CN102526150A

CN102526150A - 一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法

Info

Publication number: CN102526150A
Application number: CN2010106039100A
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-12-24
Filing date: 2010-12-24
Publication date: 2012-07-04

Abstract

本发明提供一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法。制备方法包括以下步骤：将土木香的干燥根粉碎，经极性有机溶剂提取，提取液加1-3％活性炭脱色，滤过，减压回收试剂，浓缩至含醇量低于10％，用非极性有机溶剂萃取后得到土木香总内酯，再经聚酰胺树脂柱层析分离，收集所需成分，得到土木香总倍半萜内酯提取物。本发明提取物含土木香内酯和异土木香内酯，该制备工艺得率高，有效成分明确，适合工业化生产。

Description

一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法

技术领域：

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法。

背景技术：

土木香为菊科植物土木香Inula helenium L.的干燥根，味辛、苦，性温，归肝、脾经。该中药被2005年版和2010年版《中国药典》收载，功能与主治为“健脾和胃，行气止痛，安胎。用于胸胁、脘腹胀痛，呕吐泻痢，胸胁挫伤，岔气作痛，胎动不安”。藏医将土木香和总状土木香(Inula racemosa Hook.f.)的根作为藏木香入药，用于治疗风热症、血热症以及培根病等疾病。

土木香根中含有1-3％挥发油，油中主要成分为土木香内酯、异土木香内酯、二氢土木香内酯等。现代研究表明土木香中的主要活性成分为倍半萜类化合物，而该类化合物因其良好的抗肿瘤活性以及抗炎活性收到了越来越多的关注。目前从土木香中共分离得到28个化合物，大部分为倍半萜类化合物，其中土木香内酯和异土木香内酯是其主要成分。0.1μg/ml土木香内酯可抑制感染人型结核杆菌，对金黄色葡萄菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌、真菌也有抑制作用，土木香内酯及其衍生物的化学结构与山道年类似，也有驱虫作用，且该作用好于山道年而毒性较低。土木香内酯低浓度对心脏有兴奋作用，高浓度时则有抑制作用，对离体兔子宫和兔肠运动有抑制作用，但在低浓度时有兴奋作用。异土木香内酯对人脑神经胶质瘤细胞、人肝癌细胞、人和色素瘤细胞和人乳腺癌脑转移肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。

经对现有技术的文献检索发现，中国专利申请号200810055376.7公开了一种异土木香内酯的提纯制备方法及其在制备抗癌药物中的应用，该发明采用土木香为原料，用90-99％的乙醇冷浸提取，滤液减压浓缩得浸膏；将浸膏悬浮在饱和的盐水中，在60-90℃条件下，用石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液，并用无水硫酸钠脱水后减压浓缩至近干，分别得石油醚提取物；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙酯溶剂系统进行梯度洗脱，依次用乙酸乙酯、甲醇冲柱至洗脱完全，洗脱液按体积接收，每份500ml，减压浓缩各流分将相同流分，进行合并；在8-19流分得化合物异土木香内酯。中国专利申请号200810201250.6公开了一种中药技术领域的用于促进胃动力的土木香提取物的提取方法，包括CO₂超临界萃取法和乙醇提取法，CO₂超临界萃取法：将土木香或者总状土木香的根粉碎成粗粉，过筛，装入超临界萃取釜中，通入CO₂进行超临界萃取，从分离釜中放出提取物。乙醇提取法：将土木香或者总状土木香的根粉碎成颗粒，加入乙醇，加热回流，提取液放冷过滤，减压回收乙醇至无醇味；残留物用石油醚与柱层析硅胶拌样均匀，加到硅胶柱顶上，用石油醚-丙酮梯度洗脱，分段收集，合并土木香内酯或异土木香内酯较多的流分，回收溶媒至尽，即得土木香提取物。以上两种方法提取周期长，溶剂毒性较大，成本较高，对土木香倍半萜内酯的提取率较低，制备量小。

发明内容：

本发明的目的是提供一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，本发明的方法制备得到的土木香总倍半萜内酯含量高，得率高，适合工业化生产。

本发明所述的土木香总倍半萜内酯提取物是通过以下具体技术方案实现的：

一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)总倍半萜内酯的制备：将土木香干燥根粉碎，采用极性有机溶剂提取，提取液加1-3％活性炭脱色，滤过，减压回收试剂，浓缩至含醇量低于10％，用非极性有机溶剂萃取得到土木香总内酯；(2)精制：将制备得到的土木香总内酯经柱层析分离，收集所需成分，得到土木香总倍半萜内酯提取物。

