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CN116234577A - 用于治疗和预防covid-19的sars-cov-2抗体 - Google Patents

用于治疗和预防covid-19的sars-cov-2抗体 Download PDF

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CN116234577A
CN116234577A CN202180056725.0A CN202180056725A CN116234577A CN 116234577 A CN116234577 A CN 116234577A CN 202180056725 A CN202180056725 A CN 202180056725A CN 116234577 A CN116234577 A CN 116234577A
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antibody
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antigen
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R·加瑟
M·艾瑟
P·麦克塔尼二世
卢悅明
R·M·瓦基
杜群
J·斯坦哈特
S·拉詹
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AstraZeneca UK Ltd
Original Assignee
AstraZeneca UK Ltd
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Abstract

本披露提供了与SARS‑CoV‑2的刺突蛋白特异性结合的抗体及其抗原结合片段，以及使用此类抗体及其抗原结合片段预防和治疗受试者的2019冠状病毒病(COVID‑19)的方法。

Description

用于治疗和预防COVID-19的SARS-COV-2抗体
1.相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年8月10日提交的美国临时申请号63/063,862和2020年11月10日提交的美国临时申请号63/112,104的优先权权益，将其各自通过援引以其全文并入本文。
2.技术领域
本披露涉及通常涉及使用抗体及其抗原结合片段预防和治疗受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法。
3.背景技术
由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的疾病冠状病毒2019(COVID19)已经变成全球大流行。截至2020年7月，全球已确认超过1700万COVID-19病例和60万例由其造成的死亡。该病毒能够通过感染者咳嗽、打喷嚏或说话时从鼻子或口腔排出的小飞沫在人与人之间传播。潜伏期(从暴露到症状发作的时间)范围为0到24天，平均为3-5天，但是在恢复后的这段时间期间可能具有传染性。大多数感染SARS-CoV-2的人在暴露11.5天内出现包括发烧、咳嗽和呼吸困难的症状。该病毒对患有2型糖尿病、心脏病、慢性阻塞性肺病(COPD)和/或肥胖症的高龄患者具有更大的影响。大多数感染该病毒的患者具有轻度症状，但在一些患者中，肺部感染很严重，导致严重的呼吸窘迫甚至死亡。
目前尚无经批准的疫苗，并且也没有获得科学界和医学界批准的具体治疗方法，但是正在研究几种疫苗和抗病毒方法。例如，因为针对病毒表面刺突(S)糖蛋白的人单克隆抗体(mAb)介导对其他冠状病毒(包括几种严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS))的免疫，所以已经假设靶向SARS-CoV-2刺突蛋白的人mAb可能有希望用于预防和治疗SARS-CoV-2感染。迫切需要预防和治疗COVID-19的方法。
4.发明内容
本文提供了治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法，该方法包括：向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VHCDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VHCDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VLCDR2和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLCDR3。
在一方面，提供了用于在治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法中使用的与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，该方法包括：向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VHCDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VHCDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VLCDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
在一方面，提供了用于在治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法中联合使用的与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，该方法包括：向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
在一方面，提供了用于在治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法中联合使用的与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段和与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段，该方法包括：向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些方面，该方法包括施用约150mg的第一抗体或其抗原结合片段和约150mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该方法包括施用约300mg的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该方法包括施用约500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约500mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该方法包括施用约1500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约1500mg的第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段在分开的药物组合物中施用。
在一些方面，依序施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，在同一天施用第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或抗原结合片段。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段在第二抗体或抗原结合片段之前施用。在一些方面，第二抗体或抗原结合片段在第一抗体或抗原结合片段之前施用。
在一些方面，肠胃外施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肠胃外施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肠胃外施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，静脉内施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，静脉内施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，静脉内施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由静脉内输注施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，以约20mg/分钟的速率经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，以约20mg/分钟的速率经由静脉内输注施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，以约20mg/分钟的速率经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，同时施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，肌内施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肌内施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肌内施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，经由直接三角肌肌内注射施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由直接三角肌肌内注射施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由直接三角肌肌内注射施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，该施用预防COVID-19。
在一些方面，受试者在施用时未患有COVID-19，并且该施用预防或降低COVID-19的一种或多种症状的严重程度。
在一些方面，受试者患有COVID-19的风险增加。在一些方面，受试者是医务工作人员。
在一些方面，受试者已经暴露于SARS-CoV-2。在一些方面，受试者已知没有暴露于SARS-CoV-2。
在一些方面，受试者在施用时患有有症状的COVID-19，并且该施用使COVID-19的一种或多种症状的严重程度降低、或预防COVID-19的一种或多种症状的严重程度增加。
在一些方面，该一种或多种症状选自由以下组成的组：发烧、干咳、呼吸困难、咽痛、疲劳或其组合。
在一些方面，该施用治疗COVID-19。
在一些方面，该施用导致第一抗体或其抗原结合片段和/或第二抗体或其抗原结合片段的血清浓度足以中和SARS-CoV-2。
在一些方面，该施用导致该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段在该受试者的鼻腔液体中积累。
在一些方面，受试者是人。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的可变轻链(VL)。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的可变轻链(VL)。在一些方面，(i)第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的可变轻链(VL)；以及(ii)第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的可变轻链(VL)。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区。在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区。在一些方面，重链恒定区是人IgG1重链恒定区。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区。在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区。在一些方面，轻链恒定区选自由人IgGκ和IgGλ轻链恒定区组成的组。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变的重链恒定区。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变的重链恒定区。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变的重链恒定区。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有TM突变的重链恒定区。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有TM突变的重链恒定区。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段包含：含有TM突变的重链恒定区。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变和TM突变的重链恒定区，并且第二抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变和TM突变的重链恒定区。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。在一些方面，(i)第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链，以及(ii)第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。在一些方面，(i)第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链；以及(ii)第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是全人的。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是全人的。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是全人的。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是人源化的。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是人源化的。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是人源化的。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是全长抗体。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是全长抗体。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是全长抗体。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。
