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CN118903408A - 一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂 - Google Patents

一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂 Download PDF

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CN118903408A
CN118903408A CN202411109600.1A CN202411109600A CN118903408A CN 118903408 A CN118903408 A CN 118903408A CN 202411109600 A CN202411109600 A CN 202411109600A CN 118903408 A CN118903408 A CN 118903408A
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disease
amino acid
pharmaceutical formulation
tryptase
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陈琰
刘园
陈建军
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Original Assignee
Wuhan Dabai Xiaobai Technology Co ltd
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Abstract

本发明涉及一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂，其含类胰蛋白酶单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂；所述类胰蛋白酶单克隆抗体包含重链可变区和/或轻链可变区。通过合理配比缓冲液以及蛋白保护液，使本发明提供的类胰蛋白酶单克隆抗体制备成为该药物制剂后，具有良好的均一性、热稳定性、光照稳定性、冻融稳定性，能够在长期保存或者稀释的情况下，依然具有良好的稳定性。

Description

一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂
技术领域
本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂。
背景技术
肥大细胞及其分泌产物与人类哮喘的相关性一直是倍受关注的焦点，其中，类胰蛋白酶β在人哮喘和肥大细胞诱导的其他炎症疾病中发挥着重要作用。
类胰蛋白酶在体外的许多作用已经概括为在气道或皮肤中施用类胰蛋白酶的各种制剂。Axys类胰蛋白酶抑制剂、APC366在绵羊和猪抗原模型中的研究证实了肥大细胞类胰蛋白酶β在介导气道高反应性中的作用。在致敏绵羊中，APC366降低了早期和晚期支气管收缩，阻断了过敏原诱导的气道高反应性。
Johnson公司的化合物RWJ-56423，其靶向于通过吸入途径递送，据报道已经在2003年进入临床。Axys制药公司被认为是开发肥大细胞类胰蛋白酶抑制剂的先驱。他们提出了几类药物，但其中许多化合物以及来自其他制药公司的化合物是大分子量/二聚体，不适合口服给药。
从商业角度来看，类胰蛋白酶抑制剂需要具有口服生物利用度和足够的QD制剂作用时间，以便在市场上有效竞争。许多学术团体也开发了大分子量的类胰蛋白酶二聚体抑制剂，包括高度基本的功能，如脒和胍。然而，他们的高分子量通常会排除他们的发展作为口服药物。
靶向生物制剂治疗可使传统治疗控制不理想的AR患者获益。一项中重度哮喘适应症IIb期研究表明，IL-4Rα靶向单抗可显著改善患者鼻部症状，提高患者生活质量。生物制剂治疗的适合人群与用药方案的明确将为SAR患者带来全新花粉期治疗选择和疗效体验。采用特异性单克隆抗体封闭类胰蛋白酶靶点的功能，可以有效地控制类胰蛋白酶的发生、发展、侵袭和转移。由于抗体分子具有复杂的蛋白质多级结构，并且易于物理上粘结在一起，从而可能导致不期望的免疫反应，或者可能在施用期间堵塞注射器或泵而对患者不安全，因此，抗体的液体制剂长期以来面临的问题之一是凝聚所导致的稳定性问题。
因此，需要具有稳定性和质量一致性的人类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种稳定的包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂，该药物制剂具有良好的稳定性和质量一致性，具有良好的应用前景。
为此，第一方面，本发明提供一种药物制剂，其包含类胰蛋白酶单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂；所述类胰蛋白酶单克隆抗体包含重链可变区和/或轻链可变区；
其中，所述重链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2；
如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3；
所述轻链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2；
