CN118028217A - 一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 - Google Patents
一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118028217A CN118028217A CN202410230257.XA CN202410230257A CN118028217A CN 118028217 A CN118028217 A CN 118028217A CN 202410230257 A CN202410230257 A CN 202410230257A CN 118028217 A CN118028217 A CN 118028217A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- epithelial cells
- tubular epithelial
- renal tubular
- culture medium
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004926 tubular epithelial cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 127
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 98
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 74
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 18
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims abstract description 18
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 12
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims description 11
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims description 11
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 claims 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 abstract description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 abstract 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 39
- 239000000306 component Substances 0.000 description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 5
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000000885 nephron Anatomy 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- 208000027205 Congenital disease Diseases 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 1
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000000913 Kidney Calculi Diseases 0.000 description 1
- 206010023421 Kidney fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029148 Nephrolithiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 229940039009 isoproterenol Drugs 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000009103 reabsorption Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
- C12N5/0686—Kidney cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2317—Interleukin-17 (IL-17)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/305—Growth hormone [GH], aka. somatotropin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用，肾小管上皮细胞完全培养基包括无血清基础培养基、占所述无血清基础培养基5～10％(v/v)的胎牛血清、1～10μg/mL生长素、1～2μg/mL几丁聚糖、10～20ng/mL表皮生长因子、10～20ng/mL白介素‑17细胞因子以及10～20ng/mL霍乱毒素。本发明的肾小管上皮细胞完全培养基能显著提升肾小管上皮细胞的增殖能力，并有效维持细胞的形态和性状，培养至P3代时，细胞仍能生长旺盛且细胞纯度可达90％以上，同时该完全培养基的各个组分容易获得，配制方便，因此可开发为商业化产品。
