CN107056959A - 菊芋中抗hsv‑1、rsv、ev‑71成分及制备 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药活性成分生产提取工艺以及有效成分鉴定领域，涉及菊芋抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV‑71病毒有效成分的鉴定和该有效成分提取分离的新工艺以及在制药领域的新用途，具体涉及利用抗病毒追踪的方式提取制备菊芋抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV‑71病毒的有效成分。具体步骤包括水回流提取菊芋，醇沉，抗病毒，溶解沉淀，酸碱除杂、石油醚除脂溶性杂质、Sevag法脱蛋白、活性炭脱色，最后冷冻干燥得白色固体，进行molisch反应和体外抗病毒实验，确定有效成分为菊芋多糖。本发明采用了抗病毒追踪的方法发现了菊芋中抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV‑71病毒有效成分，其作为天然提取物具有安全性高等特点。
Description
技术领域
本发明涉及中药活性成分生产提取工艺以及有效成分鉴定领域，涉及菊芋抗病毒有效部位提取的新思路新方法以及在制药领域的新用途，具体涉及利用抗病毒追踪的方式提取分离纯化菊芋抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的有效成分。
背景技术
最近几年以来世界各地都受到了各种病毒的入侵，比如SARS病毒，甲型H1N1等，每次病毒的爆发都会引起人类的恐慌以及死亡。所以找到合适的抗病毒药物迫在眉睫。
单纯疱疹病毒能引起人类多种疾病，如龈口炎、角膜结膜炎、脑炎以及生殖系统感染和新生儿的感染。在感染宿主后，常在神经细胞中建立潜伏感染，激活后又会出现无症状的排毒，在人群中维持传播链，周而复始的循环。
呼吸道合胞病毒是导致婴幼儿急性下呼吸道感染最重要的病原体之一，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染，还可引起间质性肺炎及毛细支气管炎等同时也可以引起老年人和免疫缺陷病人住院和肺炎死亡。
肠病毒在病毒学上属于微小病毒科中的肠病毒群，EV-71是目前肠道病毒群中最晚发现的病毒，它的感染性极而强且致病率较高，尤其是在神经系统方面的并发症。EV-71病毒是引起婴幼儿手足口病的主要病原体之一，也可引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹等多种神经系统疾病。
菊芋俗称洋姜、鬼子姜，属菊科Compositac，是一种向日葵属多年生宿根性草本植物，菊芋一般在秋季开花结果，此花形似菊，可食部分一般为块茎，土壤里生长的块茎富含多糖和淀粉等多种成分，菊芋具有抗氧化、抗癌、抗细菌和抗真菌等活性，可作为解热、镇痛、抗炎和抗痉挛的药物治疗骨折、肿胀、皮肤创伤和疼痛症等。
菊芋对单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒具有一定的治疗作用，实验表明菊芋提取的有效成分对单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒有很好的治疗作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是明确了菊芋抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的有效成分，并为该有效成分的分离提取提供了一种利用抗病毒追踪的方式制备菊芋抗病毒有效成分的新方法。 该有效成分从菊科植物植物菊芋中提取分离得到可以用于单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒感染的治疗。该方法可以较为简便的对以上有效成分进行分离提取。
本发明的优点是，本发明首次分离出了菊芋中具有抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的一种有效成分，并发明了一种抗病毒追踪的方法对该有效成分进行了制备，此分离方法目的性强，简单节省了大量的人力物力，优于传统的系统分离。制备得到的有效成分对单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒具有较好的治疗作用。
本发明菊芋抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的有效成分为菊芋多糖，该有效成分的制备方法，包括如下步骤：
（1）取一定量的菊芋药材用10倍的水加热回流提取2次，第一次2小时，第二次1.5小时；
（2）合并两次的提取液减压浓缩，浓缩至每毫升药液含有1克的药材，然后加乙醇调节乙醇的浓度为,80%，静置48小时。过滤得到沉淀和上清液；
（3）将上清液回收乙醇，将沉淀用水溶解，分别进行抗病毒实验。实验显示沉淀的抗病毒效果较好；
（4）在搅拌下，向沉淀溶解液中慢慢滴入石灰乳，调节pH值至11.0，静置片刻后，放入80℃水浴锅中保温1 h，抽滤除去不溶物，收集滤液；向滤液中缓慢滴入磷酸，并不断搅拌，调节pH值至8.0，用离心机离心(4000 r/min，15 min)分离，收集离心液；
（5）向离心液中加入10倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复3次，除去脂溶性杂质；
（6）采用Sevag法脱除提取液中的蛋白质，提取液：Sevag试剂=5:1（v/v），Sevag试剂为氯仿：正丁醇=5:1（v/v）。将氯仿和正丁醇混合均匀，在不断搅拌下缓慢倒入装有提取液的烧杯中，保鲜膜密封，用磁力搅拌器搅拌40 min，倒入分液漏斗中，静止分层。液体分3层，上层为浸提液层，中间层为变性蛋白质层，下层为Sevag试剂层，收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作5次，使提取液中的蛋白质脱除完全；
（7） 称取活性炭（用量为5 g/L）倒入提取液中，搅拌均匀后，放于80℃恒温水浴锅中保温30 min，趁热抽滤，将滤液冷却至室温；
（8）将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻24 h，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥，干燥好后将粉末装入ep管中贴上标签备用；
（9）将（8）得到的粉末进行molisch反应，结果呈阳性，确定该成分为菊芋多糖；
（10）将（8）得到的粉末溶解进行体外抗病毒实验，实验结果显示菊芋多糖有很好的抗病毒效果。
具体实施方式
实例1（1）称取一定量的菊芋加10倍量加热回流提取两次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并两次提取液，减压浓缩至每毫升药液含有1克的药材，加乙醇调节溶液乙醇的浓度为80%，静置48小时。
（2）将（1）得到的醇沉液减压抽滤，得到沉淀，将沉淀用蒸馏水超声溶解。
（3）将（2）得到的溶液进行酸碱除杂、石油醚除脂溶性杂质、Sevag法脱蛋白、活性炭脱色，最后冷冻干燥得白色固体。
（4）将（3）中得到的白色粉末进行molisch反应和体外抗病毒实验，实验结果显示其抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒效果较好。
Claims (10)
1.一种菊芋中具有抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的有效成分和一种利用抗病毒追踪的方式提取分离纯化该有效成分的工艺方法，其特征在于该有效成分为菊芋多糖。
2.首先利用水提醇沉，然后进行酸碱除杂、石油醚除脂溶性杂质、Sevag法脱蛋白、活性炭脱色，最后冷冻干燥得白色固体，经molisch反应鉴定为菊芋多糖。
3.根据权利要求1所述的有效成分其特征在于该有效成分为菊芋多糖。
4.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于菊芋水回流提取的料液比为1：10，提取次数两次，提取时间为第一次2小时，第二次1.5小时。
5.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于水提液的浓缩液浓度为1ml药液含有1g的药材，醇沉浓度为80%，醇沉时间为48小时。
6.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于醇沉之后进行减压抽滤，得到沉淀和上清液，然后进行抗病毒实验得到沉淀为抗病毒有效部位。
7.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于用氢氧化钠和磷酸进行酸碱除杂，然后再用石油醚除去脂溶性杂质。
8.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于用Sevag法脱蛋白和用活性炭脱色，最后冷冻干燥得白色固体。
9.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于molisch反应为阳性，鉴定该有效成分成分为菊芋多糖。
10.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于将菊芋多糖进行抗病毒实验，得到菊芋多糖为抗单纯疱疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、肠道EV-71病毒的有效成分。
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|---|---|---|---|---|
| CN111346086A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-06-30 | 鲁东大学 | 一种化合物在制备抗病毒药物中的应用 |
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