如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方式中，所述类胰蛋白酶单克隆抗体为人鼠嵌合的类胰蛋白酶单克隆抗体。
在一些实施方式中，所述类胰蛋白酶单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述类胰蛋白酶单克隆抗体的轻链可变区含如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述药物制剂具有5.0～8.0的pH。优选地，所述药物制剂具有5.5～7.5的pH。
在一些实施方式中，所述类胰蛋白酶单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为1～40mg/ml。优选地，所述类胰蛋白酶单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为10～30mg/ml，更优选为20mg/ml。
在一些实施方式中，所述药物制剂中的缓冲液选自柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液中的一种或多种。优选地，所述缓冲液选自磷酸缓冲液。
在一些实施方式中，所述缓冲液的浓度为5～25mmol/L。优选地，所述磷酸缓冲液的浓度为5～15mmol/L，更优选为10mmol/L。
在一些实施方案中，所述药物制剂中的蛋白保护剂自表面活性剂、多元醇分散剂、糖类、盐类、氨基酸类、聚合物中的一种或多种。优选地，所述蛋白保护剂包括核糖。
在一些实施方式中，所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。优选地，所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度为30～70mg/ml，更优选为50mg/ml。
在一些实施方式中，所述药物制剂在低温条件下稳定至少24个月。在一些实施方式中，所述低温条件的温度为2-8℃。
在一些实施方式中，当所述药物制剂被稀释剂稀释2-80倍后，仍能够在25±2℃的温度条件下稳定至少7天。
在一些实施方式中，所述稀释剂包括0.9％NaCl水溶液，即生理盐水。
在一些实施方式中，所述药物制剂在不低于4500lux的照度和37±2℃的温度下稳定高达30天。
在一些实施方式中，所述药物制剂是鼻喷剂。
在另一方面，本发明提供了所述药物制剂在制备治疗类胰蛋白酶相关疾病的药物中的用途。
在一些实施方式中，所述疾病包括选自肺部疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、粒细胞性(如嗜碱粒细胞性)疾病、单核细胞性疾病、淋巴细胞性疾病、或与正常或异常组织常驻性细胞(如肥大细胞、巨噬细胞或淋巴细胞)或基质细胞(如成纤维细胞、肌成纤维细胞、平滑肌细胞、上皮细胞或内皮细胞)的数目或分布增加相关的疾病中的至少一种。
在一些实施方式中，所述疾病包括肺部疾病。
在一些实施方式中，肺部疾病包括选自哮喘、气道高反应性和慢性阻塞性肺病(COPD)中的至少一种。
在一些实施方式中，所述肺部疾病包括哮喘。
在一些实施方式中，所述哮喘是高Th2哮喘或低Th2哮喘。
在一些实施方式中，所述自身免疫疾病包括选自类风湿性关节炎、银屑病、嗜酸粒细胞性食管炎、炎性肠病(IBD)和克罗恩病中的至少一种。
在一些实施方式中，所述炎性疾病包括选自慢性特发性荨麻疹(CIU，也称作慢性自发性荨麻疹，CSU)、过敏反应、变应性休克、特应性皮炎或过敏性鼻炎中的至少一种。
在一些实施方式中，所述纤维化疾病是特发性肺纤维化(IPF)。
在一些实施方式中，所述疾病包括与正常或异常组织常驻性细胞(如肥大细胞、巨噬细胞或淋巴细胞)或基质细胞(如成纤维细胞、肌成纤维细胞、平滑肌细胞、上皮细胞或内皮细胞)的数目或分布增加相关的疾病。
在一些实施方式中，所述疾病包括肥大细胞增生症。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
本发明提供了一种包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂，通过合理配比缓冲液以及蛋白保护液，使本发明提供的类胰蛋白酶单克隆抗体制备成为该药物制剂后，具有良好的均一性、热稳定性、光照稳定性、冻融稳定性，能够在长期保存或者稀释的情况下，依然具有良好的稳定性。可以较好地满足实际应用的需求，降低了类胰蛋白酶单克隆抗体药物制剂在存储方面的难度和成本，提高了实用性，具有良好的应用前景。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：
图1为在加速热稳定性测试中，包含类胰蛋白酶单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化；
图2为在光照稳定性测试中，包含类胰蛋白酶单克隆抗体和不同缓冲液的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化；
图3为在加速热稳定性测试中，包含类胰蛋白酶单克隆抗体、磷酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化；
图4为在光照稳定性测试中，包含类胰蛋白酶单克隆抗体、磷酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化；
