CN1158614A

CN1158614A - 新型化合物及其制法和抗肿瘤剂

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Publication number: CN1158614A
Application number: CN95194461A
Authority: CN
Inventors: 富田恭司; 千叶胜已; 柏木茂树; 柴森厚一郎; 筑木保知
Original assignee: Dainippon Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Pharma Co Ltd
Priority date: 1994-06-14
Filing date: 1995-06-06
Publication date: 1997-09-03
Anticipated expiration: 2015-06-06
Also published as: FI965020A7; HU220072B; HU9603455D0; KR100350921B1; NO965305L; SI0787726T1; RU2151770C1; NO307255B1; HUT75777A; ES2163512T3; NO965305D0; DE69524251T2; EP0787726B1; US5817669A; EP0787726A1; CZ292631B6; DE69524251D1; FI112485B; PL317726A1; PL181867B1

Abstract

通式(a)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐、这些化合物的制备方法以及以其为有效成分的抗肿瘤剂等，式中R₁是氢原子、卤原子等，R₂是羧基等，R₃是氢原子等，A是氮原子或CH，m是1或2，Y是可消除的基团或通式(b)所示基团，其中R₄是氢原子或低级烷基，Z是氢原子或低级烷基等，R₅是氢原子、低级烷基等，n是0或1，P是1、2、3或4。

Description

新型化合物及其制法和抗肿瘤剂

技术领域

本发明涉及新型吡啶酮羧酸衍生物、含有此类衍生物作为有效成分的抗肿瘤剂(anti-tumor agents)和该新型吡啶酮羧酸衍生物的制法等。

背景技术

各种有2-噻唑基的吡啶酮羧酸衍生物以及这些吡啶酮羧酸衍生物有抗菌活性，都是已知的。例如，特开昭61-152682号公报(以下称参考文献1(Ref.1))的实施例24公开了如下化合物A。

化合物A

此外，该参考文献1的实施例5公开了如下化合物B。

化合物B

进而，该参考文献1的实施例12还公开了如下化合物C。

化合物C

特开昭62-33176号公报(以下称参考文献2(Ref.2))的表1中也列出了上述化合物B或C。

特开昭60-56959号公报(这对应于欧洲专利公开公报131839号公报或美国专利4,730,000号公报，这些在以下总称参考文献3(Ref.3))的实施例24-4和特开昭61-251667号公报(以下称参考文献4(Ref.4))的实施例15记载了如下化合物D。

化合物D

特开昭60-163866号公报(这对应于欧洲专利公开公报154780号公报或美国专利4,774,246号公报，这些在以下总称参考文献5(Ref.5))的实施例28-16中记载了如下化合物E。

化合物E

此外，特开平2-85255号公报(以下称参考文献6(Ref.6))的实施例8中记载了如下化合物F。

化合物F

然而，这些化合物的化学结构，就如下(1)和(2)而言，不同于后述的本发明化合物(I)的结构：

(1)化合物A～F的6位上常有氟原子取代；

(2)化合物A、C、D、E和F的7位取代基不是有取代的1-吡咯烷基。

此外，参考文献1～6只提到这些化合物A～F有抗菌作用，完全没有公开其抗肿瘤活性或抗癌活性。

再者，也已知有一些吡啶酮羧酸衍生物有抗肿瘤活性或抗癌活性。例如，《(癌症研究》(Cancer Research)52，2818(1992)中报告了如下化合物G有抗肿瘤作用。

化合物G

这篇论文探讨了90种吡啶酮羧酸衍生物的抗肿瘤作用，结果，该文报告说，几乎所有吡啶酮羧酸衍生物都不能确认有抗肿瘤活性，已确认的化合物只不过数种而已。因此，该文认为，抗肿瘤作用的出现是由于1位取代的环丙基以及6位和8位取代的2个卤原子发挥了重要作用，不凭借这样的取代基，吡啶酮羧酸衍生物是不会显示抗肿瘤作用的。

附图简单说明

第1图～第9图显示对移植了各种人体癌细胞的裸鼠进行本发明化合物给药时，其肿瘤增殖抑制率(IR)的随时间变化。

第10图～第14图显示上述实验中肿瘤重量的随时间变化。

各图中给出的数字，例如第1图中给出的“1-1(50)[91]”，依次表示“化合物号码(给药量mg/kg)[观察最终日的肿瘤增殖抑制率IR％]。

此外，第15图～第19图中，列出了后述系列A实施例(本发明的中间体制备)、系列B实施例(本发明的原料化合物制备)和系列C实施例(本发明化合物的制备)中所述反应的反应式。

发明公开

本发明者等人对有抗肿瘤作用的化合物进行了深入探讨，结果发现，具有也可以有取代的2-噻唑基的新型吡啶酮羧酸衍生物有显著的抗肿瘤作用。

本发明涉及有2-噻唑基的如下通式(I)所示吡啶酮羧酸衍生物及其盐，

式中R₁是氢原子、低级烷氧基、卤原子、也可以是有卤原子取代的低级烷基或也可以是有卤原子取代的苯基，

R₂是羧基或可转化成羧基的基团，

R₃是氢原子、也可以是有保护的氨基、卤原子或也可以是有卤原子取代的低级烷基，

A是氮原子或CH，

m是1或2的整数，

Y是能脱离的基团或下式Y′所示基团，

式中R₄是氢原子或低级烷基，

Z是氢原子、低级烷基或可转化成氢原子的基团，

R₅是氢原子、卤原子、低级烷氧基、低级烷硫基或也可以是有卤原子取代的低级烷基，

n是0或1的整数，

p是1、2、3或4的整数。本发明化合物包含这些化合物的立体异构体、光学异构体、水合物、溶剂合物等任何一种。

上述本发明化合物(I)，可根据其取代基的特征分成两大类。

其一是上述式(I)中Y为能脱离的基团的化合物类，这一类化合物可直接用作Y为上述Y′的化合物类的中间体。因此，本发明的一个目的是提供可用作抗肿瘤剂的吡啶酮羧酸衍生物的中间体。

作为取代基Y所包括的该“能脱离的基团”，只要是能在如下所述与吡啶酮衍生物进行取代时脱离者，任何一种都可以，例如，可以列举卤原子、低级烷氧基、低级烷硫基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基磺酰基、低级烷基磺酰氧基、芳基磺酰氧基等，其中较好的是氟原子或氯原子这样的卤原子。关于其它取代基或盐的具体实例，将在下述关于本发明化合物(I-a)的说明中提及。

另一类本发明化合物是上述式(I)中取代基Y为Y′的化合物，是可用作优异抗肿瘤剂乃至抗癌剂的化合物。即，本发明提供如下通式(I-a)所示吡啶酮羧酸衍生物或其生理上可接受的盐，其制备方法及以其为有效成分的抗肿瘤剂，

式中A、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、Z、m、n和p均与上述定义相同。

在此，作为通式(I-a)所示化合物的盐，是上述通式(I-a)中R₂的定义所包含的羧基部分的盐，和1-吡咯烷基的3位上结合的碱性取代基部分的酸加成盐。

作为该羧基上的盐，可以列举诸如与钠、钾、镁、锌、银、铝、铂等金属的盐，或与二甲基氨基乙醇、甲基氨基乙醇、三乙醇胺、胍等有机碱的盐。

此外，作为通式(I-a)中1-吡咯烷基的3位上碱性取代基的酸加成盐，可以列举诸如与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等无机酸的盐，或与草酸、马来酸、富马酸、丙二酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、2-羟基乙磺酸、乳糖酸、葡庚糖酸等有机酸的盐。

以下说明各取代基。

本说明书中，“低级烷基”系指直链或支链、有1～5个碳的烷基，例如，可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基等。此外，“低级烷氧基”系指有1～5个碳的烷氧基，例如，较好的是甲氧基或乙氧基。

作为“卤原子”，可以列举氯原子、氟原子、溴原子。

通式(I-a)的取代基R₁处于2-噻唑基的4位和/或5位，较好的是氢原子、氟原子、氯原子、溴原子等卤原子，甲氧基、乙氧基等低级烷氧基，甲基、乙基等低级烷基，三氟甲基等有卤原子取代的低级烷基，3，4-二氟苯基等也可以有卤原子取代的苯基。

作为取代基R₂的定义中所包括的“可转化成羧基的基团”，只要是能用化学手段或酶学手段转化成羧基的基团就可以，较好的是诸如羟甲基或甲酰基、酯形态、其它羧基的生理上可接受的盐类等。

作为主要可用化学手段转化成羧基的酯形态，可以列举甲酯或乙酯等低级烷酯。

作为不仅能用化学手段而且也能用酶学手段转化成羧基的酯形态，可以列举乙酰氧甲酯或1-乙酰氧乙酯、新戊酰氧甲酯等低级烷酰氧基低级烷酯，1-乙氧基碳酰氧乙酯等低级烷氧基碳酰氧低级烷酯，2-二甲胺基乙酯等二低级烷胺基低级烷酯，2-(1-哌啶基)乙酯，3-丁内酯、胆碱酯，2-苯并[c]呋喃酮酯，(5-甲基-2-氧代-1，3-二噁唑-4-基)甲酯等。

作为R₃，较好的是氢原子，氟原子或氯原子等卤原子，氨基，有氨基保护基保护的氨基，三氟甲基等有卤原子取代的低级烷基；作为该氨基保护基，只要是在进行加水分解或加氢分解等通常脱保护基反应时不对其它结构部分产生实质性影响、能容易脱除的，无论何种保护基都可以采用，具体地说，与后述取代基Z的定义中的“能转化成氢原子的基团”实质上是相同的。作为氨基保护基的较好实例，可以列举诸如苄基、三苯甲基等。

取代基R₄是氢原子或低级烷基，较好的是氢原子、甲基、乙基等。此外，结合了含有R₄和Z的碱性取代基的1-吡咯烷基的3位若是不对称碳原子，则会存在以此为基础的光学异构体。

作为取代基Z，较好的是氢原子、甲基或乙基等低级烷基或“能转化成氢原子的基团”，作为“能转化成氢原子的基团”，只要是能用加水分解或加氢分解等化学手段或酶学手段转化成氢原子的、任何一种基团都可以。

