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CN118496302B - 一种多肽色氨酸残基吲哚c2位膦酰化修饰的化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种多肽色氨酸残基吲哚c2位膦酰化修饰的化合物及其制备方法与应用 Download PDF

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CN118496302B
CN118496302B CN202410614709.4A CN202410614709A CN118496302B CN 118496302 B CN118496302 B CN 118496302B CN 202410614709 A CN202410614709 A CN 202410614709A CN 118496302 B CN118496302 B CN 118496302B
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Abstract

本发明提供了一种多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物及其制备方法与应用，属于有机合成技术领域。本发明提供的化合物的结构式为

Description

一种多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物及其制备 方法与应用
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域，特别涉及一种多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物及其制备方法与应用。
背景技术
近年来，随着生物技术与多肽合成技术日益成熟，多肽药物受到国内外药物研发人员的广泛关注。多肽药物同时兼具大分子蛋白药的特定细胞选择性及小分子药物的低成本特性，因其生物活性高、适应证广、用药剂量小、毒副作用低且疗效显著，已成为国内外新药研发的重要方向。目前已广泛应用于肿瘤、肝炎、糖尿病、艾滋病等疾病的预防、诊断和治疗，具有广阔的开发前景。然而，现有的一些多肽药物易于酶解而导致代谢稳定性差、半衰期短以及跨膜效率和口服利用度较低，严重制约了多肽药物的发展。氨基酸作为多肽最基本的构建单元，基于天然氨基酸的化学修饰是显著改善多肽药物的稳定性和成药性、丰富多肽分子的多样性的重要策略。
在基于天然氨基酸的化学修饰中，半胱氨酸和赖氨酸因其侧链巯基和氨基的强亲核性，常作为多肽及蛋白质化学修饰的理想位点。但由于亲核残基之间的竞争性，半胱氨酸和赖氨酸化学修饰时常伴随着多种副产物生成，化学选择性与专一性较差。色氨酸(Trp)，又称β-吲哚基丙氨酸，是最为稀有的编码氨基酸，尽管在真核生物中仅占比1.13％，然而几乎存在于所有的蛋白质序列中。由于具有独特的吲哚平面结构，色氨酸具有更多的修饰位点以及独特的化学反应活性和位点选择性，常作为后期精准修饰的特异性位点。近年来，随着合成化学的发展，尽管基于色氨酸残基的多肽及蛋白质化学修饰已经取得了长足的发展，包括基于色氨酸残基的芳基化(Angew.Chem.Int.Ed.2023,62,e202216661；Chem.Commun.2019,55,12928)、炔基化(Angew.Chem.Int.Ed.2017,56,3172)、烷基化(Org.Lett.2021,23,285)、糖基化(J.Am.Chem.Soc.2021,143,12699)等。但目前基于含杂原子(氮、氟、硫等)化学修饰策略的报道较少，尤其是基于多肽及蛋白质的膦酰化化学修饰报道非常少(J.Am.Chem.Soc.2020,142,9112；J.Am.Chem.Soc.2022,144,6227；J.Am.Chem.Soc.2018,140,1568；J.Am.Chem.Soc.2020,142,1180；Org.Lett.2020,22,1754；Chem.Commun.2021,57,3504)。且这些方法存在反应条件较苛刻、需金属催化剂、底物适用性较差等问题。另一方面，含磷取代的氨基酸是一类具有重要生物活性的非天然化合物，由于在氨基酸主链中引入一个四面体膦酸片段可以增加其酸性和空间体积，显著提高多肽的稳定性，从而显著调节多肽或蛋白质的生物活性，近年来在多肽药物化学中受到了广泛关注(Adv.Synth.Catal.2021,363,688；Curr.Org.Chem.2007,11,1635)。因此，发展绿色、温和的方法实现多肽色氨酸残基的膦酰化修饰，并将其应用于开发特定功能的多肽药物及研究化合物结构功能意义重大。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物及其制备方法与应用。本发明提供的制备方法以可见光作为反应能量来源，可以绿色、温和、精准的实现多肽色氨酸残基的膦酰化修饰。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种具有式Ⅰ所示结构的多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物：
其中，AAs表示氨基酸；R2＝R3＝苯氧基、卞氧基或烷氧基；P为五价。
