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CN118010601A - 一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统 - Google Patents

一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统 Download PDF

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CN118010601A CN202410410414.5A CN202410410414A CN118010601A CN 118010601 A CN118010601 A CN 118010601A CN 202410410414 A CN202410410414 A CN 202410410414A CN 118010601 A CN118010601 A CN 118010601A
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Abstract

本公开提供了通过分子标志物诊断原发性胆汁性胆管炎的系统，该分子标志物为线粒体功能性指标，所述线粒体功能性指标包括外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；通过上述技术方案，为原发性胆汁性胆管炎的个体化诊断提供了高特异性、高敏感性的分子标志物和模型。

Description

一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统
技术领域
本公开涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统。
背景技术
原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis ,PBC)是一种以非化脓性胆管炎伴肝内肉芽肿为主要特征的自身免疫性疾病，其病理特点表现为肝内小胆管上皮细胞变性及坏死所致的肝内胆汁淤积，继而诱发肝纤维化及肝硬化，最终导致患者肝衰竭，从而威胁患者生命。PBC的发病机制尚不明确，可能是由环境因素、免疫因素及遗传因素的共同作用下所致。流行病学研究显示，PBC年发病率为(0.23~5.31)/10万、患病率为(1.91~40.2)/10万，好发于40岁以上的中年女性，且男女患病比例约为1:10。PBC早期无特异临床表现，患者发病早期可能出现皮肤瘙痒、乏力及肝区不适等非特异症状。目前，临床上诊断PBC，主要有以下三条标准：（1）患者血清可检测出抗线粒体抗体（AMA）或抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)；（2）血清碱性磷酸酶（ALP）或谷氨酰转肽酶(GGT)进行性升高；（3）肝组织穿刺检查符合PBC病理表现；上述三条诊断标准符合两条即可诊断为PBC。临床上存在部分PBC患者仅表现为AMA或AMA-M2阳性，而ALP或GGT水平正常，该类患者需通过肝穿刺检查进一步评估是否患有PBC。然而，肝穿刺检查为有创检查，患者往往难以接受，导致延误诊断，难以早期接受治疗。因此，亟需挖掘PBC诊断的新型无创检查标志物，有助于PBC早期诊断，改善患者预后。
发明内容
本公开的目的在于为原发性胆汁性胆管炎提供了具有高特异性、高敏感性的分子标志物和诊断系统。
为了实现上述目的，一方面，本公开提供了用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统，该系统包括用于输入受试者的线粒体功能指标的装置、计算装置和用于输出原发性胆汁性胆管炎诊断结果的装置；
所述线粒体功能指标包括外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；
所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现建模算法和如式（1）和/或式（2）所示的判别函数的算法；所述建模算法为支持向量机算法和/或最小偏二乘算法；
式（1），
式（2）；
式（1）中，和表示原发性胆汁性胆管炎诊断结果，返回值为1表示支持，返回值为-1时表示拒绝；c1为外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例；c2为外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；f1(c1)和f2(c2)分别为依据所述建模算法训练得到的核函数，b1和b2为依据所述建模算法训练得到的临界打分值。
线粒体膜电位（MMP）是指横跨线粒体内膜的跨膜电位，由于线粒体氧化磷酸化过程将产生的能量以电化学势能的形式储存于线粒体内膜，以致内膜两侧质子及其他离子浓度分布不对称，从而形成MMP，MMP的高低对于维持线粒体的正常功能具有重要意义，可反映细胞代谢水平的实际状态。线粒体膜电位偏低细胞百分比（MMP-low%）是指线粒体膜电位偏低的细胞占该类细胞总数的百分比，其数值越低提示细胞活性越差且线粒体功能障碍越严重。
线粒体质量（MM）线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量，代表了细胞代谢能力的上限。免疫细胞MMP及MM的改变可导致其线粒体损伤，从而影响正常的线粒体代谢功能，继而导致免疫细胞功能的失调。
单细胞线粒体质量（SCMM）是通过流式细胞术检测各淋巴细胞亚群的线粒体荧光强度，然后除以相应淋巴细胞亚群的计数，从而得到各淋巴细胞亚群的SCMM。SCMM可以更敏感地反映细胞线粒体的功能，其水平增高反映线粒体代谢异常，与线粒体损伤程度呈正相关。
可选地，所述系统还包括线粒体功能性指标的检测装置，所述检测装置为流式细胞仪。
可选地，所述线粒体功能性指标的检测装置包括线粒体功能性指标的信号读取器。
可选地，所述线粒体功能性指标的信号读取器包括：CD3信号值读取器、CD8信号值读取器、CD45信号值读取器、CD4信号值读取器、线粒体膜电位信号值读取器、线粒体呼吸链蛋白信号值读取器。
可选地，所述CD3信号值读取器读取的信号为PE探针信号、所述CD8信号值读取器读取的信号为FITC探针信号、所述CD45信号值读取器读取的信号为PC5.5探针信号、所述CD4信号值读取器读取的信号为PC7探针信号。
可选地，所述线粒体膜电位信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Deep Red633探针信号。
可选地，所述线粒体呼吸链蛋白信号值读取器读取的信号为Mito Tracker GreenFM探针信号。
可选地，所述处理器还配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下计算：
当细胞被所述细胞CD45信号值读取器和所述CD4信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为中性粒细胞，同时读取该中性粒细胞的线粒体膜电位信号值，将中性粒细胞的线粒体膜电位信号值记为V1；