作为这样的“能转化成氢原子的基团”Z，首先可以列举可水解基团。作为可水解基团的具体实例，除含有酰基、氧碳酰基的基团、氨基酸残基或肽残基外，还可以列举诸如邻硝基苯亚磺酰、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基、二苯膦基等。此外，一般来说，其Z是作为能转化成氢原子的基团的氨基酸残基或肽残基的本发明化合物(I-a)，由于溶解性优于Z不是氨基酸残基或肽残基的化合物，因而以注射剂等液剂形式使用时是优异的。

作为上述酰基的实例，可以列举甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。

此外，作为上述含有氧碳酰的基团的实例，可以列举乙氧基碳酰、叔丁氧基碳酰[(CH₃)₃C-OCO-]、苄氧基碳酰、对甲氧基苄氧基碳酰、乙烯基氧碳酰、β-(对甲苯磺酰)乙氧基碳酰等。

进而，作为氨基酸残基的实例，可以列举氨基酸本身或肽合成中通常用保护基保护的氨基酸残基。作为肽合成中通常所用氨基的保护基，可以列举甲酰或乙酰等酰基，苄氧基碳酰或对硝基苄氧基碳酰等芳基甲氧基碳酰基，叔丁氧基碳酰基[(CH₃)₃C-OCO-]等。

氨基酸残基可以是诸如丙氨酸残基[CH₃CH(NH₂)CO-]或亮氨酸残基[(CH₃)₂CHCH₂CH(NH₂)CO-]等任何一种氨基酸残基。这些氨基酸一般用3个字母组成的英文词表示，本说明书中也遵循这一惯例。此外，L-异构体、D-异构体或其混合异构体是通过在3字母词前面加“L-”、“D-”或“DL-”符号来加以区别。当对这些异构体不加以区别而予以总称时，这些符号可以不加。

作为氨基酸残基，可以列举诸如Gly(甘氨酸：Glycine)、Ala(丙氨酸：Alanine)、Arg(精氨酸：Arginine)、Asn(天冬酰胺：Asparagine)、Asp(天冬氨酸：Aspartic acid)、Cys(半胱氨酸：Cysteine)、Glu(谷氨酸：Glutamic acid)、His(组氨酸：Histidine)、Ile(异亮氨酸：Isoleucine)、Leu(亮氨酸：Leucine)、Lys(赖氨酸：Lysine)、Met(甲硫氨酸：Methionine)、Phe(苯丙氨酸：Phenylalanine)、Pro(脯氨酸：Proline)、Ser(丝氨酸：Serine)、Thr(苏氨酸：Threonine)、Trp(色氨酸： Tryptophan)、Tyr(酪氨酸：Tyrosine)、Val(缬氨酸：Valine)、Nva(正缬氨酸：Norvaline)、Hse(高丝氨酸：Homoserine)、4-Hyp(4-羟基脯氨酸：4-Hydoxyproline)、5-Hyl(5-羟基赖氨酸：5-Hydoxylysine)、Orn(鸟氨酸：Omithine)、β-Ala等氨基酸的残基。

作为肽残基，是上述氨基酸2～5个、较好2～3个连结而成的肽残基，可以列举诸如Ala-Ala[CH₃CH(NH₂)CO-NHCH(CH₃)CO-]、Gly-Phe、Nva-NVa、Ala-Phe、Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、Ala-Met、Met-Met、Leu-Met、Ala-Leu等肽的残基。

这些氨基酸或肽的残基中的立体化学配置可以是D-异构体、L-异构体或其混合体，但较好的是L-异构体。此外，Z为氨基酸或肽的残基时，也存在着这些残基中也有不对称碳原子的情况。作为有不对称碳原子的氨基酸残基的实例，可以列举Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、Lys、Thr、Tyr等氨基酸的残基，而作为有不对称碳原子的肽残基的实例，可以列举以这些有不对称碳原子的氨基酸残基为构成成分的肽残基。

此外，“能转化成氢原子的基因”Z可以是能以还原法脱除的可加氢分解基团，作为其实例，可以列举诸如邻甲苯磺酰等芳基磺酰基；苄基、三苯甲基、苄氧基甲基等有苯基或苄氧基取代的甲基；苄氧基碳酰或邻甲氧基苄氧基碳酰等芳基甲氧基碳酰基；β，β，β，-三氯乙氧基碳酰、β-碘乙氧基碳酰等卤代乙氧基碳酰基等。

进而，式Y′的1-吡咯烷基的取代基“(R₅)p-”是与1-吡咯烷基的吡咯环连接的。p是1～4的整数。p为2～4时，R₅可以相同也可以不同。R₅可以连接到1-吡咯烷基的任何一个位置上，但若连接到与含有R₄和Z的碱性取代基结合的位置(以这个位置为1-吡咯烷基的3位)或其毗邻位置(1-吡咯烷基的2位和/或4位)，则会更好。若R₅连接到上述1-吡咯烷基除3位外的其它位置上，且R₅不是氢原子时，则该1-吡咯烷基就会具有至少2个不对称碳原子，从而会存在立体异构体(顺式异构体、反式异构体)和光学异构体。作为取代基R₅，较好的是氢原子，甲基或乙基等低级烷基，氟甲基或三氟甲基等有卤原子取代的低级烷基，甲氧基或乙氧基等低级烷氧基，甲硫基等低级烷硫基，氯原子或氟原子等卤原子等。

有以上详述的各取代基的本发明化合物(I-a)及其生理上可接受的盐，是新型的而且有优异的抗肿瘤活性。

上述通式(I-a)所示的本发明化合物中，成为发挥抗肿瘤活性的核心的化合物是如下通式(I-b)所示的化合物：

式中R₁、m、R₄、n、R₅、p和A都与上述式(I-a)中的定义相同。

R₃′是氢原子、氨基、卤原子或也可以有卤原子取代的低级烷基，

Z′是氢原子或低级烷基。以下也把上述式(I-b)所示的化合物简称为“活性化合物”。不是活性化合物的化合物当给药到生物体内时，该化合物也会在生物体内转化成活性化合物。在这样的情况下，不是活性化合物的化合物也简称为“药物前体”(prodrug)。在本发明的情况下，作为药物前体，可以列举上述式(I-a)中诸如Z为氨基酸残基或肽残基的化合物，或R₂为甲酰基或乙酰氧甲氧基碳酰基等酯形态的化合物。

此外，在本说明书和权利要求的描述中，把也能借助于化学手段或酶学手段等任何一种手段转化成活性化合物的化合物总称为“能转化的化合物”。

本发明化合物(I-a)的结构特征在于其构成包括：

(1)以如下式①所示的吡啶酮羧酸为基本骨架

式中A与上述定义相同，a、b、c和d表示连接取代基的部位，

(2)a部位连接也可以有取代基的2-噻唑基，

(3)b部位连接羧基或能转化成羧基的基团，

(4)c部位或者无取代基，或者连接氨基等，

(5)A是碳原子或氮原子，其碳原子是没有氟原子等卤原子取代的，

(6)d部位连接至少有以如下式②所示基团为取代基的特定1-吡咯烷基，式中R₄、Z和n都与上述定义相同。具体地说，本发明化合物(I-a)是一类新型化合物，其结构特征在于a和d部位上连接的取代基的组合以及A上不含有氟原子。

通式(I-a)所包括的本发明化合物及其生理上可接受的盐，都是优异的抗肿瘤剂乃至抗癌剂，但A为CH的化合物是较好的抗肿瘤剂。作为更好的化合物，可以列举A为CH、m和p为1、n为0的化合物。

特别好的化合物是A为CH、m和p为1、n为0、R₁为氢原子、R₂为羧基、R₃为氢原子、R₄为氢原子或低级烷基、Z为氢原子、R₅为氢原子、低级烷基或低级烷氧基的化合物。例如，作为适用的化合物，可以列举1，4-二氢-7-(3-甲氧基-4-甲基氨基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(参照后述第1表的化合物1-1等)或能转化成此化合物的化合物。

通式(I-a)所包括的本发明的较好化合物在后述实施例中有具体描述，但作为通式(I-a)所包括的本发明1，8-二氮杂萘类的较好化合物，可以列举以下化合物以及能转化成此类化合物的化合物。

7-(3-氨基-4-氟-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-4-甲氧基-3-甲基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-4-甲氧基-4-甲基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-3-氟甲基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-4-氟甲基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-4-三氟甲基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-(4-氯-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-(4，5-二氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

5-氨基-7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-(4-氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(4-三氟甲基-2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-〔4-(3，4-二氟苯基)-2-噻唑基〕-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-(5-溴-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

作为通式(I-a)所包括的本发明的吡啶并嘧啶类化合物的实例，可以列举以下化合物以及能转化成此类化合物的化合物。

5，8-二氢-2-(反式-3-甲氧基-4-甲基氨基-1-吡咯烷基)-5-氧代-8-(2-噻唑基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸

8-(4-氟-2-噻唑基)-5，8-二氢-2-(反式-3-甲氧基-4-甲基氨基-1-吡咯烷基)-5-氧代吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸

药理实验

试验例

以下说明本发明化合物(I-a)的抗肿瘤活性。作为对照，采用本说明书开头所述特开昭61-152682号公报(参考文献1)记载的化合物A和有后述结构式的市售抗癌剂鬼臼乙叉甙(Etoposide)。

试验例1 对P388淋巴性小鼠白血病细胞的离体抗肿瘤活性

(IC₅₀：μg/ml)

用P388淋巴性小鼠白血病细胞，按照MTT〔溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓〕法，测试试验化合物的抗肿瘤活性。

向96孔平皿(96-well plates)的各孔中各添加0.1ml含有1000～2000个P388淋巴性小鼠白血病细胞和预定浓度的试验化合物的培养液，在37℃、5％二氧化碳条件下培养72小时。培养后，向各孔中各添加0.02ml MTT(5mg/ml)溶液，再培养4小时。将培养液离心分离(4℃，2000rpm×20分钟)，吸引除去上清液。然后向各孔中添加0.1ml二甲基亚砜，使所生成的甲(formazan)溶解，再添加0.1ml二甲基亚砜。用多扫描双色法(Multiscan Bichromatic)(主波长570nm，副波长690nm)测定这种溶液的吸光度(OD)。以未处理细胞(对照)的吸光度为100％，用最小二乘法算出50％增殖抑制浓度(50％Inhibitory Concentration，IC₅₀：μg/ml)。

结果列于第1表中。

第1表对P388淋巴性小鼠白血病细胞的离体抗肿瘤活性(IC₅₀：μg/ml)