优选地，所述R2＝R3＝烷氧基。
优选地，所述多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物选自C1-C13所示结构：
本发明还提供了上述技术方案所述多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物的制备方法，将化合物A、化合物B和光敏剂在溶剂中溶解后，置于400-460nm，优选为450-460nm的蓝光下照射室温反应，反应结束后，分离纯化，得到目标化合物；
所述化合物A为取代或未取代的色氨酸，或含有色氨酸残基的多肽，结构式为：
其中，AAs表示氨基酸；
所述化合物B为各种取代的亚磷酸酯，结构式为：
其中，所述R1＝R2＝R3＝苯氧基、卞氧基或烷氧基。
本发明提供的方法以可见光(蓝光)作为反应能量来源，通过可见光(蓝光)催化精准修饰色氨酸残基吲哚2位膦酰化，该方法可以用于开发特定功能的多肽药物并研究化合物结构功能。特别地，该方法可以用于修饰天然多肽王不留行的色氨酸残基C2位精准修饰，修饰后的王不留行类似物相比较于王不留行原料具有更好的人结肠癌细胞(HCT116)抑制活性。
优选地，当所述化合物A为取代或未取代的色氨酸时，化合物A为经甲基、乙酰基、叔丁氧羰基或卞氧羰基取代的色氨酸或未经取代的色氨酸；当化合物A为含有色氨酸残基的多肽时，所述多肽包括含有色氨酸残基的寡肽、含有色氨酸残基的生物活性肽、含有色氨酸残基的多肽药物，所述含有色氨酸残基的寡肽、含有色氨酸残基的生物活性肽和含有色氨酸残基的多肽药物都为具有乙酰基、叔丁氧羰基、叔丁基、9-芴基甲氧基羰基、苄氧羰基、甲酯中其中一种或两种保护基团N端和C端保护的多肽或者是多肽N端保护、C端裸露的多肽。
优选地，所述化合物A为王不留环肽A、王不留环肽B，或经甲基、乙酰基、叔丁氧羰基、卞氧羰基取代的色氨酸或未取代的色氨酸；
所述王不留环肽A的结构式为：
所述王不留环肽B的结构式为：
所述化合物B为亚磷酸三乙酯或亚磷酸三甲酯。
优选地，所述化合物A和化合物B的摩尔比为1:(2-10)。
优选地，所述光敏剂为9-均三甲基-10-甲基-10吖啶鎓高氯酸盐、3,6-二叔丁基-9-均三甲苯基-10-苯基吖啶-10鎓四氟硼酸盐、(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐或二[2-(2,4-二氟苯基)-5-三氟甲基吡啶][2-2-联吡啶]铱二(六氟磷酸)盐中的一种，光敏剂的负载量为2-10mol％。
优选地，所述溶剂为乙腈、二甲基亚砜、水、甲醇、四氢呋喃中的一种或两种混合溶剂。
优选地，所述反应气氛为空气氛围。
优选地，所述室温反应为采用循环水冷却使保持在室温。
优选地，所述反应时间为12-24h。
优选地，所述分离纯化为：依次进行洗涤、萃取、干燥、浓缩、通过柱层析或制备色谱分离纯化。
本发明还提供了一种抗肿瘤药物，原料包括上述技术方案所述的多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物。
有益技术效果：
1.本发明提供的制备方法是一种光催化多肽色氨酸残基精准膦酰化修饰的方法，其以可见光(蓝光)作为反应能量来源，具有便捷、操作简单、条件温和、绿色环保等优点。
2.本发明提供的方法具有高的化学反应选择性和专一性、产率高、底物适应性广。
3.本发明可用于多肽多样性修饰，可为特定功能多肽药物的开发以及化合物结构功能的研究提供理论基础。
4.本发明可以用于天然多肽王不留行的色氨酸残基C2位精准修饰，修饰后的王不留行类似物相比较于王不留行原料具有更好的人结肠癌细胞(HCT116)抑制活性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1所得目标产物的氢谱图；
图2为实施例1所得目标产物的碳谱图；
图3为实施例1所得目标产物的磷谱图；
图4为实施例2所得目标产物的氢谱图；
图5为实施例2所得目标产物的碳谱图；
图6为实施例2所得目标产物的磷谱图；
图7为实施例3所得目标产物的氢谱图；
图8为实施例3所得目标产物的碳谱图；
图9为实施例3所得目标产物的磷谱图；
图10为实施例4所得目标产物的氢谱图；
图11为实施例4所得目标产物的碳谱图；
图12为实施例4所得目标产物的磷谱图；
图13为实施例5所得目标产物的氢谱图；
图14为实施例5所得目标产物的碳谱图；
图15为实施例5所得目标产物的磷谱图；
图16为实施例6所得目标产物的氢谱图；
图17为实施例6所得目标产物的碳谱图；
图18为实施例6所得目标产物的磷谱图；
图19为实施例7所得目标产物的氢谱图；
图20为实施例7所得目标产物的碳谱图；
图21为实施例7所得目标产物的磷谱图；
图22为实施例8所得目标产物的氢谱图；
图23为实施例8所得目标产物的碳谱图；
图24为实施例8所得目标产物的磷谱图；
图25为实施例9所得目标产物的氢谱图；
图26为实施例9所得目标产物的碳谱图；
图27为实施例9所得目标产物的磷谱图；
图28为实施例10中多肽A9与其膦酰化三甲酯类似物C10对人结肠癌细胞(HCT116)的细胞存活率；
图29为实施例12中多肽A11与其膦酰化三甲酯类似物C12对人结肠癌细胞(HCT116)的细胞存活率。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。实施例中所用原料、试剂、仪器若无特殊说明，均可通过市售途径获得。
