CN102827816B - 一种α-淀粉酶及其应用 - Google Patents
一种α-淀粉酶及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102827816B CN102827816B CN 201210281532 CN201210281532A CN102827816B CN 102827816 B CN102827816 B CN 102827816B CN 201210281532 CN201210281532 CN 201210281532 CN 201210281532 A CN201210281532 A CN 201210281532A CN 102827816 B CN102827816 B CN 102827816B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- amylase
- seq
- application
- bread
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title abstract description 51
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title abstract description 48
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title abstract description 44
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims description 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 abstract description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 abstract description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 235000019991 rice wine Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 abstract description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 abstract description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001136494 Talaromyces funiculosus Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 108050008938 Glucoamylases Proteins 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 241000408008 Talaromyces marneffei ATCC 18224 Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010081495 driselase Proteins 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- 235000020429 malt syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种α-淀粉酶及其应用，所述的α-淀粉酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，氨基酸序列为SEQ ID NO：1。本发明筛选出的α-淀粉酶在淀粉水解为麦芽糖和低聚寡糖及少量葡萄糖的过程中发挥了十分重要的作用，可以用来生产高麦芽糖浆、作为添加剂用于焙烤制品如面包的生产，以及在啤酒、黄酒和生料酒精行业等行业均有不同程度的应用，具有工业生产应用价值。而且筛选出的α-淀粉酶可以用来转化工程菌，从而获得具有表达α-淀粉酶的重组菌。
Description
技术领域
本发明属于酶基因工程技术领域，具体涉及一种α-淀粉酶及其应用。
背景技术
真菌来源的α-淀粉酶可以粗略的按酶学性质或作用条件分为3种类型：中性真菌α-淀粉酶、耐酸或耐热性真菌α-淀粉酶、具有生淀粉酶活力的真菌α-淀粉酶。α-淀粉酶是重要的工业用酶，其被用于生产产品诸如高麦芽糖浆、焙烤制品。在啤酒酿制行业（提高麦芽汁的可发酵性）、黄酒酿制行业（改善酒质，提高出酒率）以及低聚异麦芽糖生产等行业均有不同程度的应用。
已报道有多种真菌α-淀粉酶基因在不同宿主中得到表达,其中真菌α-淀粉酶基因的异源表达主要集中在真核表达系统,尽管绝大多数报道中异源表达真菌α-淀粉酶的表达水平不高,但异源表达是实现真菌α-淀粉酶单一酶活的最好途径。
我国在真菌α-淀粉酶的研究方面虽然开展较晚，但研究成果对提升我国酶制剂工业有积极意义。与其它淀粉水解酶系的研究水平相比，我国真菌α-淀粉酶的研究水平不高，所有研究几乎没有涉及基因的克隆与表达，发酵生产方式也未从固态发酵向液体发酵转变，发酵生产水平与国际先进水平也存在较大差距。酶制剂产品为多种α-淀粉酶、糖化酶和葡萄糖苷酶的混合产品，往往无法有效的进行目的产物的生成。
发明内容
本发明的目的是提供一种α-淀粉酶及其应用，即一种具有工业应用价值的新型α-淀粉酶，以弥补现有技术的不足。
本发明一个方面涉及一种α-淀粉酶，包括有：
a）序列为SEQ ID NO：1的酶；
b）在a）中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有a中所述酶的活性的，由a衍生的酶。
