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CN117616137A - 靶向egfr和cd3的抗体及其用途 - Google Patents

靶向egfr和cd3的抗体及其用途 Download PDF

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CN117616137A
CN117616137A CN202280049176.9A CN202280049176A CN117616137A CN 117616137 A CN117616137 A CN 117616137A CN 202280049176 A CN202280049176 A CN 202280049176A CN 117616137 A CN117616137 A CN 117616137A
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CN
China
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amino acid
seq
acid sequence
light chain
variable domain
Prior art date
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CN202280049176.9A
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Inventor
大卫·坎贝尔
托马斯·R·迪莱蒙多
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Janux Therapeutics Inc
Original Assignee
Janux Therapeutics Inc
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Abstract

本文提供了选择性地结合至EGFR和CD3的抗体、其药物组合物以及产生此类抗体的方法。

Description

靶向EGFR和CD3的抗体及其用途
交叉引用
本申请要求2021年5月11日提交的美国临时申请第63/187,189号的权益，其全部内容通过引用并入本文。
发明内容
本文公开了根据下式的分离的多肽复合物：A-L-B(式I)，其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。在一些实施方案中，Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ IDNO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ IDNO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到B的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到B的C末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到Fab重链多肽的C末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到Fab轻链多肽的C末端。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为15个氨基酸。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv重链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
本文还公开了根据下式的分离的多肽复合物：A-L-D(式II)，其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。在一些实施方案中，Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽。在一些实施方案中，scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ IDNO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ IDNO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含根据SEQIDNO:13或16的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ IDNO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含根据SEQ IDNO:14或17的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为15个氨基酸。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv重链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ IDNO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv重链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ IDNO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
本文另外公开了药物组合物，其包含：根据本文任何实施方案的分离的多肽复合物；和药学上可接受的赋形剂。
本文进一步公开了分离的重组核酸分子，其编码根据本文任何实施方案的多肽复合物的多肽。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考阐述其中利用本发明的原理的说明性实施方案的以下详细描述和附图，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，在附图中：
图1A-1B示出了选择性结合至EGFR和CD3的抗体的示例性构型。图1A举例说明了结合至EGFR的Fab和结合至CD3的scFv，其中Fab重链多肽的N末端通过接头连接到scFv轻链可变结构域的C末端。图1B举例说明了结合至EGFR的Fab和结合至CD3的scFv，其中Fab轻链多肽的N末端通过接头连接到scFv轻链可变结构域的C末端。
图2示出了通过ELISA测量的Ab-1和Ab-2与EGFR的结合。
图3示出了通过ELISA测量的Ab-3与EGFR的结合。
图4示出了通过ELISA测量的Ab-1和Ab-2与CD3的结合。
图5示出了通过ELISA测量的Ab-3与CD3的结合。
图6示出了人和食蟹猴EGFR的Ab-1动力学结合和交叉反应性。
图7示出了人和食蟹猴CD3的Ab-1动力学结合和交叉反应性。
图8示出了人EGFR的Ab-1和Ab-2平衡结合。
图9示出了cyno EGFR的Ab-1和Ab-2平衡结合。
图10示出了人CD3的Ab-1和Ab-2平衡结合。
图11示出了cyno CD3的Ab-1和Ab-2平衡结合。
图12示出了在CD8+T细胞的存在下Ab-3介导的HCT116肿瘤杀伤。
图13示出了在CD8+T细胞的存在下Ab-2介导的HCT116肿瘤杀伤。
图14示出了在CD8+T细胞的存在下Ab-1介导的HCT116肿瘤杀伤。
图15示出了在CD8+T细胞的存在下Ab-1介导的A431肿瘤杀伤。
图16示出了在单次IV团注注射后，Ab-3在食蟹猴中的药代动力学。
图17示出了在单次IV团注Ab-3后在食蟹猴中的细胞因子释放。
图18示出了在单次IV团注Ab-3后在食蟹猴中的血清肝酶。
图19示出了通过ELISA测量的Ab-1和Ab-4与EGFR的结合。
图20示出了通过ELISA测量的Ab-1和Ab-4与CD3ε的结合。
图21示出了在CD8+T细胞的存在下Ab-1和Ab-4介导的HCT116肿瘤细胞杀伤。
图22示出了在连续IV输注Ab-1后在食蟹猴中的药代动力学。
图23A-23B示出了在连续IV输注Ab-1后在食蟹猴中的细胞因子释放。
具体实施方式
多特异性抗体将源自两种或更多种抗体的不同结合特异性的益处组合到单一组合物中。用于将T细胞重定向至癌症的多特异性抗体在临床前研究和临床研究两者中已经显示出前景。这种方法依赖于抗体的一个抗原相互作用部分与肿瘤相关抗原或标志物的结合，而第二抗原相互作用部分可以与T细胞上的效应细胞抗原如CD3结合，其然后触发细胞毒性活性。
一种此类肿瘤相关抗原是EGFR。表皮生长因子受体(EGFR)，也称为ERBB1，受体酪氨酸蛋白激酶ErbB-1，或原癌基因C ErbB-1，是一种跨膜糖蛋白，其是蛋白激酶超家族的成员。EGFR是一种结合至表皮生长因子的细胞表面蛋白，从而诱导受体二聚化和酪氨酸自磷酸化，导致细胞增殖。EGFR的扩增和突变已经被证明是许多癌症类型的驱动因素。
本文公开了选择性地结合至EGFR和CD3的抗体，其中抗EGFR结构域为与结合至CD3的单链可变片段(scFv)连接的Fab或Fab’抗体形式。与scFv连接的Fab或Fab’的双特异性抗体形式提供了优于其他双特异性抗体形式的效力和安全性优势。在一些实施方案中，Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20；并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，结合至CD3的scFv被连接到结合至EGFR的Fab或Fab’的N末端。
在一些实施方案中，本文所述的抗体用于治疗癌症的方法。在一些实施方案中，癌症具有表达EGFR的细胞。在一些情况下，癌症是实体瘤癌症。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌(CRC)、头部和颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、非小细胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、乳腺癌(例如HER2+；ER/PR+；TNBC)、食管胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌或胰腺癌。
某些定义
本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的并且不旨在进行限制。如本文所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”旨在也包括复数形式，除非上下文另外清楚地指出。此外，就在详细描述和/或权利要求中使用的术语“包括/包含(including)”、“包括/包含(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体而言，此类术语旨在以类似于术语“包括/包含(comprising)”的方式包括在内。
术语“抗体”以最广泛的意义使用并且涵盖完全组装的抗体、可以结合抗原的抗体片段，例如Fab、F(ab’)2、Fv、单链抗体(scFv)、双抗体、抗体嵌合体、杂交抗体、双特异性抗体等。
术语“互补决定区”或“CDR”是抗体的可变区的区段，其在结构上与抗体所结合的表位互补并且比可变区的其余部分更具可变性。因此，CDR有时被称为高变区。可变区包含三个CDR。CDR肽可以通过构建编码感兴趣的抗体的CDR的基因来获得。例如，通过使用聚合酶链式反应从产生抗体的细胞的RNA合成可变区来制备此类基因。参见，例如，Larrick等人，Methods:A Companion to Methods in Enzymology 2:106(1991)；Courtenay-Luck，“Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies”，Monoclonal Antibodies:Production,Engineering and Clinical Application，Ritter等人(编著)，第166-179页(Cambridge University Press 1995)；和Ward等人，“Genetic Manipulation andExpression of Antibodies”，Monoclonal Antibodies:Principles and Applications，Birch等人(编著)，第137-185页(Wiley-Liss,Inc.1995)。
术语“Fab”是指含有轻链的恒定结构域和重链的第一个恒定结构域(CH1)的蛋白质。Fab片段与Fab’片段的不同之处在于在重链CH1结构域的羧基末端处添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH在本文中是Fab’的名称，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离的硫醇基团。Fab’片段通过还原F(ab’)2片段的重链二硫键桥产生。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
“单链可变片段(scFv)”是抗体的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白，其与10至约25个氨基酸的短接头肽连接。该接头通常富含用于柔韧性的甘氨酸，以及用于溶解性的丝氨酸或苏氨酸，并且可以连接VH的N末端与VL的C末端，反之亦然。该蛋白保留了原始抗体的特异性，尽管去除了恒定区并引入了接头。scFv抗体例如在Houston,J.S.,Methodsin Enzymol.203(1991)46-96中描述。此外，抗体片段包含具有VH结构域的特征的单链多肽，即能够与VL结构域组装在一起；或具有VL结构域的特征的单链多肽，即能够与VH结构域装配在一起到达功能性抗原结合位点，从而提供全长抗体的抗原结合特性。
如本文所使用的，与序列相关的术语“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并引入空位(如果有必要)以获得最大百分比序列同一性之后，候选序列中与特定序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，并且不考虑作为序列同一性的一部分的任何保守取代。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，如EMBOSS MATCHER、EMBOSS WATER、EMBOSSSTRETCHER、EMBOSS NEEDLE、EMBOSS LALIGN、BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件实现。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在被比较的全长序列上实现最大比对所需的任何算法。
在ALIGN-2用于氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A相对给定氨基酸序列B、与给定氨基酸序列B或针对给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(其可以替代地被表述为具有或包含相对给定氨基酸序列B、与给定氨基酸序列B或针对给定氨基酸序列B的特定氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)被计算如下：100倍分数X/Y，其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中记录为相同匹配的氨基酸残基的数量，并且其中Y是B中氨基酸残基的总数量。应当理解，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另有具体说明，否则本文所用的所有氨基酸序列同一性％值都是使用ALIGN-2计算机程序如在上一段所述获得的。
与“高变区”或“HVR”同义的术语“互补决定区”和“CDR”在本领域中已知是指抗体可变区内的非连续氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。一般来说，在每个重链可变区中存在三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，在每个轻链可变区中存在三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。已知“框架区”和“FR”在本领域中是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。一般来说，在每个全长重链可变区中存在四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，在每个全长轻链可变区中存在四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任何一种来容易地确定，包括Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，美国国立卫生研究院公共卫生服务中心(Public Health Service,National Institutes of Health)，Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)，“Antibody-antigeninteractions:Contact analysis and binding site topography”，J.Mol.Biol.262,732-745"(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人，“IMGT unique numbering forimmunoglobulin and T cell receptor variabledomains and Ig superfamily V-likedomains”，Dev Comp Immunol，2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A，“Yet another numbering scheme for immunoglobulin variabledomains:an automatic modeling and analysis tool”，J Mol Biol，2001年6月8日；309(3):657-70，(“Aho”编号方案)；以及Whitelegg NR和Rees AR，“WAM:an improved algorithm formodelling antibodies on the WEB”，Protein Eng.2000年12月；13(12):819-24(“AbM”编号方案)。在某些实施方案中，本文所述的抗体的CDR可以通过选自Kabat、Chothia、IMGT、Aho、AbM或其组合的方法来定义。