^*取代基的立体结构呈相对配置(下同)。第1表(续)第1表(续)

化合物H：鬼臼乙叉甙

如第1表中所示，本发明化合物对P388淋巴性小鼠白血病细胞的离体抗肿瘤活性(IC₅₀)，即使与化合物A相比，也要强2～22倍。

试验例2 对人体癌细胞的离体抗肿瘤活性

向96孔平皿的各孔中各添加0.1ml含500～2000个人体癌细胞的培养液，在37℃、5％二氧化碳条件下培养约20小时。培养后，添加预定浓度的试验化合物溶液，再培养72小时。培养后，向各孔中各添加0.01ml MTT(5mg/ml)溶液，进一步培养4小时。吸引除去培养液的上清液，然后向各孔中添加0.1ml二甲基亚砜，使所生成的甲溶解，再添加0.1ml二甲基亚砜。对这种溶液同试验例1一样测定，算出50％增殖抑制浓度。

结果列于第2表中。

第2表对人体癌细胞的离体抗肿瘤活性(IC₅₀：μg/ml)

化合物	人体癌细胞
	人体癌细胞							人体鼻咽癌KB	人体黑色肿HMV-2	人体胃癌AZ-521	人体胃癌MKN45	人体结肠癌WiDr	人体子宫颈癌C-33A	人体肺癌A-427
	1-1	0.110	0.131	0.0561	0.150	0.379	0.137	人体鼻咽癌KB	人体黑色肿HMV-2	人体胃癌AZ-521	人体胃癌MKN45	人体结肠癌WiDr	人体子宫颈癌C-33A	人体肺癌A-427	0.0871
1-2	1-1	0.110	0.131	0.0561	0.150	0.379	0.137	0.0873	0.114	0.0396	0.155	0.357	0.0828	0.0925	0.0871
1-2	1-3	0.208	0.234	0.110	0.222	0.503	0.148	0.0873	0.114	0.0396	0.155	0.357	0.0828	0.0925	0.107
1-4	1-3	0.208	0.234	0.110	0.222	0.503	0.148	0.147	0.197	0.0985	0.131	0.273	0.143	0.158	0.107
1-4	2	0.309	0.382	0.331	0.579	1.88	0.314	0.147	0.197	0.0985	0.131	0.273	0.143	0.158	0.169
3	2	0.309	0.382	0.331	0.579	1.88	0.314	0.153	0.210	0.181	0.364	1.08	0.184	0.0588	0.169
3	4	0.172	0.187	0.100	0.199	0.392	0.144	0.153	0.210	0.181	0.364	1.08	0.184	0.0588	0.194
5	4	0.172	0.187	0.100	0.199	0.392	0.144	0.0805	0.0944	0.0433	0.0978	0.218	0.106	0.0927	0.194
5	6	0.0987	0.122	0.0622	0.160	0.381	0.156	0.0805	0.0944	0.0433	0.0978	0.218	0.106	0.0927	0.0832
7	6	0.0987	0.122	0.0622	0.160	0.381	0.156	0.111	0.139	0.0719	0.112	0.314	0.105	0.0933	0.0832
7	8	0.0494	0.0578	0.0285	0.143	0.323	0.0712	0.111	0.139	0.0719	0.112	0.314	0.105	0.0933	0.0625
9	8	0.0494	0.0578	0.0285	0.143	0.323	0.0712	0.106	0.211	0.0625	0.148	0.412	0.151	0.100	0.0625
9	10	0.190	0.386	0.292	0.468	0.797	0.247	0.106	0.211	0.0625	0.148	0.412	0.151	0.100	0.153
11	10	0.190	0.386	0.292	0.468	0.797	0.247	0.179	0.214	0.0307	0.144	0.264	0.161	0.0749	0.153
11	12	0.125	0.265	0.101	0.164	0.295	0.131	0.179	0.214	0.0307	0.144	0.264	0.161	0.0749	0.146
13	12	0.125	0.265	0.101	0.164	0.295	0.131	0.150	0.171	0.0717	0.139	0.268	0.138	0.150	0.146
13	14	0.636	0.872	0.310	-	-	-	0.150	0.171	0.0717	0.139	0.268	0.138	0.150	-
15	14	0.636	0.872	0.310	-	-	-	0.0604	0.119	0.0288	0.0964	0.259	0.0854	0.0696	-
15	16	0.126	0.181	0.0798	0.148	0.322	0.132	0.0604	0.119	0.0288	0.0964	0.259	0.0854	0.0696	0.145
A	16	0.126	0.181	0.0798	0.148	0.322	0.132	1.94	2.88	0.797	1.27	4.09	0.651	0.854	0.145
A	H	0.201	0.298	0.080	0.490	1.63	0.084	1.94	2.88	0.797	1.27	4.09	0.651	0.854	0.095

如第2表中所示，本发明化合物对人体癌细胞的离体抗肿瘤活性(IC₅₀)是优异的。另一方面，作为对照的化合物A的活性，只不过是本发明化合物的1/2～1/50。

试验例3 对移植了P388淋巴性小鼠白血痛细胞的小鼠的寿命延长

效果

将1×10⁶个P388淋巴性小鼠白血病细胞移植到SLC：BDF₁小鼠(8～10周龄，雌性，1组7只)的腹腔内。试验化合物(药剂)或者溶解在0.1N NaOH中，或者悬浮在0.4％羧甲基纤维素溶液中，用蒸馏水或0.4％羧甲基纤维素溶液将其稀释到各给药浓度。在移植的次日(第1日)和第5日共2次经腹腔内(ip)给药0.2ml各溶液。在30日内观察小鼠的生死，求出各组的生存日数中值(Median survival time)，按下式算出延寿率(Increase in Life Span，ILS，％)。

药效的判定按照美国国立癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)的基准进行。即，延寿率≥75％者判定为“++”(显效)；20～74％者判定为“+”(有效)；≤19％者判定为“-”(无效)。

结果列于第3表中。

第3表对移植了P388淋巴性白血病细胞的小鼠的延寿效果

化合物	给药量(mg/kg)	延寿率(％)(溶液)	延寿率(％)(悬浮液)	效果的判定
化合物	给药量(mg/kg)	延寿率(％)(溶液)	延寿率(％)(悬浮液)	效果的判定	1-1	502512.56.253.131.560.78	＞2752001501251006350	17588	++++++++++++
1-2	2512.56.253.131.560.78	＞275＞2751751258850	213113	+++++++++++	1-1	502512.56.253.131.560.78	＞2752001501251006350	17588	++++++++++++
1-2	2512.56.253.131.560.78	＞275＞2751751258850	213113	+++++++++++	1-3	502512.56.253.13	＞2752001388863	20012563	+++++++++
1-4	12.53.13	-	10025	+++	1-3	502512.56.253.13	＞2752001388863	20012563	+++++++++
1-4	12.53.13	-	10025	+++	2	502512.56.253.131.56	＞2752131251008850	23813863	+++++++++++
3	2512.56.253.131.56	＞2751881137563	17588	+++++++++	2	502512.56.253.131.56	＞2752131251008850	23813863	+++++++++++
3	2512.56.253.131.56	＞2751881137563	17588	+++++++++	4	2512.56.253.13	1501258863	12563	+++++++

第3表(续)

5	12.56.253.131.56	18815011350	18888	+++++++
5	12.56.253.131.56	18815011350	18888	+++++++	6	502512.56.253.131.56	22515013810063	＞275200100	+++++++++++
7	5012.53.13	-	18810075	++++++	6	502512.56.253.131.56	22515013810063	＞275200100	+++++++++++
7	5012.53.13	-	18810075	++++++	8	12.53.130.78	-	＞27517575	++++++
9	5012.53.13	-	250125100	++++++	8	12.53.130.78	-	＞27517575	++++++
9	5012.53.13	-	250125100	++++++	10	502512.56.253.13	＞2751251007563	11350	+++++++++
11	5012.53.13	-	22515088	++++++	10	502512.56.253.13	＞2751251007563	11350	+++++++++
11	5012.53.13	-	22515088	++++++	12	12.5	-	75	++
13	5012.53.13	-	21310025	+++++	12	12.5	-	75	++
13	5012.53.13	-	21310025	+++++	14	5012.53.13	-	＞27511363	+++++

第3表(续)

15	5012.53.13	-	23820088	++++++
15	5012.53.13	-	23820088	++++++	16	5012.53.13	-	23813838	+++++
17	50	-	150	++	16	5012.53.13	-	23813838	+++++
17	50	-	150	++	A	502512.5	38250	-	++-
H	2512.56.253.131.56	＞2751501007550	-	+++++++++	A	502512.5	38250	-	++-

如第3表中所示，本发明化合物对移植了P388淋巴性小鼠白血病细胞的小鼠的延寿效果，即使与作为对照的化合物A的情况相比，也远远优异得多。

试验例4 对移植了结肠26小鼠肿瘤细胞的小鼠的肿瘤增殖抑制

效果

向SLC：CDF₁雌性小鼠(7～9周龄，1组7只)的腹部皮内移植结肠26小鼠肿瘤(Colon 26 murine tumor)细胞的2％浆状物0.1ml。试验化合物(药剂)溶解在0.1N NaOH中，用蒸馏水将其稀释到各给药浓度。从移植的次日(第1日)到第9日每日1次经腹腔内(ip)给药0.2ml各溶液。从移植后第21～22日的肿瘤直径求出推定肿瘤重量，按下式算出给药组相对于对照组的肿瘤增殖抑制率(TumorGrowth Inhibition Rate：IR，％)。

第4表对移植了结肠26小鼠肿瘤细胞的小鼠的肿瘤增殖抑制效果化合物给药量(mg/kg) 肿瘤增殖抑制率(％)1-1 1.56 861-2 1.10 691-3 1.56 50

2.21 751-4 3.13 612 12.5 793 3.13 774 1.56 64

3.13 895 1.56 786 1.56 717 1.56 61

3.13 958 0.39 57

1.56 91

第4表(续)

化合物给药量(mg/kg) 肿瘤增殖抑制率(％)