Description
技术领域
本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种肾小管上皮细胞完全培养基及其在肾小管上皮细胞体外培养中的应用。
背景技术
肾小管上皮细胞作为研究急性肾损伤、慢性肾病、糖尿病肾病、肾间质纤维化和肾结石等多种肾疾病的重要载体和工具细胞，是构成肾小管间质的主要细胞之一，同时也是肾单位的另一个重要组成部分，与肾小球一起构成完整的功能肾单位，其功能有：重吸收；分泌、排泄；调节水、电解质平衡；调节酸碱平衡等。肾小管上皮细胞不仅与肾小管的病理、生理过程相关，而且是许多先天性疾病、代谢性疾病和炎症的主要损伤部位。
肾小管上皮细胞体外培养对于培养基营养要求较高，而提高生长速度、增加传代次数和维持传代后细胞性状对于利用肾小管上皮细胞在体外研究多种疾病的显得尤其重要。专利申请CN 111593016A公开了一种人肾上皮细胞分离与培养方法，其培养基成分为：5mL 100×双抗、10～20ng/ml人重组EGF、5～10ng/ml白介素-6、15～20％胎牛血清、余量为DMEM/F12。专利US4456687A公开了霍乱毒素、甲基异丁基黄嘌呤、异丙肾上腺素有效促进生长量能够增加细胞环AMP和细胞增殖。但是，市场上未见基于上述专利开发的商业化产品，实际培养效果尚不确定。
目前市场上比较成熟的上皮细胞培养基主要为Sciencell的EPICM培养基，上述培养基在体外培养上皮细胞有相对不错的效果，但其配方保密、价格昂贵，而且发明人发现该培养基并不适用于肾小管上皮细胞的培养，当传代至P3代时，细胞形态就已经出现了明显改变且细胞纯度明显降低。因此，开发效果明确、成本低的肾小管上皮细胞专用培养基，成为深入研究和应用肾小管上皮细胞的必要前提，对于利用肾小管上皮细胞体外研究多种疾病显得尤其重要。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提供一种适用于肾小管上皮细胞的培养基，将其用于培养肾小管上皮细胞时，能够有效提高肾小管上皮细胞的增殖和传代能力。
为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：
本发明第一方面提供了一种肾小管上皮细胞完全培养基，该完全培养基包括：无血清基础培养基，占无血清基础培养基5～10v/v％的胎牛血清(FBS)，1～10μg/mL生长素，1～2μg/mL几丁聚糖，10～20ng/mL表皮生长因子，10～20ng/mL白介素-17细胞因子以及10～20ng/mL霍乱毒素。
在本发明的肾小管上皮细胞完全培养基中，无血清培养基可以选自DMEM/F12、DMEM、1640等。在本发明的一些具体实施例中，无血清培养基为DMEM/F12。
在本发明的一个实施例中，肾小管上皮细胞完全培养基包括：无血清基础培养基、占无血清基础培养基5％体积的胎牛血清、5μg/mL生长素、1.5μg/mL几丁聚糖、13ng/mL表皮生长因子、15ng/mL白介素-17细胞因子和13ng/mL霍乱毒素。
本发明的实验数据显示，完全培养基中的生长素、几丁聚糖、表皮生长因子、白介素-17细胞因子和霍乱毒素等组分间存在协同作用，在合理的浓度和配比条件下，能够有效提高肾小管上皮细胞的增殖能力，并有效维持细胞的形态和性状，抑制杂细胞生长；使用该完全培养基培养肾小管上皮细胞至P3代时，细胞依然生长旺盛，细胞纯度可达到90％以上。
本发明的第二方面提供了一种制备上述肾小管上皮细胞完全培养基的方法，包括以下步骤：
称取生长素0.25g溶于5mL无水乙醇，得到试剂1；称取几丁聚糖0.01g溶于1％乙酸10mL，得到试剂2；采用无菌注射器和无菌0.22μm滤膜对试剂1和试剂2进行过滤除菌；
将50μg表皮生长因子溶于1mL无菌纯化水，得到试剂3；将50μg白介素-17细胞因子溶于1mL无菌纯化水，得到试剂4；将50μg霍乱毒素溶于1mL无菌纯化水，得到试剂5；
根据肾小管上皮细胞完全培养基的成分，取适量的试剂1、试剂2、试剂3、试剂4、试剂5以及FBS和无血清基础培养基混合均匀，即得。
本发明第三方面提供了上述肾小管上皮细胞完全培养基的应用，至少为以下任一：
a)在肾小管上皮细胞体外培养中的应用；
b)在提高肾小管上皮细胞的增殖和传代能力中的应用。
本发明第四方面提供了一种肾小管上皮细胞体外培养的方法，该方法采用本发明的肾小管上皮细胞完全培养基对肾小管上皮细胞进行体外培养。
进一步地，在肾小管上皮细胞体外培养的方法中，具体包括以下步骤：
S1、将肾小管上皮细胞加入肾小管上皮细胞完全培养基中，培养得到P1代细胞；
S2、待细胞融合度达到70％～90％时，处理得到消化后的细胞，将消化后的细胞接种至肾小管上皮细胞完全培养基中，培养得到P2代细胞；
S3、重复步骤S2对肾小管上皮细胞进行传代培养和扩增。
更进一步地，在肾小管上皮细胞体外培养的方法中，步骤S2所述处理的过程为：用洗涤液洗涤后，加入消化试剂进行消化，再用肾小管上皮细胞完全培养基终止消化。在本发明的一些具体实施例中，洗涤液为PBS缓冲液，消化试剂为含0.04％(w/v)EDTA的0.25％(w/v)胰蛋白酶液。
进一步地，在肾小管上皮细胞体外培养的方法中，培养的条件包括：培养温度为37℃，CO2浓度为5％(v/v)。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明基于肾小管上皮细胞的特性，针对性地开发了一种适用于肾小管上皮细胞的完全培养基，该完全培养基能有效提高肾小管上皮细胞的增殖能力，并有效维持细胞的形态和性状，抑制杂细胞生长；使用该完全培养基培养肾小管上皮细胞至P3代时，细胞依然生长旺盛，细胞纯度可达到90％以上。而且，该完全培养基的各个组分容易获得，配制方便，大幅度降低了培养肾小管上皮细胞的成本。