给定CDR或FR的边界可以根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案基于结构比对，而Chothia方案基于结构信息。Kabat方案和Chothia方案两者的编号都是基于最常见的抗体区域序列长度，其中插入由插入字母例如“30a”调节，而缺失出现在一些抗体中。这两种方案在不同的位置处放置某些插入和缺失(“indel”)，导致不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。
本文公开了根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。本文公开了包括下式的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。本文公开了包括下式的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头。本文公开了根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头。
本文公开了根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。本文公开了包括下式的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。本文公开了包括下式的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头。本文公开了根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头。
结合至CD3的单链可变片段(scFv)
在一些实施方案中，结合至CD3的scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含表1中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含表2中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含表1中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)；并且scFv轻链可变结构域包含表2中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:4；HC-CDR2：SEQ ID NO:2；HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:9；LC-CDR2：SEQ ID NO:10；和LC-CDR3：SEQ ID NO:11；并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1，HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ IDNO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1；HC-CDR2：SEQ ID NO:2；HC-CDR3：SEQID NO:3。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:4；HC-CDR2：SEQ ID NO:2；HC-CDR3：SEQ ID NO:5。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ IDNO:11。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ IDNO:6；LC-CDR2：SEQ ID NO:7；和LC-CDR3：SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:9；LC-CDR2：SEQ ID NO:10；和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1，HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ IDNO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1；HC-CDR2：SEQ IDNO:2；HC-CDR3：SEQ ID NO:3；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:4；HC-CDR2：SEQ ID NO:2；HC-CDR3：SEQ ID NO:5；并且scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:9；LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
表1.抗CD3 scFv重链可变结构域互补决定区(CDR)(如基于IMGT CDR编号系统)。
表2.抗CD3 scFv轻链可变结构域互补决定区(CDR)(如基于IMGT CDR编号系统)。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQID NO:13或16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:13或16的至少90个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:13或16的至少90个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少60个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少70个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少80个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:13或16的至少90个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少105个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少110个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少115个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:13或16的至少115个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少120个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQID NO:12或15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:12或15的至少90个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:12或15的至少90个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少60个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少70个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少80个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:12或15的至少90个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的至少105个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ IDNO:12或15的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQID NO:13或16的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ IDNO:13或16的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQID NO:13的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQID NO:16的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ IDNO:16的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ IDNO:14或17的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或1617的至少150个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少175个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少220个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少230个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少235个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少240个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
表3.抗CD3 scFv轻链可变结构域、重链可变结构域序列和全长序列
结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’
在一些实施方案中，结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’包含Fab轻链多肽链和Fab重链多肽。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含Fab轻链可变结构域。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含Fab重链可变结构域。在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含表4中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。在一些实施方案中，Fab轻链可变结构域包含表5中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含表4中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)；并且Fab轻链可变结构域包含表5中公开的至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)或与其基本上相同的序列(例如，具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列)。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ IDNO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20；并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20。在一些实施方案中，Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含：LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20；并且Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23。
在一些实施方案中，Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ IDNO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20；并且Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23。
表4.抗EGFR Fab重链可变结构域互补决定区(CDR)(如基于IMGT CDR编号系统)。
表5.抗EGFR Fab轻链可变结构域互补决定区(CDR)(如基于IMGT CDR编号系统)。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ IDNO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ IDNO:25或27的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ IDNO:25或27的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ IDNO:25或27的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少150个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少175个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少215个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少220个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ IDNO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少190个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:24或26的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少150个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少175个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少190个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少205个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24或26的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQID NO:25或27的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQID NO:25的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少91％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少92％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:26的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少94％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQID NO:27的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
表6.抗EGFR Fab轻链多肽和Fab重链多肽序列
接头