图5为在冻融稳定性测试中，包含类胰蛋白酶单克隆抗体、磷酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂的由SDS-PAGE法测得的蛋白纯度随时间的变化；
图6为在长期稳定性测试中，本发明的A-C三组制剂的蛋白浓度随时间的变化；
图7为在稀释稳定性测试中，本发明的A-E五组不同稀释度的制剂的抗体蛋白浓度随时间的变化。
具体实施方式
下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
除非另外指明，本文的实施例采用本领域常规的分子生物学、微生物学、细胞生物学、生物化学以及免疫学技术。
除非另外指明，本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常所理解的含义。
定义
抗体
本文所用，术语“单克隆抗体”是指含有均一的或基本上均一的单个抗体的抗体群。单克隆抗体可以获自单一的杂交瘤细胞克隆(Milstein，C(1999).″Thehybridomarevolution：an offshoot ofbasic research″.BioEssays.21(11)：966-73)。完整的单克隆抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链由重链可变区(VH)和重链第一、第二和第三恒定区(CH1，CH2，CH3)组成，而每个轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。重链和轻链的VH和VL区中还各有三个互补决定区(CDR)，三个CDR由被称为框架区(FR)的连续部分间隔开，框架区比CDR更加高度保守并形成一个支架支撑超变环。一条重链和一条轻链的6个CDR共同构成抗体的抗原结合部位，决定抗体的特异性。本文所述的单克隆抗体还包括完整的单克隆抗体的具有抗原结合功能的片段或衍生物，所述片段或衍生物与完整的单克隆抗体具有相同的抗原结合特异性，但是所述片段或衍生物与其特异性抗原结合的亲和力可以与完整的单克隆抗体相同或不同。
在一些实施方式中，本文所述的单克隆抗体包括抗原结合片段。抗原结合片段指保留与抗原特异性结合的能力的一种或多种抗体片段。抗原结合片段的例子包括但不限于(i)Fab片段，其是指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)Fab′片段，其是指包含一部分铰链区的Fab片段；(iii)F(ab′)2片段，其是指包含由铰链区的二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；(iv)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(v)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(vi)dAb片段(Ward等人，Nature 341：544-546(1989)；PCT公开WO 90/05144)，其包含单个可变结构域；(vii)分离的CDR；(viii)单链Fv片段，其是指VL和VH结构域直接相连或通过一个肽链连接而形成的单价片段(Huston JS等，Proc Natl Acad Sci USA，85：5879(1988))。
在一些实施方式中，本文所述的单克隆抗体包括嵌合的单克隆抗体，其部分重链和/或轻链与从特定种类中衍生获得的或属于特定抗体类或亚类的抗体对应序列是相同或同源，而剩余的链与从另一种类中衍生获得的或属于另一抗体类或亚类的抗体以及这种抗体的片段的对应序列是相同或同源的，只要它们表现出所需的功能活性。
在一些实施方式中，本文所述的单克隆抗体包括人鼠嵌合的单克隆抗体，其具有鼠重链和轻链可变区和人重链和轻链恒定区。
在一些实施方式中，本文所述的单克隆抗体包括人源化的单克隆抗体。非人体来源(如鼠源型)抗体的人源化形式是包含最少的从非人源型免疫球蛋白中获得的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其它与抗原结合的序列)。在一些例子中，人源化抗体可以是CDR嫁接的抗体，其中将人源型CDR的氨基酸序列引入非人源型VH和VL的氨基酸序列以替换相应的非人源型CDR的氨基酸序列。在另一些例子中，人源化抗体的大部分氨基酸序列可以来自于人源型免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的CDR的氨基酸残基被具有所需特异性、亲合性和能力的非人源型(例如小鼠、大鼠、兔)抗体的CDR的氨基酸残基替代。通常，人源化抗体基本上都包含至少一个，一般包括两个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人源型免疫球蛋白的序列，且所有或基本上所有的构架(FR)区是人源型免疫球蛋白的序列。在一些例子中，人源型免疫球蛋白的可变区的构架区残基被相应的非人源型残基取代。而且，人源化抗体可包括在受体抗体和输入的CDR或构架区序列中均没有的残基。
本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体是指能够特异性结合类胰蛋白酶蛋白的单克隆抗体。
