范围内，最优选地0。
在一个实施例中，包含阴离子表面活性剂(C1)的LDF包含至少一种接枝聚合物“GP1”，该接枝聚合物包含作为接枝基质的聚醚和作为接枝的侧链的共聚物，该共聚物包含至少一种选自以下的共聚单体
CH2＝CH-O-C(O)-R3 (共聚单体Ia)
CH2＝CH-CH2-O-C(O)-R3 (共聚单体Ib)
CH2＝CZ-CO-OR4 (共聚单体Ic)
其中R3选自C1-C21烷基，例如甲基、正丙基、正戊基、正庚基、正壬基、异壬基、正十一烷基、正十三烷基、正十五烷基、正十七烷基、或正十九烷基。
R4选自C2-C20烷基，优选地具有偶数个碳原子，例如乙基、正丙基和异丙基、正己基、异己基、仲己基、正庚基、正辛基、2-乙基己基、正壬基、正癸基或异癸基、n-C12H25、n-C14H29、n-C16H33或n-C18H37，
并且Z选自氢和甲基，氢是优选的。
在一个实施例中，聚醚是例如具有在从500至25,000g/mol、优选地1,000至15,000g/mol并且甚至更优选地1,500至10,000g/mol的范围内的平均分子量Mn的聚乙二醇。
在一个实施例中，聚醚是例如具有在从500至20,000g/mol、优选地2,000至10,000g/mol并且甚至更优选地4,000至9,000g/mol的范围内的平均分子量Mn的聚丙二醇。
在一个实施例中，聚醚是乙二醇和丙二醇单元的共聚物，例如无规共聚物并且优选地嵌段共聚物，例如二嵌段共聚物和三嵌段共聚物。
在一个实施例中，GP1的接枝基质选自聚乙二醇、聚丙二醇和EO-PO嵌段共聚物，其各自非封端或用C1-C20烷基或C3-C20-2-羟基烷基封端。聚醚优选地是非封端的。
共聚单体Ia具体地可以选自乙酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、丁酸乙烯酯、正己酸乙烯酯、正辛酸乙烯酯、己酸乙烯基-2-乙基酯、月桂酸乙烯酯、硬脂酸乙烯酯、肉豆蔻酸乙烯酯和棕榈酸乙烯酯。
共聚单体Ib具体地可以选自丙酸烯丙酯、丁酸烯丙酯、正己酸烯丙酯、正辛酸烯丙酯、己酸烯丙基-2-乙基酯、月桂酸烯丙酯、硬脂酸乙烯酯、肉豆蔻酸烯丙酯和棕榈酸烯丙酯。
共聚单体Ic具体地可以选自(甲基)丙烯酸2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸2-正丙基庚酯、(甲基)丙烯酸硬脂酯、(甲基)丙烯酸月桂酯、(甲基)丙烯酸棕榈酯和(甲基)丙烯酸肉豆蔻酯。
在一个实施例中，GP1包含呈优选地选自通式(共聚单体Ia)和(共聚单体Ic)的共聚单体的共聚形式的侧链。
在一个实施例中，GP1具有在从2,250至200,000g/mol的范围内的平均分子量Mn，优选的是2,250至25,000g/mol，甚至更优选的是2,500至10,000g/mol。平均分子量Mn可以通过凝胶渗透色谱法确定，用聚乙二醇作为比较标准品。接枝本身可以通过HPLC(高压液相色谱)确认。
在一个实施例中，基本上不含阴离子表面活性剂(C1)的LDF包含相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计0.05％至0.4％的至少一种选自非烷氧基化聚亚烷基亚胺(PEI)的组的化合物。
在一个实施例中，LDF包含15-20个亚乙基亚胺单元的支链均聚物。均聚物优选地具有约250g/mol至1,500g/mol的Mw。当用13C-NMR波谱法测量时，伯胺:仲胺:叔胺的比率优选地是大约1:0.9:x，其中x是0.5-0.6。此类均聚物在本文中可以被称为PEI1。
在一个实施例中，LDF包含具有约500g/mol至10,000g/mol的Mw的支链均聚物。当用13C-NMR波谱法测量时，伯胺:仲胺:叔胺的比率优选地是大约1:1:x，其中x是0.7-0.9。此类均聚物在本文中可以被称为PEI2。
在一个实施例中，LDF包含具有约25,000g/mol的Mw的支链均聚物，并且当用13C-NMR波谱法测量时，伯胺:仲胺:叔胺的比率优选地是大约1:1.1:0.7。所述均聚物在本文中可以被称为PEI3。
在一个实施例中，LDF包含具有约70,000g/mol的Mw的支链均聚物，并且当用13C-NMR波谱法测量时，伯胺:仲胺:叔胺的比率优选地是大约0.5:1:0.5。所述均聚物在本文中可以被称为PEI4。
在一个实施例中，LDF包含具有约750,000g/mol的Mw的支链均聚物，并且当用13C-NMR波谱法测量时，伯胺:仲胺:叔胺的比率优选地是大约1:1:0.7。所述均聚物在本文中可以被称为PEI5。
在一个实施例中，基本上不含阴离子表面活性剂(C1)的LDF包含相对于洗涤剂配制品的总重量按重量计0.05％至0.4％的至少一种选自水溶性和水不溶性锌盐的锌盐(ZS)。在该上下文中，水不溶性意指在25℃下在蒸馏水中具有0.1g/l或更小的溶解度的锌盐。因此，在水中具有更高溶解度的锌盐相应地被称为水溶性锌盐。