在一些方面，第一抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、(scFv)2或scFv-Fc。在一些方面，第二抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、(scFv)2或scFv-Fc。在一些方面，第一抗原结合片段和第二抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、(scFv)2或scFv-Fc。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是分离的。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是分离的。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是分离的。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是单克隆的。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是单克隆的。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是重组的。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是重组的。在一些方面，第一抗体或抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段是重组的。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者静脉内施用约150mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者静脉内施用约150mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者静脉内施用约300mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者静脉内施用约300mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者静脉内施用约500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者静脉内施用约500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者静脉内施用约1500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者静脉内施用约1500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者肌内施用约150mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者肌内施用约150mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者肌内施用约300mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者肌内施用约300mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者肌内施用约500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者肌内施用约500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
本文还提供了预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：向该受试者肌内施用约1500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VLCDR3；并且向该受试者肌内施用约1500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。在一些方面，第一抗体包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的可变轻链(VL)；并且第二抗体包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的可变轻链(VL)。
在一些方面，第一抗体和第二抗体各自是人IgG1抗体。
在一些方面，第一抗体包含：含有YTE突变和TM突变的人IgG1恒定区，并且第二抗体包含：含有YTE突变和TM突变的人IgG1恒定区。
在一些方面，第一抗体包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸1-460的重链和含有SEQID NO:25的氨基酸序列的轻链，并且第二抗体包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。
在一些方面，第一抗体包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链和含有SEQID NO:25的氨基酸序列的轻链，并且第二抗体包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。
在一些方面，在同一天依序施用第一抗体和第二抗体。在一些方面，第一抗体在第二抗体之前施用。在一些方面，第二抗体在第一抗体之前施用。
5.附图说明
图1示出了本文所述的I期试验的研究流程图(参见实例3)。
图2示出了本文所述的I期试验的图形表示(参见实例3)。
6.具体实施方式
本文提供了使用与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的抗体(例如单克隆抗体)及其抗原结合片段的组合例如用于治疗和预防COVID-19的方法。
6.1术语
术语“抗体”意指通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点识别并特异性结合靶标(例如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述的组合)的免疫球蛋白分子。如本文所用，术语“抗体”涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的融合蛋白、以及任何其他修饰的免疫球蛋白分子，只要这些抗体展现出所需的生物活性即可。抗体可以是以下五种主要类别的免疫球蛋白中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，基于它们的重链恒定结构域的特性分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白具有不同的和熟知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸的或缀合至其他分子如毒素、放射性同位素等。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分。“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”或“抗原结合区”是指与抗原结合的完整抗体的一部分。抗原结合片段可以含有完整抗体的抗原决定区(例如，互补决定区(CDR))。抗体的抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。抗体的抗原结合片段可以源自任何动物物种，例如啮齿动物(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)和人，或者可以人工产生。
术语“抗-SARS2-CoV-2抗体”、“SARS-CoV-2抗体”和“与SARS-CoV-2结合的抗体”在本文中可互换地使用，指能够与SARS-CoV-2结合的抗体。例如使用ForteBio或Biacore所测量的，SARS-CoV-2抗体与不相关的非SARS-CoV-2刺突蛋白的结合程度可以小于该抗体与SARS-CoV-2的结合的约10％。在本文提供的一些方面，SARS-CoV-2抗体也能够与SARS-1结合。在本文提供的一些方面，SARS-CoV-2抗体不与SARS-1结合。
术语“抗SARS2-CoV-2刺突蛋白抗体”、“SARS-CoV-2刺突蛋白抗体”和“与SARS-CoV-2刺突蛋白结合的抗体”在本文中可互换使用，指的是能够以足够的亲和力与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体，使得该抗体可在靶向SARS-CoV-2中用作诊断剂和/或治疗剂。例如使用ForteBio或Biacore所测量的，SARS-CoV-2刺突蛋白抗体与不相关的非SARS-CoV-2刺突蛋白的结合程度可以小于该抗体与SARS-CoV-2刺突蛋白的结合的约10％。在本文提供的一些方面，SARS-CoV-2刺突蛋白抗体也能够与SARS-1的刺突蛋白结合。在本文提供的一些方面，SARS-CoV-2刺突蛋白抗体不与SARS-1的刺突蛋白结合。
“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指涉及单一抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合的同源抗体或抗原结合片段群。这与典型地包括针对不同抗原决定簇的不同抗体的多克隆抗体相反。术语“单克隆”抗体或其抗原结合片段涵盖完整和全长单克隆抗体以及抗体片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白和包含抗原识别位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆”抗体或其抗原结合片段是指以任何数量的方式(包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物)制备的此类抗体及其抗原结合片段。
如本文所用，术语“可变区”或“可变结构域”可互换使用并且在本领域中是常见的。可变区典型地是指抗体的一部分，通常是轻链或重链的一部分，典型地是成熟重链中氨基端约110至120个氨基酸或110至125个氨基酸以及成熟轻链中约90至115个氨基酸，该部分在抗体之间的序列广泛不同并且用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的变异性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中保守性更高的区域称为框架区(FR)。不希望受任何特定机制或理论的束缚，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在一些方面，可变区是人可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和人框架区(FR)。在一些方面，可变区是灵长类(例如，非人灵长类)可变区。在一些方面，可变区包含啮齿动物或鼠类CDR和灵长类(例如，非人灵长类)框架区(FR)。
如本文所用，术语“互补决定区”或“CDR”是指抗体可变结构域中在序列上是高变的和/或形成结构上限定的环(高变环)和/或含有与抗原接触的残基的每个区域。抗体可包含六个CDR，例如VH中的三个和VL中的三个。
术语“VL”和“VL结构域”可互换用于指抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH结构域”可互换用于指抗体的重链可变区。
术语“卡巴特(Kabat)编号”和类似术语在本领域中是公认的并且是指对抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在一些方面，可以根据卡巴特编号系统来确定CDR(参见例如Kabat EA和Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci[纽约科学院年鉴]190:382-391以及Kabat EA等人,(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学相关蛋白序列],第五版,美国卫生与公共服务部(U.S.Department ofHealth and Human Services),NIH公开号91-3242)。使用卡巴特编号系统，抗体重链分子内的CDR典型地存在于氨基酸位置31至35(任选地可包括35位之后的一个或两个另外的氨基酸(在卡巴特编号方案中称为35A和35B))(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)和氨基酸位置95至102(CDR3)。使用卡巴特编号系统，抗体轻链分子内的CDR典型地存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。
相反，乔西亚(Chothia)是指结构环的位置(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917(1987))。当使用卡巴特编号惯例编号时，乔西亚CDR-H1环的末端根据环的长度在H32和H34之间变化(这是因为卡巴特编号方案将插入放置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅存在35A，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。AbM高变区表示卡巴特CDR和乔西亚结构环之间的折衷，并且被牛津分子(Oxford Molecular)AbM抗体建模软件使用。
Figure BDA0004113377040000171