附图说明
图1为本发明不同培养基条件下肾小管上皮细胞的细胞形态图。
图2为本发明的肾小管上皮细胞完全培养基与EPICM培养基对肾小管上皮细胞多次传代培养后的细胞形态图。
图3为本发明不同培养基条件下肾小管上皮细胞的生长曲线图。
图4为本发明的肾小管上皮细胞完全培养基与EPICM培养基对肾小管上皮细胞多次传代培养后的细胞荧光染色图。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而非限制本发明。
除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与本领域技术人员通常理解的含义相同；本发明的说明书和权利要求书中的术语“包括”以及它的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。
以下实施例所用FBS购自武汉普诺赛生命科技有限公司(货号164210)，所用原代大鼠肾小管上皮细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司(货号CP-R062)，所用EPICM(Epithelial Cell Medium)培养基购买自Sciencell公司(货号4101)。
以下实施例中未注明具体技术或条件的，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件或按照产品说明书进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
本例提供的肾小管上皮细胞完全培养基包括以下成分及含量：
2.5mg生长素、0.75mg几丁聚糖、6.5μg表皮生长因子、7.5μg白介素-17细胞因子、6.5μg霍乱毒素、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。
称取生长素0.25g溶于5mL无水乙醇，得到试剂1；称取几丁聚糖0.01g溶于1％乙酸10mL，得到试剂2；采用无菌注射器和无菌0.22μm滤膜对试剂1和试剂2进行过滤除菌；将50μg表皮生长因子溶于1mL无菌纯化水，得到试剂3；将50μg白介素-17细胞因子溶于1mL无菌纯化水，得到试剂4；将50μg霍乱毒素溶于1mL无菌纯化水，得到试剂5；取50μL试剂1、0.75mL试剂2、130μL试剂3、150μL试剂4、130μL试剂5、25mL FBS和无血清基础培养基475mL混合均匀，用0.2μm PVDF(聚偏二氟乙烯)滤膜过滤除菌，即可得到肾小管上皮细胞完全培养基。
实施例2
本例提供的肾小管上皮细胞完全培养基包括以下成分及含量：
5mg生长素、0.5mg几丁聚糖、10μg表皮生长因子、10μg白介素-17细胞因子、10μg霍乱毒素、45mL胎牛血清和455mL DMEM基础培养基。
肾小管上皮细胞完全培养基的制备方法参照实施例1。
实施例3
本例提供的肾小管上皮细胞完全培养基包括以下成分及含量：
0.5mg生长素、1mg几丁聚糖、5μg表皮生长因子、5μg白介素-17细胞因子、5μg霍乱毒素、25mL胎牛血清和475mL 1640基础培养基。
肾小管上皮细胞完全培养基的制备方法参照实施例1。
实施例4
本例提供的肾小管上皮细胞完全培养基包括以下成分及含量：
3mg生长素、0.55mg几丁聚糖、7.5μg表皮生长因子、7.5μg白介素-17细胞因子、7.5μg霍乱毒素、25mL胎牛血清和475mL DMEM基础培养基。
肾小管上皮细胞完全培养基的制备方法参照实施例1。
实施例5
采用实施例1-4提供的肾小管上皮细胞完全培养基对肾小管上皮细胞进行体外培养，并检测各完全培养基对肾小管上皮细胞的细胞形态和增殖效果的影响。
1、细胞形态的检测，包括以下步骤：
(1)将原代大鼠肾小管上皮细胞离心后加入5mL肾小管上皮细胞完全培养基中混悬均匀，然后接入6cm培养皿中，放入37℃、含5％(v/v)CO2的培养箱中培养，所得细胞记为P1代。
(2)待细胞融合度达到90％时，弃去上清液，用PBS缓冲液清洗2次，加入含有0.04％(w/v)EDTA的0.25％(w/v)胰蛋白酶消化，胰蛋白酶加入量为1mL/6cm培养皿，待细胞脱落后，加入肾小管上皮细胞完全培养基终止消化，肾小管上皮细胞完全培养基的体积为胰蛋白酶体积的5倍。
(3)将消化下的细胞以1000prm的速度离心5min，弃去上清液，将细胞按照3×105个/mL的密度用肾小管上皮细胞完全培养基重悬，按每孔1mL的量将细胞悬液接种到6孔板中放入37℃、含5％(v/v)CO2的培养箱中培养，培养48h后，在倒置显微镜下观察细胞形态。
(4)重复步骤(2)、(3)，将细胞进行常规传代培养。
2、增殖效果的检测，包括以下步骤：
(1)将原代大鼠肾小管上皮细胞离心后加入5mL肾小管上皮细胞完全培养基中混悬均匀，然后接入6cm培养皿中，放入37℃、含5％(v/v)CO2的培养箱中培养，所得细胞记为P1代。
(2)待P1代细胞融合度达到90％时，弃去上清液，用PBS缓冲液清洗2次，加入含有0.04％(w/v)EDTA的0.25％(w/v)胰蛋白酶消化，胰蛋白酶加入量为1mL/6cm培养皿，待细胞脱落后，加入肾小管上皮细胞完全培养基终止消化，肾小管上皮细胞完全培养基的体积为胰蛋白酶体积的5倍。
(3)将消化下的细胞以1000prm的速度离心5min，弃去上清液，将细胞按照3×105个/mL的密度用肾小管上皮细胞完全培养基重悬，按每孔0.1mL的量将细胞悬液接种到96孔板中放入37℃、含5％(v/v)CO2的培养箱中培养，每2天进行一次换液。