当细胞被所述细胞CD3信号值读取器和所述CD8信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为CD3+CD8+T淋巴细胞，对CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N1，同时读取该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值和呼吸链蛋白信号值，如果该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值小于V1，则该CD3+CD8+T淋巴细胞为线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞，对线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N2；
将N2除以N1，即得到c1；
将每一个CD3+CD8+T淋巴细胞的呼吸链蛋白信号值除以该CD3+CD8+T淋巴细胞的CD3信号值，即得到该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量，将所有CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量取平均值，即得到c2。
可选地，f1(c1)取-1×c1，b1为0.4419，f2(c2)取1×c2，b2为-4.66。
通过上述技术方案，本公开发现了外周血样本中线粒体功能性指标能够作为原发性胆汁性胆管炎的诊断用分子标志物，为原发性胆汁性胆管炎的个体化诊断和治疗提供了具有高特异性、高敏感性的分子标志物和诊断模型，并为临床指定原发性胆汁性胆管炎的诊断方案提供了一种能够新型、高效且无创的辅助工具。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是从总细胞圈门图。
图2是从淋巴细胞圈门图。
图3是从总T细胞圈门图。
图4是Tc门控图。
图5是Tc MMP-low%、SCMM-Tc的统计分析图。
图6是Tc MMP-low%、SCMM-Tc的ROC曲线分析图。
具体实施方式
以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
本公开提供了一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统，该系统包括用于输入受试者的线粒体功能性指标的装置、计算装置和用于输出原发性胆汁性胆管炎诊断结果的装置；
所述线粒体功能性指标包括外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；
所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现建模算法和如式（1）和/或式（2）所示的判别函数的算法；所述建模算法为支持向量机算法和/或最小偏二乘算法；
式（1），
式（2）；
式（1）中，和表示原发性胆汁性胆管炎诊断结果，返回值为1表示支持，返回值为-1时表示拒绝；c1为外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例；c2为外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；f1(c1)和f2(c2)分别为依据所述建模算法训练得到的核函数，b1和b2为依据所述建模算法训练得到的临界打分值。
可选地，该系统还包括线粒体功能性指标的检测装置，所述检测装置为流式细胞仪。
可选地，所述线粒体功能性指标的检测装置包括线粒体功能性指标的信号读取器。
所述线粒体功能性指标的信号读取器包括：CD3信号值读取器、CD8信号值读取器、CD45信号值读取器、CD4信号值读取器、线粒体膜电位信号值读取器、线粒体呼吸链蛋白信号值读取器。
可选地，所述CD3信号值读取器读取的信号为PE探针信号、所述CD8信号值读取器读取的信号为FITC探针信号、所述CD45信号值读取器读取的信号为PC5.5探针信号、所述CD4信号值读取器读取的信号为PC7探针信号。
可选地，所述线粒体膜电位信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Deep Red633探针信号。
可选地，所述线粒体呼吸链蛋白信号值读取器读取的信号为Mito Tracker GreenFM探针信号。
可选地，所述处理器还被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下计算：
当细胞被所述细胞CD45信号值读取器和所述CD4信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为中性粒细胞，同时读取该中性粒细胞的线粒体膜电位信号值，将中性粒细胞的线粒体膜电位信号值记为V1；
当细胞被所述细胞CD3信号值读取器和所述CD8信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为CD3+CD8+T淋巴细胞，对CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N1，同时读取该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值和呼吸链蛋白信号值，如果该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值小于V1，则该CD3+CD8+T淋巴细胞为线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞，对线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N2；
将N2除以N1，即得到c1；
将每一个CD3+CD8+T淋巴细胞的呼吸链蛋白信号值除以该CD3+CD8+T淋巴细胞的CD3信号值，即得到该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量，将所有CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量取平均值，即得到c2。
可选地，f1(c1)取-1×c1，b1为0.4419，f2(c2)取1×c2，b2为-4.66。
以下通过实施例进一步详细说明本公开。实施例中所用到的原材料均可通过商购途径获得。
本公开通过流式细胞术对64例PBC患者及32例性别年龄匹配的健康对照检测其外周全血中线粒体功能性指标，利用NovoExpress软件对获取的流式软件进行分析，将获取的线粒体功能性指标利用t检验或Mann-Whitney U检验在PBC患者及健康对照之间的差异情况进行比较分析，进一步通过受试者工作曲线（ROC）分析评估Tc MMP-low%及SCMM-Tc对于PBC的诊断价值。其中，Tc MMP-low%表示外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例，SCMM-Tc表示外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量。
实施例1
实验过程：
1、受试者样本筛选：
PBC患者的纳入标准：（1）受试者血清AMA和或AMA-M2阳性；（2）受试者血清ALP与GGT水平升高；（3）受试者肝组织穿刺检查符合PBC病理表现；以上3条标准符合2条即可诊断为PBC。
健康对照的纳入标准：同时收集健康人样本要求与PBC患者的性别与年龄均匹配。
本实施例研究方案已经获得中国医学科学院北京协和医院伦理委员会通过。
2、流式细胞术染色：
收集所有受试者的外周全血样本，采用流式细胞术对受试者的外周血Tc MMP-low%及SCMM-Tc进行检测，所用试剂盒为CD8+19 FITC/CD3+56 PE/CD45 PC5.5/CD4 PC7/MitoDye（流式细胞仪法）检测试剂盒【泛肽生物科技(浙江)有限公司】，具体步骤为：
（1）配制溶血素工作液：取1份恢复至室温的溶血素，缓慢加入9份纯化水并混匀配制成工作液，室温下放置备用；
（2）在室温下，取20μL抗体检测试剂于已做好标记的流式管中；
（3）将100μL已充分混匀的抗凝人外周血样本加入试管底部；
（4）漩涡混合器上轻轻振荡5秒，室温避光静置孵育15分钟；
（5）加入2mL室温放置的溶血素工作液；
（6）漩涡混合器上轻轻振荡5秒，室温避光静置孵育15分钟；
（7）将流式管置于离心机中，300g离心5分钟，去除上清液；
（8）加入200μL PBS，漩涡混合器上轻轻振荡5秒，将重悬液加入预先装有线粒体探针的8联管中；
（9）漩涡混合器上轻轻振荡5秒，于37℃恒温培养箱避光孵育30分钟；
（10）在CytekTMNL-CLC 全光谱流式细胞仪上进行检测（上机前低速震荡3秒），获取数据，使用NovoExpress软件进行分析。
参照图1-4的分析策略，得到各外周血样本中外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例（Tc MMP-low%）和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量（SCMM-Tc）。
3、模型构建：
基于上述线粒体功能性指标，采用最小偏二乘法和支持向量机算法构建原发性胆汁性胆管炎的诊断模型，详细地为：将通过流式细胞术检测技术检测得到的外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量作为数据集；其中外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量通过检测装置中的信号读取器检测得到：分别包括CD3信号值读取器、CD8信号值读取器、CD45信号值读取器、CD4信号值读取器、线粒体膜电位信号值读取器、线粒体呼吸链蛋白信号值读取器，其中，CD3信号值读取器读取的信号为PE（藻红蛋白）探针信号、CD8信号值读取器读取的信号为FITC（FluoresceinIsothiocyanate，异硫氰酸荧光素）探针信号、CD45信号值读取器读取的信号为PC5.5探针（PerCP-Cyanine5.5 dye）信号、CD4信号值读取器读取的信号为PC7（PE-Cyanine7 dye）探针信号，线粒体膜电位信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Deep Red 633（CAS号：873315-86-7）平均荧光强度值作为探针信号，线粒体呼吸链蛋白信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Green FM（CAS号：201860-17-5）探针信号。
以中性粒细胞的线粒体膜电位信号值作为阳性对照，当细胞被所述细胞CD45信号值读取器和所述CD4信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为中性粒细胞，同时读取该中性粒细胞的线粒体膜电位信号值，将中性粒细胞的线粒体膜电位信号值记为V1；
当细胞被所述细胞CD3信号值读取器和所述CD8信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为CD3+CD8+T淋巴细胞，对CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N1，同时读取该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值和呼吸链蛋白信号值，如果该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值小于V1，则该CD3+CD8+T淋巴细胞为线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞，对线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N2；将N2除以N1，即得到c1；
将每一个CD3+CD8+T淋巴细胞的呼吸链蛋白信号值除以该CD3+CD8+T淋巴细胞的CD3信号值，即得到该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量，将所有CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量取平均值，即得到c2。
将上述数据集随机分为训练集和测试集，重复3次；使用训练集训练模型中每个组分（线粒体功能性指标）的计算系数和阈值，用测试集进行评估，重复验证3次，该模型的判别函数如式（1）和（2）所示：
式（1），
式（2）；
式（1）中，和表示原发性胆汁性胆管炎诊断结果，返回值为1表示支持，返回值为-1时表示拒绝；f1(c1)和f2(c2)分别为依据所述建模算法训练得到的核函数，b1和b2为依据所述建模算法训练得到的临界打分值；f1(c1)取-1×c1，b1为0.4419，f2(c2)取1×c2，b2为-4.66，也就是说判别函数具体为：
式（1），
式（2）。
实施例2
本实施例对实施例1构建的诊断模型进行验证。
本实施例进一步对PBC患者和健康对照外周血中Tc MMP-low%、SCMM-Tc的水平进行统计分析，结果如图5所示（其中，HC代表健康对照，PBC代表原发性胆汁性胆管炎患者），与健康对照相比PBC患者的MMP-low%水平明显减低，而SCMM-Tc的水平显著升高，差异具有统计学意义，提示Tc MMP-low%、SCMM-Tc的水平变化可以作为PBC潜在的诊断标志物。
如图6所示，进一步对Tc MMP-low%、SCMM-Tc的水平的诊断性能进行分析(ROC曲线分析)，结果表明，Tc MMP-low%＜44.19％，在用于诊断PBC时，AUC为0.754，灵敏度为56.25％，特异性为84.38％；SCMM-Tc＞4.66，在用于诊断PBC时，AUC为0.707，灵敏度为56.25％，特异性为81.25％，可见，本公开建立的用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统，具有较好临床预测价值。
以上详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

Claims (10)

1.一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统，其特征在于，所述系统包括用于输入受试者的线粒体功能性指标的装置、计算装置和用于输出原发性胆汁性胆管炎诊断结果的装置；
所述线粒体功能性指标包括外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例和/或外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；
所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现建模算法和如式（1）和/或式（2）所示的判别函数的算法；所述建模算法为支持向量机算法和/或最小偏二乘算法；
式（1），
式（2）；
式（1）中，和表示原发性胆汁性胆管炎诊断结果，返回值为1表示支持，返回值为-1时表示拒绝；c1为外周血中线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞占外周血中总CD3+CD8+T淋巴细胞的比例；c2为外周血中CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量；f1(c1)和f2(c2)分别为依据所述建模算法训练得到的核函数，b1和b2为依据所述建模算法训练得到的临界打分值。
2.根据权利要求1所述的系统，其中，所述系统还包括线粒体功能性指标的检测装置，所述检测装置为流式细胞仪。
3.根据权利要求2所述的系统，其中，所述线粒体功能性指标的检测装置包括线粒体功能性指标的信号读取器。
4.根据权利要求3所述的系统，其中，所述线粒体功能性指标的信号读取器包括：CD3信号值读取器、CD8信号值读取器、CD45信号值读取器、CD4信号值读取器、线粒体膜电位信号值读取器、线粒体呼吸链蛋白信号值读取器。
5.根据权利要求4所述的系统，其中，所述CD3信号值读取器读取的信号为PE探针信号、所述CD8信号值读取器读取的信号为FITC探针信号、所述CD45信号值读取器读取的信号为PC5.5探针信号、所述CD4信号值读取器读取的信号为PC7探针信号。
6.根据权利要求4所述的系统，其中，所述线粒体膜电位信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Deep Red 633探针信号。
7.根据权利要求4所述的系统，其中，所述线粒体呼吸链蛋白信号值读取器读取的信号为Mito Tracker Green FM探针信号。
8.根据权利要求4-7中任意一项所述的系统，其中，所述处理器还被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下计算：
当细胞被所述细胞CD45信号值读取器和所述CD4信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为中性粒细胞，同时读取该中性粒细胞的线粒体膜电位信号值，将中性粒细胞的线粒体膜电位信号值记为V1；
当细胞被所述细胞CD3信号值读取器和所述CD8信号值读取器均读取到阳性信号时，该细胞为CD3+CD8+T淋巴细胞，对CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N1，同时读取该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值和呼吸链蛋白信号值，如果该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体膜电位信号值小于V1，则该CD3+CD8+T淋巴细胞为线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞，对线粒体低膜电位的CD3+CD8+T淋巴细胞进行计数，得到数量N2；
将N2除以N1，即得到c1；
将每一个CD3+CD8+T淋巴细胞的呼吸链蛋白信号值除以该CD3+CD8+T淋巴细胞的CD3信号值，即得到该CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量，将所有CD3+CD8+T淋巴细胞的线粒体内膜呼吸链上的有效蛋白含量取平均值，即得到c2。
9.根据权利要求1所述的系统，其中，f1(c1)取-1×c1，b1为0.4419。
10.根据权利要求1所述的系统，其中，f2(c2)取1×c2，b2为-4.66。
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