锌盐可以选自苯甲酸锌、葡糖酸锌、乳酸锌、甲酸锌、ZnCl2、ZnSO4、乙酸锌、柠檬酸锌、Zn(NO3)2、Zn(CH3SO3)2和没食子酸锌，其中ZnCl2(ZS1)、ZnSO4(ZS2)、乙酸锌(ZS3)、柠檬酸锌(ZS4)、Zn(NO3)2(ZS5)、Zn(CH3SO3)2(ZS6)和没食子酸锌(ZS7)是优选的。
在一个实施例中，锌盐选自ZnO(ZS8)、ZnO·aq(ZS9)、Zn(OH)2(ZS10)和ZnCO3(ZS11)。优先考虑ZnO·aq。
在一个实施例中，基本上不含阴离子表面活性剂(C1)的LDF包含至少一种接枝聚合物“GP2”，该接枝聚合物由以下组成
GP2-A：至少一种接枝基质，其选自非离子单糖、二糖、寡糖和多糖，以及通过在以下项上接枝可获得的侧链
GP2-B：至少一种烯键式不饱和单羧酸或二羧酸，简称单羧酸或二羧酸，以及
GP2-C：至少一种选自以下的化合物
GP2-A优选地选自非离子多糖、特别地选自淀粉，其优选地不是化学修饰的，例如其羟基优选地既不是酯化的也不是醚化的。实例是玉米淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉和小麦淀粉。
GP2-B优选地选自单羧酸，更优选地选自烯键式不饱和C3-C10-单羧酸及其碱金属盐或铵盐，特别是钾盐和钠盐。优选的单羧酸是丙烯酸和甲基丙烯酸，以及还有(甲基)丙烯酸钠。烯键式不饱和C3-C10单羧酸的混合物并且特别是丙烯酸和甲基丙烯酸的混合物也是优选的。
实例
实例1：具有和不具有初始稳定剂的液体酶制剂(％意指相对于LEP的总重量的按重量计％)
表1：具有和不具有初始稳定剂的液体酶制剂的组成(％意指相对于LEP的总重量的按重量计％)
酶浓缩物：具有R101E的EPr9iA；调节在LEP中所使用的量以提供具有100％蛋白水解活性的6％蛋白酶
初始酶稳定剂：Z-VAL
表2：在储存之后通过残余酶活性确定的蛋白酶的稳定性
*当与t＝0的初始蛋白酶活性(其已经被设定为100％)相比时。
将液体酶制剂在38℃的温度下储存最长达10周。4周的储存被认为相当于在室温下大约9个月或在8℃下>15个月的储存。蛋白酶活性通过测量对肽底物Suc-AAPF-pNA的反应性来分析。在此，将pNA使用100mM TRIS缓冲液在30℃、pH 8.6下从底物分子裂解。与蛋白酶活性成正比的裂解速率可以通过测量OD405(在405nm下的光密度)由溶液中游离pNA的黄色的增加来确定。在储存前后，确定蛋白水解活性。
实例2：对于蛋白酶和淀粉酶，所测试的液体洗涤剂配制品(％意指相对于洗涤剂配制品的总重量的按重量计％)
表3：对于蛋白酶和淀粉酶，所测试的LDF的组成
LAS：阴离子表面活性剂；直链十二烷基苯磺酸(CAS27176-87-0)：Maranil DBS/LC
AES(烷基醚硫酸盐)；阴离子表面活性剂；聚(氧基-1,2-乙烷二基)，α.-磺基-.ω.-羟基-,C12-14-烷基醚,钠盐(CAS 68891-38-3)：Texapon N70
NIS1：非离子表面活性剂；C13C15羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Lutensol AO 7
NIS2：非离子表面活性剂；C12C14羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Lutensol A 7N
NIS3：非离子表面活性剂；C12C18羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Dehydol LT 7
MEA：单乙醇胺
TEA：三乙醇胺
蛋白酶产品：包含在约50％二醇共混物中约4％的具有R101E的EPr9iA(具有100％蛋白水解活性)的产品
淀粉酶产品：prime 100L(诺维信公司(Novozymes))
表4：在洗涤剂配制品Det 1和Det 2中，在38℃下储存一定时间之后，由蛋白酶和淀粉酶的残余活性所确定的所述酶的储存稳定性
将液体洗涤剂配制品在38℃的温度下储存最长达6周。4周的储存被认为相当于在室温下大约9个月或在8℃下>15个月的储存。
蛋白酶活性通过测量对肽底物Suc-AAPF-pNA的反应性来分析。在此，将pNA使用100mM TRIS缓冲液在30℃、pH 8.6下从底物分子裂解。与蛋白酶活性成正比的裂解速率可以通过测量OD405(在405nm下的光密度)由溶液中游离pNA的黄色的增加来确定。在储存前后，确定蛋白水解活性。