9 3.13 62

6.25 97

10 3.13 74

11 0.78 50

1.56 58

12 3.13 48

6.25 84

13 1.56 41

14 3.13 55

6.25 68

15 3.13 68

16 3.13 77

A 12.5 23

H 12.5 57

如第4表中所示，本发明化合物对移植了结肠26小鼠肿瘤细胞的小鼠的肿瘤增殖抑制效果(IR)是优异的。另一方面，化合物A的此类效果，如果考虑其给药量和抑制率，则显然劣于本发明化合物。

以下试验例5～9，是将人体癌细胞移植到裸鼠中，对其给药用含NaOH的水溶液溶解的试验化合物，观察癌细胞增殖抑制程度的强度。

以下试验例5～9的结果表示在第1图～第14图中。

第1图～第9图表示肿瘤增殖抑制率(IR)的随时间变化。

第10图～第14图表示试验例5～9中在使用化合物1-1的情况下肿瘤重量与经过日数的关系，纵轴表示肿瘤重量，横轴表示给药开始后的日数。肿瘤重量是从肿瘤直径推定的。第10图～第14图中，作为对照的是移植了癌细胞但没有给药试验化合物的裸鼠中肿瘤重量的随时间变化。

此外，各图中都标出了各化合物的给药量(mg/kg/day)以及试验例4所说明的观察最终日的肿瘤增殖抑制率(IR：％)。

在此，为便于说明，解释一下试验化合物对裸鼠的给药时间安排。从给裸鼠移植人体癌细胞之日算起×日后以试验化合物给药〔经腹腔内给药(ip)〕y日，然后中断给药(休药)z日，然后再次以试验化合物给药y日，此时将给药(y日)和休药(z日)的周期称为一个“药程”(course)。在这种情况下，给药时间安排用如下记号表示：

〔(x)(y)(z)(药程)(i.p)〕

以下举例说明这个记号。但↑表示给药日。

例移植后第25日给药(ip)，然后设置6日的休药期，然后再次给药。将这一药程重复5次。

〔(25)(1)(6)(5药程)(ip)〕

试验例5 对移植了人体鼻咽癌细胞的裸鼠的抗肿瘤效果

按照以下条件进行实验。

实验条件：使用动物：雌性BALB/cAnNCrj-nu/nu裸鼠

(9和14周龄，1组6只)；使用癌细胞：人体鼻咽癌(human nasopharynx cancer)KB；癌细胞移植：将2.5×10⁶个癌细胞移植到裸鼠腹部皮内；给药时间安排：(5)(1)(6)(6药程)(ip)〕；结果：第1图～第2图和第10图。

试验例6 对移植了人体乳癌细胞的裸鼠的抗肿瘤效果

按照以下条件进行实验。

实验条件：使用动物：雌性BALB/cAnNCrj-nu/nu裸鼠(9周龄，1组5～6只)；使用癌细胞：人体乳癌(human breast cancer)MX-1；癌细胞移植：将2mm³癌组织片移植到裸鼠的背部皮下；给药时间安排：〔(16和23)(1)(6)(6药程)(ip)〕；结果：第3图～第5图和第11图。

试验例7 对移植了人体结肠癌细胞的裸鼠的抗肿瘤效果

按照以下条件进行实验。

实验条件：使用动物：雌性BALB/cAnNCrj-nu/nu裸鼠(9周龄，1组6只)；使用癌细胞：人体结肠癌(human colorectal cancer)WiDr；癌细胞移植：将2.5×10⁶个癌细胞移植到裸鼠的腹部皮内；给药时间安排：〔(9)(1)(6)(6药程)(ip)〕；结果：第6图和第12图。

试验例8 对移植了人体黑素瘤的裸鼠的抗肿瘤效果

按照以下条件进行实验。

实验条件：使用动物：雌性BALB/cAnNCrj-nu/nu和BALB/c nu/nu裸鼠

(11～15周龄，1组6～7只)；使用癌细胞：黑素瘤(human melanoma)HMV-2；癌细胞移植：将4.4×10⁶个癌细胞移植到裸鼠的腹部皮内；给药时间安排：〔(8～9)(1)(6)(9药程)(ip)〕；结果：第7图～第8图和第13图。

试验例9 对移植了人体肺癌的裸鼠的抗肿瘤效果

按照以下条件进行实验。

实验条件：使用动物：雌性BALB/cAnNCrj-nu/nu裸鼠(13周龄，1组6只)；使用癌细胞：人体肺癌(human lung cancer)LX-1；癌细胞移植：将2mm³癌组织片移植到裸鼠的背部皮下；给药时间安排：〔(19和26)(1)(6)(5～6药程)(ip)〕；结果：第9图和第14图。

如以上第1图～第14图所示，本发明化合物显著抑制了移植到裸鼠中的人体癌细胞的增殖。

试验例10急性毒性

对雌性BALB/c CrSIc小鼠(1组5～10只，10周龄)以预定浓度的试验液(0.1ml/10g体重)给药，从给药后第14日的小鼠死亡率算出LD₅₀，得到下表的结果。

第5表急性毒性(LD₅₀：mg/kg)化合物腹腔内给药(ip) 静脉内给药(iV)1-1 93.2 -2 135 -3 55.2 1194 - ＞1005 - 66.7H 71 123

如第5表中所示，本发明化合物的急性毒性与市售抗癌剂化合物H(鬼臼乙叉甙)大致相同。

试验例11 溶解度

测定化合物1-1、1-1-3、3、3-1对0.1M磷酸缓冲液(pH7.2)和蒸馏水的溶解度，得到下表的结果。

化合物1-1-3是化合物1-1的L-Ala衍生物，是按照实施例C-1(5)的描述制备的；化合物3-1是化合物3的L-Ala衍生物，是按照实施例C-6(4)的描述制备的。

第6表溶解度化合物蒸馏水(mg/ml) 0.1M磷酸缓冲液(pH7.2)(mg/ml)1-1 2.9 20.11-1-3 ＞98.7 ＞233.53 8.3 -3-1 79.4 -

如第6表中所示，Z为氨基酸残基的化合物1-1-3和3-1的溶解度，即使与Z为氢原子的对应化合物1-1或3相比，也显示出约10倍或更高的溶解性。而且，化合物1-1在中性的溶解度高，适用于注射剂等液剂。

如以上试验结果所示，本发明的化合物不仅对淋巴性白血病肿瘤等非固形肿瘤，而且对诸如肺、乳腺、胃、子宫、皮肤、肠、膀胱、鼻咽等各组织中发生的各种固形肿瘤，都显示出显著的抗肿瘤活性。此外，本发明化合物的安全性也是比较高的。因此，本发明化合物可用作人体肿瘤的治疗剂或预防剂。

本发明化合物的给药量，就是化合物的肿瘤抑制作用量，因其药力学特性、给药方法、症状、年龄、处置形式(预防或治疗)等而异，但通常是每1日每1kg体重约0.25mg～约50mg、较好约0.5mg～约20mg。例如，体重约50kg的患者每1日给药合计约13mg～约2.5g、较好25mg～1g活性成分。也可以1日分2～4次给药。给药途径可以是经口、非经口等任何一种，但较好的是非经口给药。

本发明化合物一般是以制剂形式给药的。这些制剂可以通过使本发明化合物与制剂载体配合来制备。例如，在属于非经口给药制剂的液剂中作为制剂载体，溶剂是必需成分，此外还可适量配入等渗剂、增溶剂、无痛剂、pH调节剂、缓冲剂、防腐剂等辅助成分。

作为溶剂，一般用水，也可以用丙二醇等有机溶剂，或水与有机溶剂的混合物。

作为等渗剂，可以列举山梨糖醇或甘露糖醇等糖类，氯化钠等，较好的是糖类。

作为pH调节剂，可以列举氢氧化钠等碱，或者盐酸或磷酸等酸。

作为增溶剂，可以列举缩聚山梨醇油酸酯(polysorbate)80或普郎尼克(pluronic)F68等表面活性剂，或者乳酸、甲磺酸等能与本发明化合物生成酸加成盐的有机酸等。

作为无痛剂，可以列举盐酸利多卡因或盐酸普鲁卡因等；作为防腐剂，可以列举苄醇等；作为稳定剂，可以列举抗坏血酸等抗氧剂；作为缓冲剂，可以列举磷酸、柠檬酸、乳酸等酸的盐等。

注射剂或输液剂等液剂可通过将本发明化合物溶解或悬浮、较好的是溶解在溶剂中，并根据意愿，在溶解或悬浮之前或之后配入其它辅助成分来制备。冷冻干燥制剂可通过将这些液剂冷冻干燥来制备，给药时再用溶剂溶解或悬浮。

此外，在锭剂或胶囊剂、颗粒剂、细粒剂、散剂等固形制剂中作为载体，只要是不与本发明化合物反应，可用于本领域的，任何一种都可以，例如，可以使用淀粉、甘露糖醇、结晶纤维素、羧甲基纤维素等。

再者，这些制剂中除本发明化合物外，还可进一步含有治疗上有效的其它医药成分。

制备方法

以下说明本发明化合物的制备方法。本发明化合物(I)及其盐可以用以下说明的(a)吡咯烷取代反应、(b)闭环反应和(c)氧化反应等方法制备。

(a)吡咯烷取代反应

在通式(I)所示的本发明化合物中，Y为有取代基的1-吡咯烷基(Y′)的化合物(I-a)及其盐，可以通过如下通式(II)所示的化合物或其盐与如下通式(III)所示的吡咯烷衍生物反应来制备：

式中L是能脱离的基团，A、R₁、R₂、R₃和m都与上述定义相同，式中R₄、R₅、Z、n和p都与上述定义相同。

式(II)中能脱离的基团(L)，可以列举同上述式(I)中Y为能脱离的基团的情况下一样的基团，例如，较好的是卤原子、低级烷氧基、低级烷硫基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基磺酰基、低级烷基磺酰氧基、芳基磺酰氧基等。

本反应可以在无溶剂下或适当溶剂中、较好在碱存在下、在10～150℃的温度范围内实施。作为溶剂，可以使用乙腈或水、乙醇、吡啶、二甲基亚砜、1-甲基-2-吡咯烷酮等。碱是作为酸受体而起作用的，例如，可以使用三乙胺、1，8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯或者碳酸钠或碳酸氢钠等碳酸盐。若使用过量化合物(III)，则也可以兼备作为酸受体的作用。