在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为5个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为6个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为7个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为8个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为9个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为10个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为11个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为12个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为13个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为14个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为15个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为16个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为17个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为18个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为19个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为20个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为21个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为22个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为23个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为24个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为25个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为26个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为27个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为28个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为29个氨基酸。在一些实施方案中，接头的长度为30个氨基酸。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:29(GGGGS)的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头包含SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到B的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到B的C末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到Fab重链多肽的C末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的N末端连接到Fab轻链多肽的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。
在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到D的N末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。在一些实施方案中，接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。
表7.接头序列
与EGFR和CD3结合的抗体
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:31的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ IDNO:24的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:31的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少470个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:32的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ IDNO:24的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:32的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ IDNO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:24的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少470个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:26的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:26的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:26的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:26的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少220个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少460个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与所述至少460个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQID NO:31的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:34的氨基酸序列具有至少96％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ IDNO:31的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少97％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ IDNO:34的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ IDNO:31的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基具有至少90％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:31的至少210个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基具有至少95％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:31的至少100个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少200个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少210个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少470个连续氨基酸残基具有至少99％的序列同一性。
在一些实施方案中，接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
表8.结合至EGFR和CD3的抗体序列
在一些实施方案中，分离的多肽复合物包含经修饰的氨基酸或非天然氨基酸，或经修饰的非天然氨基酸，或其组合。在一些实施方案中，经修饰的氨基酸或经修饰的非天然氨基酸包含翻译后修饰。在一些实施方案中，分离的多肽复合物包含修饰，包括但不限于乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ羧基化、糖基化、GPI锚形成(anchor formation)、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒酰化、硫酸化、转移RNA介导的氨基酸向蛋白质的添加，如精氨酰化(arginylation)和泛素化。对分离的多肽复合物的任何地方进行修饰，包括肽骨架、氨基酸侧链和末端。
编码多肽或多肽复合物的多核苷酸
在一些实施方案中，本文公开了编码如本文公开的多肽或多肽复合物的分离的重组核酸分子。在一些实施方案中，本文描述了编码多肽的分离的重组核酸分子，所述多肽包含选择性地结合至CD3和EGFR的抗体。
在一些实施方案中，本文公开了编码根据下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码包含下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码包含下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码根据下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头。
在一些实施方案中，本文公开了编码根据下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码包含下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码包含下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头。在一些实施方案中，本文公开了编码根据下式的多肽复合物的多肽的分离的重组核酸分子：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:25的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:31的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:32的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:33的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
在一些实施方案中，本文公开了编码包含根据SEQ ID NO:34的氨基酸的分离的多肽的分离的重组核酸分子。
药物组合物
在一些实施方案中，本文公开了药物组合物，所述药物组合物包含：(a)如本文公开的分离的多肽或多肽复合物；和(b)药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，药物组合物包含(a)根据式I的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)包含式I的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)包含式I的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)根据式I的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；并且B是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L是将A连接到B的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，药物组合物包含(a)根据式I的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)包含式I的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)包含式I的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物包含(a)根据式I的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中A是结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D是结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L是将A的C末端连接到D的N末端的接头；和(b)药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，多肽或多肽复合物进一步包含可检测标记物、治疗剂或药代动力学修饰部分。在一些实施方案中，可检测标记物包括荧光标记物、放射性标记物、酶、核酸探针或造影剂。
对于向对象施用，如本文公开的多肽或多肽复合物可以与一种或多种药学上可接受的载剂或赋形剂一起以药物组合物的形式提供。术语“药学上可接受的载剂”包括，但不限于，任何不干扰成分的生物活性的效力并且对它所施用至的患者无毒的载剂。合适的药物载剂的实例在本领域中是熟知的并且包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(如油/水乳液)、各种类型的湿润剂、无菌溶液等。此类载剂可以通过常规方法配制，并且可以以合适的剂量施用于对象。优选地，组合物是无菌的。这些组合物还可以含有辅助剂，如防腐剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，可以确保防止微生物的作用。
药物组合物可以为任何合适的形式(取决于期望的施用方法)。它可以以单位剂型提供，可以在密封的容器中提供，并且可以作为试剂盒的一部分提供。这种试剂盒可以包括使用说明。它可以包括多个所述单位剂型。
药物组合物可以适于通过任何合适的途径施用，包括肠胃外(例如，皮下、肌内或静脉内)途径。此类组合物可以通过药学领域已知的任何方法来制备，例如通过在无菌条件下将活性成分与载剂或赋形剂混合来制备。
本公开的物质的剂量可以在较宽的限度之间变化，取决于待治疗的疾病或病症、待治疗的个体的年龄和病状等，并且医生将最终确定待使用的适当剂量。
治疗方法
在一些实施方案中，本文所述的抗体用于治疗癌症的方法中。在一些实施方案中，癌症具有表达EGFR的细胞。在一些实施方案中，本文所述的多肽或多肽复合物用于治疗结肠直肠癌(CRC)、头部和颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、非小细胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、乳腺癌、结肠/直肠癌、头部和颈部癌症、食管胃癌、肝癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、肾癌或胰腺癌的方法中。在一些实施方案中，本文所述的多肽或多肽复合物用于治疗对EGFR抑制剂治疗有抗性的对象的方法中。在一些实施方案中，本文所述的多肽或多肽复合物用于治疗具有KRAS突变的对象的方法中。在一些实施方案中，本文所述的多肽或多肽复合物用于治疗对EGFR抑制剂治疗有抗性且具有KRAS突变的对象的方法中。
与EGFR和CD3结合的抗体的产生
在一些实施方案中，本文所述的多肽(例如，抗体及其结合片段)使用本领域已知的可用于合成多肽(例如，抗体)的任何方法产生，尤其是通过化学合成或通过重组表达产生，并且优选地通过重组表达技术产生。
在一些情况下，抗体或其结合片段被重组地表达，并且编码抗体或其结合片段的核酸由化学合成的寡核苷酸组装(例如，如在Kutmeier等人，1994，BioTechniques 17:242中所述)，其涉及合成含有编码抗体的序列的部分的重叠寡核苷酸，退火和连接这些寡核苷酸，然后通过PCR扩增连接的寡核苷酸。
可替代地，通过使用可与序列的3’端和5’端杂交的合成引物进行PCR扩增或者通过使用对特定基因序列具有特异性的寡核苷酸探针进行克隆，编码抗体的核酸分子任选地从合适的来源(例如，抗体cDNA文库，或从表达免疫球蛋白的任何组织或细胞产生的cDNA文库)产生。