如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”是可互换的并且具有其在本领域中常见的含义。恒定区是抗体的一部分，例如轻链和/或重链的羧基端部分，该部分不直接涉及抗体与抗原的结合，但是可以表现出各种效应子功能，例如与Fc受体的相互作用。相对于免疫球蛋白可变结构域，免疫球蛋白分子的恒定区通常具有更保守的氨基酸序列。在一些方面，抗体或抗原结合片段包含对于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)而言足够的恒定区或其一部分。
如本文所用，术语“重链”在用于指抗体时可以基于恒定结构域的氨基酸序列指任何不同的类型，例如alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)，分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链氨基酸序列是本领域熟知的。在一些方面，重链是人重链。
如本文所用，术语“轻链”在用于指抗体时可以基于恒定结构域的氨基酸序列指任何不同的类型，例如，kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域熟知的。在一些方面，轻链是人轻链。
术语“嵌合”抗体或其抗原结合片段是指其中氨基酸序列源自两个或更多个物种的抗体或其抗原结合片段。典型地，轻链和重链的可变区对应于源自具有所需特异性、亲和力和能力的一个物种的哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗体或其抗原结合片段的可变区，而恒定区同源于源自另一物种(典型地为人)的抗体或其抗原结合片段中的序列，以避免在该物种中引起免疫应答。
术语“人源化”抗体或其抗原结合片段是指非人(例如鼠类)抗体或抗原结合片段的形式，这些形式是含有最少的非人(例如，鼠类)序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段。典型地，人源化抗体或其抗原结合片段是人免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔子或仓鼠)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基替代(“CDR移植”)(Jones等人,Nature[自然],321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature[自然]332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science[科学]239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被来自非人物种的具有所需特异性、亲和力和能力的抗体或片段中的相应残基替代。人源化抗体或其抗原结合片段可以通过取代Fv框架区中和/或被替换的非人残基内另外的残基来进一步修饰，以改进和优化抗体或其抗原结合片段特异性、亲和力和/或能力。典型地，人源化抗体或其抗原结合片段将包含基本上所有至少一个(并且典型地两个或三个)可变结构域，该可变结构域含有对应于非人免疫球蛋白的所有或基本上所有CDR区，而所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体或其抗原结合片段还可以包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，典型地是人免疫球蛋白的恒定区或结构域的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于美国专利5,225,539；Roguska等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA[美国国家科学院院刊],91(3):969-973(1994)；以及Roguska等人,Protein Eng.[蛋白质工程]9(10):895-904(1996)。在一些方面，“人源化抗体”是表面重整抗体(resurfacedantibody)。
术语“人”抗体或其抗原结合片段意指具有源自人免疫球蛋白基因座的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段，其中这种抗体或抗原结合片段是使用本领域已知的任何技术制备的。人抗体或其抗原结合片段的定义包括完整抗体或全长抗体及其片段。
“结合亲和力”通常是指分子(例如抗体或其抗原结合片段)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如抗体或其抗原结合片段和抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示。亲和力可以以本领域中已知的多种方式测量和/或表示，包括但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD是根据koff/kon的商计算的，而KA是根据kon/koff的商计算的。kon是指例如抗体或其抗原结合片段与抗原的缔合速率常数，而koff是指例如抗体或其抗原结合片段与抗原的解离。kon和koff可以通过本领域普通技术人员已知的技术来测定，例如
Figure BDA0004113377040000191
或KinExA。
如本文所用，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”在抗体或其抗原结合片段的上下文中是类似术语。这些术语指示抗体或其抗原结合片段经由其抗原结合结构域与表位结合，并且指示该结合需要抗原结合结构域和表位之间的一些互补性。因此，在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白“特异性结合”的抗体也可以与一种或多种相关病毒(例如SARS-1)的刺突蛋白结合和/或也可以与SARS-CoV-2的刺突蛋白的变体结合，但例如使用ForteBio或Biacore所测量的，与不相关的非SARS-CoV-2刺突蛋白的结合程度小于该抗体与SARS-CoV刺突蛋白结合的约10％。
“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是呈自然界中未发现形式的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已经被纯化至它们不再呈自然界中发现形式的程度的那些。在一些方面，分离的抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。如本文所用，“基本上纯的”是指至少50％纯(即，不含污染物)、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯的材料。
在文中可互换使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”是指具有任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖已经被天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操纵或修饰，例如与标记组分缀合。该定义还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如，非天然氨基酸等)以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解，由于本发明的多肽是基于抗体的，因此在一些方面，这些多肽可以作为单链或相关链出现。
如本文所用，术语“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如原代细胞、培养中的细胞或来自细胞系的细胞。在一些方面，术语“宿主细胞”是指用核酸分子转染的细胞及这种细胞的后代或潜在后代。这种细胞的后代可能与用核酸分子转染的亲代细胞不相同，例如这归因于可发生在成功传代或核酸分子整合入宿主细胞基因组中的过程中的突变或环境影响。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其形式使得活性成分的生物活性是有效的，并且其不含对将施用该配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。配制品可以是无菌的。
如本文所用，术语“施用(administer或administering或administration)”等是指可用于使得能够将药物(例如，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段的组合)递送(例如，静脉内施用)至所需的生物作用位点的方法。可以与本文所述的药剂和方法一起使用的施用技术可参见例如Goodman和Gilman,The PharmacologicalBasis of Therapeutics[治疗学的药理学基础],当前版本,Pergamon；以及Remington’s,Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],现行版本,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.[宾夕法尼亚州伊斯顿麦克出版公司]。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换地使用。该受试者可以是动物。在一些方面，该受试者是哺乳动物，例如非人动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠、小鼠、猴或其他灵长类等)。在一些方面，该受试者是人。
术语“治疗有效量”是指有效治疗受试者的疾病或障碍的药物(例如抗体或其抗原结合片段的组合)的量。
术语如“治疗(treating或treatment或to treat)”或“减轻(alleviating或toalleviate)”是指治愈、减慢已诊断的病理状况或障碍，减轻已诊断的病理状况或障碍的症状，和/或停止已诊断的病理状况或障碍的进展的治疗性措施。因此，需要治疗的那些包括已经诊断患有或怀疑患有该障碍的那些。需要治疗的患者或受试者可包括被诊断患有2019冠状病毒(COVID-19)的那些和已感染了严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的那些。
如本文所用，术语“COVID-19”指感染了SARS-CoV-2。患有COVID-19的受试者可以是有症状的或无症状的。
替代性地，药理和/或生理作用可以是预防性的，即，该作用完全或部分地预防疾病或其症状。在这方面，所披露的方法包括施用“预防有效量”的药物(例如，抗体或其抗原结合片段的组合)。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效实现所需预防结果(例如，预防COVID-19或SARS-CoV-2感染)的量。
如本文所用，术语“组合”和“组合施用”是指将本文所述的一种抗体或其抗原结合片段与本文所述的另一种抗体或其抗原结合片段一起施用。可以同时或依序施用组合中的抗体或其抗原结合片段。可以在相同或不同组合物中施用组合中的抗体或其抗原结合片段。
如本文所提供，提及组合中的“第一”抗体或其抗原结合片段和“第二”抗体或抗原结合片段并非指施用的顺序。“第一抗体或其抗原结合片段”可以在“第二抗体或其抗原结合片段”之前或之后施用。
如在本披露内容和权利要求中所使用，单数形式“一种/个”和“该”包括复数形式，除非在上下文中的其他地方清楚地指出。
应当理解，无论在什么情况下在此用语言“包含”描述方面时，还提供了关于“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的其他类似方面。在本披露中，“包含(comprises、comprising)”、“含有(containing)”和“具有(having)”等可以意指“包括(includes、including)”等；“基本上由……组成(consisting essentially of或consistsessentially)”是开放性的，允许超出所叙述的存在，只要所叙述的基本或新颖特征不被超过叙述的存在改变，但是排除现有技术方面。
除非明确声明或从上下文显而易见，如本文所用，术语“或”被理解为包括在内。如本文在短语例如“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”和“B”。同样，如短语例如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下每个方面：A、B、和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
如本文所用，术语“约”和“大约”在用于修饰数值或数值范围时，指示高于该数值或范围10％和低于该数值或范围10％的偏差仍在所叙述的值或范围的预期含义内。应当理解，无论在什么情况下在本文中用语言“约”或“大约”数值或范围描述方面时，还提供了提及特定数值或范围(没有“约”)的其他类似方面。
可以将本文提供的任何组合物或方法与本文提供的任何其他组合物和方法中的一种或多种进行组合。
6.2使用抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段的组合的治疗方法
本文提供了预防受试者的COVID-19(即SARS-CoV-2感染)的方法。本文还提供了治疗受试者的COVID-19的方法。在一些情况下，这些方法包括向有需要的受试者施用本文所述的第一和第二抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段或如本文所述的其药物组合物。
在一些方面，本文提供了预防受试者的COVID-19的方法，该方法包括向该受试者施用约300mg至约1500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约1500mg的第二抗体或其抗原结合片段。第一抗体或其抗原结合片段可以与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合，并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3。第二抗体或其抗原结合片段可以与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合，并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLCDR3。
在一些方面，本文提供了治疗受试者的COVID-19的方法，该方法包括向该受试者施用约300mg至约1500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg至约1500mg的第二抗体或其抗原结合片段。第一抗体或其抗原结合片段可以与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合，并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3。第二抗体或其抗原结合片段可以与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合，并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VHCDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VLCDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VLCDR3。