此外，作为原料使用的化合物(II)也是新型的，可以通过诸如以下的闭环反应来制造。

(b)闭环反应

本发明化合物(I)及其盐可以通过使如下通式(IV)所示化合物发生闭环反应来制备：

式中L是能脱离的基团，R₁、R₂、R₃、A、Y和m都与上述定义相同。

式中能脱离的基团L，如已经对式(II)作了说明的，也可以采用与Y的定义中所包括的能脱离的基团一样的基团。

本闭环反应可按如下实施：在以化合物(IV)为准1～3倍摩尔的碱如碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠、叔丁醇钾、氟化钾等的存在下，使化合物(IV)与溶剂的混合物在30～150℃、较好在30～100℃搅拌1～6小时。作为溶剂，较好的是乙醇或二噁烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等。

作为原料使用的化合物(IV)也是新型的，这可以按照诸如以下实施例中所述的方法制备。

(c)氧化反应

R2为甲酰基的通式(I)所示本发明化合物及其盐，可通过使如下通式(V)所示化合物发生氧化反应来制备：

式中R₁、R₃、A、Y和m均与上述定义相同。

本氧化反应可通过在溶剂中使上述化合物(V)与氧化剂混合，在100℃以下、较好在0～50℃的温度搅拌数小时来实施。作为氧化剂，可以列举2，3-二氯-5，6-二氰基苯醌或四氯-1，4-苯醌、四氰乙烯、钯-碳、N-溴琥珀酰亚胺、二氧化锰等；作为溶剂，可以列举1，4-二噁烷或甲苯、二甲苯、乙醇、叔丁醇、乙酸乙酯、二甲基甲酰胺等。

此外，本发明化合物(I)及其盐，也可以通过使Z为氢原子的本发明化合物(I)与氨基酸或肽按常法进行反应，或使R₃为卤原子的化合物发生氨基化而转化成R₃为氨基的化合物来制备。

用这些方法得到的本发明化合物为酯形态的情况下，可通过使其酯部分按常法加水分解而转化成羧酯形态。此外，化合物(I)的羧酸部分也可以用常法进行酯化。进而，本发明化合物的Z为用保护基保护的氨基酸残基或肽残基时，也可以用常法脱去该保护基。

这样制备的本发明化合物可按照常法分离、精制。因分离、精制条件而异，可得到盐形式、游离羧酸形式或游离胺形式，但这些形式可根据需要相互转化，而制备成目的形式的化合物。

本发明化合物为外消旋体时，如有必要，可通过采用众所周知的方法分离成各自的光学异构体。本发明化合物的立体异构体(顺式或反式)，如有必要，可利用通常的方法如分步结晶法或色谱法等使之彼此分离。

此外，作为各自的原料化合物，当然可以用一方为光学异构体或立体异构体来导致对应的目的物，而且，一般来说这是有利的方法。

实施例

以下列举实施例来详细说明本发明。

要注意的是，在以下，系列A的实施例表示中间体(II)[通式(II)〕的制备方法具体例，系列B的实施例表示原料化合物(III)〔通式(III)〕的制备方法具体例，系列C的实施例表示目的物(I-a)的制备方法具体例，系列D的实施例表示制剂的制备方法具体例。

此外，随附的第15图～第19图中列出了下述系列A、系列B和系列C-14的实施例中所述反应的反应式。

1.系列A

实施例A-1 中间体(II)的制备

7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯

(1)-1把2，6-二氯吡啶(20g)溶解在四氢呋喃(200ml)中，在氩气流下，在-78℃，用30分钟滴加正丁基锂(1.6M)的正己烷溶液(84.5ml)。在同一温度下搅拌1小时后，添加大量过剩的二氧化碳(固体)。搅拌1小时后升温至-10℃，依次添加水和盐酸，调至pH1～2，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，蒸干为止。得到的固体中添加亚硫酰二氯(40ml)，加热回流3小时。减压蒸出过剩的亚硫酰二氯，并减压蒸馏粗生成物，得到2，6-二氯烟酰氯(19.8g)。

沸点：97-99℃/1mmHg

IR(净相)cm^-1：1784

(1)-2 2，6-二氯烟酸(50.6g)与亚硫酰二氯(100ml)的混合物回流2小时。减压蒸出过剩的亚硫酰二氯，并减压蒸馏粗生成物，得到2，6-二氯烟酰氯(44.9g)。

沸点：115-120℃/3mmHg

IR(净相)cm^-1：1784

(2)从金属镁(5.36g)、丙二酸二乙酯(35.4g)和乙醇(27ml)衍生的乙氧基镁丙二酸二乙酯溶解在四氢呋喃(35ml)与甲苯(140ml)组成的混合溶液中。此溶液用冰冷却，在搅拌下，向其中滴加含有上述(1)-1项或(1)-2项得到的酰氯(44.9g)的四氢呋喃(19ml)与甲苯(32ml)组成的混合液。滴加结束后，在室温搅拌过夜。减压浓缩，向残渣中添加盐酸水溶液，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸钠使之干燥后，减压蒸出溶剂，得到油状物。向其中添加水(190ml)和对甲苯磺酸(0.1g)，回流2小时。冷却后用氯仿萃取，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂后得到油状物。减压蒸馏粗生成物，得到2，6-二氯烟酰乙酸乙酯(45.2g)。

沸点：135-140℃/2mmHg

(3) 前项(2)得到的化合物(44.9g)、乙酸酐(43.8g)和原甲酸乙酯(37.7g)组成的混合物回流14小时。减压蒸干、用冰冷却下添加二异丙基醚(500ml)和2-氨基噻唑，在室温搅拌5小时。滤出所析出的结晶，得到2-(2，6-二氯烟酰)-3-(2-噻唑基氨基)丙烯酸乙酯(52.8g)。

熔点：119-122℃(用二丙基醚重结晶)

IR(KBr)cm^-1：1700

(4)前项(3)得到的化合物(51.7g)溶解在二噁烷(310ml)中，添加碳酸钾(21.4g)，在60℃搅拌1小时。加冰水之后用10％盐酸水溶液中和，滤取析出的结晶。用氯仿和二异丙基醚的混合液重结晶，得到7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(44.6g)。

熔点：176-177℃

IR(KBr)cm^-1：1724

NMR(CDCl₃)δ：1.43(t，3H，J＝6.5Hz)，

4.45(q，2H，J＝6.5Hz)，7.38(d，1H，

J＝3.5Hz)，7.52(d，1H，J＝8.5Hz)，7.75

(d，1H，J＝3.5Hz)，8.78(d，1H，J＝8.5

Hz)，10.00(s，1H)

实施例A-2 中间体(II)的制备

7-氯-1-(4-氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯

实施例1(4)得到的酯(250mg)、N-氟-2，6-二氯吡啶鎓四氟硼酸盐(240mg)和1，2-二氯乙烷(10ml)组成的混合物加热回流2天。向反应液中加水，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。得到的残渣用硅胶柱色谱法(氯仿作为洗脱剂)精制，用乙酸乙酯重结晶，得到标题化合物(40mg)。

熔点：174-175℃

IR(KBr)cm^-1：1700

NMR(CDCl₃)δ：1.42(t，3H，J＝6.5Hz)，

4.45(q，2H，J＝6.5Hz)，7.33(d，1H，

J＝3.5Hz)，7.51(d，1H，J＝8.5Hz)，8.78

(d，1H，J＝8.5Hz)，9.85(s，1H)

实施例A-3 中间体(II)的制备

5，7-二氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

(1) 4-氨基-2，6-二氯吡啶(5.5g)、氯化亚铜(4.4g)和浓盐酸(50ml)的混合物在冰盐冷却下每次少量缓缓添加亚硝酸钠(3.5g)。在同温度搅拌1小时、在室温搅拌1.5小时后，加水，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到2，4，6-三氯吡啶(5.5g)。

IR(净相)cm^-1：1563、1357、1155、851、823

NMR(CDCl₃)δ：7.31(s，2H)

(2) 前项(1)得到的化合物(5.5g)和四氢呋喃(55ml)组成的混合物在-78℃滴加正丁基锂(1.6M)的正己烷溶液(20ml)。同温度下搅拌1小时后，添加大量过剩的二氧化碳(固体)。搅拌1小时后，升温至0℃，添加盐酸水溶液调至酸性，用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，向残渣中添加二异丙基醚，滤取结晶，得到2，4，6-三氯烟酸(6.5g)。

熔点：138-141℃

IR(KBr)cm^-1：1715

(3) 前项(2)得到的化合物(6.5g)和亚硫酰二氯(25ml)组成的混合物回流3小时。减压蒸出过剩的亚硫酰二氯，减压蒸馏粗生成物，得到2，4，6-三氯烟酰氯(6.6g)。

沸点：93-95℃/1mmHg

IR(净相)cm^-1：1791

(4) 丙二酸单乙酯(3.6g)和四氢呋喃(30ml)组成的混合物在0℃滴加溴甲基镁(3M)的乙醚溶液(19ml)。在室温搅拌1小时后，滴加前项(3)得到的化合物(6.6g)与四氢呋喃(30ml)的混合物，在60℃加热1.5小时。减压蒸出溶剂，向残渣中添加盐酸水溶液，用氯仿萃取。用无水硫酸盐干燥后，减压蒸出溶剂，蒸馏粗生成物，得到2，4，6-三氯烟酰乙酸乙酯(4.8g)。

沸点：160-162℃/2mmHg

IR(净相)cm^-1：1746

(5) 前项(4)得到的化合物(4.8g)、乙酸酐(4.2g)和原甲酸乙酯(3.6g)组成的混合物回流1.5小时。减压蒸干，用冰冷却下添加二异丙基醚(100ml)和2-氨基噻唑(1.6g)，在室温搅拌3小时。减压蒸出溶剂，得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂：氯仿)精制，用乙酸乙酯重结晶，得到2-(2，4，6-三氯烟酰)-3-(2-噻唑基氨基)丙烯酸乙酯(4.0g)。

熔点：126-127℃

IR(KBr)cm^-1：1691

(6) 前项(5)得到的化合物(4.0g)、碳酸钾(1.5g)和乙酸乙酯(40ml)组成的混合物在60℃加热1小时。减压蒸出溶剂，向残渣中加水，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂：氯仿)精制，用氯仿重结晶，得到5，7-二氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(2.5g)。

熔点：226-227℃

IR(KBr)cm^-1：1737，1692

(7)前项(6)得到的酯(1.8g)与20％盐酸水溶液(60ml)的混合物加热回流5小时，冷却后加水，滤取析出的结晶、水洗，得到标题化合物5，7-二氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(1.4g)。