在一些情况下，抗体或其结合任选地通过将动物(如小鼠)免疫以产生多克隆抗体，或更优选地通过产生单克隆抗体而产生，例如，如Kohler和Milstein(1975,Nature256:495-497)所述，或如Kozbor等人(1983,Immunology Today 4:72)或Cole等人(1985inMonoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,第77-96页)所述。可替代地，编码抗体的至少Fab部分的克隆任选地通过针对结合特异性抗原的Fab片段的克隆筛选Fab表达文库(例如，如在Huse等人1989,Science 246:1275-1281中所述)或通过筛选抗体文库(参见，例如Clackson等人，1991,Nature352:624；Hane等人，1997Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:4937)来获得。
在一些实施方案中，使用开发用于通过将来自具有适当抗原特异性的小鼠抗体分子的基因与来自具有适当生物活性的人抗体分子的基因剪接在一起生产“嵌合抗体”的技术(Morrison等人，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.81:851-855；Neuberger等人，1984,Nature312:604-608；Takeda等人，1985,Nature 314:452-454)。嵌合抗体是其中不同的部分来源于不同的动物物种的分子，如那些具有来自鼠单克隆抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的分子。
在一些实施方案中，描述的用于生产单链抗体的技术(美国专利第4,694,778号；Bird,1988,Science 242:423-42；Huston等人，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；和Ward等人，1989,Nature 334:544-54)适于生产单链抗体。通过经由氨基酸桥连接Fv区的重链和轻链片段得到单链多肽来形成单链抗体。也可以任选地使用在大肠杆菌中组装功能性Fv片段的技术(Skerra等人，1988,Science 242:1038-1041)。
在一些实施方案中，通过常规技术(例如，电穿孔、脂质体转染和磷酸钙沉淀)将包含抗体的核苷酸序列的表达载体或抗体的核苷酸序列转移至宿主细胞，然后通过常规技术培养转染的细胞以产生抗体。在具体实施方案中，抗体的表达由组成型、诱导型或组织特异性启动子调节。
在一些实施方案中，利用多种宿主表达载体系统来表达本文所述的抗体或其结合片段。此类宿主表达系统代表产生且随后被纯化的抗体的编码序列的媒介物，但也代表当用合适的核苷酸编码序列转化或转染时原位表达抗体或其结合片段的细胞。这些包括但不限于微生物，如用含有抗体或其结合片段编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如大肠杆菌和枯草芽孢杆菌)；用含有抗体或其结合片段编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，毕赤酵母(Saccharomyces Pichia))；用含有抗体或其结合片段编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒(CaMV)和烟草花叶病毒(TMV))感染的或用含有抗体或其结合片段编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞系统；或包括重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如COS、CHO、BH、293、293T、3T3细胞)，所述重组表达构建体含有来自哺乳动物细胞的基因组的启动子(例如金属硫蛋白启动子)或来自哺乳动物病毒的启动子(例如腺病毒晚期启动子；痘苗病毒7.5K启动子)。
对于重组蛋白的长期高产率生产，稳定的表达是优选的。在一些情况下，稳定地表达抗体的细胞系任选地被工程改造。不使用含有病毒复制起点的表达载体，而是用由合适的表达控制元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等)和选择性标志物控制的DNA来转化宿主细胞。在引入外源DNA后，工程改造的细胞允许在富集培养基中生长持续1-2天，然后转移到选择性培养基中。重组质粒中的选择性标志物赋予对选择的抗性，并且允许细胞将质粒稳定地整合到它们的染色体中，并生长以形成灶，该灶又被克隆和扩增到细胞系中。该方法可以有利地用于工程改造表达抗体或其结合片段的细胞系。
在一些情况下，使用了许多选择系统，包括但不限于单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，1977,Cell 11:223)，次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Szybalska&Szybalski，192,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:202)和腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等人，1980,Cell 22:817)基因分别用于tk细胞、hgprt细胞或aprt细胞。此外，抗代谢物抗性被用作选择下列基因的基础：dhfr，其赋予对甲氨蝶呤的抗性(Wigler等人，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:357；O'Hare等人，1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:1527)；gpt，其赋予对霉酚酸的抗性(Mulligan&Berg,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2072)；neo，其赋予对氨基糖苷G-418的抗性(Clinical Pharmacy 12:488-505；Wu和Wu,1991,Biotherapy 3:87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596；Mulligan,1993,Science260:926-932；以及Morgan和Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62:191-217；1993年5月，TIB TECH 11(5):155-215)和hygro，其赋予对潮霉素的抗性(Santerre等人，1984,Gene 30:147)。可以使用的重组DNA技术领域中公知的方法在Ausubel等人(编著，1993,Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley&Sons,NY；Kriegler,1990,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual，Stockton Press,NY；以及在第12和13章中，Dracopoli等人(编著)，1994,CurrentProtocols in人Genetics,John Wiley&Sons,NY；Colberre-Garapin等人，1981,J.Mol.Biol.150:1)中描述。
在一些情况下，抗体的表达水平通过载体扩增来增加(关于综述，参见Bebbington和Hentschel，the use of vectors based on gene amplification for the expressionof cloned genes in mammalian cells in DNA cloning，第3卷(Academic Press，NewYork，1987)。当表达抗体的载体系统中的标志物是可扩增的时，在宿主细胞的培养物中存在的抑制剂水平的增加将增加标志物基因的拷贝数。由于扩增的区域与抗体的核苷酸序列相关联，因此抗体的产量也将增加(Crouse等人，1983,Mol.Cell Biol.3:257)。
在一些情况下，使用本领域已知的用于纯化抗体的任何方法，例如，通过色谱法(例如，离子交换、亲和，特别是通过在蛋白A之后对特异性抗原的亲和，和尺寸柱色谱法)、离心、差异溶解，或通过任何其他用于纯化蛋白质的标准技术。
表达载体
在一些实施方案中，载体包括源自真核来源或原核来源的任何合适的载体。在一些情况下，载体从细菌(例如大肠杆菌)、昆虫、酵母(例如巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris))、藻类或哺乳动物来源获得。示例性的细菌载体包括pACYC177、pASK75、pBAD载体系列、pBADM载体系列、pET载体系列、pETM载体系列、pGEX载体系列、pHAT、pHAT2、pMal-c2、pMal-p2、pQE载体系列、pRSET A、pRSET B、pRSET C、pTrcHis2系列、pZA31-Luc、pZE21-MCS-1、pFLAG ATS、pFLAG CTS、pFLAG MAC、pFLAG Shift-12c、pTAC-MAT-1、pFLAG CTC或pTAC-MAT-2。
示例性的昆虫载体包括pFastBac1、pFastBac DUAL、pFastBac ET、pFastBac HTa、pFastBac HTb、pFastBac HTc、pFastBac M30a、pFastBact M30b、pFastBac、M30c、pVL1392、pVL1393、pVL1393 M10、pVL1393M11、pVL1393 M12、FLAG载体如pPolh-FLAG1或pPolh-MAT2、或MAT载体如pPolh-MAT1或pPolh-MAT2。
在一些情况下，酵母载体包括pDESTTM14载体、pDESTTM15载体、pDESTTM17载体、pDESTTM24载体、pYES-DEST52载体、pBAD-DEST49目的载体、pAO815毕赤酵母载体、pFLD1巴斯德毕赤酵母载体、pGAPZA、B和C巴斯德毕赤酵母载体、pPIC3.5K毕赤酵母载体、pPIC6 A、B和C毕赤酵母载体、pPIC9K毕赤酵母载体、pTEF1/Zeo、pYES2酵母载体、pYES2/CT酵母载体、pYES2/NT A、B和C酵母载体或pYES3/CT酵母载体。
示例性的藻类载体包括pChlamy-4载体或MCS载体。
哺乳动物载体的实例包括瞬时表达载体或稳定表达载体。哺乳动物瞬时表达载体可以包括pRK5、p3xFLAG-CMV 8、pFLAG-Myc-CMV 19、pFLAG-Myc-CMV 23、pFLAG-CMV 2、pFLAG-CMV 6a、b、c、pFLAG-CMV 5.1、pFLAG-CMV 5a、b、c、p3xFLAG-CMV 7.1、pFLAG-CMV 20、p3xFLAG-Myc-CMV 24、pCMV-FLAG-MAT1、pCMV-FLAG-MAT2、pBICEP-CMV 3或pBICEP-CMV 4。哺乳动物稳定表达载体可以包括pFLAG-CMV 3、p3xFLAG-CMV 9、p3xFLAG-CMV 13、pFLAG-Myc-CMV 21、p3xFLAG-Myc-CMV 25、pFLAG-CMV 4、p3xFLAG-CMV 10、p3xFLAG-CMV 14、pFLAG-Myc-CMV 22、p3xFLAG-Myc-CMV 26、pBICEP-CMV 1或pBICEP-CMV 2。
在一些情况下，无细胞系统是来自细胞的细胞质组分和/或细胞核组分的混合物，并且用于体外核酸合成。在一些情况下，无细胞系统利用原核细胞组分或真核细胞组分。有时，在基于例如果蝇细胞、爪蟾卵或HeLa细胞的无细胞系统中获得核酸合成。示例性的无细胞系统包括但不限于大肠杆菌S30提取系统、大肠杆菌T7 S30系统或
宿主细胞
在一些实施方案中，宿主细胞包括任何合适的细胞，如天然衍生细胞或遗传修饰细胞。在一些情况下，宿主细胞是生产宿主细胞。在一些情况下，宿主细胞是真核细胞。在其他情况下，宿主细胞是原核细胞。在一些情况下，真核细胞包括真菌(例如，酵母细胞)、动物细胞或植物细胞。在一些情况下，原核细胞是细菌细胞。细菌细胞的实例包括革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。有时革兰氏阴性细菌是厌氧的，杆状的，或两者。
在一些情况下，革兰氏阳性细菌包括放线菌门、厚壁菌门(Firmicutes)或软壁菌门(Tenericutes)。在一些情况下，革兰氏阴性细菌包括产水菌门(Aquificae)、异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)、纤维杆菌门-绿菌门/拟杆菌门(Fibrobacteres–Chlorobi/Bacteroidetes)(FCB群)、梭杆菌门(Fusobacteria)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、硝化螺旋菌门(Nitrospirae)、浮霉菌门-疣微菌门/衣原体门(Planctomycetes–Verrucomicrobia/Chlamydiae)(PVC群)、变形菌门(Proteobacteria)、螺旋体门(Spirochaetes)或互养菌门(Synergistetes)。其他细菌可以是酸杆菌门(Acidobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、产金菌门(Chrysiogenetes)、蓝细菌(Cyanobacteria)、脱铁杆菌门(Deferribacteres)、网团菌门(Dictyoglomi)、热脱硫杆菌门(Thermodesulfobacteria)或热袍菌门(Thermotogae)。细菌细胞可以是大肠杆菌、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)或大肠杆菌(Coli bacilli)。
示例性的原核宿主细胞包括但不限于BL21、Mach1TM、DH10BTM、TOP10、DH5α、DH10BacTM、OmniMaxTM、MegaXTM、DH12STM、INV110、TOP10F’、INVαF、TOP10/P3、ccdB Survival、PIR1、PIR2、Stbl2TM、Stbl3TM或Stbl4TM。
在一些情况下，动物细胞包括来自脊椎动物或无脊椎动物的细胞。在一些情况下，动物细胞包括来自海洋无脊椎动物、鱼类、昆虫、两栖动物、爬行动物或哺乳动物的细胞。在一些情况下，真菌细胞包括酵母细胞，如啤酒酵母、面包酵母或葡萄酒酵母。
真菌包括子囊菌，如酵母、霉菌、丝状真菌、担子菌或接合菌。在一些情况下，酵母包括子囊菌门(Ascomycota)或担子菌门(Basidiomycota)。在一些情况下，子囊菌门包括酵母亚门(真正的酵母，例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(面包酵母))或外囊菌亚门(例如裂殖酵母纲(Schizosaccharomycetes)(裂殖酵母))。在一些情况下，担子菌门包括伞菌亚门(Agaricomycotina)(例如，银耳纲(Tremellomycetes))或柄锈菌亚门(Pucciniomycotina)(例如，微球黑粉菌纲(Microbotryomycetes))。
示例性的酵母或丝状真菌包括例如以下属：酵母属、裂殖酵母属、假丝酵母属、毕赤酵母属、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、接合酵母属、耶氏酵母属、丝孢酵母属、红冬孢酵母属、曲霉属、镰孢属或木霉属。示例性的酵母或丝状真菌包括例如以下种：酿酒酵母、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、产朊假丝酵母(Candida utilis)、博伊丁假丝酵母(Candida boidini)、白色假丝酵母(Candida albicans)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)、星状假丝酵母(Candida stellatoidea)、光滑假丝酵母(Candidaglabrata)、克柔假丝酵母(Candida krusei)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondii)、维斯假丝酵母(Candida viswanathii)、葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)、胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、甲醇毕赤酵母(Pichia metanolica)、安格斯毕赤酵母(Pichia angusta)、巴斯德毕赤酵母、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、出芽丝孢酵母(Trichosporon pullulans)、圆红冬孢酵母-黑曲霉(Rhodosporidium tom-Aspergillus niger)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichodermareesei)、解脂耶氏酵母、布鲁塞尔酒香酵母(Brettanomyces bruxellensis)、星形假丝酵母(Candida stellata)、粟酒裂殖酵母、德尔布有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、拜氏接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、格特隐球菌(Cryptococcus gattii)或布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)。
示例性的酵母宿主细胞包括但不限于巴斯德毕赤酵母菌株，如GS115、KM71H、SMD1168、SMD1168H和X-33；和酿酒酵母酵母菌菌株如INVSc1。