编码上述α-淀粉酶的核苷酸，其一种序列为SEQ ID NO：2。
本发明还提供用于表达上述α-淀粉酶的重组表达质粒，是将序列为SEQ IDNO：2的核苷酸片段插入到原核表达载体中构建的。
本发明还涉及携带有表达上述α-淀粉酶的重组表达质粒的重组菌。
本发明筛选出的α-淀粉酶在淀粉水解为麦芽糖和低聚寡糖及少量葡萄糖的过程中发挥了十分重要的作用，可以用来生产高麦芽糖浆、作为添加剂用于焙烤制品如面包的生产，以及在啤酒、黄酒和生料酒精行业等行业均有不同程度的应用，具有工业生产应用价值。而且筛选出的α-淀粉酶可以用来转化工程菌，从而获得具有表达α-淀粉酶的重组菌。
附图说明
图1：用于表达本发明的α-淀粉酶的pGm-Pamy质粒图谱，
图2：本发明的α-淀粉酶的SDS-PAGE凝胶图；
图3：本发明的α-淀粉酶在黑曲霉宿主中的pH稳定性；
图4：本发明的α-淀粉酶在在黑曲霉宿主中的温度稳定性。
具体实施方式
下面结合实例对本发明的方法做进一步说明。但实例仅限于说明，并不限于此。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克（Sambrook）等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。
1、α-淀粉酶Pamy的合成
从绳状青霉（Penicillium Funiculosum）全基因组测序得到的蛋白序列中找到绳状青霉淀粉酶（Penicillium Funiculosum amylase）序列。将该序列在NCBI中blast,与已知序列alpha-amylase,putative[Penicillium marneffei ATCC 18224]的最高相似度为86%,将绳状青霉淀粉酶（Penicillium Funiculosum amylase）的蛋白序列进行密码子优化并翻译成相应的核酸序列Pamy，使Pamy不被XhoⅠ和XbaⅠ两个酶切位点切断，在Pamy核酸序列两端加XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点，将文本序列送至生物公司（上海生工）合成，合成的Pamy被连接在载体PSG-TS上,插入位点为t-a克隆，受体菌为大肠杆菌DH5α菌株。其中本发明的α-淀粉酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
2、α-淀粉酶Pamy基因重组载体的构建
将连在PSG-TS载体上的Pamy基因用XhoⅠ和XbaⅠ双酶切，经琼脂糖凝胶电泳，切胶回收酶切产物片段。与同样用XhoⅠ和XbaⅠ双酶切并切胶回收的质粒pGm连接，转化感受态大肠杆菌（E.coli）DH5α后，涂于含有Amp的LB固体培养基上。37℃培养14-16小时，进行菌落PCR验证，有正确条带的，挑取单克隆转接到4ml LB液体培养基中进行培养（含Amp），培养14-6小时后，提取质粒，将重组质粒pGm-Pamy转入表达宿主黑曲霉G1，含有该重组质粒的重组菌株命名为G1-pGm-Pamy。
其中的酶切及连接反应均参照表1。
表1酶切体系及连接体系
3、转化黑曲霉及重组子筛选鉴定
（1）将装有100ml CMA的250ml4-挡板摇瓶用新鲜的黑曲霉G1菌株孢子接种，在30℃、200rpm条件下使培养物生长12小时。
（2）将（1）中获得的菌体用4层无菌纱布过滤，先用无菌水冲洗3次，再用溶液A冲洗3次。
（3）在无菌条件下将清洗过的菌丝体转移到原生质体溶液中并在30℃、200rpm温育2小时，显微镜观察监测原生质体化进展。
（4）用无菌Micra-Cloth将原生质体化反应滤入至两个50ml无菌的一次性离心管中，并将每管的体积用溶液B定容至45ml，4000rpm离心10min。弃上清；向管中加20ml溶液B，混匀，4000rpm离心5min，弃上清；再向管中加20ml溶液B，混匀，4000rpm离心5min，弃上清。
（5）加100μl溶液B重悬原生质体，原生质体的浓度应达到1×107个/100μl。在冰上，将100μl原生质体溶液转移到预冷的15ml管中，每个转化反应一管。以不超过10μl的体积向管中加入10μg DNA，并加入12.5μl溶液C，温和混匀并在冰上温育20分钟。
（6）将MMSA上层培养基（每管8ml）熔化并保持在55℃。从冰中移出原生质体，向原生质体中加入1ml溶液C和2ml溶液B，并与一管MMSA上层培养基温和混匀，将混合液分别倒入三个amds下层培养基平板中30℃恒温培养4-7天。
（7）将长出的转化子转接至adms二次验证培养基平板，30℃恒温培养，并进行菌落PCR验证，获得的阳性菌株经测序鉴定正确，α-淀粉酶的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO：2。
溶液A（每500ml）－2.5ml 1M K2HPO4;2.5ml 1M KH2PO4;48.156g无水MgSO4(FW 120.37)；加入dlH2O至终体积500ml，pH5.5。将溶液过滤灭菌并在室温下保存。
原生质体化溶液—将0.6g的β-D-葡聚糖酶（InterSpex Products，Inc,CA）或者450mgβ-D-葡聚糖酶和150mg Driselase（InterSpex Products，Inc.）溶解于40ml溶液A中，并将溶液过滤灭菌，0.2微米。
溶液B（每500ml）—5ml 1M Tris，pH7.5；2.77g CaCl2（FW 110.99）；109.32g山梨醇（FW 182.2；1.2M）；加入dlH2O至终体积500ml。将此溶液过滤灭菌并在室温下保存。
溶液C(每500ml)—250g PEG4000；2.77g CaCl2；5ml 1M Tris，pH7.5；加入dlH2O至终体积500ml。将此溶液过滤灭菌。