(4)在培养的第1、2、3、4、5、6、7天，用CCK8试剂盒测定肾小管细胞的增殖效果，操作方法按照试剂盒的说明书进行。
对比例1
与实施例5不同的是，本例采用EPICM培养基对肾小管上皮细胞进行体外培养。
对比例2
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：0.1mg生长素、0.1mg几丁聚糖、4μg表皮生长因子、15μg白介素-17细胞因子、4μg霍乱毒素、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。且该培养基的制备方法参照实施例1。
相比于实施例1的完全培养基，本例培养基中的生长素、几丁聚糖、表皮生长因子、白介素-17细胞因子和霍乱毒素的含量不在本发明限定范围内。
对比例3
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：2.5mg生长素、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基除了基础培养基外，只含有FBS和生长素。
对比例4
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：0.75mg几丁聚糖、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基除了基础培养基外，只含有FBS和几丁聚糖。
对比例5
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：6.5μg表皮生长因子、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基除了基础培养基外，只含有FBS和表皮生长因子。
对比例6
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：7.5μg白介素-17细胞因子、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基除了基础培养基外，只含有FBS和白介素-17细胞因子。
对比例7
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：6.5μg霍乱毒素、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基除了基础培养基外，只含有FBS和霍乱毒素。
对比例8
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：2.5mg生长素、0.75mg几丁聚糖、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基不含表皮生长因子、白介素-17细胞因子、霍乱毒素。
对比例9
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：2.5mg生长素、0.75mg几丁聚糖、6.5μg表皮生长因子、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基不含白介素-17细胞因子、霍乱毒素。
对比例10
与实施例5不同的是，本例对肾小管上皮细胞进行体外培养所用的培养基包括以下成分：2.5mg生长素、0.75mg几丁聚糖、6.5μg表皮生长因子、7.5μg白介素-17细胞因子、25mL胎牛血清和475mL DMEM/F12基础培养基。该培养基的制备方法参照实施例1。与实施例1的完全培养基相比，本例培养基不含霍乱毒素。
根据实施例5的培养方法，分别采用实施例1～4中的完全培养基以及对比例1～10中的培养基培养肾小管上皮细胞48h后，细胞形态具体如图1所示(a～n依次对应实施例1、实施例2、实施例3、实施例4以及对比例1、对比例2、对比例3、对比例4、对比例5、对比例6、对比例7、对比例8、对比例9、对比例10)。从图1可以看出，对比例1和实施例1～4中的细胞形态呈卵型、铺路石状，为典型的上皮细胞形态；对比例3、对比例4、对比例5、对比例6、对比例7、对比例8、对比例9、对比例10细胞形态虽正常，但细胞量较少；对比例2中的细胞形态发生了明显改变。以上结果表明，本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基用于培养肾小管上皮细胞时，能够很好的维持肾小管上皮细胞形态和生长速度，与对比例1EPICM培养基相比，无明显差异，而改变本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基中主要成分组成和配比，肾小管上皮细胞将不能维持正常形态和生长速度。
图2为分别采用实施例1的完全培养基和对比例1的EPICM培养基对培养肾小管上皮细胞多次创带培养后的细胞形态图。从图2可以看出，使用本发明的完全培养基培养肾小管上皮细胞，到P3代细胞仍维持正常形态和生长速度，而使用EPICM培养基，到P3代细胞形态已经出现明显改变，杂细胞增多。
根据实施例5的培养方法，分别采用实施例1～4中的完全培养基以及对比例1～10中的培养基培养肾小管上皮细胞后，细胞生长曲线如图3所示。从图3可以看出，使用本发明的完全培养基培养肾小管上皮细胞时，细胞生长旺盛，增殖速度较快，达到平台期后，能维持较多数量的细胞生存，且各实施例无显著差异；使用对比例2～10中的培养基培养肾小管上皮细胞时，不仅细胞增殖速度低于各实施例，而且达到平台期后的细胞总量也少于各实施例；在各对比例中，对比例3～12的繁殖速度也明显低于对比例2，且达到平台期后的细胞总量也更少；使用对比例1中的EPICM培养基培养肾小管上皮细胞时，生长曲线前2天细胞增殖速度与各实施例无显著差异，但是随着时间延长细胞增殖速度和最大细胞数量明显低于与各实施例。以上结果表明，本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基用于培养肾小管上皮细胞时，能够有效提升肾小管上皮细胞增殖速度，并能维持较多数量的细胞生存，而改变本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基中主要成分组成和配比，将导致肾小管上皮细胞增殖速度下降，获得的细胞总量减少。
另外，以EPICM培养基为对照，采用免疫荧光法对本发明肾小管上皮细胞完全培养基(实施例1)培养获得的肾小管上皮细胞进行了纯度鉴定，具体步骤如下：
①将多聚赖氨酸包被的爬片置于6孔板中，随后将肾小管上皮细胞以300000个/孔的量接种，培养2天后，吸出培养基，加1mL PBS，从孔板边缘缓慢加入，10s左右吸出PBS；加入4％(v/v)的多聚甲醛500μL，室温固定15min，避光。吸走多聚甲醛，加入1mL的PBS清洗1次后，重新加入1mL的PBS浸泡爬片。
②6孔板里加入1mL 0.5％(v/v)Triton X-100覆盖细胞固定20min。吸弃TritonX-100，加入1mL预冷的PBS清洗三遍，每次3min。
③将爬片转移至载玻片上，载玻片置于黑色盒中避光保存。每张爬片上滴加50μL10％(v/v)山羊血清(购自武汉博士德生物工程有限公司，货号AR1009)封闭，室温下孵育30min。封闭结束后，用镊子夹出爬片，从侧面吸干血清，重新放置在载玻片上。
④加入50μL CK18一抗(购自Proteintech，货号10830-1-AP)，4℃冰箱孵育过夜(约16h)，置于黑色盒中避光存放。孵育完成后，将爬片夹至6孔板，用PBS清洗3次，浸泡3min，过程注意避光操作，随后将爬片重新转移至黑色盒中的载玻片上。
⑤加入50μL二抗(购自武汉博士德生物工程有限公司，货号BA1032)，避光37℃孵育1h。二抗孵育结束后，将爬片夹至6孔板，用PBS清洗3次，浸泡3min，过程注意避光操作，随后将爬片重新转移至黑色盒中的载玻片上。
⑥加入50μL DAPI滴加(购自Elabscience，货号E-IR-R103)，室温避光染色5min。DAPI染色结束后，将爬片夹至6孔板，用PBS清洗3次，浸泡3min，过程注意避光操作，随后将爬片重新转移至黑色盒中的载玻片上。
⑦载玻片上滴加10ul抗荧淬灭封片剂(购自SouthernBiotech，货号0100-01)进行封片。
⑧用荧光显微镜拍照观察，计算免疫荧光阳性细胞(显红色)数，其占总有核细胞(显蓝色)的百分比，即为肾小管上皮细胞纯度。
肾小管上皮细胞纯度的检测结果如图4所示。从图4可以看出，使用本发明的完全培养基培养肾小管上皮细胞时，各代细胞纯度较高，到P3代仍维持90％以上的细胞纯度；使用EPICM培养基时，到P3代细胞纯度出现显著下降。表明，本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基在肾小管上皮细胞多次传代培养中，可以更好的保持肾小管上皮细胞纯度。
综上所述，本发明提供的肾小管上皮细胞完全培养基可以显著提升肾小管上皮细胞的增殖能力，并有效维持细胞的形态和性状，抑制杂细胞生长，对肾小管上皮细胞的体外培养和研究具有重要意义，而且组分简单易得，配制方便，有利于开发成商业化产品。
需要说明的是，以上实施例仅是本发明一部分实施例而不是全部的实施例，仅用以说明本发明的技术方案而非限制；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种肾小管上皮细胞完全培养基，其特征在于，包括：无血清基础培养基，占所述无血清基础培养基5～10％(v/v)的胎牛血清，1～10μg/mL生长素，1～2μg/mL几丁聚糖，10～20ng/mL表皮生长因子，10～20ng/mL白介素-17细胞因子以及10～20ng/mL霍乱毒素。
2.根据权利要求1所述的肾小管上皮细胞完全培养基，其特征在于，所述无血清基础培养基为DMEM/F12培养基。
3.权利要求1或2所述的肾小管上皮细胞完全培养基在肾小管上皮细胞体外培养中的应用。
4.权利要求1或2所述的肾小管上皮细胞完全培养基在提高肾小管上皮细胞的增殖和传代能力中的应用。
5.一种肾小管上皮细胞体外培养的方法，其特征在于，使用权利要求1或2所述的肾小管上皮细胞完全培养基培养肾小管上皮细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将肾小管上皮细胞加入肾小管上皮细胞完全培养基中，培养得到P1代细胞；
S2、待细胞融合度达到70％～90％时，处理得到消化后的细胞，将消化后的细胞接种至肾小管上皮细胞完全培养基中，培养得到P2代细胞；