在一些方面，本文提供的方法包括向受试者施用约500mg至约1500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约500mg至约1500mg的第二抗体或其抗原结合片段，任选地其中该第一抗体在该第二抗体之前施用。
在一些方面，本文提供的方法包括向受试者施用约150mg至约500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约150mg至约500mg的第二抗体或其抗原结合片段，任选地其中该第一抗体在该第二抗体之前施用。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段各自与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合结构域(RBD)上不同的、非重叠的表位结合。
在一些方面，本文提供的方法包括施用约150mg的第一抗体或其抗原结合片段和约150mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文提供的方法包括施用约300mg的第一抗体或其抗原结合片段和约300mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文提供的方法包括施用约500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约500mg的第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，本文提供的方法包括施用约1500mg的第一抗体或其抗原结合片段和约1500mg的第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，分开地施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，依序施用(例如通过静脉内施用)第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段在第一抗体或其抗原结合片段之后施用。在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段在第二抗体或其抗原结合片段之后施用。在一些方面，在同一天依序施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段(例如，其中一种抗体或其抗原结合片段在另一种抗体或其抗原片段的施用完成之后五小时内、四小时内、三小时内、二小时内、一小时内、或30分钟内施用)。
在一些方面，同时施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段，例如直接肌内注射两者。
在一些方面，肌内施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肌内施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肌内施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，该施用是直接三角肌肌内注射。
在一些方面，肠胃外施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肠胃外施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，肠胃外施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，静脉内施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，静脉内施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，静脉内施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由静脉内输注施用第二抗体或其抗原结合片段。在一些方面，经由静脉内输注施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，将第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段各自以约20mg/分钟的速率经由静脉内输注施用。
6.3患者群体和结果
本文提供了使用本文披露的任何方法(例如，施用第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段，其中该施用预防或治疗SARS-CoV-2感染)在受试者(例如人受试者)中预防和治疗COVID-19(即，SARS-CoV-2感染)的临床方法。
在一些方面，受试者患有SARS-CoV-2感染的风险增加。在一些方面，受试者是医务工作人员。在一些方面，受试者已经暴露于SARS-CoV-2。在一些方面，受试者没有暴露于SARS-CoV-2。在一些方面，受试者患有SARS-CoV-2感染的风险增加。在一些方面，受试者是人。
在一些方面，根据本文披露的方法治疗的受试者优选地经历通常与预防和治疗COVID-19(即SARS-CoV-2感染)相关的结果。
在一些方面，本文披露的方法以及本文披露的抗体和抗原结合片段的施用导致预防COVID-19的一种或多种症状。在一些方面，本文披露的方法以及本文披露的抗体和抗原结合片段的施用导致治疗COVID-19的一种或多种症状。在一些方面，症状包含发烧、干咳、呼吸困难、咽痛和/或疲劳。
在一些方面，本文披露的方法以及本文披露的抗体和抗原结合片段的施用导致治疗COVID-19。
在一些方面，本文披露的方法以及本文披露的抗体和抗原结合片段的施用导致第一和/或第二抗体或其抗原结合片段在受试者的鼻腔液体中积累。
在一些方面，本文披露的方法以及施用本文披露的抗体和抗原结合片段的施用导致第一和/或第二抗体或其抗原结合片段的血清水平足以中和SARS-CoV-2。
在一些方面，受试者未患有COVID-19(即，SARS-CoV-2感染)。在一些方面，受试者患有COVID-19但不具有COVID-19的症状。在一些方面，受试者患有COVID-19且具有感染的症状。
6.4抗体及其抗原结合片段
在具体方面，本文提供了与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体(例如，单克隆抗体，例如人抗体)及其抗原结合片段。SEQ ID NO:20中提供了SARS-CoV-2的刺突蛋白的氨基酸序列：
MFVFLVLLPLVSSQCVNLTTRTQLPPAYTNSFTRGVYYPDKVFRSSVLHSTQDLFLPFFSNVTWFHAIHVSGTNGTKRFDNPVLPFNDGVYFASTEKSNIIRGWIFGTTLDSKTQSLLIVNNATNVVIKVCEFQFCNDPFLGVYYHKNNKSWMESEFRVYSSANNCTFEYVSQPFLMDLEGKQGNFKNLREFVFKNIDGYFKIYSKHTPINLVRDLPQGFSALEPLVDLPIGINITRFQTLLALHRSYLTPGDSSSGWTAGAAAYYVGYLQPRTFLLKYNENGTITDAVDCALDPLSETKCTLKSFTVEKGIYQTSNFRVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNLVKNKCVNFNFNGLTGTGVLTESNKKFLPFQQFGRDIADTTDAVRDPQTLEILDITPCSFGGVSVITPGTNTSNQVAVLYQDVNCTEVPVAIHADQLTPTWRVYSTGSNVFQTRAGCLIGAEHVNNSYECDIPIGAGICASYQTQTNSPRRARSVASQSIIAYTMSLGAENSVAYSNNSIAIPTNFrISVTTEILPVSMTKTSVDCTMYICGDSTECSNLLLQYGSFCTQLNRALTGIAVEQDKNTQEVFAQVKQIYKTPPIKDFGGFNFSQILPDPSKPSKRSFIEDLLFNKVTLADAGFIKQYGDCLGDIAARDLICAQKFNGLTVLPPLLTDEMIAQYTSALLAGTITSGWTFGAGAALQIPFAMQMAYRFNGIGVTQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALNTLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVEAEVQIDRLITGRLQSLQTYVTQQLIRAAEIRASANLAATKMSECVLGQSKRVDFCGKGYHLMSFPQSAPHGVVFLHVTYVPAQEKNFTTAPAICHDGKAHFPREGVFVSNGTHWFVTQRNFYEPQIITTDNTFVSGNCDVVIGIVNNTVYDPLQPELDSFKEELDKYFKNHTSPDVDLGDISGINASVVNIQKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIKWPWYIWLGFIAGLIAIVMVTIMLCCMTSCCSCLKGCCSCGSCCKFDEDDSEPVLKGVKLHYT(SEQ ID NO：20)
SEQ ID NO：20的氨基酸1-12是刺突蛋白的信号肽。因此，成熟版的SARS-CoV-2的刺突蛋白含有SEQ ID NO：20的氨基酸13-1273。SEQ ID NO：20的氨基酸13-1213对应于胞外结构域；氨基酸1214-1234对应于跨膜结构域；并且氨基酸1235-1273对应于胞质结构域。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段(即，第一抗体或其抗原结合片段和/或第二抗体或其抗原结合片段)与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合并且与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合结构域(RBD)特异性结合。
在一些方面，本文所述的第一抗体或其抗原结合片段和本文所述的第二抗体或其抗原结合片段各自与SARS-CoV-2的刺突蛋白的RBD上不同的、非重叠的表位结合。
在一些方面，本文所述的第一抗体或其抗原结合片段是抗体克隆2196。在一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是抗体克隆2130。
在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV交叉反应。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段不与SARS-CoV交叉反应。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，并包含表1中列出的抗体的六个CDR(即，抗体的三个VH CDR和同一抗体的三个VL CDR)。
表1.抗体序列
Figure BDA0004113377040000281
Figure BDA0004113377040000291
Figure BDA0004113377040000301
Figure BDA0004113377040000311
*表1中提供的全长重链序列含有可进行翻译后剪切的末端赖氨酸，从而重链的主要形式可以是SEQ ID NO:22的氨基酸1-460和SEQ ID NO:24的氨基酸1-460。
在一些方面，本文所述的第一抗体或其抗原结合片段和本文所述的第二抗体或其抗原结合片段各自与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合并且包含表1中列出的抗体的两个VH和两个VL。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段可以通过其3个VL CDR和/或其3个VH CDR进行描述。
在一些方面，可以根据乔西亚编号方案确定抗体或其抗原结合片段的CDR，乔西亚编号方案是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如Chothia C和Lesk AM,(1987),J MolBiol[分子生物学杂志]196:901-917；Al-Lazikani B等人,(1997)J Mol Biol[分子生物学杂志]273:927-948；Chothia C等人,(1992)J Mol Biol[分子生物学杂志]227:799-817；Tramontano A等人,(1990)J Mol Biol[分子生物学杂志]215(1):175-82；以及美国专利号7,709,226)。典型地，当使用卡巴特编号惯例时，乔西亚CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，乔西亚CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且乔西亚CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102处，而乔西亚CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34处，乔西亚CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56处，并且乔西亚CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97处。当使用卡巴特编号惯例编号时，乔西亚CDR-H1环的末端根据环的长度在H32和H34之间变化(这是因为卡巴特编号方案将插入放置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅存在35A，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。
在一些方面，本文提供了与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含表1列出的抗体的乔西亚VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段包含一个或多个CDR，其中乔西亚和卡巴特CDR具有相同的氨基酸序列。在一些方面，本文提供与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含卡巴特CDR和乔西亚CDR的组合的抗体及其抗原结合片段。
在一些方面，可以根据如Lefranc M-P,(1999)The Immunologist[免疫学家]7:132-136和Lefranc M-P等人,(1999)Nucleic Acids Res[核酸研究]27:209-212中所述的IMGT编号系统来确定抗体或其抗原结合片段的CDR。根据IMGT编号方案，VH-CDR1处于位置26至35，VH-CDR2处于位置51至57，VH-CDR3处于位置93至102，VL-CDR1处于位置27至32，VL-CDR2处于位置50至52，并且VL-CDR3处于位置89至97。在一些方面，本文提供了与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含表1中列出抗体的IMGT VH和VL CDR的抗体及其抗原结合片段，例如，如Lefranc M-P(1999)同上和Lefranc M-P等人,(1999)同上所述)。
在一些方面，可以根据MacCallum RM等人,(1996)J Mol Biol[分子生物学杂志]262:732-745确定抗体或其抗原结合片段的CDR。另请参见例如Martin A.“ProteinSequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析],”在Antibody Engineering[抗体工程]中，Kontermann和Dübel编辑，第31章，第422-439页，柏林斯普林格出版社(Springer-Verlag,Berlin)(2001)。在一些方面，本文提供了与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含如通过MacCallum RM等人的方法确定的表1中列出抗体的VH和VL CDR的抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，可以根据AbM编号方案确定抗体或其抗原结合片段的CDR，AbM编号方案是指代表卡巴特CDR和乔西亚结构环之间折衷的AbM高变区，并且被牛津分子的AbM抗体建模软件(牛津分子集团有限公司(Oxford Molecular Group,Inc.))使用。在一些方面，本文提供了与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含如通过AbM编号方案确定的表1中列出抗体的VH和VL CDR的抗体或其抗原结合片段。
在一些方面，本文提供了包含重链和轻链的抗体。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
关于重链，在一些方面，本文所述的抗体的重链可以是alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一些方面，该抗体的重链可包含人alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)或mu(μ)重链。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表1中所列的氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包含人gamma(γ)重链恒定区(例如人IgG1重链恒定区)的氨基酸序列。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的本文所述的抗体包含重链，其中VH结构域的氨基酸序列包含表1中所列的序列，并且其中重链的恒定区包含本文所述的或本领域已知的人重链的氨基酸。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表1中所列的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ或λ轻链恒定区的氨基酸序列。
在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表1中列出的序列，并且其中轻链的恒定区包含人κ轻链恒定区的氨基酸序列。
在一些方面，本文所述的抗体的轻链是λ轻链。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体包含轻链，其中VL结构域的氨基酸序列包含表1中所列的序列，并且其中轻链的恒定区包含人λ轻链恒定区的氨基酸序列。
在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段包含：含有本文所述的任何氨基酸序列的VH结构域和VL结构域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白免疫特异性结合的本文所述的抗体包含：含有本文所述的任何氨基酸序列的VH结构域和VL结构域，并且其中恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在一些方面，恒定区包含人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如IgG2a和IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。
Fc区工程化在本领域中用于例如延长治疗性抗体及其抗原结合片段的半衰期并避免体内降解。在一些方面，可以修饰IgG抗体或抗原结合片段的Fc区，以便增加IgG分子对新生儿Fc受体(FcRn)的亲和力，从而介导IgG分解代谢并避免IgG分子降解。合适的Fc区氨基酸取代或修饰是本领域已知的并且包括例如三元取代M252Y/S254T/T256E(称为“YTE”)(参见例如美国专利7,658,921；美国专利申请公开2014/0302058；以及Yu等人，Antimicrob.Agents Chemother.[抗微生物剂与化疗]，61(1)：e01020-16(2017))。在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体或抗原结合片段(例如，单克隆抗体或片段)包含：含有YTE突变的Fc区。
重链恒定区中的三元突变(TM)L234F/L235E/P331S(根据欧盟编号惯例；Sazinsky等人{Foc Natl Acad Sci USA[美国国家科学院院刊]，105：20167-20172(2008))可以显著降低IgG效应子功能。在一些方面，包含三元突变的IgG1序列包含SEQ ID NO：21。
EPKSSDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：21)
在一些方面，根据卡巴特编号系统(例如，卡巴特中的EU索引)进行编号，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入本文所述的抗体或其抗原结合片段的Fc区中(例如，引入CH2结构域(人IgG1的残基231-340)和/或CH3结构域(人IgG1的残基341-447)和/或铰链区中，以改变抗体或其抗原结合片段的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。
在一些方面，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入Fc区(CH1结构域)的铰链区，使得铰链区中半胱氨酸残基的数目改变(例如增加或减少)，如例如美国专利号5，677，425中所述。可以改变CH1结构域的铰链区中半胱氨酸残基的数量，以例如促进轻链和重链的组装，或改变(例如增加或减少)抗体或其抗原结合片段的稳定性。
在一些方面，根据卡巴特编号系统(例如，卡巴特中的EU索引)进行编号，将一个、两个或更多个突变(例如，氨基酸取代)引入本文所述的抗体或其抗原结合片段的Fc区(例如，CH2结构域(人IgG1的残基231-340)和/或CH3结构域(人IgG1的残基341-447)和/或铰链区，以增加或降低抗体或其抗原结合片段对效应细胞表面上的Fc受体(例如，活化Fc受体)的亲和力。Fc区中降低或增加对Fc受体的亲和力的突变以及将此类突变引入Fc受体或其片段中的技术是本领域技术人员已知的。在例如Smith P等人,(2012)PNAS[美国国家科学院院刊]109:6181-6186，美国专利号6,737,056以及国际公开号WO 02/060919、WO 98/23289和WO 97/34631(其通过援引并入本文)中描述了可以在Fc受体中进行突变以改变抗体或其抗原结合片段对Fc受体的亲和力的实例。
在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)中以改变(例如，减少或增加)体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。参见例如，国际公开号WO 02/060919、WO 98/23289、和WO 97/34631，以及美国专利号5,869,046、6,121,022、6,277,375和6,165,745的突变实例，这些突变将改变(例如减少或增加)体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)中以减少体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸突变(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)中以增加体内抗体或其抗原结合片段的半衰期。在一些方面，根据卡巴特中的EU索引编号(Kabat EA等人,(1991)同上)，抗体或其抗原结合片段可以在第二恒定(CH2)结构域(人IgG1的残基231-340)和/或第三恒定(CH3)结构域(人IgG1的残基341-447)中具有一个或多个氨基酸突变(例如，取代)。在一些方面，根据如同卡巴特中的EU索引编号，IgG1的恒定区包含在位置252处的甲硫氨酸(M)至酪氨酸(Y)取代，在位置254处的丝氨酸(S)至苏氨酸(T)取代，以及在位置256处的苏氨酸(T)至谷氨酸(E)取代。参见美国专利号7,658,921，其通过援引并入本文。已经证实这种类型的突变体IgG(称为“YTE突变体”)与相同抗体的野生型形式相比会展示出增加四倍的半衰期(参见Dall’Acqua WF等人,(2006)J Biol Chem[生物化学杂志]281:23514-24)。在一些方面，抗体或其抗原结合片段包含的IgG恒定结构域包含在根据如同卡巴特中的EU索引进行编号的位置251-257、285-290、308-314、385-389和428-436处的氨基酸残基的一个、两个、三个或更多个氨基酸取代。
在一些方面，将一个、两个或更多个氨基酸取代引入IgG恒定结构域的Fc区中，以改变抗体或其抗原结合片段的一个或多个效应子功能。例如，选自根据如同卡巴特中的EU索引进行编号的氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基替换，使得该抗体或其抗原结合片段对效应配体的亲和力改变，但保留了亲本抗体的抗原结合能力。对其的亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。这种方法在美国专利号5,624,821和5,648,260中有进一步详细描述。在一些方面，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他手段)可减少循环的抗体或其抗原结合片段的Fc受体结合，从而增加肿瘤定位。对于使恒定结构域缺失或失活从而增加肿瘤定位的突变的描述，参见例如美国专利号5,585,097和8,591,886。在一些方面，可以将一个或多个氨基酸取代引入Fc区以去除Fc区上的潜在糖基化位点，从而可以减少Fc受体结合(参见例如Shields RL等人，(2001)J Biol Chem[生物化学杂志]276:6591-604)。
在一些方面，选自恒定区中的氨基酸残基322、329和331中的一个或多个氨基酸(根据如同卡巴特中的EU索引进行编号)可以被不同的氨基酸残基替换，使得该抗体或其抗原结合片段具有改变的C1q结合和/或降低的或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法在美国专利号6,194,551(Idusogie等人)中有进一步详细描述。在一些方面，改变CH2结构域的N端区域中的氨基酸位置231至238内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。这种方法在国际公开号WO 94/29351中有进一步描述。在一些方面，通过在以下位置使一个或多个氨基酸突变(例如，引入氨基酸取代)来修饰Fc区以增加抗体或其抗原结合片段介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体或其抗原结合片段对Fcγ受体的亲和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、328、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，根据如同卡巴特中的EU索引进行编号。这种方法在国际公开号WO 00/42072中有进一步描述。
在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含在根据如同卡巴特中的EU索引进行编号的位置267、328或其组合处具有突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含具有选自由S267E、L328F及其组合组成的组的突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段包含具有S267E/L328F突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域。在一些方面，包含具有S267E/L328F突变(例如，取代)的IgG1的恒定结构域的本文所述的抗体或其抗原结合片段对FcγRIIA、FcγRIIB或FcγRIIA和FcγRIIB具有增加的结合亲和力。
工程化的糖型可用于多种目的，包括但不限于增强或降低效应子功能。在本文所述的抗体或其抗原结合片段中产生工程化糖型的方法包括但不限于以下披露的那些：例如
Figure BDA0004113377040000381
P等人,(1999)Nat Biotechnol[自然生物技术]17:176-180；Davies J等人,(2001)Biotechnol Bioeng[生物技术与生物工程]74:288-294；Shields RL等人,(2002)J BiolChem[生物化学杂志]277:26733-26740；Shinkawa T等人,(2003)J Biol Chem[生物化学杂志]278:3466-3473；Niwa R等人,(2004)Clin Cancer Res[临床癌症研究]1:6248-6255；Presta LG等人,(2002)Biochem Soc Trans[生化学会会刊]30:487-490；Kanda Y等人,(2007)Glycobiology[糖生物学]17:104-118；美国专利号6,602,684、6,946,292、和7,214,775；美国专利公开号US 2007/0248600、2007/0178551、2008/0060092、和2006/0253928；国际公开号WO 00/61739、WO 01/292246、WO 02/311140、和WO 02/30954；PotillegentTM技术(新泽西州普林斯顿市宝万有限公司(Biowa,Inc.Princeton,N.J.))；以及
Figure BDA0004113377040000391
糖基化工程技术(瑞士苏黎世格黎卡特生物技术股份公司(Glycart biotechnology AG,Zurich,Switzerland))。另请参见例如Ferrara C等人,(2006)Biotechnol Bioeng[生物技术与生物工程]93:851-861；国际公开号WO 07/039818、WO 12/130831、WO 99/054342、WO03/011878、和WO 04/065540。
在一些方面，可以将本文所述的任何恒定区突变或修饰引入本文所述的具有两个重链恒定区的抗体或其抗原结合片段的一个或两个重链恒定区。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段各自抑制SARS-CoV-2与血管紧张素转换酶2(ACE2)的结合。
在一些方面，第一抗体或其抗原结合片段和第二抗体或其抗原结合片段各自中和SARS-CoV-2。
在一些方面，本文披露的第一和第二抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、(scFv)2或scFv-Fc。
在一些方面，与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合的如本文所述的抗原结合片段选自由Fab、Fab'、F(ab')2和scFv组成的组，其中Fab、Fab'、F(ab')2或scFv包含与SARS-CoV-2的刺突蛋白或与SARS-CoV-2特异性结合的本文所述的抗体或其抗原结合片段的重链可变区序列和轻链可变区序列。可以通过本领域技术人员已知的任何技术生产Fab、Fab'、F(ab')2或scFv。在一些方面，Fab、Fab'、F(ab')2或scFv进一步包含延长体内抗体半衰期的部分。该部分也称为“半衰期延长部分”。可以使用本领域技术人员已知的用于延长体内Fab、Fab'、F(ab')2或scFv的半衰期任何部分。例如，半衰期延长部分可包括Fc区、聚合物、白蛋白或白蛋白结合蛋白或化合物。聚合物可包括天然或合成的、任选经取代的直链或支链的聚亚烷基、聚亚烯基、聚氧化烯、多糖、聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙烯醇、甲氧基聚乙二醇、乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。取代基可包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基基团。在一些方面，可以通过添加一个或多个用于附接半衰期延长部分的C端氨基酸来修饰Fab、Fab'、F(ab')2或scFv。在一些方面，半衰期延长部分是聚乙二醇或人血清白蛋白。在一些方面，Fab、Fab'、F(ab')2或scFv与Fc区融合。
可以将与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的抗体或其抗原结合片段与可检测标记或物质融合或缀合(例如，共价或非共价连接)。可检测标记或物质的实例包括酶标记物，例如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，例如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)和锝(99Tc)；发光标记，例如鲁米诺；以及荧光标记，例如荧光素和若丹明，以及生物素。此类标记的抗体或其抗原结合片段可用于检测SARS-CoV-2的刺突蛋白或SARS-CoV-2。
6.5药物组合物
本文提供了施用组合物的方法，这些组合物包含在生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂中具有所需纯度的抗SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段(Remington’sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学](1990)Mack Publishing Co.[马克出版有限公司],宾夕法尼亚州伊斯顿)。载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量及浓度下对接受者无毒。(参见例如，Gennaro,Remington:The Science and Practice of Pharmacy withFacts and Comparisons:Drugfacts Plus[雷明顿：有事实和比较的药学科学和实践：药品事实+],第20版.(2003)；Ansel等人,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems[药物剂型和药物递送系统],第7版,Lippencott Williams and Wilkins[利平科特威廉姆斯和威尔金斯出版公司](2004)；Kibbe等人,Handbook of PharmaceuticalExcipients[药用辅料手册],第3版,Pharmaceutical Press[医药出版社](2000))。用于体内施用的组合物可以是无菌的。这容易通过例如经无菌滤膜过滤而实现。
在本披露的一些方面，提供了施用药物组合物的方法，其中第一药物组合物包含第一抗体或其抗原结合片段，该第一抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且第二药物组合物包含第二抗体或其抗原结合片段，该第二抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些方面，本文提供了试剂盒，其包含(i)含有第一抗体或其抗原结合片段的第一药物组合物，该第一抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；以及(ii)含有第二抗体或其抗原结合片段的第二药物组合物，该第二抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白含特异性结合并包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
在本披露的一些方面，药物组合物包含(i)第一抗体或其抗原结合片段，其与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；以及(ii)第二药物组合物包含第二抗体或其抗原结合片段，该第二抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。药物组合物可以进一步包含药学上可接受的赋形剂。在一些方面，药学上可接受的赋形剂不是水。
在本文提供的药物组合物的一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQID NO:7的氨基酸序列的VH和/或含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL。在本文提供的药物组合物的一些方面，第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH和/或含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。在本文提供的药物组合物的一些方面，第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VH和/或含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL；并且第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VH和/或含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL。
在本文提供的药物组合物的一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是IgG1抗体，任选地其中该IgG1抗体包含YTE和/或TM突变。在本文提供的药物组合物的一些方面，第二抗体或其抗原结合片段是IgG1抗体，任选地其中该IgG1抗体包含YTE和/或TM突变。在本文提供的药物组合物的一些方面，第一抗体或其抗原结合片段是IgG1抗体，其中该IgG1抗体包含YTE和TM突变；并且第二抗体或其抗原结合片段是包含YTE和/或TM突变的IgG1抗体。
以说明的方式而不是以限制的方式提供以下实例。
7.实例
实例1：两种抗SARS-CoV-2抗体的选择
选择2196+2130抗体用于在组合疗法(在本文中称为“2196+2130”)中使用。与SARS-CoV-2刺突蛋白的受体结合结构域上不同的、非重叠的位点结合的2196和2130抗体。与这些位点中的任一个结合都会阻断病毒与其人细胞受体ACE2结合的能力。通过阻断病毒进入人细胞，2196+2130可以预防或治疗由SARS-CoV-2感染(COVID-19)引起的疾病。
实例2：两种抗SARS-CoV-2抗体的剂量选择
为了支持研究剂量的选择，开发了病毒动力学模型，该模型可以了解2196+2130对SARS CoV-2感染的生长和由此产生的免疫应答的药效学作用。对于预防，病毒动力学模型指示病毒进入抑制大于约80％就足以预防感染。假设肺上皮细胞衬液(ELF)与血清的分配比为1％且IC50为26ng/mL，则需要肌内(IM)245mg的最小有效剂量，以进行覆盖5个月的预防。如果分配比低于0.1％(保守假设)，则可能需要2450mg IM的最小有效剂量以进行预防。假设76％ IM生物利用度，IV剂量将按比例降低。对于活动性感染的受试者，该模型指示病毒进入抑制大于约92％足以将病毒载量迅速抑制至少于1个拷贝/拭子，这是一个数字截止标准，其被认为是将伴随完全的自然感染清除的临床上有意义的作用。在进入抑制IC50为26ng/mL且肺ELF与血清分配范围为1％至0.1％的情况下，最小有效剂量范围为300mg IM至3000mg IM。这与实现病毒进入抑制减少92％的目标所需的剂量一致。假设76％ IM生物利用度，IV剂量将按比例降低。
实例3：向人受试者施用两种抗SARS-CoV-2抗体
进行I期、在人中首次(FTIH)、随机、双盲、安慰剂对照、剂量递增的研究，以证明在18至55岁的健康成年受试者中顺序施用两种抗SARS-CoV-2抗体(2196+2130)的安全性和耐受性。跨4个固定剂量群组，约48名受试者入组并以10:2随机化为2196+2130或安慰剂(经由静脉内输注或肌内施用)。研究流程图在图1中示出，并且图形表示在图2中提供。每个受试者的研究持续时间为约389天，由长达27天的筛选期(第-28天至第-2天)、1天的治疗期(24小时；第1天)和360天安全性随访期(给药后第361天)组成。
在筛选期期间，获取每个受试者的病史和人口统计学，并进行全面的体格检查。使用定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)进行SARS-CoV-2血清学测试，并验证资格标准(下文讨论的纳入标准和排除标准)。
受试者
为了纳入研究，受试者满足所有以下纳入标准并且不符合任何排除标准。
纳入标准
1.筛选时年龄在18至55岁(含)之间。
2.书面知情同意。
3.筛选时SARS-CoV-2qRT-PCR和血清学测试呈阴性。
4.筛选时体重≥50kg且≤110kg，包括≥18.0至≤30.0kg/m2的BMI。
5.通过病史、体格检查和基线安全性实验室研究表明健康。
6.筛选时心电图无临床上显著异常。
7.能够完成随访期直至第361天。
排除标准
1.已知对2196+2130的任何组分有超敏反应。
2.可能被2196+2130的任何组分加剧的过敏性疾病或反应史。
3.先前在施用单克隆抗体后具有超敏反应、输注相关反应或严重不良反应。
4.急性(限时)疾病，包括在计划给药前一天或计划给药当天发热超过37.5℃(99.5°F)；如果疾病在27天筛选期内消退，可以对由于短暂性急性疾病而被排除在外的受试者给药或可以重新筛选一次。
5.第1天前的7天内的任何药物疗法(除避孕药，或以等于或低于包装上推荐的剂量单独使用对乙酰氨基酚、阿司匹林、抗组胺药、或含有对乙酰氨基酚与抗组胺药的组合非处方药(OTC)产品、或OTC非甾体抗炎药剂之外)。非新引入的维生素和其他营养补充剂，即在入组前已服用至少30天，则不排除在外。
6.在筛选前2个月内，由于任何原因抽取的血液总量超过450mL(1单位)。
7.在筛选前6个月内接受免疫球蛋白或血液产品。
8.SARS-CoV-2或COVID-19：
a.随机化之前，有任何确认的当前或先前COVID-19感染的受试者。
b.在筛选前或入院时的前4周内，受试者具有与COVID-19一致的临床体征和症状(例如发烧、干咳、呼吸困难、咽痛、疲劳)或通过适当的实验室测试确认的感染。
c.任何先前接受的指示用于预防SARS-CoV-2或COVID-19的研究疫苗或许可疫苗，或在研究随访期间预期接受疫苗。
9.在前90天内接受任何研究产品或在研究随访时间段的期间预期接受研究产品，或同时参与另一项干预研究。
10.在研究开始前的6个月或五个抗体半衰期(以较长者为准)之前接受过单克隆抗体。
11.由于疾病(包括HIV感染)或由于药物(包括在筛选前6个月内每天或每隔一天以20mg剂量的泼尼松或等效物的超过2周的任何糖皮质激素疗法过程)导致的免疫缺陷。筛选时HIV测试必须为阴性。
12.有乙型肝炎或丙型肝炎活动性感染史，或筛选时丙型肝炎或乙型肝炎表面抗原检测呈阳性。
13.感染严重急性呼吸综合征(SARS)或中东呼吸综合征(MERS)的病史。
14.天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶(ALT)或血清肌酐高于正常上限(ULN)；胆红素和碱性磷酸酶(ALP)>1.5x ULN。
15.筛选时血红蛋白或血小板计数低于正常下限(LLN)。白细胞或中性粒细胞计数超出正常参考范围。
16.恶性肿瘤史。
在研究期间的限制
以下限制适用于研究期间的指定时间：
1.受试者在IV输注期间舒适地休息或在肌内施用后仰卧一小时。从登记前72小时到出院、和每次门诊就诊前72小时和他们的最后一次随访，受试者不参与任何重体力活动。
2.在治疗期和门诊就诊之前，受试者在登记前72小时戒酒，直到他们最后一次药代动力学(PK)采样就诊之后。受试者在他们的最后一次随访前也戒酒72小时。
3.在治疗期和门诊就诊之前，受试者在登记前24小时直到从临床单位出院戒除含咖啡因的食物和饮料。
4.在入院期间，受试者接受标准饮食，该标准饮食不包括所有酒精和含咖啡因的产品。
5.入院前，受试者至少72小时避免含有罂粟籽的食物。
6.受试者被要求放弃献血或血浆捐赠，直到在研究随访时的最终健康检查后3个月。
前哨给药
所有群组的给药从前哨群组中的2名受试者开始。前哨给药是第一群组的参与者中的一个人在完整研究群组之前接受单剂量的产品。
一个受试者随机接受安慰剂，并且一个受试者随机接受2196+2130产品。在对群组中的其余受试者给药之前，审查来自前哨受试者直至给药后24小时的安全性数据。每个群组的其余10名受试者在前哨群组后至少24小时以9:1的活性剂与安慰剂的比率给药。
前哨给药适用于所有给药群组，以确保受试者的安全性如下：
·每个群组的两名受试者按1:1(2196+2130:安慰剂)的比率给药，然后在给该群组的其余受试者给药之前经历至少24小时的安全性监测期。
·从一个剂量水平到下一个剂量水平的增加是基于对直到第8天(包括第8天)的所有可用的安全性数据的审查。此外，还将审查任何可用的PK数据。
群组
在如下提供的4个固定剂量群组中，约48名健康成年受试者随机接受2196+2130或安慰剂。
群组1a(12名受试者)：
·300mg(150mg抗体2196和150mg抗体2130)(n＝9)或安慰剂(n＝1)，肌内(IM)施用(直接三角肌IM)
·前哨给药：300mg IP(150mg抗体2196和150mg抗体2130)(n＝1)或安慰剂(n＝1)。
群组1b(12名受试者)：
·300mg(150mg抗体2196和150mg抗体2130)(n＝9)或安慰剂(n＝1)，静脉内(IV)施用
·前哨给药：300mg(150mg抗体2196和150mg抗体2130)(n＝1)或安慰剂(n＝1)。
群组2(12名受试者)：
·1000mg(500mg抗体2196和500mg抗体2130)(n＝9)或安慰剂(n＝2)，IV施用
·前哨给药：1000mg(500mg抗体2196和500mg抗体2130)(n＝1)或安慰剂(n＝1)。
群组3(12名受试者)：
·3000mg(1500mg抗体2196和1500mg抗体2130)(n＝9)或安慰剂(n＝1)，IV施用
·前哨给药：3000mg(1500mg抗体2196和1500mg抗体2130)(n＝1)或安慰剂(n＝1)。
研究设计
筛选期后，每位符合资格的患者在其各自的第-1天(给药前1天)入住I期病房，并在第2天(给药后1天，完成24小时程序后)出院。然后在给药后对受试者进行约一年的安全性监测，包括记录不良事件(AE)和严重不良事件(SAE)，以及为抗药物抗体(ADA)收集血液样品。评估安全性和耐受性以及免疫原性终点。
在以下几天获得中和抗体的血清样品：第8天(±1)、第31天(±2)、第61天(±5)、第91天(±5)、第151天(±5)、第211天(±5)、第271天(±10)和第361天(±10)。使用野生型SARS-CoV-2中和测定和/或假病毒中和测定测量针对SARS-CoV-2的2196+2130的中和抗体浓度。还总结了鼻腔液体中的2196+2130抗体浓度。
结果
将安慰剂组和2196+2130组进行比较，以表明2196+2130可生成可以功能上抑制SARS-CoV-2的2196+2130的血清浓度。还将这些组进行比较，以表明当静脉内(IV)或肌内(IM)施用时，2196+2130的施用是安全且可耐受的。还将这些组进行比较，以表明在2196+2130的施用后，抗药物抗体反应是可接受的。
***
本发明不受本文所述的具体实施例的范围的限制。实际上，除了描述的那些之外，根据前面的描述和附图，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。
本文引用的所有参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)通过援引以其全文并入本文并用于所有目的，其程度如同具体和单独指示各个参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)通过援引以其全文并入以用于所有目的一样。
其他的实施例在以下的权利要求书之内。
序列表
<110> 英国阿斯利康有限公司（AstraZeneca UK Limited）
<120> 用于治疗和预防COVID-19的SARS-COV-2抗体
<130> P70367WO
<150> US 63/112,104
<151> 2020-11-10
<150> US 63/063,862
<151> 2020-08-10
<160> 25
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196重链可变CDR1
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Met Ser Ser Ala
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196重链可变CDR2
<400> 2
Ile Val Ile Gly Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196重链可变CDR3
<400> 3
Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Ser Ile Ser Cys Asn Asp Gly Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196轻链可变CDR1
<400> 4
Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr
1 5
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196轻链可变CDR2
<400> 5
Gly Ala Ser
1
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196轻链可变CDR3
<400> 6
Gln His Tyr Gly Ser Ser Arg Gly Trp Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196重链可变区
<400> 7
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Met Ser Ser
20 25 30
Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Val Ile Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Ser Ile Ser Cys Asn Asp Gly Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196轻链可变区
<400> 8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Arg
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130重链可变CDR1
<400> 9
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Val Trp
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130重链可变CDR2
<400> 10
Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr
1 5 10
<210> 11
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130重链可变CDR3
<400> 11
Thr Thr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Asp Thr Val Gly Pro Gly Leu Pro
1 5 10 15
Glu Gly Lys Phe Asp Tyr
20
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130轻链可变CDR1
<400> 12
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130轻链可变CDR2
<400> 13
Trp Ala Ser
1
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130轻链可变CDR3
<400> 14
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr
1 5
<210> 15
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130重链可变区
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Asp Thr Val Gly Pro Gly
100 105 110
Leu Pro Glu Gly Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 16
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130轻链可变区
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<400> 17
000
<210> 18
<400> 18
000
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<211> 1273
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SARS-CoV-2刺突蛋白
<400> 20
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 21
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含三元突变的IgG1序列
<400> 21
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 22
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130全长重链
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Val
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Asp Thr Val Gly Pro Gly
100 105 110
Leu Pro Glu Gly Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 23
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2130全长轻链
<400> 23
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 24
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196全长重链
<400> 24
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Met Ser Ser
20 25 30
Ala Val Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Val Ile Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Pro Tyr Cys Ser Ser Ile Ser Cys Asn Asp Gly Phe Asp Ile
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
225 230 235 240
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 25
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆2196全长轻链
<400> 25
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Arg
85 90 95
Gly Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215

Claims (60)

1.一种治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段、和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中
该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且
该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
2.如权利要求1所述的方法，该方法包括施用约300mg的该第一抗体或其抗原结合片段和约300mg的该第二抗体或其抗原结合片段。
3.如权利要求1所述的方法，该方法包括施用约500mg的该第一抗体或其抗原结合片段和约500mg的该第二抗体或其抗原结合片段。
4.如权利要求1所述的方法，该方法包括施用约1500mg的该第一抗体或其抗原结合片段和约1500mg的该第二抗体或其抗原结合片段。
5.一种治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法，该方法包括向有需要的受试者施用约150mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段和约150mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其中
该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；并且
该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和该第二抗体或其抗原结合片段在分开的药物组合物中施用。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中依序施用该第一抗体或其抗原结合片段和该第二抗体或其抗原结合片段，任选地其中在同一天施用该第一抗体或抗原结合片段和该第二抗体或抗原结合片段。