MMSA琼脂—将0.59g/L乙酰胺；3.4g/L CsCl；0.52g/L KCl；1.52g/L KH2PO4；218.5g/L D-山梨醇；1ml/L痕量元素；10g/L琼脂（顶层琼脂中的低熔点琼脂糖）溶解于1L dlH2O，高压灭菌。灭菌后，在无菌条件下加入10ml50%葡萄糖和1.25ml 20% MgSO4·7H2O。
CMA（1升）=20g无水葡萄糖；20g麦芽膏（Difco Brand Malt Extract），1g蛋白胨（Bacto Peptone）；20g琼脂（Bacto Agar）
4、α淀粉酶的活性测定
将获得的阳性菌株接种于液体发酵培养基中，于30℃、200rpm摇床培养。α淀粉酶酶活用Megazyme Alpha-amylase Ceralpha method（MegazymeInternational Ireland）试剂盒测定。转入了pGm-Pamy质粒的黑曲霉G1在pH5.4、40℃条件下测定的淀粉酶酶活可达到135.64CU/ml。
4.1、测定本发明α淀粉酶在不同pH下的酶活：
将测酶活的反应缓冲液pH分别设定为pH2.4、pH3.0、pH3.6、pH4.2、pH4.8、pH5.4、pH6.0、pH6.6、pH7.2、pH7.8，测定在这些pH条件下α淀粉酶的酶活，测定结果参见图三。从该图中可以看出，α淀粉酶的最适反应pH为6.6。
4.2、测定本发明α淀粉酶在pH6.6、不同温度下的酶活：
将反应pH设定为6.6，测反应温度分别设定为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、。测定结果参见图四。从该图中可以看出，α淀粉酶的最适反应温度为40℃。
5、α-淀粉酶的应用实例
通过研究面包硬度的变化与α-淀粉酶添加量之间的关系，发现α-淀粉酶有一定的抗老化效果。结果表明，在适当的添加范围内(0.5～1.5ml/100g面粉)，α-淀粉酶可以明显地增加面包的比容，减小面包皮和面包心的硬度，改善面包质地，提高面包的焙烤品质。α-淀粉酶能改进面包的体积，改良面包的口感，使面包等产品体积更大，颗粒更柔软，对提高面包的品质有着重要的意义。本发明为α-淀粉酶作为面包添加剂应用到面包工业中提供了一定的理论依据。
Claims (6)
1.一种α-淀粉酶，其特征在于，所述的α-淀粉酶的氨基酸序列为SEQID NO：1。
2.一种核苷酸，其特征在于，所述的核苷酸用于编码权利要求1所述的α-淀粉酶。
3.如权利要求2所述的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸的序列为SEQID NO：2。
4.一种用于表达权利要求1所述的α-淀粉酶的重组表达质粒，其特征在于，所述的重组表达质粒是将序列为SEQ ID NO：2的核苷酸片段插入到原核表达载体中构建的。
5.一种重组菌，其特征在于，所述的重组菌携带有权利要求4所述的重组表达质粒。
6.权利要求1所述的α-淀粉酶作为面包添加剂的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201210281532 CN102827816B (zh) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | 一种α-淀粉酶及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201210281532 CN102827816B (zh) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | 一种α-淀粉酶及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102827816A CN102827816A (zh) | 2012-12-19 |
| CN102827816B true CN102827816B (zh) | 2013-09-25 |
Family
ID=47331129
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201210281532 Expired - Fee Related CN102827816B (zh) | 2012-08-08 | 2012-08-08 | 一种α-淀粉酶及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102827816B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103849608B (zh) * | 2013-12-10 | 2016-09-07 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种耐高温淀粉酶 |
| CN104480027B (zh) * | 2015-01-04 | 2016-09-21 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种高产蛋白酶k的黑曲霉菌株及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1751281A2 (en) * | 2004-05-27 | 2007-02-14 | Genencor International, Inc. | Aspergillus kawachi acid-stable alpha amylase and applications in granular starch hydrolysis |
| CN101139569B (zh) * | 2007-07-27 | 2010-05-19 | 南开大学 | 一株α-淀粉酶抑制剂生产菌及α-淀粉酶抑制剂的制备方法与应用 |
-
2012
