CN102186828B - 异丁酸(1r*,2r*,4r*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1h-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的盐 - Google Patents
异丁酸(1r*,2r*,4r*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1h-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的盐 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐、其制备方法、含有所述结晶盐的药物组合物、及其作为药剂，尤其作为钙通道阻断剂的用途。
Description
技术领域
本发明涉及异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯(在本文中亦称为「化合物」)或其对映异构体的新颖结晶盐形式、其制备方法、含有所述结晶盐形式的药物组合物、及所述结晶盐形式作为钙通道阻断剂于治疗或预防慢性稳定型心绞痛、高血压、缺血(肾及心脏)、包括心房颤动在内的心律不整、心脏肥大或充血性心力衰竭的用途。本发明的所述结晶盐形式亦可单独或于药物组合物中用于治疗人类及其它哺乳动物的肾病、糖尿病及其并发症、醛固酮增多症、癫痫、神经性疼痛或癌症。
背景技术
许多心血管病症与通过心脏及血管平滑肌细胞质膜的钙流入量异常升高而引起的“钙超载”有关。细胞外钙主要通过3条路径进入所述细胞：1)受体激活型钙通道、2)配体门控型钙通道及3)电压操纵型钙通道(VOC)。
VOC分为6种主要类型：L型(持久)、T型(短暂)、N型(神经元)、P型(蒲金耶氏细胞(Purkinje cell))、Q型(在P之后)及R型(其余(Remaining)或抗性(Resistant))。
L型钙通道负责钙的向内运动，此会引起心脏及平滑肌细胞收缩，表明所述通道的阻断剂在心血管领域具有推定应用。鉴于此，L型钙通道阻断剂自60年代初以来一直用于临床，且现推荐作为收缩期-舒张期高血压及心绞痛的一线治疗用药。
已在诸如冠状及外周脉管系统、窦房结及蒲金耶氏纤维(Purkinje fibre)、脑、肾上腺及肾脏等多种组织中发现T型钙通道。此广泛分布表明T型通道阻断剂具有推定心血管保护作用，对睡眠障碍、情绪障碍、抑郁症、偏头痛、醛固酮增多症、早产、尿失禁、脑老化或神经变性病症(例如阿兹海默氏症(Alzheimers disease))具有效果。
米贝拉地尔(Mibefradil) 是第一种L型及T型钙通道阻断剂，其展示优于主要靶向L通道的钙通道阻断剂的卓越效果。
已使用米贝拉地尔来治疗高血压及咽峡炎而不显示L通道阻断剂所常见的不良副作用，例如收缩力、反射性心动过速、血管收缩性激素释放或外周性水肿。另外，米贝拉地尔显示潜在的心脏保护效果(Villame，Cardiovascular Drugs and Therapy 15，41-28，2001；Ramires，J Mol Cell Cardiol 1998，30，475-83)、肾保护效果(Honda，Hypertension 19，2031-37，2001)，且显示治疗心力衰竭的积极效果(Clozel，Procee dings Association American Physicians 1999，111，429-37)。
尽管对此性质化合物的需求巨大，米贝拉地尔仍在1998年(在其推出后一年)由于不可接受的CYP 3A4药物相互作用而撤出市场。而且，亦报导ECG异常(即QT延长)及与MDR-1调介的地高辛(digoxin)流出量相互作用(du Souich，Clin Pharmacol Ther 67，249-57，2000；Wandel，Drug Metab Dispos 2000，28，895-8)。
现已发现，在某些条件下可以见到化合物(异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯)的结晶盐形式。化合物的所述结晶盐形式非常新颖，且可具有有利特性，尤其与化合物的游离碱(WO 2008/132679)或二-盐酸盐相比。所述优点可包括较佳流动特性、较佳溶解性、较低吸水性、制造时具有较佳再现性(例如较佳滤过参数、较佳形成再现性、较佳沉降)、确定形态及/或较佳长期稳定性。
附图说明
图1显示自参照实例S1获得的呈结晶形式的化合物的二-盐酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：3.02°(100％)、9.19°(88％)、9.77°(81％)、10.81°(16％)、12.50°(19％)、12.94°(21％)、13.15°(30％)、14.30°(26％)、14.62°(24％)、15.36°(66％)、16.14°(37％)、17.08°(73％)、18.12°(76％)、19.46°(45％)、19.71°(40％)、20.54°(35％)、20.92°(31％)、21.17°(29％)、21.56°(41％)、22.47°(29％)、22.90°(22％)、23.99°(24％)、25.41°(52％)、26.05°(31％)、26.90°(32％)、27.28°(24％)及28.45°(37％)。
图2显示自实例S 2获得的呈结晶形式的化合物的二-甲基磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：3.97°(100％)、7.21°(42％)、10.00°(39％)、14.09°(40％)、14.45°(29％)、15.99°(55％)、16.38°(22％)、17.16°(51％)、18.12°(44％)、18.34°(53％)、18.60°(19％)、 19.38°(25％)、20.62°(35％)、21.02°(74％)、21.79°(18％)、22.24°(25％)、26.66°(30％)及27.63°(29％)。
图3显示自实例S3获得的呈结晶形式的化合物的二-甲苯磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：4.35°(31％)、5.79°(100％)、7.43°(16％)、8.62°(17％)、10.93°(19％)、11.51°(31％)、13.98°(34％)、15.81°(26％)、18.06°(30％)、19.00°(20％)、19.39°(21％)、19.84°(31％)、20.30°(25％)及25.51°(20％)。
图4显示自实例S4获得的呈结晶形式的化合物的硫酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-30°2θ，报告相对强度大于10％者)：2.85°(100％)、8.50°(21％)、9.50°(28％)、11.78°(85％)、13.26°(41％)、13.69°(51％)、14.19°(82％)、15.78°(40％)、16.47°(39％)、17.12°(38％)、18.91°(40％)、19.48°(43％)、26.77°(65％)及27.24°(63％)。
图5显示自实例S5获得的呈结晶形式的化合物的二-马来酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：5.07°(26％)、8.19°(12％)、10.15°(93％)、15.26°(39％)、17.20°(12％)、17.61°(18％)、20.39°(100％)、20.88°(12％)、22.63°(47％)、23.93°(43％)、24.27°(26％)、24.51°(13％)、24.73°(17％)、25.61°(21％)、29.42°(25％)及32.93°(16％)。
图6显示自实例S6获得的呈结晶形式的化合物的一倍半-富马酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的 X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：5.27°(57％)、8.05°(100％)、12.93°(18％)、15.20°(10％)、15.50°(20％)、19.45°(14％)、20.31°(31％)、20.61°(62％)、21.11°(27％)、22.77°(15％)、25.42°(11％)、26.22°(11％)及31.27°(21％)。
图7显示自实例S 7获得的呈结晶形式的化合物的二-氢溴酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法1测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围2-40°2θ，报告相对强度大于10％者)：3.1°(59％)、6.2°(28％)、9.3°(18％)、14.4°(11％)、15.6°(100％)、17.3°(33％)、18.1°(15％)、19.4°(20％)、20.0°(37％)、21.4°(14％)、22.8°(16％)及34.8°(43％)。