所述土木香是菊科植物土木香Inula helenium L.的干燥根。

步骤(1)所述的极性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙酮中的一种。

步骤(1)所述萃取所用的非极性有机溶剂可选氯仿、乙酸乙酯或乙醚中的一种。

步骤(2)柱层析填料为聚酰胺树脂，洗脱树脂柱的流动相可以是乙醇或甲醇水溶液，体积百分比为50-90％。

本发明相对现有技术具有以下特点：土木香总倍半萜内酯含量高，得率高，工艺稳定，适合工业化生产。

具体实施方式：

下面将结合具体实施例对本发明做进一步说明，以下所举实施例目的是为了说明本发明，而不限制本发明。

实施例1：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用80％甲醇加热回流提取3次，分别提取3h、2h、1.5h，过滤，合并滤液，加入2％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙酸乙酯充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用70％乙醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为84.71％。

实施例2：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用90％甲醇加热回流提取2次，分别提取3h、1.5h，过滤，合并滤液，加入3％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙酸乙酯充分搅拌，静置分层，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用80％乙醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为82.52％。

实施例3：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用70％丙酮加热回流提取2次，分别提取2.5h、1.5h，过滤，合并滤液，加入1％活性炭回流脱色1.5h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙醚充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙醚萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用80％甲醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为80.39％。

实施例4：

称取土木香根20kg粉碎成粗粉，用80％乙醇加热回流提取3次，分别提取3h、1h、h，过滤，合并滤液，加入2％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙酸乙酯充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用70％乙醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为81.76％。

实施例5：

称取土木香根20kg粉碎成粗粉，用60％乙醇加热回流提取2次，分别提取2h、2h，过滤，合并滤液，加入1％活性炭回流脱色1.5h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L氯仿充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并氯仿萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用80％乙醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为82.35％。

实施例6：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用90％甲醇加热回流提取3次，分别提取3h、1.5h、1h，过滤，合并滤液，加入2％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙酸乙酯充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用70％乙醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为89.23％。

实施例7：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用80％乙醇加热回流提取2次，分别提取3h、3h，过滤，合并滤液，加入2％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙醚充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙醚萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用90％甲醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为84.71％。

实施例8：

称取土木香根10kg粉碎成粗粉，用70％丙酮加热回流提取3次，分别提取3h、2h、1h，过滤，合并滤液，加入2％活性炭回流脱色1h，滤除活性炭，脱色液减压回收甲醇至醇含量低于10％，浓缩液加入3L乙酸乙酯充分搅拌，静置分层，萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，真空干燥得土木香总内酯。将制备得到的土木香总内酯用乙醇溶解，与等量聚酰胺树脂拌样，另取聚酰胺树脂干法装柱，将聚酰胺树脂拌样样品装在净聚酰胺树脂上，先用去离子水洗脱杂质，然后用20％乙醇洗脱杂质，再用80％甲醇洗脱，GC跟踪检测，收集含土木香倍半萜内酯的流分，合并，60℃以下减压回收试剂，冷冻干燥，得土木香总倍半萜提取物，GC检测，土木香内酯和异土木香内酯加和量为80.68％。

Claims

1.一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)总倍半萜内酯的制备：将土木香干燥根粉碎，采用极性有机溶剂提取，提取液加1-3％活性炭脱色，滤过，减压回收试剂，浓缩至含醇量低于10％，用非极性有机溶剂萃取得到土木香总内酯；(2)精制：将制备得到的土木香总内酯经柱层析分离，收集所需成分，得到土木香总倍半萜内酯提取物。

2.如权利要求1所述的一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于：所述土木香是菊科植物土木香Inula helenium L.的干燥根。

3.如权利要求1所述的一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的极性有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙酮中的一种。

4.如权利要求1所述的一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述萃取所用的非极性有机溶剂可选氯仿、乙酸乙酯或乙醚中的一种。

5.如权利要求1所述的一种土木香总倍半萜内酯提取物的制备方法，其特征在于：步骤(2)柱层析填料为聚酰胺树脂，洗脱树脂柱的流动相可以是乙醇或甲醇水溶液，体积百分比为50-90％。