实施例1
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A1(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三乙酯B1(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A1原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C1，产率63％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.03(s,1H),7.86(d,J＝6.3Hz,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.42(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),4.71-4.62(m,1H),4.27-4.13(m,4H),3.72(s,3H),3.53-3.42(m,2H),1.93(s,3H),1.42-1.33(m,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.4,170.6,137.6,137.5,127.2,127.1,125.4,122.2,121.8,121.6,120.7,120.0,120.0,112.0,63.0,62.8,62.8,53.9,52.3,26.5,22.6,16.3,16.3,16.2,16.2.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ11.14.
实施例2
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A1(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A1原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C2，产率65％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.92(s,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.64(d,J＝6.6Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.32(t,J＝7.6Hz,1H),7.18(t,J＝7.5Hz,1H),4.71-4.64(m,1H),3.86-3.77(m,6H),3.70(s,3H),3.50-3.38(m,2H),1.92(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.4,170.5,137.7,137.6,127.3,125.6,122.5,122.3,120.8,120.0,118.6,112.0,112.0,53.8,53.1,53.1,53.0,52.9,52.3,26.7,22.7.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ14.2,14.1,14.0,13.9,13.9.
实施例3
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A2(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A2原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C3，产率56％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.85-8.64(m,1H),7.92(d,J＝6.6Hz,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(d,J＝8.2Hz,1H),7.32(q,J＝7.9Hz,2H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),4.70-4.61(m,1H),4.50-4.44(m,1H),3.89-3.83(m,3H),3.79(d,J＝11.6Hz,3H),3.70(s,3H),3.57-3.49(m,1H),3.42-3.33(m,1H),2.16-2.10(m,1H),1.90(s,3H),0.91-0.86(m,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.0,171.7,171.3,137.7,137.5,127.4,127.2,125.6,123.8,123.6,120.8,120.5,120.1,118.3,111.9,57.4,54.6,53.2,53.2,52.9,52.8,52.0,31.1,26.4,22.7,18.9,17.7.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ14.1,14.0,13.9.