8.如权利要求7所述的方法，其中该第一抗体或抗原结合片段在该第二抗体或抗原结合片段之前施用，或者该第二抗体或抗原结合片段在该第一抗体或抗原结合片段之前施用。
9.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中肠胃外施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
10.如权利要求9所述的方法，其中静脉内施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
11.如权利要求9所述的方法，其中经由静脉内输注施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
12.如权利要求11所述的方法，其中以约20mg/分钟的速率经由静脉内输注施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
13.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中同时施用该第一抗体或其抗原结合片段和该第二抗体或其抗原结合片段。
14.如权利要求1-8或13中任一项所述的方法，其中肌内施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
15.如权利要求1-8、13或14中任一项所述的方法，其中经由直接三角肌肌内注射施用该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该施用预防COVID-19。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中该受试者在该施用时未患有COVID-19，并且该施用预防或降低COVID-19的一种或多种症状的严重程度。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中该受试者患有COVID-19的风险增加，任选地其中该受试者是医务工作人员。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中该受试者已经暴露于SARS-CoV-2。
20.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中该受试者已知没有暴露于SARS-CoV-2。
21.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该受试者在该施用时患有有症状的COVID-19，并且该施用使COVID-19的一种或多种症状的严重程度降低、或预防COVID-19的一种或多种症状的严重程度增加。
22.如权利要求17-21中任一项所述的方法，其中该一种或多种症状选自由以下组成的组：发烧、干咳、呼吸困难、咽痛、疲劳或其组合。
23.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该施用治疗COVID-19。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中该施用导致该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段的血清浓度足以中和SARS-CoV-2。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中该施用导致该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段在该受试者的鼻腔液体中积累。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中该受试者是人。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的可变轻链(VL)；和/或该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的可变轻链(VL)。
28.如权利要求1-27中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区。
29.如权利要求28所述的方法，其中该重链恒定区是人IgG1重链恒定区。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区。
31.如权利要求30所述的方法，其中该轻链恒定区选自由人IgGκ和IgGλ轻链恒定区组成的组。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变的重链恒定区。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有TM突变的重链恒定区。
34.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变和TM突变的重链恒定区，并且其中该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有YTE突变和TM突变的重链恒定区。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链，和/或其中该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸1-460的重链和含有SEQID NO:23的氨基酸序列的轻链。
36.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段是全人的。
37.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段是人源化的。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段是全长抗体，和/或该第二抗体或其抗原结合片段是全长抗体。
39.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段，和/或该第二抗体或其抗原结合片段是抗原结合片段。
40.如权利要求39所述的方法，其中该第一和/或第二抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四抗体、三抗体、双抗体、单结构域抗体、(scFv)2或scFv-Fc。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段是分离的。
42.如权利要求1-41中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段是单克隆的。
43.如权利要求1-42中任一项所述的方法，其中该第一抗体或其抗原结合片段和/或该第二抗体或其抗原结合片段是重组的。
44.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者静脉内施用约150mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者静脉内施用约150mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
45.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者静脉内施用约300mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者静脉内施用约300mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
46.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者静脉内施用约500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者静脉内施用约500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
47.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者静脉内施用约1500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者静脉内施用约1500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
48.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者肌内施用约150mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者肌内施用约150mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
49.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者肌内施用约300mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者肌内施用约300mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
50.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者肌内施用约500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者肌内施用约500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
51.一种预防或治疗受试者的2019冠状病毒病的方法，该方法包括：
向该受试者肌内施用约1500mg的第一抗体，该第一抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3；
并且向该受试者肌内施用约1500mg的第二抗体，该第二抗体与SARS-CoV-2的刺突蛋白特异性结合并且包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
52.如权利要求44-51中任一项所述的方法，其中该第一抗体包含：含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ IDNO:8的氨基酸序列的可变轻链(VL)；并且其中该第二抗体包含：含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的可变重链(VH)和含有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的可变轻链(VL)。
53.如权利要求44-52中任一项所述的方法，其中该第一抗体和该第二抗体各自是人IgG1抗体。
54.如权利要求44-52中任一项所述的方法，其中该第一抗体包含：含有YTE突变和TM突变的人IgG1恒定区，并且其中该第二抗体包含：含有YTE突变和TM突变的人IgG1恒定区。
55.如权利要求44-54中任一项所述的方法，其中该第一抗体包含：含有SEQ ID NO:24的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链，并且其中该第二抗体包含：含有SEQ ID NO:22的氨基酸1-460的重链和含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链。
56.如权利要求44-55中任一项所述的方法，其中在同一天依序施用该第一抗体和该第二抗体。
57.如权利要求44-56中任一项所述的方法，其中该第一抗体在该第二抗体之前施用。
58.如权利要求44-56中任一项所述的方法，其中该第二抗体在该第一抗体之前施用。
59.一种与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第一抗体或其抗原结合片段，其用于在治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法中与第二抗体或其抗原结合片段联合使用，该第二抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，该方法包括：
向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的该第一抗体或其抗原结合片段、和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的该第二抗体或其抗原结合片段，
其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3，并且
该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
60.一种与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的第二抗体或其抗原结合片段，其用于在治疗或预防受试者的2019冠状病毒病(COVID-19)的方法中与第一抗体或其抗原结合片段联合使用，该第一抗体或其抗原结合片段与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，该方法包括：
向有需要的受试者施用约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的该第一抗体或其抗原结合片段、和约300mg至约3000mg与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合的该第二抗体或其抗原结合片段，
其中该第一抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VL CDR3，并且
该第二抗体或其抗原结合片段包含：含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR1、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH CDR2、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VH CDR3、含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR1、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR2、和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL CDR3。
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