除非另外说明，否则如本文所用，术语“类胰蛋白酶β”指来自任何脊椎动物来源的任何类胰蛋白酶β，所述脊椎动物来源包括哺乳动物如灵长类(例如，人类)和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。类胰蛋白酶β是作为肥大细胞分泌颗粒的主要组分的丝氨酸蛋白酶。如本文所用，该术语涵盖类胰蛋白酶β1(由TPSAB1基因编码，所述基因还编码类胰蛋白酶α1)、类胰蛋白酶β2(由TPSB2基因编码)和类胰蛋白酶β3(也由TPSB2基因编码)。示例性人类胰蛋白酶β1序列在SEQ ID NO:15中显示(还参见GenBank登录号NP_003285.2)。示例性人类胰蛋白酶β2序列在SEQ ID NO:16中显示(还参见GenBank登录号AAD13876.1)。示例性人类胰蛋白酶β3序列在SEQ ID NO:17中显示(还参见GenBank登录号NP_077078.5)。术语“类胰蛋白酶β”涵盖“全长”未加工的类胰蛋白酶β以及因翻译后修饰(包括蛋白酶解加工)产生的类胰蛋白酶β。认为全长、原类胰蛋白酶β在两个蛋白酶解性步骤中加工。首先，在R-3处发生自催化分子间剪切，尤其在酸性pH和存在聚阴离子(例如，肝素或硫酸葡聚糖)时。接着，移除剩余pro二肽(可能通过二肽基肽酶I移除)。对于全长人类胰蛋白酶β1，参考以下序列，加下划线的氨基酸残基对应于天然前导序列，并且加粗和加灰色阴影的氨基酸残基对应于pro结构域，它们被切割以形成成熟蛋白(参见，例如，Sakai等人J.Clin.Invest.97:988-995,1996)
MLNLLLLALPVLASRAYAAPAPGQALQRVGIVGGQEAPRSKWPWQVSLRVHGPYWMHFCGGSLIHPQWVLTAAHCVGPDVKDLAALRVQLREQHLYYQDQLLPVSRIIVHPQFYTAQIGADIALLELEEPVNVSSHVHTVTLPPASETFPPGMPCWVTGWGDVDNDERLPPPFPLKQVKVPIMENHICDAKYHLGAYTGDDVRIVRDDMLCAGNTRRDSCQGDSGGPLVCKVNGTWLQAGVVSWGEGCAQPNRPGIYTRVTYYLDWIHHYVPKKP(SEQ ID NO：18)。
在一些实施方式中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括重链CDR序列，所述重链CDR序列选自如SEQ ID NO：1、2和3所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括轻链CDR序列，所述轻链CDR序列选自如SEQ ID NO：4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括重链可变区VH，所述重链可变区VH包含如下所示的重链CDR序列：如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1、如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2，如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方式中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括轻链可变区VL，所述轻链可变区VL包含如下所示的轻链CDR：如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1、如SEQID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2，如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方式中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区VH包含具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2，具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3；所述轻链可变区VL包含具有如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1、具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2，具有如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
在一些实施方式中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的重链可变区VH。在一些实施方案中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。在一些实施方案中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体包括具有如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列的重链可变区VH和如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQID NO：13或SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的轻链可变区VL。
在一些实施方案中，本文所述的类胰蛋白酶单克隆抗体进一步包括免疫球蛋白恒定区。在一些实施方式中，免疫球蛋白恒定区包括重链和/或轻链恒定区。所述重链恒定区包括CH1、CH1-CH2或CH1-CH3区，所述轻链恒定区包括CL区。在一些实施方式中，所述重链恒定区的类型为IgG1。
下表1中列出了在一些实施方案中的示例性氨基酸序列：
表1示例性的氨基酸序列
在一些实施方式中，对表达本发明所述的类胰蛋白酶单克隆抗体的菌株进行了保藏，分类命名为杂交瘤细胞株TYP 3C4(Hybridoma cell line TYP 3C4)，保藏编号CCTCCNO:C2024194，2024年7月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉；该菌株表达本发明的类胰蛋白酶单克隆抗体，重链可变区序列包含SEQ ID NO：1～3所示的CDR序列，重链恒定区类型为IgG1，轻链可变区包含SEQ ID NO：4～6所示的CDR序列，轻链恒定区序列类型为IgG1。
在一些实施方式中，本发明所述的类胰蛋白酶单克隆抗体由杂交瘤细胞株TYP3C4表达得到。
本发明涉及包含类胰蛋白酶单克隆抗体的药物制剂。在一些实施方案中，本发明的药物制剂可包含浓度为1～40mg/ml的所述类胰蛋白酶单克隆抗体。在一些实施方案中，类胰蛋白酶单克隆抗体的浓度是在上述范围内的任一浓度值。
缓冲液
如本文所用，术语“缓冲液”指通过其酸碱共轭组分的作用而耐受pH值变化的缓冲溶液。本文所用的“缓冲液”指已知可安全地应用于药学制剂中、具有维持或控制该制剂的pH值在所需范围的化合物溶液。能控制pH值在温和酸性pH值至温和碱性pH值范围(例如，pH5.0～8.0)的可接受的缓冲液包括但不限于磷酸缓冲液、乙酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、精氨酸缓冲液、2-氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇(TRIS)缓冲液、组氨酸缓冲液等中的一种或任意几种的组合。
可将药物制剂的pH值控制在所需范围内的缓冲液的例子包括组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液和其他有机酸或无机酸缓冲液。这些缓冲液可以单独使用1种，也可以将2种以上混合使用。优选地，本发明的药物制剂包含组氨酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液。更优选地，本发明的药物制剂包含组氨酸缓冲液。
“组氨酸缓冲液”为包含组氨酸根离子的缓冲液。组氨酸缓冲液可包括组氨酸、组氨酸盐酸盐、组氨酸醋酸盐、组氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐等中的一种或多种。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液可为组氨酸-组氨酸盐酸盐缓冲液。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的pH值可为在5.5～6.5范围内的任一pH值。
“柠檬酸缓冲液”为包含柠檬酸根离子的缓冲液。柠檬酸缓冲液可包含柠檬酸、柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠、柠檬酸一钾、柠檬酸二钾、柠檬酸三钾、氯化钠、氯化钾中的一种或多种等。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。在一些实施方案中，柠檬酸缓冲液的pH可为在5.0～5.5范围内的任一pH值。
“磷酸缓冲液”为包含磷酸根离子的缓冲液。磷酸缓冲液可包含磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、氯化钠、氯化钾等中的一种或多种。在一些实施方案中，磷酸缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。在一些实施方案中，磷酸缓冲液的pH可为在6.5～8.0范围内的任一pH值。
本文所述的缓冲液的浓度指缓冲液中缓冲离子的浓度。在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的合适的缓冲液的浓度可为5～25mmol/L。在一些实施方案中，缓冲液的浓度是在上述范围内的任一浓度值。
蛋白保护剂
如本文所用，术语“蛋白保护剂”指这样一种试剂，当其与感兴趣的蛋白质结合时，其能阻止或减少蛋白质的化学和/或物理不稳定性。蛋白保护剂的例子包括表面活性剂、多元醇分散剂、糖类、盐类、氨基酸类、聚合物中的一种或多种。表面活性剂类的例子包括吐温类表面活性剂(以tween-80为代表)、曲拉通类表面活性剂(以triton-100为代表)。多元醇分散剂的例子包括丙二醇、丙三醇等。糖类的例子包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、葡聚糖、核糖等。盐类的例子包括硫酸钠、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵等。氨基酸类的例子包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸等。聚合物的例子包括聚乙二醇、聚维酮等。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂选自表面活性剂、多元醇分散剂、糖类、盐类、氨基酸类、聚合物或它们的组合。
在一些实施方案中，用于本发明的药物制剂的蛋白保护剂在药物制剂中的浓度可为10～200mg/ml。在一些实施方案中，蛋白保护剂的浓度是在上述范围内的任一浓度值。
疾病
如本文所用，“疾病”是将从抗体(例如，本文所述的任何抗类胰蛋白酶抗体)治疗获益的任何疾病。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易罹患所讨论病症的那些病理疾病。在一些实施方案中，疾病是肺部疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、粒细胞性(嗜碱粒细胞性)疾病、单核细胞性疾病、淋巴细胞性疾病、或与正常或异常组织常驻性细胞(如肥大细胞、巨噬细胞或淋巴细胞)或基质细胞(如成纤维细胞、肌成纤维细胞、平滑肌细胞、上皮细胞或内皮细胞)的数目或分布增加相关的疾病。在一些实施方案中，疾病是肺部疾病。在一些例子中，疾病可以是类胰蛋白酶相关的疾病或类胰蛋白酶介导的疾病。术语“类胰蛋白酶相关疾病”和“类胰蛋白酶介导的疾病”指由类胰蛋白酶介导或与之相关的任何疾病或病状。在一些实施方案中，类胰蛋白酶介导的疾病与类胰蛋白酶水平或活性过高相关，其中非典型症状可以因类胰蛋白酶水平或活性而在体内局部和/或全身性表现。
在一些实施方案中，肺部疾病是哮喘。在一些实施方案中，哮喘是持续性慢性重度哮喘伴随可能威胁生命的症状恶化急性事件(加重或骤发)。在一些实施方案中，哮喘是异位性(也称作过敏性)哮喘、非过敏性哮喘(例如，经常由呼吸道病毒(例如，流感、副流感、鼻病毒、人偏肺病毒和呼吸道合胞体病毒)感染或吸入的刺激物(大气污染物、烟雾、柴油粒子、挥发性化学品和室内或户外气体、或甚至因干冷空气))触发。
在一些实施方案中，自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、粒细胞性(嗜碱粒细胞性)疾病、单核细胞性疾病、或淋巴细胞性疾病是食管炎(例如，嗜酸粒细胞性食管炎)、过敏性鼻炎、非过敏性鼻炎、鼻窦炎伴息肉、鼻息肉、支气管炎、慢性肺炎、过敏性支气管肺曲霉菌病、气道炎症、过敏性鼻炎、支气管扩张症、和/或慢性支气管炎。
在一些实施方案中，疾病是皮肤的炎性疾病。在一些实施方案中，疾病是特应性皮炎或盘尾丝虫性皮炎。在一些实施方案中，疾病是慢性特发性荨麻疹(CIU或CSU)。或乳糜泻(celiac disease)中的结肠炎、食物过敏、胃炎、胃肠炎、传染性胃炎或小肠结肠炎(例如，幽门螺杆菌(Helicobacter pyloris)感染的慢性活动性胃炎)、食管炎和由传染因子引起的其他形式的胃肠道炎症或未定型结肠炎。
在一些实施方案中，肺部疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、嗜中性粒细胞性疾病或嗜酸粒细胞性疾病是慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些实施方案中，COPD是慢性阻塞性肺病全球倡议(GOLD)类别A。在一些实施方案中，COPD是GOLD类别B。在一些实施方案中，COPD是GOLD类别C。在一些实施方案中，COPD是GOLD类别D。在一些实施方案中，COPD是慢性支气管炎。在一些实施方案中，COPD是肺气肿。在一些实施方案中，肺气肿是近端腺泡状、全小叶性或远端腺泡状肺气肿。在一些实施方案中，肺气肿是香烟所致肺气肿。在一些实施方案中，COPD与暴露于颗粒状粉尘、化学烟气和/或空气污染相关。在一些实施方案中，COPD与肺发育受损相关。在一些实施方案中，COPD是慢性阻塞性哮喘。在一些实施方案中，COPD与α-1抗胰蛋白酶缺乏相关。在一些实施方案中，COPD与丝氨酸蛋白酶抑制剂进化枝E成员2(SERPINE2)破坏相关。在一些实施方案中，COPD是伴有迁延性全身性炎症的COPD。在一些实施方案中，COPD是嗜酸粒细胞性或高辅助T细胞2型(TH2)的COPD。在一些实施方案中，COPD是伴随迁延性细菌定植的COPD。在一些实施方案中，COPD是频繁加重的COPD。在一些实施方案中，自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、嗜中性粒细胞性疾病或嗜酸粒细胞性疾病是哮喘-COPD重叠综合征(ACOS)。在一些实施方案中，ACOS是嗜酸性粒细胞占优势、嗜中性粒细胞占优势、混合模式或无炎症(粒细胞缺乏性)ACOS。在一些实施方案中，自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、嗜中性粒细胞性疾病或嗜酸粒细胞性疾病是COPD-阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)重叠综合征。
上文清单并非包括一切，并且技术人员将理解疾病或病症可以落于多种分类范围内。
实施例1：缓冲液对制剂稳定性的作用
在本实施例中选择以下3组不同的缓冲液制备包含浓度为20.0mg/ml的类胰蛋白酶单克隆抗体(由保藏编号为CCTCC NO:C2024194的杂交瘤细胞株TYP 3C4表达得到)的药物制剂，使用制得的药物制剂进行加速热稳定性测试(药物制剂在42±2℃下存放4周，分别在0、1、2、3、4周取样)及光照稳定性测试(药物制剂在4±2℃下在4500±500lux的照度下存放4周，分别在0、1、2、3、4周取样)。其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法或者紫外-可见光分光光度法(检测波长：280nm)测得。
表2采用不同缓冲液的制剂的加速热稳定性测试结果
加速热稳定性测试结果如表2和图1所示，可以看出，三个实验组的制剂在测试条件下在4周时间内的pH值波动较小，表明这三种缓冲液均具有足够的pH缓冲能力。另外，三个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，表明制剂应当低温保存。而实验组1的包含磷酸缓冲液的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明磷酸缓冲液对类胰蛋白酶单克隆抗体的保护性最佳。
表3采用不同缓冲液的制剂的光照稳定性测试结果
光照稳定性测试结果如表3和图2所示，可以看出，三个实验组的制剂在测试条件下在4周时间内的pH值波动较小，表明这三种缓冲液均具有足够的pH缓冲能力。另外，三个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，表明制剂应当避光保存。而实验组1的包含磷酸缓冲液的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明磷酸缓冲液对类胰蛋白酶单克隆抗体的保护性最佳。
实施例2蛋白保护剂对制剂稳定性的作用
根据实施例1的测试结果，选择10mM磷酸缓冲液，本实施例在此基础上继续研究蛋白保护剂对制剂稳定性的作用。
选择6种不同的蛋白保护剂，配制包含浓度为20.0mg/ml的类胰蛋白酶单克隆抗体和浓度为10mmol/L的磷酸缓冲液的pH为7.0的药物制剂，各组采用的蛋白保护剂及其浓度如表4所示。对制备得到的药物制剂进行加速热稳定性测试、光照稳定性测试和冻融稳定性测试(药物制剂经受四次循环，每次循环在-20±2℃下3天，然后在25±2℃下4天，分别在0、1、2、3、4周取样)。
加速热稳定性的测试结果示于表5和图3中，所得光照稳定性测试结果示于表6和图4中，所得冻融稳定性测试结果示于表7和图5中，其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法或者紫外-可见光分光光度法(检测波长：280nm)测得。
表4包含类胰蛋白酶单克隆抗体、磷酸缓冲液和不同蛋白保护剂的制剂
表5采用不同蛋白保护剂的制剂的加速热稳定性测试中的蛋白纯度测定结果(％)
由表5和图3可以看出，6个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，表明制剂应当低温保存。而实验组3的包含吐温20、丙二醇、海藻糖、氯化钠、蛋氨酸、聚乙二醇的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明蛋白保护剂3对类胰蛋白酶单克隆抗体的保护性最佳。
表6采用不同蛋白保护剂的制剂的光照稳定性测试中的蛋白纯度测定结果(％)
时间点 实验组1 实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 实验组6 对照组
0周 96.6 96.6 96.8 96.6 96.6 96.8 96.6
1周 96.5 96.5 96.7 96.5 96.5 96.7 96.5
2周 96.1 95.8 96.5 96.3 96.3 96.1 95.8
3周 95.8 95.2 96.2 96.1 95.9 95.7 95.2
4周 95.3 95.1 96 95.5 95.5 95.2 94.7
降低量 1.3 1.5 0.8 1.1 1.1 1.6 1.9
由表6和图4可以看出，6个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，表明制剂应当避光保存。而实验组3的包含吐温20、丙二醇、海藻糖、氯化钠、蛋氨酸、聚乙二醇的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明蛋白保护剂3对类胰蛋白酶单克隆抗体的保护性最佳。
表7采用不同蛋白保护剂的制剂的冻融稳定性测试中的蛋白纯度测定结果(％)
时间点 实验组1 实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 实验组6 对照组
0周 96.7 96.6 96.6 96.7 96.6 96.6 96.6
1周 96.6 96.5 96.6 96.6 96.5 96.5 96.5
2周 96.5 96.4 96.5 96.5 96.4 96.4 96.3
3周 96.4 96.2 96.4 96.3 96.2 96.2 96.1
4周 96.2 96.1 96.3 96.1 96.1 96 95.9
降低量 0.5 0.5 0.3 0.6 0.5 0.6 0.7
由表7和图5可以看出，6个实验组的制剂在测试条件下的蛋白纯度在4周时间内均有所下降，表明制剂应当避免反复冻融。而实验组3的包含吐温20、丙二醇、海藻糖、氯化钠、蛋氨酸、聚乙二醇的制剂在4周后蛋白纯度下降最小，表明蛋白保护剂3对类胰蛋白酶单克隆抗体的保护性最佳。
实施例3蛋白制剂的长期稳定性
使用类胰蛋白酶单克隆抗体、磷酸缓冲液、吐温20、丙二醇、海藻糖、氯化钠、蛋氨酸、聚乙二醇，制备3个批次的制剂，分别命名为A组、B组和C组，其中类胰蛋白酶单克隆抗体的浓度为20.0mg/ml，磷酸缓冲液的浓度为10mmol/L，吐温20的浓度为1mg/ml，丙二醇的浓度为1mg/ml，海藻糖的浓度为50mg/ml，氯化钠的浓度为9mg/ml，蛋氨酸的浓度为9mg/ml，聚乙二醇的浓度为3mg/ml，制剂的pH为7.4。对三组制剂进行长期稳定性测试，结果列于表8和图6中。将制剂置于安剖瓶中，以溴化丁基胶塞密封瓶口，以铝塑组合盖紧固瓶口。将该制剂在2-8℃下避光密闭储存2年，分别在第0,3,6,9,12,18和24个月定期取样检测制剂的蛋白浓度和纯度等。其中蛋白纯度通过SDS-PAGE法或者紫外-可见光分光光度法(检测波长：280nm)测得。
表8制剂的长期稳定性测试结果
由表8和图6可以看出，在2年的测试终点时，ABC三组制剂的蛋白浓度和纯度无明显变化；测得的蛋白纯度分别降低0.1％、0.2％和0.4％，均符合预设标准；结合活性的变化也满足预设标准。这表明本发明的制剂在2-8℃下能够稳定储存2年。
实施例4蛋白制剂的稀释稳定性
按照实施例3制备得到制剂，使用0.9％NaCl生理盐水稀释制剂，使得制剂中的抗体浓度由20.0mg/ml降低至0.5、1.0、2.0、5.0和10.0mg/ml，经稀释的制剂分别为A、B、C、D和E组。在稀释稳定性测试条件下测定经稀释的制剂的稳定性，所得结果如表9和图7所示。使用0.9％NaCl生理盐水稀释制剂，经过稀释后的制剂在常温25±2℃储存7天，分别在第0,1,2,7天定期取样检测制剂的蛋白浓度和纯度。
表9制剂的稀释稳定性测试结果
由表9和图7可以看出，A-E五组制剂在稀释后，蛋白浓度和纯度无明显变化；这表明本发明的制剂在用0.9％生理盐水稀释2～80倍后，可在25±2℃下稳定储存至少7天。
综上，本发明提供的制剂能够较好地保持类胰蛋白酶单克隆抗体的稳定性。为了更好地保持抗体的稳定性，优选在2-8℃的温度下避光储存本发明的制剂。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种药物制剂，其特征在于，包含类胰蛋白酶单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂；所述类胰蛋白酶单克隆抗体包含重链可变区和/或轻链可变区；
其中，所述重链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的CDR2；
如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的CDR3；
所述轻链可变区可包含如下所示的CDR序列：
如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的CDR1；
如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的CDR2；
如SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的CDR3。
2.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述类胰蛋白酶单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQID NO：10所示的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述类胰蛋白酶单克隆抗体的轻链可变区含如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13或SEQID NO：14所示的氨基酸序列。
4.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述类胰蛋白酶单克隆抗体为人鼠嵌合的类胰蛋白酶单克隆抗体。
5.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述类胰蛋白酶单克隆抗体在所述药物制剂中的浓度为1～40mg/ml。
6.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂中的缓冲液选自柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液中的一种或多种；
优选地，所述缓冲液的浓度为5～25mmol/L。
7.如权利要求1所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂中的蛋白保护剂自表面活性剂、多元醇分散剂、糖类、盐类、氨基酸类、聚合物中的一种或多种；
优选地，所述蛋白保护剂在所述药物制剂中的浓度为10～200mg/ml。
8.如权利要求1-7任一项所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂包括鼻喷剂。
9.权利要求1-8任一项所述的药物制剂在制备治疗类胰蛋白酶相关疾病的药物中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述疾病包括选自肺部疾病、自身免疫疾病、炎性疾病、纤维化疾病、粒细胞性疾病、单核细胞性疾病、淋巴细胞性疾病、或与正常或异常组织常驻性细胞或基质细胞的数目或分布增加相关的疾病中的至少一种；
优选地，所述肺部疾病包括选自哮喘、气道高反应性和慢性阻塞性肺病的至少一种；
优选地，所述哮喘是高Th2哮喘或低Th2哮喘；
优选地，所述自身免疫疾病包括选自类风湿性关节炎、银屑病、嗜酸粒细胞性食管炎、炎性肠病和克罗恩病中的至少一种；
优选地，所述炎性疾病包括选自慢性特发性荨麻疹、过敏反应、变应性休克、特应性皮炎或过敏性鼻炎中的至少一种；
优选地，所述纤维化疾病是特发性肺纤维化；
优选地，所述疾病包括肥大细胞增生症。
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