实施例4
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A3(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A3原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C4，产率57％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.35-8.22(m,2H),7.82-7.79(m,1H),7.44-7.41(m,1H),7.27(dd,J＝8.3,6.9Hz,1H),7.14-7.10(m,1H),4.67-4.61(m,1H),4.50-4.44(m,1H),3.87(d,J＝11.4Hz,3H),3.80(d,J＝11.6Hz,3H),3.65(s,3H),3.52-3.47(m,1H),3.33-3.27(m,1H),1.83(s,3H),1.70-1.64(m,1H),1.62-1.57(m,2H),0.95-0.89(m,6H).13C NMR(100MHz,CD3OD)δ173.0,172.7,172.7,171.7,171.7,138.3,138.2,127.3,127.2,124.7,122.8,122.6,119.8,119.8,119.8,119.7,119.7,117.7,111.8,111.8,55.2,55.1,52.5,52.4,52.3,52.3,51.3,50.8,40.3,27.1,27.1,24.4,21.9,21.1,21.0,20.5.31PNMR(162MHz,CD3OD)δ14.9.
实施例5
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A4(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A4原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C5，产率47％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),7.86(d,J＝6.4Hz,1H),7.73(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.34-7.29(m,1H),7.20-7.15(m,1H),4.82-4.75(m,1H),4.65-4.55(m,1H),3.86(d,J＝11.2Hz,3H),3.80(d,J＝11.6Hz,3H),3.72(s,3H),3.65(s,3H),3.57-3.49(m,1H),3.42-3.34(m,1H),2.94-2.87(m,1H),2.76-2.68(m,1H),1.91(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.4,171.1,171.0,170.9,137.6,137.5,127.4,127.2,125.7,123.5,123.3,120.9,120.5,120.2,118.3,111.8,54.7,53.2,53.2,53.0,52.9,52.8,51.9,48.7,36.1,26.5,22.7.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ14.2,14.1,14.0.
实施例6
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A5(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A5原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C6，产率67％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.78(s,1H),7.95(d,J＝6.6Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(d,J＝9.0Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(t,J＝7.6Hz,1H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),4.68-4.61(m,1H),4.36(d,J＝9.0Hz,1H),3.86(d,J＝11.2Hz,3H),3.78(d,J＝11.6Hz,3H),3.69(s,3H),3.55-3.47(m,1H),3.41-3.33(m,1H),1.91(s,3H),0.95(s,9H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.5,171.4,171.3,137.6,137.5,127.3,127.2,125.6,123.7,123.5,120.8,120.5,120.1,118.3,111.9,60.5,54.4,53.3,53.2,52.9,52.8,51.7,34.5,26.5,26.1,22.7.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ14.2,14.1,14.1.
实施例7
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A6(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(5mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A6原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C7，产率54％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),7.81-7.65(m,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(t,J＝7.7Hz,1H),7.21-7.13(m,2H),7.04-6.98(m,2H),6.93-6.86(m,2H),4.75(q,J＝6.8Hz,1H),4.66-4.58(m,1H),3.87(d,J＝11.1Hz,3H),3.80(d,J＝11.5Hz,3H),3.66(s,3H),3.53-3.47(m,1H),3.38-3.30(m,1H),3.06-2.93(m,2H),1.88(s,3H),1.33(s,9H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ171.7,171.2,171.1,154.3,137.7,137.6,130.8,129.7,127.4,127.2,125.6,124.0,123.5,123.3,120.8,120.5,120.2,118.3,111.9,78.3,54.6,53.6,53.2,53.2,52.9,52.9,52.1,37.4,28.8,26.5,22.7.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ14.1,14.1,14.0.
实施例8
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A7(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三乙酯B1(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A7原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C8，产率55％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.67(s,1H),7.95(d,J＝6.3Hz,1H),7.71(d,J＝8.1Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.33(d,J＝7.2Hz,1H),7.28-7.15(m,4H),7.12(d,J＝6.7Hz,2H),4.82(q,J＝6.8Hz,1H),4.62-4.55(m,1H),4.28-4.09(m,4H),3.71(s,3H),3.53(d,J＝14.5Hz,1H),3.39-3.31(m,1H),3.16-3.10(m,1H),3.05-2.99(m,1H),1.85(s,3H),1.42(t,J＝7.1Hz,3H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.7,171.3,171.3,137.5,137.4,136.1,129.3,128.4,127.4,127.2,126.9,125.5,123.0,122.8,121.9,120.8,120.1,119.7,111.8,63-0,62.9,62.8,62.8,54.5,53.4,52.2,37.9,26.0,22.6,16.4,16.4,16.3,16.2.31PNMR(162MHz,CDCl3)δ11.2,11.1,11.1.
实施例9
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入色氨酸A8(1.0eq.，0.2mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续12小时，待保护色氨酸A8原料消耗完毕，洗涤、萃取、干燥、浓缩、柱层析分离，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C9，产率46％。
所得产物的结构式及产物表征数据如下所示：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.95(s,1H),8.13-8.04(m,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.32(t,J＝7.6Hz,1H),7.20-7.16(m,1H),6.93-6.86(m,1H),5.08(d,J＝7.6Hz,1H),4.67-4.61(m,1H),4.48-4.42(m,1H),3.87(d,J＝11.3Hz,3H),3.77(d,J＝11.6Hz,3H),3.72(s,3H),3.53-3.42(m,2H),1.44-1.42(m,3H),1.38-1.35(m,9H),1.28-1.26(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.5,172.2,171.9,155.3,137.9,137.7,127.1,126.9,125.4,121.9,121.7,120.6,119.7,118.6,112.2,79.8,53.7,53.3,53.2,53.1,53.1,52.3,48.5,28.2,28.2,28.1,26.6,19.0,18.5.31P NMR(162MHz,CDCl3)δ14.1,14.0,14.0,13.9,13.8.
实施例10
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入王不留环肽A(A9)(1.0eq.，0.02mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，0.1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.0006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待王不留环肽A(A9)原料消耗完毕，初产物直接经制备HPLC纯化，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C10，产物分子式为C33H48N7O9P，产率50％。
所得产物的结构式及产物质谱实验数据如下所示：
HRMS-ESI(m/z):calcd for[M+H]+C33H49N7O9P+:718.3324；found:718.3332.
实施例11
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入王不留环肽A(A10)(1.0eq.，0.02mmol)和亚磷酸三乙酯B1(5eq.，0.1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.0006mmol)，加入溶剂乙腈(1ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待王不留环肽A(A10)原料消耗完毕，初产物直接经制备HPLC分离纯化，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C11，产物分子式为C35H52N7O9P，产率51％。
所得产物的结构式及产物质谱实验数据如下图所示：
HRMS-ESI(m/z):calcd for[M+H]+C35H53N7O9P+:746.3637；found:746.3627.
实施例12
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入王不留环肽B(A11)(1.0eq.，0.02mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，0.1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.0006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待保护色氨酸A11原料消耗完毕，初产物直接经HPLC分离纯化，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C12，产物结构式为C26H37N6O8P，产率48％。
所得产物的结构式及产物质谱实验数据如下图所示：
HRMS-ESI(m/z):calcd for[M+H]+C26H38N6O8P+:593.2483；found:593.2489.
实施例13
向干燥的带有搅拌磁子的玻璃试管内依次加入多肽A12(1.0eq.，0.02mmol)和亚磷酸三甲酯B2(5eq.，0.1mmol)，加入光敏剂(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐(3mol％，0.0006mmol)，加入溶剂乙腈(2ml)溶解后，空气氛围下置于450-460nm的蓝光下照射，采用循环水冷却使保持在室温，反应持续18小时，待多肽A12原料消耗完毕，经过HPLC分离纯化，得到目标产物吲哚C-2位膦酰化修饰产物C13，产物结构式为C42H52N5O10P，产率53％。
所得产物的结构式及产物质谱实验数据如下所示：
HRMS-ESI(m/z):calcd for[M+H]+C42H53N5O10P+:818.3525；found:818.3521.
实施例14
本发明天然肽膦酰化修饰衍生物体外抗肿瘤实验
1实验方法：
1.1细胞培养
HCT116细胞培养于含10％FBS(Fetal bovine serum)和1％Penicillin-Streptomcin青链霉双抗的RPMI Medium 1640basic(Roswell Park Memorial Institute)培养基中(含(L)-谷氨酰胺(L-Glutamine))，于37℃、5％CO2、饱和湿度下培养，取对数生长期细胞用于实验。
1.2CCK8比色法检测药物对细胞活力的影响
(1)收集对数生长期的细胞，1000转离心3分钟，弃掉旧培养基，加适量新鲜培养基进行细胞计数。
(2)将细胞浓度均调整为5x104/mL接种于96孔板中，每孔100μl，则为5000个细胞每孔。
(3)将96孔板于37℃、5％CO2、饱和湿度下培养24h。
(4)将药物配成600μM、300μM、150μM、18.75μM四个浓度，分别加入100μl至实验孔中，使孔内浓度成300μM、150μM、75μM、18.75μM；对照孔和空白孔加入100μl培养基。
(5)将细胞培养于37℃、5％CO2、饱和湿度下培养24h；培养结束后每孔加入10μlCCK-8(Cell Counting Kit-8)，培养1.5-2小时后，用酶标仪检测450nm的光吸收值。
(6)根据下面公式计算药物的抑制率：抑制率＝(OD实验－OD空白)/OD对照*100％。As：OD实验：实验组(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)，OD空白：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)，OD对照：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)。
2天然多肽膦酰化修饰衍生物体外抗肿瘤实验结果见图28、29所示，可以看出，经本发明膦酰化修饰后的天然多肽类似物极大地提高了其对HCT116细胞的抑制活性。
本发明还验证了实施例1-9、实施例11、实施例13中天然多肽膦酰化修饰衍生物(即目标产物)体外抗肿瘤实验，结果表明，经本发明膦酰化修饰后的天然多肽类似物极大地提高了其对HCT116细胞的抑制活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物，其特征在于，结构式如下所示：
。
2.一种权利要求1所述多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物的制备方法，其特征在于，将化合物A、化合物B和光敏剂在溶剂中溶解后，置于400-460nm的蓝光下照射室温反应，反应结束后，分离纯化，得到目标化合物；
所述化合物A的结构式为：；
所述化合物B的结构式为：。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物A和化合物B的摩尔比为1:(2-10)。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述光敏剂为9-均三甲基-10-甲基-10吖啶鎓高氯酸盐、3,6-二叔丁基-9-均三甲苯基-10-苯基吖啶-10鎓四氟硼酸盐、(4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶)双[(2-吡啶基)苯基]铱(III)六氟磷酸盐或二[2-(2,4-二氟苯基)-5-三氟甲基吡啶][2-2-联吡啶]铱二(六氟磷酸)盐中的一种，光敏剂的负载量为2-10mol％。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为乙腈、二甲基亚砜、水、甲醇、四氢呋喃中的一种或两种混合溶剂。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应的气氛为空气氛围。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应的时间为12-24h。
8.一种抗肿瘤药物，其特征在于，原料包括权利要求1所述多肽色氨酸残基吲哚C2位膦酰化修饰的化合物。
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