通过从底物Ethyliden-封端-pNPG7(罗氏应用科学公司(Roche AppliedScience)，材料编号10880078103)释放发色团对硝基苯酚(pNP)来定量地测量储存之后的淀粉酶活性。α-淀粉酶将底物降解成更小的分子，并且与α-淀粉酶相比过量添加的α-葡糖苷酶(罗氏应用科学公司，材料编号11626329103)处理这些更小的产物，直到pNP被释放；经由在405nm下吸收的增加所测量的pNP的释放与样品的α-淀粉酶活性成正比。淀粉酶标准品：Termamyl 120L(Sigma 3403)。在储存前后，确定淀粉分解活性。
残余酶活性对应于当与在储存之前在时间0时可得的初始酶活性相比时剩余的酶活性。
实例3：具有蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的所测试的液体洗涤剂配制品
表5：对于蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶，所测试的液体洗涤剂配制品的组成(％意指相对于洗涤剂配制品的总重量的按重量计％)
LAS：阴离子表面活性剂；直链十二烷基苯磺酸(CAS27176-87-0)：Maranil DBS/LC
AES(烷基醚硫酸盐)；阴离子表面活性剂；聚(氧基-1,2-乙烷二基)，α.-磺基-.ω.-羟基-,C12-14-烷基醚,钠盐(CAS 68891-38-3)：Texapon N70
NIS1a-I：非离子表面活性剂；C13C15羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Lutensol AO 7
NIS1a-II：非离子表面活性剂；C12C14羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Lutensol A7N
NIS1a-II：非离子表面活性剂；C12C18羰基合成醇乙氧基化物(7EO)：Dehydol LT 7
MEA：单乙醇胺；TEA：三乙醇胺
*酶：％是指相对于洗涤剂配制品的总重量，配制到洗涤剂配制品中的酶产品的按重量计％
蛋白酶I：具有4％的具有R101E的EPr9iA(具有100％蛋白水解活性)+约0.3％ Z-VAL的酶配制品
蛋白酶II：具有4％的具有R101E的EPr9iA(具有100％蛋白水解活性)、缺少酶稳定剂(诸如含硼化合物和肽稳定剂)的酶配制品
淀粉酶：prime 100L(诺维信公司(Novozymes))
脂肪酶：购自西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)的100L(CAS-号9001-62-1，EC-号232-619-9)。
表6：包含添加剂的洗涤剂配制品的稳定性
表7：在38℃下储存之后蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的残余活性
*配制品浑浊，不稳定
除了酶组分之外，如以上所描述的洗涤剂配制品Det 1和Det 3，其如下：
表8：在38℃下储存之后蛋白酶和淀粉酶的残余活性
分别将液体洗涤剂配制品在38℃的温度下储存最长达6或8周。4周的储存被认为相当于在室温下大约9个月或在8℃下>15个月的储存。
蛋白酶活性通过测量对肽底物Suc-AAPF-pNA的反应性来分析。在此，将pNA使用100mM TRIS缓冲液在30℃、pH 8.6下从底物分子裂解。与蛋白酶活性成正比的裂解速率可以通过测量OD405(在405nm下的光密度)由溶液中游离pNA的黄色的增加来确定。在储存前后，确定蛋白水解活性。
通过从底物Ethyliden-封端-pNPG7(罗氏应用科学公司(Roche AppliedScience)，材料编号10880078103)释放发色团对硝基苯酚(pNP)来定量地测量储存之后的淀粉酶活性。α-淀粉酶将底物降解成更小的分子，并且与α-淀粉酶相比过量添加的α-葡糖苷酶(罗氏应用科学公司，材料编号11626329103)处理这些更小的产物，直到pNP被释放；经由在405nm下吸收的增加所测量的pNP的释放与样品的α-淀粉酶活性成正比。淀粉酶标准品：Termamyl 120L(Sigma 3403)。在储存前后，确定淀粉分解活性。
脂肪酶活性通过采用对硝基苯酚-戊酸酯(2.4mM pNP-C5，在100mM Tris中，pH8.0，0.01％ Triton X100)作为底物来确定。经5分钟，每30秒，在20℃下测量在405nm下的吸收。时间依赖性吸收曲线的斜率(在405nm下每分钟的吸光度增加)与脂肪酶的活性成正比。
残余酶活性对应于当与在储存之前在时间0时可得的初始酶活性相比时剩余的酶活性。

Claims (17)

1.一种液体酶制剂，其包含
a.按重量计0.5％至15％的至少一种水解酶(EC 3)，以及
b.按重量计2％至70％的至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
其中水解酶的量是指100％活性水解酶。
2.根据权利要求1所述的液体酶制剂，其中，该液体酶制剂包含不超过按重量计15％的量的水。
3.根据前述权利要求中任一项所述的液体酶制剂，其中，该液体酶制剂基本上不含表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的液体酶制剂，其中，该液体酶制剂基本上不含选自含硼化合物和肽稳定剂的酶稳定剂。
5.根据前述权利要求中任一项所述的液体酶制剂，其中，该液体酶制剂进一步包含至少一种选自二醇、三醇和糖醇的溶剂和/或进一步包含至少一种选自单价阳离子和1-6个碳的单价阴离子的盐、NaCl、KCl、CaCl2和Na2SO4的盐。
6.一种制备液体酶制剂的方法，其包括将至少一种水解酶(EC 3)与至少一种根据式(I)的化合物混合的步骤
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，该至少一种水解酶在与该至少一种根据式(I)的化合物混合之前包含在液体酶浓缩物中，其中该液体酶浓缩物优选地起源自发酵酶生产。
8.根据权利要求6所述的方法，其中，在与至少一种根据式(I)的化合物混合之前，将该至少一种水解酶溶解于选自水和有机溶剂、优选地水的溶剂中。
9.至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
用于提供液体酶制剂的用途，当与缺少该根据式(I)的化合物的液体酶制剂相比时，该液体酶制剂在其外观上是均匀的并且至少一种水解酶的稳定性增加。
10.一种液体洗涤剂配制品，其包含
(A)按重量计0.0005％至0.4％的至少一种水解酶(EC 3)
(B)按重量计4％至20％的根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；以及
(C)至少5％的至少一种阴离子化合物。
11.根据权利要求10所述的液体洗涤剂配制品，其中，该阴离子化合物选自表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物，其中该表面活性阴离子化合物优选地选自LAS或AES，并且其中该络合阴离子化合物优选地选自柠檬酸盐(NPB1)和氨基羧酸盐(NPB3)。
12.根据权利要求10或11中任一项所述的液体洗涤剂配制品，其中，该液体洗涤剂配制品包含按重量计≤3％、优选地按重量计≤2％的甲酸钠。
13.一种制备液体洗涤剂配制品的方法，其包括将至少一种水解酶、至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
和至少一种阴离子化合物在一个或多个步骤中混合，其中该至少一种水解酶优选地在与该至少一种阴离子化合物混合之前包含在根据权利要求1所述的液体酶制剂中。
14.至少一种根据式(I)的化合物
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
用于使包含在包含至少一种选自表面活性阴离子化合物和络合阴离子化合物的阴离子化合物的液体洗涤剂配制品中的至少一种水解酶稳定或提供液体洗涤剂配制品的用途，当与缺少该根据式(I)的化合物的液体洗涤剂配制品相比时，该液体洗涤剂配制品在其外观上是均匀的并且具有至少一种水解酶的增加的稳定性。
15.一种用于通过向含水解酶的液体洗涤剂配制品中添加至少一种根据式(I)的化合物以改进液体洗涤剂配制品的去污力的方法
其中R1和R2选自H和C2H4OH，
R3中的每个独立地选自H、甲基和乙基，优选地所有R3是H或甲基，
并且m、n、o各自单独地是0-2、优选地0-1、更优选地0；
其中去污力优选地针对至少一种选自蛋白酶敏感性污渍、淀粉酶敏感性污渍和脂肪酶敏感性污渍的污渍得到改进。
16.根据权利要求1–5中任一项所述的液体酶制剂或根据权利要求10-12中任一项所述的液体洗涤剂配制品，其中，该水解酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、DNA酶、分散素、果胶酶和角质酶，优选地选自枯草杆菌蛋白酶(EC3.4.21.62)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)和三酰甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)。
17.根据权利要求1–5或16中任一项所述的液体酶制剂或根据权利要求10-12或16中任一项所述的液体洗涤剂配制品，其中，该至少一种根据式(I)的化合物是三乙醇胺甲酸盐。
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