CN118703389A - 一种调节情绪、改善睡眠和长身高的戊糖片球菌及其应用 - Google Patents
一种调节情绪、改善睡眠和长身高的戊糖片球菌及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种调节情绪、改善睡眠和长身高的戊糖片球菌及其应用，属于益生菌技术领域。本发明戊糖片球菌ZJPY017的分类命名为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1.60177。本发明提供的戊糖片球菌具有较强的耐酸、耐胆盐特性，而且具有增加骨密度、有助于机体排铅、促进身高生长、调节情绪和改善睡眠的作用，对于各类人群具有普遍适用性，为保健食品和药品的研发提供了新的思路。
Description
技术领域
本发明属于益生菌技术领域，尤其涉及一种调节情绪、改善睡眠和长身高的戊糖片球菌及其应用。
背景技术
铅是一种自然界中广泛存在的人体所非必需的重金属元素，如果机体铅含量过高，能够导致许多急性和慢性疾病。铅进入人体后，除部分通过粪便、汗液排泄外，其余在数小时后溶入血液中，阻碍血液的合成，导致人体贫血，出现头痛、眩晕、乏力、困倦、便秘和肢体酸痛等；有的口中有金属味，动脉硬化、消化道溃疡和眼底出血等症状也与铅污染有关。处于生长发育期的儿童对铅暴露尤为敏感，机体铅的存在会阻碍儿童的生长发育，而儿童身高发育是每个家长关心的重要问题。良好的身高发育对儿童的身体健康、心理发展和社会适应能力都有着深远的影响，比如体格发育不良可能导致生长发育迟缓、免疫力低下等问题。所以，促进机体排铅以及促进儿童身高生长具有重要意义。
睡眠是生物体的基本功能，对维持正常生理活动具有重要作用。充足的睡眠是恢复精神和体力、整合和巩固记忆的重要环节，其生理意义仅次于呼吸和心跳，是维持机体健康不可或缺的。研究表明，良好的睡眠可以降低某些慢性疾病的发病率，反之，睡眠不足则影响多种生理功能，例如认知、情绪、免疫、生殖功能等。而情绪低落是人们常见的心理问题之一，它会给人们的日常生活、工作、学习带来很大的负面影响。如果情绪低落持续时间较长，就会产生一系列的后果。在生理方面，长期情绪低落会导致免疫力下降、增加感染疾病的风险；会导致血液中的肾上腺素和皮质醇水平升高，增加心脏病和中风的风险；会导致消化系统问题，如胃酸过多、胃痉挛、腹泻等。在心理健康方面，长期情绪低落是抑郁症的前兆，或导致焦虑症的发生。可见，睡眠状况与情绪好坏密切相关，失眠、情绪低落对于机体健康是十分不利的。目前，化学药物是临床上治疗失眠的主要手段，但患者长期服用，容易造成一些神经损伤和依赖性，因此寻找一种高效、安全无毒副作用的失眠治疗方式迫在眉睫。
骨是一种高活性结缔组织，可以通过骨代谢及骨重塑来修复自身微损伤，保持骨结构、荷载及钙含量的内稳态平衡，同时骨也作为内分泌器官调控代谢过程，是维持人体生命的重要器官。骨质疏松症是一种全身性骨代谢病，由多种因素引起，其特点是骨量、骨密度和骨组织的显微结构恶化，骨脆性增强和易发生骨折。骨质疏松症已严重威胁人类健康，最终将导致患者日常活动减少，生活质量降低，死亡率增加。所以如何有效提高骨密度对于骨质疏松症的防治具有重要意义。
戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)，属于革兰氏阳性球菌，链球菌科片球菌属，能发酵葡萄糖产生乳酸，分布于麦芽汁及发酵植物材料，如酸腌菜、泡菜、青贮料等。已报道的戊糖片球菌的益生功能具有抑制炎症、抑制细菌生长、促进消化以及提高免疫力，目前尚未有关于戊糖片球菌是否同时具有增加骨密度、有助于机体排铅、促进儿童身高生长、调节情绪和改善睡眠作用的有关报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一株同时具有增加骨密度、有助于机体排铅、促进儿童身高生长、调节情绪和改善睡眠作用的戊糖片球菌。
本发明的另一目的在于提供一种同时具有增加骨密度、有助于机体排铅、促进儿童身高生长、调节情绪和改善睡眠作用的戊糖片球菌菌液。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种戊糖片球菌，所述戊糖片球菌为戊糖片球菌ZJPY017，分类命名为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1.60177。
本发明还提供了一种戊糖片球菌菌液，所述戊糖片球菌菌液包括上述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液中的至少一种。
优选的，所述活菌液的制备方法包括如下步骤：将上述戊糖片球菌接种至液体培养基中，40℃-50℃发酵培养，对发酵培养液计数，用无菌水调节菌浓度至104CFU/mL-106CFU/mL，得活菌液。
优选的，所述灭活菌液的制备方法包括如下步骤：将所述活菌液进行灭活，得灭活菌液。
优选的，当所述戊糖片球菌菌液包括上述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液时，活菌液中的菌数量和灭活菌液中的菌数量比为1:2-4。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备增加骨密度产品中的应用。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备有助于机体排铅产品中的应用。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备促进身高生长产品中的应用。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备调节情绪产品中的应用。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备改善睡眠产品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明提供的戊糖片球菌ZJPY017具有较强的耐酸、耐胆盐特性，而且具有增加骨密度、有助于机体排铅、促进身高生长、调节情绪和改善睡眠的作用，对于各类人群具有普遍适用性，为保健食品和药品的研发提供了新的思路。
附图说明
图1为本发明戊糖片球菌的生长曲线；
图2为粪便中铅含量测定结果。
保藏说明
本发明戊糖片球菌ZJPY017保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏时间为2024年04月15日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.1.60177。
具体实施方式
本发明提供了一种戊糖片球菌，所述戊糖片球菌为戊糖片球菌ZJPY017，分类命名为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1.60177。
本发明戊糖片球菌是从浙江省宁波市慈城一农户发酵老面团中筛选获得的。对筛选获得的菌株经形态鉴定和16S rRNA测序分析，确定为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)。本发明戊糖片球菌的分离纯化方法具体为：用细菌接种环取一环发酵老面团接种于MRS固体培养基中，40℃条件下厌氧培养30h；挑取表面光滑的白色菌落做革兰氏染色，显微镜下观察到菌体为革兰氏阳性球菌。将该菌落接种到MRS液体培养基中，40℃条件下厌氧培养30h；提取基因组，利用PCR扩增16S rDNA，将测序结果在NCBI数据库中进行比对，最终鉴定筛选获得的样品为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)。
本发明还提供了一种戊糖片球菌菌液，所述戊糖片球菌菌液包括上述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液中的至少一种。
在本发明中，所述活菌液的制备方法优选的包括如下步骤：将上述戊糖片球菌接种至液体培养基中，40℃-50℃发酵培养，对发酵培养液计数，用无菌水调节菌浓度至104CFU/mL-106CFU/mL，得活菌液。在本发明中，所述液体培养基优选的包括如下原料：蛋白粉20g/L-30g/L，葡萄糖20g/L-30g/L，磷酸氢二钾2.1g/L-2.4g/L，氯化镁0.2g/L-0.4g/L，硫酸锌0.3g/L-0.35g/L，碳酸钙0.16g/L-0.2g/L，所述液体培养基的pH值优选为5.5-6.5。在本发明中，所述发酵培养的温度优选为43℃-47℃，更优选为45℃-46℃，本发明对于发酵的具体时间没有特殊限定，只要发酵所得的培养液中菌浓度高于104CFU/mL或高于106CFU/mL即可。
在本发明中，所述灭活菌液的制备方法优选的包括如下步骤：将所述活菌液进行灭活，得灭活菌液。所述灭活的方法优选的为高温蒸汽灭菌，所述高温蒸汽灭菌的温度优选为140℃-150℃，更优选为144℃-148℃，所述高温蒸汽灭菌的时间优选为20min-30min，更优选为23min-26min。
在本发明戊糖片球菌菌液中，当所述戊糖片球菌菌液仅为上述戊糖片球菌的活菌液时，所述活菌液中的菌浓度优选为105CFU/mL；当所述戊糖片球菌菌液仅为上述戊糖片球菌的灭活菌液时，所述灭活菌液中的菌浓度优选为105CFU/mL；当所述戊糖片球菌菌液同时包括上述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液时，活菌液中的菌数量和灭活菌液中的菌数量比优选为1:2-4，更优选为1:3。
本发明还提供了上述戊糖片球菌或上述戊糖片球菌菌液在制备增加骨密度、有助于机体排铅、促进身高生长、调节情绪或改善睡眠产品中的应用。
在本发明中，所述产品的种类优选的包括食品和药品。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