熔点：264-266℃

IR(KBr)cm^-1：1729

实施例A-4中间体(II)的制备

5-氨基-7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸

(1)实施例A-3(6)得到的化合物(500mg)、苄胺(140mg)、三乙胺(280mg)和甲苯(15ml)组成的混合物回流30分钟。减压蒸出溶剂，向残渣中加水，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到的残渣用乙酸乙酯重结晶，得到5-苄胺基-7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(510mg)。

熔点：141-143℃

IR(KBr)cm^-1：1733

NMR(CDCl₃)δ：1.42(t，3H，J＝7Hz)，

4.41(q，2H，J＝7Hz)，4.49(d，2H，J

＝6.5Hz)，6.47(s，1H)，7.31(d，1H，J＝

3.5Hz)，7.32-7.40(m，5H)，7.70(d，1H，

J＝3.5Hz)，9.87(s，1H)，11.2-11.7(m，

1H)

(2)前项(1)得到的酯(1.0g)、浓硫酸(2ml)和乙酸(8ml)组成的混合物在110℃搅拌5小时，冷却后，加水8ml，在110℃搅拌1小时。滤取析出的结晶、水洗，得到740mg标题化合物。

熔点：264-265℃

IR(KBr)cm^-1：1727

实施例A-5中间体(II)的制备

7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-5-三氟甲基-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯

(1) 2，6-二氯-4-三氟甲基吡啶(5g)和四氢呋喃(50ml)组成的混合物冷却至-78℃，滴加正丁基锂(1.6M)的正己烷溶液(16ml)，搅拌30分钟。向其中添加大量过剩的二氧化碳(固体)，搅拌1小时。升温至0℃，添加乙酸乙酯和稀盐酸进行萃取，有机层用硫酸钠干燥。减压蒸出溶剂，向残渣中添加亚硫酰二氯(20ml)，加热回流6小时。减压蒸出过剩的亚硫酰二氯，残留物进行减压蒸馏，得到2，6-二氯-4-三氟甲基烟酰氯(3.8g)。

沸点：77-78℃/2mmHg

IR(净相)cm^-1：1797

(2) 向镁(0.36g)和乙醇(1.5ml)组成的混合物中加1滴四氯化碳，滴加丙二酸二乙酯(2.4g)、乙醇(1.5ml)和甲苯(10ml)组成的混合物，搅拌2小时。然后，在冰冷却下滴加前项(1)得到的化合物(3.8g)与四氢呋喃(10ml)的混合物，在室温搅拌3小时。向其中添加乙酸乙酯和稀盐酸水溶液进行萃取，有机层水洗、用硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂。向残渣中加水(20ml)和对甲苯磺酸(50mg)，加热回流3小时。向其中加氯仿和水进行萃取，有机层用硫酸钠干燥，减压蒸出溶剂，得到2，6-二氯-4-三氟甲基烟酰乙酸乙酯(0.9g)。

IR(净相)cm^-1：1744，1721

MS(m/z)：330(MH⁺)

(3) 前项(2)得到的化合物(0.9g)、原甲酸乙酯(0.6g)和乙酸酐(0.7g)组成的混合物在140℃加热回流1.5小时，减压蒸干。向残渣中添加异丙醚(20ml)，在冰冷却下添加2-氨基噻唑(0.3g)，在室温搅拌3小时后，蒸出溶剂。向其中添加氯仿和水进行萃取，有机层用硫酸钠干燥、减压蒸出溶剂。残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂：氯仿)精制，得到2-(2，6-二氯-4-三氟甲基烟酰)-3-(2-噻唑基氨基)丙烯酸乙酯(0.37g)。

IR(净相)cm^-1：1713

MS(m/z)：440(MH⁺)

(4)前项(3)得到的化合物(0.37g)、碳酸钾(0.13g)和乙酸乙酯(10ml)组成的混合物加热回流15分钟，加入乙酸乙酯进行萃取，有机层用硫酸钠干燥。减压蒸出溶剂，残渣用乙酸乙酯重结晶，得到标题化合物7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-5-三氟甲基-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(0.27g)。

熔点：184-185℃

IR(KBr)cm^-1：1736，1703

实施例A-6中间体(II)的制备

5，8-二氢-2-甲磺酰-5-氧代-8-(2-噻唑基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

(1) 丙二酸单乙酯(12.3g)的四氢呋喃溶液(80ml)用冰冷却、滴加溴甲基镁(3M)的乙醚溶液(64ml)，搅拌20分钟后，滴加2-甲硫基-4-氯嘧啶-5-碳酰氯(8.6g)的四氢呋喃溶液(100ml)，在室温搅拌2小时。将反应液倾入冰水中，用浓盐酸调至pH5-6，用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥后、减压蒸出溶剂，用硅胶柱色谱法(洗脱剂：氯仿)精制，得到3-(2-甲硫基-4-氯嘧啶-5-基)-3-氧代丙酸乙酯(8.0g)。

IR(净相)cm^-1：1743

MS(m/z)：275(MH⁺)

(2) 前项(1)得到的化合物(7.95g)、原甲酸乙酯(6.80g)和乙酸酐(7.76g)组成的混合物在130℃加热回流1小时，减压浓缩。在冰冷却下添加二异丙基醚(100ml)和2-氨基噻唑(3.28g)，在室温搅拌过夜，滤取析出的结晶，用二异丙基醚洗涤。此结晶溶解在1，4-二噁烷(70ml)中，在冰冷却下添加碳酸钾(2.72g)，在室温搅拌5小时。将其用冰冷却、添加冰水(200ml)、用10％盐酸水溶液中和。滤取析出的结晶，依次用水、1，4-二噁烷和二异丙基醚洗涤，得到5，8-二氢-2-甲硫基-5-氧代-8-(2-噻唑基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(6.0g)。

熔点：183-184℃

IR(KBr)cm^-1：1736

(3) 前项(2)得到的化合物(5.99g)的二氯甲烷溶液(450ml)用冰冷却、每次少量缓缓添加80％的间氯过苯甲酸，在室温搅拌过夜。依次用硫代硫酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，用乙酸乙酯与二异丙基醚的混合液重结晶，得到标题化合物5，8-二氢-2-甲磺酰-5-氧代-8-(2-噻唑基)吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(4.48g)。

熔点：185-187℃

IR(KBr)cm^-1：1741

2.系列B

实施例B-1 原料化合物(III)的制备

反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲基吡咯烷

(1) 反式-3-氨基-1-苄基-4-甲基吡咯烷(19g)溶解在二氯甲烷(200ml)中，在水冷却下添加草酸二叔丁酯(22.9g)的二氯甲烷(20ml)溶液。在室温搅拌1小时后，反应液减压浓缩，得到反式-1-苄基-3-(叔丁氧碳酰胺基)-4-甲基吡咯烷(28.2g)。

熔点：138-140℃(用乙酸乙酯-正己烷重结晶)

IR(KBr)cm^-1：3198，1706

MS(m/z)：291(MH⁺)

(2) 氢化二(2-甲氧基乙氧基)铝钠的70％甲苯溶液(40ml)溶解在甲苯(150ml)中，在冰冷却下每次少许缓缓添加前项(1)得到的化合物(10g)。反应液加热回流1小时，用冰冷却后，用水使过剩的试剂分解。滤去不溶物，滤液用无水硫酸镁干燥后，减压蒸出溶剂。得到的残渣溶解在二氯甲烷(100ml)中，在冰冷却下向其中添加草酸二叔丁酯(7.5g)的二氯甲烷(10ml)溶液。在室温搅拌3.5小时后，反应液减压浓缩。得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)精制，得到反式-1-苄基-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲基吡咯烷(9.9g)。

IR(净相)cm^-1：1694

MS(m/z)：305(MH⁺)

(3)前项(2)得到的化合物(1.52g)溶解在乙醇(50ml)中，添加10％钯-碳(200mg)，在50℃吸收理论量的氢。滤去催化剂后减压蒸出溶剂，得到目的化合物反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲基吡咯烷(950mg)。

IR(净相)cm^-1：3337，1685

MS(m/z)：215(MH⁺)

实施例B-2 原料化合物(III)的制备

(+)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷

(1) 特开平2-69474号公报中记载的反式-3-氨基-1-苄基-4-甲氧基吡咯烷(外消旋体，22.4g)和19.6g L-酒石酸溶解在甲醇(350ml)中，在室温放置7小时。滤取析出的L-酒石酸盐，用甲醇和水重结晶，得到有如下物理性质的反式-3-氨基-1-苄基-4-甲氧基吡咯烷L-酒石酸盐(14.1g)。然后，合并总的母液，减压蒸出溶剂，加饱和食盐水，用碳酸钾调成碱性，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。得到的残渣与D-酒石酸(6.73g)一起溶解在甲醇(180ml)中，在室温放置7小时。滤取析出的D-酒石酸盐，用甲醇和水重结晶，得到有如下物理性质的反式-3-氨基-1-苄基-4-甲氧基吡咯烷D-酒石酸盐(9.9g)。L-酒石酸盐

熔点：206-208℃(分解)

[α]_D ²⁹+33.0°(c＝1.003，水)

元素分析值(％)：C₁₂H₁₈N₂O·3/2C₄H₆O₆

计算值：C，50.11；H，6.31；N，6.49

实测值：C，49.85；H，6.26；N，6.27D-酒石酸盐

熔点：207-209℃(分解)

[α]_D ^29-33.4°(c ＝1.020，水)

元素分析值(％)：C₁₂H₁₈N₂O·3/2C₄H₆O₆

计算值：C，50.11；H，6.31；N，6.49

实测值：C，50.35；H，6.32；N，6.47

(2) 前项(1)得到的L-酒石酸盐(3.65g)中添加饱和食盐水，用碳酸钾中和，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到(+)-反式-3-氨基-1-苄基-4-甲氧基吡咯烷(1.23g)。

[α]_D ²⁷+32.2°(c＝1.053，甲醇)

(3) 前项(2)得到的化合物(5.74g)溶解在甲醇(65ml)中，在冰冷却下添加草酸二叔丁酯(7.29g)。在同温度搅拌30分钟，然后在室温搅拌4小时。减压蒸出溶剂，残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1)精制，得到(+)-反式-1-苄基-3-(叔丁氧碳酰胺基)-4-甲氧基吡咯烷(8.55g)。

熔点：44-45℃

[α]_D ²⁹+9.5°(c＝1.044，甲醇)

(4) 氢化锂铝(3.43g)悬浮在无水四氢呋喃(150ml)中，滴加前项(3)得到的化合物(8.4g)的无水四氢呋喃(50ml)溶液，在室温搅拌1小时。然后，加热回流5小时后，在冰冷却下用水使过剩试剂分解，滤去不溶物。滤液用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。得到的残渣溶解在二氯甲烷(180ml)中，在冰冷却下添加草酸二叔丁酯(6.3g)。在同温度搅拌30分钟，然后在室温搅拌2小时后，减压蒸出溶剂。得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1)精制，得到(+)-反式-1-苄基-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷(8.26g)。

[α]_D ²⁹+9.9°(c＝1.002，甲醇)

(5) 同实施例B-1(3)项一样进行，用前项(4)得到的化合物(8.15g)得到目的化合物(+)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷(5.59g)。

[α]_D ²⁹+12.5°(c＝1.051，甲醇)

IR(净相)cm^-1：3318，1693

MS(m/z)：231(MH⁺)

实施例B-3 原料化合物(III)的制备

(-)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷

(1) 同实施例B-2(2)项一样进行，从实施例B-2(1)得到的D-酒石酸盐(2.57g)得到(-)-反式-3-氨基-1-苄基-4-甲氧基吡咯烷(1.01g)。

[α]_D ²⁷-32.7°(c＝1.016，甲醇)

(2) 同实施例B-2(3)项一样进行，从前项得到的化合物(3.03g)得到(-)-反式-1-苄基-3-(叔丁氧碳酰胺基)-4-甲氧基吡咯烷(4.5g)。

熔点：44-45℃

[α]_D ²⁹-9.5°(c＝1.080，甲醇)

(3) 同实施例B-2(4)项一样进行，从前项得到的化合物(4.25g)得到(-)-反式-1-苄基-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷(4.25g)。

[α]_D ²⁹-10.1°(c＝1.054，甲醇)

(4) 同实施例B-2(5)项一样进行，从前项得到的化合物(4.25g)得到目的化合物(-)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷(2.81g)。

[α]_D ²⁹-12.2°(c＝1.003，甲醇)

IR(净相)cm^-1：3318，1693

MS(m/z)：231(MH⁺)

实施例B-4 原料化合物(III)的制备

3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-3-甲基吡咯烷

(1) 同实施例B-1(1)一样进行，从3-氨基-1-苄基-3-甲基吡咯烷(20g)得到1-苄基-3-(N-叔丁氧碳酰胺基)-3-甲基吡咯烷(28.3g)。

IR(净相)cm^-1：3356、1716、1697

MS(m/z)：291(MH⁺)

(2) 同实施例B-1(2)一样进行，从前项(1)得到的化合物(11.4g)得到1-苄基-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-3-甲基吡咯烷(7.5g)。

IR(净相)cm^-1：1697

MS(m/z)：305(MH⁺)

(3) 同实施例B-1(3)一样进行，从前项(2)得到的化合物(7.5g)得到目的化合物3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-3-甲基吡咯烷(5.5g)。

IR(净相)cm^-1：3337、1682

MS(m/z)：215(MH⁺)

3.系列C

实施例C-1目的物(I)的制备

1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸、其盐及其L-Ala衍生物

(1) 实施例A-1(4)得到的7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(7.1g)和反式-3-甲氧基-4-甲胺基吡咯烷二盐酸盐(6.0g)以及乙腈(150ml)组成的悬浮液中添加三乙胺(18ml)。在室温搅拌5小时，在减压下使反应液浓缩，添加碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。萃取液用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝6∶1)精制，得到1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(6.1g)。

熔点：73-76℃

(2) 上述酯(6.0g)和18％盐酸水溶液(100ml)组成的溶液在100℃搅拌28小时。滤取析出的结晶，用乙醇和二异丙基醚组成的混合液洗涤，得到1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物1-1)(4.45g)。

熔点：270-273℃

(3) 上述(2)得到的盐酸盐(51.5g)、水(500ml)和氨水(40ml)组成的溶液在50℃搅拌过夜。向其中添加乙腈，减压浓缩，滤取析出的结晶。得到的结晶用水和乙腈洗涤，得到1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(化合物1-1-1)(32.6g)。

熔点：290-292℃(分解)

(4) 前项(3)得到的化合物(2.0g)、乳酸(3.1g)和蒸馏水(4ml)组成的混合物在60℃加热溶解。冷却至室温后，加乙醇(70ml)，滤取析出的结晶，用乙醇洗涤，得到2g乳酸盐(化合物1-1-2)。

熔点：288-291℃(分解)

(5) 前项(1)得到的酯(1.89g)、N-叔丁氧碳酰-L-丙氨酸(1.26g)和二氯甲烷(80ml)组成的混合物中添加1.27g 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(WSC)，在室温搅拌3小时。水洗后，有无水硫酸钠干燥，减压浓缩。用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝50∶1)精制，得到7-{反式-3-[N-(N-叔丁氧碳酰-L-丙氨酰)]甲胺基-4-甲氧基-1-吡咯烷基}-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(2.15g)。

熔点：120-123℃

[α]_D ²⁸+10.2°(c＝1.0，氯仿)

这种乙酯(1.71g)、0.5N盐酸(42ml)、乙醇(22ml)组成的混合物在80℃加热搅拌17.5小时。这种溶液减压浓缩，滤取析出的结晶，用10％盐酸和乙醇洗涤，得到7-[反式-3-(N-L-丙氨酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物1-1-3)1.16g。

熔点：230-233℃

[α]_D ²⁹+8.4°(c＝1.0，水)

实施例C-2 目的物(I)的制备

(+)-1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(化合物1-2-1)及其盐酸盐(化合物1-2)

(1) 用实施例A-1(4)得到的7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯和实施例B-2得到的(+)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷，同实施例C-1(1)一样进行，得到(+)-7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(非结晶体)。

[α]_D ²⁹-9.1°(c＝1.006，氯仿)

(2) 参照实施例C-1(2)中记载的方法，从前项(1)得到的乙酯形态得到标题盐酸盐(化合物(1-2))。

熔点：278-282℃(分解)

[α]_D ²⁹+24.8°(c＝0.500，水)

(3)前述(2)得到盐酸盐(28.1g)、水(300ml)和氨水(25ml)组成的溶液在50℃搅拌过夜，然后减压浓缩。滤取析出的结晶，用水和乙醇洗涤，得到目的羧酸形态[化合物1-2-1](19.5g)。

熔点：268-271℃

[α]_D ³⁰+53.1°(c＝1.005，1N NaOH)

实施例C-3目的物(I)的制备

(-)-1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物1-3)

(1)用实施例A-1(4)得到的7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯和实施例B-3得到的(-)-反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基吡咯烷，同实施例C-1(1)一样进行，得到(-)-7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(非结晶体)。

[α]_D ²⁹+9.0°(c＝1.002，氯仿)

(2) 参照实施例C-1(2)中记载的方法，从前项(1)得到的乙酯形态得到标题化合物。熔点：278-282℃(分解)[α]_D ²⁹-25.2°(c＝0.504，水)实施例C-4和C-5 目的物(I)的制备按照与实施例C-1所述方法几乎相同的方法，得到以下化合物。

^*Et：乙基(以下相同)

实施例C-6 目的物(I)的制备

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物3)及基L-Ala衍生物(化合物3-1)

(1) 向实施例A-1(4)得到的酯(2.0g)和乙腈(80ml)组成的悬浮液中滴加含有3-氨基吡咯烷(1.6g)的乙腈(10ml)。在室温搅拌1.5小时，滤取析出的结晶。用氯仿、甲醇和二异丙基醚的混合液重结晶，得到7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(1.89g)。

熔点：219-221℃

(2) 上述酯(1.0g)和10％盐酸水溶液(15ml)组成的悬浮液在95℃搅拌3.5小时。滤取析出的结晶，用氯仿和甲醇组成的混合液洗涤，得到7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物3)(0.93g)。

熔点：267℃(分解)

(3)向上述(1)项得到的乙酯(2.1g)、N-叔丁氧碳酰-L-丙氨酸(1.5g)和二氯甲烷(80ml)组成的混合物中添加1.6g1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(WSC)，在室温搅拌2小时。用碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝20∶1)精制，得到7-[3-(N-叔丁氧碳酰-L-丙氨酰)氨基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(2.9g)。

熔点：138-140℃

[α]_D ²⁷＝-46°(c＝1.0，氯仿)

(4)上述(3)项得到的酯(1.4g)、0.5N盐酸(30ml)和乙醇(16ml)组成的混合物在70℃搅拌2天。减压浓缩溶剂，用10％盐酸和乙醇重结晶，得到7-(3-L-丙氨酰胺基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物3-1)(0.77g)。

熔点：229-231℃(分解)

[α]_D ²⁷＝+10°(c＝0.5，水)实施例C-7～C-10目的物(I)的制备按照与实施例C-1所述方法几乎相同的方法，得到以下化合物。

^*Boc：叔丁氧碳酰(以下相同)

实施例C-11目的物(I)的制备

7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1-(4-氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物8)

(1) 实施例A-2得到的7-氯-1-(4-氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(30mg)、3-(叔丁氧碳酰胺基)吡咯烷(19mg)、三乙胺(26mg)和乙腈(10ml)组成的混合物在室温搅拌30分钟。减压蒸出溶剂，加水，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。得到残渣用乙酸乙酯重结晶，得到7-(3-叔丁氧碳酰胺基-1-吡咯烷基)-1-(4-氟-2-噻唑基)-1，4-二氢-4-氧代-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(40mg)。

熔点：233-234℃

(2) 上述酯(40mg)和20％盐酸水溶液(2ml)组成的溶液加热回流1.5小时。冷却后滤取结晶，用稀盐酸水溶液洗涤，得到标题化合物8(32mg)。

熔点：283-284℃(分解)

实施例C-12 目的物(I)的制备

5-氨基-7-(3-氨基-1-吡咯烷基)-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物9)

(1) 实施例A-4(2)得到的5-氨基-7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(1.0g)和氨基吡咯烷(800mg)，按照与实施例C-1大致相同的方法反应处理，得到标题化合物9(610mg)。

