CN1164267C - 绿原酸的医学用途及它的制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了从天然植物中提取获得的绿原酸，经药理试验证明其具有明显的抗SARS病毒活性，将具有该活性的绿原酸为主要活性成份，根据不同要求加入赋形剂、辅剂或载体，配制成不同的剂型。它们可作治疗、预防SARS病毒引起疾病的药物。

Description

绿原酸的医学用途及它的制剂

技术领域

本发明涉及具有生物活性的化合物，更具体指绿原酸、及它的抗SARS病毒活性用作预防和治疗非典型性肺炎药物。

背景技术

绿原酸、异绿原酸、黄酮类物质等存在于多种植物中，例如金银花、咖啡、杜仲、茵陈蒿等植物中。

金银花又名双花、银花、忍冬花，为忍冬科多年生缠绕性木质藤本植物忍冬的花蕾。我国南北各地均有分布。夏初当花蕾含苞未放时采摘，晾晒或阴干，生用或炒用。性寒，味甘，入肺、胃、大肠经。功能：清热解毒、疏散风热、凉血止痢。祖国医学认为金银花甘寒质轻，其气清香，既能清热解毒，又能宣散风热，清解之中能宣透，为治疗外感风热、温病初期、痈疮疖肿之要药。我国民间常以金银花、生甘草适量泡茶饮用，可用于夏季防暑抗温，清热解渴。亦有取金银花、麦冬、桔梗、乌梅、甘草等泡饮治疗急慢性咽喉炎的。

绿原酸(Chlorogenic acid)，异名：咖啡鞣酸，是苯丙烯酰奎宁酸酯类化合物中最重要的天然产物之一，主要存在于一些具有清热解毒的传统中药，如金银花之中，是这些中药的功效成分之一。绿原酸的结构式如下：

绿原酸具有较广泛的抗菌作用。口服或腹腔注射时，可提高大鼠的中枢兴奋性。可增加大鼠及小鼠的小肠蠕动和大鼠子宫的张力。有利于胆的作用，能增进大鼠的胆汁分泌。对人有致敏作用，吸入含有本品的植物尘埃后，可发生气喘、皮炎等，但食入后可经小肠分泌物作用，变为无致敏性物质。有止血、增高白血球，具有缩短血凝及出血时间的作用。绿原酸毒性很小，幼大鼠口服LD₅₀大于1g/Kg腹腔注射大于0.25g/Kg。

发明内容

本发明的目的是提供一种绿原酸的医学新用途，特别是具有抗SARS病毒活性，可用作预防、治疗SARS病毒疾病的药物。

本发明的另一目的是将具有抗SARS病毒活性的绿原酸作为主要成份配制成合适的剂型。

本发明的绿原酸是从植物金银花经水煎二次，煎液减压浓缩至一定体积，稀石灰乳悬浊液调PH到碱性，离心分离，沉淀物与2倍量乙醇研匀搅拌加入稀硫酸使PH至3，离心，上清液用2N NaOH调PH，得沉淀物水重结晶，得绿原酸纯品。

结构证明为：

                             (绿原酸结构)

绿原酸经药理试验证明其具有明显的抗SARS病毒活性，活性测定采用Vero-E6细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测样品绿原酸对病毒感染细胞的保护作用检测指标为细胞变性反应，以及感染细胞保护率。

病毒株为BJ-01，筛选用样品7个稀释度，结果证明其具有明显的抗SARS病毒活性。

根据绿原酸具有明显的抗SARS病毒活性，再根据需要加入辅剂制成不同剂型。

本发明含有有效量绿原酸与药物可接受的赋形剂、载体或稀释剂配制成不同的药物剂型，它可将绿原酸与维生素C与口服制剂中的典型药物载体和赋形剂制成口服剂，药物载体和赋形剂包括乳糖；淀粉及其衍生物类如玉米淀粉、羧甲基淀粉钠等；纤维素衍生物，诸如甲基和乙基纤维素；明胶；无机类化合物如轻质氧化镁、滑石粉等；油，诸如植物油、芝麻油等；包合剂如β-环糊精；以及二元醇类如聚乙二醇。口服制剂的可做成片剂、胶囊、乳剂、溶液等，也可应用于固体分散片、脂质体制剂、靶向制剂和控释制剂等。

本发明含有有效量绿原酸与药物可接受的赋形载体或稀释剂配制成注射剂包括等渗盐水、5％葡萄糖水溶液、注射用水、茶油、大豆油、麻油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸苄酯；吐温80、卵磷脂、脱氧胆酸钠、蛋黄磷脂、聚乙烯吡咯烷酮；醋酸、醋酸钠、枸橼酸及钠盐、乳酸、酒石酸及钠盐、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠和碳酸钠；明胶、羧甲基纤维素钠、果胶、山梨醇溶液；肌酐、甘氨酸；亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚磷酸钠、硫代硫酸钠、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯及乙酯酚、三氯叔丁醇；利多卡因；脑磷脂、大豆磷脂等，注射制剂的典型形式为粉针剂、混悬型注射剂等。

在片剂中，可将绿原酸与用碳酸氢钠与酒石酸或枸橼酸混合组成的崩解剂一起制成泡腾片，当遇水时产生二氧化碳气体使片剂迅速崩解。

绿原酸也可制成气雾剂，例如采用聚氯乙烯糊状树脂苯二甲酸二丁酯、苯二甲酸二辛酯、硬脂酸钙、硬脂酸锌等配制而成气雾剂。

具体实施方式

取金银花水煎2次，煎液减压浓缩至1∶2，加入20％石灰乳悬浊液调至pH10左右，离心分离沉淀物，将沉淀与2倍量乙醇研匀，在搅拌下滴加50％硫酸，溶液调至pH3，充分搅拌，离心除去固体物。滤液以2N NaOH调至pH6，回收乙醇，减压烘干，得粗提物。取粗提物溶于少量水，进行聚酰胺柱色谱分离，以梯度乙醇-水洗脱，聚酰胺薄层检测洗脱液，合并含有绿原酸部分，减压抽干。以水进行重结晶，得绿原酸纯品。

                        绿原酸抗SARS病毒活性结果

测试项目：绿原酸抗SARS病毒活性的筛选(病毒-细胞水平模型)

测试原理：以Vero-E6细胞作为病毒宿主细胞(易感细胞)，测试样品对病毒感染细胞的保护作用，检测指标为细胞变性反应(CPE)以及感染细胞保护率。

测试材料和方法：绿原酸

病毒株：BJ-01

样品处理：样品溶于培养液或DMSO，配成适宜的初始浓度，5倍稀释，各7个稀释度。

测试方法：把Vero-E6细胞接种于96孔培养板，置37℃，5％CO2孵箱培养，分别加入SARS病毒和不同稀释浓度的样品，设病毒对照、细胞对照和样品对照。每日镜下观察结果，记录CPE，并用中性红染色测定OD值，参照对照进行样品抗SARS病毒活性作用的计算和评价。

                测试结果

浓度(ug/ml)        CPE         感染细胞保护率

100                -           3.01

20                 -           2.54

4                  -           2.65

0.8                -           2.77

0.16               -           2.38

0.032              -           2.33

0.0064             +           1.21

细胞病变法(CPE)：以加号表示细胞病变程度，＜25％+，25％～50％++，50％～75+++，＞75％++++。

感染细胞保护率：通过比较病毒对照、细胞对照和样品对照的OD值，计算样品对病毒感染细胞的保护活性，保护率＞1.5倍率，初步被认为样品对病毒感染细胞具有一定的保护活性。

*样品细胞毒性：如果样品的细胞毒性与细胞对照比＞50％时，不做CPE评价和保护率计算。

上述结果显示该化合物具有明显的抗SARS病毒活性作用。而绿原酸的LD₅₀大于1g/Kg，腹腔注射大于0.25g/Kg证明毒性较低。

实施例一

选用下列用量的绿原酸与附加剂：(化合物∶维生素＝1∶1w/w)

绿原酸                400克

维生素C               400克

羟丙维生素            20克

微粉硅胶              60克

预胶化淀粉            120克

硬脂酸镁              适量

制成                  1000粒

将绿原酸与附加剂混合均匀，用10％预胶化淀粉浆作为黏合剂，湿法制粒，烘干，加入适量硬脂酸镁混合，压制成片剂。

实施例二

选用下列用量的绿原酸与附加剂：(化合物∶维生素＝1∶9)

绿原酸                  80克

维生素C                 720克

羟丙维生素              20克

微粉硅胶                48克

乙醇                    适量

硬脂酸镁                适量

制成                    900粒

将绿原酸与羟丙纤维素及微粉硅胶混合，用适量70％乙醇做湿润剂，湿法制粒，过40目筛选成颗粒，烘干，加入硬脂酸镁，混合，装入硬胶囊。

实施例三

选用下列用量的绿原酸与附加剂：(化合物∶维生素＝2∶1)

绿原酸                    800克

维生素C                   400克

蔗糖                      40克

防腐剂                    适量

蒸馏水                    适量

制成                      20000ml

取蒸馏水适量，加入绿原酸，边加热边搅拌使溶解，过滤。另将蔗糖和防腐剂用蒸馏水加热溶解，在搅拌下缓缓加入上述溶液中，加蒸馏水至全量，混合，冷藏，过滤，灌封，灭菌，得口服液。

实施例四

选用下列用量的绿原酸与附加剂：(化合物∶维生素＝6∶1)

绿原酸                  2400克

维生素C                 400克

吐温80                  适量

注射用水                适量

制成                    45000ml

取适量注射用水，加入绿原酸和药用辅料、赋形剂，加热，搅拌使充分溶解，加入4％吐温80，充分搅匀，过滤，加盐酸调PH至6.8，加注射用水至足量，中空纤维超滤，精滤，灌封，灭菌，得注射液。

Claims (6)

1、一种结构如下的绿原酸的医学用途，其特征在于在制备预防、治疗SARS病毒引起疾病的药物中应用

2、根据权利要求1所述的绿原酸的医学用途，其特征在于绿原酸与药物赋形剂、载体或稀释剂配制成制剂。

3、根据权利要求2所述的绿原酸的医学用途，其特征在于制成口服的赋型剂、载体或稀释剂为不同的药物剂型，将绿原酸、维生素C与口服制剂中的典型药物载体和赋形剂制成口服剂，药物载体和赋形剂包括乳糖；淀粉及其衍生物类有玉米淀粉、羧甲基淀粉钠；纤维素衍生物有甲基和乙基纤维素、明胶；无机类化合物有轻质氧化镁、滑石粉；油有植物油、芝麻油；包合剂以及二元醇类口服制剂的可做成片剂、胶囊、乳剂、溶液，也可应用于固体分散片、脂质体制剂、靶向制剂和控释制剂。

4、根据权利要求2所述的绿原酸的医学用途，其特征在于制成针剂的赋形载体或稀释剂配制成注射剂包括等渗盐水、5％葡萄糖水溶液、注射用水、茶油、大豆油、麻油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸苄酯；吐温80、卵磷脂、脱氧胆酸钠、蛋黄磷脂、聚乙烯吡咯烷酮；醋酸、醋酸钠、枸橼酸及钠盐、乳酸、酒石酸及钠盐、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠和碳酸钠；明胶、羧甲基纤维素钠、果胶、山梨醇溶液；肌酐、甘氨酸；亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚磷酸钠、硫代硫酸钠、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯及乙酯酚、三氯叔丁醇；利多卡因；脑磷脂、大豆磷脂注射制剂的典型形式为粉针剂、混悬型注射剂。

5、根据权利要求2所述的绿原酸的医学用途，其特征在于口服片采用碳酸氢钠酒石酸，枸橼酸制成泡腾片。

6、根据权利要求2所述的绿原酸的医学用途，其特征在于该配方采用聚氯乙稀糊状树脂、苯二甲酸二丁酯、苯二甲酸二辛酯、硬脂酸钙、硬脂酸锌配制成气雾剂。