以浙江省宁波市慈城一农户发酵老面团为样品，用细菌接种环取一环发酵老面团接种于MRS固体培养基中，40℃条件下厌氧培养30h；挑取表面光滑的白色菌落做革兰氏染色，显微镜下观察到菌体为革兰氏阳性球菌。将该菌落接种到MRS液体培养基中，40℃条件下厌氧培养30h；提取基因组，利用PCR扩增16S rDNA，将测序结果在NCBI数据库中进行比对，最终鉴定筛选获得的样品为戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)ZJPY017。
实施例2
实施例1所得戊糖片球菌ZJPY017的生长曲线及益生菌特性研究
戊糖片球菌ZJPY017的生长曲线
将戊糖片球菌ZJPY017接种到MRS液体培养基中，置于40℃摇床培养(厌氧)1d，每隔2h测定一次OD595值，以时间为横坐标，以OD595的值为纵坐标，绘制生长曲线。结果如图1所示，生长曲线显示戊糖片球菌的对数生长期为2h-4h，在10h时达到稳定期，说明本发明戊糖片球菌ZJPY017具有良好的活性。
戊糖片球菌ZJPY017的益生菌特性研究
将戊糖片球菌ZJPY017接种到MRS液体培养基中，在40℃恒温培养箱中培养12h，得戊糖片球菌ZJPY017培养液，进行如下耐酸和耐胆盐实验。
(1)耐酸实验
取100μL戊糖片球菌ZJPY017培养液，分别在pH为2、3、4和7的PBS溶液中进行培养，培养温度为40℃。在培养至1h、3h和4h时用平板计数方法测定活菌率。活菌率(％)＝(a/b)×100％，其中a分别代表1h、3h和4h戊糖片球菌ZJPY017培养液中的活菌数，b为100μL戊糖片球菌ZJPY017培养液中的初始活菌数，即接种至PBS之前的活菌数。本次实验设置3个平行，数据为平均值±SD。结果如表1所示。
表1戊糖片球菌ZJPY017的耐酸结果
| 活菌率(％) | 1h | 3h | 4h |
| pH2 | 25.3±3.4 | 12.1±4.6 | 0 |
| pH3 | 98.6±6.9 | 81.3±8.2 | 69.5±5.1 |
| pH4 | 134.8±4.6 | 126.5±4.2 | 112.4±6.4 |
| pH7 | 152.7±5.8 | 149.5±3.6 | 123.5±5.3 |
(2)耐胆盐实验
将戊糖片球菌ZJPY017培养液以2％的体积接种量分别接种于含0％、0.3％牛胆盐的MRS液体培养基中，40℃培养4h，用平板计数方法测定活菌率，以未接种菌液的液体培养基作为空白对照，按照如下公式计算菌株在胆盐中的活菌率。
活菌率(％)＝[(含0.3％胆盐培养基活菌数-空白对照活菌数)/(含0％胆盐培养基活菌数-空白对照活菌数)]×100％。
本次实验设置3个平行，数据为平均值±SD。结果显示，本发明戊糖片球菌ZJPY017在0.3％胆盐中4h的活菌率高达95.4±2.6％。
以上结果表明，本发明戊糖片球菌ZJPY017具有强耐酸、耐胆盐性。
实施例3
一种戊糖片球菌菌液，由实施例1所得戊糖片球菌ZJPY017的活菌液组成，具体制备方法为：
将实施例1所得的戊糖片球菌ZJPY017接种至液体培养基中，45℃发酵培养，对发酵培养液计数，用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL，得活菌液；所述液体培养基由蛋白粉20g/L，葡萄糖30g/L，磷酸氢二钾2.1g/L，氯化镁0.2g/L，硫酸锌0.3g/L，碳酸钙0.2g/L组成，所述液体培养基的pH值为5.5。
实施例4
一种戊糖片球菌菌液，由实施例1所得戊糖片球菌ZJPY017的灭活菌液组成，具体制备方法为：
将实施例1所得的戊糖片球菌ZJPY017接种至液体培养基中，45℃发酵培养，对发酵培养液计数，用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL，得活菌液；所述液体培养基由蛋白粉20g/L，葡萄糖30g/L，磷酸氢二钾2.1g/L，氯化镁0.2g/L，硫酸锌0.3g/L，碳酸钙0.2g/L组成，所述液体培养基的pH值为5.5。
将活菌液在140℃条件下灭菌20min，得灭活菌液。
实施例5
与实施例4的区别在于用无菌水调节菌浓度至3×105CFU/mL，其余均同实施例4。
实施例6
一种戊糖片球菌菌液，由1mL实施例3所得的活菌液和1mL实施例5所得的灭活菌液组成，其中实施例3所得的活菌液的菌浓度为105CFU/mL，实施例5所得的灭活菌液的菌浓度为3×105CFU/mL。
实施例7
铅中毒大鼠铅排泄效果验证
将70只SD大鼠随机分成正常组(简写为：NC)、模型组(简写为：Pb)、实施例1所得戊糖片球菌组(简写为：Pb+S1)、实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为：Pb+S3)、实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为：Pb+S4)、实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为：Pb+S5)和实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为：Pb+S6)，每组10只，适应性喂养一周后开始实验，实验周期为8周。各组别的喂养方式分别为：