S3、重复步骤S2对肾小管上皮细胞进行传代培养和扩增。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤S2所述处理的过程为：用洗涤液洗涤后，加入消化试剂进行消化，再用肾小管上皮细胞完全培养基终止消化。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述洗涤液为PBS缓冲液。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述消化试剂为含0.04％(w/v)EDTA的0.25％(w/v)胰蛋白酶液。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养的条件包括：培养温度为37℃，CO2浓度为5％(v/v)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410230257.XA CN118028217B (zh) | 2024-02-29 | 2024-02-29 | 一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410230257.XA CN118028217B (zh) | 2024-02-29 | 2024-02-29 | 一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118028217A true CN118028217A (zh) | 2024-05-14 |
| CN118028217B CN118028217B (zh) | 2024-12-27 |
Family
ID=90987424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410230257.XA Active CN118028217B (zh) | 2024-02-29 | 2024-02-29 | 一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118028217B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201416097A (zh) * | 2012-10-26 | 2014-05-01 | Univ Nat Taiwan | 植入體以及製造其之方法 |
| CN109022350A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-18 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种提取及培养小鼠高纯度原代肾小管上皮细胞的方法及培养基 |
| CN111593016A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-08-28 | 北京昱龙盛世生物科技有限公司 | 一种人肾上皮细胞分离与培养方法 |
| CN116948945A (zh) * | 2023-07-13 | 2023-10-27 | 中国人民解放军西部战区总医院 | 一种肾小管上皮原代细胞的提取方法及其应用 |
-
2024
- 2024-02-29 CN CN202410230257.XA patent/CN118028217B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW201416097A (zh) * | 2012-10-26 | 2014-05-01 | Univ Nat Taiwan | 植入體以及製造其之方法 |
| CN109022350A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-18 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种提取及培养小鼠高纯度原代肾小管上皮细胞的方法及培养基 |
| CN111593016A (zh) * | 2020-07-27 | 2020-08-28 | 北京昱龙盛世生物科技有限公司 | 一种人肾上皮细胞分离与培养方法 |
| CN116948945A (zh) * | 2023-07-13 | 2023-10-27 | 中国人民解放军西部战区总医院 | 一种肾小管上皮原代细胞的提取方法及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GANG CHEN等: "Structural features and bioactivities of the chitosan", 《INT J BIOL MACROMOL》, vol. 49, no. 4, 15 June 2011 (2011-06-15), pages 543 - 547, XP028282252, DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2011.06.009 * |
| VALERIA CERNARO等: "Auxin induces cell proliferation in an experimental model of mammalian renal tubular epithelial cells", 《REN FAIL》, vol. 37, no. 5, 24 February 2015 (2015-02-24), pages 911 - 913 * |
| YING-YING LI 等: "Anti-apoptotic effect of HeidihuangWan in renal tubular epithelial cells via PI3K/Akt/mTOR signaling pathway", 《J ETHNOPHARMACOL 》, vol. 302, 29 October 2022 (2022-10-29), pages 1 - 11 * |
| ZHI XUAN等: "Effects of Low-Molecular-Weight-Chitosan on the AdenineInduced Chronic Renal Failure Rats in vitro and in vivo", 《J. OCEAN UNIV. CHINA》, vol. 14, no. 1, 28 February 2015 (2015-02-28), pages 97 - 104 * |