在一些情况下，额外的动物细胞包括从软体动物、节肢动物、环节动物或海绵获得的细胞。在一些情况下，额外的动物细胞是哺乳动物细胞，例如来自灵长类、猿类、马科动物、牛科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物或啮齿类动物的细胞。在一些情况下，啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、沙鼠、仓鼠、南美栗鼠、花枝鼠或豚鼠。
示例性的哺乳动物宿主细胞包括，但不限于，293A细胞系、293FT细胞系、293F细胞、293H细胞、CHO DG44细胞、CHO-S细胞、CHO-K1细胞、FUT8 KO CHOK1、Expi293FTM细胞、Flp-InTMT-RExTM293细胞系、Flp-InTM-293细胞系、Flp-InTM-3T3细胞系、Flp-InTM-BHK细胞系、Flp-InTM-CHO细胞系、Flp-InTM-CV-1细胞系、Flp-InTM-Jurkat细胞系、FreeStyleTM293-F细胞、FreeStyleTMCHO-S细胞、GripTiteTM293MSR细胞系、GS-CHO细胞系、HepaRGTM细胞、T-RExTMJurkat细胞系、Per.C6细胞、T-RExTM-293细胞系、T-RExTM-CHO细胞系和T-RExTM-HeLa细胞系。
在一些情况下，哺乳动物宿主细胞是稳定的细胞系，或者已经将感兴趣的遗传材料并入到其自身基因组中并具有在细胞分裂许多代之后表达该遗传材料的产物的能力的细胞系。在一些情况下，哺乳动物宿主细胞是瞬时细胞系，或者没有将感兴趣的遗传材料并入到其自身基因组中并且在细胞分裂许多代之后不具有表达该遗传材料的产物的能力的细胞系。
示例性的昆虫宿主细胞包括但不限于果蝇S2细胞、Sf9细胞、Sf21细胞、HighFiveTM细胞和细胞。
在一些情况下，植物细胞包括来自藻类的细胞。示例性的昆虫细胞系包括但不限于来自莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)137c或细长聚球藻(Synechococcuselongatus)PPC 7942的菌株。
制品
在本发明的另一方面中，提供了一种制品，其含有用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料。该制品包括容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。容器装有一种组合物，该组合物本身或与另一种组合物组合可有效地用于治疗、预防和/或诊断病状；并且可以具有无菌进入端口(例如，容器可以是静脉注射溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是双特异性抗体，该双特异性抗体包括特异性地结合至CD3的第一抗原结合位点和特异性地结合至如上文定义的EGFR的第二抗原结合位点。
标签或包装插页指示组合物用于治疗所选的病状。此外，该制品可以包括(a)其中容纳有组合物的第一容器，其中该组合物包含本发明的双特异性抗体；和(b)其中容纳有组合物的第二容器，其中该组合物包含另外的细胞毒性剂或其他治疗剂。本发明的该实施方案中的制品可以进一步包括包装插页，其指示该组合物可以用于治疗特定的病状。
可替代地或另外地，制品可以进一步包括第二(或第三)容器，该第二(或第三)容器包括药学上可接受的缓冲剂，如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户角度来看所期望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
实施方案
实施方案1包括一种根据下式的分离的多肽复合物：A-L-B(式I)，其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且L包含将A连接到B的接头。
实施方案2包括根据实施方案1所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案3包括根据实施方案1或2所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。
实施方案4包括根据实施方案3所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案5包括根据实施方案3或4所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案6包括根据实施方案1-5中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案7包括根据实施方案1-5中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案8包括根据实施方案7所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案9包括根据实施方案7所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案10包括根据实施方案1-9中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列。
实施方案11包括根据实施方案1-10中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案12包括根据实施方案1-10中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案13包括根据实施方案12所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案14包括根据实施方案12所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案15包括根据实施方案1-14中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列。
实施方案16包括根据实施方案3-15中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案17包括根据实施方案3-16中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案18包括根据实施方案3-17中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案19包括根据实施方案3-18中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案20包括根据实施方案3-19中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。
实施方案21包括根据实施方案3-20中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案22包括根据实施方案3-20中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案23包括根据实施方案22所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案24包括根据实施方案22所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案25包括根据实施方案3-24中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。
实施方案26包括根据实施方案1-25中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案27包括根据实施方案1-25中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案28包括根据实施方案27所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQ IDNO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案29包括根据实施方案27所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQ IDNO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案30包括根据实施方案1-29中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。
实施方案31包括根据实施方案1-30中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的C末端连接到B的N末端。
实施方案32包括根据实施方案1-30中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的N末端连接到B的C末端。
实施方案33包括根据实施方案31所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。
实施方案34包括根据实施方案32所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的N末端连接到Fab重链多肽的C末端。
实施方案35包括根据实施方案31所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。
实施方案36包括根据实施方案32所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的N末端连接到Fab轻链多肽的C末端。
实施方案37包括根据实施方案3-32中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域。
实施方案38包括根据实施方案3-32中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域。
实施方案39包括根据实施方案3-32中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域。
实施方案40包括根据实施方案3-32中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域。
实施方案41包括根据实施方案36所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。
实施方案42包括根据实施方案35所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。
实施方案43包括根据实施方案36所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。
实施方案44包括根据实施方案35所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。
实施方案45包括根据实施方案34所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的N末端。
实施方案46包括根据实施方案33所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端。
实施方案47包括根据实施方案34所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的N末端。
实施方案48包括根据实施方案33所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端。
实施方案49包括根据实施方案1-48中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为至少5个氨基酸。
实施方案50包括根据实施方案1-49中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度不超过30个氨基酸。
实施方案51包括根据实施方案1-50中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。
实施方案52包括根据实施方案1-51中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为5个氨基酸。
实施方案53包括根据实施方案1-51中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为15个氨基酸。
实施方案54包括根据实施方案1-51中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。
实施方案55包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案56包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案57包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案58包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案59包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
实施方案60包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案61包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案62包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案63包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案64包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
实施方案65包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案66包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案67包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案68包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案69包括根据实施方案46所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
实施方案70包括根据实施方案42所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案71包括根据实施方案42所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案72包括根据实施方案42所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案73包括根据实施方案42所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案74包括根据实施方案42所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
实施方案75包括一种根据下式的分离的多肽复合物：A-L-D(式II)，其中A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。
实施方案76包括根据实施方案75所述的分离的多肽复合物，其中Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽。
实施方案77包括根据实施方案75或76所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。
实施方案78包括根据实施方案76-77中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。
实施方案79包括根据实施方案76-77中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头将A的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。
实施方案80包括根据实施方案78所述的分离的多肽复合物，其中接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。
实施方案81包括根据实施方案79所述的分离的多肽复合物，其中接头将scFv轻链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。
实施方案82包括根据实施方案78所述的分离的多肽复合物，其中接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab重链多肽的N末端。
实施方案83包括根据实施方案79所述的分离的多肽复合物，其中接头将scFv重链可变结构域的C末端连接到Fab轻链多肽的N末端。
实施方案84包括根据实施方案76-83中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案85包括根据实施方案76-83中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案86包括根据实施方案77-83中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3:SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQID NO:5，并且其中CDR在HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案87包括根据实施方案77-83中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQID NO:11，并且其中CDR在LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
实施方案88包括根据实施方案76-87中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案89包括根据实施方案76-87中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案90包括根据实施方案89所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案91包括根据实施方案89所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案92包括根据实施方案76-91中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:25或27的氨基酸序列。
实施方案93包括根据实施方案76-92中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案94包括根据实施方案76-92中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案95包括根据实施方案94所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案96包括根据实施方案94所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案97包括根据实施方案76-96中任一者所述的分离的多肽复合物，其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24或26的氨基酸序列。
实施方案98包括根据实施方案77-97中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案99包括根据实施方案77-97中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案100包括根据实施方案99所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案101包括根据实施方案99所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:13或16的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案102包括根据实施方案77-101中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。
实施方案103包括根据实施方案77-102中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案104包括根据实施方案77-103中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案105包括根据实施方案104所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案106包括根据实施方案104所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:12或15的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案107包括根据实施方案77-106中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。
实施方案108包括根据实施方案75-107中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案109包括根据实施方案75-107中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案110包括根据实施方案109所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案111包括根据实施方案109所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含SEQID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案112包括根据实施方案75-112中任一者所述的分离的多肽复合物，其中scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。
实施方案113包括根据实施方案75-112中任一者所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为至少5个氨基酸。
实施方案114包括根据实施方案113所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度不超过30个氨基酸。
实施方案115包括根据实施方案114所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。
实施方案116包括根据实施方案115所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为5个氨基酸。
实施方案117包括根据实施方案115所述的分离的多肽复合物，其中接头的长度为15个氨基酸。
实施方案118包括根据实施方案115所述的分离的多肽复合物，其中接头包含SEQID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。
实施方案119包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案120包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案121包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案122包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案123包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
实施方案124包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案125包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案126包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案127包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案128包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
实施方案129包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案130包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案131包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案132包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv重链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案133包括根据实施方案80所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab重链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
实施方案134包括根据实施方案81所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
实施方案135包括根据实施方案81所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案136包括根据实施方案81所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
实施方案137包括根据实施方案81所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
实施方案138包括根据实施方案81所述的分离的多肽复合物，其中接头将Fab轻链多肽连接到scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
实施方案139包括根据实施方案77所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5；scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ IDNO:8；或者LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
实施方案140包括根据实施方案77所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8。
实施方案141包括根据实施方案77所述的分离的多肽复合物，其中Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中Fab重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中Fab轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中scFv重链可变结构域的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5；scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中scFv轻链可变结构域的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
实施方案142包括一种药物组合物，其包含：根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物；和药学上可接受的赋形剂。
实施方案143包括一种分离的重组核酸分子，其编码根据实施方案1-141中任一者所述的多肽复合物的多肽。
实施方案144包括一种根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗癌症的方法中。
实施方案145包括根据实施方案144所述的分离的多肽复合物，其中癌症具有表达EGFR的细胞。
实施方案146包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗结肠直肠癌(CRC)的方法中。
实施方案147包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗头部和颈部鳞状细胞癌(SCCHN)的方法中。
实施方案148包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的方法中。
实施方案149包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗前列腺癌的方法中。
实施方案150包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗乳腺癌的方法中。
实施方案151包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗结肠/直肠癌的方法中。
实施方案152包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗头部和颈部癌症的方法中。
实施方案153包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗食管胃癌的方法中。
实施方案154包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗肝癌的方法中。
实施方案155包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗宫颈癌的方法中。
实施方案156包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗卵巢癌的方法中。
实施方案157包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗膀胱癌的方法中。
实施方案158包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗肾癌的方法中。
实施方案159包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗胰腺癌的方法中。
实施方案160包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗对EGFR抑制剂治疗有抗性的对象的方法中。
实施方案161包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗具有KRAS突变的对象的方法中。
实施方案162包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗对EGFR抑制剂治疗有抗性且具有KRAS突变的对象的方法中。
实施方案163包括根据实施方案1-141中任一者所述的分离的多肽复合物，用于治疗胶质母细胞瘤的方法中。
实施例
实施例1：EGFR多肽复合物结合
评估EGFR多肽复合物Ab-1、Ab-2和Ab-3的EGFR和CD3ε结合。
Ab-1、Ab-2和Ab-3包含如表9中列出的序列。
表9.Ab-1、Ab-3和Ab-3序列
使用酶联免疫吸附测定(ELISA)评估Ab-1、Ab-2和Ab-3与EGFR和CD3的结合。生物素化的肽被捕获在中性链霉亲和素包被的板上。将在缓冲液中稀释的多肽复合物分子加入到抗原包被的板中。使用标准辣根过氧化物酶缀合的次级抗体来检测结合的多肽复合物。使用Graphpad Prism软件来计算获得50％最大信号(EC50)所需的多肽复合物的浓度。在图2中可以看到Ab-1和Ab-2与EGFR结合的数据，并且在图3中可以看到Ab-3与EGFR结合的数据。在图4中看到Ab-1和Ab-2与CD3结合的数据，并且在图5中看到Ab-3与CD3结合的数据。EC50数据见表10。
表10.
实施例2：人相对于Cyno EGFR和CD3的结合
使用Octet RED96仪器，通过生物层干涉测量法来评估Ab-1分子与人和食蟹猴EGFR的动力学结合。简而言之，生物传感器负载有抗原并且在缓冲液中基线化(baselined)。在溶液中以50nM、25nM、12.5nM和6.25nM滴定多肽分子，然后将其缔合到负载抗原的传感器上。在短暂的缔合期后，将传感器转移到缓冲液中，并且测量结合的多肽分子的解离。实验的时间和步骤在表11中示出。实时记录缔合和解离信号，并且使用仪器软件中的1:1结合模型进行分析。使用1:1结合模型的分析使得能够计算结合速率和解离速率常数以及亲和力KD。解离速率常数被转换成半衰期，如图6所示。
表11.
使用Octet RED96仪器，通过生物层干涉测量法来评估多肽分子与人和cyno CD3的动力学结合。简而言之，生物传感器负载有抗原并且在缓冲液中基线化。在溶液中以50nM、25nM、12.5nM和6.25nM滴定多肽分子，然后将其缔合到负载抗原的传感器上。在短暂的缔合期后，将传感器转移到缓冲液中，并且测量结合的多肽分子的解离。实验的时间和步骤在表12中示出。实时记录缔合和解离信号，并且使用仪器软件中的1:1结合模型进行分析。使用1:1结合模型的分析使得能够计算结合速率和解离速率常数以及亲和力KD。解离速率常数被转换成半衰期，如图7所示。
表12.
以标准的酶联免疫吸附测定(ELISA)形式，评估多肽复合物分子结合人和食蟹猴抗原、EGFR或CD3的能力。简而言之，与人Fc结构域融合的抗原被直接包被在高结合ELISA板上。然后将在缓冲液中稀释的多肽复合物分子加入到抗原包被的板中。使用标准辣根过氧化物酶缀合物次级抗体来检测结合的多肽复合物。结合曲线显示在图8(人EGFR)、图9(cynoEGFR)、图10(人CD3)和图11(cyno CD3)中。使用Graphpad Prism软件计算达到50％最大信号(EC50)(表13)所需的多肽复合物的浓度。
表13.
实施例2：EGFR多肽复合物的体外功效
使用EGFR阳性肿瘤细胞系HCT116和A431，在功能性体外肿瘤细胞杀伤测定中评估多肽复合物。使用来自Agilent的xCelligence实时细胞分析仪来测量肿瘤细胞杀伤，该分析仪依赖于传感器阻抗测量值(细胞指数)，所述传感器阻抗测量值随着肿瘤细胞在传感器表面上的粘附、扩散和扩增而增加。同样，随着肿瘤细胞被杀死，阻抗降低。每孔加入10,000个肿瘤细胞，并且允许其在96孔E板上粘附过夜。第二天，将在补充人血清的培养基中滴定的多肽复合物以及30,000个CD8+T细胞加入到孔中。每10分钟获取细胞指数测量值持续另外的72小时。然后将细胞指数乘以小时数(肿瘤细胞生长动力学)对多肽复合物的浓度作图，其中使用Graphpad Prism软件来计算降低肿瘤生长50％所需的浓度(IC50)。数据显示在图12(Ab-3，HCT116细胞)、图13(Ab-2，HCT116细胞)、图14(Ab-1，HCT116细胞)、图15(Ab-1，A431细胞)和表14中。
表14.
抗体 IC50(pM)HCT116细胞 IC50(pM)A431细胞
Ab-1 0.43 0.18
Ab-2 0.53 ND
Ab-3 0.47 ND
实施例3：在IV团注施用EGFR多肽复合物Ab-3后在食蟹猴中的药代动力学
针对Ab-3，在食蟹猴中评估了多肽分子的药代动力学和探索性安全性。简而言之，对体重大约3kg的食蟹猴以IV团注施用多肽，并且每天观察不良事件的迹象。没有观察到生活中的不良事件。在给药后，在特定时间点将血液收集在K2 EDTA管中，并且加工成血浆。血浆被冷冻储存直到分析。相对于在对照cyno血浆中稀释的参考标准，经由标准ELISA技术测量血浆中多肽分子的浓度。血浆浓度曲线符合代表分布和消除相的标准两相指数方程(图16)。药代动力学的拟合能够计算Cmax、半衰期、分布体积、清除率和7天曲线下面积(AUC)，如表15所示。
表15.
Ab-3(10μg/kg) Ab-3(3μg/kg)
CMax(nM) 1.66 0.17
t1/2(h) 1.30 0.32
Vd(L) 0.24 0.68
VSS(L) 1.08 0.63
CL(ml/h/kg) 41.72 500.62
BW(kg) 3.00 3.00
7天AUS(nM min) 75 5
实施例4：在IV团注施用EGFR多肽复合物Ab-3后在食蟹猴中的细胞因子释放在食蟹猴中评估在通过IV团注施用Ab-3后的细胞因子释放。简而言之，对体重大约3kg的食蟹猴以IV团注施用多肽，并且每天观察不良事件的迹象。没有观察到生活中的不良事件。在给药后，在特定时间点将血液收集在K2 EDTA管中，并且加工成血浆。血浆被冷冻储存直到分析。按照制造商的说明，使用来自BD biosciences的非人灵长类细胞计数Th1/Th2微珠阵列试剂盒来分析血浆样品的细胞因子。相对于设置有微珠阵列试剂盒的参考标准，计算血浆中干扰素γ、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素5、白细胞介素4和白细胞介素2的水平(图17)。
实施例5：在IV团注施用EGFR多肽复合物Ab-3后在食蟹猴中的血清肝酶
在食蟹猴中评估了在通过IV团注施用Ab-3后的全身肝酶。简而言之，对体重大约3kg的食蟹猴以IV团注施用多肽，并且每天观察不良事件的迹象。没有观察到生活中的不良事件。在给药后，在特定时间点将血液收集在K2 EDTA管中，并且加工成血浆。血浆被冷冻储存直到分析。分析血浆样品中作为潜在肝毒性迹象的肝酶天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的存在。对于给药后测试的所有时间点，AST和ALT水平都保持在正常范围内，表明没有肝毒性。AST和ALT按照在来自Millipore的市售试剂盒中提供的说明进行定量。相对于阳性对照参考标准，根据制造商的说明计算AST和ALT水平(图18)。
实施例6：EGFR多肽复合物结合
评估多肽复合物分子Ab-1和Ab-4结合EGFR和CD3ε的能力。Ab-4和Ab-1在抗CD3scFv和抗EGFR Fab之间具有不同的连接方向。在Ab-4中，抗CD3 scFv轻链连接到抗EGFRFab轻链(形式Vl，图1B)。在Ab-1中，抗CD3 scFv轻链连接到抗EGFR Fab重链(形式Vh，图1A)。在表16中提供了Ab-4的序列。
表16.Ab-4序列
使用标准ELISA格式测量结合。简而言之，将生物素化的抗原捕获在中性链霉亲和素包被的板上。然后将在缓冲液中稀释的多肽复合物分子加入到抗原包被的板中。使用标准辣根过氧化物酶缀合物次级抗体来检测结合的多肽复合物。使用Graphpad Prism软件来计算获得50％最大信号(EC50)所需的多肽复合物的浓度。在图19中示出了Ab-4和Ab-1与EGFR结合的结合曲线，并且在图20中示出了Ab-4和Ab-1与CD3ε结合的结合曲线。EC50数据在表17中示出。
表17.
实施例7：EGFR多肽复合物的体外功效
使用EGFR阳性肿瘤细胞系HCT116，在功能性体外肿瘤细胞杀伤测定中评估多肽复合物Ab-1和Ab-4。使用来自Agilent的xCelligence实时细胞分析仪来测量肿瘤细胞杀伤，该分析仪依赖于传感器阻抗测量值(细胞指数)，所述传感器阻抗测量值随着肿瘤细胞在传感器表面上的粘附、扩散和扩增而增加。同样，随着肿瘤细胞被杀死，阻抗降低。每孔加入10,000个肿瘤细胞，并且允许其在96孔E板上粘附过夜。第二天，将在补充人血清的培养基中滴定的多肽复合物以及30,000个CD8+T细胞加入到孔中。每10分钟获取细胞指数测量值持续另外的72小时。然后将细胞指数乘以小时数(肿瘤细胞生长动力学)对多肽复合物的浓度作图，其中使用Graphpad Prism软件来计算降低肿瘤生长50％所需的浓度(IC50)。肿瘤细胞杀伤数据在图21中示出。IC50数据在表18中提供。
表18.
抗体 IC50(pM)HCT116细胞
Ab-1 0.5
Ab-4 9.0
实施例8：在连续IV输注EGFR多肽复合物Ab-1后在食蟹猴中的药代动力学
针对Ab-1，在食蟹猴中评估了多肽分子的药代动力学和探索性安全性。简而言之，向体重大约3kg的食蟹猴皮下植入输注泵。两周后，用多肽给药溶液填充该泵，并且经由持续输注施用。研究了三种不同的浓度，5ug/kg/天、15ug/kg/天和30ug/kg/天。在开始给药后，在特定时间点将血液收集在K2 EDTA管中，并且加工成血浆。血浆被冷冻储存直到分析。相对于在对照cyno血浆中稀释的参考标准，经由标准ELISA技术测量血浆中多肽分子的浓度。绘制血浆浓度随时间变化的曲线，如图22所示，并且计算的CMax值在表19-21中提供。
表19.
Ab-1 5ug/kg/天 单位 剂量耐受/不耐受？
CMAX 0.025 nM 耐受
表20.
Ab-1 15ug/kg/天 单位 剂量耐受/不耐受？
CMAX 0.031 nM 耐受
表21.
Ab-1 30ug/kg/天 单位 剂量耐受/不耐受？
CMAX 0.208 nM 不耐受
实施例9：在连续IV输注EGFR多肽复合物Ab-1后在食蟹猴中的细胞因子释放
在食蟹猴中评估通过连续IV输注施用Ab-1后的细胞因子释放。简单地说，向体重大约3kg的食蟹猴皮下植入输注泵。两周后，用多肽给药溶液填充该泵，并且经由持续输注施用。研究了三种不同的浓度，5ug/kg/天、15ug/kg/天和30ug/kg/天。在开始给药后，在特定时间点将血液收集在K2 EDTA管中，并且加工成血浆。按照制造商的说明，使用来自BDbiosciences的非人灵长类细胞计数Th1/Th2微珠阵列试剂盒来分析血浆样品的细胞因子。相对于设置有微珠阵列试剂盒的参考标准，计算血浆中的干扰素γ、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素5、白细胞介素4和白细胞介素2水平。图23A-23B显示了三种不同浓度的Ab-1的血浆IL-6水平随时间的变化。

Claims (143)

1.一种根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-B
(式I)
其中
A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；
B包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’，其中所述Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽，所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述Fab重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ IDNO:19和HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中所述CDR在所述HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰；并且
L包含将A连接到B的接头。
2.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述Fab轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21、LC-CDR2：SEQ ID NO:22和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中所述CDR在所述LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
3.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。
4.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述scFv重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5，并且其中所述CDR在所述HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
5.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述scFv轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11，并且其中所述CDR在所述LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
6.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含与根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
9.根据权利要求7所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
10.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列。
11.根据权利要求2所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求2所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
13.根据权利要求2所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
14.根据权利要求2所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
15.根据权利要求2所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ IDNO:24或26的氨基酸序列。
16.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
17.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
18.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
19.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的所述至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
20.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。
21.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
22.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
23.根据权利要求22所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
24.根据权利要求22所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的所述至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
25.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。
26.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
27.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
28.根据权利要求27所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
29.根据权利要求27所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的所述至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
30.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。
31.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的C末端连接到B的N末端。
32.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的N末端连接到B的C末端。
33.根据权利要求31所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的C末端连接到所述Fab重链多肽的N末端。
34.根据权利要求32所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的N末端连接到所述Fab重链多肽的C末端。
35.根据权利要求31所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的C末端连接到所述Fab轻链多肽的N末端。
36.根据权利要求32所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的N末端连接到所述Fab轻链多肽的C末端。
37.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域。
38.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv重链可变结构域。
39.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域。
40.根据权利要求3所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv重链可变结构域。
41.根据权利要求36所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的N末端。
42.根据权利要求35所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端。
43.根据权利要求36所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv重链可变结构域的N末端。
44.根据权利要求35所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv重链可变结构域的C末端。
45.根据权利要求34所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的N末端。
46.根据权利要求33所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端。
47.根据权利要求34所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv重链可变结构域的N末端。
48.根据权利要求33所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv重链可变结构域的C末端。
49.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为至少5个氨基酸。
50.根据权利要求49所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度不超过30个氨基酸。
51.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。
52.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为5个氨基酸。
53.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为15个氨基酸。
54.根据权利要求1所述的分离的多肽复合物，其中所述接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。
55.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
56.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
57.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
58.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
59.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
60.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
61.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
62.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
63.根据权利要求46的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变区的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ IDNO:32的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
64.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
65.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
66.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
67.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
68.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
69.根据权利要求46所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
70.根据权利要求42所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
71.根据权利要求42所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
72.根据权利要求42所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
73.根据权利要求42所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
74.根据权利要求42所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
75.一种根据下式的分离的多肽复合物：
A-L-D
(式II)
其中
A包含结合至CD3的单链可变片段(scFv)；
D包含结合至EGFR的抗原结合片段(Fab)或Fab’；并且
L包含将A的C末端连接到D的N末端的接头。
76.根据权利要求75所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab或Fab’包含有包含Fab轻链可变结构域的Fab轻链多肽链和包含Fab重链可变结构域的Fab重链多肽。
77.根据权利要求76所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含scFv轻链可变结构域和scFv重链可变结构域。
78.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的C末端连接到所述Fab重链多肽的N末端。
79.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将A的C末端连接到所述Fab轻链多肽的N末端。
80.根据权利要求79所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述scFv轻链可变结构域的C末端连接到所述Fab重链多肽的N末端。
81.根据权利要求79所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述scFv轻链可变结构域的C末端连接到所述Fab轻链多肽的N末端。
82.根据权利要求79所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述scFv重链可变结构域的C末端连接到所述Fab重链多肽的N末端。
83.根据权利要求79所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述scFv重链可变结构域的C末端连接到所述Fab轻链多肽的N末端。
84.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述Fab重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20，并且其中所述CDR在所述HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
85.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述Fab轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23，并且其中所述CDR在所述LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
86.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述scFv重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ IDNO:5，并且其中所述CDR在所述HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
87.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述scFv轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ IDNO:11，并且其中所述CDR在所述LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。
88.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含与根据SEQID NO:25或27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
89.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
90.根据权利要求89所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
91.根据权利要求89所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:25或27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:25或27的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
92.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链多肽包含根据SEQ IDNO:25或27的氨基酸序列。
93.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQID NO:24或26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
94.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
95.根据权利要求94所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
96.根据权利要求94所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24或26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24或26的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
97.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ IDNO:24或26的氨基酸序列。
98.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
99.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQID NO:13或16的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
100.根据权利要求99所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
101.根据权利要求99所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含SEQ ID NO:13或16的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:13或16的所述至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
102.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv重链可变结构域包含根据SEQ ID NO:13或16的氨基酸序列。
103.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含与根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
104.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
105.根据权利要求104所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
106.根据权利要求104所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含SEQ ID NO:12或15的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:12或15的所述至少100个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
107.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv轻链可变结构域包含根据SEQ ID NO:12或15的氨基酸序列。
108.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含与根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
109.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少150个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
110.根据权利要求109所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
111.根据权利要求109所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含SEQ ID NO:14或17的至少225个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:14或17的所述至少225个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
112.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述scFv包含根据SEQ ID NO:14或17的氨基酸序列。
113.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为至少5个氨基酸。
114.根据权利要求113所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度不超过30个氨基酸。
115.根据权利要求114所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。
116.根据权利要求115所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为5个氨基酸。
117.根据权利要求115所述的分离的多肽复合物，其中所述接头的长度为15个氨基酸。
118.根据权利要求115所述的分离的多肽复合物，其中所述接头包含SEQ ID NO:28(GGGGSGGGGSGGGGS)、SEQ ID NO:29(GGGGS)或SEQ ID NO:30(GGGGSGGGS)的氨基酸序列。
119.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
120.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
121.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
122.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:31的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
123.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到所述scFv重链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
124.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
125.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
126.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
127.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:24的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:24的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:32的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
128.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
129.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含与根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
130.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
131.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
132.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含SEQ ID NO:26的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:26的所述至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:33的所述至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
133.根据权利要求80所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab重链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab轻链多肽包含根据SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab重链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。
134.根据权利要求81所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含与根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
135.根据权利要求81所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少400个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
136.根据权利要求81所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
137.根据权利要求81所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:27的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与SEQ ID NO:34的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％的序列同一性。
138.根据权利要求81所述的分离的多肽复合物，其中所述接头将所述Fab轻链多肽连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端，并且其中所述Fab重链多肽包含根据SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且连接到所述scFv轻链可变结构域的C末端的所述Fab轻链多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
139.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述Fab重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；所述Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述Fab轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；所述scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述scFv重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；或HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5；所述scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述scFv轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8；或者LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
140.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述Fab重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；所述Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述Fab轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；所述scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述scFv重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:1、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:3；所述scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述scFv轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:6、LC-CDR2：SEQ ID NO:7和LC-CDR3：SEQ ID NO:8。
141.根据权利要求77所述的分离的多肽复合物，其中所述Fab重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述Fab重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含HC-CDR1：SEQ ID NO:18、HC-CDR2：SEQ ID NO:19、HC-CDR3：SEQ ID NO:20；所述Fab轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述Fab轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:21；LC-CDR2：SEQ ID NO:22；和LC-CDR3：SEQ ID NO:23；所述scFv重链可变结构域包含互补决定区(CDR)：HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，其中所述scFv重链可变结构域的所述HC-CDR1、所述HC-CDR2和所述HC-CDR3包含：HC-CDR1：SEQ ID NO:4、HC-CDR2：SEQ ID NO:2和HC-CDR3：SEQ ID NO:5；所述scFv轻链可变结构域包含互补决定区(CDR)：LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述scFv轻链可变结构域的所述LC-CDR1、所述LC-CDR2和所述LC-CDR3包含LC-CDR1：SEQ ID NO:9、LC-CDR2：SEQ ID NO:10和LC-CDR3：SEQ ID NO:11。
142.一种药物组合物，其包含：
(i)根据权利要求1-138中任一项所述的分离的多肽复合物；和
(ii)药学上可接受的赋形剂。
143.一种分离的重组核酸分子，其编码根据权利要求1-141中任一项所述的多肽复合物的多肽。
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