NC：在8周内提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用，从第二周开始，每天灌胃一次生理盐水，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
Pb：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用，从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。从第二周开始，每天灌胃一次生理盐水，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
Pb+S1：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用。从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。另外，从第二周开始，每天灌胃一次实施例1所得戊糖片球菌，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。灌胃的实施例1所得戊糖片球菌的菌浓度为105CFU/mL，菌浓度为105CFU/mL的戊糖片球菌的制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL。
Pb+S3：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用。从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。另外，从第二周开始，每天灌胃一次实施例3所得戊糖片球菌活菌液，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
Pb+S4：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用。从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。另外，从第二周开始，每天灌胃一次实施例4戊糖片球菌灭活菌液，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
Pb+S5：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用。从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。另外，从第二周开始，每天灌胃一次实施例5戊糖片球菌灭活菌液，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
Pb+S6：适应性喂养一周内，提供无铅的普通饮用水，供大鼠自由饮用。从第二周开始，将无铅普通饮用水替换为铅水，所述铅水为将三水乙酸铅溶于饮用水中使其浓度达600mg/L，供小鼠自由饮用。另外，从第二周开始，每天灌胃一次实施例6戊糖片球菌菌液，灌胃剂量为每100g体重灌胃0.1mL。
每周定时单独收集每只大鼠的粪便，在8周实验结束后，大鼠禁食禁水18h后称取体重，乙醚迷晕后眼球取血。其中取3mL全血用于检测血铅，将其装入肝素钠管，颠倒混匀，待测。粪便及血液中的铅含量测定方法为：将粪便与血液样品转移至用20％硝酸浸泡过夜的锥形瓶中，加入10mL浓硝酸，放置过夜后置于可调式电热板上消解，直至消化液呈无色透明或略带淡黄色。冷却后定容，使用火焰原子吸收分光光度计测定样品中铅的含量，最终结果用平均值进行展示。
其中粪便中铅含量测定结果如图2所示，由图2可以看出，正常组整个周期的粪便中几乎不含铅。而在其他组别中，给予铅水喂养时，粪便中铅离子含量显著增加。与模型组相比，本发明戊糖片球菌或戊糖片球菌菌液各组别均能提高粪便中的铅含量，且戊糖片球菌活菌组、灭活菌液组的排铅效果优于戊糖片球菌组。
血液中铅含量的结果如表2所示，由表2可以看出，正常组整个周期的血液中几乎不含铅。与模型组相比，本发明戊糖片球菌ZJPY017或戊糖片球菌ZJPY017菌液各组别均能降低血液中的铅含量，且戊糖片球菌ZJPY017活菌组、灭活菌液组的排铅效果优于戊糖片球菌ZJPY017组。
表2血液中铅含量测定结果
| 组别 | 血液铅含量(μg/mL) |
| NC | 0 |
| Pb | 6.2 |
| Pb+S1 | 5.4 |
| Pb+S3 | 5.1 |
| Pb+S4 | 4.6 |
| Pb+S5 | 4.1 |
| Pb+S6 | 3.6 |
实施例8
改善睡眠效果验证
(1)延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间
选择SPF级ICR健康雄性小鼠70只，2-3月龄，体质量20-22g，小鼠适应性喂养一周后，随机分为7个组，每个组10只小鼠，分别为空白对照组(简写为NC)、阳性组、实施例1所得戊糖片球菌组(简写为Pb+S1，实施例1所得戊糖片球菌组的菌浓度为105CFU/mL，制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL)、实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为Pb+S3)、实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S4)、实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S5)和实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为Pb+S6)，除NC组和阳性组之外，每组小鼠按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃对应组别的菌剂，每天一次，连续灌胃15d。NC组小鼠按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃生理盐水，每天一次，连续灌胃15d。阳性组小鼠按照每1kg体重给予14mg的量给予罗通定片食用，每天一次，连续灌胃15d。末次给药15min后，各组小鼠腹腔注射经预实验确定剂量为38mg/kg的戊巴比妥钠溶液，注射量为0.2mL/20g。以翻正反射消失1min以上为入睡判断标准，记录各组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间，最终结果用平均值进行展示，结果见表3。由表3可以看出，本发明实施例1所得戊糖片球菌ZJPY017、实施例3所得戊糖片球菌ZJPY017活菌液、实施例4所得戊糖片球菌ZJPY017灭活菌液、实施例5所得戊糖片球菌ZJPY017灭活菌液和实施例6所得戊糖片球菌ZJPY017菌液均能明显提高睡眠时间。
表3各组小鼠延长戊巴比妥钠睡眠时间测定结果
| 组别 | 睡眠时间(s) |
| NC | 1863.5 |
| 阳性组 | 3350.6 |
| Pb+S1 | 3142.8 |
| Pb+S3 | 3226.2 |
| Pb+S4 | 3287.6 |
| Pb+S5 | 3310.2 |
| Pb+S6 | 3348.5 |
(2)巴比妥钠睡眠潜伏期检测
选择SPF级ICR健康雄性小鼠70只，2-3月龄，体质量20-22g，小鼠适应性喂养一周后，随机分为7个组，每个组10只小鼠，分别为空白对照组(简写为NC)、阳性组、实施例1所得戊糖片球菌组(简写为Pb+S1，实施例1所得戊糖片球菌组的菌浓度为105CFU/mL，制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL)、实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为Pb+S3)、实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S4)、实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S5)和实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为Pb+S6)，除NC组和阳性组之外，每组小鼠按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃对应组别的菌剂，每天一次，连续灌胃15d。NC组小鼠按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃生理盐水，每天一次，连续灌胃15d。阳性组小鼠按照每1kg体重给予14mg的量给予罗通定片食用，每天一次，连续灌胃15d。末次给药15min后，各组小鼠腹腔注射经预实验确定剂量为230mg/kg的巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g。以翻正反射消失1min以上作为入睡指标，记录各组小鼠的睡眠潜伏期，最终结果用平均值进行展示，结果见表4。由表4可以看出，本发明实施例1所得戊糖片球菌ZJPY017、实施例3所得戊糖片球菌ZJPY017活菌液、实施例4所得戊糖片球菌ZJPY017灭活菌液、实施例5所得戊糖片球菌ZJPY017灭活菌液和实施例6所得戊糖片球菌ZJPY017菌液均能明显缩短睡眠潜伏期。
表4各组小鼠缩短戊巴比妥钠睡眠潜伏期测定结果
| 组别 | 睡眠潜伏期(s) |
| NC | 2238.6 |
| 阳性组 | 1256.4 |
| Pb+S1 | 1312.4 |
| Pb+S3 | 1289.5 |
| Pb+S4 | 1269.7 |
| Pb+S5 | 1259.3 |
| Pb+S6 | 1248.2 |
实施例9
调节情绪效果验证
建立慢性不可预测的温和刺激(CUMS)模型，模拟抑郁症患者的疾病状态。具体建模方法为：
选取70只7周龄雄性C57BL/6小鼠作为实验用鼠，从中随机选取60只用于建立CUMS小鼠模型。建立CUMS模型的方法为：将空笼17h、斜笼45°17h、湿笼17h、食物剥夺14h、夜间光照12h、热水游泳5min、饮水剥夺16h、夹尾5min共8种刺激随机安排到28天内，每日2种，同种刺激不连续出现，使小鼠不能预料刺激的发生。结果显示，模型组小鼠表现出类似抑郁症的行为和生理特征，表明28天造模成功。其余10只小鼠作为正常对照组(简写为NC)，正常饲养，不给予刺激。
从第5周开始，将造模成功的60只CUMS模型小鼠重新随机分为6组，分别为模型组(简写为M)、实施例1所得戊糖片球菌组(简写为Pb+S1，实施例1所得戊糖片球菌组的菌浓度为105CFU/mL，制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL)、实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为Pb+S3)、实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S4)、实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S5)和实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为Pb+S6)，每组10只。对照组小鼠和模型组小鼠正常饲喂，不做其它处理；Pb+S1、Pb+S3、Pb+S4、Pb+S5和Pb+S6组小鼠每天灌胃一次对应组别的菌剂，灌胃剂量为每100g体重灌胃1mL，连续15天。然后进行如下测试：
(1)旷场测试(OFT)
实验在安静的环境下进行。总共准备70个规格等完全相同的箱子，对70只小鼠同时进行测试，将不同组别的不同只动物分别放入不同的箱内底面中心，同时进行摄像和计时。观察6min后停止摄像，根据摄像结果计算不同小鼠的总移动距离，最终数值以平均数的方式体现，计算结果如表5所示，与正常对照组小鼠相比，模型组CUMS小鼠的总移动距离明显较短。然而，Pb+S1、Pb+S3、Pb+S4、Pb+S5和Pb+S6组小鼠的总移动距离有明显改善，表明本发明戊糖片球菌ZJPY017能够显著改善CUMS模型小鼠的情绪低落和抑郁倾向。
表5旷场测试结果
| 组别 | 总移动距离(m) |
| NC | 35.4 |
| M | 18.9 |
| Pb+S1 | 25.8 |
| Pb+S3 | 27.3 |
| Pb+S4 | 28.6 |
| Pb+S5 | 30.2 |
| Pb+S6 | 33.7 |
(2)悬尾实验(TST)
使用医用胶带将小鼠尾部固定在实验箱顶部，用摄像机记录5min内小鼠的行为，并用Tail Suspension ScanTM(Clever Sys Inc,VA,USA)分析软件进行分析，统计2-5min内小鼠四肢与躯干完全不动的时间。最终数值以平均数的方式体现，计算结果如表6所示，与正常对照组相比，模型组小鼠在悬尾试验中表现出更长的不动时间，而Pb+S1、Pb+S3、Pb+S4、Pb+S5和Pb+S6组小鼠的不动时间相对于模型组小鼠组明显缩短，表明本发明戊糖片球菌ZJPY017能够显著改善CUMS模型小鼠的情绪低落和抑郁倾向。
表6悬尾实验结果
| 组别 | 不动时间(s) |
| NC | 50 |
| M | 90 |
| Pb+S1 | 79 |
| Pb+S3 | 65 |
| Pb+S4 | 62 |
| Pb+S5 | 59 |
| Pb+S6 | 54 |
实施例10
增加骨密度效果验证
采用去除卵巢的方式构建骨质疏松大鼠模型，具体为：将70只健康状况稳定的SD雌性(8周龄)SPF级大鼠按体重随机分为空白对照组(简写为NC，又称为假手术组，10只)和去卵巢组(60只)。去卵巢组60只大鼠摘除双侧卵巢后缝合，空白对照组(假手术组)进行除摘除双侧卵巢之外的相应操作，手术结束后进行消毒处理。造模第6天，将去卵巢组大鼠按体重随机分为6组，具体为：
模型组(10只)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃无菌水，每天一次；
实施例1所得戊糖片球菌组(简写为Pb+S1，实施例1所得戊糖片球菌组的菌浓度为105CFU/mL，制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃浓度为105CFU/mL的实施例1所得戊糖片球菌，每天一次；
实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为Pb+S3)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃实施例3所得戊糖片球菌活菌液，每天一次；
实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S4)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃实施例4所得戊糖片球菌灭活菌液，每天一次；
