CN118524846A

CN118524846A - 包含酶的口腔护理组合物

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Publication number: CN118524846A
Application number: CN202280082163.1A
Authority: CN
Inventors: M·K·蒂瓦里; L·G·帕尔门; D·R·塞古拉; M·R·约根森
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2021-12-16
Filing date: 2022-12-13
Publication date: 2024-08-20

Abstract

本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β‑葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。本发明进一步涉及所述组合物作为药物的用途、所述组合物在治疗口腔疾病中的用途、包括向人受试者施用所述组合物的治疗方法、包括将物体与所述组合物接触的去除生物膜的方法、以及包含所述组合物的套装盒。

Description

包含酶的口腔护理组合物

序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶(mutanase)、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。本发明进一步涉及所述组合物作为药物的用途、所述组合物在治疗口腔疾病中的用途、包括向人受试者施用所述组合物的治疗方法、包括将物体与所述组合物接触的去除生物膜的方法、以及包含所述组合物的套装盒。

背景技术

生物膜是在很多不同环境中的固体表面(包括口腔表面)上发现的细菌群落。口腔生物膜或牙菌斑含有很多与口腔健康问题(例如口腔恶臭、脱矿、龋齿、蛀牙、牙齿潜在缺失和牙龈病(牙龈炎和牙周炎))相关的细菌。

口腔生物膜的形成发生在三个阶段中，分别称为停滞期、生长期、和稳定状态。在停滞期，来自唾液的糖蛋白与口腔表面(例如牙齿)结合，并且形成称为菌膜的结构，该菌膜充当细菌的附着位点。在生长期，发生共聚集，即第二细菌定殖者附着至第一细菌定殖者，引起生物膜多样性增加以及生物膜生长和成熟。在稳定状态，生物膜生长减缓并最终停止。这一基于阶段的形成周期导致生物膜存在几个连续层面中，这使得生物膜的物理磨损更加困难。

在生物膜内，驻留的细菌细胞分布在细胞外聚合物基质中，该细胞外聚合物基质主要由水、蛋白质、外泌多糖、脂多糖、脂质、表面活性剂、和细胞外DNA组成，其中外泌多糖占生物膜干重的主要部分(H.C.Flemming和J.Wingender(2010),Nat.Rev.Microbiol.[微生物自然评论]8,623-633)。外泌多糖是主要的葡萄糖和果糖均聚物，包括1,3-α-D-葡聚糖、1,4-α-D-葡聚糖、1,6-α-D-葡聚糖和2,6-β-D-果聚糖。这些多糖是通过由口腔细菌(例如链球菌属物种、乳杆菌属物种、和放线菌属物种)分泌的葡萄糖基转移酶和果糖基转移酶从摄取的蔗糖合成的。变聚糖和右旋糖酐是在牙菌斑的形成中特别重要的葡聚糖。变聚糖具有高度支化的结构，其主链由与侧链中的1,3-α-糖苷键和1,6-α-糖苷键连接的葡萄糖分子构成。右旋糖酐也是葡萄糖的高分子量聚合物，在主链和侧链上含有多个连续的1,6-α-键，以1,3-α-键开始(M.Pleszczynska等人(2016),Biotechnol.Appl.Biochem.[应用生物化学与生物技术]64(3),337-346)。

因为对抗微生物剂的抗性提高以及生物膜的机械特性，很多目前的口腔护理产品在解决生物膜形成和缓解相关口腔健康问题方面十分低效。生物膜去除的主要关注点在于机械磨损。然而，生物膜的多层性质给机械磨损造成困难，并且由于生物膜的机械去除(例如，通过刷牙)扩大和加深了生物膜在口腔中附着和扩展的区域，潜在地增加而不是降低了问题的严重性，从而使机械磨损进一步受到影响。

鉴于生物膜在口腔疾病中的重要作用，本领域需要可有效靶向口腔生物膜的口腔护理组合物。WO 1997/38669(诺维信公司(Novozymes))描述了包含变聚糖酶和右旋糖酶的口腔护理组合物，WO 1998/57653(诺维信公司)提供了包含右旋糖酶和支链淀粉酶的口腔护理组合物，并且WO 2020/099490(诺维信公司)描述了包含变聚糖酶和DNA酶的口腔护理组合物。然而，仍然需要能够更有效地降解口腔生物膜的另外的和改善的口腔护理组合物。

发明内容

本发明提供了酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶。这些酶通过降解口腔生物膜的细胞外DNA和外泌多糖组分起作用，从而改善口腔健康。这种酶促活性的组合在预防和去除口腔生物膜方面具有很高的活性。此外，单个酶组分在多种口腔护理成分存在下高度稳定，使得它们非常适用于口腔护理配制品。

在第一方面，本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

在第二方面，本发明涉及根据第一方面的组合物，该组合物用作药物。

在第三方面，本发明涉及根据第一方面的组合物，该组合物用于治疗口腔疾病。

在第四方面，本发明涉及一种套装盒，该套装盒包含：

a)根据第一方面的组合物；以及

b)使用说明书。

定义

β-葡聚糖酶：术语“β-葡聚糖酶”意指具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性(E.C.3.2.1.6活性)的多肽，该多肽催化β-D-葡聚糖中(1,3)-键和/或(1,4)-键的水解切割，从而降解β-葡聚糖。术语“β-葡聚糖酶”和表达“具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的多肽”在整个申请中可互换使用。出于本发明的目的，根据下文实例部分所描述的β-葡聚糖酶活性测定确定内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性。

义齿：术语“义齿”旨在涵盖义齿本身以及矫正器、隐形牙箍、固定器等。

DNA酶：术语“DNA酶”意指具有DNA酶(脱氧核糖核酸酶)(E.C.3.1.21和E.C.3.1.22)活性的多肽，该多肽催化DNA主链中的磷酸二酯键的水解切割，从而降解DNA。术语“DNA酶”和表达“具有DNA酶活性的多肽”在整个申请中可互换使用。出于本发明的目的，可以根据下文实例部分所描述的DNA酶活性测定I或DNA酶活性测定II确定DNA酶活性。

变聚糖酶：术语“变聚糖酶”意指具有内切-1,3-α-葡聚糖酶(E.C.3.2.1.59)活性的多肽，该多肽催化例如在变聚糖中存在的1,3-α-糖苷键的水解切割。术语“变聚糖酶”和“1,3-α-葡聚糖酶”和表达“具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽”在整个申请中可互换使用。出于本发明的目的，可以根据下文实例部分所描述的变聚糖酶活性测定确定内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用尼德勒曼–翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人，2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用Needle标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：

(相同的残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)

出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人，2000，同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。使用Needle标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：

(同一的脱氧核糖核苷酸×100)/(比对长度–比对中的空位总数)

附图说明

图1示出了使用nanoDSF仪器生成的热稳定性数据的实例。A分图是一式三份获得的作为温度函数的SEQ ID NO:2的数据(350nm至330nm处荧光发射的比率)的实例。B分图示出了A分图中的原始数据的一阶导数。一阶导数图中的峰最大值对应于热解折叠转变的中点，称为Tm。在此实例中，pH 6.0下的Tm对应于53.6℃，并且在三次重复内是高度可再现的。

图2示出了从基线到随访时的OPI评分的相对变化。垂直线表示标准误差。

图3示出了箱形图，示出安慰剂(白色)组和测试(灰色)组的基线和随访样品之间的成对布雷-柯蒂斯(Bray-Curtis)相异度，其中各组间无统计学差异(p＝0.704)。

图4示出了条形图，示出对于每名受试者从基线到随访时唾液中丰富度的变化。我们通过对每个样品中独特OTU的数量进行计数来测量丰富度，并根据安慰剂(白色)和测试(灰色)组对受试者进行可视化。各组间没有发现统计学显著性变化，但从基线到随访时，与测试组相比，安慰剂组的丰富度有增加的趋势(p＝0.06)。P数字表示个体受试者。

图5示出了条形图，示出对于每个受试者从基线到随访时菌斑丰富度的变化。我们通过对每个样品中独特OTU的数量进行计数来测量丰富度，并根据安慰剂(白色)和测试(灰色)组对受试者进行可视化。与治疗组相比，观察到安慰剂组在基线和随访之间微生物丰富度的增加更高(p＝0.04)。P数字表示个体受试者。

图6示出了条形图，示出对于每名受试者从基线到随访时唾液中丰富度的变化。我们通过对每个样品中独特OTU的数量进行计数来测量丰富度，并根据安慰剂(白色)和测试(灰色)组对受试者进行可视化。各组间没有发现统计学显著性变化，但从基线到随访时，与测试组相比，安慰剂组的丰富度有增加的趋势(p＝0.12)。P数字表示个体受试者。

序列综述

SEQ ID NO:1是来自食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)的DNA酶。

SEQ ID NO:2是来自哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:3是来自棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的β-葡聚糖酶。

SEQ ID NO:4是来自特异腐质霉(Humicola insolens)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:5是来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:6是来自杆孢篮状菌(Talaromyces bacillisporus)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:7是来自尖刺篮状菌(Talaromyces apiculatus)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:8是来自阎氏链霉菌(Streptomyces yanii)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:9是来自桤木链霉菌(Streptomyces alni)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:10是来自窦口杆菌(Oribacterium sinus)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:11是来自鲜黄链霉菌(Streptomyces galbus)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:12是来自球团链霉菌(Streptomyces glomeratus)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:13是来自四联球状菌属物种(Tetrasphaera sp)0185的变聚糖酶。

SEQ ID NO:14是来自光燧霉素北里孢菌(Kitasatospora phosalacinea)的变聚糖酶。

SEQ ID NO:15是来自棘孢曲霉的β-葡聚糖酶。

SEQ ID NO:16是来自棘孢曲霉的β-葡聚糖酶。

具体实施方式

本发明提供了酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶。这些酶通过降解口腔生物膜的细胞外DNA和外泌多糖组分起作用，从而改善口腔健康。这种酶促活性的组合在预防和去除口腔生物膜方面具有很高的活性。特别是，临床试验表明，这种酶组合能够改变牙菌斑的形态学并减少牙菌斑的数量，而不会对口腔微生物组产生不利影响。此外，单个酶组分在多种口腔护理成分存在下高度稳定，因此它们非常适用于口腔护理配制品。

因此，在第一方面，本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

DNA酶

DNA酶降解口腔生物膜的DNA组分，特别是细胞外DNA。任何合适的DNA酶均可用于本发明的口腔护理组合物。DNA酶可以仅切割双链DNA或可以切割双链和单链DNA。DNA酶优选地是在DNA主链内切割或切开的内切-脱氧核糖核酸酶，但DNA酶还可以是切开或切割DNA主链末端处残基的外切脱氧核糖核酸酶。

任何合适的DNA酶均可用于本发明的酶促口腔护理组合物。优选地，DNA酶获得自微生物，并且该DNA酶是微生物酶。DNA酶优选地是真菌或细菌来源的。

DNA酶可以选自以下任何一个：E.C.3.1.21酶类，例如像E.C.3.1.21.X，其中X＝1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10，例如，脱氧核糖核酸酶I(E.C.3.1.21.1)、脱氧核糖核酸酶IV(E.C.3.1.21.2)、I型位点特异性脱氧核糖核酸酶(E.C.3.1.21.3)、II型位点特异性脱氧核糖核酸酶(E.C.3.1.21.4)、III型位点特异性脱氧核糖核酸酶(E.C.3.1.21.5)、CC-偏好型内切-脱氧核糖核酸酶(E.C.3.1.21.6)、脱氧核糖核酸酶V(E.C.3.1.21.7)、T(4)脱氧核糖核酸酶II(E.C.3.1.21.8)、或T(4)脱氧核糖核酸酶IV(E.C.3.1.21.9)、或交叉结合内切-脱氧核糖核酸酶(E.C.3.1.21.10)。

DNA酶还可以选自以下任何一个：E.C.3.1.22酶类，例如像E.C.3.1.22.Y，其中Y＝1、2、或5，例如，脱氧核糖核酸酶II(E.C.3.1.22.1)，曲霉属(Aspergillus)脱氧核糖核酸酶K(1)(E.C.3.1.22.2)、或脱氧核糖核酸酶X(E.C.3.1.22.5)。

DNA酶可以从芽孢杆菌属获得，例如地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、芽孢杆菌属物种-62451、堀越氏芽孢杆菌(Bacillushorikoshii)、芽孢杆菌属物种-62451、芽孢杆菌属物种-16840、芽孢杆菌属物种-62668、芽孢杆菌属物种-13395、霍耐克芽孢杆菌(Bacillus horneckiae)、芽孢杆菌属物种-11238、食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、病研所芽孢杆菌(Bacillus idriensis)、芽孢杆菌属物种-62520、芽孢杆菌属物种-16840、芽孢杆菌属物种-62668、藻居芽孢杆菌(Bacillusalgicola)、越南芽孢杆菌(Bacillus vietnamensis)、花津滩芽孢杆菌(Bacillushwajinpoensis)、印度芽孢杆菌(Bacillus indicus)、黄海芽孢杆菌(Bacillusmarisflavi)、路西法芽孢杆菌(Bacillus luciferensis)、和芽孢杆菌属物种SA2-6。

DNA酶还可以获得自以下生物体中任何一个：拟棘壳孢菌属物种(Pyrenochaetopsis sp.)、黄病毒弧菌(Vibrissea flavovirens)、棘球菌(Setosphaeriarostrate)、内多隔孢属(Endophragmiella valdina)、多主棒孢霉(Corynesporacassiicola)、异茎点霉属物种(Paraphoma sp.)XZ1965、桃褐腐病菌(Moniliniafructicola)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、网孢青霉(Penicilliumreticulisporum)、檞皮素青霉(Penicillium quercetorum)、Setophaeosphaeria属物种、链格孢属(Alternaria)、链格孢属物种XZ2545、里氏木霉、嗜热毛壳菌(Chaetomiumthermophilum)、嗜热色串孢(Scytalidium thermophilum)、Metapochonia suchlasporia、开裂轮层炭壳菌(Daldinia fissa)、枝顶孢霉属物种(Acremonium sp.)XZ2007、枝顶孢霉属物种XZ2414、二色孢枝顶孢霉(Acremonium dichromosporum)、帚枝霉属物种(Sarocladium sp.)XZ2014、绿僵菌属物种(Metarhizium sp.)HNA15-2、细脚棒束孢(Isaria tenuipes)、卷旋节格孢(Scytalidium circinatum)、鳞腮绿僵菌(Metarhiziumlepidiotae)、双孢高温双孢菌(Thermobispora bispora)、Sporormia fimetaria、Pycnidiophora cf.dispera、环境样品(Enviromental sample)D、环境样品O、麦角菌科物种(Clavicipitaceae sp)-70249、韦斯特壳属物种(Westerdykellasp.)AS85-2、Humicolopsis cephalosporioides、马萨新萨托菌(Neosartorya massa)、Roussoellaintermedia、格孢腔目(Pleosporales)、暗球腔菌属(Phaeosphaeria)或Didymosphaeriafutilis。

合适的DNA酶包括例如在WO 2017/060475、WO 2014/087011、WO 2015/155350、和WO 2015/155351中描述的那些。

在优选的实施例中，DNA酶在口腔护理配制品(例如，牙膏、漱口剂、薄荷糖、锭剂、口香糖等)中和/或在口腔护理组分(例如十二烷基硫酸钠(SDS)或氟离子源(例如氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡))存在下表现出改善的稳定性。具有改善的稳定性的此类DNA酶的实例披露于WO 2020/099491中。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从芽孢杆菌属获得的(例如可从食物芽孢杆菌获得)具有DNA酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有DNA酶活性。在优选的实施例中，多肽与示出于SEQ ID NO:1中的多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成或由其组成。

变聚糖酶

变聚糖酶(EC 3.2.1.59，还称为1,3-α-葡聚糖酶)是具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽，这些多肽切割在各种多糖(例如，变聚糖，是通常在口腔生物膜中存在的多糖)中存在的1,3-α-糖苷键。变聚糖酶针对由生龋齿的微生物变异链球菌(Streptococcusmutans)生成的生物膜特别有用。

任何合适的变聚糖酶均可用于本发明的酶促口腔护理组合物。优选地，变聚糖酶获得自微生物，并且该变聚糖酶是微生物酶。变聚糖酶优选地是真菌或细菌来源的。

合适的变聚糖酶来源于木霉属(Trichoderma)(Hasegawa等人，(1969),Journalof Biological Chemistry[生物化学杂志]244，第5460-5470页；Guggenheim和Haller,(1972),Journal of Dental Research[牙科研究杂志]51，第394-402页)和链霉菌属菌株(Takehara等人，(1981),Journal of Bacteriology[细菌学杂志]145，第729-735页)、树脂枝孢菌(Cladosporium resinae)(Hare等人(1978),Carbohydrate Research[碳水化合物研究]66，第245-264页)、假单胞菌属物种(美国专利号4,438,093)、黄杆菌属物种(JP77038113)、环状芽孢杆菌(JP 63301788)和曲霉属物种。

特别合适的变聚糖酶可以由木霉属的菌株(特别是来自哈茨木霉的菌株，如哈茨木霉CBS243.71)产生。其他合适的变聚糖酶可以由以下菌株产生：青霉菌属(Penicillium)的菌株(特别是绳状青霉菌(Penicillium funiculosum)的菌株(如绳状青霉菌NRRL1768)、或淡紫青霉(Penicillium lilacinum)的菌株(特别是淡紫青霉NRRL 896)、或产紫青霉(Penicillium purpurogenum)的菌株(如产紫青霉CBS238.95的菌株))、或假单胞菌属(Pseudomonas)的菌株、或黄杆菌属物种(Flavobacterium sp.)的菌株、或环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)的菌株、或曲霉属物种(Aspergillus sp.)的菌株、或链霉菌属物种的菌株。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从木霉属获得的(例如可从哈茨木霉获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:2的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从腐质霉属(Humicola)获得的(例如可从特异腐质霉获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQID NO:4的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:4的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:4、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从木霉属获得的(例如可从里氏木霉获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:5的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:5、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从篮状菌属(Talaromyces)获得的(例如可从杆孢篮状菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:6的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:6、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从篮状菌属获得的(例如可从尖刺篮状菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:7的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ IDNO:7、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从链霉菌属获得的(例如可从阎氏链霉菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:8的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ IDNO:8、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从链霉菌属获得的(例如可从桤木链霉菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:9的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ IDNO:9、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从口杆菌属(Oribacterium)获得的(例如可从窦口杆菌获得的)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:10的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:10、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从链霉菌属获得的(例如可从鲜黄链霉菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:11的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:11、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从链霉菌属获得的(例如可从球团链霉菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:12的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:12、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从四联球状菌属(Tetrasphaera)获得的(例如可从四联球状菌属物种0185获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:13的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:13、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从北里孢菌属(Kitasatospora)获得的(例如可从光燧霉素北里孢菌获得)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与示出于SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性的多肽包含SEQ ID NO:14、基本上由其组成、或由其组成。

β-葡聚糖酶

β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.6)是具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的多肽，这些多肽催化β-D-葡聚糖中(1,3)-键和/或(1,4)-键的水解切割。

任何合适的β-葡聚糖酶均可用于本发明的酶促口腔护理组合物。优选地，β-葡聚糖酶获得自微生物，并且该β-葡聚糖酶是微生物酶。β-葡聚糖酶优选地是真菌或细菌来源的。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从曲霉属获得的(例如可从棘孢曲霉获得)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:3具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性。在优选的实施例中，多肽与示出于SEQ ID NO:3中的多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从曲霉属获得的(例如可从棘孢曲霉获得)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:15具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性。在优选的实施例中，多肽与示出于SEQ ID NO:15中的多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:15、基本上由其组成、或由其组成。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸残基1至741、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含可从曲霉属获得的(例如可从棘孢曲霉获得)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性的多肽。在优选的实施例中，多肽与SEQ ID NO:16具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性，并且具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性。在优选的实施例中，多肽与示出于SEQ ID NO:16中的多肽相差多达10个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸残基6至396、基本上由其组成、或由其组成。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸残基1至312、基本上由其组成、或由其组成。在优选的实施例中，多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸残基6至312、基本上由其组成、或由其组成。

口腔护理配制品的稳定性

包括在本发明口腔护理组合物中的酶(即，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶)在适合于口腔护理的配制品和/或形式中高度稳定，特别是在诸如牙膏、漱口剂、锭剂、薄荷糖、口香糖、糖果等的配制品或形式中。高稳定性(例如相当或改善的稳定性)可以是相当或改善的物理和/或化学稳定性。当将这些酶和另一种试剂共同配制和/或共同施用时，优选地在共同配制时，可以出现相当或改善的化学稳定性，即在另一种试剂(例如，另一种酶、活性成分、赋形剂、或溶剂)存在下相当或改善的稳定性。

在本发明的上下文中，术语“相当的化学稳定性”意指在特定口腔护理成分或组分存在下(或可替代地陈述为与特定口腔护理成分或组分共同配制)，酶的化学稳定性在单独的相同酶的化学稳定性的+/-5％内(即，在不存在所述口腔护理成分的情况下)。

在本发明的上下文中，术语“改善的化学稳定性”意指与单独的相同酶的化学稳定性相比(即，在不存在所述口腔护理成分的情况下)，在特定口腔护理成分或组分存在下(或可替代地陈述为与特定口腔护理成分或组分共同配制)，酶的化学稳定性改善超过5％，例如，10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或甚至更高。

出于本发明的目的，化学稳定性可根据以下实例1确定为在特定口腔护理成分存在下由热解折叠转变中点(Tm)定义的热稳定性。

在一个实施例中，在至少一种口腔护理成分的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：苯甲酸盐(优选苯甲酸钠)、EDTA、乙醇、甘油、磷酸盐(优选磷酸钠或磷酸钾)、山梨醇、山梨酸钾、氟化物(优选氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)、过氧化氢、和甘露醇。

在一个实施例中，在至少一种口腔护理成分的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：苯甲酸盐(例如，苯甲酸钠)、EDTA、乙醇、甘油、(例如，磷酸钠)、山梨醇、山梨酸钾、氟化物(例如，氟化钠)、过氧化氢、和甘露醇。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含苯甲酸盐(例如，苯甲酸钠)，并且在苯甲酸盐(例如，苯甲酸钠)的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在0.01％-5％苯甲酸盐、更优选地0.05％-2.5％苯甲酸盐、甚至更优选地0.1％-1％苯甲酸盐、最优选地0.1％-0.5％苯甲酸盐的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-100mM苯甲酸盐、更优选地5-50mM苯甲酸盐、最优选地10-35mM苯甲酸盐的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含EDTA，并且在EDTA的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在0.1-10mM EDTA、更优选地0.5-5mM EDTA、最优选地1mM EDTA的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含乙醇，并且在乙醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在0.1％-20％乙醇、更优选地1％-10％乙醇、甚至更优选地2.5％-7.5％乙醇、最优选地5％乙醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-100000mM乙醇、更优选地100-10000mM乙醇、最优选地1000mM乙醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含甘油，并且在甘油的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1％-50％甘油、更优选地5％-40％甘油、最优选地10％-30％甘油的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在100-10000mM甘油、更优选地500-5000mM甘油、甚至更优选地750-4000mM甘油、最优选地1000-3250mM甘油的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含磷酸盐(例如，磷酸钠或磷酸钾)，并且在磷酸盐(例如，磷酸钠或磷酸钾)的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-50mM磷酸盐、更优选地2.5-25mM磷酸盐、甚至更优选地5-10mM磷酸盐的存在下，至少一种(例如，至少两种或全部)DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含山梨醇，并且在山梨醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在0.1％-70％山梨醇、更优选地1％-60％山梨醇、甚至更优选地5％-50％山梨醇、最优选地10％-40％山梨醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在100-10000mM山梨醇、更优选地250-5000mM山梨醇、甚至更优选地500-2500mM山梨醇、最优选地550-2200mM山梨醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含山梨酸盐(例如，山梨酸钠、山梨酸钾、或山梨酸钙)，并且在山梨酸盐(例如，山梨酸钠、山梨酸钾、或山梨酸钙)的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在0.01％-5％山梨酸盐、更优选地0.05％-2.5％山梨酸盐、甚至更优选地0.1％-1％山梨酸盐、最优选地0.1％-0.5％山梨酸盐的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-100mM山梨酸盐、更优选地5-75mM山梨酸盐、甚至更优选地7.5-50mM山梨酸盐、最优选地10-35mM山梨酸盐的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含氟化物(例如，氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)，并且在氟化物(例如，氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-5000ppm氟化物、更优选地500-2500ppm氟化物、最优选地1,000-1500ppm氟化物的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-100mM氟化物、更优选地5-75mM氟化物、甚至更优选地10-50mM氟化物、最优选地20-40mM氟化物的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含过氧化物(例如，过氧化氢)，并且在过氧化物(例如，过氧化氢)的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-1000mM过氧化物、更优选地50-750mM过氧化物、最优选地100-500mM过氧化物的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

在一个实施例中，口腔护理组合物包含甘露醇，并且在甘露醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。优选地，在1-1000mM甘露醇、更优选地150-750mM甘露醇、最优选地250-550mM甘露醇的存在下，DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性。

口腔护理组合物、成分和形式

本发明的酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

在一个实施例中，DNA酶与SEQ ID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:2具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:4具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:4、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:5具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:5、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:6具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％,至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:6、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:7具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:7、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:8具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:8、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:9具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:9、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:10具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:10、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:11具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:11、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:12具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:12、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:13具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:13、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，变聚糖酶与SEQ ID NO:14具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:14、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，β-葡聚糖酶与SEQ ID NO:3具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，β-葡聚糖酶包含SEQ IDNO:3、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，β-葡聚糖酶与SEQ ID NO:15具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:15、基本上由其组成、或由其组成。

在一个实施例中，β-葡聚糖酶与SEQ ID NO:16具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；优选地，β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)与SEQ ID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的DNA酶；

b)与SEQ ID NO:2具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的变聚糖酶；以及

c)与SEQ ID NO:3相比，具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

c)与SEQ ID NO:15相比，或与由SEQ ID NO:15的氨基酸残基1至741定义的多肽相比，具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

c)与SEQ ID NO:16相比，或与由SEQ ID NO:16的氨基酸残基6至396定义的多肽相比，或与由SEQ ID NO:16的氨基酸残基1至312定义的多肽相比，或与由SEQ ID NO:16的氨基酸残基6至312定义的多肽相比，具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成的DNA酶；

b)包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成的变聚糖酶；以及

c)包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶，或包含SEQ IDNO:15、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶，或包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成的DNA酶；

c)包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶，和包含SEQ IDNO:15、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶，以及包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成的DNA酶；

c)包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成的DNA酶；

c)包含SEQ ID NO:15、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶。

在优选的实施例中，口腔护理组合物包含：

a)包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成的DNA酶；

c)包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成的β-葡聚糖酶。

至少一种口腔护理成分可根据口腔护理组合物的类型以及所期望的口腔护理组合物的特征和/或活性而变化。出于本发明的目的，术语“成分”和“组分”涉及口腔护理组合物时可互换使用。

本发明的口腔护理组合物可以是内部口腔护理组合物，例如牙膏或牙膏片、牙霜(dental cream)、漱口剂或漱口片、口腔清洗剂、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食、糖果等，该内部口腔护理组合物被设计为去除口腔内的生物膜，例如驻留在牙齿上、口腔软组织上和驻留在口腔中的义齿上的生物膜。

本发明的口腔护理组合物还可以是外部口腔护理组合物，例如义齿清洗液、义齿清洗片剂、义齿清洗粉末等，该外部口腔护理组合物被设计为从已经从口腔中取出进行清洁的义齿上去除生物膜。

在优选的实施例中，口腔护理组合物是内部口腔护理组合物，并且该至少一种口腔护理组分选自由以下组成的组：研磨剂、湿润剂、溶剂、增稠剂、粘合剂、缓冲剂、发泡剂、发泡调节剂、增甜剂(sweetening agent)、柔软剂、塑化剂、调味剂、着色剂、治疗剂、抗微生物剂、牙垢控制剂、氟离子源、防腐剂、洗涤剂、表面活性剂、着色剂、缓冲剂、软化剂、增塑剂、增白剂、漂白剂、胶基成分、和膨胀剂。

尽管根据功能性对本文提及的口腔护理成分由通用标题进行分类，但这不被解释为限制，因为如将被技术人员所理解的，成分可包含另外的功能性。

牙膏、牙霜、漱口剂和口腔清洗剂

本发明的内部口腔护理组合物呈牙膏或牙膏片、牙霜、漱口剂或漱口片、和口腔清洗剂的形式，这些内部口腔护理组合物可以包括选自以下类别的口腔护理成分：

牙膏

牙膏和牙霜/牙齿凝胶典型地包括研磨剂、溶剂、湿润剂、洗涤剂/表面活性剂、增稠剂和粘合剂、缓冲剂、调味剂、增甜剂、氟离子源、治疗剂、酶、着色剂、和防腐剂。

在优选的实施例中，本发明涉及呈牙膏或牙霜形式的酶促口腔护理组合物，这些口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该至少一种口腔护理成分选自以下成分：

本发明的口腔护理组合物可以是包含以下成分(以最终牙膏组合物的重量％计)的牙膏：

研磨剂：10％至70％

湿润剂：0％至80％

增稠剂：0.1％至20％

粘合剂：0.01％至10％

增甜剂：0.1％至5％

发泡剂：0％至15％

酶(DNA、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶)：0.01％至10％

漱口剂

本发明的漱口剂和口腔清洗剂(包括菌斑去除液)典型地包含酶、载液、洗涤剂/表面活性剂、缓冲剂、调味剂、湿润剂、增甜剂、治疗剂、氟离子源、着色剂、防腐剂、和酶。

在优选的实施例中，本发明涉及呈漱口剂或口腔清洗剂形式的酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该至少一种口腔护理成分选自以下成分：

本发明的口腔护理组合物可以是包含以下成分(以最终漱口剂组合物的重量％计)的漱口剂：

水：0％至70％

乙醇：0％至20％

湿润剂：0％至20％

表面活性剂：0％至2％

酶(DNA、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶)：0.01％至10％

其他成分：0％至2％(例如，香料、甜味剂(sweetener)、氟离子源)。

漱口剂组合物可以用在pH 6-7.5范围的合适的缓冲剂(例如柠檬酸钠或磷酸钠)缓冲。

适用于牙膏、牙霜、漱口剂、和口腔清洗剂的相关口腔护理组分在下文进一步详述。技术人员能够根据口腔护理组合物的类型以及特定口腔护理组合物所期望的特征和/或活性来改变口腔护理组分。口腔护理组合物可以不必包含所有提及的成分。

研磨剂

可将研磨抛光材料掺入本发明的口腔护理组合物中。根据本发明，所述研磨抛光材料包括氧化铝及其水合物(例如α-三水合氧化铝)、三硅酸镁、碳酸镁、高岭土、铝硅酸盐(例如煅烧硅酸铝和硅酸铝)、碳酸钙、硅酸锆、膨润土、二氧化硅、碳酸氢钠、以及粉状塑料(例如聚氯乙烯)、聚酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、酚醛树脂、三聚氰胺-甲醛树脂、脲-甲醛树脂、环氧树脂、粉状聚乙烯、二氧化硅干凝胶、水凝胶和气凝胶等。

还适合作为研磨剂的是焦磷酸钙、水不溶性碱偏磷酸盐、聚偏磷酸盐、磷酸二钙和/或其二水合物、正磷酸二钙、磷酸三钙、微粒状羟磷灰石等。还可能使用这些物质的混合物。

各种类型的二氧化硅牙齿研磨剂是优选的，因为其独特的益处是优异的牙齿清洁和抛光性能而不过度磨损牙釉质或牙本质，并且其与其他可能的成分(如金属离子和氟化物)具有良好的相容性。

取决于口腔护理组合物，研磨产品能以按重量计0％至70％、优选地1％至70％存在。

对于牙膏，研磨材料含量典型地在按最终牙膏产品重量计10％至70％的范围内。

湿润剂

湿润剂用于防止水从例如牙膏中流失，并避免牙膏在暴露于空气时变硬。一些湿润剂还给予牙膏和漱口剂组合物所期望的甜味。适用于根据本发明的口腔护理组合物的湿润剂包括以下化合物及其混合物：甘油、多元醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、聚氧乙烯、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、1,4-丁二醇、氢化的部分水解的多糖等、椰子油脂肪酸、N-甲基-牛磺酸的酰胺和

湿润剂通常以按重量计0％至80％、优选地5％至70％存在。

增稠剂/粘合剂

合适的增稠剂和/或粘合剂包括二氧化硅、淀粉、黄蓍胶、黄原胶、刺梧桐树胶、角叉菜胶(爱尔兰苔的提取物)、阿拉伯树胶、藻酸盐、果胶、纤维素衍生物(例如羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素和羟乙基丙基纤维素)、聚丙烯酸及其盐、聚乙烯吡咯烷酮和羧乙烯基聚合物、以及无机增稠剂(例如无定形二氧化硅化合物)。这些试剂稳定本发明的口腔护理组合物。

增稠剂能以按最终产品重量计0.1％至20％的量存在于牙膏、牙霜和凝胶以及漱口剂中，并且以按最终产品重量计0.01％至10％的范围存在于粘合剂中。

发泡剂和发泡调节剂

作为发泡剂，可以单独或组合使用皂、阴离子、阳离子、非离子、两性和/或兼性离子表面活性剂。这些能以按最终产品重量计0％至15％、优选地0.1％至13％、更优选地0.25％至10％的水平存在。表面活性剂仅适用于不对口腔护理组合物中包含的酶和其他组分发挥灭活作用的程度。有用的表面活性剂包括阴离子、非离子、和两性化合物，优选地是阴离子化合物。

合适的表面活性剂的实例包括高级烷基硫酸盐的盐，例如月桂基硫酸钠或在烷基基团中具有8至18个碳原子的其他合适的烷基硫酸盐；月桂基磺基乙酸钠，高级脂肪酸的磺化单甘油酯的盐，例如椰子单甘油酯磺酸钠或其他合适的10至18个碳原子的脂肪酸的磺化单甘油酯；高级脂肪酸(例如12至16个碳原子酸)与低级脂肪族氨基酸的酰胺盐，例如N-甲基-N-棕榈酰基牛磺酸钠、N-月桂酰肌氨酸钠、N-肉豆蔻酰基肌氨酸钠、和N-棕榈酰基肌氨酸钠；此类脂肪酸与同位素酸或与甘油单硫酸盐的酯的盐；例如氢化椰子油脂肪酸的单硫酸酯单甘油酯的钠盐；烯烃磺酸盐，例如在分子的碳链中具有12至16个碳原子的链烯烃磺酸盐或链烯烃磺酸盐或其混合物；以及高级脂肪酸的皂，例如具有12至18个碳原子的那些，例如椰子油脂肪酸。

盐的阳离子可以是钠、钾或一乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺。非离子表面活性剂包括蔗糖/脂肪酸酯、麦芽糖/脂肪酸酯、麦芽糖醇/脂肪酸酯、麦芽三醇/脂肪酸酯、麦芽四醇/脂肪酸酯、麦芽五醇/脂肪酸酯、麦芽六醇/脂肪酸酯、mahoheptaitol/脂肪酸酯、山梨聚糖/脂肪酸酯、乳糖/脂肪酸酯、lactinose/脂肪酸酯、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯/脂肪酸酯、脂肪酸烷醇酰胺、聚氧乙烯山梨聚糖/脂肪酸酯、聚氧乙烯/氢化蓖麻油、和聚甘油/脂肪酸酯。

最优选的是月桂基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠和月桂基肌氨酸钠。

优选的发泡调节剂包括聚乙二醇。

发泡剂和发泡调节剂能以按重量计0％至15％、优选地0.01％至10％的量存在。

增甜剂

合适的甜味剂包括但不限于糖精及其水溶性盐、右旋糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、左旋糖、阿斯巴甜、环己氨磺酸盐、D-色氨酸、双氢查耳酮、乙酰舒泛(acesulphame)、甜菊苷、levaudioside、甘草甜素、pellartine、奇异果甜蛋白、对甲氧基肉桂醛、氢化淀粉水解产物、木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇、甘露醇及其混合物。

甜味剂能以按重量计0.001％至60％、优选地按重量计0.01％至50％的量存在。

调味剂

调味剂通常以少量存在，例如按重量计0.01％至约5％、尤其是0.1％至5％。可用于本发明的香料包括但不限于冬青油、薄荷油、留兰香油、丁香花油、薄荷醇、茴香脑、水杨酸甲酯、桉叶油素、桂皮、1-乙酸薄荷酯、鼠尾草、丁香酚、洋芹油、氧杂壬烷、α-紫罗兰酮、马郁兰、柠檬、橙、蔓越莓、丙烯基乙基愈创木酚、肉桂、香草醛、乙基香草醛、胡椒醛、4-顺式-庚烯醛、双乙酰、甲基对叔丁基乙酸丁酯、香芹酮、桉树脑、薄荷酮、肉桂醛、柠檬烯、罗勒烯、正癸醇、香茅醇、α-松油醇、乙酸甲酯、乙酸香茅酯、甲基丁香酚、芳樟醇、麝香草酚、迷迭香油、多香果油、硅藻油、桉树油及其混合物。

冷却剂也可以是调味系统的一部分或分开地添加到组合物中。本发明组合物中优选的冷却剂是对薄荷烷羧基酰胺基试剂，例如N-乙基-对薄荷烷-3-甲酰胺(商业上称为“WS-3”)、薄荷醇、3-1-薄荷氧基-1,2-丙二醇(“TK-10”)、薄荷酮甘油缩醛(“MGA”)、乳酸薄荷酯及其混合物。

增白剂/漂白剂

增白剂/漂白剂包括H₂O₂并且能以基于最终组合物的重量计算的小于5％、优选地0.05％至4％的量添加。

本发明可包含的其他漂白组分包括过氧二磷酸盐、脲、过氧化物、金属过氧化物(例如过氧化钙、过氧化钠、过氧化锶、过氧化镁)、次氯酸盐(例如次氯酸钠)、以及过硼酸盐、过硅酸盐、过磷酸盐和过碳酸盐的盐(例如过硼酸钠、过硅酸钾和过碳酸钠)。过氧化物化合物可以通过添加三苯甲烷染料、螯合剂或抗氧化剂(例如丁基化羟基茴香醚(BHA)或丁基化羟基甲苯(BHT))来稳定。

溶剂

通常以如下量将溶剂添加至本发明的组合物，该量足以在组合物例如为牙膏、牙霜或凝胶的情况下使组合物呈可流动形式，或在例如漱口剂或口腔清洗剂的情况下溶解组合物的其他成分。

合适的溶剂包括水、乙醇和水/乙醇混合物，其能以0.1％至70％的量存在。

抗微生物剂

本发明还包括水溶性抗微生物剂，例如氯己定、三氯生、二葡糖酸盐、海克替啶、阿来西定、季铵抗菌化合物；并且还可以包括某些金属离子的水溶性来源，例如锌、铜、银和亚锡(例如，氯化锌、氯化铜和氯化亚锡、以及硝酸银)。

由于这些锌盐在唾液中的缓慢溶解，微溶的锌盐例如柠檬酸锌、C14-烷基马来酸锌、苯甲酸锌、己酸锌、碳酸锌也可以包括在本发明的组合物中，以延长锌离子的抗微生物效力。

抗微生物剂能以按重量计0％至50％、优选地按重量计0.01％至40％、最优选地按重量计0.1％至30％的量存在。

牙垢控制剂

本发明的组合物可包含牙垢控制剂，例如无机磷牙垢控制剂，该无机磷牙垢控制剂包括任何焦磷酸盐，例如焦磷酸二钠、焦磷酸二钾、焦磷酸四钾、焦磷酸四钠及其混合物。

可用作牙垢控制剂的有机磷化合物包括聚膦酸盐，例如乙烷-1-羟基-1,1-二磷酸二钠(EHDP)、甲烷二膦酸、和2-膦酰基丁烷-1,2,4-三甲酸。

牙垢控制剂能以按重量计0％至10％、优选地按重量计0.1％至5％的量存在。

防腐剂

合适的防腐剂包括苯甲酸钠、山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、柠檬酸、柠檬酸钙及其混合物。

防腐剂能以按重量计0％至40％、优选地按重量计0.01％至30％的量存在。

氟离子源

本发明的组合物还可包含可用作氟离子源的成分。优选的可溶性氟离子源包括氟化钠、氟化钾、氟化亚锡、氟化铟、单氟磷酸钠、六氟硅酸钠、氟化锌、氟化锂、氟化铝、酸性氟磷酸盐、氟化氢铵、四氟化钛、和氟化胺。

特别优选的是氟化钠和单氟磷酸钠。

氟离子源能以按重量计0％至20％、优选地按重量计0.01％至15％、最优选地按重量计0.1％至10％的量存在。

在优选的实施例中，该至少一种口腔护理成分是氟离子源；优选地，氟离子源选自由以下组成的组：氟化钠、氟化钙、氟化亚锡、或单氟磷酸钠。

着色剂

适用于本发明的口腔护理组合物的着色剂或颜料包括无毒的水不溶性无机颜料，例如二氧化钛和氧化铬绿、群青蓝和粉红以及氧化铁，以及通过将FD&C染料的钙盐或铝盐在氧化铝上延伸而制备的水不溶性染料色淀，例如FD&C绿色1号色淀、FD&C蓝色2号色淀、FD&C红色30号色淀、FD&C黄色16号色淀、和FD&C黄色10号色淀。

优选的遮光剂是二氧化钛。

着色剂能以按重量计0％至20％、优选地按重量计0.01％至15％、最优选地按重量计0.1％至10％的量存在。

缓冲剂

本发明的口腔护理组合物还可包括缓冲剂，即pH调节剂，例如碱金属氢氧化物、碳酸盐、倍半碳酸盐、硼酸盐、硅酸盐、磷酸盐、咪唑、及其混合物。

特定的缓冲剂包括磷酸一钠、磷酸三钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碱金属碳酸盐、碳酸钠、咪唑、焦磷酸盐、柠檬酸钠、盐酸、氢氧化钠、三乙醇胺、三乙胺、乳酸、苹果酸、富马酸、酒石酸、磷酸和这些的混合物。

缓冲剂能以按重量计0％至10％、优选地按重量计0.01％至5％的量存在。

口香糖

当根据本发明的口腔组合物是口香糖时，它可以是任何已知类型的口香糖，例如任选地包衣的口香糖片，以及响应预期用途以任意所期望的形状提供的棒或口香糖。口香糖制品可以具有任何质量，包括泡泡糖质量。

在优选的实施例中，本发明涉及呈口香糖形式的酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该至少一种口腔护理成分选自弹性体、软化剂、塑化剂、乳化剂、蜡、着色剂、甜味剂、调味剂、膨胀剂、和增稠剂。

胶基成分

传统上认为口香糖由水不溶性或基质部分和含有调味剂、增甜剂和着色剂的水溶性部分组成。口香糖的胶基部分是赋予最终产品咀嚼特征的咀嚼物质。它定义了香料和甜味剂的释放曲线，并且在口香糖产品中起显著作用。香料、甜味剂和着色剂可被认为提供口香糖的感官吸引力方面。对于在根据本发明的口香糖制品中使用的口香糖基质没有限制。常规的口香糖基质可从例如丹麦口香糖厂有限公司(Dansk Tyggegummi Fabrik A/S,L.A.)获得。德雷福斯或卡法萨口香糖有限责任公司(Dreyfus or Cafasa Gum SIA)通常是合适的，但也可使用特别制造的配制品。配制品取决于所期望的口香糖的类型或所期望的结构类型。用于胶基的合适原材料包括根据美国口香糖胶基法规-联邦法规标题21第172,615节和根据其他国家和国际列表(或积极列表)的物质，并且包括弹性体、树脂、蜡、聚乙酸乙烯酯、油、脂肪、乳化剂、填料和抗氧化剂。

胶基通常包含最终产品的按重量计15％至90％，优选地按重量计30％至40％，更优选地按重量计5％至25％。

弹性体为基质提供咀嚼性、弹性或反弹性，并控制最终口香糖中的气泡和香味释放。它们可以是本领域已知的任何水不溶性聚合物。它们包括苯乙烯丁二烯共聚物(SBR)和非SBR类型，包括天然的和合成的两者。天然弹性体的实例包括但不限于橡胶(例如橡胶胶乳(天然橡胶))和银胶菊、以及树胶，例如糖胶树胶(chicle)、节路顿胶(jelutong)、巴拉塔树胶(balata)、古塔波胶(guttapercha)、lechi capsi、索马胶(sorva)、冠胶(crown gum)、尼斯佩罗胶(nispero)、山榄胶(rosidinha)、香豆树胶(perillo)、尼日尔杜仲胶(nigergutta)、卡斯德拉胶(tunu)、gutta kay、pendare、leche de vaca、芡茨棕树胶(chiquibul)、冠胶等及其混合物。合成弹性体的实例包括但不限于聚异丁烯、异丁烯-异戊二烯共聚物(丁基橡胶)、聚乙烯、聚丁二烯、苯乙烯-丁二烯共聚物、聚异戊二烯等及其混合物。

胶基组合物(gum base composition)中使用的弹性体(橡胶)的量将根据各种因素产生很大变化，这些因素是例如使用的胶基类型(粘性的或常规的，气泡的或标准的)、期望的胶基组合物的稠度、以及用于组合物中以制备最终口香糖产品的其他组分。通常，基于胶基组合物的总重量，弹性体以按重量计约15％至约60％、优选地约25％至约30％的量存在于胶基组合物中。

弹性体溶剂有助于软化或塑化弹性体组分。这样，它们为咀嚼物提供了膨胀性。

弹性体溶剂包括但不限于天然松香酯和例如萜烯的合成衍生物。适用于本文的弹性体溶剂的实例包括妥尔油松香酯；部分氢化的木松香和脂松香；木松香和脂松香的甘油酯、部分氢化的木松香/脂松香的甘油酯、部分二聚化的木松香和脂松香的甘油酯、聚合的木松香和脂松香的甘油酯、以及妥尔油松香的甘油酯；木松香的除臭甘油酯；木松香和脂松香的季戊四醇酯；部分氢化的木松香和脂松香；部分氢化的木松香的甲基酯；松香和经修饰的松香(例如氢化的、二聚化的和聚合的松香)的甲基酯、甘油酯和季戊四醇酯；萜烯树脂(例如α-蒎烯或β-蒎烯的聚合物)、萜烯烃树脂；多萜；等及其混合物。弹性体溶剂能以按胶基组合物重量计约2％至约40％、优选地约7％至约15％的量用于胶基组合物中。

聚乙酸乙烯酯为胶基提供延伸性或弹性。它们还影响咀嚼膨胀性、柔软度和气泡、亲水性和香味释放。

存在于胶基组合物中的不同分子量的聚乙酸乙烯酯的量应有效提供成品口香糖所期望的咀嚼特性，例如完整性、柔软度、咀嚼膨胀性、成膜特征、亲水特征和香味释放。用于胶基组合物的聚乙酸乙烯酯的总量通常是基于总胶基组合物按重量计约45％至约92％。乙烯基聚合物可具有约2000Da至约95,000Da的分子量。

典型地，低分子量聚乙酸乙烯酯具有约2,000Da至约14,000Da的重均分子量。中等分子量聚乙酸乙烯酯典型地具有约15,000Da至55,000Da的重均分子量。高分子量聚乙酸乙烯酯典型地具有55,000Da至约95,000Da、但可高达500,000Da的重均分子量。

蜡、脂肪和油塑化弹性体混合物并改善胶基的弹性。蜡可提供柔软或坚硬的咀嚼物、影响香味释放并为胶基提供膨胀性和光滑度。脂肪和油提供软咀嚼物。脂肪、油和蜡可以单独使用或组合使用，或者胶基可以是无蜡胶基。

当使用蜡时，它可以是矿物、动物、植物或合成来源的。矿物蜡的非限制性实例包括石油蜡(例如石蜡和微晶蜡)、动物蜡(包括蜂蜡)、植物蜡(包括巴西棕榈蜡、小烛树蜡、米糠蜡、细茎针草蜡、亚麻蜡和甘蔗蜡)、合成蜡(包括通过费托合成法生产的那些)及其混合物。

可用于口香糖组合物的合适的油和脂肪包括氢化或部分氢化的植物或动物脂肪，例如棉籽油、大豆油、椰子油、棕榈仁油、牛脂、氢化牛脂、猪油、可可脂、羊毛脂等；脂肪酸例如棕榈酸、油酸、硬脂酸、亚油酸、月桂酸、肉豆蔻酸、己酸、辛酸、癸酸或酯和盐(如硬脂酸钠和硬脂酸钾)。当使用时，这些成分通常以按口香糖组合物重量计高达约7％、并且优选地以按口香糖组合物重量计高达约3.5％的量存在。

优选作为软化剂的是氢化的植物油，并且包括大豆油和棉籽油，它们可以单独使用或组合使用。这些软化剂为胶基组合物提供良好的质地和柔软的咀嚼特征。这些软化剂通常以按胶基组合物重量计约5％至约14％的量使用。

乳化剂有助于将胶基组合物的不混溶组分分散到单一稳定体系中。它们为胶基提供亲水性并有助于塑化树脂和聚乙酸乙烯酯。它们还影响基质的柔软度和基底的气泡性。典型的乳化剂包括乙酰化单甘油酯、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、脂肪酸单甘油酯、甘油二酯、丙二醇单硬脂酸酯、卵磷脂、三醋精、三乙酸甘油酯等及其混合物。

优选的乳化剂是单硬脂酸甘油酯和乙酰化单甘油酯。这些用作塑化剂。乳化剂能以按胶基组合物重量计约2％至约15％的量使用，并且优选地以按胶基组合物重量计约7％至约11％的量使用。

脂肪、油、蜡、乳化剂和某些糖膨胀剂通常组合在一起并称为柔软剂。由于这些成分的低分子量，软化剂能够穿透胶基的基本结构，使其具有塑性和更小的粘性。上述有用的增塑剂和软化剂包括羊毛脂、棕榈酸、油酸、硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸钾、三乙酸甘油酯、甘油基卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、丙二醇单硬脂酸酯、乙酰化单甘油酯、甘油、完全不饱和植物油(例如非氢化棉籽油、氢化植物油、石油蜡、山梨聚糖单硬脂酸酯、牛脂等)及其混合物，并且还包括高果糖玉米糖浆、玉米糖浆、山梨醇溶液、氢化淀粉水解产物等及其混合物。

软化剂存在的量应该是为成品口香糖提供所期望的咀嚼膨胀性和柔软度的有效量。当用作软化剂时，这些材料通常在胶基组合物中以按胶基组合物重量计高达约25％的量、优选地约1％至约17％的量使用。

胶基可以进一步含有表面活性剂。合适的表面活性剂的实例包括聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯、聚氧乙烯(20)山梨聚糖单月桂酸酯、聚乙烯(4)山梨聚糖单月桂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨聚糖单棕榈酸酯、聚氧乙烯(20)山梨聚糖单硬脂酸酯、聚氧乙烯(4)山梨聚糖单硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)山梨聚糖三硬脂酸酯、聚氧乙烯(5)山梨聚糖单油酸酯、聚氧乙烯(20)山梨聚糖三油酸酯、山梨聚糖单月桂酸酯等。表面活性剂存在的量应该为成品口香糖有效提供所期望的柔软度。典型地，基于胶基的总重量，表面活性剂以按重量计约0.5％至约3.0％的量用于基质中。

本发明的胶基组合物还可包括有效量的填料，其有时称为膨胀剂。这些材料增加了硬度和膨胀度并影响口香糖的质地和香味释放。有用的填料包括有机和无机化合物(矿物佐剂)，例如碳酸钙、碳酸镁、重质碳酸钙、硅酸镁、磷酸钙、纤维素聚合物、粘土、氧化铝、氢氧化铝、硅酸铝、滑石、磷酸三钙、磷酸二钙等及其混合物。这些填料或佐剂能以各种量用于胶基组合物中。填料存在的量应该为成品口香糖有效提供所期望的香味释放和完整性。典型地，填料能以按胶基组合物重量计约1％至约40％、并且优选地约5％至约20％的量用于胶基组合物中。

胶基还可包含抗氧化剂以提供改善的稳定性、减少任何油味并提供更长的保质期。抗氧化剂的典型非限制性实例是丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯。还可以使用其混合物。

其他胶成分

口香糖组合物(chewing gum composition)中的剩余成分是常规的，并且通常包含按最终产品重量计10％至85％。

其实例为常规地用于口香糖的类型和量的增甜剂、软化剂、着色剂、膨胀剂、增稠剂、和调味剂。

合适的调味剂是技术人员已知的那些香料，例如天然和人工香料。这些调味剂可选自合成调味油和调味芳香剂和/或油，油树脂和来源于植物、叶、花、果实等的提取物及其组合。非限制性的代表性调味油包括留兰香油、肉桂油、冬青油(水杨酸甲酯)、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、百里香油、雪松叶油、肉豆蔻油、甜胡椒油、鼠尾草油、肉豆蔻衣(mace)油、苦杏仁油、和桂皮油。其他有用的调味剂是人工的、天然的和合成的水果香料(例如香草和柑橘油，包括柠檬、橙、酸橙、葡萄柚)和水果香精(包括苹果、梨、桃、葡萄、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝、杏等)。这些调味剂能以液体或固体形式使用，并且可以单独或混合使用。常用的香料包括薄荷，例如胡椒薄荷、薄荷醇、人造香草、肉桂衍生物、和各种水果香料，可以单独使用或混合使用。

其他有用的调味剂包括醛和酯，例如可以使用乙酸肉桂酯、肉桂醛、柠檬酸二乙缩醛、二氢香芹乙酸酯、甲酸丁香酯、对甲基苯甲醚等。通常，可以使用任何调味剂或食品添加剂。

醛调味剂的另外的实例包括但不限于乙醛(苹果)、苯甲醛(樱桃、杏仁)、大茴香醛(甘草、大茴香)、肉桂醛(肉桂)、柠檬醛即α-柠檬醛(柠檬、酸橙)、橙花醛即β-柠檬醛(柠檬、酸橙)、癸醛(橙、柠檬)、乙基香草醛(香草、奶油)、天芥菜属植物即胡椒醛(香草、奶油)、香草醛(香草、奶油)、α-戊基肉桂醛(辛辣果味香料)、丁醛(黄油、奶酪)、戊醛(黄油、奶酪)、香茅醛(多种类型)、癸醛(柑橘类水果)、醛C-8(柑橘类水果)、醛C-9(柑橘类水果)、醛C-12(柑橘类水果)、2-乙基丁醛(浆果类水果)、己烯醛即反式-2-己烯醛(浆果类水果)、甲苯醛(樱桃、杏仁)、藜芦醛(香草)、2,6-二甲基-5-庚醛即甜瓜醛(甜瓜)、2,6-二甲基辛醛(绿色水果)和2-十二醛(柑橘、柑桔)、樱桃、葡萄、草莓酥饼、及其混合物等。

本文所用调味剂的量通常是受例如最终口香糖组合物的类型、个体风味、所使用的胶、和所期望的风味强度等因素影响。因此，可以改变调味剂的量以获得最终产品中所期望的结果，并且此类改变在本领域技术人员的能力范围内，而不需要过度实验。在口香糖组合物中，调味剂通常以按口香糖组合物重量计约0.02％至约5％的量存在。

口香糖组合物通常包括膨胀剂。这些膨胀剂(carders、填充剂)可以是水溶性的并且包括选自由以下组成的组(但不限于此)的膨胀剂：单糖、二糖、多糖、糖醇、及其混合物；山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇(α-D-吡喃葡萄糖基-1,6-甘露醇和α-D-吡喃葡萄糖基-1,6-山梨醇的外消旋混合物，由Suddeutsche Zucker公司以商品名Palatinit^TM制造)、甘油、阿斯巴甜、半乳糖醇、乙酰舒泛钾、糖精及其盐、环己氨磺酸盐及其盐、新橙皮苷双氢查耳酮、甘草酸及其盐、thaumantine和三氯蔗糖及其混合物或其与其他合适的甜味剂的混合物、麦芽糖糊精；氢化淀粉水解产物；氢化己糖；氢化二糖；矿物质，例如碳酸钙、滑石、二氧化钛、磷酸二钙、纤维素等，及其混合物。膨胀剂能以按口香糖组合物重量计高达约60％的量、优选地约25％至约60％的量使用。

口香糖组合物还可以包括高强度增甜剂(甜味剂)。高强度增甜剂的甜味强度基本上大于蔗糖的甜味强度。合适的强力甜味剂的实例包括：

a)水溶性的天然存在的强力甜味剂，例如双氢查耳酮、莫尼林、甜菊苷、甘草甜素、黄烷酮醇和L-氨基二羧酸、氨基烷酸酯酰胺，例如美国专利号4,619,834中披露的那些，及其混合物；

b)水溶性人工甜味剂，包括可溶性糖精盐(例如糖精钠或糖精钙盐)，环己氨磺酸盐，3,4-二氢-6-甲基-1,2,3-噁噻嗪-4-酮-2,2-二氧化物的钠盐、铵盐或钙盐，3,4-二氢-6-甲基-1,2,3-噁噻嗪-4-酮-2,2-二氧化物的钾盐(乙酰舒泛钾)，糖精的游离酸形式等，及其混合物；

c)基于二肽的甜味剂，包括来源于L-天冬氨酸的甜味剂(例如1-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(阿斯巴甜)和美国专利号3,492,131中描述的材料)、L-α-天冬氨酰-N-(2,2,4,4-四甲基-3-硫杂环丁烷基)-D-丙氨酰胺水合物(阿力甜)、L-天冬氨酰-L-苯基甘油和L-天冬氨酰-L-2,5-二氢苯基-甘氨酸的甲基酯、L-天冬氨酰-2,5-二氢-L-苯丙氨酸、L-天冬氨酰-L-(1-环己烯)-丙氨酸等及其混合物；

d)来源于天然存在的水溶性甜味剂的水溶性强力甜味剂，例如普通糖(蔗糖)的氯化衍生物，例如氯脱氧糖衍生物(例如氯脱氧蔗糖或氯脱氧半乳糖蔗糖的衍生物)，已知例如在的产品名称下；氯脱氧蔗糖和氯脱氧半乳蔗糖衍生物的实例包括但不限于：1-氯-1'-脱氧蔗糖；4-氯-4-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基-α-D-呋喃果糖苷，或4-氯-4-脱氧半乳蔗糖；4-氯-4-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基-1-氯-脱氧-β-D-呋喃果糖苷，或4,1'-二氯-4,1'-双脱氧半乳蔗糖；1',6'-二氯-1',6'-双脱氧蔗糖；4-氯-4-脱氧-α-D-吡喃半乳糖基-1,6-二氯-1,6-双脱氧-β-D-呋喃果糖苷，或4,1',6'-三氯-4,1',6'-三脱氧半乳蔗糖；4,6-二氯-4,6-双脱氧-α-D-吡喃半乳糖基-6-氯-6-脱氧-β-D-呋喃果糖苷，或4,6,6'-三氯-4,6,6'-三脱氧半乳蔗糖；6,1',6'-三氯-6,1',6'-三脱氧蔗糖；4,6-二氯-4,6-双脱氧-α-D-吡喃半乳糖基-1,6-二氯-1,6-双脱氧-β-D-呋喃果糖苷，或4,6,1',6'-四氯-4,6,1',6'-四脱氧半乳蔗糖；和4,6,1',6'-四脱氧-蔗糖，及其混合物；以及

e)基于蛋白质的强力甜味剂，例如Thaumaoccous daniclii(奇异果甜蛋白I和II)。口香糖组合物中使用的甜味剂的量将随选择用于特定口香糖的甜味剂而变化。因此，对于任何给定的甜味剂，使用足够量的甜味剂来提供所期望的甜度水平。基于口香糖组合物的总重量，上述糖类甜味剂和糖醇通常以按重量计约1％至约70％的量、优选地约40％至约50％的量使用。基于口香糖组合物的总重量，上述强力甜味剂和糖醇通常以按重量计高达约1％的量、优选地约0.05％至约0.4％的量使用。

本发明中有用的着色剂以有效产生所期望的颜色的量使用。这些着色剂包括颜料，其能以按口香糖组合物重量计高达约6％的量掺入。优选的颜料，即二氧化钛能以按口香糖组合物重量计高达约2％的量、优选地小于约1％的量掺入。着色剂还可以包括适用于食品、药物和化妆品应用的天然食品颜料和染料。这些着色剂被称为F.D.&C.染料和色淀。用于前述用途的可接受的材料优选地是水溶性的。说明性非限制性实例包括被称为F.D.&C.蓝色2号的靛蓝染料，它是5,5-靛蓝二磺酸的二钠盐。类似地，被称为F.D.&C.绿色1号的染料包含三苯甲烷染料，并且是4-[4-(N-乙基-N-对硫苄基氨基)二苯基亚甲基]-[1-(N-乙基-N-对硫苄基)-δ-2,5-环己二烯亚胺]的单钠盐。

增稠剂的实例包括甲基纤维素、藻酸盐、角叉菜胶、黄原胶、明胶、角豆胶、黄蓍胶和刺槐豆胶、乳化剂(例如卵磷脂和单硬脂酸甘油酯)、酸化剂(例如苹果酸、己二酸、柠檬酸、酒石酸、富马酸)及其混合物。

以上讨论的适用于胶基的增塑剂、柔软剂、乳化剂、蜡和抗氧化剂也可用于口香糖组合物。

活性口香糖成分

本发明的呈口香糖形式的口腔护理组合物还可以含有各种活性成分，例如抗微生物剂、Zn盐、氟化物、和脲。

此外，如果需要，根据本发明的口腔组合物可以包括任何其他活性成分，例如抗龋剂、抗结石剂、抗菌斑剂、抗牙周病剂、抗真菌剂、抗烟剂、抗寒剂、抗牙龈炎剂等。

在组合物中使用的抗微生物剂可以是多种阳离子抗微生物剂中的任一种，例如季铵化合物(例如，十六烷基氯化吡啶)和取代的胍类(例如氯己定以及相应的化合物阿来西定)。阳离子抗微生物剂的混合物也可用于本发明。

抗微生物季铵化合物包括其中季氮上的一个或两个取代基具有大约8至20个、典型地10至18个碳原子的碳链长度(典型地烷基)，而其余的取代基(典型地烷基或苄基基团)具有更少数量的碳原子(例如1至7个碳原子)、典型地甲基或乙基基团的那些。十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基氯化吡啶、十四烷基乙基氯化吡啶、十二烷基二甲基(2-苯氧基乙基)溴化铵、苄基二甲基硬脂基氯化铵、十六烷基氯化吡啶、季铵化5-氨基-1,3-双2-乙基-己基)-5-甲基六氢嘧啶和苄索氯铵是典型的季铵抗菌剂的实例。其他化合物是如在1980年6月3日的美国专利4,206,215(其通过引用并入本文)中披露的双[4-(R-氨基)-1-吡啶]烷烃。吡啶化合物是优选的季铵化合物。

阳离子抗微生物剂通常以约0.02％至约1％，优选地约0.3％至约0.7％，最优选地约0.3％至约0.5％的水平用于本发明的组合物中。

作为易溶的锌盐，原则上可以使用无机酸或有机酸的任何生理学上可接受的、易溶的锌盐，所述盐能够释放锌离子并且被批准用于预期用途，例如在食品、化妆品或药物产品中。非限制性实例是例如柠檬酸锌、硫酸锌、乳酸锌、氯化锌、乙酸锌以及其混合物。在这些盐中，优选的是乙酸锌。

所使用的锌盐必须是易溶的，以便确保在合适的时间段内在口腔中释放的锌离子的量对所针对的目的是有效的。

有利地，锌盐以按重量计0.001％至1.25％的量存在于口腔组合物中。所使用的量取决于施用形式和预期用途，并且被调整为使得释放的锌离子的量对预期用途有效。

作为掩味盐，使用选自氯化钠、氯化铵和生理学上可接受的碱金属、碱土金属和/或碳酸铵中的至少一种盐。

碱金属特别是钠或钾，而碱土金属有利地是钙或镁。特别优选的掩味盐是碳酸钠、碳酸钾和碳酸镁、氯化钠、氯化铵及其混合物。

掩味盐有利地以按重量计0.05％至6.25％、更优选地按重量计0.25％至3.50％、例如按重量计0.50％至2.50％的量用于口腔组合物中。

在每种情况下，用于掩盖锌的味道的掩味盐的用量可以由本领域技术人员确定并且取决于所讨论的具体的锌盐以及所选择的施用形式。

脲被用作防龋齿产品，用于中和在进食或饮水之后在牙菌斑中产生的酸。除了脲之外，组合物还可以含有能够在口中主要的条件下释放脲的药理学上可接受的物质。其实例是脲与无机化合物(例如硫酸镁、磷酸钙、氯化钠等)之间的盐和加成化合物。

根据本发明的组合物的脲含量在按重量计0.05％和按重量计80％之间、优选地在按重量计0.2％和按重量计25％之间变化。

可以使用本领域技术人员已知的标准技术和设备来制备口香糖组合物。根据本发明的有用的装置还包括混合和打浆装置。

锭剂和软锭剂

锭剂是旨在吸入并保持在口或咽中的经调味的药物剂型。它们可以含有维生素、抗生素、抗腐剂、局部麻醉剂、抗组胺剂、减充血剂、皮质类固醇、收敛剂、止痛剂、芳香剂、缓和剂、或这些成分的组合。锭剂可以采用各种形状，最常见的是扁平形、圆形、八边形和双凸形式。称为杆菌的另一种类型呈短杆或圆柱形式。锭剂的软种类称为软锭剂，由明胶或甘油明胶基质中或阿拉伯胶、蔗糖和水基质中的药物组成(H.A.Lieberman,PharmaceuticalDosage Forms:Tablets[药物剂型：片剂]，第1卷(1980),Marcel Dekker,Inc.[马塞尔·德克尔公司]，纽约州，纽约市.)。

在优选的实施例中，本发明涉及呈锭剂或软锭剂形式的酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该至少一种口腔护理成分选自润滑剂、膨胀剂、甜味剂、和调味剂。

润滑剂

在压缩锭剂的制造中使用润滑剂以促进锭剂从形成其的模具中释放。用于本发明中的润滑剂是固体材料，该固体材料不带电并且不会干扰(例如复合)阳离子抗微生物剂。该材料应该优选地是不溶于水的。满足这些要求的合适材料的一种类型是无毒的烃脂肪或衍生物。实例包括氢化牛脂和氢化植物油。只要聚乙二醇是固体材料，它们也可以用作润滑剂，这通常意味着聚乙二醇具有在4000Da至6000Da范围内的分子量。如下所述，这些材料也可以用作填料。

润滑剂的混合物也可用于本发明。润滑剂以约0.1％至约4.0％，优选地约0.5％至约2％的水平使用。

锭剂运载体

本文使用术语“锭剂运载体”来表示携带活性成分(酶和治疗剂)以及润滑剂的一种或多种材料。这些材料也称为膨胀剂或填料。由于运载体是非致龋的，运载体应不含蔗糖和类似材料。

可接受的填料材料包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇以及非致龋右旋糖酐。填料可以单独使用或组合使用。

甘露醇是天然存在的糖醇并且可以作为细粉获得。它的甜度仅为蔗糖甜度的约50％。然而，甘露醇的负溶解热使其能够在锭剂溶解时在口中赋予令人愉悦的、凉爽的感觉。

山梨醇是甘露醇的化学异构体并且具有类似程度的甜味。它的溶解热(是负的)还在口中提供令人愉悦的、凉爽的感觉。山梨醇可作为自由流动的颗粒或作为结晶粉末获得。聚乙二醇(PEG)也可以用于本发明的组合物中。这些材料是具有通式HOCH₂(CH₂OCH₂)_nCH₂OH的环氧乙烷的聚合物。单独使用PEG不是有利的，但它们与其他填料组合使用是可以接受的。发现最期望的分子量是在4000Da与6000Da之间。

填料通常以约85％至约99.8％、优选地约90％至约98％、最优选地约94％至约97％的水平用于本发明的组合物中。

其他锭剂组分

可接受的锭剂可以仅使用如以上概述的活性成分、润滑剂和填料材料制造。然而，为了使锭剂从美学观点更可接受，其通常包括如下材料：例如喷雾干燥的或胶囊化的香料或吸附到合适的稀释剂上的液体香料。喷雾干燥的或胶囊化的香料是优选的。合适的香料包括薄荷油、冬青油、黄樟油、留兰香油和丁香油。增甜剂也可被接受用于本发明的组合物中。合适的试剂包括阿司帕坦、乙酰舒泛、糖精、右旋糖和左旋糖。甜味剂和调味剂通常以约0.1％至约2％、优选地约0.25％至约1.5％的水平用于本发明的组合物中。

还可接受的是本发明的锭剂中存在的水溶性氟化物化合物的固体形式的量足以给出按重量计约0.0025％至约5.0％、优选地按重量计约0.005％至约2.0％的氟化物浓度，以提供另外的防龋效力。优选的氟化物是氟化钠、氟化亚锡、氟化铟以及单氟磷酸钠。锭剂也可以含有各种活性成分，例如抗微生物剂、Zn盐、氟化物、和脲(见上文)。

甜食和糖果

在优选的实施例中，本发明涉及呈甜食或糖果形式的酶促口腔护理组合物，这些酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该至少一种口腔护理成分选自着色剂、甜味剂、调味剂、和油改性剂。

甜食配制品的制备在历史上是众所周知的，并且多年来很少变化。甜食制品已经被分类为“硬”甜食或“软”甜食。本发明的挥发性油改性剂可以通过将改性剂混合到常规的硬甜食和软甜食中来掺入。

硬甜食可以通过常规方法加工和配制。通常，硬甜食具有由糖和其他碳水化合物膨胀剂的混合物组成的基质，该膨胀剂保持在无定形或玻璃状条件下。这种形式被认为是糖的固体糖浆，该糖的固体糖浆通常具有约0.5％至约1.5％的水分。此类材料通常含有按最终组合物重量计高达约92％的玉米糖浆、高达约55％的糖以及约0.1％至约5％的水。糖浆组分通常由富含果糖的玉米糖浆制备，但可包括其他材料。还可以添加另外的成分，例如调味剂、甜味剂、酸化剂、着色剂等。

此类甜食可通过常规方法常规地制备，例如涉及火蒸煮器、真空蒸煮器和刮面蒸煮器(也称为高速大气蒸煮器)的常规方法。

火蒸煮器涉及制造糖果基质的传统方法。在这一方法中，通过在锅中加热试剂直至膨胀剂溶解，将所期望的量的碳水化合物膨胀剂溶解在水中。然后可以添加另外的膨胀剂，并且继续蒸煮直至最终温度达到145℃至156℃。然后将该批次冷却并作为塑料样团块加工以掺入添加剂，例如香料、着色剂等。

高速大气蒸煮器使用换热器表面，其涉及在热交换表面上铺展一层糖果，糖果在几分钟内被加热至165℃至170℃。然后将糖果迅速冷却至100℃至120℃，并作为能够掺入添加剂(例如香料、着色剂等)的塑料样团块起作用。

在真空蒸煮器中，将碳水化合物膨胀剂煮沸至125℃至132℃，应用真空，并且在不额外加热的情况下将另外的水蒸发。当蒸煮完成时，该团块是半固体并且具有塑料样的稠度。此时，通过常规的机械混合操作将香料、着色剂和其他添加剂混合到该团块中。

在常规的硬甜食制造期间，均匀混合香料、着色剂和其他添加剂所需的最佳混合由获得均匀分布的材料所需的时间确定。通常，已经发现4至10分钟的混合时间是可接受的。

一旦糖果块已经被适当地回火，它可以被切割成可加工的部分或形成所期望的形状。取决于所期望的最终产品的形状和尺寸，可以使用多种成形技术。对于硬甜食的组合物和制备的一般讨论可见于H.A.Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets[药物剂型：片剂]，第1卷(1980),Marcel Dekker,Inc.[马塞尔·德克尔公司]，纽约州，纽约市。

根据本发明，有用的设备包括在甜食制造领域中众所周知的蒸煮和混合装置，并且特定装置的选择对于技术人员而言将是显而易见的。相比之下，压制片剂甜食含有特定的材料并且在压力下形成结构。

这些甜食通常含有按组合物重量计高达约95％的量的糖，以及典型的片剂赋形剂，例如粘合剂和润滑剂以及调味剂、着色剂等。与硬甜食类似，软糖食可用于本发明。软甜食(例如牛轧糖)的制备涉及常规的方法，例如两种主要组分的组合，即(1)高沸点糖浆，例如玉米糖浆、氢化淀粉水解产物等，和(2)相对轻质地的冰冻甜食(frappe)，其通常由卵清蛋白、明胶、植物蛋白(例如大豆衍生的化合物)、无糖乳衍生的化合物(例如乳蛋白)及其混合物制备。冰冻甜食(frappe)通常是相对轻的，并且可以例如在约0.5至约0.7克/cc的密度范围内。

该甜食的调味组分是具有相关的苦味或其他令人不愉快的余味的香料。这些调味组分可以选自天然和合成调味液体，例如挥发油，合成调味油，调味芳香剂和油、液体，油树脂，或来源于植物、叶、花、果实、茎的提取物及其组合。挥发油的非限制性的代表性实例包括留兰香油、肉桂油、冬青油(水杨酸甲酯)、薄荷油、薄荷醇、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、百里香油、雪松叶油、肉豆蔻油、甜胡椒油、鼠尾草油、肉豆蔻衣提取物、苦杏仁油和桂皮油。此外，该甜食还含有人工的、天然的或合成的香料，包括单独和混合的水果香料(例如香草和柑橘油，包括柠檬、橙、葡萄、酸橙、葡萄柚)和水果香精(包括苹果、梨、桃、葡萄、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝、杏等)。

其他有用的调味剂包括醛类和酯类，例如苯甲醛(樱桃、杏仁)、柠檬醛(即α-柠檬醛(柠檬、酸橙))、橙花醛(即β-柠檬醛(柠檬、酸橙))、癸醛(橙、柠檬)、醛C-8(柑橘类水果)、醛C-9(柑橘类水果)、醛C-12(柑橘类水果)、甲苯基醛(樱桃、杏仁)、2,6-二甲基-辛醛(绿色水果)、以及2-十二醛(柑橘、柑桔)、其混合物等。

在使用甜味剂的情况下，认为本发明包括本领域众所周知的那些甜味剂，包括天然甜味剂和人工甜味剂二者。甜味剂可选自以下非限制性列表：糖，例如蔗糖、葡萄糖(玉米糖浆)、右旋糖、转化糖、果糖及其混合物、糖精及其各种盐(例如钠盐或钙盐)；环拉酸及其各种盐，例如钠盐；二肽甜味剂，例如阿斯巴甜、双氢查耳酮化合物、甘草甜素；甜菊(Steviarebaudiana)(甜菊苷)；蔗糖的氯衍生物；黄烷酮醇；羟基愈创木酚酯；L-氨基二羧酸偕二胺；L-氨基二羧酸氨基烯基酸酯酰胺；以及糖醇，例如山梨醇、山梨醇糖浆、甘露醇、木糖醇等。还考虑了合成甜味剂3,6-二氢-6-甲基-1,2,3-噁噻嗪-4-酮-2,2-二氧化物，特别是其钾盐(乙酰舒泛钾)、钠盐和钙盐。

该甜食还可以包括着色剂。这些着色剂可以选自适用于食品、药物和化妆品应用的多种染料中的任一种，并且被称为FD&C染料等。用于前述用途谱的可接受的材料优选地是水溶性的。说明性的实例包括被称为FD&C蓝色2号的靛蓝染料，其为5,5’-靛二磺酸的二钠盐。类似地，被称为FD&C绿色1号的染料包含三苯甲烷染料并且是4-[4-(N-乙基-N-对磺基苄基氨基)二苯基亚甲基]-[1-(N-乙基-N-对硫苄基)-2-5-环己二烯亚胺]的单钠盐。所有FD&C和D&C染料以及它们相应的化学结构的完整叙述可见于柯克奥斯莫的化学技术百科全书(Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology)的第5卷。

甜食还可以包括挥发性油改性剂，例如辣椒油树脂。油改性剂以一定量存在，其未被检测为口腔中的单独成分，但是仍然能够改变挥发性油的感官知觉。

该油改性剂以甜食的约1至约150ppm的量存在。辣椒可从小辣椒(Capsicumminimum)、观赏辣椒(Capsicum fruttescens)、番椒(Capsicum annuum)和类似品种获得。在商业上，辣椒的果实被称为辣椒(chilies)或胡椒(peppers)。这些果实因其极大的咬合力、刺激性和独特气味而闻名。

关于甜食压制片剂配制品，其将含有片剂粒化基质和各种添加剂，例如甜味剂和香料。所使用的片剂粒化基质将取决于多种因素而变化，这些因素是例如所使用的基质类型、所期望的脆性以及用于制造最终产品的其他组分。这些甜食通常含有按组合物重量计高达95％的量的糖。

甜食压制片剂可以另外地包括片剂赋形剂，例如粘合剂或润滑剂，以及调味剂、着色剂、以及挥发油和挥发性油改性剂。

就这些甜食而言，可以实践的变化非常广泛，并且在本领域技术人员的能力之内，特别是关于另外的组合物填料、调味剂的使用，着色剂等的使用。

外部口腔护理组合物

外部口腔护理配制品(例如义齿清洗液、义齿清洗片剂、义齿清洗粉末等)可包括选自以下类别的成分和/或物质：

在优选的实施例中，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：载液、消毒剂和漂白剂、清洁剂、洗涤剂和表面活性剂、发泡剂、防腐剂、和调味剂。

其他口腔护理组合物

本发明的酶促口腔组合物还可以包含在适用于牙齿清洁的细丝中，例如，用作牙线的细丝。优选地，口腔护理组合物被涂覆到细丝的外部。因此，在优选的方面，本发明涉及包含酶促口腔护理组合物的细丝，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，其中该细丝适合用于牙齿清洁。

口腔疾病的治疗

本发明的酶促口腔护理组合物适合用于治疗口腔疾病，其中所期望的是去除生物膜。本发明的组合物特别适用于治疗牙周病和龋齿。

牙周病也称为牙龈病，是由细菌感染以及随后在牙齿和牙齿周围组织上建立生物膜而引起的一组炎性病症。牙周病可以根据严重性分为以下类别：牙龈炎(包括菌斑诱导的牙龈炎)、慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、作为全身性疾病的表现的牙周炎、坏死性溃疡性牙龈炎/牙周炎、牙周膜脓肿、以及牙髓牙周联合病变。取决于受影响区域的范围，牙周病可以进一步被认为是局部的或全身的。

龋齿，也称为蛀牙或龋洞，是由有机酸(例如乳酸)引起的，有机酸由驻留在口腔中的某些形成生物膜的细菌(包括变异链球菌和一些乳杆菌属物种)释放。龋齿可以与其他并发症相关，例如牙齿周围组织的炎症、牙齿缺失和感染或脓肿形成。龋齿可以通过位置、病因、进展速率和受影响的硬组织来分类，例如根据G.V.Black分类(类别I、II、III、IV、V、和VI)。

在一个方面，本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，用作药物。

在一个方面，本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，用于治疗口腔疾病。

在优选的实施例中，本发明涉及一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分，用于治疗牙周疾病和/或龋齿。

在一个方面，本发明涉及酶促口腔护理组合物用于治疗或预防性治疗人受试者的用途，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

在一个方面，本发明涉及治疗人受试者的方法，该方法包括向人受试者施用包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分的酶促口腔护理组合物。

在一个方面，本发明涉及用于去除口腔生物膜的方法，该方法包括将生物膜与口腔护理组合物接触，该口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。在一个实施例中，该酶促口腔护理组合物是外部口腔护理组合物，并且生物膜位于目标上；优选地该目标是义齿。在一个实施例中，目标位于口腔内部或外部。

犬科口腔护理组合物

本发明的酶促口腔护理组合物可以是犬科口腔护理组合物。也就是说组合物可以用于犬科动物。因此，本发明的实施例针对用作犬科口腔护理组合物的组合物，其中所述组合物包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶。

组合物可以配制成牙膏或牙膏片、牙霜、或糊剂或乳膏用于应用于消耗品。消耗品可以呈咀嚼物、零食、干粮或液体补充剂的形式。咀嚼物可以是例如牙棒、硬咀嚼物、软咀嚼物、饼干、冻干零食和肉干零食。除非另有说明，否则在一个实施例中，该组合物适合用于应用至口腔，优选地应用到犬科的牙齿上，并且在替代性实施例中，该组合物适合于在犬科消耗之前应用到犬科消耗品上。因此，本发明的一个方面涉及用作牙膏或牙霜或乳膏或糊剂的口腔护理组合物。

在另一方面，该组合物被配制为消耗品的一部分。因此，本发明的另一个方面涉及包含本发明组合物的犬科消耗品。

如实例4所示，本发明的组合物对犬科物种中发现的病原体有效。因此，本发明的一个方面涉及改善犬科口腔卫生的方法，或涉及DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶用于制备用于改善口腔卫生的组合物的用途。结果表明，含有变聚糖酶、β-葡聚糖酶和PDE的酶组合物对犬科多物种生物膜的形成具有82.9％预防作用。本发明的一个方面涉及预防与细菌物种相关的犬科口腔疾病，该细菌选自由以下组成的组：奈瑟氏菌属(Neisseria)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、假单胞菌属(Pseudomonas)、二氧化碳噬纤维菌属(Capnocytophaga)和肠球菌属(Enterococcus)，特别地选自以下物种，该物种选自由以下组成的组：动物口腔奈瑟氏球菌(Neisseria zoodegmatis)、犬巴斯德菌(Pasteurella canis)、莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)、犬二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga canis)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)，更优选地选自由以下组成的组：动物口腔奈瑟氏球菌DSM21643、犬巴斯德菌DSM22968、莓实假单胞菌DSM3456、犬二氧化碳噬纤维菌DSM101831和粪肠球菌DSM20478。

本发明的另一个方面涉及本发明组合物用于制备用于预防犬科的牙菌斑、牙龈疾病和/或牙洞和/或用于改善犬科的总体口腔卫生的口腔护理产品的用途。

优选的实施例I

1)一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

2)根据实施例1所述的口腔护理组合物，其中该DNA酶与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性；优选地，该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成。

3).根据实施例1-2中任一项所述的口腔护理组合物，其中该变聚糖酶与SEQ IDNO:2具有至少80％序列同一性；优选地，该变聚糖酶包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成。

4)根据实施例1-3中任一项所述的口腔护理组合物，其中该β-葡聚糖酶与SEQ IDNO:3具有至少80％序列同一性；优选地，该DNA酶包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成。

5)根据实施例1-4中任一项所述的口腔护理组合物，其中在至少一种口腔护理成分存在下，该DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：苯甲酸盐(优选苯甲酸钠)、EDTA、乙醇、甘油、磷酸盐(优选磷酸钠或磷酸钾)、氟化物(优选氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)、过氧化氢、和甘露醇。

6)根据实施例1-5中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈内部口腔护理组合物的形式；优选地呈牙膏或牙膏片、牙霜、漱口剂或漱口片、口腔清洗剂、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食、或糖果的形式。

7)根据实施例1-5中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈外部口腔护理组合物的形式；优选地呈义齿清洗液、义齿清洗片剂、或义齿清洗粉末的形式。

8)根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用作药物。

9)根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用于治疗口腔疾病；优选地用于治疗牙周病和/或龋齿。

10)根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物用于治疗或预防性治疗人受试者的用途。

11)一种治疗人受试者的方法，该方法包括施用根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物；优选地向该人受试者的口腔施用该口腔护理组合物。

12)一种用于去除口腔生物膜的方法，该方法包括将该口腔生物膜与根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物接触。

13)根据实施例12所述的方法，其中该口腔生物膜位于物体上，优选地义齿。

14)根据实施例13所述的方法，其中该义齿位于口腔的内侧或外侧。

15)一种套装盒，该套装盒包含：

a)根据实施例1-7中任一项所述的口腔护理组合物；以及

b)使用说明书。

优选的实施例II

2)根据实施例1所述的口腔护理组合物，其中该DNA酶是具有DNA酶活性并且与SEQID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

3)根据实施例2所述的口腔护理组合物，其中该DNA酶与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性；优选地，该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成。

4)根据实施例1-3中任一项所述的口腔护理组合物，其中该变聚糖酶选自由以下组成的组：

a)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

b)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:4的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

c)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

d)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

e)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

f)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

g)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

h)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

i)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

j)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

k)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；以及

l)具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

5)根据实施例1-4中任一项所述的口腔护理组合物，其中该变聚糖酶与SEQ IDNO:2具有至少80％序列同一性；优选地，变聚糖酶包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成。

6)根据实施例1-5中任一项所述的口腔护理组合物，其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：

a)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

b)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；以及

c)具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:16的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

7)根据实施例1-6中任一项所述的口腔护理组合物，其中该β-葡聚糖酶与SEQ IDNO:3具有至少80％序列同一性；优选地，该β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成。

8)根据实施例1-7中任一项所述的口腔组合物，

i)其中该DNA酶是具有DNA酶活性并且与SEQ ID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；

ii)其中该变聚糖酶是具有内切-1,3-α-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽；以及

iii)其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：

9)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

iii)其中该β-葡聚糖酶是具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

10)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

iii)其中该β-葡聚糖酶是具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

11)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

iii)其中该β-葡聚糖酶是具有内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:16的多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

12)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

ii)其中该变聚糖酶包含SEQ ID NO:2、基本上由其组成、或由其组成；以及

13)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

14)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

15)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

iii)其中该β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:3、基本上由其组成、或由其组成。

16)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

iii)其中该β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:15、基本上由其组成、或由其组成。

17)根据实施例1-8中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

iii)其中该β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成。

18)根据实施例1-17中任一项所述的口腔护理组合物，其中在至少一种口腔护理成分的存在下，该DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：苯甲酸盐(优选苯甲酸钠)、EDTA、乙醇、甘油、磷酸盐(优选磷酸钠或磷酸钾)、氟化物(优选氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)、过氧化氢、和甘露醇。

19)根据实施例18所述的口腔护理组合物，其中化学稳定性根据本文实例1进行确定；优选地，其中化学稳定性确定为在特定口腔护理成分存在下由热解折叠转变中点(Tm)定义的热稳定性。

20)根据实施例1-19中任一项所述的口腔护理组合物，其中与组合物B相比，该口腔护理组合物提供了改善的生物膜预防，如根据本文实例2所确定的。

21)根据实施例1-20中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈内部口腔护理组合物的形式；优选地呈牙膏或牙膏片、牙霜、漱口剂或漱口片、口腔清洗剂、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食、或糖果的形式；更优选地呈牙膏片、漱口片、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食或糖果的形式；最优选地呈牙膏片、锭剂、或口香糖的形式。

22)根据实施例1-20中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈外部口腔护理组合物的形式；优选地呈义齿清洗液、义齿清洗片剂、或义齿清洗粉末的形式。

23)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用作药物。

24)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用于治疗口腔疾病；优选地用于治疗牙周病和/或龋齿。

25)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用于预防和/或去除口腔生物膜。

26)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物用于治疗或预防性治疗人受试者的用途。

27)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物用于改变(例如改善)牙菌斑形态学的用途。

28)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物用于增加口腔微生物组的微生物丰富度的用途。

29)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物用于预防和/或去除口腔生物膜的用途。

30)一种治疗人受试者的方法，该方法包括施用根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物；优选地向该人受试者的口腔施用该口腔护理组合物。

31)一种用于去除口腔生物膜的方法，该方法包括将该口腔生物膜与根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物接触。

32)根据实施例31所述的方法，其中该口腔生物膜位于物体上，优选地义齿。

33)根据实施例32所述的方法，其中该义齿位于口腔的内侧或外侧。

34)一种套装盒，该套装盒包括：

a)根据实施例1-22中任一项所述的口腔护理组合物；以及

b)使用说明书。

实例

活性测定

DNA酶活性测定1

可以在具有甲基绿(BD公司，富兰克林湖(Franklin Lakes)，新泽西州(NJ)，美国)的DNA酶测试琼脂(其根据供应商的说明书制备)上确定DNA酶活性。简言之，将21g的琼脂溶解于500ml水中，然后在121℃下高压灭菌15min。然后将经高压灭菌的琼脂在水浴中调温至48℃，并且将20ml的琼脂倒入皮氏培养皿并允许在室温下通过孵育过夜进行固化。在固化的琼脂板上，添加5μl的酶溶液，并且DNA酶活性被观察为斑点酶溶液周围的无色区域。

DNA酶活性测定2

根据供应商的说明书，通过使用DNA酶Alert试剂盒(11-02-01-04，IDT整合DNA技术有限公司(IDT Intergrated DNA Technologies))确定DNA酶活性。简言之，将95μl DNA酶样品与5μl底物在微量滴定板中混合，并立即使用例如来自BMG莱伯泰科(BMG Labtech)的Clariostar酶标仪(536nm激发、556nm发射)测量荧光。

变聚糖酶活性测定

变聚糖酶在水解变聚糖底物后产生还原糖，并且可以检测还原糖的释放，并用于测定内切-1,3-α-葡聚糖酶活性。可以根据Fuglsang等人，J.Biol.Chem.[生物化学杂志],2000，第375卷，第3期，第2009-2018页中描述的程序制备变聚糖底物。

将变聚糖底物溶解于0.5％ DMSO中至终浓度为60ppm(0.006％)，并将变聚糖酶稀释至200ppm(0.2mg/mL)的储备浓度。通过在透明底部96孔微量滴定板(赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher Scientific))中，在50℃和300rpm下，将60ppm变聚糖酶(0.06mg/mL)连同100μL预热的变聚糖底物在0.1M乙酸钠缓冲液(pH 5.6)中孵育10分钟来引发反应。将不添加酶的样品用作底物对照。

通过添加80μL含有酒石酸钾钠(50g/L)、PAHBAH(20g/L，CAS号：5351-23-5)、乙酸铋(III)(5.52g/L)和氢氧化钠(0.5M)的碱性试剂来淬灭变聚糖水解反应，并将经淬灭的样品在50℃和300rpm下再孵育20分钟。

可以通过测量405nm处的吸光度来确定变聚糖酶活性。

β-葡聚糖酶活性测定

可以通过还原端测定，以如下方式确定内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性：

将20μLβ-葡聚糖酶储备溶液(例如，通过将100uLL添加至10ml含有0.01％ Triton-X的MilliQ水中获得)和180μLβ-葡聚糖底物溶液(例如，通过将12.5mgβ-葡聚糖(例如，来自大麦的β-葡聚糖、中等粘度、目录号P-BGBM，麦格酶公司(Megazyme))溶解于5ml含有在MilliQ水中50mM硼酸、50mM乙酸、50mM KCl、1mM CaCl₂、和0.01％ Triton-X的B&R缓冲液中获得)进行混合，并将酶-底物混合物在30℃下孵育30min。

孵育后，将20μL酶-底物混合物与130μL MilliQ水和70μL PAHBAH试剂(通过将0.375g 4-羟基-苯甲酰肼溶解于25ml K-Na-酒石酸盐溶液中获得，该K-Na-酒石酸盐溶液通过将50g K-Na-酒石酸盐和20g NaOH溶解于1L MilliQ水中获得)进行混合。然后将该溶液在95℃下孵育10min，然后在冰上冷却1min。

然后可以通过测量410nm处的吸光度来确定内切-1,3(4)-β-葡聚糖酶活性。

酶组合物

在本实例中，评估了以下酶组合物：

实例1：在口腔护理成分存在下的SEQ ID NO:1-4、6和11的热稳定性

用于热稳定性测量的口腔护理配制品的制备

在广泛使用的口腔护理成分的存在下，在口腔护理产品配制品和所选口腔护理商业产品中常用的浓度范围内，测量DNA酶(SEQ ID NO:1)、变聚糖酶(SEQ ID NO:2、4、6和11)和β-葡聚糖酶(SEQ ID NO:3)的热稳定性或热解折叠转变中点(Tm)。Tm参数用于评估热稳定性，因为这是折叠和未折叠蛋白分子群体相等时的温度。Tm是在评估热稳定性时使用的广泛接受的参数。

从不同供应商获得高纯度和生物技术等级的试剂并且使用MilliQ水新鲜制备储备溶液。这些配制化学品和它们的储备液以及Tm测量中使用的最终浓度在表1中列出。

将酶样品的纯化制剂稀释至2mg/ml的储备浓度，然后在由单独的口腔护理成分(表2-5中规定的浓度)、柠檬酸盐磷酸盐缓冲液(McIlvaine缓冲液，见下文)和MilliQ水组成的口腔护理配制品中进一步稀释10倍，对应于0.2mg/ml的最终蛋白质浓度。使用机械臂，在384孔小体积深孔板(格瑞纳生物国际公司(Greiner Bio-One International)，产品号784201)中以70μl的最终体积进行所有稀释，并且用于热稳定性测量。使用pH 5.0和pH 6.0的McIlvaine缓冲液，在接近口腔的生理pH范围对每种酶进行Tm测量。通过混合51.50ml0.2M Na₂HPO₄+48.50ml 0.1M柠檬酸来制备100ml McIIvaine缓冲液pH 5.0，而通过混合63.15ml 0.2M Na₂HPO₄+36.85ml 0.1M柠檬酸来制备pH 6.0的McIIvaine缓冲液。

口腔护理配制品的热稳定性

使用基于毛细管的纳米差示扫描荧光仪(nanoDSF)、Prometheus NT.Plex(纳米温度技术股份有限公司(NanoTemper Technologies GmbH)，慕尼黑，德国)进行热稳定性测量。使用来自纳米温度技术公司(NanoTemper Technologies)的标准nanoDSF级毛细作用片(目录号：PR-AC002)。通过毛细管作用将蛋白质样品加载到毛细管中(每个样品一式三份)。通过改变仪器上的LED功率来优化330nm和350nm处的发射强度，以确保足够的信号。连续监测在330nm和350nm处的荧光信号作为温度的函数(用于热解折叠的加热速率为从20℃至95℃每分钟3.3℃)。使用制造商提供的PR.StabilityAnalysis_1.1.0.11077软件分析数据。该分析与模型无关，且仅采用一阶导数的峰最大值，该峰最大值对应于近似热解折叠转变中点，定义为Tm(参见图1)。

热稳定性数据的再现性

图1中示出的数据是使用nanoDSF在不同配制品中针对所有酶生成的数据类型的实例。在所有情况下，数据显示明显的解折叠转变，和在一阶导数中清晰可辨的峰，并且是高度可再现的。

结果

表2和表3示出了分别源自pH 5和pH 6下一式三份测量的SEQ ID NO:1(DNA酶)、SEQ ID NO:2(变聚糖酶)、和SEQ ID NO:3(β-葡聚糖酶)的平均Tm值。表4和表5示出了分别源自pH 5和pH 6下一式三份测量的SEQ ID NO:4(变聚糖酶)、SEQ ID NO:6(变聚糖酶)、和SEQ ID NO:11(变聚糖酶)的平均Tm值。表6和表7示出了分别源自pH 5和pH 6下一式三份测量的SEQ ID NO:15(β-葡聚糖酶)和SEQ ID NO:16(β-葡聚糖酶)的平均Tm值。

根据表2-7中示出的数据，显然经测试的酶在大量用于口腔护理的配制品成分存在下具有相当或改善的热稳定性。在这种上下文中，术语“相当的热稳定性”意指与口腔护理组分共同配制的酶的Tm值在单独的相同酶(即对照)的Tm值的+/-5％内，并且术语“改善的热稳定性”意指与单独的相同酶(即对照)的Tm值相比，与口腔护理组分共同配制的酶的Tm值增加超过5％，例如，10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、或甚至更多。

总之，在这个实例中呈现的数据清楚地显示这些经评估的酶在广泛使用的口腔护理组分存在下具有高热稳定性，使得它们与常见的口腔护理配制品相容。

实例2：人唾液生物膜预防测定

使用WO 2020/099490中描述的方法(有少量修改)进行人唾液生物膜预防测定。简言之，使生物膜在96孔板中生长，并通过与组合物A在柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液(McIlvaine缓冲液，pH 6，通过混合12.63ml 0.2M Na₂HPO₄+7.37ml 0.1M柠檬酸制备)中孵育来制备酶处理的样品。作为比较，还评估了相同柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液中的组合物B。在微量需氧条件下，在ThermoFisher Scientific^TMRectangular AnaeroBox^TM容器中(赛默飞世尔科技公司(ThermoScientific)AnaeroGen 2,5L#AN0025A)，在37℃下，将孵育不摇动进行24小时。包括通过与pH 6的McIlvaine缓冲液一起孵育而制备的经缓冲液处理的样品作为对照。将所有样品重复评估八次。

孵育后，通过用100μl 0.9％氯化钠进行两次温和洗涤来去除浮游细菌，并用0.95％结晶紫溶液在室温下对生物膜染色15min。将板用100μL 0.9％氯化钠冲洗两次，并且将附着的染料用96％乙醇和0.1％乙酸的水溶液溶解。用SpectraMax M3酶标仪(分子仪器公司(Molecular Devices))在600nm处测量吸光度。

对于数据处理，吸光度与酶或缓冲液处理后剩余生物膜的程度成正比。结果表示为生物膜预防的百分比并且如下计算：100-((A600 nm酶处理的样品)/(A600 nm缓冲液处理的样品)x100)，其中A600 nm是指酶处理的或缓冲液处理的样品在600nm处进行的八次吸光度测量的平均值。

如可以从表8中看出，与仅包含DNA酶和变聚糖酶的组合物B相比，包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶的组合物A展示出增强的生物膜预防作用(87.3％相比于79.0％)。

实例3：生物膜去除测定

组合物A

使用以下两种类型的生物膜评估组合物A的生物膜去除：自人唾液生长的多物种生物膜和自变异链球菌生长的单物种生物膜。以如下方式，使这两种类型的生物膜在具有黑色孔壁和光学环烯烃底部的384/1536孔微孔板中生长：

多物种唾液生物膜：从12名不同的志愿者中收集了人唾液。将收集的唾液在等体积的PBS和甘油中稀释至50％，然后冷冻并在-20℃下储存直至使用。为形成生物膜，向每个孔中添加8μl未灭菌的唾液连同8μl经灭菌的唾液、6.4μl蔗糖和57.6μl脑心浸液(BHI)肉汤(西格玛公司(Sigma)，产品号53286)。将板在37℃和50rpm下孵育16h。

单物种变异链球菌生物膜：向每个孔中添加含有1x 10⁷个CFU/ml细菌接种物(基于变异链球菌UA159的McFarland溶液)的80μl Tripticase大豆肉汤(TSB)+1％蔗糖。在厌氧条件下，在37℃下，对板接种16h。

孵育后，通过移液从生长的生物膜中去除该液体，并用80μl在柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液(McIlvaine缓冲液，pH 6)中的组合物A替代。在37℃和50rpm下，将板孵育0.5h(唾液生物膜)或2h(变异链球菌生物膜)。

然后通过将板倒置去除柠檬酸盐磷酸盐缓冲液(McIlvaine缓冲液，pH 6)中的组合物A。将生物膜用80μl 0.9％水性NaCl(添加并吸出)洗涤一次，并通过将板倒置并面朝下轻敲以去除孔中残留的任何液滴来进行部分干燥。

在用以下各项染色后，使用配备有63x水浸物镜的Opera Phenix^TM高含量筛选系统(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))来评估生物膜的去除：小麦胚芽凝集素Alexa Fluor^TM633缀合物(WGA)(激发长度：640nm；发射长度：650-760nm)、FITC(激发长度：488nm；发射长度：500-550nm)和Syto^TM85(激发长度：561nm；发射长度：570-630nm)。对每个孔的所有区域进行成像以评估生物膜去除性能。使用Harmony软件进行数据处理。

如从表9a可以看出，组合物A(包含DNA酶、变聚糖酶和L)表现出有效的生物膜去除效果，特别是对于从变异链球菌生长的生物膜。

EPS＝外泌多糖；eDNA＝细胞外DNA.

组合物B、D和E

根据WO 2020/099490中描述的方法(有一些修改)，使用在96孔微量滴定板甲酸盐中从人唾液生长的多物种生物膜来评估组合物B、D和E的生物膜去除。简言之，使生物膜生长24小时，并在37℃下伴随搅动(50rpm)用200μL pH 6的McIlvaine缓冲液(对照；通过混合12.63ml 0.2M Na₂HPO₄+7.37ml 0.1M柠檬酸来制备)或用在pH 6的McIlvaine缓冲液中的组合物C、D或E处理30分钟。将所有样品重复评估八次。

酶处理后，将样品用200μL 0.9％氯化钠冲洗两次，并在室温下用0.095％结晶紫溶液染色15分钟。将样品用200μL 0.9％氯化钠冲洗三次，并用33％乙酸溶液萃取染料。用SpectraMax M3酶标仪(分子仪器公司)在600nm处测量吸光度。

对于数据处理，吸光度与酶或缓冲液处理后剩余生物膜的程度成正比。生物膜去除的百分比如下计算：100-((A600 nm酶处理的样品)/(A600 nm缓冲液处理的样品)x100)，其中A600 nm是指酶处理的或缓冲液处理的样品在600nm处进行的八次吸光度测量的平均值。

如可以从表9b中看出，组合物D和E(包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶)表现出有效的生物膜去除作用，与组合物B(包含DNA酶和变聚糖酶)相比有所改善。

实例4：组合物A对具有固定正畸矫治器的患者牙齿生物膜和唾液微生物组的影响的临床评估

该临床研究的目的是评估呈漱口水形式的组合物A对正在接受固定正畸矫治器治疗的患者的牙齿生物膜量和唾液微生物组组成的影响。

材料与方法

研究设计、伦理批准和注册：

该研究采用随机、双盲安慰剂对照设计，具有两个平行组。该项目已经获得瑞典伦理审查机构(Swedish ethical review authority，瑞典)的批准(Dnr2020-05221)，并且已在临床试验政府标识符(Clinical Trials.gov Identifier)上注册(NCT05033015)。

研究群体：

我们邀请了在瑞典卡尔斯港(Karlshamn)正畸专科诊所的60名符合条件的患者(年龄在14-18岁)参加这项研究。受试者连续入选，并且纳入标准为：i)正在接受固定正畸矫治器(单侧或双侧上颌)治疗至少3-6个月；和ii)在至少6颗牙齿的托槽基部周围可见生物膜积聚。不邀请具有龋齿病变、牙周疾病和/或软组织病理学的患者。同样，我们排除了对测试产品中的成分具有已知食物过敏或具有过敏史(包括对酶过敏)的患者。35名患者接受了邀请，并获得了有关该项目的口头和书面信息。我们从每名患者和监护人那里收集了签署的同意书。在基线注册后，通过打开计算机生成的编号信封，将受试者随机分配到测试组或安慰剂组。由于各种与Covid-19相关的原因，只有29名受试者完成了研究方案，退出率为18％。

干预和实验性产品：

我们为所有受试者提供了含1450ppm氟化钠的标准化无酶牙膏，在研究过程中每天使用两次。在基线临床注册后，我们要求参与者早晚通过在牙齿周围冲洗10mL指定液体30秒来彻底冲洗口腔。冲洗后，受试者应吐出冲洗液，避免用水冲洗，并且最重要的是，我们要求他们将刷牙和漱口分隔开至少30分钟。干预的持续时间为8天(16次冲洗)。实验性漱口剂含有在水溶液中的组合物A，如表10所示。安慰剂漱口剂具有相同的味道和颜色，但不含任何酶。为了确保盲法，将这些产品装在带有颜色编码的管中，每个试管精确地含有10mL产品。临床研究人员每天向患者发送两次SMS(上午和晚上)提醒(瑞典隆德的Servicewell)，以提高依从性。独立的基于大学的监督员保证了分配的隐蔽性。

临床登记和终点：

主要结果是正畸托槽周围的牙齿生物膜数量，并且单一校准的检查员在基线和8天后进行了登记。为可视化生物膜，在检测模式下用紫外光(D-light Pro，GC Europe)照射牙齿。然后根据Beberhold和同事(Beberhold等人，Orthodontics[口腔正畸学](Chic.),2012；13:94-99)对生物膜进行评分：评分0＝托槽无菌斑；评分1＝在托槽基部的一个牙齿表面上有单独菌斑岛状物；评分2＝在托槽基部的两个牙齿表面上有菌斑；评分3＝在托槽基部的三个牙齿表面上有菌斑；和评分4＝在托槽基部的所有牙齿表面上有菌斑和/或牙龈炎症。登记上下前牙(门牙和尖牙)和前磨牙的颊表面。我们将评分的总和除以牙齿的数量以表示在患者水平上的正畸菌斑指数(OPI)。主要检查者对牙龈边缘的颊粘膜评分为：0＝正常牙龈(暗淡而坚硬)，或1＝出现牙龈炎(粘膜红肿，探查时出血)。我们评估了OPI对10名接受固定正畸矫治器治疗、未参加试点研究的青少年的检查者间可靠性。两名训练有素的临床医生在总共178颗牙齿的托槽基部独立地评估了生物膜评分。

临床数据的功效计算和统计方法：

由于缺乏有关实验性漱口剂的先前临床数据，我们预计0.5个OPI单位(SD 0.4)的平均差异将具有临床意义。用α＝0.05和β＝0.8得出的计算表明，在该项研究中每组应招募18名患者。我们用IBM-SPSS软件(27.0版，美国芝加哥)处理了临床数据。对于连续数据，将受试者水平上的组间差异与未配对t检验进行比较。检查者间的可靠性是用科恩氏(Cohen)κ值计算和表示的。p值小于0.05被认为具有统计学显著性。在小组分配公布之前，我们进行了统计计算。

唾液取样和分析：

检查者在基线和生物膜评分前八天后收集了未经刺激的全唾液样品。受试者用自来水冲洗，在他们的口腔中积聚唾液，并唾出到有盖的塑料管(约1.0mL)中。将管立即冷冻并在-18℃下储存，直到在丹麦的诺维信公司进行运输和进一步加工。

将所有样品在95℃下热灭活15min，随后根据制造商的方案，通过使用Macherey-Nagel^TMNucleoSpin^TM土壤试剂盒进行DNA提取。将600-800μl唾液样品与850μl PBS缓冲液混合，并以10,000rpm离心2min。将裂解缓冲液直接添加到沉淀中并转移至珠管中。使用通用引物对16S的V3-V4区进行PCR扩增，并使用Illumina MiSeq 300bp配对末端进行测序。我们包括阴性对照样品(无材料/DNA)以及由已知模拟群体组成的阳性对照以验证分析。

唾液微生物组样品的生物信息学和统计分析：

我们用USEARCH管线，使用如通过Larsen等人(Gut Microbes[肠道微生物],2021,13(1),1988836)中描述的相同设置，生成零半径操作分类单元(OTU；Edgar,Nat.Methods.[自然方法],2013；10:996-998)。用QIIME特征分类器classify-sklearn(Bolyen等人，Nat.Biotechnol.[自然生物技术]2019，第37卷，第852-857页)和人口腔微生物组数据库v15.22(Chen等人，2010)对独特的过滤扩增子进行分类学分类。将所有样品细化至10000的读数。对于基线时唾液微生物组的整体组成，我们使用布雷-柯蒂斯(Bray-Curtis)度量(Bray和Curtis,Monographs[专论],1957；27:326-349)，将阿多尼斯·佩曼诺瓦(AdonisPermanova)检验应用到相异度矩阵上。为调查漱口剂是否会随着时间的推移引起整体微生物组组成的变化，使用配对t检验对每个个体的基线和随访样品之间的布雷-柯蒂斯(Bray-Curtis)相异度进行了测试。我们建立了一个线性混合模型以测试漱口剂与安慰剂组相比从基线到随访时对微生物丰富度的影响。零假设是测试组在基线和随访之间的丰富度变化等于安慰剂组的变化。我们使用类似的模型来测试在超过32个样品中存在的所有OTU的显著变化，其中每个OTU计数都经过对数转换。我们根据Benjamini和Hochberg(J R Stat SocSeries[英国皇家统计学会系列],B.1995；57:289-300)校正了多重检验的所有p值。

结果

基线数据：

测试组中患者的平均年龄为15.4岁，而安慰剂组中患者的平均年龄为16.8岁。最常见的正畸治疗指征是中度至重度拥挤的牙弓，并且18名患者被拔除了2-4颗前磨牙。所有患者在上颌骨都有预先调整的固定正畸矫治器(022狭槽大小，MBT处方，3M^TMVictorySeries^TM低态托槽，Unitek公司，美国加利福尼亚州)，并且24名患者正在接受双上颌支具治疗。

临床结果：

安慰剂组的受试者在基线时具有稍微更高的平均OPI值，但与测试组相比，差异不具有统计学显著性。8天后，注意到测试组下降，但安慰剂组无下降(p<0.05)。相对差异为38％，如图2所示。基线时，测试组中的6名患者和安慰剂组中的9名患者显示探查时出血。8天后的相应数字分别为3名和9名患者。检查者间测试显示，OPI评分具有78％一致性。科恩氏加权κ为0.734(标准误差0.039)，表明一致性良好。

微生物结果

测试组和安慰剂组之间在基线微生物组成方面没有差异(p＝0.317)，并且我们发现随着时间的推移组成保持一致，在基线和随访时，在整体微生物组成的成对比较中，各组之间没有统计学差异(图3，p＝0.704)。对微生物丰富度没有显著的处理效应(图4)。

副作用：

测试组中的一名参与者声称恶心和“有怪味”，并在第一天后放弃了该项目。两名参与者不喜欢漱口剂的味道，但按照指示使用。没有向研究人员报告其他不良事件或副作用。除一名参与者外的所有参与者均按照约定在八天后将所有分发的口腔清洗剂管归还诊所。

结论

在8天时间段内，在使用固定正畸矫治器的青少年中，每天两次使用含有组合物A的漱口剂减少了牙齿生物膜量。测试组和安慰剂组之间的平均差异为0.7个OPI单位，这具有临床相关性。获得了减少的牙齿生物膜量，而未显著影响唾液微生物组的组成。

实例5：组合物A对健康个体菌斑形态学影响的临床评估

该临床研究的目的是评估呈锭剂形式的组合物A对健康个体牙齿生物膜的量和形态学的影响。

材料与方法：

研究设计和伦理批准：

该研究应用随机、双盲安慰剂对照设计，具有两个平行组。本试验在奥胡斯大学(Aarhus University)牙科和口腔健康系(Department of Dentistry and Oral Health)进行。方案得到了中央日德兰地区健康研究伦理委员会(Central Jutland RegionalCommittee on Health Research Ethics)的批准(1-10-72-260-20)。

实验性产品：

实验性锭剂含有组合物A。实验性锭剂和安慰剂锭剂的成分描述于表11中。除了酶，安慰剂锭剂含有与实验性锭剂相同的成分，并且具有相同的味道、颜色和质地。

功效计算：

由于缺乏关于实验性锭剂的先前临床数据，我们预计0.5个单位(SD 0.4)的平均差异将具有临床意义，并且用α＝0.05和β＝1-0.8得出的估计表明，需要每组中10名患者以完成研究。为弥补退出者，每个组招募了12名参与者。

研究群体：

对35名年龄在至少18岁的一般健康的男性和女性进行了资格评估，并将24名受试者随机分为两个研究组(每组中n＝12)。纳入标准为：(1)年龄≥18岁的一般健康男性和女性；(2)能够阅读、签署和接收签署的知情同意书副本；和(3)有至少20颗天然牙齿。排除标准为：(1)临床上可见的活动性龋齿病变和/或牙周炎；(2)基于目视检查的显著口腔软组织病理学；(3)在使用口腔卫生产品(如牙膏、口腔清洗剂、口气薄荷糖、锭剂、或口香糖)或其成分后的过敏史或显著不良事件；(4)对测试产品中成分的过敏史；(5)对酶的过敏史；(6)自我报告为怀孕或哺乳期；(7)自我报告为严重的医疗病症；(8)筛查访视30天内使用抗生素或抗炎药；(9)正畸矫治器，包括固位器、口周/口腔穿孔或可摘局部义齿；以及(10)急性鼻窦炎或严重的口咽感染。我们从每名受试者那里收集了签署的同意书。通过计算机软件(www.randomization.com)辅助，将符合条件的参与者随机分配到测试组或安慰剂组。分配的隐藏性由不参与数据收集/分析的独立监督员保证，并且直到所有统计计算完成才被揭示。所有受试者均完成了研究。

干预：

干预期为7天(从第1天到第8天)。

在第0天、第1天(基线)和在干预期后，在记录所有指标并采集所有样品后，所有参与者接受由训练有素的牙医进行的专业牙齿清洁。

在第1天，向参与者提供含有安慰剂或实验性锭剂的管。参与者被指示每天三次服用一片锭剂，饭后至少30min，持续7天。参与者被告知将锭剂置于舌背部，并之后主动将其移动到口腔周围，使其缓慢溶解。在干预期间不允许进行正常的口腔卫生程序。指示参与者在第8天归还使用过的和(如果有)未使用的管。

菌斑和唾液取样

在第1天和第8天，收集1mL经刺激的唾液。在相同的时刻，通过用刮刀刮擦牙齿表面，从第三象限角的第一和第二磨牙之间的邻接空间收集菌斑。将样品立即转移到无菌塑料瓶中，冷冻至-80℃并冷冻保存，直到进行DNA提取和全基因组测序。将用Macherey-Nagel^TMNucleoSpin^TM土壤试剂盒进行DNA提取。使用通用引物对16S的V3-V4区进行PCR扩增，并使用Illumina MiSeq 300bp配对末端进行测序。分析后，生物材料将被销毁。

菌斑评估：

在干预的1、2和8天后，使用Turesky改良的奎格利-海因菌斑指数(Quigley-HeinPlaque Index(QHPI))(Quigley等人，JADA[美国牙科协会杂志],1962；65:26-29；Turesky等人，J.Periodontol.[牙周病学杂志],1970；41:41-43)评估了菌斑水平。

在第1天，在第一和第二象限角的第一门牙、第一前磨牙和第一磨牙的颊表面评估了Turesky改良的QHPI，以提供有关菌斑形成的个体水平的信息。对牙齿上的软生物膜进行评分，并且对每个表面给出从0到5的评分：评分0＝无可见菌斑；评分1＝牙齿颈部边缘的单独菌斑斑点；评分2＝在牙齿颈部边缘处的一条薄而连续的菌斑带(宽度达1mm)；评分3＝一条菌斑带，宽度超过1mm，但覆盖不到牙冠的三分之一；评分4＝覆盖牙冠的至少三分之一但不到三分之二的菌斑；和评分5＝覆盖牙冠的三分之二或更多的菌斑。此后，由训练有素的牙医清洁牙齿。

在第2天和第8天，在第一和第二象限角的第一门牙、第一前磨牙和第一磨牙的颊表面评估了改良的QHPI。

统计方法：

使用R软件进行统计分析。治疗组之间的年龄和性别差异分别通过曼-惠特尼(Mann-Whitney)U检验和费希尔(Fisher)精确检验(计数数据)来评估。为比较QHPI，计算了第1天、第2天和第8天的平均值。使用曼-惠特尼U检验评估在基线(第1天)时治疗组间的差异。为了估计治疗效果，分别计算了在第2天和第1天以及第8天和第1天的记录之间的差异。数据的正态分布和方差均匀性分别通过夏皮罗-威尔克(Shapiro-Wilk)检验、qq图和F检验进行评估。进行两个样品t检验以评估基线与第2天或第8天之间差异的治疗效果。此外，进行线性回归，其中以基线与第2天或第8天之间的差异作为因变量，并且以基线记录和治疗类型作为解释变量。显著性水平设置为α＝0.05。

唾液和菌斑取样和分析：

将所有样品在95℃下热灭活15min，随后根据制造商的方案，通过使用Macherey-Nagel^TMNucleoSpin^TM土壤试剂盒进行DNA提取。将200μl唾液或用于取样菌斑的牙签直接加入到珠管中。使用通用引物对16S的V3-V4区进行PCR扩增，并使用Illumina MiSeq 300bp配对末端进行测序。我们包括阴性对照样品(无材料/DNA)以及由已知模拟群体组成的阳性对照以验证分析。

唾液和菌斑样品的生物信息学和统计分析：

我们用USEARCH管线，使用如通过Larsen等人(Gut Microbes[肠道微生物],2021,13(1),1988836)中描述的相同设置，生成零半径操作分类单元(OTU；Edgar,Nat.Methods.[自然方法],2013；10:996-998)。用QIIME特征分类器classify-sklearn(Bolyen等人，Nat.Biotechnol.[自然生物技术]2019，第37卷，第852-857页)和人口腔微生物组数据库v15.22(Chen等人，2010)对独特的过滤扩增子进行分类学分类。将所有样品细化至2000个读数/样品。对于基线时唾液微生物组的整体组成，我们使用布雷-柯蒂斯(Bray-Curtis)度量(Bray和Curtis,Monographs[专论],1957；27:326-349)，将阿多尼斯·佩曼诺瓦(AdonisPermanova)检验应用到相异度矩阵上。为调查锭剂是否会随着时间的推移引起整体微生物组组成的变化，使用配对t检验对每个个体的基线和随访样品之间的布雷-柯蒂斯(Bray-Curtis)相异度进行了测试。我们建立了一个线性混合模型以测试漱口剂与安慰剂组相比从基线到随访时对微生物丰富度的影响。零假设是测试组在基线和随访之间的丰富度变化等于安慰剂组的变化。我们使用类似的模型来测试在超过32个样品中存在的所有OTU的显著变化，其中每个OTU计数都经过对数转换。我们根据Benjamini和Hochberg(J R Stat SocSeries[英国皇家统计学会系列],B.1995；57:289-300)校正了多重检验的所有p值。

结果

基线数据：

测试组的平均年龄为30.0岁，并且安慰剂组为29.7岁。测试组中的性别分布(n名女性/n名男性)为3/9，并且安慰剂组中的性别分布为7/5。在基线时，测试组和安慰剂组之间Turesky改良的QHPI没有差异。

临床结果：

与安慰剂组相比，对于测试组，第2天和基线之间的菌斑记录的差异显著降低(-0.82±0.74SD相比于-0.09±0.45SD；从每组中去除异常值后，p＝0.01)。

与安慰剂组相比，对于测试组，第8天和基线之间的菌斑记录的差异似乎略低，但差异没有统计学显著性(1.03±1.42SD相比于1.61±1.36SD；p＝0.39)。然而，检查者注意到在第8天测试组和安慰剂组之间的菌斑形态学具有很大差异。由检查员(训练有素的牙医)做出的目视检查表明，测试组中大多数受试者的菌斑薄(86％相比于14％)，而在安慰剂组中大多数受试者的菌斑厚(56％相比于44％)。重要的是，Turesky改良的QHPI没有考虑菌斑形态学的差异，与具有厚菌斑形态学的受试者相比，预计具有薄菌斑形态学的受试者的牙齿生物膜总量会更低。

微生物结果：

与治疗组相比，对于安慰剂组，观察到基线(第1天)和第8天之间的微生物丰富度增加更高。这对于菌斑样品具有统计学显著性(图5，p＝0.04)，并且对于唾液样品也观察到类似的趋势(图6，p＝0.12)。

结论

在7天时间段内，在健康个体中，每天三次使用含有组合物A的锭剂减少了牙齿生物膜量。在第2天(即治疗1天后)，下降具有统计学显著性，并且在第8天保持略低。第8天的目视检查显示，与安慰剂组相比，测试组中菌斑形态学是不同的。在不受理论约束的情况下，推测在测试组中观察到的薄菌斑形态学导致牙齿生物膜更容易受到机械性磨损。唾液和菌斑微生物组的分析显示，在第8天，与治疗组相比，安慰剂组的微生物丰富度的增加更高。

实例6：在暴露于组合物A后，人唾液生物膜的活/死Baclight^TM细菌生活力荧光测定

活/死Baclight^TM细菌活力试剂盒利用SYTO 9和碘化丙啶染色剂的混合物来定量区分含有混合范围的细菌类型的生物膜群体中的活细菌和死细菌。因此，具有完整细胞膜的细菌染成荧光绿色，而具有受损膜的细菌染成荧光红色。

生物膜去除测定

根据WO 2020/099490中描述的方法(有一些修改)，使用在96孔微量滴定板(黑色/透明底部板，ThermoFisher Scientific^TM265301)中生长的人唾液生物膜进行生物膜去除测定。简言之，将生长24h的含生物膜的样品用200μL柠檬酸盐磷酸盐缓冲液(pH 6)(McIlvaine缓冲液，通过混合12.63ml 0.2M Na₂HPO₄和7.37ml 0.1M柠檬酸来制备)处理作为对照，或用以下处理溶液：

-在McIlvaine缓冲液中的组合物A，pH 6

-氯己定0.2％(爱普特柯斯合作有限责任公司(Apotekernes A.m.b.a.)，Mileparken 20E，斯科夫伦德(Skovlunde)2740，丹麦)

-乙醇96％(VWR国际公司(VWR International))

-苯扎氯铵0.1％(烷基苄基二甲基氯化铵，CAS号63449-41-2，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))

-漱口剂(亚马逊公司(Amazon))

-Plax清凉薄荷漱口剂(高露洁棕榄公司(Colgate-Palmolive))

在37℃下，在搅动(50rpm)下，将样品孵育1min或5min。将对照和处理样品以8个重复/板进行处理。

处理后，将样品用200μL 0.9％ NaCl冲洗两次，并根据制造商的方案，用活/死Baclight^TM细菌活力试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，#L7012)染色。

染料的制备

对于一个96孔板，通过将30μL SYTO 9(3.34mM)和30μL碘化丙啶(20mM)溶解于10mL MilliQ水中来制备1:1混合物。将100μL染料溶液分配至每个孔，并在室温下于黑暗中将96孔板在搅动(50rpm)下孵育30分钟。将样品用0.9％ NaCl冲洗两次，并使用Tecanreader Infinite M1000 PRO进行荧光测量。

荧光强度测量

针对整个板的每个孔，对于SYTO 9，激发/发射为485/530(发射1，缩写为em1；绿色)，并且对于碘化丙啶，激发/发射为485/630(发射2，缩写为em2；红色)。

数据分析

将染色细菌在发射1(绿色)下的荧光强度(F_细胞)除以在发射2(红色)下的荧光强度，以获得活细胞相比于死细胞的比率(比率_G/R)：

比率_G/R＝F_细胞em1/F_细胞em2

绿色与红色荧光发射的比率与活细菌的相对数量成正比。表12中列出的数据表明，用组合物A进行处理产生的活:死比率与对照处理产生的活:死比率相似，并且高于在用多种可商购杀生物剂/防腐剂溶液(如氯己定、苯甲烃铵、乙醇)和漱口剂产品Solimo和Colgate Plax处理后获得的活:死比率。

活/死Baclight测定的这些结果清楚地表明，组合物A不影响从人唾液生长的生物膜中发现的细菌的活/死比率，并且这与用组合物A处理不会改变口腔微生物组的临床结果一致。

实例7：犬科多物种生物膜预防测定

在由犬科牙齿病原体组成的96孔微量滴定板上生长的多物种生物膜上测定了本发明组合物(包含DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶)的生物膜预防作用。

在由以下五种犬科牙病原体组成的多物种生物膜上对组合物进行了测试：动物口腔奈瑟氏球菌DSM21643、犬巴斯德菌DSM22968、莓实假单胞菌DSM3456、犬二氧化碳噬纤维菌DSM101831、和粪肠球菌DSM20478

将96孔微量滴定板(Nunclon Delta表面，赛默飞世尔科技公司#167008)填充75μl含有以上提及的五种菌株中每种菌株的1×10⁷个CFU/ml细菌接种物的Tripticase大豆肉汤(TSB)和在25mM HEPES缓冲液(pH 7)中的25μl酶溶液，以产生最终浓度为60ppm。对于对照样品，将酶溶液替换为25mM HEPES缓冲液(pH 7)。在微量需氧条件下，在ThermoFisherScientific^TMRectangular AnaeroBox^TM容器(ThermoFisher Scientific^TMAnaeroGen2.5L#AN0025A)中，在30℃下将板不摇动孵育24小时。将酶和对照样品进行了8次重复。

孵育后，通过用100μl 0.9％氯化钠进行两次温和洗涤来去除浮游细菌，并用0.095％结晶紫溶液在室温下对生物膜染色15min。将板用100μL 0.9％氯化钠冲洗两次，并且将附着的染料用96％乙醇和0.1％乙酸的水溶液溶解。用酶标仪SpectraMax M3(分子仪器公司(Molecular Devices))在600nm下测量吸光度。

对于数据处理，吸光度与酶或缓冲液处理后剩余生物膜的程度成正比。结果表示为生物膜预防的百分比并且如下计算：

100-((A600 nm酶处理的样品)/(A600 nm缓冲液对照处理的样品)x100)

其中A600 nm是指酶或缓冲液处理的样品在600nm处测量的八个吸光度的平均值。结果在下表13中列出：

结果表明，组合物A对犬科多物种生物膜的形成提供了82.9％预防作用。

本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明几个方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，本发明的各种修改因前述说明而对本领域的技术人员变得清楚。这样的修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

Claims

1.一种酶促口腔护理组合物，该酶促口腔护理组合物包含DNA酶、变聚糖酶、β-葡聚糖酶和至少一种口腔护理成分。

2.根据权利要求1所述的口腔护理组合物，其中该DNA酶是具有DNA酶活性并且与SEQID NO:1具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的多肽。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的口腔护理组合物，其中该变聚糖酶选自由以下组成的组：

4.根据权利要求1-3中任一项所述的口腔护理组合物，其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：

5.根据权利要求1-4中任一项所述的口腔组合物，

iii)其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：

6.根据权利要求1-5中任一项所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

iii)其中该β-葡聚糖酶包含SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:15和/或SEQ ID NO:16、基本上由其组成、或由其组成。

7.根据权利要求6所述的口腔护理组合物，

i)其中该DNA酶包含SEQ ID NO:1、基本上由其组成、或由其组成；

8.根据权利要求1-7中任一项所述的口腔护理组合物，其中在至少一种口腔护理成分存在下，该DNA酶、变聚糖酶、和β-葡聚糖酶中的至少一种(例如，至少两种或全部)具有相当或改善的化学稳定性，该至少一种口腔护理成分选自由以下组成的组：苯甲酸盐(优选苯甲酸钠)、EDTA、乙醇、甘油、磷酸盐(优选磷酸钠或磷酸钾)、氟化物(优选氟化钠、单氟磷酸钠、氟化钙、或氟化亚锡)、过氧化氢、和甘露醇。

9.根据权利要求8所述的口腔护理组合物，其中根据本文实例1确定化学稳定性；优选地，其中化学稳定性确定为在特定口腔护理成分存在下由热解折叠转变中点(Tm)定义的热稳定性。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的口腔护理组合物，其中与组合物B相比，该口腔护理组合物提供了改善的生物膜预防，如根据本文实例2所确定的。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈内部口腔护理组合物的形式；优选地呈牙膏或牙膏片、牙霜、漱口剂或漱口片、口腔清洗剂、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食、或糖果的形式；更优选地呈牙膏片、漱口片、锭剂、软锭剂、口香糖、甜食或糖果的形式；最优选地呈牙膏片、锭剂、或口香糖的形式。

12.根据权利要求1-10中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物呈外部口腔护理组合物的形式；优选地呈义齿清洗液、义齿清洗片剂、或义齿清洗粉末的形式。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用作药物。

14.根据权利要求1-12中任一项所述的口腔护理组合物，该口腔护理组合物用于治疗口腔疾病；优选地用于治疗牙周病和/或龋齿。

15.一种套装盒，该套装盒包括：

a)根据权利要求1-12中任一项所述的口腔护理组合物；以及

b)使用说明书。