熔点：261-263℃

实施例C-13 目的物(I)的制备

按照与实施例C-1所述方法大致相同的方法，得到以下化合物。

实施例C-14目的物(I)的制备

3-甲酰基-1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘盐酸盐(化合物11)

(1) 向实施例A-1(4)得到的7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(8.49g)、反式-3-甲氧基-4-甲胺基吡咯烷二盐酸盐(6.5g)和乙腈(400ml)组成的悬浮液中添加三乙胺(13.4ml)。在室温搅拌一夜后，使反应液减压浓缩，添加碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。向得到的残渣中添加二氯甲烷(500ml)。在冰冷却下添加草酸二叔丁酯(6.4g)。在室温搅拌一夜后，使反应液减压浓缩，得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝100∶1)精制，得到7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯(9.1g)。

IR(KBr)cm^-1：1735，1695

MS(m/z)：530(MH⁺)

(2)前项(1)得到的化合物(8.95g)和乙醇(150mg)的混合物在冰冷却下添1N氢氧化钠水溶液(150ml)，在同温度搅拌30分钟，然后在室温搅拌过夜。用乙酸水溶液调至酸性，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸(7.19g)。

熔点：185-188℃

IR(KBr)cm^-1：1715，1690

MS(m/z)：502(MH⁺)

(3)前项(2)得到的化合物(7.15g)和甲醇(400ml)组成的混合物中在冰冷却下添加硼氢化钠(2.16g)，在同温度搅拌15分钟，然后在室温搅拌过夜。减压蒸出溶剂，然后用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂。得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝100∶1)精制，得到7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-1，2，3，4-四氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘(3.9g)。

IR(净相)cm^-1：1690

MS(m/z)：460(MH⁺)

(4) 前项(3)得到的化合物(3.8g)溶解在四氢呋喃(500ml)中，在-78℃滴加正丁基锂(1.6M)的正己烷溶液(6.1ml)。在同温度搅拌30分钟后，添加甲酸乙酯(1.34ml)，缓缓升温，搅拌过夜。减压蒸出溶剂，向残渣中添加乙酸水溶液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-3-甲酰基-1，2，3，4-四氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘(3.87g)。

IR(净相)cm^-1：1690，1615

MS(m/z)：488(MH⁺)

(5)前项(4)得到的化合物(3.6g)溶解在1，4-二噁烷(160ml)中，缓缓添加2，3-二氯-5，6-二氰基苯醌(2.51g)。搅拌2小时后，减压蒸出溶剂，向残渣中添加氢氧化钠水溶液，用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸出溶剂，得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗脱剂为氯仿∶甲醇＝100∶1)精制，得到7-[反式-3-(N-叔丁氧碳酰甲胺基)-4-甲氧基-1-吡咯烷基]-3-甲酰基-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘(1.73g)。

熔点：130-132℃

IR(KBr)cm^-1：1695，1645，1615

MS(m/z)：486(MH⁺)

(6) 前项(5)得到的化合物(1.65g)、10％盐酸水溶液(10ml)和乙醇(40ml)组成的混合液在50～60℃加热7小时。滤取析出的结晶，用乙醇和二异丙基醚洗涤，得到3-甲酰基-1，4-二氢-7-(反式-3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘盐酸盐(化合物11)(1.05g)。

熔点：255-263℃(分解)

IR(KBr)cm^-1：3460，1695，1645

MS(m/z)：386(MH⁺)实施例C-15～C-27目的物(I)的制备参照实施例C-1所述方法，得到以下化合物。

*Ac：乙酰

实施例C-28目的物(I)的制备

1，4-二氢-7-(反式-3-甲胺基-4-甲硫基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸盐酸盐(化合物25)

(1) 用实施例A-1(4)得到的7-氯-1，4-二氢-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯和反式-3-甲胺基-4-甲硫基吡咯烷，同实施例C-1(1)-样进行，得到1，4-二氢-7-(反式-3-甲胺基-4-甲硫基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸乙酯

熔点：164～165℃

(2) 参照实施例C-1(2)所述方法，从前项(1)得到的乙酯形态得到标题化合物。

熔点：271～272℃

4.系列D

实施例D-1 液剂的配制

配方

化合物1-1 2g

山梨糖醇 50g

氢氧化钠适量

注射用蒸馏水适量

1000ml

配制法

化合物1-1和山梨糖醇溶解在一部分注射用蒸馏水中，添加其余蒸馏水，把溶液的pH调至4.0。此溶液用膜过滤器(0.22μm)过滤，得到注射用液剂。

实施例D-2 冷冻干燥制剂的配制

配方

化合物1-1 1g

甘露糖醇 5g

氢氧化钠适量

注射用蒸馏水适量

100ml

配制法

化合物1-1和甘露糖醇溶解在一部分注射用蒸馏水中，添加其余蒸馏水，把溶液的pH调至5.0。此溶液用膜过滤器(0.22μm)过滤，使之冷冻干燥，得到注射用粉末剂。

产业上利用的可能性

本发明化合物可用作包括人类在内的哺乳动物的医药品、尤其是抗肿瘤剂。

Claims

1.如下通式(I)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐，式中R₁是氢原子、低级烷氧基、卤原子、也可以是有卤原子取代的低级烷基或也可以是有卤原子取代的苯基，

R₂是羧基或可转化成羧基的基团，

A是氮原子或CH，

m是1或2的整数，

Y是能脱离的基团或下式Y′所示基团，式中R₄是氢原子或低级烷基，

Z是氢原子、低级烷基或可转化成氢原子的基团，

n是0或1的整数，

p是1、2、3或4的整数。

2.按照上述权利要求1的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I)中Y是能脱离的基团。

3.如下通式(I-a)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐，

式中R₁是氢原子，低级烷氧基，卤原子，也可以是有卤原子取代的低级烷基，或也可以是有卤原子取代的苯基，

R₂是羧基或可以转化成羧基的基团，

R₃是氢原子，也可以是有保护的氨基，卤原子，或也可以是有卤原子取代的低级烷基，

R₄是氢原子或低级烷基，

Z是氢原子，低级烷基，或能转化成氢原子的基团，

R₅是氢原子，卤原子，低级烷氧基，低级烷硫基，或也可以是有卤原子取代的低级烷基，

A是氮原子或CH，

m是1或2的整数，

n是0或1的整数，

p是1、2、3或4的整数。

4.按照上述权利要求3的吡啶酮羧酸衍生物，其中，该盐是上述式(I-a)中R₂上羧基的盐，或1-吡咯烷基的3位上碱性取代基的酸加成盐。

5.按照上述权利要求3的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I-a)中R₂上能转化成羧基的基团是甲酰基或是酯形态。

6.按照上述权利要求3的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I-a)中Z上能转化成氢原子的基团是氨基酸残基或肽残基。

7.如下式(I-b)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐，式中R₁是氢原子，低级烷氧基，卤原子，也可以是有卤原子取代的低级烷基，或也可以是有卤原子取代的苯基，

R₃′是氢原子，氨基，卤原子，或也可以是有卤原子取代的低级烷基，

R₄是氢原子，或低级烷基，

Z′是氢原子，或低级烷基，

A是氮原子，或CH，

m是1或2的整数，

n是0或1的整数，

p是1、2、3或4的整数。

8.按照上述权利要求7的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I-b)中A是CH。

9.按照上述权利要求7的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I-b)中m和p都是1，n是0。

10.按照上述权利要求7的吡啶酮羧酸衍生物或其盐，其中，上述式(I-b)中A是CH，m和p是1，n是0，R₁是氢原子或氟原子，R₃是氢原子，R₄是氢原子或低级烷基，Z′是氢原子，R₅是低级烷基或低级烷氧基。

11.按照上述权利要求1或3的吡啶酮羧酸衍生物，其中，上述吡啶酮羧酸衍生物是1，4-二氢-7-(3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸，或能转化成该羧酸的化合物。

12.按照上述权利要求11的吡啶酮羧酸衍生物，其中，上述吡啶酮羧酸衍生物是1，4-二氢-7-(3-甲氧基-4-甲胺基-1-吡咯烷基)-4-氧代-1-(2-噻唑基)-1，8-二氮杂萘-3-羧酸的顺式异构体、反式异构体及其旋光异构体中任何一种，或能转化成这些异构体的化合物。

13.以上述权利要求3所述的通式(I-a)所示吡啶酮羧酸衍生物或其生理上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤剂。

14.以上述权利要求7所述的通式(I-b)所示吡啶酮羧酸衍生物，或能转化成该衍生物的化合物作为有效成分的抗肿瘤剂。

15.按照权利要求13或14的抗肿瘤剂，它是非固形肿瘤或固形肿瘤的治疗剂或预防剂。

16.按照权利要求15的抗肿瘤剂，其中非固形肿瘤是白血病肿瘤或恶性淋巴瘤。

17.按照权利要求15的抗肿瘤剂，其中固形肿瘤是在肺、乳腺、胃、皮肤、卵巢、子宫、肠、膀胱、鼻咽、头颈部、食道、肝、胆道、胰、肾、睾丸、前列腺、骨、脑等任何一种组织中发生的肿瘤。

18.医药组合物，其组成为权利要求3所述通式(I-a)或权利要求7所述通式(I-b)所示吡啶酮羧酸衍生物或其生理上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

19.按照权利要求18的组合物，其中载体是溶剂。

20.按照权利要求18的组合物，其中该医药组合物是液状的。

21.按照权利要求20的组合物，其中该医药组合物是注射剂或输液剂。

22.按照权利要求18的组合物，其中该医药组合物是冷冻干燥制剂。

23.如下通式(I-a)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐的制备方法，

(式中A、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、Z、m、n和p均与权利要求1中的定义相同)，其特征在于使如下通式(II)所示化合物或其盐与如下通式(III)所示环状胺反应，(式中L是能脱离的基团，A、R₁、R₂、R₃和m均与权利要求1中的定义相同)，(式中R₄、R₅、n和p均与权利要求1中的定义相同)。

24.如下通式(I)所示吡啶酮羧酸衍生物或其盐的制备方法，

(式中A、Y、R₁、R₂、R₃和m均与权利要求1中的定义相同)，其特征在于使如下通式(IV)所示化合物发生闭环反应，

(式中L是能脱离的基团，A、R₁、R₂、R₃、Y和m均与权利要求1中的定义相同)。