实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S5)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃实施例5所得戊糖片球菌灭活菌液，每天一次；
实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为Pb+S6)：按照每100g体重灌胃1mL的量灌胃实施例6所得戊糖片球菌菌液，每天一次。
各组小鼠持续灌胃6周，结束后，采用1％戊巴比妥钠麻醉大鼠，将其固定于小动物活体断层扫描成像仪上，分辨率为20μm，扫描结束后进行图像重建，采用InveonResearchWorkplace 2.2软件分析各组大鼠骨密度情况，结果用平均值表示，见表7。表明本发明戊糖片球菌ZJPY017具有显著提高骨密度的作用。
表7骨密度测定结果
| 组别 | 骨密度(μg/cm3) |
| NC | 0.359 |
| 模型组 | 0.274 |
| Pb+S1 | 0.308 |
| Pb+S3 | 0.312 |
| Pb+S4 | 0.323 |
| Pb+S5 | 0.336 |
| Pb+S6 | 0.348 |
实施例11
促进身高生长效果验证
购买60只刚出生的体长相差不超过0.5cm、体重相差不超过1g的昆明种仔鼠，随机分成6组：空白对照组、实施例1所得戊糖片球菌组(简写为Pb+S1，实施例1所得戊糖片球菌组的菌浓度为105CFU/mL，制备方法为：将实施例1所得戊糖片球菌接种到MRS液体培养基中，40℃厌氧培养30h，离心取菌体，将菌体用无菌水调节菌浓度至105CFU/mL)、实施例3戊糖片球菌活菌液组(简写为Pb+S3)、实施例4戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S4)、实施例5戊糖片球菌灭活菌液组(简写为Pb+S5)和实施例6戊糖片球菌菌液组(简写为Pb+S6))，每组10只。6组小鼠每天在相同的时间给予相同量的奶喂养，除了空白对照组之外，其余组别均按照每10g体重灌胃1mL对应组别的菌剂进行灌胃给药，每天一次，空白对照组按照每10g体重灌胃1mL无菌水的量灌胃给无菌水，每天一次，连续30天。在整个实验过程中，分别在0d、10d、20d和30d测量仔鼠的体长，结果以平均数表示，见表8。结果表明本发明戊糖片球菌ZJPY017具有显著促进身高生长的作用。
表8仔鼠身长变化测量结果
| 组别 | 0d(cm) | 10d(cm) | 20d(cm) | 30d(cm) |
| NC | 2.52 | 4.22 | 5.67 | 6.16 |
| Pb+S1 | 2.53 | 4.62 | 6.23 | 7.45 |
| Pb+S3 | 2.50 | 4.71 | 6.87 | 7.79 |
| Pb+S4 | 2.51 | 4.82 | 6.98 | 7.96 |
| Pb+S5 | 2.52 | 4.98 | 7.12 | 8.35 |
| Pb+S6 | 2.53 | 5.34 | 7.86 | 8.98 |
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种戊糖片球菌，其特征在于，所述戊糖片球菌为戊糖片球菌ZJPY017，分类命名为戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1.60177。
2.一种戊糖片球菌菌液，其特征在于，所述戊糖片球菌菌液包括权利要求1所述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的戊糖片球菌菌液，其特征在于，所述活菌液的制备方法包括如下步骤：将权利要求1所述戊糖片球菌接种至液体培养基中，40℃-50℃发酵培养，对发酵培养液计数，用无菌水调节菌浓度至104CFU/mL-106CFU/mL，得活菌液。
4.根据权利要求2所述的戊糖片球菌菌液，其特征在于，所述灭活菌液的制备方法包括如下步骤：将所述活菌液进行灭活，得灭活菌液。
5.根据权利要求2所述的戊糖片球菌菌液，其特征在于，当所述戊糖片球菌菌液包括权利要求1所述戊糖片球菌的活菌液和灭活菌液时，活菌液中的菌数量和灭活菌液中的菌数量比为1:2-4。
6.权利要求1所述戊糖片球菌或权利要求2-5任意一项所述戊糖片球菌菌液在制备增加骨密度产品中的应用。
7.权利要求1所述戊糖片球菌或权利要求2-5任意一项所述戊糖片球菌菌液在制备有助于机体排铅产品中的应用。
8.权利要求1所述戊糖片球菌或权利要求2-5任意一项所述戊糖片球菌菌液在制备促进身高生长产品中的应用。
9.权利要求1所述戊糖片球菌或权利要求2-5任意一项所述戊糖片球菌菌液在制备调节情绪产品中的应用。
10.权利要求1所述戊糖片球菌或权利要求2-5任意一项所述戊糖片球菌菌液在制备改善睡眠产品中的应用。
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