图8显示自一般盐形成程序获得的呈结晶形式的化合物的一倍半-萘-1，5-二磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法2测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围8-26.5°2θ，报告相对强度大于10％者)：9.9°(40％)、10.4°(18％)、12.8°(42％)、14.2°(100％)、15.0°(73％)、18.3°(68％)、19°(54％)、20.1°(39％)、20.6°(48％)、21.3°(83％)、23.8°(13％)、24.9°(14％)及26.2°(22％)。
图9显示自一般盐形成程序获得的呈结晶形式的化合物的二-苯磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法2测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围8-26.5°2θ，报告相对强度大于10％者)：8.1°(16％)、8.5°(18％)、10.9°(20％)、11.4°(16％)、12.3°(20％)、12.6°(37％)、12.9°(22％)、13.4°(55％)、14.6°(32％)、15.3°(37％)、16.1°(27％)、17.5°(71％)、 17.9°(37％)、19.1°(22％)、19.4°(25％)、20.1°(46％)、21.3°(91％)、21.8°(46％)、22.7°(100％)、23.6°(18％)、24.5°(20％)及25.5°(21％)。
图10显示自一般盐形成程序获得的呈结晶形式的化合物的二-乙磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法2测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围8-26.5°2θ，报告相对强度大于10％者)：9.6°(25％)、9.9°(21％)、10.5°(23.3％)、11.2°(27％)、11.9°(17％)、12.9°(48％)、14.5°(53％)、15.0°(40％)、15.7°(100％)、16.5°(65％)、17.0°(40％)、17.7°(49％)、19.0°(67％)、19.7°(69％)、20.4°(68％)、21.5°(55％)、22.6°(67％)及23.3°(47％)。
图11显示自一般盐形成程序获得的呈结晶形式的化合物的二-萘-2-磺酸盐的X射线粉末衍射图。利用方法2测量的X射线衍射图在指定折射角2θ处显示与图中的最强峰相比具有以下百分比相对强度(相对峰强度在圆括号中给出)的峰(峰选自范围8-26.5°2θ，报告相对强度大于10％者)：9.8°(98％)、11.2°(45％)、11.8°(24％)、13.7°(20％)、14.6°(33％)、15.6°(100％)、16.9°(90％)、19.4°(96％)、22.4°(45％)及23.9°(23％)。
在图1至图11的X射线衍射图中，折射角2θ绘示于水平轴上，且计数绘示于垂直轴上。
发明内容
1)本发明涉及化合物(异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯)的结晶盐、尤其基本纯净结晶盐；其中该结晶盐由以下组成：
·1当量化合物；
·酸组份，其由1至2当量选自由下列组成的群的酸组成：氢溴酸、硫酸、马来酸、富马酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘-1，5-二磺酸、萘-2-磺酸及乙磺酸；及
·0至5当量水。
2)另一实施方式涉及如实施方式1)的化合物的结晶盐，其中化合物是对映异构体富集的异丁酸(1R，2R，4R)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯。
3)另一实施方式涉及如实施方式1)的化合物的结晶盐，其中化合物是对映异构体富集的异丁酸(1S，2S，4S)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯。
4)另一实施方式涉及如实施方式1)的化合物的结晶盐，其中化合物是呈对映异构体富集形式的具有负旋光性的异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯。
5)另一实施方式涉及如实施方式1)至4)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐含有0至3(尤其0.5至3，特别1至2)当量水。
6)另一实施方式涉及如实施方式1)至4)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐含有0当量水。
7)另一实施方式涉及如实施方式1)至6)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由以下组成：1或2(尤其2)当量氢溴酸、1或2当量硫酸、1或2(尤 其2)当量马来酸、1至2(尤其1.5)当量富马酸、1或2(尤其2)当量甲磺酸、1或2(尤其2)当量对甲苯磺酸、1或2(尤其2)当量苯磺酸、1至2(尤其1.5)当量萘-1、5-二磺酸、1或2(尤其2)当量萘-2-磺酸、或1或2(尤其2)当量乙磺酸。
在一子实施方式中，该结晶盐的酸组份优选由以下组成：2当量氢溴酸、1或2当量硫酸、2当量马来酸、1至2(尤其1.5)当量富马酸、2当量甲磺酸、2当量对甲苯磺酸或2当量苯磺酸。在另一子实施方式中，该结晶盐的酸组份优选由1或2(尤其2)当量马来酸或1至2(尤其1.5)当量富马酸组成。
8)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量氢溴酸组成。一子实施方式涉及如实施方式1)至5)或7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量氢溴酸组成；且其中该结晶盐含有约3当量水。
9)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由1或2当量硫酸组成。
10)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量马来酸组成。
11)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由1至2(尤其1.5)当量富马酸组成。
12)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量甲磺酸组成。
13)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量对甲苯磺酸组成。
14)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量苯磺酸组成。
15)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由1至2(尤其1.5)当量萘-1，5-二磺酸组成。
16)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量萘-2-磺酸组成。
17)另一实施方式涉及如实施方式1)至7)中任一实施方式的化合物的结晶盐，其中该结晶盐的酸组份由2当量乙磺酸组成。
18)另一实施方式涉及如实施方式1)或10)的化合物的结晶盐、尤其基本纯净结晶盐，其中该结晶盐由以下组成：
·1当量化合物或如实施方式2)至4)中任一实施方式所述的对映异构体富集的化合物；
·2当量马来酸；及
·0当量水。
19)另一实施方式涉及如实施方式10)或18)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：10.15°、20.39°及22.63°。
20)另一实施方式涉及如实施方式10)或18)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下 折射角2θ处出现波峰：5.07°、8.19°、10.15°、15.26°、17.61°、20.39°、22.63°、23.93°、24.27°及25.61°。
21)另一实施方式涉及如实施方式10)或18)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图5中所绘示的X射线粉末衍射图案。
22)另一实施方式涉及如实施方式10)或18)至21)的化合物的结晶盐，其具有约147℃的熔点，如通过示差扫描热测量定法使用本文所述方法所测定。
23)在另一实施方式中，本发明涉及如实施方式10)或18)至22)中任一实施方式的结晶盐，其可通过以下获得：
1.使于EtOAc(6.3L，11份体积)中的化合物(682g，84％w/w，1.05mol)溶液回流；
2.添加溶解于MeOH(630m L，1.1份体积)中的马来酸(256g，2.2mol，2.1当量)；
3.将所得混合物回流搅拌15分钟，并在30分钟内冷却至65-68℃；
4.可选地添加0.04％w/w的晶种；
5.将混合物在3小时内冷却至40℃；
6.将混合物在1小时内冷却至20℃；
7.在0.2巴氮气中过滤固体，并用EtOAc(1500mL 2.6份体积)冲洗固体；及
8.将固体在1大气压氮气中干燥24小时。
24)另一实施方式涉及如实施方式8)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：9.3°、15.6°及17.3°。
25)另一实施方式涉及如实施方式8)或24)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：6.2°、9.3°、15.6°、17.3°、18.1°、19.4°、20.0°及22.8°。
26)另一实施方式涉及如实施方式8)、24)或25)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图7中所绘示的X射线粉末衍射图案。
27)另一实施方式涉及如实施方式11)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：5.27°、8.05°及20.61°。
28)另一实施方式涉及如实施方式11)或27)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：5.27°、8.05°、12.93°、19.45°、20.61°、21.11°及31.27°。
29)另一实施方式涉及如实施方式11)、27)或28)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图6中所绘示的X射线粉末衍射图案。
30)另一实施方式涉及如实施方式11)、或27)至29)的化合物的结晶盐，其具有约180℃的熔点，如通过示差扫描热测量定法使用本文所述方法所测定。
31)另一实施方式涉及如实施方式12)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：7.21°及10.00°。
32)另一实施方式涉及如实施方式12)或31)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：3.97°、7.21°、10.00°、15.99°、17.16°及21.02°。
33)另一实施方式涉及如实施方式12)、31)或32)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图2中所绘示的X射线粉末衍射图案。
34)另一实施方式涉及如实施方式13)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：5.79°及19.84°。
35)另一实施方式涉及如实施方式13)或34)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：4.35°、5.79°、10.93°、13.98°、15.81°及19.84°。
36)另一实施方式涉及如实施方式13)、34)或35)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图3中所绘示的X射线粉末衍射图案。
37)另一实施方式涉及如实施方式14)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：13.4°、17.5°及21.3°。
38)另一实施方式涉及如实施方式14)或37)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：12.6°、13.4°、14.7°、17.5°、21.3°及22.7°。
39)另一实施方式涉及如实施方式14)、37)或38)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图9中所绘示的X射线粉末衍射图案。
40)另一实施方式涉及如实施方式15)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：9.9°、14.2°及21.3°。
41)另一实施方式涉及如实施方式15)或40)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下 折射角2θ处出现波峰：9.9°、12.9°、14.2°、20.1°、20.6°及21.3°。
42)另一实施方式涉及如实施方式15)、40)或41)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图8中所绘示的X射线粉末衍射图案。
43)另一实施方式涉及如实施方式16)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：9.8°、11.2°及15.6°。
44)另一实施方式涉及如实施方式16)或43)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：9.8°、11.2°、15.6°、22.4°及23.9°。
45)另一实施方式涉及如实施方式16)、43)或44)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图11中所绘示的X射线粉末衍射图案。
46)另一实施方式涉及如实施方式17)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：11.2°、15.7°及20.4°。
47)另一实施方式涉及如实施方式17)或46)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：11.2°、14.5°、15.7°、17.7°、20.4°及22.6°。
48)另一实施方式涉及如实施方式17)、46)或47)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图10中所绘示的X射线粉末衍射图案。
49)本发明进一步涉及化合物(异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯)的结晶盐、尤其基本纯净结晶盐；其中该结晶盐由以下组成：
·1当量化合物；
·酸组份，由约1当量硫酸组成；及
·约6当量水。
50)另一实施方式涉及如实施方式49)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：11.78°、13.69°及14.19°。
51)另一实施方式涉及如实施方式49)或50)的化合物的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：2.85°、8.50°、9.50°、11.78°、13.26°、13.69°及14.19°。
52)另一实施方式涉及如实施方式49)、50)或51)的化合物的结晶盐，其实质上显示如图4中所绘示的X射线粉末衍射图案。
为避免任何疑问，只要上文实施方式的一、尤其实施方式19)、20)、24)、25)、27)、28)、31)、32)、34)、35)、37)、38)、40)、41)、43)、44)、46)、47)、50)及51)的一提及“在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰”，则该X射线粉末衍射图是通过使用CuKα1辐射 获得；且应了解，本文所提供2θ值的准确度在+/-0.1-0.2°范围内。值得注意的是，在本发明实施方式及申请专利范围中，当具体说明峰的折射角2θ时，所给出的2θ值应理解为自该值减去0.2°至该值加上0.2°的区间(2θ+/-0.2°)；且优选自该值减去0.1°至该值加上0.1°的区间(2θ+/-0.1°)。
为避免任何疑问，立体异构体的相对构型表示如下：以异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯来命名
异丁酸(1R，2R，4R)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯或
异丁酸(1S，2S，4S)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯，
或该两个对映异构体的混合物，例如外消旋物。
本发明范围涵盖本文所述化合物(即异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯)的结晶盐形式；其中化合物可呈外消旋形式；呈绝对构型(1R，2R，4R)的对映异构体的对映异构体富集形式；呈绝对构型(1S，2S，4S)的对映异构体的对映异构体富集形式；或呈该两种对映异构体的任一混合物形式。优选如利用本文所述方法所测定具有负旋光性的对映异构体富集形式。
当化合物、盐、药物组合物、疾病及诸如此类以复数形式使用时，此亦欲指单一化合物、盐或诸如此类。
术语“对映异构体富集”在本发明上下文中应理解为尤其意指至少90重量％、优选至少95重量％且最优选至少99重量％的化合物以化合物的一种对映异构体形式存在。
术语“基本纯净”在本发明上下文中应理解为尤其意指至少90重量％、优选至少95重量％且最优选至少99重量％的化合物晶体以本发明结晶形式、尤其本发明的单一结晶形式存在。
当界定例如X射线粉末衍射图中峰的存在时，常用途径为根据S/N比(S＝信号，N＝噪声)来实施。根据此定义，当陈述峰在X射线粉末衍射图中存在时，应了解， X射线粉末衍射图中的峰为通过具有大于x(x为大于1的数值)、通常大于2、尤其大于3的S/N比(S＝信号，N＝噪声)来界定。
在陈述结晶形式实质上显示如图1至图11中所分别绘示的X射线粉末衍射图案的上下文中，术语“实质上”意指至少所述图中所绘示图的主峰(即相较于图中最强峰具有大于10％，尤其大于20％的相对强度的波峰)必需存在。然而，X射线粉末衍射领域技术人员应认识到，X射线粉末衍射图中的相对强度可能会由于择优许向效应而有强烈强度变化。
除非所用涉及温度，否则置于数值“X”前面的术语“约”在本申请中指自X减去10％X延伸至X加上10％X的区间，且优选指自X减去5％X延伸至X加上5％X的区间。特别在温度情形下，置于温度“Y”前面的术语“约”在本申请中指自温度Y减去10℃延伸至Y加上10℃的区间，且优选指自Y减去5℃延伸至Y加上5℃的区间。室温意指约25℃的温度。在本申请中当使用术语n当量(其中n为数字)时，意味着且在本申请范围内，n指大约数字n，优选地，n指确切数字n。
实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐，尤其基本上纯净结晶盐可呈例如适于经肠或肠胃外施用的药物组合物形式用作药剂。
药物组合物可依任何本领域技术人员所熟悉的方式制备(参见例如Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第21版(2005)，第5部分，「Pharmaceutical Manufacturing」[由Lippincott Williams & Wilkins出版])，其由本发明结晶形式可选地与其它有治疗价值的物质组合连同适宜的无毒惰性医药上可接受的固体或液体载体材料及若需要时，与常用医药佐剂制成盖仑制剂投药形式。
实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐、尤其基本上纯净结晶盐可呈化合物单一组份或与其它结晶形式的混合物或非晶形形式使用。
实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐、尤其基本上纯净结晶盐可用于制备药剂及/或适于
·治疗或预防慢性稳定型心绞痛、高血压、缺血(肾及心脏)，包括心房颤动在内的心律不整、心脏肥大或充血性心力衰竭。
实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐，尤其基本上纯净结晶盐(单独或呈任何组合)亦可用于制备药剂及/或适于以下疾病群组：
·用于治疗人类及其它哺乳动物的肾病、糖尿病及其并发症、醛固酮增多症、癫痫、神经性疼痛或癌症；
·用作抗纤颤药(anti-fibrillatory agent)、抗哮喘药、抗动脉粥样硬化药、用于肺旁路的心脏停搏液的添加剂、血栓溶解疗法的附加药剂、抗凝集药(antiaggregantagent)或作为治疗不稳定型心绞痛的药剂；
·用于治疗或预防高血压，尤其门静脉高血压、促红细胞生成素治疗继发性高血压及低肾素型高血压；
·用于缺氧或缺血疾病，或作为抗缺血药用于治疗例如心脏、肾及大脑缺血及再灌注(例如在心肺旁路手术后发生)、冠状血管痉挛及脑血管痉挛及诸如此类、用于外周血管疾病(例如雷诺氏病(Raynaud′s disease)、间歇性跛行、塔卡亚萨病(Takayashus disease))、镰刀形细胞病(包括痛危象的开始及/或进展)的疗法；
·用于治疗或预防与肾、肾小球及肾小球膜细胞功能有关的病症，包括急性及慢性肾衰竭、糖尿病性肾病、高血压诱发的肾病、肾小球损伤、与年龄或透析有关的肾损伤、肾硬化、与显像剂及造影剂及环孢菌素 (cyclosporine)有关的中毒性肾损害、肾缺血、原发性膀胱输尿管反流或肾小球硬化症；
·用于治疗心肌梗塞、用于治疗心脏肥大、原发性及继发性肺性高血压、用于治疗充血性心力衰竭，包括抑制纤维化、抑制左心室扩张、再塑及功能障碍、或血管成形术或支架术后再狭窄；
·用于治疗内毒素血症或内毒素性休克、或出血性休克；
·用于通过改良至生殖器、尤其海绵体的血流来治疗男性(勃起功能障碍，例如由糖尿病、脊髓损伤、根治性前列腺切除术、精神性病因及其它病因而引起)及女性性功能障碍；
·用于预防及/或减少与细胞增殖有关的癌症或终末器官损伤；
·用于治疗代谢病症或慢性炎症性疾病、胰岛素依赖性糖尿病及非胰岛素依赖性糖尿病及其并发症(例如神经病变、视网膜病变)、醛固酮增多症、骨再塑、牛皮癣、关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、结节病或湿疹性皮炎；
·用于治疗肝脏毒性及猝死；早期及晚期肝疾病及损伤，包括伴随并发症(例如肝脏毒性、纤维化、硬化)；肿瘤的有害后果，例如由血管外皮细胞瘤而引起的高血压；泌尿道及/或膀胱的痉挛性疾病；肝肾综合症；涉及血管炎的免疫学疾病，例如狼疮、全身性硬化症、混合性冷沉球蛋白血症、与肾功能障碍及肝脏毒性有关的纤维化；
·用于胃肠疾病，例如溃疡性结肠炎、克隆氏病(Crohn′s disease)、胃黏膜损伤、溃疡性炎性肠病及缺血性肠病、基于胆囊或胆管的疾病(例如胆管炎)、胰腺炎、 调控细胞生长、良性前列腺肥大、或移植，或用作止泻药；
·用于治疗与枝气管收缩有关的病症或慢性或急性炎症病症，例如阻塞性肺病及成人呼吸窘迫综合症；
·用于减轻疼痛，包括神经性疼痛、外周疼痛及与癌症有关的疼痛，例如与前列腺癌或骨癌有关的疼痛；
·用于治疗中枢神经系统血管病症，例如中风、短暂性脑缺血发作、偏头痛及蛛网膜下腔出血；中枢神经系统行为病症；治疗痴呆，包括阿兹海默氏痴呆(Alzheimer′s dementia)、老年性痴呆及血管性痴呆；癫痫或睡眠障碍；或
·因上述效用而用于降低总体发病率及/或死亡率。
本发明亦涉及预防或治疗本文所提及疾病或病症的方法，其包含向个体施用医药活性量的实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐、尤其基本纯净结晶盐。
此外，实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐、尤其基本纯净结晶盐亦可有利地与一或多种选自以下的药剂组合使用：降脂剂，例如他汀类药物(statins)；抗凝血药，例如香豆素；抗血栓形成剂，例如氯吡格雷(clopidogrel)；β-阻断剂及其它心脏保护药。
本发明亦涉及制备呈外消旋及对映异构体富集形式的化合物的方法、及制备及表征实施方式1)至51)中任一实施方式的化合物的结晶盐的方法，所述方法在下文实验部分中予以阐述。
具体实施方式
实验部分
以下实例更详细地阐释本发明。温度均以摄氏度给出。若无另外说明，则所给出的百分比为重量百分比。
本文及上文说明中所用的缩写：
X射线粉末衍射分析(XRPD)：
方法1：X射线粉末衍射图案为在装备有3°窗口的LynxEye检测器且使用CuKα辐射进行操作的Bruker D8Advance X射线衍射仪上，以反射几何(Bragg-Brentano) 采集。通常，X射线管在40kV/40mA下运行。在2-50°2θ扫描范围内，使用0.02°(2θ)的步长及37秒的步时。端视样品固持器深度而将发散狭缝设置为可变V12或V20。将粉末(0.1mm深度时约15mg且1mm深度时约80mg)轻轻压至深度为0.1mm或1mm的硅单晶样品固持器中，且在测量期间样品在其自身平面上旋转。给所选样品覆盖上Kapton箔。在使用仪器分析软件(EVA)除去Kα2组成部分后，使用Cu Kα1 来报告衍射数据。另外，对于在数据获取期间被Kapton覆盖的样品，背景信号已使用仪器分析软件(EVA)去除。本文所提供2θ值的准确度在+/-0.1-0.2°范围内，因传统记录的X射线粉末衍射图案通常如此。
方法2：X射线粉末衍射图案在装备有GADDS HiStar检测器且使用Cu Kα辐射进行操作的Bruker D8 HTS X射线衍射仪上以反射几何采集。通常，X射线管在40kV/40mA下运行。使用经鉴定刚玉标准物(NIST 1976)对仪器进行性能检测。环境条件下进行实验的样品使用接受态粉末制备成平板试样形式。将约3mg样品轻轻压在显微镜载玻片上。在7.6°至26.7°2θ角度范围内在1个讯框中以180秒获取时间采集数据。所报告衍射数据未除去Kα2组成部分，且背景信号已使用仪器分析软件(EVA)去除。本文所提供2θ值的准确度在+/-0.1-0.2°范围内，因传统记录的X射线粉末衍射图案通常如此。
熔点在Buchi B-540设备上测量且未校正；或若明确陈述则通过示差扫描热测量定法(DSC)测量：
在Perkin Elmer DSC7上采集DSC数据。通常将2-3mg样品(预先在干燥氮气中开放储存16小时)在封闭金盘中以20℃min-1自-20℃加热至200℃。熔点以峰值温度报告。
旋光性在Jasco P-1030设备上于室温下使用钠D线(λ＝589nm)来测量。
1H-NMR在Bruker Avance 400(400MHz)上测量；化学位移以相对于所用溶剂的ppm给出；多重性：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，hex＝六重峰，sept＝七重峰，m＝多重峰，dm＝双重多峰，br＝宽峰，偶合常数以Hz给出。NMR分析使用氢醌二甲基醚作为内标准物来测量。
吸水性通过扫描重量分析蒸气吸附测量在SPS11-100m(Projekt Messtechnik，Ulm，Germany)上进行评价(扫描速率为5％相对湿度变化/小时，循环以50％相对湿度开始，继的扫描至干燥且向上扫描至95％相对湿度)。根据欧洲药典技术指导(European Pharmacopea Technical Guide)(1999年版)来实施分级(例如略微吸水性：质量增加小于2％质量/质量且等于或大于0.2％质量/质量)。考虑向上扫描中40％相对湿度与80％相对湿度间的质量变化。
LC-MS使用以下条件来实施：具有HP 1100二元帮浦及DAD的Finnigan Navigator，柱：4.6×50mm，ZorbaxSB-AQ，5μm， 梯度：存于水中的5-95％乙腈，1min，含有0.04％三氟乙酸，流速：4.5mL/min，tR以min给出。
通过制备型HPLC(柱：X-terra RP18，50x19mm，5μm，梯度：存于含有0.5％甲酸的水中的10-95％乙腈)或通过硅胶上的柱层析来纯化化合物。外消旋物可通过制备型HPLC(优选条件：Daicel，ChiralCel OD 20x250mm，10μm，存于己烷中的4％乙醇，流速10-20mL/min)分离成其对映异构体。
I.化合物的制备及表征
化合物的制备由WO 2008/132679获知：
中间体的制备
制备关键中间体K的一般程序：
关键中间体K1A及K2A是二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基或二环[3.2.2]壬-8-烯-6-基衍生物，其以具有相对构型(R*，R*，R*)(即环己烯部分的桥-(CH2)2-相对于为羟基的基团-OR2呈顺式)的主要外消旋物与具有相对构型(R*，S*，R*)(即环己烯部分的桥-(CH2)2-相对于为羟基的基团-OR2呈反式)的次要外消旋物的混合物形式获得。主要及次要外消旋物可如程序A1.5中对于关键中间体K1A所述予以分离。分离出主要外消旋物，且用于下文实例的制备中。
K1A：外消旋-(1R＊，2R＊，4R＊)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯
K1A.1(程序A1.1)：外消旋-(1R＊，4R＊)-二环[2.2.2]辛烷-2，5-二酮
将25mL 2-(三甲基甲硅烷基氧基)-1，3-环己二烯与13mL α-乙酰氧基丙烯腈混合，并在150℃下于封闭容器中加热22h。将所获得的暗橙色黏性油状物溶解于200mL MeOH中。在逐滴添加2.2g甲醇钠存于150mLMeOH中的溶液之后，将反应混合物在rt下搅拌3h，倾倒至冰/水中并用DCM萃取。在真空中浓缩有机相，并通过CC使用EtOAc-Hept(1∶2)对粗残留物实施纯化，获得7.9g外消旋-(1R*，4R*)-二环[2.2.2]辛烷-2，5-二酮。
LC-MS：tR＝0.44min。
K1A.2(程序A1.2)：外消旋-(1R＊，4R＊)-螺[二环[2.2.2]辛烷-2，2′-[1，3]二氧戊环]-5-酮
向溶解于120mL甲苯中的4.0g外消旋-(1R*，4R*)-二环[2.2.2]辛烷-2，5-二酮(中间体K1A.1)中添加1.7mL乙二醇及0.27g TsOH，并将溶液在剧烈搅拌下加热至回流，保持3.5h。将反应混合物冷却至rt，用饱和 NaHCO3水溶液骤冷，用Et2O萃取，并蒸发有机相。通过CC使用Hex-EtOAc(7∶3)对粗产物实施纯化，获得2.41g黄色油状外消旋-(1R*，4R*)-螺[二环[2.2.2]辛烷-2，2′-[1，3]二氧戊环]-5-酮。
LC-MS：tR＝0.64min；[M+H+CH3CN]+：224.35。
K1A.3(程序A1.3)：外消旋-(7R＊，8R＊，10R＊)-与外消旋-(7R＊，8S＊，10R＊)-7，10-(1，2-亚乙基)-8-苯基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-醇的混合物
经10min向2.41g外消旋-(1R*，4R*)-螺[二环[2.2.2]辛烷-2，2′-[1，3]二氧戊环]-5-酮(中间体K1A.2)存于80mL Et2O中的溶液中逐滴添加14.5mL苯基溴化镁溶液(1M，于Et2O中)。将反应混合物在rt下搅拌4h。随后，用冰小心地骤冷混合物，添加8mL 2N HCl，并分离各相。蒸发有机相，并通过CC使用Hept-EtOAC(7∶3)对粗产物实施纯化，得到0.37g无色油状7，10-(1，2-亚乙基)-8-苯基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-醇。(可通过C C来分离非对映异构体，但此处并未实施)。
LC-MS：tR＝0.84min；[M-H2O+H]+：243.34。
K1A.4(程序A 1.4)：外消旋-(1R＊，4R＊)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-酮
向0.54g 7，10-(1，2-亚乙基)-8-苯基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-醇(中间体K1A.3)存于20mL丙酮中的溶液中添加200mg TsOH，并随后将混合物在rt下搅拌2d。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液骤冷，用EtOAC萃取，并蒸发有机相。通过CC使用Hept-EtOAC(7∶3)对粗产物实施纯化，得到0.34g无色油状外消旋-(1R*，4R*)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-酮。
LC-MS：tR＝0.93min；[M+H+CH3CN]+：240.11。
K1A.5(程序A 1.5)：外消旋-(1R＊，2R＊，4R＊)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯及外消旋-(1R＊，2S＊，4R＊)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯
在-20℃下，向0.51mL DIPA存于0.5mL THF中的溶液中逐滴添加2.2mL正丁基锂(1.6M，于己烷中)。10min后，添加0.5mL甲苯，并将溶液搅拌30min。将混合物冷却至-50℃，添加0.73mL乙酸叔丁基酯，并在-50℃下持续搅拌1h。随后添加溶解于1mL THF中的0.32g外消旋-(1R*，4R*)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-酮(中间体K1A.4)，并将溶液在-50℃至-20℃下搅拌2.5h。将反应混合物倾倒于冰/HCl水溶液上，分离有机相，洗涤并蒸发。通过C C使用Hept-EtOAc(9∶1)对粗反应产物实施纯化，获得0.30g白色固体状主要外消旋物(即，外消旋-(1R*，2R*，4R*)-2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯)及0.07g无色油状次要外消旋物(即，外消旋-(1R*，2S*，4R*)-2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯)。
LC-MS(主要外消旋物)：tR＝1.06min；[M-(CH3)3-H2O+H]+：241.11。
LC-MS(次要外消旋物)：tR＝1.05min；[M+H]+：315.18。
K1A.6：(1S，2S，4S)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯及(1R，2R，4R)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯
使用制备型手性HPLC(柱：Daicel Chiral Pak AD-H，20×250mm，5μm；Hex/EtOH 95∶5，流速：16mL/min)将外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯分离成各对映异构体。
手性分析型HPLC(Daicel ChiralPak AD-H，4.6×250mm，5μm；Hex/EtOH 95∶5，流速：0.8mL/min)：
(1R，2R，4R)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯：对映异构体A：tR＝6.70min。
(1S，2S，4S)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯：对映异构体B：tR＝7.93min。
BB.[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺
BB.13，6-二甲氧基-苯-1，2-二胺
3，6-二甲氧基-苯-1，2-二胺通过以下来合成：将6.0g1，4-二甲氧基-2，3-二硝基-苯(Eur.J.Org.Chem.2006，2786-2794)溶解于220mL EtOH中，用N2排空气3次，并添600mg 10wt％Pd/C。在H2气氛(气球)中搅拌反应物。2天后，再添加300mg 10wt％Pd/C，并将混合物再搅拌24h。经硅藻土垫过滤并用EtOH及EtOAc洗涤，在于真空中浓缩后获得4.3g黑色固体状3，6-二甲氧基-苯-1，2-二胺。
LC-MS：tR＝0.48min；[M+H]+：169.09。
BB.2[3-(2-胺基-3，6-二甲氧基-苯基胺甲酰基)-丙基]-甲基-胺基甲酸苄基酯
向3.1g 4-(苄基氧基羰基-甲基-胺基)-丁酸存于80mL DCM中的溶液中添加6.5mL DIPEA、1.8g HOBt、2.6g EDC及154mg DMAP。搅拌10min后，添加溶解于20mL DCM中的2.1g 3，6-二甲氧基-苯-1，2-二胺，并将混合物在rt下搅拌过夜。用饱和NaHCO3水溶液骤冷反应物，分离各相，并将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并在真空中浓缩，获得黑色油状粗标题化合物。
LC-MS：tR＝0.88min；[M+H]+＝402.06。
BB.3[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基甲酸苄基酯
向上述粗3-(2-胺基-3，6-二甲氧基-苯基胺甲酰基)-丙基]-甲基-胺基甲酸苄基酯存于16mL甲苯中的混合物中添加4mL DMF及1.9g TsOH，并将反应物在微波中加热至150℃，保持2h。添加饱和NaHCO3水溶液，并分离各相。将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，在真空中浓缩，经含有EtOAc的短硅胶垫过滤，并再次浓缩。通过CC使用EtOAc进行纯化，获得2.7g褐色树脂状3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基甲酸苄基酯。
LC-MS：tR＝0.85min；[M+H]+：384.62。
BB.4[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺
将2.6g 3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基甲酸苄基酯存于60mL EtOH中的溶液用N2排空气3次，随后添加260mg 10wt％Pd/C。随后将反应混合物在H2气氛(气球)中于rt下搅拌5h。经硅藻土垫过滤并用EtOH洗涤，在于真空中浓缩后获得1.7g褐色发泡体状3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺。
LC-MS：tR＝0.57min；[M+H]+：250.13。
化合物的制备
参照实例1A：外消旋-异丁酸(1R＊，2R＊，4R＊)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
1.1(程序P1.1)：外消旋-(1R＊，2R＊，4R＊)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸
向4.0g外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯存于25mL EtOH中 的溶液中添加2.1g LiOH.H2O、8mL H2O及22mLMeOH。将反应混合物在rt下搅拌3d，并随后浓缩。将残留物分配于水与Et2O之间。分离水性层并用1N HCl酸化，形成白色固体。过滤出固体，用5mL HCl水溶液洗涤，并在真空中干燥，获得3.2g白色固体状外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸。
LC-M S：tR＝0.86min；[M-H2O+H]+：241.28。
1.2(程序P1.2)：外消旋-(1R＊，2R＊，4R＊)-N-[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-2-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-N-甲基-乙酰胺
在rt下，向280mg外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸存于7mL THF中的溶液中添加0.58mL DIPEA、175mg HOBt及250mgEDC。搅拌10min后，添加270mg 3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺，并将反应混合物在rt下搅拌过夜。用饱和NaHCO3水溶液骤冷反应混合物，分离各相，并将有机相用水及盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。通过CC使用EtOAc-MeOH(5∶1至2∶1)进行纯化，获得475mg白色发泡体状外消旋-(1R*，2R*，4R*)-N-[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-2-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-N-甲基-乙酰胺。
LC-MS：tR＝0.91min；[M+H]+＝490.06。
1.3(程序P1.3)：外消旋-(1R＊，2R＊，4R＊)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇
在0℃下，向310mg外消旋-(1R*，2R*，4R*)-N-[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-2-(2-羟 基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-N-甲基-乙酰胺存于8mL甲苯中的溶液中逐滴添加0.77mL红-Al溶液(65％，于甲苯中)。在于0℃下搅拌10min后，移除冷却浴，并在rt下持续搅拌3h。随后将反应混合物小心地倾倒至1M NaOH/冰混合物上，并搅拌10min。用甲苯萃取水相，将合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。通过CC使用EtOAc-MeOH(2∶1)进行纯化，获得230mg白色发泡体状外消旋-(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇。
LC-MS：tR＝0.79min；[M+H]+：476.13。
1.4：外消旋-异丁酸(1R＊，2R＊，4R＊)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
在0℃下，向199mg外消旋-(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇存于4mLDCM中的溶液中添加0.2mL NEt3及0.1mL异丁酰氯。将反应混合物搅拌过夜，使温度缓慢达至rt。用饱和NaHCO3水溶液骤冷反应物，分离各相，并用DCM再次萃取水相。将合并的有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。将残留物再溶解于3mL EtOAc中，添加硅胶及1.5mL MeOH，并将混合物剧烈搅拌7d。过滤混合物，用EtOAc-MeOH(2∶1)彻底洗涤并蒸发。通过C C使用EtOAc-MeOH(5∶1至3∶1+0.1％NEt3)进行纯化，获得186mg淡棕色发泡体状外消旋-异丁酸(1R*，2R*，4R*)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯。
LC-MS：tR＝0.90min；[M+H]+：546.23。
参照实例2A：异丁酸(1S，2S，4S)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
2.1：(1S，2S，4S)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸
按照参照实例1A中的程序P1.1使用外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯的对映异构体B(参见K1A.6)来制备。
LC-MS：tR＝0.91min；[M-H2O+H]+：241.10。
2.2：(1S，2S，4S)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇
按照参照实例1A中的程序P1.2至P1.3使用上述(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸来制备。
LC-MS：tR＝0.78min；[M+H]+：476.09。
2.3：异丁酸(1S，2S，4S)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
按照参照实例1A中的程序P1.4使用上述2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇来制备。
LC-MS：tR＝0.89min；[M+H]+：546.19。
参照实例3A：异丁酸(1R，2R，4R)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
3.1：(1R，2R，4R)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸
按照参照实例1中的程序P1.1使用外消旋-(1R*，2R*，4R*)-(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸叔丁基酯的对映异构体A(参见K 1A.6)来制备。
LC-MS：tR＝0.91min；[M-H2O+H]+：241.16。
3.2：(1R，2R，4R)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇
按照参照实例1中的程序P1.2至P1.3使用上述(2-羟基-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基)-乙酸来制备。
LC-MS：tR＝0.79min；[M+H]+：476.09。
3.3：异丁酸(1R，2R，4R)-2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯
按照参照实例1A中的程序P1.4使用上述2-(2-{[3-(4，7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-醇来制备。
LC-MS：tR＝0.89min；[M+H]+：546.11。
旋光性：αD(c＝10mg/mL EtOH)＝-21.5°。
1H NMR(MeOD，400MHz)δ7.39-7.37(m，2H)，7.30(t，J＝6.4Hz，2H)，7.24-7.20(m，1H)，6.60(s，2H)，6.43(br d，J＝7.6Hz，1H)，3.91(s，6H)，3.27-3.23(m，1H)，3.18-3.15(m，1H)，2.87(t，J＝7.6Hz，2H)，2.54(sept，J＝7.0Hz，1H)，2.47-2.37(m，4H)，2.21(s，3H)，2.19-2.12(m，1H)，2.01-1.92(m，5H)，1.75-1.65(m，2H)， 1.48-1.38(m，1H)，1.27-1.19(m，1H)，1.16(d，J＝7.0Hz，6H)。
生物学测试
活体外分析L通道
参照实例1A、2A及3A的L通道拮抗活性(IC50值)按照以下实验方法来测定。
使表现人类Cav 1.2通道以及辅助亚单元β-2a及α2δ-1的人类胚肾(HEK293)细胞在培养基(含有10％热灭活胎牛血清(FCS)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、100μg/ml G418、40μg/ml争光霉素(Zeocin)及100μg/ml潮霉素的DMEM)中生长。将细胞以20.000个细胞/孔接种至384孔黑色透明无菌底板(涂敷有聚-L-赖氨酸，BectonDickinson)中。将已接种的所述板在37℃下于5％CO2中孵育过夜。KCl溶液制备成存于分析缓冲液(含有0.1％BSA、20mM HEPES、0.375g/l NaHCO3且用NaOH调节至pH 7.4的HBSS)中的80mM原液，以20mM的最终浓度用于分析。拮抗剂制备成存于DMSO中的10mM原液，随后在384孔板中首先稀释于DMSO中、随后稀释于分析缓冲液中以获得3x原液。在分析当天，将25μl染色缓冲液(含有20mM HEPES、0.375g/l NaHCO3及3μM荧光钙指示剂fluo-4AM(存于DMSO中的1mM原液，含有10％普罗尼克(pluronic))的HBSS)添加至所接种板的各孔中。将384孔细胞板在37℃下于5％CO2中孵育60min，随后使用分析缓冲液以2×50μl/孔进行洗涤，每孔留下50μl该缓冲液用于在室温下平衡(30-60min)。在荧光成像板读数仪(FLIPR，Molecular Devices)内，将拮抗剂以25μl/孔体积添加至板中，孵育3min，并最后添加25μl/孔KCl溶液用于细胞去极化。各孔的荧光以2秒间隔测量8分钟，并将各荧光峰的曲线下面积与以溶媒代替拮抗剂时由20mM KCl所诱发的荧光峰面积进行比较。对于 各拮抗剂，经测定IC50值(抑制50％KCl诱发的荧光应答所需要的化合物浓度(以nM计))低至10μM。
已测量参照实例化合物1A、2A及3A的IC50值，且在156nM至439nM范围内。
活体外分析T通道：
参照实例1A、2A及3A的T通道拮抗活性(IC50值)按照以下实验方法来测定，且数据显示于表1中。
使分别表现人类Cav3.1、Cav 3.2或Cav 3.3通道的人类胚肾(HEK293)细胞在培养基(含有10％热灭活胎牛血清(FCS)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素及1mg/mlG418的DMEM)中生长。将细胞以20.000个细胞/孔接种至384孔黑色透明无菌底板(涂敷有聚-L-赖氨酸，BectonDickinson)中。将已接种的所述板在37℃下于5％CO2中孵育过夜。Ca2+溶液制备成存于100mM四乙基氯化铵(TEA-氯化物)、50mM HEPES、2.5mM CaCl2、5mMKCl、1mM MgCl2(用TEA-氢氧化物调节至pH 7.2)中的100mM原液，以10mM的最终浓度用于分析。拮抗剂制备成存于DMSO中的10mM原液，随后在384孔板中首先稀释于DMSO中、随后稀释于100mM TEA-氯化物、50mM HEPES、2.5mM CaCl2、5mM KCl、1mMMgCl2(用TEA-氢氧化物调节至pH 7.2)中以获得9x原液。在分析当天，将25μl染色缓冲液(含有20mMHEPES、0.375g/l NaHCO3及3μM荧光钙指示剂fluo-4AM(存于DMSO中的1mM原液，含有10％普罗尼克(pluronic))的HBSS)添加至所接种板的各孔中。将384孔细胞板在37℃下于5％CO2中孵育60min，随后使用含有0.1％BSA、20mM HEPES、0.375g/l NaHCO3的HBSS以2x50μl/孔进行洗涤，每孔留下50μl该缓冲液用于在室温下平衡(30-60min)。在荧光成像板读数仪(FLIPR，Molecular Devices)内，将拮抗剂以6.25μl/孔体积添加至板中，孵育3min，并最后添加6.25μl/孔Ca2+溶液。 各孔的荧光以2秒间隔测量8分钟，并将各荧光峰的曲线下面积与以溶媒代替拮抗剂时由10mM Ca2+所诱发的荧光峰面积进行比较。对于各拮抗剂，经测定IC50值(抑制50％Ca2+诱发的荧光应答所需要的化合物浓度(以nM计))低至10μM。
表1
| 参照实例的化合物 | IC50值 | 参照实例的化合物 | IC50值 |
| 2A | 778 | 3A | 793 |
按照兰根道尔夫方法(Langendorff method)(Lgdff)对离体心脏的作用
对参照实例1A、2A及3A降低血压的潜力及其对心脏肌肉收缩性的作用进行测试。按照文献(Doring HJ.，The isolated perfused heart according to Langendorff technique--function--application，Physiol.Bohemoslov.1990，39(6)，481-504；Kligfield P，Horner H，BrachfeldN.，A model of graded ischemia in the isolated perfusedrat heart，J.Appl.Physiol.1976Jun，40(6)，1004-8)来测定对离体小鼠心脏的EC50值。
使用上文对于兰根道尔夫实验(Langendorff experiment)所述的程序对参照实例1A的化合物进行测量，其EC50值为5nM。
II.化合物盐形式的制备
II.a)形成化合物盐的一般程序：
将1当量化合物溶解于溶剂1中。使溶液达到50℃。添加2当量溶解于溶剂2中的酸。将混合物在50℃下搅拌5min，并关掉加热源。使混合物在1小时内冷却至rt。若观察到沉淀，则过滤混合物并分离出固体。若未获得 固体，则将混合物蒸发至干燥，并添加6份体积庚烷。将混合物加热至回流，添加3份体积EtOAc，直至完全溶解。若未完全溶解，则再添加3份体积EtOAc。若仍未完全溶解，则添加尽可能少的MeOH直至完全溶解。使该混合物缓慢冷却至rt。在rt下，用刮刀刮擦容器，并进一步冷却至0℃。过滤混合物，并将溶液在旋转蒸发器(rotavapor)上蒸发至干燥。
本文所用的术语“份体积”表示对于1kg固体物质而言为1L。
对于苯磺酸、苯甲酸、水杨酸、糖精、对甲苯磺酸、丙二酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5-二磺酸、乙磺酸、苹果酸、羟基乙酸、酮戊二酸及富马酸，溶剂1＝8份体积EtOAc；
对于氢溴酸及盐酸，溶剂1＝1.8份体积EtOAc；
对于硫酸及磷酸，溶剂1＝8份体积丙酮；
对于柠檬酸、琥珀酸及酒石酸，溶剂1＝7份体积丙酮。
对于柠檬酸，溶剂2＝7份体积EtOAc；
对于苯磺酸、苯甲酸、甲磺酸、水杨酸及糖精(部分溶解)，溶剂2＝3份体积EtOAc；
对于对甲苯磺酸、丙二酸、萘-2-磺酸、萘-1，5-二磺酸、苹果酸、羟基乙酸、酮戊二酸及富马酸，溶剂2＝3份体积MeOH；
对于琥珀酸，溶剂2＝15份体积丙酮；
对于酒石酸，溶剂2＝12份体积EtOH；
对于氢溴酸、盐酸、硫酸及磷酸，溶剂2＝水。
使用上文所述一般程序所获得的结果概述于表1及2中。若使用特殊程序来制备化合物的结晶盐形式，则使用阐述于下文参照实例S1及实例S2至S7中的程序。
表1：按照一般程序获得的化合物的结晶盐形式的表征数据
表2：按照一般程序获得的化合物其它盐形式的表征数据
参照实例S1：化合物的二-盐酸盐的制备及表征
将7.598mL HCl水溶液(0.1N)添加至200.7mg化合物中，形成白色悬浮液。添加5mL 2-PrOH，并将所获得的澄清溶液在氮气中蒸发至干燥。向残留物中添加4mL TBME，并以温度循环振荡悬浮液(T1＝20℃，T2＝25℃，保持时间分别为1h；加热及冷却速率为5℃/h，500rpm)。重复18次后，过滤悬浮液，并将固体在真空中干燥，获得265mg化合物的二-盐酸盐。
表S1：化合物的二-盐酸盐的表征数据
实例S2：化合物的二-甲磺酸盐的制备及表征
将0.0476mL甲磺酸添加至199.7mg化合物溶解于7ml EtOAc中的澄清溶液中。将该澄清溶液在氮气中蒸发至干燥，并将所获得的残留物以温度循环(T1＝20℃，T2＝25℃，保持时间分别为1h；加热及冷却速率为5℃/h，500rpm)悬浮及振荡于4mL EtOAc/庚烷(1∶3)混合物中。重复18次后，过滤悬浮液并在真空中干燥固体。将所获得的固体悬浮及振荡于1mL TBME中(温度循环：T1＝20℃，T2＝25℃，保持时间分别为1h；加热及冷却速率为5℃/h，500rpm)。重复18次后，过滤悬浮液，并将固体在真空中干燥，获得化合物的二-甲磺酸盐。
表S2：化合物的二-甲磺酸盐的表征数据
实例S3：化合物的二-对甲苯磺酸盐的制备及表征
将199.7mg化合物溶解于7mL EtOAc中。添加溶解于10mL EtOAc中的139.2mg对甲苯磺酸。将澄清溶液在氮气中蒸发至干燥，并将残留物悬浮于4mL EtOAc/庚烷(1∶3)混合物中，且以温度循环振荡(温度循环：T1＝20℃，T2＝25℃，保持时间分别为1h；加热及冷却速 率为5℃/h，500rpm)。18个循环后，在真空中蒸发溶剂，并将固体残留物悬浮于2ml EtOAc中。短暂超音波处理(3min)后，以温度循环振荡悬浮液(温度循环：T1＝20℃，T2＝25℃，保持时间分别为1h；加热及冷却速率为5℃/h，500rpm)。重复18次后，过滤悬浮液，并将固体在真空中干燥，获得173.8mg化合物的二-对甲苯磺酸盐。
表S3：化合物的二-对甲苯磺酸盐的表征数据
实例S4：化合物的硫酸盐的制备及表征
将0.733mL硫酸水溶液(0.5M)添加至200.2mg化合物溶解于10mL MEK中的溶液中，形成澄清溶液。2天后，过滤所获得的悬浮液，并将固体在真空中干燥1h，获得含有约6当量水的化合物的单硫酸盐。
表S4：化合物的二-硫酸盐的表征数据
实例S5：化合物的二-马来酸盐的制备及表征
将溶解于MeOH(630mL，1.1份体积)中的马来酸(256g，2.2mol，2.1当量)添加至化合物(682g，84％w/w(NMR分析)，1.05mol)于EtOAc(6.3L，11份体积)中的回流溶液中。将所得混合物回流搅拌15分钟，并随后在30分钟内冷却至65-68℃，并添加0.04％w/w的化合物二-马来酸盐晶种(晶种在使用相同方案小心结晶后获得)。随后将混合物在3h内自65-68℃冷却至40℃。随后将所获得的悬浮液经1h冷却至20℃，在0.2巴氮气中过滤，并用EtOAc(1500mL，2.6份体积)冲洗。随后将所获得的白色固体在1大气压氮气中干燥24小时，获得715g(88％)化合物的二-马来酸盐。
表S5：化合物的二-马来酸盐的表征数据
实例S6：化合物的一倍半-富马酸盐的制备
将199.5mg化合物溶解于5mL EtOAc中。缓慢添加85.4mg富马酸存于5mL THF中的澄清溶液。将所获得的澄清溶液在氮气中浓缩成3mL溶液，导致沉淀。过滤混合物，并在真空中干燥固体。所获得固体为化合物的一倍半-富马酸盐。
表S6：化合物的一倍半-富马酸盐的表征数据
实例S7：化合物的二-氢溴酸盐的制备
将0.3665mL 2摩尔浓度的氢溴酸水溶液缓慢添加至199.8mg化合物存于0.4ml THF中的溶液中，并加热(加热枪)所获得的悬浮液。将澄清溶液冷却至r.t.，导致沉淀。添加3mL THF，振荡悬浮液，过滤并真空干燥固体(1h，3毫巴)。所获得固体为含有约3当量水的化合物的二-氢溴酸盐。
表S7：化合物的二-氢溴酸盐的表征数据
Claims (8)
1.化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐，其中所述结晶盐由以下组成：
1当量异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯；
2当量马来酸；以及
0当量水；
其中以异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯来命名化合物异丁酸(1R,2R,4R)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯，或化合物异丁酸(1S,2S,4S)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯，或该两个对映异构体的混合物；
其中所述结晶盐的特征是在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：5.07°、8.19°、10.15°、15.26°、17.61°、20.39°、22.63°、23.93°、24.27°及25.61°；其中该X射线粉末衍射图通过使用CuKα1辐射获得；且所述2θ值的准确度在2θ+/-0.2°范围内。
2.如权利要求1的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐，其特征在于在X射线粉末衍射图中在以下折射角2θ处出现波峰：5.07°、8.19°、10.15°、15.26°、17.20°、17.61°、20.39°、20.88°、22.63°、23.93°、24.27°、24.51°、24.73°、25.61°、29.42°及32.93°；其中该X射线粉末衍射图通过使用Cu Kα1辐射获得；且所述2θ值的准确度在2θ+/-0.2°范围内。
3.如权利要求1的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐，其通过示差扫描热测量定法测定的熔点为约147℃。
4.如权利要求1的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐，其可通过以下获得：
(1).使含于6.3L、11份体积EtOAc中的682g、84%w/w、1.05mol异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的溶液回流；
(2).添加溶解于630mL、1.1份体积MeOH中的256g、2.2mol、2.1当量马来酸；
(3).将所得混合物回流搅拌15分钟，并在30分钟内冷却至65-68℃；
(4).可选地添加0.04%w/w的晶种；
(5).将该混合物在3小时内冷却至40℃；
(6).将该混合物在1小时内冷却至20℃；
(7).在0.2巴氮气中过滤固体，并用1500mL、2.6份体积EtOAc冲洗该固体；及
(8).将该固体在1大气压氮气中干燥24小时。
5.如权利要求1至4任一项的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐，其中异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯呈具有负旋光性的对映异构体富集形式。
6.一种药物组合物，其包含如权利要求1至5中任一项的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐及医药上可接受的载体。
7.一种如权利要求1至5中任一项的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐在制备用于治疗或预防慢性稳定型心绞痛、高血压、肾缺血或心肌缺血、心律不整、心脏肥大或充血性心力衰竭的药物组合物中的用途。
8.如权利要求1至5中任一项的化合物异丁酸(1R*,2R*,4R*)-2-(2-{[3-(4,7-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-丙基]-甲基-胺基}-乙基)-5-苯基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-基酯的结晶盐在制备用于治疗或预防慢性稳定型心绞痛、高血压、或心房颤动的药物组合物中的用途。
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