- 2012-08-08 CN CN 201210281532 patent/CN102827816B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102827816A (zh) | 2012-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sahnoun et al. | Production, purification and characterization of two α-amylase isoforms from a newly isolated Aspergillus oryzae strain S2 | |
| CN103525778B (zh) | 一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体 | |
| CN106148265B (zh) | 一种产硫酸软骨素裂解酶的重组枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN103571815B (zh) | 一种高效制备食品级酸性脲酶的方法及应用 | |
| CN109321552B (zh) | 一种新型普鲁兰酶及其基因、工程菌和制备方法 | |
| CN104073458A (zh) | 一株可高效表达外源分泌蛋白酶的枯草芽孢杆菌 | |
| CN102796751A (zh) | 一种长野芽孢杆菌普鲁兰酶突变体Pul324及其应用 | |
| CN105349515A (zh) | 一种分泌能力提高的天冬酰胺酶突变体及其应用 | |
| CN106635846B (zh) | 一种高产果胶甲酯酶的黑曲霉菌株 | |
| CN114107146B (zh) | 一种无抗性标记营养缺陷型枯草芽孢杆菌的构建方法与应用 | |
| JP2018504136A (ja) | 切断型プルラナーゼの製造および使用方法 | |
| CN103834629A (zh) | 一种重组高温普鲁兰酶及其制备方法 | |
| WO2014117472A1 (zh) | α-淀粉酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用 | |
| CN102051369A (zh) | 一种耐高温壳聚糖酶酵母工程菌及其耐高温壳聚糖酶的生产方法 | |
| CN115725550B (zh) | 一种木聚糖酶突变体及其应用 | |
| CN102827816B (zh) | 一种α-淀粉酶及其应用 | |
| CN103695388B (zh) | α淀粉酶及表达α淀粉酶的黑曲霉菌株 | |
| CN106086049A (zh) | 脯氨酸特异性蛋白酶基因及其应用 | |
| CN102994476B (zh) | 一种糖化酶 | |
| CN105886519A (zh) | 一种异淀粉酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用 | |
| CN107058264B (zh) | 比活提高的α-淀粉酶JcAmy突变体及其编码基因和应用 | |
| CN105039386A (zh) | 一种高产酸性蛋白酶的红曲霉菌株的构建方法 | |
| CN102925420B (zh) | 一种α淀粉酶及表达α淀粉酶的重组菌株 | |
| CN102994475A (zh) | α淀粉酶及表达α淀粉酶的重组菌株 | |
| CN105969751B (zh) | 一种β-葡萄糖苷酶基因及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHI Free format text: FORMER OWNER: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY Effective date: 20140415 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140415 Address after: 300308, No. 32, seven West Road, Tianjin Airport Economic Zone, Dongli, Tianjin Patentee after: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES Address before: 300308, No. 32, seven West Road, Tianjin Airport Economic Zone, Dongli, Tianjin Patentee before: TIANJIN INSTITUTE OF INDUSTRIAL BIOTECHNOLOGY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191230 Address after: 253300 talent apartment, Wucheng Development Zone, Dezhou City, Shandong Province Patentee after: Shandong Zhongke Biological Innovation Industrial Park Management Co.,Ltd. Address before: 300308, No. 32, seven West Road, Tianjin Airport Economic Zone, Dongli, Tianjin Patentee before: Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sciences |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130925 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |