CN102812046A

CN102812046A - Cd127结合蛋白

Info

Publication number: CN102812046A
Application number: CN2011800158560A
Authority: CN
Inventors: I.柯比; A.H.泰勒; T.M.韦布; 薛雨
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2010-01-28
Filing date: 2011-01-26
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2031-01-26
Also published as: PE20121702A1; EA201290589A1; CL2012002081A1; MY160590A; MX2012008765A; AU2011209713A1; IL220899A; KR20130028055A; EP2528947A4; UA104663C2; PE20170687A1; MA34004B1; SG182590A1; CR20120404A; US8940303B2; MX339083B; TWI489996B; UY33202A; CA2787070A1; ZA201205624B

Abstract

提供了结合人IL-7受体（CD127）的抗原结合蛋白质。抗原结合蛋白质一般是抗体，并且用于治疗人中的疾病或病症，特别是自身免疫疾病例如多发性硬化。

Description

CD127结合蛋白

发明领域

本发明涉及特异性结合人IL-7受体（CD127）的α链的抗原结合蛋白，特别是免疫球蛋白。本发明还涉及用所述蛋白质治疗疾病或病症的方法，包含所述蛋白质的药物组合物及其制造方法。本发明的其他方面由下述详述将是显而易见的。

发明背景

多发性硬化（MS）是影响中枢神经系统的慢性炎性脱髓鞘疾病。在MS中，认为浸润炎性免疫细胞涉及少突神经胶质细胞的破坏，所述少突神经胶质细胞是负责产生且维持称为髓鞘的脂肪层的细胞。MS导致髓磷脂的变薄或完全丧失。当髓磷脂丧失时，神经元可以不再有效传导其电信号，导致众多神经功能障碍。具有MS的个体产生自体反应性T细胞，其参与沿着神经纤维的髓鞘的炎性病变形成。具有活动性MS的患者的脑脊液含有活化T细胞，其浸润脑组织且引起特征性炎性病变，破坏髓磷脂。虽然多发性硬化症状和病程可以从个人到个人不等，但存在三种主要形式的疾病 – 复发缓解型MS、继发进展型MS和原发进展型MS。

在MS的早期阶段，炎性攻击经过剧烈加强的疾病活性的短间隔发生。这些发作随后为恢复和缓解期。在缓解期过程中，在神经系统病变中的局部肿胀消退，免疫细胞变得更不活跃或失活，并且髓磷脂产生细胞使轴突再髓鞘化。神经信号传导改善，并且由炎症引起的无能力变得更不严重或完全消失。疾病的这个时期称为复发缓解型MS（RRMS）。但该病变并不完全治愈。某些作为“慢性”病变保留，这通常具有缺乏免疫细胞的脱髓鞘核心区。随着时间过去，此类病变中心的细胞大部分死亡，尽管炎症通常在其边缘处继续。脑可以充分适应某些神经元的丧失，并且永久性无能力可能很多年不发生。然而，超过50%具有MS的患者最终进入进行性恶化阶段，称为继发进展型（SPMS）。在这个阶段，该疾病不再良好响应缓解疾病的药物，并且患者的无能力稳定恶化。来自MS自然过程中早期的神经元破坏暗示SPMS的进行性无能力可能是累积的神经元丧失的结果，其最终压倒脑的代偿能力。原发进展型MS是一类多发性硬化，其中不存在复发，但经过数年时期，存在躯体和认知功能的逐步丧失。

具有复发缓解型多发性硬化的患者中的治疗目标是减少复发的频率与严重度（且从而预防加重）以及预防或推迟疾病的进展期的发作。为了达到这个目的，尤其是在过去，已使用免疫调节或免疫抑制药物，但由于有限的功效和相当大的毒性，它们从未获得普遍接受。例如，大型随机化对照试验已用干扰素β-1a、干扰素β-1b和乙酸格拉默成功执行。

改变的自身免疫T细胞应答和免疫系统的调节网络的功能障碍在人自身免疫病理学例如MS和类风湿性关节炎中起重要作用（Kuchroo等人，（2002）Annu. Rev. Immunol. 20:101-123；Sospedra和Martin（2005）Annu. Rev. Immunol. 23：683-747；Toh和Miossec（2007）Curr. Opin. Rheumatol. 19:284-288）。

尽管MS的病因学和发病机理仍是未知的，但它一般视为自身免疫病理学，其中致病潜力的自身反应性T细胞例如T_H1和T_H17细胞被认为起重要作用。存在这些效应T细胞在疾病过程期间在体内活化且可归于中枢神经系统（CNS）炎症的证据。还存在这些T细胞介导在疾病的活跃期过程中在EAE和MS病变中髓磷脂表达细胞的破坏。另一方面，在检查中通常保持致病性T_H1和T_H17细胞的调节性T细胞（T_reg）在具有MS的患者中是缺陷的，进一步使免疫系统朝向促炎状态倾斜。

这些分开的团体近期报道了在具有或不具有MS的总共17,947个供体中全基因组单核苷酸多态性（SNPs）扫描的结果。在扫描334,923 SNPs后，他们发现在具有MS易感性的人IL-7受体α链（IL-7Rα）中非同义编码SNP的非常显著关联（总体P=2.9x10^-7）。SNP对应于在CD127（也称为IL-7Rα）的外显子6中从T到C的变化。这个变化增强在RNA剪接过程中外显子6跳过的机率，导致可溶形式的CD127。此外，CD127和IL-7 RNAs在MS患者的脑脊液（CSFs）中的表达相对于具有其他神经障碍的患者的CSFs明显更高。

IL-7和IL-7受体（IL-7R）已知主要在胸腺环境中的T细胞和B细胞发育和稳态中起重要作用。事实上，胸腺基质细胞、胎儿胸腺和骨髓是IL-7生产部位。IL-7受体由两个亚基组成，CD127和共同链（γ链或γc），其由IL-2、IL-4、IL-9、IL-15和IL-21的受体共享。

CD127也称为IL-7受体α（IL-7Rα）和p90 IL-7R。人CD127（Swiss Prot登记号P16871）具有总共459个氨基酸（20种信号序列）。它包含219氨基酸胞外区、25氨基酸跨膜区和195氨基酸胞内区。如本文使用的（例如对于抗体表位的描述），在CD127内的残基编号基于全长蛋白质，包括信号序列残基。CD127可以以四种同种型存在，同种型H20（Swissprot登记号P16871-1）具有下述氨基酸序列（包括信号序列）：

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE001

CD127还在胸腺基质衍生的淋巴细胞生成素（TSLP）的受体中发现。TSLP受体是CD127和细胞因子受体样因子2（CRLF2）的异源二聚体。

IL-7和IL-7R的结合活化多重信号传导途径，包括JAK激酶1和3的活化，导致Stat5的磷酸化和活化。这个途径对于胸腺发育T细胞前体的存活是关键的，因为Stat5活化是诱导抗细胞凋亡蛋白质Bcl-2和阻止促细胞凋亡蛋白质Bax进入线粒体内所需的。另一个IL-7R介导的途径是PI3激酶的活化，导致促细胞凋亡蛋白质Bad的磷酸化及其细胞质保留。CD127在外周静止和记忆T细胞中表达。T细胞存活和稳态的IL-7调节机制和外周中IL-7的来源并未完全理解。此外，它在自身免疫疾病中致病性T细胞的分化和功能中的潜在作用研究甚少且在很大程度上是未知的。存在暗示IL-7可能促成自身免疫疾病的发病机理的少数报道。

近来，Liu和同事（Liu等人，（2010）Nature Medicine 16:191-197）已描述了IL-7在T_H17存活和表达中的作用。鼠抗CD127抗体（包括抗CD127抗体1A11和6A3）及其在MS和其他自身免疫疾病的治疗中的作用已在PCT申请号PCT/US2009/053136中描述。

希望分离且开发结合和/或抑制人CD127的生物学效应的进一步单克隆抗体。此类抗体可以是在治疗MS及其他炎性和自身免疫疾病和病症，特别是其中已牵涉致病性T_H17细胞的那些中治疗上有用的。

发明概述

本发明提供了特异性结合CD127的抗原结合蛋白质。抗原结合蛋白质可以用于治疗方法中，特别是治疗或预防其中牵涉致病性T_H17细胞的疾病中。抗原结合蛋白质可以结合CD127且抑制例如中和CD127的生物学功能。

在第一个方面，本发明提供了抗原结合蛋白质，例如抗体，其包含下述互补决定区中的一到六个或其变体：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:132 – SEQ ID NO:137中的任何中所示的CDRH3，

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3。

在另一个方面，本发明提供了抗原结合蛋白质，例如抗体，其包含下述互补决定区中的一到六个或其变体：

（i）如SEQ ID NO:39中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:40中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:41中所示的CDRH3，

（iv）如SEQ ID NO:42中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:43中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:44中所示的CDRL3。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质是抗体，任选嵌合、人源化或人抗体。抗体可以包含受体抗体构架中的一个或多个CDR（来自供体抗体的SEQ ID NO:2-7或39-44）。受体抗体构架可以是人抗体。

在一个方面，本发明提供了人源化抗体，其包括包含下述互补决定区中的一个或多个的重链可变区：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在重链可变区的位置66上的赖氨酸残基，在位置69上的苯丙氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸残基，和在位置71上的缬氨酸、精氨酸、丙氨酸或亮氨酸残基（根据Kabat编号）。

在一个实施方案中，人源化抗体包含在位置69上的亮氨酸。在一个实施方案中，人源化抗体包含在位置71上的缬氨酸。在一个实施方案中，人源化抗体包含在位置69上的亮氨酸和在位置71上的缬氨酸。在一个实施方案中，人源化抗体包含在位置66上的赖氨酸、在位置69上的亮氨酸和在位置71上的缬氨酸。除上述点突变外，重链可变区可以具有人种系可变区的构架序列。例如，在一个实施方案中，重链可变区衍生自IGHV1_2人构架（SEQ ID NO:116）。

因此，在另一个方面，本发明提供了在V_H构架中包含下述互补决定区中的一个或多个的抗体：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

其中V_H构架衍生自人种系V_H构架且包含下述中的至少一个：在重链可变区的位置66上的赖氨酸残基，在位置69上的苯丙氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸残基，和在位置71上的缬氨酸、精氨酸、丙氨酸或亮氨酸残基（根据Kabat编号）。在一个实施方案中，重链V_H构架是IGHV1_2人构架（SEQ ID NO:116）。

本发明的抗体可以包含重链可变区，其包含CDRH1（SEQ ID NO:2）和CDRH3（SEQ ID NO:4）；CDRH2（SEQ ID NO:3）和CDRH3（SEQ ID NO:4）；CDRH1（SEQ ID NO:2）和CDRH2（SEQ ID NO:3）；或CDRH1（SEQ ID NO:2）、CDRH2（SEQ ID NO:3）和CDRH3（SEQ ID NO:4）。抗体可以包含SEQ ID NOs:10-17（1A11.H0 V_H - 1A11.H7 V_H）中的任何的重链可变区。在一个实施方案中，人源化抗体包含SEQ ID NO:13（1A11.H3 V_H）的重链可变区。在这些实施方案中的任何中，SEQ ID NO:4的CDRH3可以用如SEQ ID NO:132 – SEQ ID NO:137中的任何中所示的CDRH3取代。可替代地，SEQ ID NO:13的重链可变区可以包含选自N98D、N98E、F100bE、F100bH、F100bI和F100bV（Kabat）的一个或多个置换。在另一个实施方案中，重链可变结构域具有SEQ ID NOs:121、123、125、127、129或131的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区与SEQ ID NO:16的轻链可变区配对。

本发明还提供了抗体，其包括包含下述互补决定区中的一个或多个的轻链可变区：

（i）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（ii）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（iii）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3，

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在可变区轻链的位置45上的赖氨酸残基、在位置46上的脯氨酸残基、在位置47上的色氨酸残基、在位置58上的缬氨酸残基、在位置60上的缬氨酸残基、在位置70上的丝氨酸残基、和在位置71上的酪氨酸或苯丙氨酸残基（根据Kabat编号）。

在一个实施方案中，抗体包含在位置46上的脯氨酸残基。在一个实施方案中，抗体包含在位置71上的酪氨酸残基。在一个实施方案中，抗体包含在位置46上的脯氨酸残基和在位置71上的酪氨酸残基。

抗体可以包含轻链可变区，其包含CDRL1（SEQ ID NO:5）和CDRL3（SEQ ID NO:7）；CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）；CDRL1（SEQ ID NO:5）和CDRL2（SEQ ID NO:6）；或CDRL1（SEQ ID NO:5）、CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）。抗体可以包含SEQ ID NOs:18-27（1A11.L0 Vκ - 1A11.L9 Vκ）中的任何的轻链可变区。在一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:22（1A11.L4 Vκ）的轻链可变区。

在另一个方面，本发明提供了包含下述的抗体：包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的重链可变区：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在重链可变区的位置66上的赖氨酸残基，在位置69上的苯丙氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸残基，和在位置71上的缬氨酸、精氨酸、丙氨酸或亮氨酸（根据Kabat编号）；

和包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的轻链可变区：

（i）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（ii）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（iii）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3，

抗体可以包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的任何组合，包括从一个重链CDR和一个轻链CDR到所述CDRs的所有六个（即所有3个重链和3个轻链CDRs）。在一个实施方案中，抗体包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的所有六个。

在一个实施方案中，抗体包含：包含下述互补决定区的重链可变区：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:133 – SEQ ID NO:138中的任何中所示的CDRH3，

和包含下述互补决定区的轻链可变区：

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3，

其中所述抗体进一步包含在重链可变区的位置69上的亮氨酸残基，和在轻链可变区的位置46上的脯氨酸残基。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包括包含SEQ ID NO:13（1A11.H3 V_H）的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列的重链可变区，或包含SEQ ID NO:121、123、125、127、129或131中的任何中所示的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:22（1A11.L4 Vκ）的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含重链，其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114或SEQ ID NO:118的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列。在特定实施方案中，重链包含选自N98D、N98E、F100bE、F100bH、F100bI和F100bV（Kabat）的一个或多个置换。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含轻链，其包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:114或118的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114或118的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列。一个特定实施方案包含具有SEQ ID NO:118的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列的抗原结合蛋白质。

在另一个方面，本发明提供了抗原结合蛋白质，其包含下述中的一个或多个：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1或其变体CDR，

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2或其变体CDR，

（iii）如SEQ ID NO:4中所示的CDRH3或其变体CDR，或如SEQ ID NO:132 – SEQ ID NO:137中的任何中所示的CDRH3，

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1或其变体CDR，

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2或其变体CDR，

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3或其变体CDR，

进一步包含具有下述残基中的至少一个的重链构架：

（a）在位置2上的Val、Ile或Gly

（b）在位置4上的Leu或Val

（c）在位置20上的Leu、Ile、Met或Val

（d）在位置22上的Cys

（e）在位置24上的Thr、Ala、Val、Gly或Ser

（f）在位置26上的Gly

（g）在位置47上的Trp或Tyr

（h）在位置48上的Ile、Met、Val或Leu

（i）在位置69上的Ile、Leu、Phe、Met或Val

（j）在位置71上的Arg、Val、Ala或Leu

（k）在位置78上的Ala、Leu、Val、Tyr或Phe

（l）在位置80上的Leu或Met

（m）在位置90上的Tyr或Phe

（n）在位置92上的Cys

（o）在位置94上的Arg、Lys、Gly、Ser、His或Asn，

和/或具有下述残基中的至少一个的轻链构架：

（p）在位置2上的Ile

（q）在位置4上的Leu

（r）在位置23上的Cys

（s）在位置35上的Trp

（t）在位置36上的Tyr

（u）在位置71上的Tyr或Phe

（v）在位置88上的Cys

（w）在位置98上的Phe，

其中所述抗原结合蛋白质能够结合CD127。

抗原结合蛋白质可以包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的任何组合，包括从一个CDR到所述CDRs（SEQ ID NOs:2-7）中的六个。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含所述CDRs（SEQ ID NOs:2-7）的所有六个。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如上所述的重链构架和轻链构架区。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质是抗体，任选人源化或人抗体或其抗原结合片段。

本发明的这个方面的一个或多个变体CDRs可以包含：

（a）CDRH1（SEQ ID NO:2）的变体，其中：

i. 在位置32上的酪氨酸残基由异亮氨酸、组氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酸或天冬氨酸置换；

ii. 在位置33上的苏氨酸残基由酪氨酸、丙氨酸、色氨酸、甘氨酸、亮氨酸或缬氨酸置换，

iii. 在位置34上的甲硫氨酸残基由异亮氨酸、缬氨酸或色氨酸置换；和/或

iv. 在位置35上的天冬酰胺残基由组氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、酪氨酸或苏氨酸置换；

（b）CDRH2（SEQ ID NO:3）的变体，其中：

i. 在位置50上的亮氨酸残基由精氨酸、谷氨酸、色氨酸、酪氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、天冬酰胺、赖氨酸或丙氨酸置换；

ii. 在位置51上的异亮氨酸残基由亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸或天冬酰胺置换；

iii. 在位置52上的天冬酰胺残基由天冬酰胺、亮氨酸、丝氨酸或酪氨酸置换；

iv. 在位置53上的酪氨酸残基由丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸或天冬酰胺置换；

v. 在位置54上的天冬酰胺由丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸、天冬酰胺或甘氨酸置换；

vi. 在位置56上的缬氨酸由酪氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸或丙氨酸置换；和/或

vii. 在位置58上的丝氨酸由赖氨酸、天冬酰胺、苏氨酸、精氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸置换；

（c）CDRH3（SEQ ID NO:4）的变体，其中在位置102上的缬氨酸由酪氨酸、组氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、天冬氨酸或甘氨酸置换；

（d）CDRL1（SEQ ID NO:5）的变体，其中：

i. 在位置29上的丝氨酸由缬氨酸置换；和/或

ii. 在位置33上的甲硫氨酸由亮氨酸置换；和/或

（e）CDRL3（SEQ ID NO:7）的变体，其包含下述置换中的一个或多个：

i. 在位置89上的谷氨酰胺由亮氨酸置换；

ii. 在位置90上的谷氨酸由谷氨酰胺置换；

iii. 在位置91上的色氨酸由酪氨酸置换；和/或

iv. 在位置93上的酪氨酸由丝氨酸或精氨酸置换。

抗原结合蛋白质可以包含SEQ ID NOs:10-17（1A11.H0 V_H - 1A11.H7 V_H）中的任何的重链可变区或SEQ ID NO:121、123、125、127、129或131中的任何的重链可变区。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含SEQ ID NO:13（1A11.H3 V_H）的重链可变区。抗原结合蛋白质可以包含SEQ ID NOs:18-27（1A11.L0 Vκ - 1A11.L9 Vκ）中的任何的轻链可变区。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含SEQ ID NO:22（1A11.L4 Vκ）的轻链可变区。

在一个特定实施方案中，抗原结合蛋白质包含SEQ ID NO:13（1A11.H3 V_H）的重链可变区，和SEQ ID NO:22（1A11.L4 Vκ）的轻链可变区。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含SEQ ID NO：114或SEQ ID NO:118特别是SEQ ID NO:118的重链，和SEQ ID NO:115的轻链。重链可以进一步包含下述置换中的任何：N98D、N98E、F100bE、F100bH、F100bI和F100bV（Kabat）。

在另一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含在CDRH3内的一个或多个点突变，并且其中与缺乏所述突变的抗原结合蛋白质相比较，所述抗原结合蛋白质具有对于IL-7R更高的结合亲和力。例如，在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NOs:132-137中所示的CDRH3。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NOs:121、123、125、127、129或131中所示的重链可变区。

在另一个方面，本发明提供了包含如下述中所示的重链可变结构域的抗原结合蛋白质：

（a）SEQ ID NO:11

（b）SEQ ID NO:12

（c）SEQ ID NO:13

（d）SEQ ID NO:14

（e）SEQ ID NO:15

（f）SEQ ID NO:16

（g）SEQ ID NO:17

（h）SEQ ID NO:121

（i）SEQ ID NO:123

（j）SEQ ID NO:125

（k）SEQ ID NO:127

（l）SEQ ID NO:129

（m）SEQ ID NO:131，

或与SEQ ID NOs:11 - 17之一具有70%或更多同一性的重链可变结构域，其中抗原结合蛋白质能够结合CD127。

在一个实施方案中，重链可变结构域与SEQ ID NOs:11 - 17之一具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变结构域，或与SEQ ID NO:13具有70%或更大、75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的重链可变结构域。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质具有与SEQ ID NO:115或SEQ ID NO:118具有70%或更大、75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的重链。

在一个实施方案中，重链或重链可变结构域是SEQ ID NOs：11 - 17、121、123、125、127、129、131之一的变体，并且其中变异程度由下述中的一个或多个组成：

i. 在位置2上的Val、Ile或Gly

ii. 在位置4上的Leu或Val

iii. 在位置20上的Leu、Ile、Met或Val

iv. 在位置24上的Thr、Ala、Val、Gly或Ser

v. 在位置47上的Trp或Tyr

vi. 在位置48上的Ile、Met、Val或Leu

vii. 在位置69上的Ile、Leu、Phe、Met或Val

viii. 在位置71上的Arg、Val、Ala或Leu

ix. 在位置78上的Ala、Leu、Val、Tyr或Phe

x. 在位置80上的Leu或Met

xi. 在位置90上的Tyr或Phe；和

xii. 在位置94上的Arg、Lys、Gly、Ser、His或Asn。

在另一个方面，本发明提供了抗原结合蛋白质，其包含如下述中所示的轻链可变结构域：

（a）SEQ ID NO:19

（b）SEQ ID NO:20

（c）SEQ ID NO:21

（d）SEQ ID NO:22

（e）SEQ ID NO:23

（f）SEQ ID NO:24

（g）SEQ ID NO:25

（h）SEQ ID NO:26

（i）SEQ ID NO:27

或与SEQ ID NOs:19 - 27之一具有70%或更多同一性的轻链可变结构域，其中抗原结合蛋白质能够结合CD127。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变结构域，或与SEQ ID NO:22具有70%或更多同一性的轻链可变结构域。

在一个实施方案中，轻链可变结构域与SEQ ID NOs:19 – 27之一具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质具有与SEQ ID NOs:115具有70%或更大、75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的轻链。

本发明考虑了所述重和轻可变结构域的任何配对。因此，在一个实施方案中，本发明还提供了包含下述重和轻链可变结构域组合中的任何一个的抗原结合蛋白质：SEQ ID NO:11的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:12的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:13的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:14的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:15的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:16的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；SEQ ID NO:17的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:121的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:123的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:125的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:127的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:129的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）；或

SEQ ID NO:131的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、或99%或更大同一性的序列）。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包括包含与SEQ ID NO:13中所示的序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和包含与SEQ ID NO:22中所示的序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变结构域，和如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变结构域。

在另一个方面，本发明提供了抗原结合蛋白质，其包含下述互补决定区中的一个或多个：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1或其变体CDR，

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2或其变体CDR，

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1或其变体CDR，

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2或其变体CDR，

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3或其变体CDR，

其中所述CDRs中的至少一个是变体CDR，并且其中所述抗原结合蛋白质能够结合CD127。

在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2或其变体。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质包含至少如SEQ ID NO:4中所示的CDRH3或其变体CDR。本发明的这个方面的变体CDR可以包含：

（f）CDRH1（SEQ ID NO:2）的变体，其中：

（g）CDRH2（SEQ ID NO:3）的变体，其中：

（h）CDRH3（SEQ ID NO:4）的变体，其中在位置102上的缬氨酸由酪氨酸、组氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、天冬氨酸或甘氨酸置换；

（i）CDRL1（SEQ ID NO:5）的变体，其中：

i. 在位置29上的丝氨酸由缬氨酸置换；和/或

ii. 在位置33上的甲硫氨酸由亮氨酸置换；和/或

（j）CDRL3（SEQ ID NO:7）的变体，其包含下述置换中的一个或多个：

i. 在位置89上的谷氨酰胺由亮氨酸置换；

ii. 在位置90上的谷氨酸由谷氨酰胺置换；

iii. 在位置91上的色氨酸由酪氨酸置换；和/或

iv. 在位置93上的酪氨酸由丝氨酸或精氨酸置换。

在另一个方面，本发明提供了包含下述的抗原结合蛋白质：

在重链可变结构域构架中包含下述的重链可变结构域：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1或其变体CDR，

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2或其变体CDR，

其包含下述中的至少一个：

（a）在位置2上的Val、Ile或Gly

（b）在位置4上的Leu或Val

（c）在位置20上的Leu、Ile、Met或Val

（d）在位置22上的Cys

（e）在位置24上的Thr、Ala、Val、Gly或Ser

（f）在位置26上的Gly

（g）在位置47上的Trp或Tyr

（h）在位置48上的Ile、Met、Val或Leu

（i）在位置69上的Ile、Leu、Phe、Met或Val

（j）在位置71上的Arg、Val、Ala或Leu

（k）在位置78上的Ala、Leu、Val、Tyr或Phe

（l）在位置80上的Leu或Met

（m）在位置90上的Tyr或Phe

（n）在位置92上的Cys

（o）在位置94上的Arg、Lys、Gly、Ser、His或Asn，

和在轻链可变结构域构架中包含下述的轻链可变结构域：

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1或其变体CDR，

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2或其变体CDR，

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3或其变体CDR，

其包含下述中的至少一个：

（a）在位置2上的Ile

（b）在位置4上的Leu

（c）在位置23上的Cys

（d）在位置35上的Trp

（e）在位置36上的Tyr

（f）在位置71上的Tyr或Phe

（g）在位置88上的Cys

（h）在位置98上的Phe，

其中所述抗原结合蛋白质能够结合CD127。

本发明的这个方面的变体CDR可以包含：

（a）CDRH1（SEQ ID NO:2）的变体，其中：

（b）CDRH2（SEQ ID NO:3）的变体，其中：

（d）CDRL1（SEQ ID NO:5）的变体，其中：

i. 在位置29上的丝氨酸由缬氨酸置换；和/或

ii. 在位置33上的甲硫氨酸由亮氨酸置换；和/或

i. 在位置89上的谷氨酰胺由亮氨酸置换；

ii. 在位置90上的谷氨酸由谷氨酰胺置换；

iii. 在位置91上的色氨酸由酪氨酸置换；和/或

iv. 在位置93上的酪氨酸由丝氨酸或精氨酸置换。

在另一个方面，本发明提供了抗体，其包括包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的重链可变区：

（i）如SEQ ID NO:39中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:40中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:41中所示的CDRH3，

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在重链可变区的位置24上的缬氨酸、在位置27上的酪氨酸、在位置28上的丝氨酸、在位置29上的异亮氨酸、在位置30上的苏氨酸、在位置48上的甲硫氨酸、在位置49上的甘氨酸、在位置67上的异亮氨酸、在位置68上的丝氨酸、在位置71上的精氨酸、在位置73上的苏氨酸和在位置78上的苯丙氨酸（根据Kabat编号）。

在一个实施方案中，抗体包含在位置27上的酪氨酸、在位置30上的苏氨酸、在位置48上的甲硫氨酸、在位置67上的异亮氨酸和在位置71上的精氨酸中的至少一个、两个、三个、四个或所有五个。

抗体可以包括包含CDRH1（SEQ ID NO:39）和CDRH3（SEQ ID NO:41）；CDRH2（SEQ ID NO:40）和CDRH3（SEQ ID NO:41）；CDRH1（SEQ ID NO:39）和CDRH2（SEQ ID NO:40）；或CDRH1（SEQ ID NO:39）、CDRH2（SEQ ID NO:40）和CDRH3（SEQ ID NO:41）的重链可变区。抗体可以包含SEQ ID NOs:48-56（6A3IGHV4_61.H1 V_H - 6A3IGHV4_61.H9）或SEQ ID NOs:58-68（6A3IGHV3-33.H1 V_H - 6A3 IGHV3-33.H11）中的任何的重链可变区。

本发明还提供了抗体，其包括包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的轻链可变区：

（iv）如SEQ ID NO:42中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:43中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:44中所示的CDRL3，

其中所述抗体进一步包含：

（a）在可变区轻链的位置45上的谷氨酰胺残基和在位置70上的赖氨酸残基中的一个或两个，或

（b）在位置4上的亮氨酸、在位置31上的酪氨酸、在位置70上的甲硫氨酸、在位置85上的苏氨酸、在位置94上的酪氨酸、在位置100上的甘氨酸和在位置104上的缬氨酸中的一个或多个（根据Kabat编号）。

在一个实施方案中，抗体包含在位置45上的谷氨酰胺残基和在位置70上的赖氨酸残基。在另一个实施方案中，抗体包含在位置4上的亮氨酸、在位置31上的酪氨酸、在位置70上的甲硫氨酸、在位置85上的苏氨酸、在位置94上的酪氨酸、在位置100上的甘氨酸和在位置104上的缬氨酸中的每一个。

抗体可以包括包含CDRL1（SEQ ID NO:42）和CDRL3（SEQ ID NO:44）；CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）；或 CDRL1（SEQ ID NO:42）和CDRL2（SEQ ID NO:43）；或CDRL1（SEQ ID NO:42）、CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）的轻链可变区。抗体可以包含SEQ ID NOs:70-72和138（6A3.L1 Vκ、6A3.L2 Vκ、6A3.L3 Vκ和6A3.L27 Vκ）中的任何的轻链可变区。

（i）如SEQ ID NO:39中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:40中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:41中所示的CDRH3，

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在重链可变区的位置24上的缬氨酸、在位置27上的酪氨酸、在位置28上的丝氨酸、在位置29上的异亮氨酸、在位置30上的苏氨酸、在位置48上的甲硫氨酸、在位置49上的甘氨酸、在位置67上的异亮氨酸、在位置68上的丝氨酸、在位置71上的精氨酸、在位置73上的苏氨酸和在位置78上的苯丙氨酸，和

包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的轻链可变区：

（i）如SEQ ID NO:42中所示的CDRL1

（ii）如SEQ ID NO:43中所示的CDRL2

（iii）如SEQ ID NO:44中所示的CDRL3，

其中所述抗体进一步包含：

（a）在可变区轻链的位置45上的谷氨酰胺残基和在位置70上的赖氨酸残基中的一个或两个；或

抗体可以包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3的任何组合，包括从一个重链和一个轻链CDR到所述CDRs的所有六个。

（i）如SEQ ID NO:39中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:40中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:41中所示的CDRH3，

（iv）如SEQ ID NO:42中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:43中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:44中所示的CDRL3。

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：

（a）在重链可变区的位置24上的缬氨酸、在位置27上的酪氨酸、在位置28上的丝氨酸、在位置29上的异亮氨酸、在位置30上的苏氨酸、在位置48上的甲硫氨酸、在位置49上的甘氨酸、在位置67上的异亮氨酸、在位置68上的丝氨酸、在位置71上的精氨酸、在位置73上的苏氨酸和在位置78上的苯丙氨酸；和/或

（b）

a. 在可变区轻链的位置45上的谷氨酰胺残基和在位置70上的赖氨酸残基中的至少一个，或

b. 在位置4上的亮氨酸、在位置31上的酪氨酸、在位置70上的甲硫氨酸、在位置85上的苏氨酸、在位置94上的酪氨酸、在位置100上的甘氨酸和在位置104上的缬氨酸中的一个或多个（根据Kabat编号）。

本发明考虑了所述重和轻可变结构域的任何配对。因此，在一个实施方案中，本发明还提供了包含下述重和轻链可变结构域组合中的任何一个的抗原结合蛋白质：SEQ ID NO:47的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:48的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:49的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:50的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:51的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:52的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:53的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:54的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:55的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

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SEQ ID NO:61的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:62的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:64的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:65的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:66的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；

SEQ ID NO:67的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）；和

SEQ ID NO:68的重链可变结构域（或与其具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列），连同SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何一个的轻链可变结构域（或与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:138中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%或更大同一性的序列）。

在一个特定实施方案中，提供了抗原结合蛋白质，其包含具有如SEQ ID NO:53、54、55或56中所示的氨基酸序列的重链可变区，和具有如SEQ ID NO:138中所示的氨基酸序列的轻链可变区。

结合蛋白可以是抗体，特别是人源化或人抗体或其抗原结合片段。

在另一个方面，本发明提供了嵌合抗体，其包含SEQ ID NO:28的可变重链结构域和SEQ ID NO:29的可变轻链结构域，或SEQ ID NO:73的可变重链结构域和SEQ ID NO:74的可变轻链结构域。

本发明的抗原结合蛋白质可以不抑制TSLP信号传导。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质不抑制TSLP信号传导。

本发明还提供了编码本发明的抗原结合蛋白质的核酸分子。在一个实施方案中，本发明提供了SEQ ID NO:30-38、SEQ ID NO:75-113、SEQ ID NO:119-120、以及SEQ ID NOs:122、124、126、128和130的核酸分子。本发明还提供了包含如本文定义的核酸分子的表达载体，和包含如本文定义的表达载体的重组宿主细胞。表达载体可以包含SEQ ID NO:30-38、 SEQ ID NO:75-113、和SEQ ID NO:119-120、以及SEQ ID NOs:122、124、126、128和130中的任何一个或多个的核酸分子。在一个实施方案中，表达载体包含编码如上文描述的抗原结合蛋白质的核酸分子。在另一个实施方案中，本发明提供了包含如上文描述的表达载体的宿主细胞。在一个进一步的实施方案中，本发明提供了由如上文描述的宿主细胞表达的抗体。

本发明还提供了用于产生本发明的抗原结合蛋白质的方法，所述方法包括培养如上文定义的宿主细胞和回收抗原结合蛋白质的步骤。

本发明还提供了根据本发明的抗体或抗原结合蛋白质，其由包含编码根据本发明的抗体或抗原结合片段的核酸序列或序列的宿主细胞表达。

本发明还提供了包含本发明的抗原结合蛋白质和药学可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

本发明还提供了治疗受自身免疫或炎性疾病折磨的受试者的方法，所述方法包括给受试者施用本发明的抗原结合蛋白质的步骤。

本发明还提供了治疗受其中牵涉致病性T_H17细胞的疾病折磨的受试者的方法，所述方法包括给受试者施用本发明的抗原结合蛋白质的步骤。

本发明还提供了治疗受与IL-17表达上调相关的疾病折磨的受试者的方法，所述方法包括给受试者施用本发明的抗原结合蛋白质的步骤。

特别地，自身免疫或炎性疾病、其中牵涉致病性T_H17细胞的疾病或与IL-17表达上调相关的疾病可以是多发性硬化（MS）、SLE、类风湿性关节炎、Behcet’s病或哮喘。在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白质将用于治疗多发性硬化的方法中。可以通过施用本发明的抗原结合蛋白质治疗的其他疾病在本文中描述。

本发明还提供了用于在治疗受下述疾病折磨的受试者中使用的如本文描述的抗原结合蛋白质：自身免疫或炎性疾病；其中牵涉致病性T_H17细胞的疾病；或与IL-17表达上调相关的疾病。

本发明提供了如本文描述的抗原结合蛋白质在制造用于在治疗受下述疾病折磨的受试者中使用的药物中的用途：自身免疫或炎性疾病；其中牵涉致病性T_H17细胞的疾病；或与IL-17表达上调相关的疾病。

本发明的其他方面和实施方案由于下述详述将是显而易见的。

发明概述

图1显示了抗IL7R mAb 1A11 H3L4对表达hIL-7R的HEK293细胞的补体依赖性细胞毒性。

图2显示了在外周血单核细胞的存在下，人源化抗IL7R mAb 1A11 H3L4和Fc无能的抗IL7R mAb（1A11 H3L4Fc）对表达hIL-7R的HEK293细胞的抗体依赖细胞介导的细胞毒性。

图3A和3B显示了在由两个分开的供体提供的人PBMC中通过1A11 H3L4抑制IL-7诱导的STAT5磷酸化。

图4A至4D显示了通过1A11 H3L4抑制在分化的人Th17细胞中IL-7诱导的IL-17生产（在4个不同供体中）。

图5A至5E显示了1A11 H3L4不影响TARC（胸腺和活化调节趋化因子）的TSLP诱导。

详述

IL-7/IL-7R信号传导是定型T_H17细胞在小鼠和人系统中的存活和扩增关键需要的，虽然与IL-6的那种相比较，它在T_H17分化中的作用不是必需的（Liu等人，（2010）Nature Medicine 16:191-197）。令人惊讶的是，通过IL-7R拮抗对免疫系统的体内作用在EAE - 用于多发性硬化的动物模型中是高度选择性的，影响T_H17细胞和至较小程度的占优势地具有记忆表型的T_H1细胞和少量T_reg细胞。这种选择性看起来在通过IL-7R拮抗在EAE中再平衡致病性T_H17细胞和T_reg细胞的比率中起重要作用且可归于治疗功效。

IL-7/IL-7R信号传导在T_H17细胞存活和扩增中的作用支持IL-7R拮抗在人自身免疫疾病例如MS中的治疗功效。IL-7中和或IL-7R拮抗很可能具有独特的治疗优点。一方面，治疗提供区分致病性T_H1和T_H17细胞与T_reg和无关免疫细胞的选择性。另一方面，IL-7R拮抗的另外治疗优点涉及其对分化的T_H17的存活和扩增的选择性作用，与T_H17分化相反。可以想象靶向定型T_H17的体内维持相比T_H17分化在治疗背景下是更有效的。IL-7受体介导的信号传导的抑制因此提供了用于治疗自身免疫或炎性疾病的有希望的治疗干预。

如本文使用的，术语IL-7R介导的信号传导意指当由其配体IL-7结合时，由IL-7受体复合物促成的生物学效应。IL-7R介导的信号传导因此包括但不一定限于IL-7诱导的STAT-5磷酸化、IL-7诱导的T_H17细胞扩增和IL-7诱导的T_H17细胞存活中的一种或多种或全部。

鼠抗体1A11和6A3在专利申请号PCT/US2009/053136（WO2010/017468）中描述。这些抗体特异性结合人IL-7受体CD127（SEQ ID NO:1）的α链。这些抗体的可变结构域在SEQ ID NO:8和9（分别为V_H，Vκ 1A11）以及SEQ ID NO:45和46（分别为V_H，Vκ 6A3）中描述。

本发明提供了包含1A11或6A3的互补决定区（CDRs）中的一个或多个及其变体的抗原结合蛋白质。抗原结合蛋白质可以结合且中和IL-7R信号传导。在一个实施方案中，本发明提供了人源化抗体，其包含在人受体抗体中来自鼠抗体1A11或6A3（供体抗体）的CDRs中的一到六个。

如本文使用的，术语“抗原结合蛋白质”指抗体、抗体片段及其他蛋白质构建体，例如结构域，其能够结合CD127。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质是抗体。

术语“抗体”在本文中以最广泛含义使用，以指具有免疫球蛋白样结构域的分子且包括单克隆、重组、多克隆、嵌合、人源化、双特异性和异源缀合物抗体；单可变结构域、结构域抗体、抗原结合片段、免疫学有效片段、单链Fv、双抗体、Tandabs™等（关于可替代“抗体”形式的概述，参见Holliger和Hudson，Nature Biotechnology，2005，第23卷，No. 9，1126-1136）。

短语“单可变结构域”指抗原结合蛋白质可变结构域（例如V_H、V_HH、V_L），其特异性结合抗原或表位，不依赖于不同的可变区或结构域。

“结构域抗体”或“dAb”可以视为与能够结合抗原的“单可变结构域”相同。单可变结构域可以是人抗体可变结构域，但还包括来自其他物种例如啮齿类动物（例如如WO 00/29004中公开的）、护士鲨和骆驼科动物（Camelid）V_HH dAbs的单个抗体可变结构域。骆驼科动物V_HH是免疫球蛋白单可变结构域多肽，其衍生自物种包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼和原驼，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。此类V_HH结构域可以根据本领域可获得的标准技术进行人源化，并且此类结构域视为“结构域抗体”。如本文使用的，V_H包括骆驼科动物V_HH结构域。

如本文使用的，术语“结构域”指折叠的蛋白质结构，其具有三级结构，不依赖于蛋白质的其余部分。一般地，结构域负责蛋白质的不连续功能性质，并且在许多情况下可以加入、去除或转移至其他蛋白质，而无蛋白质和/或结构域的剩余部分的功能丧失。“单可变结构域”是包含抗体可变结构域特有的序列的折叠的多肽结构域。它因此包括完全抗体可变结构域和经修饰的可变结构域，例如其中一个或多个环已替换为并非抗体可变结构域特有的序列，或已截短或包含N或C末端延长部分的抗体可变结构域，以及保留全长结构域的至少结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。结构域可以结合抗原或表位，不依赖于不同可变区或结构域。

抗原结合片段可以借助于在非抗体蛋白质支架例如结构域上一个或多个CDRs的排列提供。非抗体蛋白质支架或结构域是已实施蛋白质工程的那种，以便获得与除其天然配体外的配体的结合，例如为选自下述的支架的衍生物的结构域：CTLA-4（Evibody）；脂质运载蛋白；蛋白A衍生分子例如蛋白A的Z结构域（亲和体，SpA）、A结构域（亲和性多聚体（Avimer）/ Maxibody）；热休克蛋白例如GroEl和GroES；转铁蛋白（trans-body）；锚蛋白重复蛋白（DARPin）；肽适体；C型凝集素结构域（四连接素）；人γ-晶状体蛋白和人遍在蛋白（affilins）；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂的蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白（adnectin）；其已实施蛋白质工程，以便获得与除其天然配体外的配体的结合。

CTLA-4（细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4）是主要在CD4+ T细胞上表达的CD28家族受体。它的细胞外结构域具有可变结构域样Ig折叠。对应于抗体的CDRs的环可以用异源序列取代，以赋予不同结合性质。改造为具有不同结合特异性的CTLA-4分子也称为Evibodies。关于进一步细节，参见Journal of Immunological Methods 248（1-2），31-45（2001）。

脂质运载蛋白是细胞外蛋白质的家族，其转运小疏水分子例如类固醇、胆色素、视黄素和脂质。它们具有刚性β-折叠二级结构，伴随在经典结构的开放末端上的许多环，其可以改造为结合不同靶抗原。Anticalins大小在160-180氨基酸之间，且衍生自脂质运载蛋白。关于进一步细节，参见Biochim Biophys Acta 1482：337-350（2000）、US7250297B1和US20070224633。

亲和体是衍生自金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的蛋白A的支架，其可以改造为结合抗原。结构域由约58个氨基酸的三螺旋束组成。文库已通过表面残基的随机化生成。关于进一步细节，参见Protein Eng. Des. Sel. 17，455-462（2004）和EP1641818A1。

亲和性多聚体是衍生自A结构域支架家族的多结构域蛋白。约35个氨基酸的天然结构域采取限定的二硫键合结构。多样性通过由A结构域家族显示出的天然变异的改组生成。关于进一步细节，参见Nature Biotechnology 23（12），1556 - 1561（2005）和Expert Opinion on Investigational Drugs 16（6），909-917（2007年6月）。

转铁蛋白是单体血清转运糖蛋白。转铁蛋白可以通过在允许的表面环中插入肽序列例如一个或多个CDRs而改造为结合不同靶抗原。经改造的转铁蛋白支架的例子包括Trans-body。关于进一步细节，参见J. Biol. Chem 274，24066-24073（1999）。

设计的锚蛋白重复蛋白（DARPins）衍生自锚蛋白，其为介导整合膜蛋白与细胞支架的附着的蛋白质家族。单个锚蛋白重复是由两个α-螺旋和β-转角组成的33残基基序。它们可以改造为通过下述结合不同靶抗原：随机化在每个重复的第一个α-螺旋和β-转角中的残基；或肽序列例如一个或多个CDRs的插入。它们的结合界面可以通过增加分子数目得到增加（亲和力成熟的方法）。关于进一步细节，参见J. Mol. Biol. 332，489-503（2003），PNAS 100（4），1700-1705（2003）和J. Mol. Biol. 369，1015-1028（2007）和US20040132028A1。

纤连蛋白是可以改造为结合抗原的支架。Adnectins由人纤连蛋白III型（FN3）的15个重复单位的第10个结构域的天然氨基酸序列主链组成。在β-夹心的一个末端上的三个环可以改造为使得Adnectin能够特异性识别目的治疗靶。关于进一步细节，参见Protein Eng. Des. Sel. 18，435-444（2005），US20080139791、WO2005056764和US6818418B1。

肽适体是组合识别分子，其由恒定支架蛋白质一般为硫氧还蛋白（TrxA）组成，其含有在活性部位插入的约束可变肽环。关于进一步细节，参见Expert Opin. Biol. Ther. 5，783-797（2005）。

微体衍生自长度25-50个氨基酸的天然存在的微量蛋白，其包含3-4个半胱氨酸桥；微量蛋白的例子包括KalataB1和芋螺毒素和打结素（knottins）。微量蛋白具有可以改造为包括高达25个氨基酸而不影响微量蛋白的总体折叠的环。关于经改造的打结素结构域的进一步细节，参见WO2008098796。

其他结合结构域包括已用作支架以改造不同靶抗原结合性质的蛋白质，包括人γ-晶状体蛋白和人遍在蛋白（affilins）、人蛋白酶抑制剂的kunitz型结构域、Ras结合蛋白AF-6的PDZ结构域、蝎毒素（卡律蝎毒素（charybdotoxin））、C型凝集素结构域（四连接素），在来自Handbook of Therapeutic Antibodies（2007，由Stefan Dubel编辑）的第7章– Non-Antibody Scaffolds和Protein Science 15:14-27（2006）中综述。本发明的结合结构域可以衍生自这些可替代蛋白质结构域中的任何和嫁接到结构域上的本发明的CDRs的任何组合。

抗原结合片段或免疫学有效片段可以包含部分重或轻链可变序列。片段是长度至少5、6、8或10个氨基酸。可替代地，片段是长度至少15、至少20、至少50、至少75或至少100个氨基酸。

如本说明书自始至终与抗原结合蛋白质有关使用的术语“特异性结合”意指抗原结合蛋白质与CD127结合，而与其他（例如无关）蛋白质无结合或不显著结合 – 即，本文描述的抗原结合蛋白质和抗体可以特异性结合CD127。然而，该术语不排除抗原结合蛋白质还可以与来自其他物种的CD127交叉反应的事实，例如鼠CD127、食蟹猴（食蟹猴（Macaca fascicularis））或绒猴CD127。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质结合食蟹猴和绒猴CD127。本文描述的抗原结合蛋白质可以结合人CD127，其亲和力是它们结合来自其他物种的CD127的至少2、5、10、50、100或1000倍亲和力。

抗原结合蛋白质-CD127相互作用的结合亲和力或平衡解离常数（K_D）可以是100 nM或更少、10 nM或更少、2 nM或更少或1 nM或更少。可替代地，K_D可以是在5 - 10 nM之间；或在1 - 2 nM之间。K_D可以是在1 pM - 500 pM之间；或在500 pM - 1 nM之间。抗原结合蛋白质的结合亲和力通过结合速率常数（k_a）和解离速率常数（k_d）进行测定（K_D = k_d/k_a）。结合亲和力可以通过BIAcore^TM进行测量，例如通过用经由伯胺偶联而偶联到CM5芯片上的CD127的抗原捕获和在这个表面上的抗体捕获。实施例4中所述的BIAcore^TM方法可以用于测量结合亲和力。可替代地，结合亲和力可以通过FORTEbio进行测量，例如通过用经由伯胺偶联而偶联到CM5针上的CD127的抗原捕获和在这个表面上的抗体捕获。

k_d可以是1x10^-3 s^-1或更少、1x10^-4 s^-1或更少或1x10^-5 s^-1或更少。k_d可以是在1x10^-5 s^-1 - 1x10^-4 s^-1之间；或在1x10^-4 s^-1 - 1x10^-3 s^-1之间。缓慢k_d可以导致抗原结合蛋白质-配体复合物的缓慢解离和配体的改善中和。

对于本领域技术人员显而易见的是，术语“衍生的”不仅意欲定义在它是关于材料的物理来源意义上的来源，还意欲定义在结构上等同于材料但不源于参考来源的材料。因此，“在供体抗体中发现的残基”不一定需要已从供体抗体中纯化。

分离的意指分子例如抗原结合蛋白质从它在自然界中发现的环境中去除。例如，分子可以是纯化的，远离它通常在自然界中与之一起存在的物质。例如，抗原结合蛋白质可以纯化至就含有抗原结合蛋白质的培养基而言至少95%、96%、97%、98%或99%或更多。本发明的抗原结合蛋白质和抗体可以是分离的抗原结合蛋白质和抗体。

“嵌合抗体”指一类经改造的抗体，其含有与衍生自受体抗体的轻和重链恒定区结合的，衍生自供体抗体的天然存在的可变区（轻链和重链）。

“人源化抗体”指具有一个或多个其CDRs衍生自非人供体免疫球蛋白的一类经改造的抗体，分子的剩余免疫球蛋白衍生的部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白。此外，构架支持残基可以是改变的，以保存结合亲和力（参见例如，Queen等人Proc. Natl Acad Sci USA，86:10029-10032（1989），Hodgson等人Bio/Technology，9:421（1991））。合适的人受体抗体可以是选自常规数据库的那种，例如KABAT®数据库、Los Alamos数据库和瑞士蛋白质（Swiss Protein）数据库，其通过与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性。特征在于与供体抗体（在氨基酸基础上）的构架区的同源性的人抗体可以是合适的，以提供重链恒定区和/或重链可变构架区用于插入供体CDRs。能够捐献轻链恒定或可变构架区的合适受体抗体可以以相似方式进行选择。应当指出受体抗体重和轻链无需源于相同受体抗体。现有技术描述了产生此类人源化抗体的几种方式，参见例如EP-A-0239400和EP-A-054951。

术语“供体抗体”指将其可变区、一个或多个CDRs、或其他功能片段或其类似物的氨基酸序列贡献给第一个免疫球蛋白配偶体的抗体。供体因此提供了改变的免疫球蛋白编码区和所得到的表达的改变抗体，具有供体抗体的抗原特异性和中和活性特征。

术语“受体抗体”指对于供体抗体异源的抗体，其将编码其重和/或轻链构架区和/或其重和/或轻链恒定区的所有（或任何部分）氨基酸序列贡献给第一个免疫球蛋白配偶体。人抗体可以是受体抗体。

术语“V_H”和“V_L”在本文中分别用于指抗原结合蛋白质的重链可变区和轻链可变区。Vκ还用于指可变轻链结构域。

“CDRs”定义为抗原结合蛋白质的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重和轻链的高变区。存在在免疫球蛋白的可变部分中的三个重链和三个轻链CDRs（或CDR区）。因此，如本文使用的，“CDRs”指所有三个重链CDRs、所有三个轻链CDRs、所有重和轻链CDRs或至少两个CDRs。

本说明书自始至终，在可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据Kabat编号常规进行编号，除非另有说明。类似地，在实施例中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵循Kabat编号常规。关于进一步信息，参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S. Department of Health and Human Services，National Institutes of Health（1987）。

对于本领域技术人员显而易见的是，存在关于可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基的可替代编号常规。还存在关于CDR序列的可替代编号常规，例如Chothia等人（1989）Nature 342：877-883中所示的那些。抗体的结构和蛋白质折叠可以意指其他残基是CDR序列的考虑部分，并且将由技术人员理解为这样。因此，术语“相应CDR”在本文中用于指使用任何编号常规的CDR序列，例如表1中所示的那些。

技术人员可获得的用于CDR序列的其他编号常规包括“AbM”（University of Bath）和“接触”（University College London）法。可以测定使用Kabat、Chothia、AbM和接触法中的至少两种的最低限度重叠区，以提供“最低限度结合单位”。最低限度结合单位可以是CDR的亚部分。

下表1代表使用关于每个CDR或结合单位的每个编号常规的一个定义。Kabat编号方案在表1中用于编号可变结构域氨基酸序列。应当指出某些CDR定义可以取决于使用的个别出版物而改变。

表 1 ：

	Kabat CDR	Chothia CDR	AbM CDR	接触CDR	最低限度结合单位
						H1	31-35/35A/35B	26-32/33/34	26-35/35A/35B	30-35/35A/35B	31-32
H2	50-65	52-56	50-58	47-58	52-56
						H3	95-102	95-102	95-102	93-101	95-101
L1	24-34	24-34	24-34	30-36	30-34
						L2	50-56	50-56	50-56	46-55	50-55
L3	89-97	89-97	89-97	89-96	89-96

如本文使用的，术语“抗原结合位点”指在抗原结合蛋白质上的位点，其能够特异性结合抗原。这可以是单结构域（例如，表位结合结构域）或单链Fv（ScFv）结构域，或它可以是如可以在标准抗体上发现的配对的V_H/V_L结构域。

如本文使用的，术语“表位”指抗原与抗原结合蛋白质的特定结合结构域接触的那个部分。表位可以是线性的，包含来自抗原的基本上线性的氨基酸序列。可替代地，表位可以是构象或不连续的。例如，构象表位包含需要结构约束的元件的氨基酸残基。不连续表位包含由其他序列分开的氨基酸残基，即不在抗原的基本序列中的连续序列中。在抗原的三级和四级结构的背景下，不连续表位的残基彼此足够接近，以由抗原结合蛋白质结合。

关于核苷酸和氨基酸序列，术语“等同的”或“序列同一性”指示在两个核酸或两个氨基酸序列之间的同一性程度，并且如果需要的话，当最佳比对且与合适的插入或缺失相比较时。

在两个序列之间的同一性百分比是由序列共享的等同位置数目的函数（即%同一性 = 等同位置数目/位置总数目乘以100），考虑到缺口数目和每个缺口的长度，所述缺口需要引入用于两个序列的最佳比对。在两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以使用如下文描述的数学算法完成。

在两个核苷酸序列之间的同一性百分比可以使用GCG软件包中的GAP程序进行测定，使用NWSgapdna.CMP矩阵以及缺口权40、50、60、70或80和长度权1、2、3、4、5或6。在两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比还可以使用E. Meyers和W. Miller（Comput. Appl. Biosci.，4:11-17（1988））的算法进行测定，所述算法已掺入ALIGN程序（版本2.0）内，使用PAM120权重残基表、缺口长度罚分12和缺口罚分4。此外，在两个氨基酸序列之间的序列同一性可以使用Needleman和Wunsch（J. Mol. Biol. 48:444-453（1970））算法进行测定，所述算法已掺入GCG软件包中的GAP程序内，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及缺口权16、14、12、10、8、6或4和长度权1、2、3、4、5或6。

在一种方法中，多核苷酸序列可以等同于如本文描述的参考多核苷酸序列（参见例如SEQ ID NO：30-39、SEQ ID NO:76-105），其是100%等同的，或它可以包括与参考序列相比较高达特定整数数目的核苷酸改变，例如至少50、60、70、75、80、85、90、95、98或99%等同的。此类改变选自至少一个核苷酸缺失、置换包括转换和颠换、或插入，并且其中所述改变可以在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置上或在那些末端位置之间的任何地方出现，个别散布在参考序列中的核苷酸中或在参考序列内的一个或多个邻接基团中。核苷酸改变数目通过下述进行测定：将如本文描述的参考多核苷酸序列（参见例如SEQ ID NO：30-39、SEQ ID NO:76-105）中的核苷酸总数目乘以各自同一性百分比的数目百分比（除以100），且从如本文描述的参考多核苷酸序列（参见例如SEQ ID NO：30-39、SEQ ID NO:76-105）中的所述核苷酸总数目中扣除那个乘积，或：

n_n ≤ x_n -（x_n•y），

其中n_n是核苷酸改变数目，x_n是如本文描述的参考多核苷酸序列（参见例如SEQ ID NO：30-39、SEQ ID NO:76-105）中的核苷酸总数目，并且y对于50%是0.50，对于60%是0.60，对于70%是0.70，对于75%是0.75，对于80%是0.80，对于85%是0.85，对于90%是0.90，对于95%是0.95，对于98%是0.98，对于99%是0.99，或对于100%是1.00。•是关于乘法运算符的符号，并且其中x_n和y的任何非整数乘积四舍五入为在从x_n中扣除其之前的最近整数。

类似地，多肽序列可以等同于如本文描述的多肽参考序列（参见例如SEQ ID NO:1-29、SEQ ID NO:40-75），其是100%等同的，或它可以包括与参考序列相比较高达特定整数数目的氨基酸改变，从而使得%同一性小于100%，例如至少50、60、70、75、80、85、90、95、98或99%等同的。此类改变选自至少一个氨基酸缺失、置换包括保守和非保守置换、或插入，并且其中所述改变可以在参考多肽序列的氨基或羧基末端位置上或在那些末端位置之间的任何地方出现，个别散布在参考序列中的氨基酸中或在参考序列内的一个或多个邻接基团中。对于给定%同一性的氨基酸改变数目通过下述进行测定：将由如本文描述的多肽参考序列（参见例如SEQ ID NO:1-29、SEQ ID NO:40-75）编码的多肽序列中的氨基酸总数目乘以各自同一性百分比的数目百分比（除以100），且从如本文描述的多肽参考序列（参见例如SEQ ID NO:1-29、SEQ ID NO:40-75）中的所述氨基酸总数目中扣除那个乘积，或：

n_a≤ x_a -（x_a•y），

其中n_a是氨基酸改变数目，x_a是如本文描述的参考多肽序列（参见例如SEQ ID NO:1-29、SEQ ID NO:40-75）中的氨基酸总数目，并且y对于50%是0.50，对于60%是0.60，对于70%是0.70，对于75%是0.75，对于80%是0.80，对于85%是0.85，对于90%是0.90，对于95%是0.95，对于98%是0.98，对于99%是0.99，或对于100%是1.00。•是关于乘法运算符的符号，并且其中x_a和y的任何非整数乘积四舍五入为在从x_a中扣除其之前的最近整数。

%同一性可以跨越序列的全长或其任何片段进行测定；并且连同或不连同任何插入或缺失。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”各自指包含两个或更多个氨基酸残基的分子。肽可以是单体或聚合的。

本领域充分认识到的是特定氨基酸置换视为“保守的”。氨基酸基于共同的侧链性质分成组，并且在维持抗原结合蛋白质的所有或基本上所有结合亲和力的组内的置换视为保守置换，参见下表2：

表 2

侧链	成员
		疏水性	met、ala、val、leu、ile
中性亲水性	cys、ser、thr
		酸性	asp、glu
碱性	asn、gln、his、lys、arg
		影响链定向的残基	gly、pro
芳香族	trp、tyr、phe

本发明提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含SEQ ID NO:4的CDRH3；其变体CDRH3，或SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:137的CDRH3。抗原结合蛋白质可以特异性结合CD127且还可以中和IL-7R活性。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含SEQ ID NO:3的CDRH2；或其变体CDRH2。抗原结合蛋白质可以特异性结合CD127且还可以中和IL-7R活性。

除了上文描述的CDRH3或CDRH2序列外，抗原结合蛋白质还可以进一步包含选自下述的以任何组合的一个或多个CDRs或所有CDRs：CDRH1（SEQ ID NO:2）、CDRH2（SEQ ID NO:3）、CDRH3（SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO：132至SEQ ID NO:137中的任何）、CDRL1（SEQ ID NO:5）、CDRL2（SEQ ID NO:6）、和CDRL3（SEQ ID NO:7）；或所述CDRs中的任何的变体。

例如，抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:4）和CDRH1（SEQ ID NO:2）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:4）和CDRH2（SEQ ID NO:3）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH1（SEQ ID NO:2）和CDRH2（SEQ ID NO:3）、和CDRH3（SEQ ID NO:4）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRL1（SEQ ID NO:5）和CDRL2（SEQ ID NO:6）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRL1（SEQ ID NO:5）、CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:4）和CDRL3（SEQ ID NO:7）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:4）、CDRH2（SEQ ID NO:3）和CDRL3（SEQ ID NO:7）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:4）、CDRH2（SEQ ID NO:3）、CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRH1（SEQ ID NO:2）、CDRH2（SEQ ID NO:3）、CDRH3（SEQ ID NO:4）、CDRL1（SEQ ID NO:5）、CDRL2（SEQ ID NO:6）和CDRL3（SEQ ID NO:7）。可替代地，可以存在变体CDRs，或SEQ ID NO:4的CDRH3可以替换为SEQ ID NO:132-137的CDRs中的任何。

本发明提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含SEQ ID NO:41的CDRH3；或其变体CDRH3。抗原结合蛋白质还可以中和IL-7R活性。

本发明提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含SEQ ID NO:40的CDRH2；或其变体CDRH2。抗原结合蛋白质还可以中和IL-7R活性。

除了上文描述的CDRH3或CDRH2序列外，抗原结合蛋白质还可以进一步包含选自下述的以任何组合的一个或多个CDRs或所有CDRs：CDRH1（SEQ ID NO:39）、CDRH2（SEQ ID NO:40）、CDRH3（SEQ ID NO:41）、CDRL1（SEQ ID NO:42）、CDRL2（SEQ ID NO:43）、和CDRL3（SEQ ID NO:44）；或所述CDRs中的任何的变体。

例如，抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:41）和CDRH1（SEQ ID NO:40）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:41）和CDRH2（SEQ ID NO:40）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH1（SEQ ID NO:39）和CDRH2（SEQ ID NO:40）和CDRH3（SEQ ID NO:41）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRL1（SEQ ID NO:42）和CDRL2（SEQ ID NO:43）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRL1（SEQ ID NO:42）、CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:41）和CDRL3（SEQ ID NO:44）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:41）、CDRH2（SEQ ID NO:40）和CDRL3（SEQ ID NO:44）或其变体。抗原结合蛋白质可以包含CDRH3（SEQ ID NO:41）、CDRH2（SEQ ID NO:40）、CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含CDRH1（SEQ ID NO:39）、CDRH2（SEQ ID NO:40）、CDRH3（SEQ ID NO:41）、CDRL1（SEQ ID NO:42）、CDRL2（SEQ ID NO:43）和CDRL3（SEQ ID NO:44）。可替代地，可以存在变体CDRs。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含在人受体构架中SEQ ID NO:8的可变结构域序列的相应CDRH3或其变体CDRH3。抗原结合蛋白质可以中和CD127活性。抗原结合蛋白质可以是人、嵌合或人源化抗体。

抗原结合蛋白质可以进一步包含选自SEQ ID NO：8和/或SEQ ID NO：9的可变结构域序列的相应CDRs中的一个或多个或全部，或其变体CDR。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其特异性结合CD127且包含在人受体构架中SEQ ID NO:45的可变结构域序列的相应CDRH3或其变体CDRH3。抗原结合蛋白质可以中和CD127活性。抗原结合蛋白质可以是人、嵌合或人源化抗体。

抗原结合蛋白质可以进一步包含选自SEQ ID NO：45和/或SEQ ID NO：46的可变结构域序列的相应CDRs中的一个或多个或全部，或其变体CDR。

例如，抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH3和相应CDRH1或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH3和相应CDRH2或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH1、相应CDRH2和相应CDRH3；或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含相应CDRL1和相应CDRL2或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRL2和相应CDRL3或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRL1、相应CDRL2和相应CDRL3或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH3和相应CDRL3或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH3、相应CDRH2和相应CDRL3或其变体。抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH3、相应CDRH2、相应CDRL2和相应CDRL3或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含相应CDRH1、相应CDRH2、相应CDRH3、相应CDRL1、相应CDRL2和相应CDRL3或其变体。

相应CDRs可以通过参考Kabat（1987）、Chothia（1989）、AbM或接触法进行限定。所述方法各自的一个定义可以在表1中找到，且可以应用于参考重链可变结构域（SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:45）和参考轻链可变结构域（SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:46），以测定相应CDR。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包括包含SEQ ID NO:8的Kabat残基95-101的结合单位H3或变体H3。抗原结合蛋白质可以是人、人源化或嵌合抗原结合蛋白质，例如抗体。

抗原结合蛋白质可以进一步包含选自下述的一个或多个或所有结合单位：包含SEQ ID NO:8的Kabat残基31-32的H1，包含SEQ ID NO:8的Kabat残基52-56的H2，包含SEQ ID NO:9的Kabat残基30-34的L1，包含SEQ ID NO:9的Kabat残基50-55的L2，和包含SEQ ID NO:9的Kabat残基89-96的L3；或变体结合单位。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包括包含SEQ ID NO:45的Kabat残基95-101的结合单位H3或变体H3。抗原结合蛋白质可以是人、人源化或嵌合抗原结合蛋白质，例如抗体。

抗原结合蛋白质可以进一步包含选自下述的一个或多个或所有结合单位：包含SEQ ID NO:45的Kabat残基31-32的H1，包含SEQ ID NO:45的Kabat残基52-56的H2，包含SEQ ID NO:46的Kabat残基30-34的L1，包含SEQ ID NO:46的Kabat残基50-55的L2，和包含SEQ ID NO:46的Kabat残基89-96的L3；或变体结合单位。

例如，抗原结合蛋白质可以包含结合单位H3和结合单位H1或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位H3和结合单位H2或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位H1、结合单位H2和结合单位H3；或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含结合单位L1和结合单位L2或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位L2和结合单位L3或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位L1、结合单位L2和结合单位L3；或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含结合单位H3和结合单位L3或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位H3、结合单位H2和结合单位L3；或其变体。抗原结合蛋白质可以包含结合单位H3、结合单位H2、结合单位L2和结合单位L3；或其变体。

抗原结合蛋白质可以包含结合单位H1、结合单位H2、结合单位H3、结合单位L1、结合单位L2和结合单位L3；或其变体。

CDR变体或变体结合单位包括通过至少一个氨基酸修饰的氨基酸序列，其中所述修饰可以是氨基酸序列的化学或部分改变（例如不超过10个氨基酸），所述修饰允许变体保留未修饰序列的生物学特征。例如，变体是结合CD127的功能变体。CDR氨基酸序列的部分改变可以是一个到几个氨基酸的缺失或置换，或一个到几个氨基酸的添加或插入，或其组合（例如不超过10个氨基酸）。CDR变体或结合单位变体可以含有在氨基酸序列中以任何组合的1、2、3、4、5或6个氨基酸置换、添加或缺失。CDR变体或结合单位变体可以含有在氨基酸序列中以任何组合的1、2或3个氨基酸置换、添加或缺失。氨基酸残基中的置换可以是保守置换，例如一个疏水性氨基酸置换为可替代疏水性氨基酸。例如，亮氨酸可以由缬氨酸或异亮氨酸置换。

CDRs L1、L2、L3、H1、H2和H3趋于在结构上显示出有限数目的主链构象（经典（canonicals））之一。CDR的特定经典结构类别通过CDR的长度和环包装限定，通过位于CDRs和构架区中的关键位置上的残基决定（结构决定残基或SDRs）。Martin和Thornton（1996；J Mol Biol 263:800-815）已生成限定“关键残基”经典模板的自动方法。聚类分析用于限定关于CDRs组的经典类别，并且随后通过分析埋入的疏水性、氢键合残基以及保守的甘氨酸和脯氨酸鉴定经典模板。通过将序列与关键残基模板比较，且使用同一性或同源性矩阵评分每个模板，可以将抗体序列的CDRs指定至经典类别。

基于1A11 H3L4抗体（SEQ ID NO：13（1A11.H3 V_H）或SEQ ID NO:22（1A11.L4 V_κ））的经典类别，功能抗体结合可以预测为在下述CDR置换的存在下得到维持，其中在Kabat编号前的氨基酸是原始氨基酸序列，并且在Kabat编号末端处的氨基酸序列是置换的氨基酸：

CDRH1经典：

Y32I、Y32H、Y32F、Y32T、Y32N、Y32C、Y32E、Y32D

T33Y、T33A、T33W、T33G、T33L、T33V

M34I、M34V、M34W

N35E、N35H、N35Q、N35S、N35Y、N35T

CDRH2经典：

L50R、L50E、L50W、L50Y、L50G、L50Q、L50V、L50N、L50K、N50A

I51L、I51V、I51T、I51S、I51N

N52D、N52L、N52S、N52Y

Y53A、Y53G、Y53S、Y53K、Y53T、Y53N

N54S、N54T、N54K、N54D、N54G

V56Y、V56R、V56E、V56D、V56G、V56S、V56A

S58K、S58N、S58T、S58D、S58R、S58G、S58F、S58Y

CDRH3经典：

V102Y、V102H、V102I、V102S、V102D、V102G

CDRL1经典：

S29V

M33L

CDRL3经典：

Q89L

E90Q

W91Y

Y93S、Y93R

因此，抗原结合蛋白质可以具有或不具有在CDR位置内的上述置换中的任何。每个变体CDR、每个相应CDR、每个结合单位、每个重或轻链可变区、每条重或轻链和每个抗原结合蛋白质可以存在多个置换，并且因此置换的任何组合可以存在于本发明的抗原结合蛋白质中，条件是CDR的经典结构得到维持。

为了避免疑问，上述置换不应解释为限制可能的CDR置换，其可以执行同时仍保留功能抗CD127抗体。

包含所述CDRs、相应CDRs、变体CDRs、结合单位或变体结合单位的抗原结合蛋白质，可以展示用于结合CD127的效力，如通过在由1A11c（嵌合体，V_H – SEQ ID NO:28，V_κ – SEQ ID NO:29）或6A3c（嵌合体，V_H – SEQ ID NO:74，V_κ – SEQ ID NO:75）证实的效力10倍或5倍内的EC50证实的。关于结合CD127的效力可以通过多种方法例如结合亲和力（例如通过BIAcore）或EC50（例如通过ELISA测定）加以证实。

如上文讨论的，CDR的特定经典结构类别通过CDR的长度和环包装进行限定，通过位于CDRs和构架区中的关键位置上的残基决定。因此，除SEQ ID NO:2-6中列出的CDRs、变体CDRs、相应CDRs、结合单位或其变体外，基于经典类别，可以在本发明的抗原结合蛋白质的关键残基中进行置换，同时保留功能抗体。这些可以包括（使用Kabat编号）：

重链：在位置2上的V、I或G；在位置4上的L或V；在位置20上的L、I、M或V；在位置22上的C；在位置24上的T、A、V、G或S；在位置26上的G；在位置29上的I、F、L或S；在位置36上的W；在位置47上的W或Y；在位置48上的I、M、V或L；在位置69上的I、L、F、M或V；在位置71上的V、A、R或L；在位置78上的A、L、V、Y或F；在位置80上的L或M；在位置90上的Y或F；在位置92上的C；和/或在位置94上的R、K、G、S、H或N；和/或

轻链：在位置2上的I、L或V；在位置3上的V、Q、L或E；在位置4上的M或L；在位置23上的C；在位置35上的W；在位置36上的Y、L或F；在位置46上的S、L、R或V；在位置49上的Y、H、F或K；在位置71上的Y或F；在位置88上的C；和/或在位置98上的F。

上文描述的构架位置中的任何一个、任何组合或全部可以存在于本发明的抗原结合蛋白质中。每个重或轻链可变区、每条重或轻链和每个抗原结合蛋白质可以存在多个变体构架经典位置，并且因此任何组合可以存在于本发明的抗原结合蛋白质中，条件是构架的经典结构得到维持。

例如，重链可变构架可以包含在位置2上的V、在位置4上的L、在位置20上的V、在位置22上的C、在位置24上的A、在位置26上的G、在位置29上的F、在位置36上的W、在位置47上的W、在位置48上的M、在位置69上的L、在位置71上的R、在位置78上的A、在位置80上的M、在位置90上的Y、在位置92上的C和在位置94上的R，并且例如轻链可变构架可以包含在位置2上的I、在位置4上的L、在位置23上的C、在位置35上的W、在位置36上的Y、在位置71上的F、在位置88上的C、在位置90上的E和在位置93上的Y。

本文描述的CDRs、相应CDRs、变体CDRs或结合单位中的一个或多个可以存在于人构架的背景下，例如作为人源化或嵌合可变结构域。

人源化重链可变结构域可以包含在受体抗体构架内SEQ ID NO:2-4或SEQ ID NO:39-41中列出的CDRs；其变体CDRs；相应CDRs；结合单位；或其变体，其在构架区中与SEQ ID NO：116中的人受体可变结构域序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%更大或100%同一性。

人源化轻链可变结构域可以包含在受体抗体构架内SEQ ID NO：5-7或SEQ ID NO:42-44中列出的CDRs；其变体CDRs；相应CDRs；结合单位；或其变体，其在构架区中与SEQ ID NO：117中的人受体可变结构域序列具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%更大或100%同一性。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含选自SEQ ID NO:10、11、12、13、14、15、16、17、121、123、125、127、129或131中的任何一个的重链可变区。抗原结合蛋白质可以包含选自SEQ ID NO:18、19、20、21、22、23、24、25、26或27中的任何一个的轻链可变区。重链可变区中的任何可以与轻链可变区中的任何组合。抗原结合蛋白质还可以中和CD127。

本发明还提供了抗原结合蛋白质，其结合CD127且包含选自SEQ ID NO:48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中的任何一个的重链可变区。抗原结合蛋白质可以包含选自SEQ ID NO:70、71、72、73或138中的任何一个的轻链可变区。重链可变区中的任何可以与轻链可变区中的任何组合。抗原结合蛋白质还可以中和CD127。

抗体重链可变区可以与SEQ ID NO:10、11、12、13、14、15、16、17、121、123、125、127、129或131；或SEQ ID NO:48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中的任一个具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%更大或100%同一性。

抗体轻链可变区可以与SEQ ID NO:18、19、20、21、22、23、24、25、26或27；或SEQ ID NO:70、71、72、73或138中的任一个具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%更大或100%同一性。

SEQ ID NO：10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、121、123、125、127、129或131的变体的同一性百分比可以跨越序列的全长进行测定。

抗体重链可变区可以是SEQ ID NO:10、11、12、13、14、15、16、17、121、123、125、127、129或131中的任何一个的变体，其包含30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸置换、插入或缺失。

抗体轻链可变区可以是SEQ ID NO:18、19、20、21、22、23、24、25、26或27中的任何一个的变体，其包含30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸置换、插入或缺失。

例如，上文描述的经典CDRs和经典构架残基置换还可以作为至少75%等同或含有高达30个氨基酸置换的变体序列存在于变体重或轻链可变区中。

在另一个实施方案中，抗体重链可变区可以是SEQ ID NO：48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68或69中的任何一个的变体，其包含30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸置换、插入或缺失。抗体轻链可变区可以是SEQ ID NO：70、71、72或73中的任何一个的变体，其包含30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸置换、插入或缺失。

本发明的重链可变区中的任何可以与合适的人恒定区组合。本发明的轻链可变区中的任何可以与合适的恒定区组合。

本发明还提供了特异性结合CD127且包含任何下述重链和轻链可变结构域组合的抗原结合蛋白质：1A11.H3.L4（SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:22），或具有与SEQ ID NO:13具有至少75%同一性的重链可变结构域和与SEQ ID NO:22具有至少75%同一性的轻链可变结构域的抗原结合蛋白质。抗原结合蛋白质还可以中和CD127。

如上所述的抗原结合蛋白质，例如具有通过化学修饰和/或一个或多个氨基酸残基的插入、缺失或置换的序列的部分改变的变体，或与上文描述的序列中的任何具有75%或更大、80%或更大、85%或更大、90%或更大、95%或更大、98%或更大、99%更大同一性的那些，可以展示用于结合CD127的效力，如通过在由1A11c 或6A3c证实的效力10倍或5倍内的EC50或BIAcore证实的。关于结合CD127的效力可以通过经由ELISA测定进行的EC50或通过经由BIAcore进行的结合亲和力加以证实。

本发明人还已实验上测定在CDRH3内的特定位置可以进行置换，导致减少的结合亲和力（即更强的结合）。此类CDRH3类似物在表4中阐述。在位置N98和F100b（Kabat编号）上的置换看起来在增加亲和力中是特别有效的。特定置换包括N98D、N98E、F100bE、F100bI和F100bV。代表这些置换的CDRH3序列分别是SEQ ID NO:132、133、134、135、136和137。

本发明考虑了此类置换掺入本文描述的抗体的任何内。

在一个实施方案中，本发明的抗体具有在位置100上的W（Trp）残基。

可能希望这样修饰抗原结合片段的效应子功能 – 例如，以增强ADCC或CDC、半衰期等。

在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白质可以是Fc无能的（disabled）。达到Fc无能的一种方法包括在重链恒定区的位置235和237（EU指数编号）上丙氨酸残基的置换。可替代地，抗原结合蛋白质可以是Fc激活的（Fc enabled）且不包含在位置235和237上的丙氨酸置换。

抗原结合蛋白质可以具有在人或鼠动物模型中在体内至少6小时、至少1天、至少2 天、至少3 天、至少4 天、至少5 天、至少7 天或至少9 天的半衰期。

抗原结合蛋白质可以衍生自大鼠、小鼠、灵长类动物（例如猕猴、旧大陆猴或类人猿）或人。抗原结合蛋白质可以是人、人源化或嵌合抗体。抗原结合蛋白质可以包含恒定区，其可以具有任何同种型或亚类。恒定区可以具有IgG同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。抗原结合蛋白质恒定区可以是IgG1。

对于抗体的Fc效应子部分的突变改变可以用于改变在FcRn和抗体之间的相互作用的亲和力，以调节抗体周转率。抗体的半衰期可以在体内延长。这对于患者群体可以是有利的，因为由于体内IC50维持更长时间段，可以实现最大限度剂量量和最大限度给药频率。抗体的Fc效应子功能可以整体或部分去除，因为可能不希望杀死表达CD127的那些细胞。这种去除可以导致增加的安全概况。

包含恒定区的抗原结合蛋白质可以具有减少的ADCC和/或补体活化或效应子功能性。恒定结构域可以包含IgG2或IgG4同种型的天然无能的恒定区或突变的IgG1恒定结构域。合适修饰的例子在EP0307434中描述。实现Fc无能的一种方法包括在重链恒定区的位置235和237（EU指数编号）上丙氨酸残基的置换。

抗原结合蛋白质可以包含选自突变的恒定结构域的一种或多种修饰，从而使得抗体具有增强的效应子功能/ ADCC和/或补体活化。合适修饰的例子在Shields等人J. Biol. Chem（2001）276:6591-6604，Lazar等人PNAS（2006）103:4005-4010以及US6737056、WO2004063351和WO2004029207中描述。

抗原结合蛋白质可以包含具有改变的糖基化概况的恒定结构域，从而使得抗原结合蛋白质具有增强的效应子功能/ ADCC和/或补体活化。生产具有改变的糖基化概况的抗原结合蛋白质的合适方法的例子在WO2003/011878、WO2006/014679和EP1229125中描述。

抗原结合蛋白质与之结合的CD127多肽可以是重组多肽，并且可以包含任选融合至另一种蛋白质例如Fc结构域的细胞外结构域（ECD），或可以包含全长CD127蛋白质。CD127可以在溶液中或可以附着至固体表面。例如，CD127可以附着至珠例如磁珠。CD127可以是生物素化的。缀合至CD127生物素分子可以通过将生物素-链霉抗生物素蛋白偶联在固体表面上用于将CD127固定在固体表面上。

本发明还提供了编码如本文描述的抗原结合蛋白质的核酸分子。核酸分子可以包含编码下述的序列：（i）一个或多个CDRHs、重链可变序列或全长重链序列；和（ii）一个或多个CDRLs、轻链可变序列或全长轻链序列，其中（i）和（ii）在相同的核酸分子上。可替代地，编码本文描述的抗原结合蛋白质的核酸分子可以包含编码下述的序列：（a）一个或多个CDRHs、重链可变序列或全长重链序列；或（b）一个或多个CDRLs、轻链可变序列或全长轻链序列，其中（a）和（b）在分开的核酸分子上。

编码重链可变结构域的核酸分子可以包含SEQ ID NO:30-36。编码轻链可变结构域的核酸分子可以包含SEQ ID NO:10-113。

编码重链可变结构域的核酸分子可以包含SEQ ID NO:75-96。编码轻链可变结构域的核酸分子可以包含SEQ ID NO:97-100。

本发明还提供了包含如本文描述的核酸分子的表达载体。还提供的是包含如本文描述的表达载体的重组宿主细胞。

本文描述的抗原结合蛋白质可以在合适的宿主细胞中生产。用于生产如本文描述的抗原结合蛋白质的方法可以包括培养如本文描述的宿主细胞和回收抗原结合蛋白质的步骤。重组转化、转染或转导的宿主细胞可以包含至少一个表达盒，由此所述表达盒包含编码本文描述的抗原结合蛋白质的重链的多核苷酸，且进一步包含编码本文描述的抗原结合蛋白质的轻链的多核苷酸。可替代地，重组转化、转染或转导的宿主细胞可以包含至少一个表达盒，由此第一个表达盒包含编码本文描述的抗原结合蛋白质的重链的多核苷酸，且进一步包括包含编码本文描述的抗原结合蛋白质的轻链的多核苷酸的第二个表达盒。稳定转化的宿主细胞可以包括包含一个或多个表达盒的载体，所述表达盒编码本文描述的抗原结合蛋白质的重链和/或轻链。例如，此类宿主细胞可以包含编码轻链的第一个载体和编码重链的第二个载体。

宿主细胞可以是真核的例如哺乳动物的。此类细胞系的例子包括CHO或NS0。宿主细胞可以是非人宿主细胞。宿主细胞可以是非胚胎宿主细胞。宿主细胞可以在培养基例如无血清培养基中培养。抗原结合蛋白质可以通过宿主细胞分泌到培养基内。抗原结合蛋白质可以纯化至就含有抗原结合蛋白质的所述培养基而言至少95%或更多（例如98%或更多）。

本发明还提供了包含抗原结合蛋白质和药学可接受的载体的药物组合物。进一步提供了包含药物组合物连同使用说明书的试剂盒套件（kit-of-parts）。为了方便起见，试剂盒套件可以包含以预定量的试剂连同使用说明书。

抗体结构

完整抗体

基于恒定区的氨基酸序列，来自大多数脊椎动物物种的抗体的轻链可以指定至称为κ和λ的两个类型之一。取决于其重链的恒定区的氨基酸序列，人抗体可以指定至五个不同类别，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgG和IgA可以进一步再分成亚类，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；以及IgA1和IgA2。对于具有至少IgG2a、IgG2b的小鼠和大鼠存在物种变体。

可变区的更保守部分称为构架区（FR）。完整重和轻链的可变结构域各自包含由三个CDRs连接的四个FR。每条链中的CDRs通过FR区紧密结合在一起，且与来自其他链的CDRs一起促成抗体的抗原结合位点的形成。

恒定区不直接涉及抗体与抗原的结合，但显示出多种效应子功能例如参与抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）、经由结合Fcγ受体的吞噬作用、经由新生儿Fc受体（FcRn）的半衰期/清除率和经由补体级联的C1q组分的补体依赖性细胞毒性。

人IgG2恒定区已报道为基本上缺乏通过经典途径活化补体或介导抗体依赖细胞的细胞毒性的能力。IgG4恒定区已报道为缺乏通过经典途径活化补体的能力，且仅弱介导抗体依赖细胞的细胞毒性。基本上缺乏这些效应子功能的抗体可以称为‘非裂解性’抗体。可能希望减少根据本发明的抗体的效应子功能，任选至抗体基本上不具有效应子功能的程度。在一个实施方案中，根据本发明的抗体是非裂解性的。在一个实施方案中，根据本发明的抗体基本上不具有效应子功能。抗体可以缀合至或不缀合至另一种分子，例如预期修饰效应子功能的分子，例如细胞毒性部分或放射性部分。在一个实施方案中，抗体不缀合至另一种分子，例如放射性标记或细胞毒性分子。在这个实施方案中，抗体通过阻断天然生物学相互作用，而不是通过直接细胞杀死效应实现其功能效应。

人抗体

人抗体可以通过本领域技术人员已知的许多方法进行生产。人抗体可以通过杂交瘤法进行制备，使用人骨髓瘤或小鼠-人异源骨髓瘤细胞系，参见Kozbor（1984）J. Immunol 133，3001，和Brodeur，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，51-63（Marcel Dekker Inc，1987）。可替代方法包括噬菌体文库或转基因小鼠的使用，这两者都利用人可变区储库（参见Winter（1994）Annu. Rev. Immunol 12：433-455；Green（1999）J. Immunol. Methods 231：11-23）。

转基因小鼠的几个品系是目前可获得的，其中其小鼠免疫球蛋白基因座已替换为人免疫球蛋白基因区段（参见Tomizuka（2000）PNAS 97：722-727；Fishwild（1996）Nature Biotechnol. 14：845-851；Mendez（1997）Nature Genetics，15：146-156）。在抗原攻击后，此类小鼠能够产生人抗体储库，从其中可以选择目的抗体。

噬菌体展示技术可以用于生产人抗原结合蛋白质（及其片段），参见McCafferty（1990）Nature 348：552-553和Griffiths等人（1994）EMBO 13：3245-3260。

亲和力成熟技术（Marks Bio/technol（1992）10：779-783）可以用于改善结合亲和力，其中通过用天然存在的变体序贯替换H和L链可变区且在改善的结合亲和力的基础上选择，改善初级人抗体的亲和力。这种技术的变动例如“表位印迹”也是目前可获得的，参见例如WO 93/06213；Waterhouse（1993）Nucl. Acids Res. 21：2265-2266。

嵌合和人源化抗体

嵌合抗体一般使用重组DNA法进行生产。使用常规程序（例如通过使用能够特异性结合编码抗体的H和L链的基因的寡核苷酸探针），将编码抗体的DNA（例如cDNA）分离且测序。杂交瘤细胞充当此类DNA的一般来源。一旦分离，就将DNA置于表达载体内，随后将所述表达载体转染到否则不产生免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞内，例如大肠杆菌（E. coli）、COS细胞、CHO细胞或骨髓瘤细胞，以获得抗体的合成。DNA可以通过用关于人L和H链的编码序列取代相应非人（例如鼠）H和L恒定区进行修饰，参见例如Morrison（1984）PNAS 81：6851。

通过仅将非人（例如鼠）抗体（“供体”抗体）的CDRs嫁接到人构架（“受体构架”）和恒定区上，可以实现免疫原性中的大量减少，以生成人源化抗体（参见Jones等人（1986）Nature 321：522-525；和Verhoeyen等人（1988）Science 239：1534-1536）。然而，CDR嫁接本身可以不导致抗原结合性质的完全保留，并且频繁发现供体抗体的某些构架残基（有时称为“回复突变”）必需在人源化分子中保存，如果待恢复显著的抗原结合亲和力（参见Queen等人（1989）PNAS 86：10,029-10,033：Co等人（1991）Nature 351：501-502）。在这种情况下，显示与非人供体抗体的最大序列同源性的人可变区选自数据库，以便提供人构架（FR）。人FRs的选择可以由人共有或个别人抗体进行制备。当需要时，来自供体抗体的关键残基可以置换到人受体构架内，以保存CDR构象。抗体的计算机建模可以用于帮助鉴定此类结构上重要的残基，参见WO 99/48523。

可替代地，人源化可以通过“镶嵌（veneering）”的过程来实现。独特人和鼠免疫球蛋白重和轻链可变区的统计分析揭示暴露残基的精确模式在人和鼠抗体中是不同的，并且大多数个别表面位置具有对于少数不同残基的强优先选择（参见Padlan等人（1991）Mol. Immunol. 28：489-498；和Pedersen等人（1994）J. Mol. Biol. 235：959-973）。因此，通过替换在其构架区中不同于通常在人抗体中发现的那些的暴露残基，可以减少非人Fv的免疫原性。因为蛋白质抗原性可以与表面易接近性关联，所以表面残基的替换可以足以致使小鼠可变区对于人免疫系统是“看不见的”（还参见Mark等人（1994）在Handbook of Experimental Pharmacology第113卷中：The pharmacology of Monoclonal Antibodies，Springer-Verlag，105-134）。这个人源化程序被称为“镶嵌”，因为仅抗体的表面是改变的，支持残基保持原状。进一步的可替代方法包括WO04/006955中阐述的那种和Humaneering^TM（Kalobios）的程序，其利用细菌表达系统且产生在序列中接近于人种系的抗体（Alfenito-M Advancing Protein Therapeutics January 2007，San Diego，California）。

双特异性抗原结合蛋白质

双特异性抗原结合蛋白质是对于至少两个不同表位具有结合特异性的抗原结合蛋白质。制备此类抗原结合蛋白质的方法是本领域已知的。常规地，双特异性抗原结合蛋白质的重组生产基于两个免疫球蛋白H链-L链对的共表达，其中两条H链具有不同结合特异性，参见Millstein等人（1983）Nature 305：537-539；WO 93/08829；和Traunecker等人（1991）EMBO 10：3655-3659。由于H和L链的随机分配，产生了十种不同抗体结构的潜在混合物，其中仅一种具有所需结合特异性。可替代方法涉及将具有所需结合特异性的可变结构域融合至重链恒定区，所述重链恒定区包含至少部分铰链区、CH2和CH3区。含有对于轻链结合必需的位点的CH1区域可以存在于融合物中的至少一个中。将编码这些融合物的DNA和需要时的L链插入分开的表达载体内，并且随后共转染到合适的宿主生物内。认为将关于两条或三条链的编码序列插入一个表达载体内是可能的。在一种方法中，双特异性抗体由在一个臂中具有第一种结合特异性的H链和在另一个臂中提供第二个结合特异性的H-L链对组成，参见WO 94/04690。还参见Suresh等人（1986）Methods in Enzymology 121：210。

抗原结合片段

缺乏恒定区的片段缺乏通过经典途径活化补体或介导抗体依赖细胞的细胞毒性的能力。常规地，此类片段通过完整抗体的蛋白酶解消化通过例如木瓜蛋白酶消化生产（参见例如WO 94/29348），但可以由重组转化的宿主细胞直接生产。关于ScFv的生产，参见Bird等人（1988）Science 242：423-426。此外，抗原结合片段可以使用如下所述的多种改造技术进行生产。

Fv片段看起来比Fab片段具有其两条链更低的相互作用能量。为了稳定V_H和V_L结构域的结合，它们已用肽（Bird等人（1988）Science 242：423-426；Huston等人（1988）PNAS 85（16）：5879-5883）、二硫桥（Glockshuber等人（1990）Biochemistry 29：1362-1367）和“钮进洞（knob in hole）”突变（Zhu等人（1997）Protein Sci.，6：781-788）连接。ScFv片段可以通过本领域技术人员众所周知的方法进行生产，参见Whitlow等人（1991）Methods Companion Methods Enzymol，2：97-105和Huston等人（1993）Int. Rev. Immunol 10：195-217。ScFv可以在细菌细胞例如大肠杆菌或真核细胞中进行生产。ScFv的一个缺点是产物的单价性及其短半衰期，所述单价性排除了由于多价结合增加的亲合力。克服这些问题的尝试包括通过化学偶联由含有另外的C末端半胱氨酸的ScFv产生的二价（ScFv'）₂（Adams等人（1993）Can. Res 53：4026-4034；和McCartney等人（1995）Protein Eng. 8：301-314），或通过含有未配对C末端半胱氨酸残基的ScFv的自发位点特异性二聚化（参见Kipriyanov等人（1995）Cell. Biophys 26：187-204）。可替代地，通过将肽接头缩短为3 – 12个残基，ScFv可以被迫形成多聚体，以形成“双抗体”，参见Holliger等人（1993）PNAS 90：6444-6448。再进一步减少接头可以导致ScFv三聚体（“三抗体”，参见Kortt等人（1997）Protein Eng 10：423-433）和四聚体（“四抗体”，参见Le Gall等人（1999）FEBS Lett，453：164-168）。二价ScFv分子的构建还可以通过与蛋白质二聚化基序的遗传融合来实现，以形成“微抗体”（参见Pack等人（1992）Biochemistry 31：1579-1584）和“微体（minibodies）”（参见Hu等人（1996）Cancer Res. 56：3055-3061）。ScFv-Sc-Fv串联（（ScFv）₂）还可以通过经由第三个肽接头连接两个ScFv单位进行生产，参见Kurucz等人（1995）J. Immol. 154：4576-4582。双特异性抗体可以通过两个单链融合产物的非共价结合进行生产，所述单链融合产物由通过短接头与另一个抗体的V_L结构域连接的来自一个抗体的V_H结构域组成，参见Kipriyanov等人（1998）Int. J. Can 77：763-772。通过引入如上描述的二硫桥或“钮进洞”突变或通过单链双抗体（ScDb）的形成，可以增强此类双特异性抗体的稳定性，在所述单链双抗体中，两个杂交ScFv片段通过肽接头连接，参见Kontermann等人（1999）J. Immunol. Methods 226:179-188。四价双特异性分子是可通过例如将ScFv片段融合至IgG分子的CH3结构域或通过铰链区融合至Fab片段获得的，参见Coloma等人（1997）Nature Biotechnol. 15：159-163。可替代地，四价双特异性分子已通过双特异性单链双抗体的融合进行制备（参见Alt等人（1999）FEBS Lett 454：90-94。更小的四价双特异性分子也可以通过下述形成：具有含有螺旋-环-螺旋基序的接头的ScFv-ScFv串联的二聚化（DiBi微抗体，参见Muller等人（1998）FEBS Lett 432：45-49），或包含以阻止分子内配对的方向的四个抗体可变结构域（V_H和V_L）的单链分子（串联双抗体，参见Kipriyanov等人（1999）J. Mol. Biol. 293：41-56）。双特异性F（ab'）₂片段可以通过Fab'片段的化学偶联或通过经由亮氨酸拉链的异二聚化进行制备（参见Shalaby等人（1992）J. Exp. Med. 175：217-225；和Kostelny等人（1992），J. Immunol. 148：1547-1553）。还可获得的是分离的V_H和V_L结构域（Domantis plc），参见US 6,248,516；US 6,291,158；和US 6,172,197。

异源缀合物抗体

异源缀合物抗体由使用任何方便的交联法形成的两个共价连接的抗体组成。参见例如，US 4,676,980。

其他修饰

本发明的抗原结合蛋白质可以包含其他修饰，以增强或改变其效应子功能。如本文使用的，术语“效应子功能”意指抗体依赖细胞介导的细胞毒性活性（ADCC）、补体依赖性细胞毒性活性（CDC）介导的应答、Fc介导的吞噬作用和经由FcRn受体的抗体再循环中的一种或多种。对于IgG抗体，效应子功能性包括ADCC和ADCP通过重链恒定区与免疫细胞表面上存在的Fcγ受体家族的相互作用介导。在人中，这些包括FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）。在与抗原结合的抗原结合蛋白质和Fc/ Fcγ复合物形成之间的相互作用诱导一系列效应，包括细胞毒性、免疫细胞活化、吞噬作用和炎性细胞因子的释放。

在抗原结合蛋白质的恒定区和多种Fc受体（FcR）之间的相互作用被认为介导抗原结合蛋白质的效应子功能。显著的生物学效应可以是效应子功能性的结果，特别是抗体依赖细胞的细胞毒性（ADCC）、补体固定（补体依赖性细胞毒性或CDC）、和抗原结合蛋白质的半衰期/清除。通常，介导效应子功能的能力要求抗原结合蛋白质与抗原的结合，并且并非所有抗原结合蛋白质都介导每一种效应子功能。

效应子功能可以以许多方法进行测量，包括例如经由FcγRIII与天然杀伤细胞的结合或经由FcγRI与单核细胞/巨噬细胞的结合，以测量ADCC效应子功能。例如，本发明的抗原结合蛋白质可以在天然杀伤细胞测定中就ADCC效应子功能进行评估。此类测定的例子可以在Shields等人，2001 The Journal of Biological Chemistry，第276卷，第6591-6604页；Chappel等人，1993 The Journal of Biological Chemistry，第268卷，第25124-25131页；Lazar等人，2006 PNAS，103；4005-4010中找到。

测定CDC功能的测定的例子包括在1995 J Imm Meth 184:29-38中所述的那种。

人恒定区的某些同种型特别是IgG4和IgG2同种型基本上缺乏下述功能：a）通过经典途径的补体活化；和b）抗体依赖细胞的细胞毒性。取决于所需效应子性质，可以进行对于抗原结合蛋白质的重链恒定区的多种修饰。含有特异性突变的IgG1恒定区已分开描述，以减少与Fc受体的结合，并且因此减少ADCC和CDC（Duncan等人Nature 1988，332；563-564；Lund等人J. Immunol. 1991，147；2657-2662；Chappel等人PNAS 1991，88；9036-9040；Burton和Woof，Adv. Immunol. 1992，51；1-84；Morgan等人，Immunology 1995，86；319-324；Hezareh等人，J. Virol. 2001，75（24）；12161-12168）。

取决于所需性质，可以进行对于抗体的Fc区的多种修饰。例如，在Fc区中致使否则裂解性抗体成为非裂解性的特异性突变在EP 0629 240和EP 0307 434中详述，或可以将补救受体结合表位掺入抗体内，以增加血清半衰期，参见US 5,739,277。人Fcγ受体包括FcγR（I）、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa和新生儿FcRn。Shields等人（2001）J. Biol. Chem 276：6591-6604证实常见组的IgG1残基涉及结合所有FcγRs，而FcγRII和FcγRIII利用这个常见组外的不同位点。一组IgG1残基当改变为丙氨酸时减少与所有FcγRs的结合：Pro-238、Asp-265、Asp-270、Asn-297和Pro-239。全部都在IgG CH2结构域中，且在连接CH1和CH2的铰链附近成簇。虽然FcγRI仅利用常见组的IgG1残基用于结合，但FcγRII和FcγRIII与除常见组外的不同残基相互作用。某些残基的改变仅减少与FcγRII（例如Arg-292）或FcγRIII（例如Glu-293）的结合。某些变体显示对于FcγRII或FcγRIII改善的结合，但不影响与其他受体的结合（例如Ser-267Ala改善与FcγRII的结合，但与FcγRIII的结合是不受影响的）。其他变体显示出与FcγRII或FcγRIII改善的结合，伴随与其他受体的结合中的减少（例如Ser-298Ala改善与FcγRIII的结合，且减少与FcγRII的结合）。对于FcγRIIIa，最佳结合的IgG1变体具有在Ser-298、Glu-333和Lys-334处组合的丙氨酸置换。新生儿FcRn受体被认为涉及抗体清除和跨越组织的转胞吞作用（参见Junghans（1997）Immunol. Res 16：29-57；和Ghetie等人（2000）Annu. Rev. Immunol. 18：739-766）。测定为与人FcRn直接相互作用的人IgG1残基包括Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434和His435。在这个部分中描述的位置中的任何上的置换可以使得抗体增加的血清半衰期和/或改变的效应子性质成为可能。

其他修饰包括抗体的糖基化变体。抗体在其恒定区中的保守位置上的糖基化已知对抗体功能具有显著作用，特别是效应子功能例如上文描述的那些，参见例如，Boyd等人（1996）Mol. Immunol. 32：1311-1318。考虑了抗体或其抗原结合片段的糖基化变体，其中添加、置换、缺失或修饰一个或多个碳水化合物部分。天冬酰胺-X-丝氨酸或天冬酰胺-X-苏氨酸基序的引入产生用于碳水化合物部分的酶促附着的潜在位点，并且因此可以用于处理抗体的糖基化。在Raju等人（2001）Biochemistry 40：8868-8876中，TNFR-IgG免疫粘附素的末端唾液酸化通过再半乳糖基化和/或再唾液酸化的过程得到增加，使用β-1，4-半乳糖基转移酶（galactosyltransferace）和/或α，2,3唾液酸转移酶。增加末端唾液酸化被认为增加免疫球蛋白的半衰期。和大多数糖蛋白一样，抗体一般作为糖形的混合物产生。当抗体在真核特别是哺乳动物细胞中产生时，这种混合物是特别明显的。已开发了多种方法以制造限定糖形，参见Zhang等人（2004）Science 303：371：Sears等人（2001）Science 291：2344；Wacker等人（2002）Science 298：1790；Davis等人（2002）Chem. Rev. 102：579；Hang等人（2001）Acc. Chem. Res 34：727。如本文描述的抗体（例如具有IgG同种型，例如IgG1）可以包含限定数目（例如7个或更少，例如5个或更少，例如2个或单个）的糖形。

抗体可以偶联至或不偶联至非蛋白质性质（proteinaeous）的聚合物，例如聚乙二醇（PEG）、聚丙二醇或聚氧化亚烷基。蛋白质与PEG的缀合是用于增加蛋白质半衰期以及减少蛋白质的抗原性和免疫原性的确定技术。已用完整抗体以及Fab'片段研究具有不同分子量和样式（线性或分支的）的聚乙二醇化的使用，参见Koumenis等人（2000）Int. J. Pharmaceut. 198：83-95。

生产方法

抗原结合蛋白质可以在转基因生物中进行生产，例如山羊（参见Pollock等人（1999）J. Immunol. Methods 231：147-157）、鸡（参见Morrow（2000）Genet. Eng. News 20：1-55、小鼠（参见Pollock等人）或植物（参见Doran（2000）Curr. Opinion Biotechnol. 11：199-204；Ma（1998）Nat. Med. 4：601-606；Baez等人（2000）BioPharm 13：50-54；Stoger等人（2000）Plant Mol. Biol. 42：583-590）。

抗原结合蛋白质还可以通过化学合成进行生产。然而，抗原结合蛋白质一般使用对于本领域技术人员众所周知的重组细胞培养技术进行生产。将编码抗原结合蛋白质的多核苷酸分离且插入可复制载体例如质粒内，用于进一步克隆（扩增）或表达。一种表达系统是谷氨酸盐合成酶系统（例如由Lonza Biologics销售的），特别是当宿主细胞是CHO或NS0时。编码抗原结合蛋白质的多核苷酸使用常规程序（例如寡核苷酸探针）容易地分离且测序。可以使用的载体包括质粒、病毒、噬菌体、转座子、微型染色体，其中一般使用质粒。一般地，此类载体进一步包括与抗原结合蛋白质多核苷酸可操作地连接的信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列，以便促进表达。可以将编码轻和重链的多核苷酸插入分开的载体内，并且同时或序贯地引入（例如通过转化、转染、电穿孔或转导）相同宿主细胞内，或需要时，在所述引入前可以将重链和轻链插入相同载体内。

可以使用密码子最佳化，目的是与用野生型序列转染时的水平相比较，用密码子最佳化的基因转染时，由宿主细胞产生的蛋白质总水平更大。几种方法已得到公开（Nakamura等人（1996）Nucleic Acids Research 24：214-215；W098/34640；W097/11086）。由于遗传密码的冗余，对于本文公开那些的可替代多核苷酸（特别是密码子最佳化用于在给定宿主细胞中表达的那些）也可以编码本文描述的抗原结合蛋白质。本发明的抗原结合蛋白质的密码子使用可以这样进行修饰，以容纳宿主细胞的密码子偏爱，以增大转录和/或产物得率（例如Hoekema等人Mol Cell Biol 1987 7（8）：2914-24）。密码子的选择可以基于与用于表达的宿主细胞的合适相容性。

信号序列

抗原结合蛋白质可以作为具有异源信号序列的融合蛋白产生，所述异源信号序列具有在成熟蛋白的N末端的特异性切割位点。信号序列应由宿主细胞识别且加工。对于原核宿主细胞，信号序列可以是例如碱性磷酸酶、青霉素酶或热稳定的肠毒素II前导区。对于酵母分泌，信号序列可以是例如酵母转化酶前导区、α因子前导区或酸性磷酸酶前导区，参见例如WO90/13646。在哺乳动物细胞系统中，病毒分泌前导区例如单纯疱疹gD信号和天然免疫球蛋白信号序列可以是合适的。一般地，信号序列在读码框中连接至编码抗原结合蛋白质的DNA。

复制起点

复制起点是本领域众所周知的，其中pBR322适合于大多数革兰氏阴性菌，2μ质粒适合于大多数酵母，并且多种病毒起点例如SV40、多瘤、腺病毒、VSV或BPV适合于大多数哺乳动物细胞。一般地，复制起点组分不是哺乳动物表达载体必需的，但可以使用SV40，因为它含有早期启动子。

选择标记

一般的选择基因编码蛋白质，其（a）赋予对于抗生素或其他毒素例如氨苄青霉素、新霉素、氨甲蝶呤或四环素的抗性，或（b）补充营养缺陷型不足或供应在复合培养基中无法获得的营养素，或（c）两者的组合。选择方案可以涉及停止宿主细胞的生长。由于例如由共同递送的选择标记赋予的药物抗性，已用编码抗原结合蛋白质的基因成功转化的细胞存活。一个例子是DHFR选择标记，其中在氨甲蝶呤的存在下培养转化体。细胞可以在增加量的氨甲蝶呤的存在下进行培养，以扩增目的外源基因的拷贝数。CHO细胞是用于DHFR选择的特别有用的细胞系。进一步例子是谷氨酸盐合成酶表达系统（Lonza Biologics）。用于在酵母中使用的选择基因的例子是trp1基因，参见Stinchcomb等人（1979）Nature 282：38。

启动子

用于表达抗原结合蛋白质的合适启动子与编码抗原结合蛋白质的DNA/多核苷酸可操作地连接。用于原核宿主的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸和杂合启动子例如Tac。适合于在酵母细胞中表达的启动子包括3-磷酸甘油酸酯激酶或其他糖酵解酶，例如烯醇酶、甘油醛3磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、6磷酸葡萄糖异构酶、3-磷酸甘油酸酯变位酶和葡糖激酶。诱导型酵母启动子包括醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、金属硫蛋白和负责氮代谢或麦芽糖/半乳糖利用的酶。

用于在哺乳动物细胞系统中表达的启动子包括病毒启动子，例如多瘤、鸡痘和腺病毒（例如腺病毒2）、牛乳头状瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒（特别是立即早期基因启动子）、逆转录病毒、乙型肝炎病毒、肌动蛋白、劳斯肉瘤病毒（RSV）启动子和早期或晚期猿猴病毒40。当然，启动子的选择基于与用于表达的宿主细胞的合适相容性。第一种质粒可以包含RSV和/或SV40和/或CMV启动子、编码轻链可变区（V_L）的DNA、κC区连同新霉素和氨苄青霉素抗性选择标记，并且第二种质粒包含RSV或SV40启动子、编码重链可变区（V_H）的DNA、编码γ1恒定区的DNA、DHFR和氨苄青霉素抗性标记。

增强子元件

当合适时，例如对于在高等真核生物中的表达，可以使用与载体中的启动子元件可操作地连接的增强子元件。哺乳动物增强子序列包括来自珠蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、胎蛋白和胰岛素的增强子元件。可替代地，可以使用来自真核细胞病毒的增强子元件，例如SV40增强子（在bp100-270处）、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤增强子、杆状病毒增强子或鼠IgG2a基因座（参见WO04/009823）。增强子可以位于载体上对于启动子上游的位点处。可替代地，增强子可以位于其他地方，例如在非翻译区内或多腺苷酸化信号下游。增强子的选择和定位可以基于与用于表达的宿主细胞的合适相容性。

多腺苷酸化 / 终止

在真核系统中，多腺苷酸化信号与编码抗原结合蛋白质的DNA/多核苷酸可操作地连接。此类信号一般置于开放读码框的3'。在哺乳动物系统中，非限制性例子包括衍生自生长激素、延伸因子-1α和病毒（例如SV40）基因或逆转录病毒长末端重复的信号。在酵母系统中，多腺苷酸化/终止信号的非限制性例子包括衍生自磷酸甘油酸酯激酶（PGK）和醇脱氢酶1（ADH）基因的那些。在原核系统中，多腺苷酸化信号一般是不需要的，并且相反通常采用更短和更确定的终止子序列。多腺苷酸化/终止序列的选择可以基于与用于表达的宿主细胞的合适相容性。

用于增强得率的其他方法 / 元件

除上文外，可以用于增强得率的其他特征包括染色质重塑元件、内含子和宿主细胞特异性密码子修饰。

宿主细胞

用于克隆或表达编码抗原结合蛋白质的载体的合适宿主细胞是原核、酵母或高等真核细胞。合适的原核细胞包括细菌例如肠杆菌科（enterobacteriaceae），例如埃希氏菌属（Escherichia）例如大肠杆菌（例如ATCC 31,446；31,537；27,325）、肠杆菌属（Enterobacter）、欧文氏菌属（Erwinia）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、变形杆菌属（Proteus）、沙门氏菌属（Salmonella）例如鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、沙雷氏菌属（Serratia）例如粘质沙雷氏菌（Serratia marcescans）和志贺氏菌属（Shigella），以及芽孢杆菌属（Bacilli）例如枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和地衣芽孢杆菌（B. licheniformis）（参见DD 266 710）、假单胞菌属（Pseudomonas）例如铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）和链霉菌属（Streptomyces）。在酵母宿主细胞中，还考虑了酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、克鲁维酵母属（Kluyveromyces）（例如ATCC 16,045；12,424；24178；56,500）、耶氏酵母属（yarrowia）（EP402，226）、巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）（EP 183 070，还参见Peng等人（2004）J. Biotechnol. 108：185-192）、假丝酵母属（Candida）、里氏木霉（Trichoderma reesia）（EP 244 234）、青霉素、弯颈霉属（Tolypocladium）和曲霉菌属（Aspergillus）宿主例如构槽曲霉（A. nidulans）和黑曲霉（A. niger）。

高等真核宿主细胞包括哺乳动物细胞，例如COS-1（ATCC编号CRL 1650）COS-7（ATCC CRL 1651），人胚肾系293，幼仓鼠肾细胞（BHK）（ATCC CRL.1632），BHK570（ATCC编号：CRL 10314），293（ATCC编号CRL 1573），中国仓鼠卵巢细胞CHO（例如CHO-K1，ATCC编号：CCL 61，DHFR-CHO细胞系例如DG44（参见Urlaub等人（1986）Somatic Cell Mol. Genet.12：555-556），特别是适合于悬浮培养的那些CHO细胞系，小鼠塞尔托利细胞，猴肾细胞，非洲绿猴肾细胞（ATCC CRL-1587），HELA细胞，犬肾细胞（ATCC CCL 34），人肺细胞（ATCC CCL 75），Hep G2和骨髓瘤或淋巴瘤细胞例如NS0（参见US 5,807,715），Sp2/0，Y0。

此类宿主细胞还可以进一步改造或适合于修饰抗原结合蛋白质的品质、功能和/或得率。非限制性例子包括特异性修饰（例如糖基化）酶和蛋白质折叠伴侣蛋白的表达。

细胞培养方法

用编码抗原结合蛋白质的载体转化的宿主细胞可以通过本领域技术人员已知的任何方法进行培养。宿主细胞可以在旋转瓶、转瓶或空心纤维系统中进行培养，但对于大规模培养，搅拌槽反应器特别用于悬浮培养。搅拌槽可以适合于使用例如喷洒器、挡板或低剪切叶轮的通气。对于气泡柱和气升式反应器，可以使用用空气或氧气泡的直接通气。当宿主细胞在无血清培养基中培养时，培养基补充有细胞保护剂例如普朗尼克F-68，以帮助预防由于通气过程的细胞损伤。取决于宿主细胞特征，微载体可以用作生长基底用于贴壁依赖性细胞系，或细胞可以适合于悬浮培养（这是一般的）。宿主细胞特别是无脊椎动物宿主细胞的培养可以利用多种操作模式，例如分批补料、重复分批加工（参见Drapeau等人（1994）Cytotechnology 15：103-109）、延长分批过程或灌注培养。尽管重组转化的哺乳动物宿主细胞可以在含血清培养基例如胎牛血清（FCS）中进行培养，但例如此类宿主细胞在例如公开于Keen等人（1995）Cytotechnology 17：153-163中的合成无血清培养基或商购可得的培养基例如ProCHO-CDM或UltraCHO^TM（Cambrex NJ，USA）中进行培养，在需要时，所述培养基补充有能源例如葡萄糖和合成生长因子例如重组胰岛素。宿主细胞的无血清培养可能要求那些细胞适合于在无血清条件下生长。一种适应方法是在含血清培养基中培养此类宿主细胞且以无血清培养基重复更换80%的培养基，从而使得宿主细胞学习适应无血清条件（参见例如Scharfenberg等人（1995）in Animal Cell Technology：Developments towards the 21st century（Beuvery等人编辑，619-623，Kluwer Academic出版商）。

分泌到培养基内的抗原结合蛋白质可以使用多种技术回收且纯化，以提供适合于预期用途的纯化程度。例如，用于治疗人患者的抗原结合蛋白质的使用一般要求至少95%纯度、更一般地98%或99%或更大纯度（与粗培养基相比较）。来自培养基的细胞碎片一般使用离心随后为上清液的澄清步骤去除，使用例如微量过滤、超滤和/或深度过滤。多种其他技术例如透析和凝胶电泳和层析技术例如羟磷灰石（HA）、亲和层析（任选涉及亲和标记系统例如多组氨酸）和/或疏水作用层析（HIC，参见US 5,429,746）是可获得的。在多种澄清步骤后的抗体可以使用蛋白A或G亲和层析进行捕获。进一步层析步骤可以跟随，例如离子交换和/或HA层析、阴离子或阳离子交换、尺寸排阻层析和硫酸铵沉淀。还可以采用多个病毒去除步骤（例如使用例如DV-20滤器的纳米过滤）。在这些多个步骤后，提供了包含至少75mg/ml或更多、或100mg/ml或更多抗原结合蛋白质的纯化（例如单克隆）制备物。此类制备物基本上不含聚集形式的抗原结合蛋白质。

细菌系统可以用于表达抗原结合片段。此类片段可以细胞内定位，定位在周质内或细胞外分泌。根据本领域技术人员已知的方法，可以将不溶性蛋白质提取且重折叠，以形成活性蛋白质，参见Sanchez等人（1999）J. Biotechnol. 72：13-20；和Cupit等人（1999）Lett Appl Microbiol 29：273-277。

药物组合物

术语疾病、病症和状况是可互换使用的。如本文描述的抗原结合蛋白质的纯化制备物可以掺入药物组合物内用于在本文描述的人疾病中使用。药物组合物可以用于疾病的治疗，其中IL-7促成该疾病或其中IL-7R介导的信号传导的抑制/中和将是有利的。药物组合物包含治疗有效量的本文描述的抗原结合蛋白质。

药物制备物可以包含与药学可接受的载体组合的抗原结合蛋白质。抗原结合蛋白质可以单独或作为药物组合物的部分施用。

一般地，此类组合物包含如已知且通过可接受的药学实践调用的药学可接受的载体，参见例如Remingtons Pharmaceutical Sciences，第16版（1980）Mack Publishing Co。此类载体的例子包括灭菌载体例如盐水、林格溶液或右旋糖溶液，任选用合适缓冲液缓冲至在5 – 8范围内的pH。

药物组合物可以通过注射或连续输注（例如静脉内、腹膜内、皮内、皮下、肌内或门静脉内（intraportal））进行施用。此类组合物适当地不含可见粒性物质。药物组合物可以包含1mg - 10g抗原结合蛋白质，例如5mg - 1g抗原结合蛋白质。可替代地，组合物可以包含5mg - 500mg，例如5mg - 50mg。

用于此类药物组合物制备的方法是本领域技术人员众所周知的。药物组合物可以包含在单位剂型中1mg - 10g的抗原结合蛋白质，任选连同使用说明书一起。药物组合物可以是冻干的（冷冻干燥的），用于在根据技术人员众所周知或显而易见的方法施用前重构。当抗体具有IgG1同种型时，铜螯合剂例如柠檬酸盐（例如柠檬酸钠）或EDTA或组氨酸，可以加入药物组合物中，以减少铜介导的这个同种型抗体的降解程度，参见EP0612251。药物组合物还可以包含增溶剂例如精氨酸碱、去垢剂/抗聚集剂例如聚山梨醇酯80、和惰性气体例如氮以替换小瓶顶空氧（headspace oxygen）。

用于施用抗原结合蛋白质的有效剂量和治疗方案一般凭经验进行测定，并且可以依赖于因素例如患者的年龄、重量和健康状态和待治疗的疾病或病症。此类因素在主治医师的知识范围内。在选择合适剂量中的指导可以在例如Smith等人（1977）Antibodies in human diagnosis and therapy，Raven Press，New York中找到。因此，本发明的抗原结合蛋白质可以以治疗有效量施用。

施用于受试者的抗原结合蛋白质的剂量一般在受试者的体重的1 μg/kg - 150 mg/kg之间、0.1 mg/kg - 100 mg/kg之间、0.5 mg/kg - 50 mg/kg之间、1 - 25 mg/kg之间或1 - 10 mg/kg之间。例如，剂量可以是10 mg/kg、30 mg/kg或60 mg/kg。抗原结合蛋白质可以肠胃外例如皮下、静脉内或肌内施用。

需要时，治疗组合物的有效日剂量可以作为任选以单位剂型以合适间隔分开施用的两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量进行施用。例如，剂量可以在每天施用时以多重亚剂量的形式皮下施用，每14或28天一次。

剂量的施用可以是通过静脉内输注，一般在15分钟 – 24小时的时间段，例如2 – 12小时，或2 – 6小时。这可以导致减少的毒性副作用。

剂量的施用可以根据需要重复一次或多次，例如每天三次、每天一次、每2天一次、每周一次、两周一次、每月一次、每3个月一次、每6个月一次、或每12个月一次。抗原结合蛋白质可以通过维持疗法进行施用，例如每周一次共6个月或更久的时间段。抗原结合蛋白质可以通过间歇疗法进行施用，例如共3 – 6个月的时间段，并且随后共3 – 6个月无剂量，随后为再次施用抗原结合蛋白质共3 – 6个月，等等周而复始。

剂量可以通过测量生物学样品中IL-17的量进行测定或调整。可以利用测定或调整剂量的其他方法，包括但不限于药理学的生物学标记（‘生物标记’）、肌肉量和/或功能的测量、安全、耐受性和治疗应答。抗原结合蛋白质可以以有效下调受试者中IL-7介导的信号传导活性的量和持续时间进行施用。

抗原结合蛋白质可以以这样的方式施用于受试者，以便将治疗靶向特定部位。例如，抗原结合蛋白质可以局部注射到肌肉例如骨骼肌内。

抗原结合蛋白质可以与一种或多种其他治疗活性剂组合使用，例如：免疫调节剂例如干扰素β（IFNβ-1a或IFNβ-1b）和乙酸格拉默，免疫抑制剂例如环磷酰胺、氨甲蝶呤、硫唑嘌呤、克拉屈滨、环孢菌素和米托蒽醌，其他免疫疗法例如静脉内免疫球蛋白（IVIg）、血浆置换和柳氮磺胺吡啶。另外的治疗学可以以如由医生开出的方式（剂量、时间选择、机制）进行施用。在一个实施方案中，另外的治疗剂可以与本发明的抗原结合蛋白质同时或序贯或分开施用。在一个实施方案中，另外的治疗剂和抗原结合蛋白质这样施用，从而使得它们对患者的药理学作用重叠；换言之，它们同时对患者发挥其生物学作用。

当抗原结合蛋白质与其他治疗活性剂组合使用时，个别组分可以一起或分开、序贯或同时、在分开或组合的药物制剂中、通过任何合适途径施用。如果分开或序贯施用，那么抗原结合蛋白质和一种或多种治疗活性剂可以以任何次序施用。

上文提及的组合可以呈现用于以单一药物制剂的形式使用，所述单一药物制剂包含如上定义的组合任选连同药学可接受的载体或赋形剂。

当在相同制剂中组合时，应当理解组分必须是稳定的且与彼此和制剂的其他组分相容的，并且可以配制用于施用。当分开配制时，它们可以在任何方便的制剂中提供，例如以如本领域已知用于抗原结合蛋白质的此类方式。

当与针对相同疾病活性的第二种治疗剂组合时，每种组分的剂量可以不同于当抗原结合蛋白质单独使用时的那种。合适剂量对于本领域技术人员将是容易理解的。

抗原结合蛋白质和一种或多种治疗活性剂可以协同作用。换言之，组合施用抗原结合蛋白质和一种或多种治疗活性剂可以对本文描述的疾病、病症或状况具有比各自单独的效应总和更大的作用。

药物组合物可以包含抗原结合蛋白质连同其他药物的试剂盒套件，任选连同使用说明书。为了方便起见，试剂盒可以包含以预定量的试剂连同使用说明书。

术语“个体”、“受试者”和“患者”在本文中是可互换使用的。受试者一般是人。受试者还可以是哺乳动物例如小鼠、大鼠或灵长类动物（例如绒猴或猴）。受试者可以是非人动物。抗原结合蛋白质还可以具有兽医学用途。待治疗的受试者可以是家畜，例如母牛或公牛、绵羊、猪、牛、山羊或马，或可以是驯养动物例如犬或猫。动物可以是任何年龄，或成熟成年动物。

治疗可以是治疗、预防或预防性的。受试者可以是有此需要的受试者。需要治疗的那些可以包括已患有特定医学疾病的个体加上未来可能发展该疾病的那些。

因此，本文描述的抗原结合蛋白质可以用于预防性或预防治疗。在这种情况下，将本文描述的抗原结合蛋白质施用于个体，以便预防或延迟疾病的一个或多个方面或症状的发作。受试者可以是无症状的。受试者可以具有对于疾病的遗传素质。将预防有效量的抗原结合蛋白质施用于此类个体。预防有效量是预防或延迟本文所述疾病的一个或多个方面或症状的发作的量。

本文描述的抗原结合蛋白质还可以在治疗方法中使用。术语“治疗”包含疾病的至少一个方面或症状的减轻、减少或预防。例如，本文描述的抗原结合蛋白质可以用于减轻或减少本文描述的疾病的一个或多个方面或症状。

本文描述的抗原结合蛋白质以有效量用于治疗、预防性或预防治疗。本文描述的抗原结合蛋白质的治疗有效量是有效减轻或减少疾病的一个或多个方面或症状的量。本文描述的抗原结合蛋白质还可以用于治疗、预防或治愈本文描述的疾病。

本文描述的抗原结合蛋白质可以对受试者的健康具有一般有利作用，例如它可以增加受试者的预期寿命。

本文描述的抗原结合蛋白质无需影响完全治愈，或根除疾病的每一种症状或表现，以构成可行的治疗方案。如有关领域中认识到的，作为治疗剂采用的药物可以减少给定疾病状态的严重性，但无需取消疾病的每一种表现，以视为有用的治疗剂。类似地，预防性施用的治疗无需在预防疾病的发作中是完全有效的，以便构成可行的预防试剂。仅仅减少疾病的影响（例如通过减少其症状数目或严重性，或通过增加另一种治疗的有效性，或通过产生另一种有利效应），或减少受试者中疾病将发生（例如通过延迟疾病的发作）或恶化的可能性是足够的。

本发明的抗原结合蛋白质可以用于治疗多发性硬化和其他自身免疫或炎性疾病，特别是其中牵涉致病性T_H17细胞的那些。此类疾病与高水平的IL-17表达相关。升高水平的IL-17已在MS患者的血清和CSF（Matusevicius，D.等人；Mult. Scler. 5，101-104；1999）和得自类风湿性关节炎患者的滑液中报道。IL-17也已牵涉牛皮癣（Homey等人；J. Immunol. 164（12）:6621-32；2000），而Hamzaoui等人报道在Behcet氏病中高水平的IL-17（Scand. J. Rhuematol.；31:4，205-210；2002）。升高的IL-17水平也已在全身性红斑狼疮（SLE）中观察到（Wong等人；Lupus 9（8）:589-93；2000）。

IL-7受体介导的信号传导的抑制还可以用于治疗其中已牵涉升高的IL-17的炎性（非自身免疫）疾病，例如哮喘。

相应地，本发明的炎性和/或自身免疫疾病包括炎性皮肤病包括牛皮癣和特应性皮炎；全身性硬皮病和硬化症；炎性肠病（IBD）；Crohn氏病；溃疡性结肠炎；缺血性再灌注病症包括手术组织再灌注损伤、心肌缺血状况例如心肌梗塞、心跳骤停、在心脏手术后的再灌注和在经皮腔内冠状动脉成形术后的压迫感（constriction）、中风和腹主动脉瘤；中风继发的脑水肿；颅外伤、低血容量休克；窒息；成人呼吸窘迫综合征；急性肺损伤；Behcet氏病；皮肌炎；多肌炎；多发性硬化（MS）；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；骨关节炎；狼疮性肾炎；自身免疫疾病例如类风湿性关节炎（RA）、Sjorgen氏综合征、脉管炎；涉及白细胞渗出的疾病；中枢神经系统（CNS）炎性病症、败血病或外伤继发的多器官损伤综合征；酒精性肝炎；细菌性肺炎；抗原-抗体复合物介导的疾病，包括肾小球肾炎；败血症；肉瘤样病；对于组织/器官移植的免疫病理学应答；肺的炎症，包括胸膜炎、肺泡炎、脉管炎、肺炎、慢性支气管炎、支气管扩张、弥漫性泛细支气管炎、过敏性肺炎、特发性肺纤维化（IPF）、和囊性纤维化；牛皮癣关节炎；视神经脊髓炎、Guillain-Barre综合征（GBS）、COPD、1型糖尿病等。

特别地，本发明的拮抗剂可以用于治疗以所有其形式的多发性硬化，包括视神经脊髓炎。在活动性炎性疾病的背景下施用时，即在临床上分离的综合征或复发型MS的治疗中使用时，用本发明的拮抗剂的治疗预期是最有效的。疾病的这些阶段可以临床上和/或通过成像标准例如钆增强或其他更灵敏的技术，和/或其他如活动性疾病的仍未确定的生物标记进行限定。特别地，当患者进入或处于复发中时，本发明的拮抗剂可以用于治疗RRMS（经由静脉内、皮下、经口或肌内递送）。在一个实施方案中，在复发发作时，或在距离复发发作1小时、2小时、3小时、6小时、12小时、24小时、2 天、3 天、4 天、5 天、6 天、7 天、8 天、9 天或10 天内，将本发明的拮抗剂施用于患者。

本发明的抗原结合蛋白质能够结合CD127。在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白质能够拮抗IL-7受体的生物学效应。在一个实施方案中，抗原结合蛋白质能够拮抗下述中的至少一种：IL-7受体介导的T_H17扩增、和IL-7受体介导的T_H17存活。

术语抑制、拮抗和中和在本文中是同义使用的。没有术语预期暗示总中和的要求；还考虑了部分中和 – 对应于生物学效应的减少而不是完全取消。

通过T_H17细胞计数的增加或维持，或通过与其他CD4+ T细胞数目相比较，T_H17细胞数目的比中的增加，或更具体而言通过T_H17:T_H1细胞的比、T_H17:T_reg细胞的比、（T_H17加上T_H1）:T_reg细胞的比和/或T_H17:（T_H1加上T_reg）细胞的比中的增加，可以在细胞水平上观察到IL-7受体介导的T_H17扩增和/或存活。

在分子水平上，通过经由CD4+ T细胞群体（或经由T_H17细胞群体）的IL-17生产中的增加，可以观察到T_H17扩增和/或存活。在一个实施方案中，因此，本发明的抗原结合蛋白质减少通过CD4+ T细胞群体的IL-17生产。IL-7受体介导的T_H17扩增和存活还可以通过经由CD4+ T细胞群体（或经由T_H17细胞群体）的IFN-γ生产中的增加观察到。因此，在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白质拮抗（减少）通过CD4+ T细胞群体的IFN-γ生产。在分子水平上，本发明的抗原结合蛋白质可以抑制IL-7受体介导的STAT-5磷酸化。

在分子水平上，通过测定例如IL-7诱导的P-STAT5或Bcl-2，可以观察且测量本发明的抗原结合蛋白质的阻断效应。在分子水平上，通过测定例如Th17的IL-17分泌或IFNγ，可以观察且测量阻断效应。示例性测定在PCT申请号PCT/US2009/053136（WO2010/017468）中描述。

在示例性pSTAT-5测定中，在测试试剂的存在和不存在下用IL-7刺激PBMCs。细胞随后就pSTAT-5水平进行定量评估，例如通过就pSTAT-5染色（例如用标记的抗pSTAT-5抗体，例如Alexa Fluor® 647小鼠抗Stat5（pY694，BD [#612599]）），随后为荧光激活细胞分选。磷酸化的STAT-5水平还可以通过ELISA进行测定。减少磷酸化的STAT-5水平的那些试剂可以是用于自身免疫疾病的潜在治疗候选物。

当与在拮抗剂的不存在下的STAT-5水平相比较时，或当与阴性对照或未处理的细胞相比较时，拮抗剂可以能够将磷酸化的STAT-5水平减少至少20%、50%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。拮抗剂可以具有50μg/ml、25μg/ml或更少、10μg/ml或更少、5μg/ml或更少、或2μg/ml或更少的IC₅₀。在一个实施方案中，拮抗剂具有小于或等于1μg/ml、小于或等于0.75μg/ml、小于或等于0.5μg/ml、小于或等于0.25μg/ml、或小于或等于0.1μg/ml的IC₅₀。

本发明的拮抗剂在抑制T_H17细胞的扩增中是特别有效的。T_H17细胞的扩增可以在T_H17扩增测定中进行测定，其包含刺激幼稚T细胞群体以在测试试剂的存在和不存在下扩增，随后刺激细胞以产生IL-17且评估在测试试剂的存在和不存在下由细胞产生的IL-17水平。

在示例性测定中，人CD4+ T细胞通过用在IL-1、IL-6和IL-23的存在下T细胞受体活化刺激而分化成T_H17。在分化5天后，挑选出CCR6+细胞以产生富集的T_H17群体。这个群体随后用人IL-7刺激，并且测定在上清液中IL-17和IFN-γ中的增加。可以测定测试试剂例如本发明的抗原结合片段阻断IL-7和CD127之间的相互作用的能力，因为在温育期过程中这种相互作用的拮抗剂的存在应阻止T_H17细胞的扩增，导致IL-17和IFN-γ生产的减少。

与阴性对照比较，本发明的抗原结合蛋白质在此类测定中可以能够20%或更多抑制IL-17分泌。更一般地，与阴性对照比较，抗原结合蛋白质能够50%、75%、85%或90%或更多抑制IL-17分泌。在某些实施方案中，抗原结合片段可以显示出在测定中小于或等于50μg/ml的IC₅₀。在其他实施方案中，IC₅₀可以小于或等于20μg/ml、10μg/ml或5μg/ml。

因此，在另一个方面，本发明提供了用于治疗自身免疫疾病或炎性病症的方法，其包括给患者施用以足以减少患者中的T_H17细胞计数的量的本发明抗原结合蛋白质。

在另一个方面，本发明提供了用于治疗人受试者中的自身免疫疾病的方法，其包括给受试者施用以足以减少IL-7受体介导的STAT-5磷酸化的量的抗原结合蛋白质。

在另一个方面，本发明提供了用于治疗患者中的多发性硬化的方法，其包括给患者施用本发明的抗原结合蛋白质，其中所述患者患有复发缓解型多发性硬化。

在另一个方面，本发明提供了治疗人受试者中的自身免疫或炎性疾病的方法，其包括给患者给受试者施用以有效减少T_H17细胞相对于T_H1细胞的比的量的本发明抗原结合蛋白质。

在另一个方面，本发明提供了治疗人受试者中的自身免疫或炎性疾病的方法，其包括给患者给受试者施用以有效减少T_H细胞相对于（Foxp3+）T_reg细胞的比的量的本发明抗原结合蛋白质。

使用的诊断方法

本文描述的抗原结合蛋白质可以用于在体外或体内检测生物学样品中的CD127用于诊断目的。例如，抗CD127抗原结合蛋白质可以用于检测培养细胞、组织或血清中的CD127。组织可以已首先从人或动物体内取出（例如活组织检查）。可以采用常规免疫测定，包括ELISA、蛋白质印迹、免疫组织化学或免疫沉淀。

抗原结合蛋白质可以在诊断试剂盒中提供，所述诊断试剂盒包含一种或多种抗原结合蛋白质、检测标记和试剂盒的使用说明书。为了方便起见，试剂盒可以包含以预定量的试剂连同使用说明书。

基因疗法

编码本文描述的抗原结合蛋白质的核酸分子可以施用于有此需要的受试者。核酸分子可以表达在合适支架或结构域、可变结构域或全长抗体中的CDRs。核酸分子可以包含在允许在人或动物细胞中表达的载体中。核酸分子或载体可以配制用于与如上讨论的药学可接受的赋形剂和/或一种或多种治疗活性剂一起施用。

实施例

1.0 1A11 的人源化

1.1 杂交瘤可变区的 1A11 克隆

由1A11杂交瘤的细胞团块制备总RNA，并且执行RT-PCR，以生成可变区的cDNA。将用于每个杂交瘤的重和轻链的扩增可变区克隆到pCR2.1克隆载体内。获得关于每个杂交瘤的重和轻可变区的序列。序列分析预测如下的肽序列（其中互补决定区是突出显示的）：

通过将可变重和轻区分别融合至人IgG1Fc和κ恒定区制备重组嵌合形式的抗体。

1.2 1A11 重链人源化策略

在人V基因种系数据库的BLAST分析后，选择与小鼠1A11可变重链序列具有64%同一性（包括CDRs）的人种系IGHV1_2作为用于人源化的优选受体构架。基于序列相似性，将种系V区在计算机芯片上与合适的FR4组合，在这种情况下JH6小基因（Kabat Vol.II）。JH6小基因残基在WGQG基序前的前六个残基落入CDR3区内，这替换为来自供体抗体的引入CDR。在序列比较和对抗体功能的可能影响的基础上，生成八个人源化重链变体。构建体H0是来自1A11（使用Kabat定义）的小鼠CDRs直接嫁接到上文选择的人受体构架内。构建体H1直到H3基于H0；各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置71、66和69。H4直到H7构建体掺入上述回复突变中的两个、三个、四个或五个。

1.3 用于构架 IGHV1-2 的 1A11 重链人源化原理

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE003

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE005

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1.4 1A11 轻链人源化策略

在人V基因种系数据库的BLAST分析后，选择与小鼠1A11可变轻链序列具有53%同一性（包括CDRs）的人种系IGKV3_11作为用于人源化的优选受体构架。基于序列相似性，将种系V区在计算机芯片上与合适的FR4组合，在这种情况下J区κ4小基因（Kabat Vol.II）。JK-4小基因残基的前三个残基落入CDR3区内，这替换为来自供体抗体的引入CDR。在序列比较和对抗体功能的可能影响的基础上，生成十个人源化轻链变体。构建体L0是来自1A11（使用Kabat定义）的小鼠CDRs直接嫁接到上文选择的人受体构架内。构建体L1、L2、L4基于L0，各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置47、71和46。构建体L3掺入上述回复突变47和71中的两个。构建体L5掺入上述回复突变47和71和46中的三个。构建体L6直到L9基于L5，各自掺入一个、两个、三个和四个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置58、45、70和60。

1.5 用于构架 IGKV3-11 的 1A11 轻链人源化原理

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE007

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE009

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2.0 6A3 的人源化

2.1 6A3 重链人源化策略

在人V基因种系数据库的BLAST分析后，选择与小鼠6A3可变重链序列具有71%同一性（包括CDRs）的人种系IGHV4_61和具有51%同一性的人种系IGHV3_33（其先前已显示对于IGKV1_39良好表达）作为用于人源化的优选受体构架。基于序列相似性，将种系V区在计算机芯片上与合适的FR4组合，在这种情况下JH6小基因（Kabat Vol.II）。JH6小基因残基在WGQG基序前的前两个残基落入CDR3区内，这替换为来自供体抗体的引入CDR。在序列比较和对抗体功能的可能影响的基础上，生成具有构架IGHV4_61的十个人源化重链变体和具有构架IGHV3_33的十二个人源化重链变体。构建体H0是来自6A3（使用Kabat定义）的小鼠CDRs直接嫁接到上文选择的人受体构架内。具有构架IGHV4_61的H1直到H5构建体基于H0，各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置71、27、30、67和48。H6直到H9构建体掺入上述回复突变中的两个、三个、四个或五个。具有构架IGHV3-33的H1直到H11构建体基于H0，各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置27、30、28、29、67、73、78、49、68、24和48。

2.2 用于构架 IGHV4_61 的 6A3 重链人源化原理

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE011

构架4

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE013

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2.3 用于构架 IGHV3_33 的 6A3 重链人源化原理

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE015

构架4

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE019

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2.4 6A3 轻链人源化策略

在人V基因种系数据库的BLAST分析后，选择与小鼠6A3可变轻链序列具有72%同一性（包括CDRs）的人种系IGKV1_39作为用于人源化的优选受体构架。基于序列相似性，将种系V区在计算机芯片上与合适的FR4组合，在这种情况下J区κ2小基因（Kabat Vol.II）。JK-2小基因残基的前两个残基落入CDR3区内，且等同于小鼠6A3轻链CDR3中的最后两个残基。在序列比较和对抗体功能的可能影响的基础上，生成五个人源化轻链变体。构建体L0是来自6A3（使用Kabat定义）的小鼠CDRs直接嫁接到上文选择的人受体构架内。构建体L1、L2基于L0，各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置45、70。构建体L3掺入上述回复突变中的两个。

用于构架IGKV1_39的6A3轻链人源化原理

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE021

构架4

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在序列比较和对抗体功能的可能影响的基础上，生成五个人源化轻链变体。构建体L0是来自6A3（使用Kabat定义）的小鼠CDRs直接嫁接到上文选择的人受体构架内。构建体L1、L2基于L0，各自掺入一个另外的构架突变，其在每个构建体中是不同的；分别为位置45、70。构建体L3掺入上述回复突变中的两个。构建体L27掺入更多突变，包括T4L、A31Y、D70M、V85T、T94Y、Q100G、L104V（SEQ ID NO:138）。

表3：6A3可变轻人源化变体

人源化的VL	模板	回复突变（Kabat#）
			L0	6A3VLCDRs直接嫁接到IGKV1-39 + JK-2小基因上	无
L1	L0	K45Q
			L2	L0	D70K
L3	L1	K45Q、D70K
			L27	L0	T4L、A31Y、D70M、V85T、T94Y、Q100G、L104V

2.5 Fc 无能的可变重链的构建

对1A11 H3构建体进行两个氨基酸置换，L237A和G239A。这些修饰致使分子更不能够召募免疫效应细胞或补体。所得到的VH构建体鉴定为1A11 H3-Fc，且具有如SEQ ID NO:118中所示的序列（由具有SEQ ID NO:119的序列的多核苷酸编码）。包含1A11 H3-Fc和1A11.L4轻链（1A11 H3L4Fc）的抗体进一步如下文实施例4中所述进行分析。

2.6 1A11 H3L4 的亲和力成熟

2.6.1 重组抗 IL7R 1A11 H3L4 CDRH3 变体的构建

产生人源化抗IL-7R单克隆抗体1A11 H3L4的许多变体。这些都仅相差在抗体重链的CDRH3区中的一个氨基酸置换，所述抗体具有SEQ ID NO:114（H3）中所示的重链氨基酸序列，和SEQ ID NO:115（L4）中所示的轻链氨基酸序列。

使用定点诱变生成在pLEFD哺乳动物表达载体内的1A11 H3L4的人源化CDRH3变体。

2.6.2 在 HEK 293 6E 细胞中的小规模抗体表达

使用293fectin（Invitrogen，12347019）在96孔规模上（500µl表达体积），将分别编码1A11 H3L4和CDRH3变体的轻和重链的pLEFN和pLEFD质粒瞬时共转染到HEK 293 6E细胞内。通过以1500rpm离心10分钟收获上清液。随后使用0.45μm过滤板过滤含有抗体的上清液。由组织培养上清液直接评估抗体。

2.6.3 抗 IL7R 1A11 H3L4 CDRH3 变体的 Proteon 分析

在ProteOn XPR36（Biorad）上进行测定CDRH3抗体变体（其衍生自在HEK 293 6E细胞中的小规模抗体表达且由组织培养上清液直接评估，如实施例2.6.2中所述）的结合亲和力的起始筛选。该方法如下；通过伯胺偶联将蛋白A固定在GLC芯片上，随后将CDRH3突变型抗体捕获在这个表面上，并且将IL7R以256、64、16、4、1nM经过，伴随用于加倍参考结合曲线的0nM注射（即单独的缓冲液）。50mM NaOH用于再生捕获表面，去除结合的CDRH3突变型抗体，为另一个捕获和分析物注射循环作准备。使用机器固有的分析软件将数据与1:1模型拟合。由组织培养上清液直接进行关于突变型抗体的结合分析。

该筛选鉴定了看起来具有比亲本分子（1A11 H3L4）更佳的动力学概况的几种抗体。得自这种分析的数据显示于4.2.3中，显示在N98和F100b残基上的几个CDRH3突变看起来改善与IL7R的结合亲和力。根据这个数据集，选择六种分子用于进一步分析（实施例2.6.4）。

2.6.4 在 HEK 293 6E 细胞中的更大规模抗体表达

数据突出显示在N98和F100b残基上的几个CDRH3突变看起来改善与IL7R的结合亲和力（数据显示于4.2.3中）。因此，对于这六个CDRH3变体产生纯化抗体。将编码1A11 H3L4 CDRH3变体的轻和重链的构建体从pLEFD和pLEFN质粒亚克隆到pTT载体内，用于最佳的大规模HEK 293 6E表达。使用293fectin（Invitrogen，12347019）将质粒瞬时共转染到50-100ml HEK 293 6E内（质粒细节概括于表7中）。在24小时后将胰蛋白胨补料加入细胞培养中，并且在进一步72小时后收获细胞。随后使用固定的蛋白A柱亲和力纯化抗体，且通过阅读在280nm处的吸光度进行定量。

3.0 人源化载体的构建

使用LETO 1.0软件（Entelechon GmbH）序列最佳化人源化可变区的DNA序列，并且通过重叠寡核苷酸的叠加和PCR扩增从新合成。引物包括用于克隆到哺乳动物表达载体内的限制位点和用于分泌的人免疫球蛋白信号序列。使用Age1/Kas1将人源化可变重区克隆到含有人γ1恒定区的哺乳动物表达载体内。平行地，使用HindIII和BsiWI将人源化可变轻区克隆到含有人κ恒定区的哺乳动物表达载体内。

4.0 人源化抗体的表征

4.1 1A11 和 6A3 构建体的结合动力学的测定： BIAcore ™ 3000

使用BIAcore 3000装置（GE Healthcare）评估抗CD127抗体对于人CD127 ECD的结合动力学。使用供应的偶联缓冲液，将人源化6A3或1A11构建体捕获到CM5生物传感器芯片上，其已固定BIAcore（GE Healthcare目录# BR-1008-39）抗人IgG（Fc特异性）单克隆抗体。将一系列人CD127 ECD浓度（512、256、128、64、32、16nM）以30ul/分钟的流速注射240秒。

1）捕获目的MAb

2）分析物与捕获的MAb的结合

3）分析物（缓冲液）的解离

4）用BIAcore最佳化的缓冲液再生。去除所有并非共价偶联的抗H Ab。BIAcore动力学运行循环：缓冲液512、256、128、64、32、16nM。

IL7R ECD；用于加倍参考的缓冲液循环。

将抗体表面用3 M MgCl₂再生。使用BIAevaluation软件通过数据与1:1兰米尔（Langmuir）模型的总体拟合测定动力学。结果显示于实施例4.2.1（1A11）和4.2.2（6A3）中。

4.1.1 所选 1A11 H3L4 CDRH3 变体的结合动力学的测定

BIAcore™分析用于测定纯化的CDRH3突变型抗体（其衍生自在HEK 293 6E细胞中的更大规模抗体表达，如实施例2.6.4中所述）的结合亲和力。

4.1.1.1 方法 1 ： BIAcore ™ T100

通过伯胺偶联至~1300共振单位（RU’s）的水平，将抗人IgG（GE Healthcare/BIAcore™ BR-1008-39）固定在CM3芯片上，随后将CDRH3突变型抗体捕获在其上，所有抗体捕获至相似水平（44-56 RU’s），并且将IL-7R以256、64、16、4、1nM经过，伴随用于加倍参考结合曲线的0nM注射（即单独的缓冲液），使用3M MgCl₂实现这个表面的再生。将结合数据与BIAcore™ T100分析软件固有的1:1模型拟合。使用HBS-EP作为运行缓冲液进行运行，并且在BIAcore™ T100上在25℃进行。结果显示于4.2.4中。

4.1.1.2 ：方法 2 ： BIAcore ™ 3000

通过伯胺偶联至~5400共振单位（RU’s）的水平，将抗人IgG（GE Healthcare/BIAcore™ BR-1008-39）固定在CM5芯片上，随后将CDRH3突变型抗体捕获在这个表面上，所有抗体捕获至相似水平（175-205 RU’s），并且将IL7R以64、16、4、1nM经过，伴随用于加倍参考结合曲线的0nM注射（即单独的缓冲液），使用3M MgCl₂实现这个表面的再生。将结合数据与BIAcore™ 3000分析软件固有的1:1模型拟合。使用HBS-EP作为运行缓冲液进行运行，并且在BIAcore™ 3000上在25℃进行。结果显示于4.2.5中。

4.1.2 1A11 H3L4 在猕猴和绒猴中的物种交叉反应性的测定

使用Biacore 3000评估1A11H3L4对于猕猴和绒猴CD127 ECD的结合动力学。将1A11 H3L4捕获到CM5生物传感器芯片上，其已固定BIAcore（GE Healthcare目录# BR-1008-39）抗人IgG（Fc特异性）单克隆抗体。将抗体表面用3 M MgCl₂再生。使用BIAevaluation软件通过数据与1:1兰米尔模型的总体拟合测定动力学。结果显示于4.3中。

4.1.3 IL7 受体抑制测定

BIAcore™分析也用于证实纯化的CDRH3突变型抗体（其衍生自在HEK 293 6E细胞中的更大规模抗体表达，如实施例2.6.4中所述）能够抑制IL7和IL7R之间的相互作用。

通过伯胺偶联将IL7（R&D Systems）固定在CM5芯片上；将表面用10mM 甘氨酸、pH3.0条件化，以提供用于中和测定的稳定表面。将以64nM的IL7R与在运行1中以256nM、128nM、64nM、16nM、8nM、4nM、2nM和1nM以及在运行2中以256nM、128nM、64nM、16nM、8nM、4nM、2nM、1nM、0.5nM和0.25nM浓度的测试抗体一起温育。随后在IL7/CM5芯片上运行前，将样品在室温温育3小时，10mM 甘氨酸、pH3.0用于生成表面用于下一次相互作用。使用Robosage计算IC₅₀值，由此将结合信号转化成百分比值，基于使用以64nM的IL7R与0nM抗体达到的大约最大限度信号。结果显示于4.7中。

4.2 结合动力学结果

4.2.1 1A11

表 4 ：关于 1A11 构建体的结合动力学

样品	ka（1/Ms）	kd（1/s）	KD（M）
				1A11嵌合体	9.26e4	2.98e-4	3.22e-9
1A11 H0L0	未见结合	-	-
				1A11 H1L1	未见结合	-	-
1A11 H6L6	未见结合	-	-
				1A11 H7L5	未见表达	-	-
1A11 H3L4	1.77e5	4.64e-4	2.62e-9
				1A11 H3L5	2.94e4	6.07e-3	2.07e-7
1A11 H3L9	4.32e4	1.84e-3	4.25e-8
				1A11 H3L6	1.82e4	2.82e-3	1.55e-7
1A11 H4L4	未见结合	-	-
				1A11 H6L4	未见结合	-	-
1A11 H7L4	未见表达	-	-
				生物素标记的1A11 H3L4	1.69e5	4.52e-4	2.67e-9
1A11 H3L4Fc	1.8e5	6.62e-4	3.68e-9

4.2.2 6A3

表 5 ：关于 6A3 构建体的结合动力学

样品	ka（1/Ms）	kd（1/s）	KD（M）
				H4-61_6L27	1.6e4	2.99e-4	19
H4-61_7L27	3.77e4	1.04e-3	28
				H4-61_8L27	2.43e4	3.7e-4	15
H4-61_9L27	6.99e4	1.22e-3	18

4.2.3 通过 BIAcore ™分析选择 1A11 H3L4 的多个抗 IL7R 1A11 H3L4 CDRH3 变体

表 6 –抗 IL-7R 1A11 H3L4 CDRH3 变体的 Proteon 分析（ KD ，以 nM 表示）。

表 7 ：构建且表达的所选 CDRH3 变体 mAbs

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE025

4.2.4 所选 1A11 H3L4 CDRH3 变体的 BIAcore ™ T100 分析

表8显示得自4.1.1.1研究的数据，其显示所有CDRH3突变看起来具有比亲本分子更佳的亲和力，其中最佳构建体看起来是BPC4398（抗IL7R 1A11 H3L4 N98D）。

表 8 ：

Figure 2011800158560100002DEST_PATH_IMAGE027

4.2.5 所选 1A11 H3L4 CDHR3 变体的 BIAcore ™ 3000 分析

表9显示得自4.1.1.2研究的数据，并且显示所有CDRH3突变看起来具有比亲本分子更佳的亲和力，其中最佳构建体看起来是BPC4398（1A11 H3L4 N98D）和BPC4399（1A11 H3L4 N98E）。

表 9 ：

在两种方法之间计算的总亲和力中可见差异。这很可能是由于IL7R是同源二聚体的事实，并且因此取决于在两种测定中使用的通过不同捕获表面固定的IL7R的不同密度，抗体与抗原的亲合力和交联量可以增加或减少。尽管在两个运行之间可见不同亲和力，但在两个实验中的等级显示BPC4398（1A11 H3L4 N98D）具有超过亲本分子1A11 H3L4的改善亲和力。

4.3 物种交叉反应性

通过Biacore系统观察到1A11 H3L4（野生型）与以可比较水平测试的绒猴和猕猴IL-7R交叉反应（表10）。

表10：1A11 H3L4与人IL7R、小鼠IL7R和猕猴IL7R比较

样品	ka（1/Ms）	kd（1/s）	KD（M）
				1A11 H3L4与人IL7R	1.77e5	4.64e-4	2.62e-9
1A11 H3L4与猕猴IL7R	2.58e4	2.34e-4	9.06e-9
				1A11 H3L4与绒猴IL7R	4.93e4	2.99e-4	6.05e-9

4.4 通过 X 射线晶体学的表位结合

使用1A11 H3L4 Fab，与在计算机芯片上的建模偶联的X射线晶体学用于预测关于mAbs的结合界面，以帮助提供关于观察到的功能中和的机制了解，且作出关于抗体成熟的理性选择。

建立1A11H3L4 Fab/人IL7受体复合物的高分辨率（2.08A）结构。将人IL7受体细胞外结构域和1A11H3L4在CHO lec细胞中表达且通过亲和层析和尺寸排阻层析纯化。通过木瓜蛋白酶切割生成1A11H3L4的Fab片段。通过混合Fab1A11H3L4与IL7受体ECD的1:1.2摩尔比生成Fab1A11H3L4/IL7R ECD复合物。使用悬滴蒸汽扩散法将蛋白质浓缩且结晶。在Argonne National Laboratory中的Advanced Photon Source处收集X射线衍射数据。使用HKL2000软件将衍射数据编入索引且定标。在程序X-PLOR中通过分子置换测定结构。对起始分子置换解决方案实施在CNX中的多轮分子动力学精化和用程序WinCoot重建。

基于高分辨率2.08A晶体结构，预测1A11H3L4在IL-7R细胞外环的4上结合IL7受体，从而阻断IL7-配体结合：

环2：55Gly 56Ala 57Leu 58Val 59Glu 60Val 61Lys

环3：80Leu 81Leu 82Ile 83Gly 84Lys 100Lys

环4：138Lys 139Tyr 142Val

环5：192Tyr 193Phe

这些发现与在1A11和6A3之间观察到的观察到的与hIL7的竞争结合一致。

4.5 效应子功能的分析

4.5.1 1A11 H3L4 缺乏补体介导的细胞毒性

总共六次分开的实验显示1A11 H3L4（野生型）具有无法测量的补体介导的细胞毒性。这些实验用作为靶使用的hIL-7r BacMam转导的HEK 293 MSR II细胞系执行。这些细胞在37℃、5% CO₂在T175培养瓶中转导（感染复数75）~21小时。随后使用TrypLE从烧瓶中取出贴壁细胞，并且在以1x10⁵细胞/50ul/孔铺平板到96孔板内之前洗涤几次。将25μl抗体在37℃、5% CO₂加入30分钟。在这个温育后，加入20μl兔补体，并且随后将板送回温箱2小时。通过使用多通道吸管将100μl CellTiter-Glo加入每个孔中，伴随轻轻混合，进行细胞生存的评估。随后将板在Victor V板阅读器上阅读发光信号（活细胞具有增加的信号）。这些实验之一的例子显示于图1中。

在上文实验中使用的阳性对照抗体（Grits 32092）特异性针对关于HER3的细胞表面受体，所述HER3在表达hIL-7Rα的相同靶细胞上共表达。这种对照抗体以与1A11 H3L4（10 μg/ml）相同的浓度使用，并且与相同两个来源的兔补体（Calbiochem和Invitrogen）组合。这些结果显示在测定中使用的靶细胞和补体能够诱导补体依赖性细胞毒性。

4.5.2 1A11 H3L4Fc 具有减少的抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ ADCC ）

来自7个人供体的纯化外周血单核细胞在ADCC测定中作为效应细胞进行概况分析。这些实验用作为靶细胞使用的hIL-7r BacMam转导的HEK 293 MSR II细胞系执行。这些细胞在37℃、5% CO₂在T175培养瓶中转导（感染复数75）~21小时。随后使用Tryple从烧瓶中取出这些贴壁细胞，并且在“装载”铕之前洗涤几次。将这些装载的细胞合并到含有抗IL-7R抗体的96孔板（2x10⁴细胞/25ul/孔）内在37℃、5% CO₂共30分钟。在温育后，将效应细胞以200、100、50和25:1（100μl/孔）的比加入，并且送回37℃、5% CO₂共2小时。在这个温育后，取出25μl上清液且加入含有100μl/孔Delfia增强溶液的96孔板中。随后将板在室温平板振荡器上温育5分钟，且随后在Victor V平板阅读器中读数。通过裂解的细胞释放到周围上清液内的任何铕（细胞的细胞毒性）作为荧光单位进行测量。

这些测定比较“野生型”1A11 H3L4和Fc无能的分子1A11 H3L4Fc经由其Fc受体结合人效应细胞，并且杀死IL-7受体阳性靶细胞的能力。来自这些实验的总体结果显示Fc无能的1A11 H3L4Fc在起始抗体依赖细胞介导的细胞毒性中比“野生型”1A11 H3L4至少2倍更不有效。这些结果还显示在七个供体中的六个中，无能的抗体能够诱导某一水平的ADCC活性（一个供体显示对于野生型和无能的1A11 H3L4的很少活性）。结果显示于图2中。

4.5.3 Fc 受体结合

1A11 H3L4和1A11 H3L4Fc就其结合多重Fc效应子受体（FcγI、IIa和IIIa）和多个物种的FcRn的能力进行评估，并且与对照野生型和Fc无能的抗体相比较。在ProteOn XPR36表面等离振子共振仪（BioRad）上进行工作。待测试的抗体通过伯胺偶联与GLM生物传感器芯片偶联。多种Fcγ受体以2048nM、512nM、128nM、32nM和8nM用作分析物，使用HBS-EP（pH7.4）作为运行缓冲液。对于FcRn受体结合，人、犬、小鼠和大鼠FcRn以2048nM、512nM、128nM、32nM和8nM用作分析物，其中运行在pH6.0和pH7.4进行。所有结合传感图用0nM注射（即单独的缓冲液）加倍参考。将数据与对于ProteOn分析软件固有的均衡模型拟合。

表11显示了对于与在这个研究中评估的多种Fc受体的抗体结合生成的亲和力，并且显示了1A11 H3L4和1A11 H3L4Fc以与其对照抗体配对物可比较的方式表现。无能的Fc抗体（1A11 H3L4Fc）显示对于Fcγ受体无结合或减少得多的结合，并且因此无法进行精确分析。关于FcRn结合的数据显示Fc无能和Fc野生型对于测试的所有物种具有相似的亲和力，表中的数据是对于pH6.0测定，结合如预期的在pH7.4不存在或减少得多。

表 11 ： 1A11 H3L4 （ Fc 无能的和 wt Fc ）与 Fc 受体的结合亲和力（ nM ）

构建体	Fcγ2a（Arg）	Fcγ2a（His）	Fcγ3a（Phe）	Fcγ（Val）	Fcγ1	人FcRn	犬FcRn	小鼠FcRn	大鼠FcRn
										对照Ab（Fc WT）	1290	1500	1840	442	14.9	95	156	160	112
对照Ab（Fc无能的）	减少得多的结合	无结合	无结合	无结合	减少得多的结合	154	195	171	118
										1A11 H3L4	1250	1040	990	319	21.4	183	210	192	145
1A11 H3L4Fc	减少得多的结合	无结合	无结合	无结合	减少得多的结合	158	248	207	163

4.6 体外效力测定

4.6.1 通过 1A11 和 1A11 H3L4 抑制 IL-7 刺激的 STAT5 磷酸化

为了筛选对于IL-7Rα的功能抗体，在用IL-7刺激前，将杂交瘤培养基、阳性对照抗体或测试上清液样品与PBMC细胞一起温育30分钟。分析未处理的细胞作为本底信号，而IL-7处理的细胞设为阴性对照。在与对照或测试样品的30分钟温育后，将细胞用IL-7在37℃刺激15分钟。随后将细胞用1.6%多聚甲醛/PBS在37℃固定10分钟，并且在100%甲醇中渗透化处理20-30分钟。随后将细胞在染色缓冲液（1% BSA的PBS溶液）中洗涤两次，并且用Alexa-647标记的抗pStat5抗体（BD Biosciences Inc #612599）染色1小时。在BD LSR II FACS仪器上分析样品。

亲本1A11单克隆抗体阻断人PBMC中STAT5磷酸化的IL-7诱导，具有0.088 ug/ml的IC50（数据未显示）。1A11 H3L4在相同测定中进行测试，使用来自两个供体的PBMCs在两个人IL-7浓度（0.1 ng/ml和1 ng/ml）进行。1A11 H3L4证实与1A11相比较非常相似的IC50（平均值=0.087 ug/ml），指示人源化过程不影响抗体抑制IL-7诱导的pSTAT5的能力（图3A和3B）。

4.6.2 通过 1A11 H3L4 抑制 IL-7 诱导的 IL-17 生产

根据下述方案测定1A11 H3L4，以测定其抑制Th17扩增的能力。根据手册（#130-091-155，Miltenyi）分离CD4+细胞。将在100 μl中的约1x10⁶/ml CD4+细胞与相等体积的2x浓度的Th17分化培养基（2μg/ml抗CD28 + 10μg/ml抗IFN-γ + 10μg/ml抗IL-4 + 12.5ng/ml IL-1ß + 20ng/ml IL-23 + 50ng/ml IL-6）混合，且在37℃用5% CO₂培养5天。在Th17培养基中通过多种细胞因子和生长因子处理将CD4+细胞优先分化Th17细胞。使用BD FACS SORP Aria II分选在第5天时来自分化的培养细胞的CCR6+细胞。随后将CCR6+细胞调整至2 x10⁶/ml用于IL-17生产测定。

为了测量IL-17和IFN-γ水平，将100μl CCR6+细胞与测试抗体一起在37℃预温育1小时，并且随后与100μl 10ng/ml IL-7混合。将细胞在37℃培养24-40小时，伴随5% CO₂的补充。在24小时和40小时分别通过FlowCytomix（Bender MedSystems）测量在100 μl培养上清液中的IFN-γ和IL-17水平。

在总共四份人CD4+细胞样品中在Th17扩增测定中测试1A11 H3L4（图4A-D）。人源化抗体证实在两份样品中IL-17生产的显著抑制和在另外两份样品中抑制的趋势。考虑到在这个测定中的供体与供体变异，我们得出结论1A11 H3L4能够阻断IL-7介导的Th17细胞扩增。

4.6.3 对 TSLP 信号传导的影响

IL-7Rα亚单位由IL-7R和TSLP受体复合物（TSLPR）共享。基于TSLP诱导的通过人血液单核细胞的TARC生产，在体外测定中测试1A11 H3L4对TSLP信号传导的作用。商业抗IL-7Rα抗体R34.34用作阳性对照用于阻断TARC的TSLP诱导。此外，Fc无能的人源化IgG1（HuIgG1；GRITS39633）也用作阴性对照。使用来自5个供体的单核细胞，其中TSLP以1ng/ml使用，1A11 H3L4和HuIgG1以0.001-30µg/ml的剂量使用，并且R34.34以0.4、2和10 µg/ml使用。还通过细胞计数评估细胞存活。

如图5A-E中所示，1A11 H3L4不影响TARC的TSLP诱导，而对于相同5个供体，R34.34基本上抑制TARC生产。人源化阴性对照抗体对TARC生产没有作用。这个数据集显示1A11 H3L4不中和人单核细胞中的TSLP信号传导。因此，预期1A11 H3L4对于通过IL-7R的IL-7信号传导的中和是特异性的，并且不影响通过TSLPR的TSLP信号传导。

4.7 IL7 受体抑制测定

表12A显示了在运行1中获得的IC₅₀值，并且显示了所有构建体具有比对于亲本1A11 H3L4分子获得的最佳值更佳的IC₅₀值，并且顶部两种分子是BPC4401（抗IL7R 1A11 H3L4 F100bH）和BPC4398（1A11 VH3 N98D L4）。表12B显示了在运行2中获得的IC₅₀值，并且还显示了两个构建体BPC4401（抗IL7R 1A11 H3L4 F100bH）和BPC4398（1A11 VH3 N98D L4）具有比对于亲本1A11 H3L4分子获得的最佳值更佳的IC₅₀值。运行1和2在分开的IL7R/CM5表面上进行。

表 12A ： IC50s 受体抑制测定（运行 1 ）

表 12B ： IC50s 受体抑制测定（运行 2 ）

4.8 IL-7R 多形体（ polymorph ）结合测定

IL-7R作为两个多形体形式存在，变体1：Thr66-Ile128，变体2：Ile66-Thr128。测定1A11H3L4与两个多形体形式的结合。通过伯胺偶联至~9000共振单位（RU’s）的水平，将抗人IgG（GE Healthcare/BIAcore™ BR-1008-39）固定在CM5芯片上，随后将1A11H3L4捕获在这个表面上，并且将IL7R以512n、256n、128n、64nnM、32nM和16nM经过，伴随用于加倍参考结合曲线的0nM注射（即单独的缓冲液），使用3M MgCl₂实现这个表面的再生。将结合数据与BIAcore™ 3000分析软件固有的1:1模型拟合。使用HBS-EP作为运行缓冲液进行运行，并且在BIAcore™ 3000上在25℃进行。表13显示获得的结果，并且显示1A11 H3L4具有与两个多形体变体相同或相似的结合亲和力（即它结合两个多形体）。

表 13 ： IL-7R 多形体结合

1A11H3L4与hIL7R变体1：Thr66-Ile128	Kon（Ka）1.52e5	Koff（Kd）4.15e-4	KD 2.73e-9
				1A11H3L4与hIL7R变体2：ILE66-Thr128	Kon（Ka）1.46e5	Koff（Kd）4.56e-4	KD 3.1e-9

在本说明书内，本发明已就实施方案而言以使得能够书写明确和简明说明书的方式进行描述。预期且应当理解实施方案可以不同组合或分离，而不背离本发明。

序列表

<110> Glaxo Group Limited

<120> CD127结合蛋白

<130> PB64061

<140> 61/299010

<141> 2010-01-28

<150> unknown

<151> 2011-01-26

<160> 138

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 455

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人CD127

<400> 1

Met Thr Ile Leu Gly Thr Thr Phe Gly Met Val Phe Ser Leu Leu Gln

1 5 10 15

Val Val Ser Gly Glu Ser Gly Tyr Ala Gln Asn Gly Asp Leu Glu Asp

20 25 30

Ala Glu Leu Asp Asp Tyr Ser Phe Ser Cys Gln Leu Glu Val Asn Gly

35 40 45

Ser Gln His Ser Leu Thr Cys Ala Phe Glu Asp Pro Asp Val Asn Thr

50 55 60

Thr Asn Leu Glu Phe Glu Ile Cys Gly Ala Leu Val Glu Val Lys Cys

65 70 75 80

Leu Asn Phe Arg Lys Leu Gln Glu Ile Tyr Phe Ile Glu Thr Lys Lys

85 90 95

Phe Leu Leu Ile Gly Lys Ser Asn Ile Cys Val Lys Val Gly Glu Lys

100 105 110

Ser Leu Thr Cys Lys Lys Ile Asp Leu Thr Thr Ile Val Lys Pro Glu

115 120 125

Ala Pro Phe Asp Leu Ser Val Ile Tyr Arg Glu Gly Ala Asn Asp Phe

130 135 140

Val Val Thr Phe Asn Thr Ser His Leu Gln Lys Lys Tyr Val Lys Val

145 150 155 160

Leu Met His Asp Val Ala Tyr Arg Gln Glu Lys Asp Glu Asn Lys Trp

165 170 175

Thr His Val Asn Leu Ser Ser Thr Lys Leu Thr Leu Leu Gln Arg Lys

180 185 190

Leu Gln Pro Ala Ala Met Tyr Glu Ile Lys Val Arg Ser Ile Pro Asp

195 200 205

His Tyr Phe Lys Gly Phe Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Tyr Tyr Phe

210 215 220

Arg Thr Pro Glu Ile Asn Asn Ser Ser Gly Glu Met Asp Pro Ile Leu

225 230 235 240

Leu Thr Ile Ser Ile Leu Ser Phe Phe Ser Val Leu Val Ile Leu Ala

245 250 255

Cys Val Leu Trp Lys Lys Arg Ile Lys Pro Ile Val Trp Pro Ser Leu

260 265 270

Pro Asp His Lys Lys Thr Leu Glu His Leu Cys Lys Lys Pro Arg Lys

275 280 285

Asn Leu Asn Val Ser Phe Asn Pro Glu Ser Phe Leu Asp Cys Gln Ile

290 295 300

His Arg Val Asp Asp Ile Gln Ala Arg Asp Glu Val Glu Gly Phe Leu

305 310 315 320

Gln Asp Thr Phe Pro Gln Gln Leu Glu Glu Ser Glu Lys Gln Arg Leu

325 330 335

Gly Gly Asp Val Gln Ser Pro Asn Cys Pro Ser Glu Asp Val Val Val

340 345 350

Thr Pro Glu Ser Phe Gly Arg Asp Ser Ser Leu Thr Cys Leu Ala Gly

355 360 365

Asn Val Ser Ala Cys Asp Ala Pro Ile Leu Ser Ser Ser Arg Ser Leu

370 375 380

Asp Cys Arg Glu Ser Gly Lys Asn Gly Pro His Val Tyr Gln Asp Leu

385 390 395 400

Leu Leu Ser Leu Gly Thr Thr Asn Ser Thr Leu Pro Pro Pro Phe Ser

405 410 415

Leu Gln Ser Gly Ile Leu Thr Leu Asn Pro Val Ala Gln Gly Gln Pro

420 425 430

Ile Leu Thr Ser Leu Gly Ser Asn Gln Glu Glu Ala Tyr Val Thr Met

435 440 445

Ser Ser Phe Tyr Gln Asn Gln

450 455

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<220>

<223> 1A11 CDR H1

<400> 2

Gly Tyr Thr Met Asn

1 5

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 CDR H2

<400> 3

Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 CDR H3

<400> 4

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 CDR L1

<400> 5

Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met His

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 CDR L2

<400> 6

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 7

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 CDR L3

<400> 7

Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 8

<211> 117

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 VH

<400> 8

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Ala Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 105

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 1A11 Vk

<400> 9

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Thr Ala Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 10

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H0 VH

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H1 VH

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H2 VH

<400> 12

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H3 VH

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H4 VH

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H5 VH

<400> 15

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H6 VH

<400> 16

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 17

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H7 VH

<400> 17

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Ala Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L0 Vk

<400> 18

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

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85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 19

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L1 Vk

<400> 19

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 20

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L2 Vk

<400> 20

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 21

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L3 Vk

<400> 21

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 22

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L4 Vk

<400> 22

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

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<210> 23

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L5 Vk

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L6 Vk

<400> 24

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 25

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L7 Vk

<400> 25

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L8 Vk

<400> 26

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L9 Vk

<400> 27

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 28

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11c VH

<400> 28

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Leu Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Ala Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 29

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11c Vk

<400> 29

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Thr Ala Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 30

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H1 VH的多核苷酸序列

<400> 30

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccatg accgtggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 31

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H2 VH的多核苷酸序列

<400> 31

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggtgaccatg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 32

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H3 VH的多核苷酸序列

<400> 32

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 33

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H4 VH的多核苷酸序列

<400> 33

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggtgaccatg accgtggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 34

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H5 VH的多核苷酸序列

<400> 34

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggtgaccctg accgtggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 35

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H6 VH的多核苷酸序列

<400> 35

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggtgaccctg accgtggata agagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 36

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H7 VH的多核苷酸序列

<400> 36

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggtgaccctg accgtggcca agagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 37

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11c VH的多核苷酸

<400> 37

gaggtgcagc tgcagcagag cggccccgaa ctgctgaagc ccggcgctag catgaagatc 60

agctgcaagg ccagcggcta cagcttcacc ggctacacca tgaactgggt caagcagtcc 120

cacggcaaga acctggagtg gatcggcctg atcaacccct acaacggcgt gacctcctac 180

aaccagaagt tcaagggcaa ggccaccctc acagtggcca aaagcagcag caccgcctac 240

atggaactgc tgagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt actattgcgc caggggcgac 300

ggcaattact ggtacttcga cgtgtggggc gccggaacca ccgtgaccgt gtctagc 357

<210> 38

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11c Vk的多核苷酸

<400> 38

gagatcgtgc tgacccagag ccccgcaatt accgccgcca gcctgggcca gaaggtgacc 60

atcacctgca gcgcaagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagagcggc 120

accagcccca agccctggat ctacgagatc tccaagctcg cctctggagt ccctgtgagg 180

ttcagcggca gcggcagcgg cactagctac tcactgacca tcagcagcat ggaggccgaa 240

gacgccgcca tctattactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaactggaga tcaag 315

<210> 39

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR H1

<400> 39

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1 5

<210> 40

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR H2

<400> 40

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1 5 10 15

<210> 41

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR H3

<400> 41

Gly Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp

1 5 10

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR L1

<400> 42

Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly

1 5

<210> 43

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR L2

<400> 43

Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 CDR L3

<400> 44

Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 45

<211> 117

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 VH

<400> 45

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Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

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Met Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 46

<211> 107

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3 Vk

<400> 46

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

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<210> 47

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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20 25 30

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Ile Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

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Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

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100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV4_61.H1 VH

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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 49

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Val Ser Thr Asp

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Ile Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 50

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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100 105 110

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115

<210> 51

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 52

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV4_61.H5 VH

<400> 52

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Thr Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV4_61.H6 VH

<400> 53

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Val Ser Thr Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

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65 70 75 80

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100 105 110

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115

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV4_61.H7 VH

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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Val Thr Thr Asp

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100 105 110

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115

<210> 55

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 55

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Val Thr Thr Asp

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100 105 110

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115

<210> 56

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV4_61.H9 VH

<400> 56

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Val Thr Thr Asp

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

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115

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Asp

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

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100 105 110

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115

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Asp

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100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 61

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H4 VH

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Thr Asp

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100 105 110

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H5 VH

<400> 62

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

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115

<210> 63

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H6 VH

<400> 63

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asp

20 25 30

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100 105 110

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115

<210> 64

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 64

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asp

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100 105 110

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115

<210> 65

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H8 VH

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

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100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 66

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H9 VH

<400> 66

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asp

20 25 30

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 67

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H10 VH

<400> 67

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Ala Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 68

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.IGHV3-33.H11 VH

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Ala Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 69

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.L0 Vk

<400> 69

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 70

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.L1 Vk

<400> 70

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 71

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.L2 Vk

<400> 71

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 72

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.L3 Vk

<400> 72

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 73

<211> 117

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3c VH

<400> 73

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Thr Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Thr Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Gly Tyr Asp Val Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<223> 6A3c Vk

<400> 74

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Gln Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ala Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Ser Phe Lys Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Phe Val Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H0 VH的多核苷酸序列

<400> 75

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 76

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H1 VH的多核苷酸序列

<400> 76

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcagggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 77

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H2 VH的多核苷酸序列

<400> 77

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcta ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 78

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H3 VH的多核苷酸序列

<400> 78

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgacc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 79

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H4 VH的多核苷酸序列

<400> 79

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag gatcaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 80

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H5 VH的多核苷酸序列

<400> 80

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatgggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 81

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H6 VH的多核苷酸序列

<400> 81

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcta ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcagggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 82

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H7 VH的多核苷酸序列

<400> 82

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcta ctccgtgacc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcagggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 83

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H8 VH的多核苷酸序列

<400> 83

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcgg ctccgtgagc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag ggtgaccatc agcgtcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 84

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV4_61.H9 VH的多核苷酸序列

<400> 84

caggtgcagc tgcaggagag cggacccggc ctggtgaaac ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcacag tgagcggcta ctccgtgacc accgactacg cttggaactg gatcaggcag 120

cctcccggca agggcctgga gtggatcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tcaagtccag gatcaccatc agcagggaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgat accgccgtgt actactgcgc caggggaggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca cctatactgt gagcagc 357

<210> 85

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H0 VH的多核苷酸序列

<400> 85

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 86

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H1 VH的多核苷酸序列

<400> 86

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggata caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 87

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H2 VH的多核苷酸序列

<400> 87

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcacc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 88

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H3 VH的多核苷酸序列

<400> 88

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt cagcttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 89

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H4 VH的多核苷酸序列

<400> 89

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccatcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 90

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H5 VH的多核苷酸序列

<400> 90

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gatcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 91

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H6 VH的多核苷酸序列

<400> 91

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca ccagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 92

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H7 VH的多核苷酸序列

<400> 92

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccttctac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 93

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H8 VH的多核苷酸序列

<400> 93

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcggc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 94

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H9 VH的多核苷酸序列

<400> 94

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcagcatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 95

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H10 VH的多核苷酸序列

<400> 95

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg tgagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtgggtcgcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 96

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.IGHV3_33.H11 VH的多核苷酸序列

<400> 96

caggtgcagc tggtggagag cggcggcggc gtggtgcagc ccggcaggag cctgaggctc 60

tcttgcgccg ccagcggatt caccttcagc accgactacg cctggaattg ggtgaggcag 120

gcccccggga agggcctgga gtggatggcc tacatcttct acagcggcag caccacctac 180

acccccagcc tgaagagcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt attactgcgc tagggggggc 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 97

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.L0 Vk的多核苷酸序列

<400> 97

gacatccaga tgacccagag ccccagctcc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60

atcacctgcc tggccagcca gaccattggc gcctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc ccaaactgct gatctacgcc gcaactaggc tcgccgacgg cgtgccctct 180

aggtttagcg gcagcggaag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ttcttcagca ccccctggac cttcggcggg 300

ggcacaaagg tggagatcaa g 321

<210> 98

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.L1 Vk的多核苷酸序列

<400> 98

gacatccaga tgacccagag ccccagctcc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60

atcacctgcc tggccagcca gaccattggc gcctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc cccagctgct gatctacgcc gcaactaggc tcgccgacgg cgtgccctct 180

aggtttagcg gcagcggaag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ttcttcagca ccccctggac cttcggcggg 300

ggcacaaagg tggagatcaa g 321

<210> 99

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.L2 Vk的多核苷酸序列

<400> 99

gacatccaga tgacccagag ccccagctcc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60

atcacctgcc tggccagcca gaccattggc gcctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc ccaaactgct gatctacgcc gcaactaggc tcgccgacgg cgtgccctct 180

aggtttagcg gcagcggaag cggcaccaag ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ttcttcagca ccccctggac cttcggcggg 300

ggcacaaagg tggagatcaa g 321

<210> 100

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3.L3 Vk的多核苷酸序列

<400> 100

gacatccaga tgacccagag ccccagctcc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60

atcacctgcc tggccagcca gaccattggc gcctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120

ggcaaggccc cccagctgct gatctacgcc gcaactaggc tcgccgacgg cgtgccctct 180

aggtttagcg gcagcggaag cggcaccaag ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240

gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag ttcttcagca ccccctggac cttcggcggg 300

ggcacaaagg tggagatcaa g 321

<210> 101

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3c VH的多核苷酸序列

<400> 101

gacgtccagc tgcaggagag cggccccggg ctggtgaagc cctctcagag cctgagcctg 60

acctgcaccg tgaccggcta cagcatcacc accgactacg cctggaactg gatcaggcag 120

ttccccggca acaagctgga gtggatgggc tacatcttct acagcggcag caccacctat 180

acccccagcc tcaagagcag gatcagcatc accagggaca cctccaagaa ccagttcttc 240

ctgcagctga acagcgtgac cacagaggac accgccacct actactgcgc caggggcgga 300

tacgacgtga actacttcga ctactggggc cagggcacca ctctgaccgt gagcagc 357

<210> 102

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码6A3c Vk的多核苷酸序列

<400> 102

gacatccaga tgacccagag ccccgccagc cagagcgcct ctctgggcga gagcgtgaca 60

atcacctgcc tggccagcca gaccattggc gcttggctgg cctggtacca gcagaagccc 120

ggcaagagcc cccagctgct gatctacgcc gccactaggc tggccgacgg cgtgcccagc 180

aggtttagcg gcagcggcag cggcaccaag ttcagcttca agatcagcag cctgcaggcc 240

gaggacttcg tgtcctacta ctgccagcag ttcttcagca ccccctggac cttcggcggc 300

ggaaccaaac tcgagatcaa g 321

<210> 103

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.H0的核酸序列

<400> 103

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaagc ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaaag cctccggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt caggcaggct 120

cccggccagg gcctggagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccatg accagggaca ccagcatcag caccgcctac 240

atggaactga gcaggctgag gagcgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

gggaactact ggtacttcga cgtatggggc cagggaacaa ccgtgaccgt gagcagc 357

<210> 104

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L0的核酸序列

<400> 104

gagatcgtgc tgacacagag ccccgccacc ctgtctctga gccctggcga gagggccacc 60

ctgagctgca gcgccagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaaacccggc 120

caggcccctc gcctgctgat ctacgagatc tctaagctgg ccagcggcat tcccgctagg 180

ttcagcggca gcggctcagg caccgacttc accctcacca tcagcagcct ggagcccgaa 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactacccct ataccttcgg cggcgggacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 105

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L1的核酸序列

<400> 105

gagatcgtgc tgactcagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga aagggccaca 60

ctgagctgca gcgctagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggccccta ggctgtggat ctacgagatc agcaagctgg ccagcggcat tcccgccagg 180

ttctcaggca gcggaagcgg caccgacttc accctcacca tcagctctct ggagcccgag 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactacccct ataccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 106

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L2的核酸序列

<400> 106

gagatcgtgc tgacccagag ccccgcaacc ctgagcctca gccctggcga gagggccact 60

ctgagctgct ctgccagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccgga 120

caggccccca ggctgctgat ctacgagatc agcaagctgg cctctggcat tcccgccagg 180

ttcagcggct caggcagcgg caccgactac accctgacca tcagcagcct ggaacccgag 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactatccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 107

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L3的核酸序列

<400> 107

gagatcgtgc tgacccagag ccccgccaca ctgtcactgt ctcccggcga aagggccacc 60

ctgagctgca gcgcctctag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggctccca ggctgtggat ctacgagatc agcaagctgg ccagcggcat ccctgccagg 180

ttcagcggca gcggcagcgg caccgactat accctgacca tcagcagcct cgagcccgag 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcgggacc 300

aaagtggaga tcaag 315

<210> 108

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L4的核酸序列

<400> 108

gaaattgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctgt caccaggcga gagggcaact 60

ctgagctgca gcgccagctc tagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaaacccgga 120

caggcccccc ggcccctgat ctacgagatc tccaagctgg ccagcggcat ccccgccagg 180

tttagcggca gcggcagcgg caccgacttc accctgacca tcagcagcct cgagcccgag 240

gacttcgccg tgtattactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 109

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L5的核酸序列

<400> 109

gaaatcgtgc tgacccagag ccccgcaacc ctgagcctga gccccggaga gagggccact 60

ctgagctgca gcgccagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggccccaa ggccctggat ctacgagatt agcaagctgg cctccggcat ccctgccagg 180

ttcagcggct caggcagcgg caccgactat accctcacca tcagcagcct ggagcccgag 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 110

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L6的核酸序列

<400> 110

gagatcgtgc tgacccagtc acccgcaaca ctgagcctga gcccaggaga gagggccacc 60

ctgagctgca gcgcctctag ctccgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggccccca gaccctggat ctacgagatc agcaagctcg ccagcggcgt ccccgccagg 180

ttcagcggaa gcggcagcgg gaccgactac accctgacca tcagcagcct ggaacccgag 240

gacttcgccg tgtattactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 111

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L7的核酸序列

<400> 111

gaaattgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctgt caccaggcga gagggcaact 60

ctgagctgca gcgccagctc tagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaaacccgga 120

caggccccca agccctggat ctacgagatc tccaagctgg ccagcggcgt gcccgccagg 180

tttagcggca gcggcagcgg caccgactac accctgacca tcagcagcct cgagcccgag 240

gacttcgccg tgtattactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 112

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L8的核酸序列

<400> 112

gaaatcgtgc tgacccagag ccccgcaacc ctgagcctga gccccggaga gagggccact 60

ctgagctgca gcgccagcag cagcgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggccccaa agccctggat ctacgagatt agcaagctgg cctccggcgt ccctgccagg 180

ttcagcggct caggcagcgg cacctcctat accctcacca tcagcagcct ggagcccgag 240

gacttcgccg tctactactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 113

<211> 315

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11.L9的核酸序列

<400> 113

gagatcgtgc tgacccagtc acccgcaaca ctgagcctga gcccaggaga gagggccacc 60

ctgagctgca gcgcctctag ctccgtgacc tacatgcact ggtaccagca gaagcccggc 120

caggccccca agccctggat ctacgagatc agcaagctcg ccagcggcgt ccccgtcagg 180

ttcagcggaa gcggcagcgg gaccagctac accctgacca tcagcagcct ggaacccgag 240

gacttcgccg tgtattactg ccaggagtgg aactacccct acaccttcgg cggcggcacc 300

aaggtggaga tcaag 315

<210> 114

<211> 441

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.H3FL (全长)

<400> 114

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

340 345 350

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

405 410 415

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

420 425 430

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 115

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11.L4FL (全长)

<400> 115

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Pro Leu Ile Tyr

35 40 45

Glu Ile Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Glu Trp Asn Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

100 105 110

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

115 120 125

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

130 135 140

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

165 170 175

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

180 185 190

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

195 200 205

Arg Gly Glu Cys

210

<210> 116

<211> 117

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人免疫球蛋白重链IGHV1-2 V基因

(前导区加上V区)序列

<400> 116

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala

65 70 75 80

Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg

115

<210> 117

<211> 113

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人免疫球蛋白κ轻链IGKV3-11 V

基因 (前导区加上V区)序列

<400> 117

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1 5 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

20 25 30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

35 40 45

Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

85 90 95

Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp

100 105 110

Pro

<210> 118

<211> 441

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11_H3-Fc (全长)

<400> 118

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Tyr Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

340 345 350

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Lys Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

405 410 415

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

420 425 430

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440

<210> 119

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11_VH3-Fc DNA (全长, 具有信号序列)

<400> 119

atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggtgt gcacagccag 60

gtgcagctgg tgcagagcgg agccgaggtg aagaaacccg gagccagcgt gaaggtgagc 120

tgcaaggcca gcggctacac cttcaccggc tacaccatga actgggtgag gcaggccccc 180

ggccagggac tcgagtggat gggcctgatc aacccctaca acggcgtgac cagctacaac 240

cagaagttca agggcagggt gaccctgacc agggatacca gcatcagcac cgcttacatg 300

gaactgagca ggctgaggtc cgacgacacc gccgtgtatt actgcgccag gggcgacggc 360

aactactggt acttcgatgt gtggggccag ggcaccaccg tcacagtgag cagcgccagc 420

accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcg cccagcagca agagcaccag cggcggcaca 480

gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac ttccccgagc cagtgaccgt gtcctggaac 540

agcggagccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctgcagag cagcggcctg 600

tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 660

tgtaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaggtgga gcccaagagc 720

tgtgacaaga cccacacctg ccccccctgc cctgcccccg agctggccgg agcccccagc 780

gtgttcctgt tcccccccaa gcctaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg 840

acctgtgtgg tggtggatgt gagccacgag gaccctgagg tgaagttcaa ctggtacgtg 900

gacggcgtgg aggtgcacaa tgccaagacc aagcccaggg aggagcagta caacagcacc 960

taccgggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaggagtac 1020

aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcct gcccctatcg agaaaaccat cagcaaggcc 1080

aagggccagc ccagagagcc ccaggtgtac accctgcccc ctagcagaga tgagctgacc 1140

aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtg aagggcttct accccagcga catcgccgtg 1200

gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac 1260

agcgatggca gcttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag 1320

ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaatcacta cacccagaag 1380

agcctgagcc tgtcccctgg caagtga 1407

<210> 120

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码A11 VH3 N98D的核酸

<400> 120

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcgactact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 121

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11 VH3 N98D

<400> 121

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 122

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11 VH3 N98E的核酸

<400> 122

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcgagtact ggtacttcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 123

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11 VH3 N98E

<400> 123

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Glu Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 124

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码1A11 VH3 F100bE的核酸

<400> 124

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacgagga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 125

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11 VH3 F100bE

<400> 125

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Glu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 126

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码VH3 F100bH的核酸

<400> 126

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtaccacga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 127

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A11 VH3 F100bH

<400> 127

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr His Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 128

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码VH3 F100bI的核酸

<400> 128

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacatcga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 129

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bI

<400> 129

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 130

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码VH3 F100bV的核酸

<400> 130

caggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaaac ccggagccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc ggctacacca tgaactgggt gaggcaggcc 120

cccggccagg gactcgagtg gatgggcctg atcaacccct acaacggcgt gaccagctac 180

aaccagaagt tcaagggcag ggtgaccctg accagggata ccagcatcag caccgcttac 240

atggaactga gcaggctgag gtccgacgac accgccgtgt attactgcgc caggggcgac 300

ggcaactact ggtacgtgga tgtgtggggc cagggcacca ccgtcacagt gagcagc 357

<210> 131

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bV

<400> 131

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Val Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Arg Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Val Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 132

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 N98D CDRH3

<400> 132

Gly Asp Gly Asp Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 133

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 N98E CDRH3

<400> 133

Gly Asp Gly Glu Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 134

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bE CDRH3

<400> 134

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Glu Asp Val

1 5 10

<210> 135

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bH CDRH3

<400> 135

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr His Asp Val

1 5 10

<210> 136

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bI CDRH3

<400> 136

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 137

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH3 F100bV CDRH3

<400> 137

Gly Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Val Asp Val

1 5 10

<210> 138

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6A3.L27 Vk

<400> 138

Asp Ile Gln Met Leu Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Tyr Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Thr Arg Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Met Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Phe Ser Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

Claims

1.一种人源化抗体，其包括包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的重链可变区：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:4中所示的CDRH3，或如SEQ ID NO:132-137中的任何中所示的CDRH3，

其中所述抗体进一步包含下述中的至少一个：在所述重链可变区的位置66上的赖氨酸残基，在位置69上的亮氨酸残基，或在位置71上的缬氨酸（根据Kabat编号）。

2.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含在重链可变区的位置69上的亮氨酸残基。

3.权利要求1或2的抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1、如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2和如SEQ ID NO:4中所示的CDRH3。

4.权利要求1或2的抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1、如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2和具有选自下述的序列的CDRH3：SEQ ID NO:132、133、134、135、136或137。

5.权利要求1的抗体，其包含具有选自下述的序列的重链可变区：SEQ ID NO:10、11、12、13、14、15、16、17、121、123、125、127、129或131。

6.权利要求5的抗体，其包含SEQ ID NO:13（1A11.H3 V_H）的重链可变区。

7.任何前述权利要求的抗体，其包含SEQ ID NO:114或SEQ ID NO:118的重链。

8.权利要求5的抗体，其包含SEQ ID NO:121或SEQ ID NO:123的重链可变区。

9.任何前述权利要求的抗体，其进一步包括包含下述互补决定区中的一个、两个或三个的轻链可变区：

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（iv）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（v）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3。

10.权利要求9的抗体，其中所述轻链可变区进一步包含选自下述的至少一个残基：在所述可变区轻链的位置45上的赖氨酸残基、在位置46上的脯氨酸残基、在位置47上的色氨酸残基、在位置58上的缬氨酸残基、在位置60上的缬氨酸残基、在位置70上的丝氨酸残基、和在位置71上的酪氨酸残基（根据Kabat编号）。

11.任何前述权利要求的抗体，其包含：包含下述互补决定区的重链可变结构域：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

和包含下述互补决定区的轻链可变结构域：

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3，

其中所述抗体进一步包含在所述重链可变区的位置69上的亮氨酸残基，和在所述轻链可变区的位置46上的脯氨酸残基。

12.任何前述权利要求的抗体，其包含SEQ ID NO:22的轻链可变区。

13.权利要求1 – 12中任一项的抗体，其包含SEQ ID NO:115的轻链。

14.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区。

15.一种抗原结合蛋白质，其包含下述互补决定区中的一个或多个：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1或其变体CDR

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2或其变体CDR

（iii）如SEQ ID NO:4中所示的CDRH3或其变体CDR，或如SEQ ID NO:132-137中的任何中所示的CDRH3

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1或其变体CDR

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2或其变体CDR

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3或其变体CDR，

其中所述CDRs中的至少一个是变体CDR，或其中CDRH3具有如SEQ ID NO:132-137中所示的序列，并且其中所述抗原结合蛋白质能够结合CD127。

16.权利要求15的抗原结合蛋白质，其包含下述互补决定区：

（i）如SEQ ID NO:2中所示的CDRH1

（ii）如SEQ ID NO:3中所示的CDRH2

（iii）如SEQ ID NO:132-137中的任何中所示的CDRH3，

（iv）如SEQ ID NO:5中所示的CDRL1

（v）如SEQ ID NO:6中所示的CDRL2

（vi）如SEQ ID NO:7中所示的CDRL3。

17.权利要求15或16的抗原结合蛋白质，其包含SEQ ID NO:22的轻链可变区。

18.权利要求15、16或17的抗原结合蛋白质，其包含SEQ ID NO:13的重链可变区，具有在所述重链中的一个或多个置换，所述置换选自：N98D、N98E、F100bE、F100bH、F100bI和F100bV。

19.根据权利要求15、16或17的抗原结合蛋白质，其包含选自SEQ ID NO:121、123、125、127、129和131的重链可变区。

20.一种抗原结合蛋白质，其包含如SEQ ID NO:13中所示的重链可变区，和如SEQ ID NO:22中所示的轻链可变区。

21.根据权利要求20的抗原结合蛋白质，其包含如SEQ ID NO:114或SEQ ID NO:118中所示的重链，和如SEQ ID NO:115中所示的轻链。

22.一种核酸分子，其编码根据权利要求1 – 20中任一项的抗体或抗原结合蛋白质。

23.一种表达载体，其包含根据权利要求22的核酸分子。

24.一种重组宿主细胞，其包含根据权利要求23的表达载体。

25.一种抗体或抗原结合蛋白质，其由根据权利要求24的宿主细胞表达。

26.一种用于生产抗原结合蛋白质的方法，其包括在培养基中培养根据权利要求24的宿主细胞以生产所述抗原结合蛋白质，和从其中分离或纯化所述抗原结合蛋白质的步骤。

27.根据权利要求26的方法，其中所述培养步骤在有助于所述抗体或抗原结合蛋白质由所述宿主细胞表达和所述抗体由细胞分泌的条件下进行。

28.一种药物组合物，其包含根据权利要求1 – 20中任一项的抗原结合蛋白质和药学可接受的载体或赋形剂。

29.一种治疗受自身免疫或炎性疾病折磨的受试者的方法，其包括给所述受试者施用根据权利要求1 – 20中任一项的抗原结合蛋白质的步骤。

30.根据权利要求29的方法，其中所述自身免疫或炎性疾病是多发性硬化。