| 刘利: "IL-17对肾小管上皮细胞转分化的作用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库_医药卫生科技辑》, no. 4, 15 April 2019 (2019-04-15), pages 067 - 12 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN118028217B (zh) | 2024-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101914490B (zh) | 一种人羊膜间充质干细胞无血清培养基及其培养方法 | |
| CN104164403B (zh) | 一种提取及培养脂肪干细胞的方法 | |
| CN108642004A (zh) | 一种外泌体的制备方法及含有外泌体的干细胞增殖试剂 | |
| CN105112366B (zh) | 一种含小檗碱的间充质干细胞无血清培养基 | |
| CN101942413A (zh) | 出生缺陷细胞库及其构建方法 | |
| WO2022217868A1 (zh) | 外泌体在促进壁蜕膜间充质干细胞生长中的应用 | |
| CN102978156A (zh) | 一种骨髓间充质干细胞的体外扩增纯化培养方法及培养基 | |
| CN101802177A (zh) | 从人或动物胚胎提取间质性干细胞及提取其分泌物的方法 | |
| CN106754675B (zh) | 一种脂肪干细胞无血清培养基及其制备方法和用途 | |
| CN114350603B (zh) | 包含外泌体的间充质干细胞胞外基质及其制备和在细胞修复中的应用 | |
| CN116355857B (zh) | 悬浮培养的牛肾细胞及其制备方法与应用 | |
| CN117802039A (zh) | 一种无血清间充质干细胞三维培养基及其应用 | |
| CN114561358B (zh) | 一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法 | |
| CN109777771B (zh) | 原代脐带间充质干细胞的无血清培养基及其使用方法 | |
| CN101760445B (zh) | 自体骨髓间充质干细胞的扩增方法 | |
| CN117904038A (zh) | 一种无动物血清的脐带间充质干细胞培养基及其合成工艺和应用 | |
| CN118028217A (zh) | 一种肾小管上皮细胞完全培养基及其应用 | |
| CN114574435A (zh) | 一种诱导脐带间充质干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用 | |
| CN119082010B (zh) | 一种改良的间充质干细胞培养方法及其用到的培养基 | |
| CN114763527A (zh) | 一种高效稳定工作细胞库的制备方法 | |
| CN118813529A (zh) | 一种用于禽类肌肉干细胞培养的培养基组合及培养方法和应用 | |
| CN105039264A (zh) | 一种犬细小病毒增殖方法 | |
| CN108841786A (zh) | 人羊膜来源的间充质干细胞预处理方法及其应用 | |
| CN115595303A (zh) | 一种促进间充质干细胞分化的培养基及应用 | |
| CN110628712B (zh) | 基于诱导多能干细胞的治疗级间充质干细胞制备方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20241129 Address after: 430075 Second and Fifth Floors, Building C4, Biomedical Park, No. 858 Gaoxin Avenue, Donghu New Technology Development Zone, Wuhan City, Hubei Province (Wuhan Free Trade Zone Area) Applicant after: WUHAN PROCELL LIFE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co.,Ltd. Country or region after: China Applicant after: ELABSCIENCE BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Address before: 430000, 2nd and 5th floors of Building C4, Biopharmaceutical Park, No. 858 Gaoxin Avenue, Donghu New Technology Development Zone, Wuhan, Hubei Province (Wuhan area of the Free Trade Zone) Applicant before: WUHAN PROCELL LIFE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co.,Ltd. Country or region before: China |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |