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CN102159086A - 益生菌婴儿产品 - Google Patents

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CN102159086A CN2009801366582A CN200980136658A CN102159086A CN 102159086 A CN102159086 A CN 102159086A CN 2009801366582 A CN2009801366582 A CN 2009801366582A CN 200980136658 A CN200980136658 A CN 200980136658A CN 102159086 A CN102159086 A CN 102159086A
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Abstract

包含蛋白质来源、脂肪来源、碳水化合物来源和长双歧杆菌（B.Longum）AH1206的婴儿配制食品或儿童营养产品。

Description

益生菌婴儿产品
技术领域
本发明一般涉及益生菌婴儿配制食品（infant formulas）和儿童营养产品。
发明内容
简言之，本发明在一个实施方案中涉及包含蛋白质来源、脂肪来源、碳水化合物来源和长双歧杆菌（B. Longum）AH1206的婴儿配制食品或儿童营养产品。
在另一个实施方案中，本发明涉及在婴儿或儿童中降低炎症的方法，所述方法包括对婴儿或儿童施用长双歧杆菌AH1206。
附图说明
为了更全面的理解本发明，现提及以下说明，其结合附图进行理解。
图1是长双歧杆菌AH1206的BOX聚合酶链式反应（BOX PCR）（生物分析仪）条码谱（barcode profile）。使用Agilent 2100软件测定碱基对大小；
图2为图，其显示了在8天喂食期间长双歧杆菌AH1206的粪便回收并证明AH1206可以在鼠胃肠道中存活；
图3为条形图，其显示了长双歧杆菌AH1206对人外周血单核细胞(PBMC)的白介素（IL）-10细胞因子产生的影响。结果表示为平均值+测量标准误（SEM）(n=6)；
图4为条形图，其显示了喂食长双歧杆菌AH1206对敏化小鼠肺的嗜酸粒细胞募集的影响。图4A显示在喂食AH1206的小鼠中在支气管肺泡灌洗（BAL）中存在的总细胞数降低；图4B显示了在BAL中的不同细胞计数，其揭示细胞数的降低主要是在嗜酸粒细胞群中。（细胞数在y轴上显示(x104)；*p<0.05相对于安慰剂）；
图5A和5B为图，显示了（A）益生菌菌株AH1206和（B）安慰剂对用卵清蛋白（OVA）攻击后的敏化小鼠BAL液中的总细胞数的影响（n=10/组，* = p<0.05相比仅用OVA攻击）；
图6A和6B为图，其显示了（A）长双歧杆菌AH1206和（B）安慰剂对乙酰甲胆碱的气道反应性的影响，通过在用OVA或盐水鼻内攻击后24小时的OVA敏化小鼠的增强的呼气间歇（Penh）的改变来进行评定。各个数据点代表平均值+SEM（n=10/组，*  p=<0.05相比仅用OVA）；
图7为图，其显示了来自于OVA敏化小鼠的BAL液中的肿瘤坏死因子（TNF）细胞因子水平。各个柱代表平均值+SEM（n=10，*  p<0.05相比OVA攻击的、MRS (deMann, Rogosa 和Sharpe)肉汤处理的对照）；
图8A和8B为图，其显示了用益生菌菌株AH1206的口腔处理对从OVA敏化小鼠中分离的活化脾细胞（(CD3/CD28刺激的脾细胞）中的（A）TNF和（B）干扰素（IFN）-γ细胞因子产生的影响。各个柱代表平均值+SEM（n=10，*  p=<0.05相比OVA攻击的、MRS 肉汤处理的对照）；
图9为图，其显示了从喂食AH1206的小鼠中分离的血清中的OVA-特异性免疫球蛋白E（IgE）水平比不用AH1206喂食的对照显著更低(**p = <0.01)；
图10为图，其显示了益生菌菌株AH1206的口腔处理对从OVA敏化小鼠中分离的活化脾细胞（CD3/CD28刺激的脾细胞）中的TNF-α产生的影响。显示了各组的平均值（* p = <0.05, ** p =<0.01相比OVA和霍乱毒素（CT）攻击的、MRS肉汤处理的对照）；
图11为图，其显示了喂食AH1206的动物的CD4+ CD25+细胞的增殖大大降低（所有组n=10，除了对照组n=20）；
图12A和12B为图，其显示了在CD4+群中同时为CD25+的细胞百分比，通过流式细胞术评定（未喂食组n=11，安慰剂组n=20，以及喂食AH1206组n=10）；
图13显示在喂食AH1206的无菌小鼠中表达转录因子FoxP3的CD4/CD25+细胞百分比显著上调（每组n=8或9）（*p<0.05相对于安慰剂）；和
图14为图，其显示了益生菌株AH1206在3个月中的稳定性。
实施发明的最佳方式
现在将详细涉及本发明的实施方案，以下阐明其中的一个或多个实施例。提供各个实施例以解释本发明而不是限制本发明。事实上，对本领域技术人员而言显而易见的，可以在本发明中进行各种修改和改变而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方案的部分说明或描述的特征可用于另一个实施方案以获得更进一步的实施方案。
因此，本发明旨在包含在所附权利要求及其等同范围内的这些修改和改变。本发明的其他目的、特征和方面在以下详细描述中公开或在以下详细描述中是显而易见的。本领域普通技术人员应当理解本说明仅仅描述示例性实施方案，而无意限制本发明的更广泛方面。
如上所述，本发明一般涉及益生菌婴儿配制食品和儿童营养产品。益生菌婴儿配制食品和儿童营养产品相关参考可包括Dennen等人的美国专利号7,179,460和Luchansky等人的美国专利号5,922,375。
本发明要解决的技术问题是提供包含新益生菌的婴儿配制食品和儿童营养产品。因此，在一个实施方案中，本发明涉及包含长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）菌株AH1206的婴儿配制食品或儿童营养产品。长双歧杆菌菌株AH1206已于2006年3月15日在国立工业和海洋微生物保藏有限公司(英国)（National Collections of Industrial, Marine, and Food Bacteria(NCIMB), 苏格兰, 英国）保藏，授予的登记号为NCIMB 41382。NCIMB是布达佩斯条约确认的国际培养物保藏单位(International Depository Authority)。菌株是耐酸和耐胆汁的并通过胃肠道。在本发明的一个具体的实施方案中，长双歧杆菌AH1206从婴儿粪便中分离。
在另一个实施方案中，婴儿配制食品或儿童营养产品包含长双歧杆菌AH1206或其突变体或变体。突变体可为遗传修饰的突变体。变体可为双歧杆菌的天然发生变体。在一些实施方案中，菌株可为益生菌。在其他实施方案中，菌株可为生物纯培养物形式。在还其他实施方案中，菌株为分离的菌株。
如本文所用，术语“突变体”、“变体”和“遗传修饰的突变体”包括双歧杆菌菌株，与亲本菌株相比，其遗传和/或表型特性发生改变。长双歧杆菌的天然发生变体包括选择性分离的靶特性的自发改变。亲本菌株特性的故意改变（deliberate alteration）通过传统（体外）遗传操纵技术例如基因破坏和接合转移完成。
遗传修饰包括将外源和/或内源DNA序列引入双歧杆菌菌株的基因组，例如通过载体，包括质粒DNA或噬菌体，插入细菌菌株的基因组。天然或诱导的突变包括至少单碱基改变例如缺失、插入、转换或其他可导致DNA序列编码的氨基酸序列改变的DNA修饰。
术语“突变体”、“变体”和“遗传修饰的突变体”也包括下述双歧杆菌菌株，其经历以与所有微生物本质上一致的速率在基因组中积累的遗传改变，和/或经历通过自发突变和/或基因获得和/或基因丢失而发生的，不是由故意的（体外）基因组操纵获得而是通过变体和/或突变体的自然选择获得的遗传改变；当暴露于环境压力例如抗生素时，所述遗传改变提供了支持细菌存活的选择优势。突变体可通过将特定基因故意的（体外）插入基因组产生，所述基因并不根本性地改变生物的生化功能，但其产物可用于细菌的鉴定或选择，例如抗生素抗性。
本领域技术人员理解，可通过与亲本菌株的DNA序列同源性分析鉴定双歧杆菌突变体或变体菌株。与亲本菌株具有接近的序列同一性的双歧杆菌菌株被认为是突变体或变体菌株。与亲本DNA序列具有96%或更多，例如97%或更多，或98%或更多，或99%或更多的序列同一性（同源性）的双歧杆菌菌株可被认为是突变体或变体。序列同源性可使用在线的同源性算法“BLAST”程序测定，所述程序在http://www.ncbi.nlm.nih,gov/BLAST/上可公开获得。
亲本菌株的突变体也包括与亲本菌株的16s-23s基因间间隔区多核苷酸序列具有至少85%序列同源性，例如至少90%序列同源性，或至少95%序列同源性的衍生双歧杆菌菌株。这些突变体可进一步包含在细菌基因组中的其它DNA序列中的DNA突变。
在本发明的一个实施方案中，双歧杆菌菌株为活细胞的形式。可选地，双歧杆菌菌株可为失活细胞的形式。术语“失活”（“inactivated”）指菌株的代谢活性或繁殖能力已被降低或破坏。可通过本领域目前已知的或还待发展的任意方法发生失活。例如可通过热处理、冻干、紫外光、γ辐射、压力、化学破坏、机械破坏或改变pH完成失活。例如，可使用热处理通过在80℃至100℃范围内储存10分钟来使益生菌失活。还可使用紫外光通过在距离30瓦特UVC灯5厘米距离处辐射5分钟来使益生菌失活。可选地，可使用γ辐射通过使用在距离钴-60源20厘米处以2千克-戈瑞 (kGy) 辐射来使益生菌失活。如本文所用，术语“失活”与“非存活”（“non-viable”）同义。
在一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206可添加至儿童或婴儿制品中。术语“婴儿”指小于约1岁大的出生后的人。术语“儿童”指在约1岁至12岁年龄范围内的人。在某些实施方案中，儿童是在约1岁至6岁年龄范围内。在其它实施方案中，儿童是在约7岁至12岁年龄范围内。
添加至本发明制品中的长双歧杆菌AH1206的量可相当于每克制品约1x104至约1x1012 菌落形成单位（cfu）的范围。在另一个实施方案中，添加至本发明制品中的量可相当于每克制品约1x106至约1x109 cfu的范围。在另一个实施方案中，添加至本发明制品中的量可相当于每克制品约1x109至约1x1012 cfu的范围。在另一个实施方案中，添加至本发明制品中的量可相当于每克制品至少约1x106cfu。
本发明中的长双歧杆菌AH1206的施用形式不是关键的，只要以有效量对儿童或婴儿施用。在一些实施方案中，通过片剂、丸剂、封装剂（encapsulations）、囊片、软胶囊、胶囊、油滴、药囊（sachets）、液体、浓缩液、粉末、酏剂、溶液、悬浮液、乳剂、锭剂、小珠和其组合对儿童或婴儿施用长双歧杆菌AH1206。在另一个实施方案中，在糖、脂肪或多糖中封装长双歧杆菌AH1206。还在另一个实施方案中，将长双歧杆菌AH1206加入食物或饮料产品并供食用。食物或饮料产品可为营养添加剂或儿童营养产品例如较大婴儿配制食品（follow-on formula）、成长奶、饮料、奶、酸奶、果汁、基于水果的饮料、可咀嚼片剂、曲奇饼、脆点心或奶粉。
在其他实施方案中，产品可为婴儿营养产品，例如婴儿配制食品或人奶增强剂。如本文所用，术语“婴儿配制食品”指满足婴儿营养需要的替代人奶的组合物。术语“人奶增强剂”指可加入人奶以增强人奶营养价值的组合物。在一些实施方案中，组合物为酸化的产品（如某些医用食品规定要求的）。
营养产品可为用于足月婴儿、早产婴儿、低出生体重婴儿或极低出生体重婴儿的产品。如本文所用，术语“早产”或“早产婴儿”可包括低出生体重婴儿或极低出生体重婴儿。低出生体重婴儿为在约32周至约37周孕期出生的婴儿或出生时体重在约3.25磅至约5.5磅的婴儿。极低出生体重婴儿为在约32周孕期前出生的婴儿或出生时体重低于约3.25磅的婴儿。因此，早产婴儿可包括在约37周孕期前出生的婴儿和/或出生时体重低于约5.5磅的婴儿。
在某些实施方案中，制品可经肠内或胃肠外施用。如本文所用，“肠内”指通过或在胃肠或消化道内，“肠内施用”包括口服喂食、胃内喂食、经幽门施用或任意其他至消化道的引入。术语“胃肠外”指以消化道以外的方式摄入体内或施用，例如通过静脉内或肌肉内注射。
本发明的制品可提供最低、部分或全部营养支持。组合物可为营养添加剂或代餐。在一些实施方案中，组合物可与食物或营养组合物组合施用。在此实施方案中，组合物可在被受试者消化前与食物或营养组合物混和，或者可在消化食物或营养组合物之前或之后对受试者施用。组合物可对接受婴儿配制食品、母乳、人奶增强剂或其组合的早产婴儿施用。组合物可以是，但不需要是营养完全的。术语“营养完全”指组合物包含足够的营养以维持持续期的健康人生活。
在一些实施方案中，本发明可包含供怀孕女性食用的出生前饮食添加剂，由此将长双歧杆菌AH1206提供给子宫内的胎儿。在其他实施方案中，本发明可包含供哺乳母亲食用的出生后饮食添加剂，由此将长双歧杆菌AH1206经母乳提供给出生后的婴儿。
如果将长双歧杆菌AH1206经婴儿配制食品或儿童营养产品施用，制品可为营养完全的并包含合适类型和量的脂、碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质。脂质或脂肪的量一般可在约3至约7克/100千卡中变化。脂质来源可为任意本领域已知或使用的脂质来源，例如奶脂肪、蛋黄脂质、鱼油、蔬菜油例如棕榈油、大豆油、棕榈油精、棕榈油、棕榈坚果油、椰子油、中链甘油三酯油、高油酸向日葵油、橄榄油、高油酸红花油和脂肪酸酯。
蛋白质的量一般可从约1至约5克/100千卡变化。蛋白质来源可为任意本领域已知或使用的蛋白质来源，例如奶蛋白、脱脂奶固体、脱脂奶、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、动物蛋白、谷类蛋白、蔬菜蛋白或其组合。制品可包含富含谷氨酰胺/谷氨酸的蛋白质和/或肽。蛋白质来源可为完整的、部分水解的或大量水解的。在一些实施方案中，蛋白质来源可为完整蛋白质和水解蛋白质的组合。蛋白质来源可为分离物或浓缩物。
在某些实施方案中，本发明的组合物可包含氮来源（即氨基酸和/或蛋白质），从而使氨基酸或蛋白质总量占总组合物的约1克/100千卡（kcal）至约10克/100千卡，在一些实施方案中为约2克/100千卡至约6克/100千卡。每100千卡总组合物中的脂质来源的量可高于0克直至约6克，在一些实施方案中约0.5克至约5.5克，在其他实施方案中约2克至约5.5克；每100千卡总组合物中的非纤维碳水化合物来源的量可为约5克至约20克，在一些实施方案中可为约7.5克至约15克。在营养完全组合物中的维生素和矿物质的量可足够满足100%的美国推荐的每日摄取量（RDI），为约500至约3,000千卡，在一些实施方案中约1,000至约3,000千卡。在一个具体的实施方案中，组合物可不含蛋白质。在这样的实施方案中，组合物可含有包含100%游离氨基酸的蛋白质等同来源。
碳水化合物的量一般可从约8至约12克/100千卡变化。碳水化合物来源可为任意本领域已知或使用的碳水化合物来源，例如乳糖、果糖、葡萄糖、玉米糖浆、玉米糖浆固体、麦芽糊精、蔗糖、淀粉、大米糖浆固体、大米淀粉、修饰的玉米淀粉、修饰的木薯淀粉、米粉、豆粉和其组合。制品可包括任一种或多种佐剂、细菌成分、药物实体或生物化合物。
方便地，可在本发明的实施中使用市售的婴儿配制食品和其他制品。例如，可在Enfamil?、Enfamil? Premature Formula、Enfamil? with Iron、Lactofree?、Nutramigen?、Pregestimil?和ProSobee? (可获自Mead Johnson & Company, Evansville, IN, U.S.A.)中添加合适水平的长双歧杆菌AH1206并用于本发明的实施。
本发明的制品可任选地包括一种或多种以下维生素或其衍生物，包括但不限于生物素、维生素B1、硫胺素、焦磷酸硫胺素、维生素B2、核黄素、黄素单核苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、盐酸吡多辛、单硝酸硫胺素、叶酸、维生素B3、尼亚新、烟酸、烟酰胺（nicotinamide）、烟酰胺（niacinamide）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、色氨酸、生物素、泛酸、维生素B6、维生素B12、钴胺素、甲钴胺、脱氧腺苷钴胺、氰钴胺、泛酸钙、泛酸、维生素C、抗坏血酸、维生素A、视黄醇、视黄醛、视黄酸、β-胡萝卜素、维生素D、维生素D3、钙化醇、胆钙化醇、二羟维生素D、1,25-二羟胆钙化醇、7-脱氢胆固醇、胆碱、维生素E、乙酸维生素E、维生素K、甲萘醌、甲基萘醌类、叶绿醌、萘醌和其混合物。
本发明的制品可任选地包括一种或多种以下矿物质或其衍生物，包括但不限于磷、钾、硫、钠、多库酯钠、氯、锰、镁、硬脂酸镁、碳酸镁、氧化镁、氢氧化镁、硫酸镁、铜、硫酸铜、碘、硼、锌、氧化锌、铬、钼、铁、羰基铁、三价铁、延胡索酸亚铁、多糖铁、氟、硒、钼、磷酸钙或醋酸钙、磷酸钾、硫酸镁或氧化镁、氯化钠、氯化钾或醋酸钾、正磷酸铁、醋酸α-生育酚、硫酸锌或氧化锌、葡萄糖酸铜、氯化铬或吡啶甲酸铬、碘化钾、硒酸钠、钼酸钠、叶绿醌、 氰钴胺、亚硒酸钠、硫酸铜、肌醇、碘化钾、钴和其混合物。矿物质化合物的非限制性示例衍生物包括任意矿物质化合物的盐、碱性盐、酯和螯合物。
本发明组合物还可包含乳化剂和稳定剂例如大豆卵磷脂、角叉胶和其组合。本发明组合物可任选地包含其他可具有益作用的物质例如乳铁蛋白、核苷酸、核苷、免疫球蛋白和其组合。
在本发明的一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206可与一种或多种益生菌组合施用。术语“益生菌”指对宿主健康发挥有益作用的微生物。只要能够达到预期的结果，在此实施方案中可接受本领域已知的任意益生菌。在一个具体的实施方案中，益生菌可选自鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）GG (LGG)、长双歧杆菌物种和动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）BB-12。在一个实施方案中，另外的益生菌可为活的或非存活的。
在本发明的另一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206可与一种或多种益生素组合。术语“益生素”指刺激益生菌生长和/或活性的不能消化的食物成分。只要能够达到预期的结果，在此实施方案中可接受本领域已知的任意益生素。在本发明中有用的益生素可包括寡糖、多糖和其他益生素，包括果糖、木糖、大豆、半乳糖、葡萄糖和甘露糖。更具体地，在本发明中有用的益生素可包括乳果糖、寡葡萄糖、菊粉、聚葡萄糖、寡半乳糖、寡果糖、寡异麦芽糖、大豆寡糖、乳果糖、寡木糖和寡龙胆糖。
还在本发明的另一个实施方案中，制品可包含其他活性剂例如长链聚不饱和脂肪酸(LCPUFA)。合适的LCPUFA包括但不限于α-亚油酸、γ-亚油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、花生四烯酸(ARA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。还在一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206与DHA组合施用。在另一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206与ARA组合施用。在还另一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206与DHA和ARA二者组合施用。可在包含DHA、ARA或其组合的市售婴儿配制食品中添加长双歧杆菌AH1206并用于本发明。例如，包含有效DHA和ARA水平的Enfamil? LIPIL?是市售的，可在其中添加长双歧杆菌AH1206并用于本发明。
在一个实施方案中，DHA和ARA同时与长双歧杆菌AH1206组合施用。在此实施方案中，ARA：DHA的重量比可为约1:3至约9:1。在本发明的一个实施方案中，此比值为约1:2至约4:1。在还另一个实施方案中，此比值为约2:3至约2:1。在一个具体的实施方案中此比值为约2:1。在本发明的另一个具体的实施方案中，此比值为约1:1.5。在其他实施方案中，此比值为约1:1.3。在还其他实施方案中，此比值为约1:1.9。在一个具体的实施方案中，此比值为约1.5:1。在另一个实施方案中，此比值为约1.47:1。
在本发明的某些实施方案中，DHA水平为脂肪酸的以重量计约0.0%至1.00%范围内。DHA水平可为以重量计约0.32%。在一些实施方案中，DHA水平可为以重量计约0.33%。在另一个实施方案中，DHA水平可为以重量计约0.64%。在另一个实施方案中，DHA水平可为以重量计约0.67%。还在另一个实施方案中，DHA水平可为以重量计约0.96%。在另一个实施方案中，DHA水平可为以重量计约1.00%。
在本发明的实施方案中，ARA水平为脂肪酸的以重量计约0.0%至0.67%范围内。在另一个实施方案中，ARA水平可为以重量计约0.67%。在另一个实施方案中，ARA水平可为以重量计约0.5%。还在另一个实施方案中，DHA水平可为以重量计约0.47%至0.48%范围内。
如果包含，在本发明的一个实施方案中的DHA有效量一般为每公斤体重每天约3 mg至每公斤体重每天约150 mg。在本发明的一个实施方案中，所述量为每公斤体重每天约6 mg至每公斤体重每天约100 mg。在另一个实施方案中，所述量为每公斤体重每天约10 mg至每公斤体重每天约60 mg。还在另一个实施方案中，所述量为每公斤体重每天约15 mg至每公斤体重每天约30 mg。
如果包含，在本发明的一个实施方案中的ARA有效量一般为每公斤体重每天约5 mg至每公斤体重每天约150 mg。在此发明的一个实施方案中，所述量在每公斤体重每天约10 mg至每公斤体重每天约120 mg中变化。在另一个实施方案中，所述量在每公斤体重每天约15 mg至每公斤体重每天约90 mg中变化。还在另一个实施方案中，所述量在每公斤体重每天约20 mg至每公斤体重每天约60 mg中变化。
如果使用婴儿配制食品，婴儿配制食品中的DHA量可在约5 mg/100 kcal至约80 mg/100 kcal中变化。在本发明的一个实施方案中，DHA从约10 mg/100 kcal至约50 mg/100 kcal中变化；在另一个实施方案中，从约15 mg/100 kcal至约20 mg/100 kcal。在本发明的一个具体的实施方案中，DHA量为约17 mg/100 kcal。
如果使用婴儿配制食品，婴儿配制食品中的ARA量可在约10 mg/100 kcal至约100 mg/100 kcal中变化。在本发明的一个实施方案中，ARA量从约15 mg/100 kcal至约70 mg/100 kcal中变化。在另一个实施方案中，ARA量在从约20 mg/100 kcal至约40 mg/100 kcal中变化。在本发明的一个具体的实施方案中，ARA量为约34 mg/100 kcal。
如果使用婴儿配制食品，可使用本领域已知的标准技术在婴儿配制食品中添加含有DHA和ARA的油。例如，可通过等量替换配制食品中通常存在的油例如高油酸向日葵油来将DHA和ARA加入配制食品。在另一个示例中，可通过等量替换配制食品中通常存在的不含DHA和ARA的剩余全部脂肪混合物来将DHA和ARA加入配制食品。
如果使用，DHA和ARA来源可为本领域已知的任意来源例如海兽油（marine oil）、鱼油、单细胞油、蛋黄脂和脑脂。在一些实施方案中，DHA和ARA来源于单细胞Martek油、DHASCO?或其变种。如果LCPUFA来源的剩余物对婴儿不产生任意实质性有害作用，DHA和ARA可为天然形式。可选地，DHA和ARA可以精炼的形式使用。
在本发明的一个实施方案中，DHA和ARA来源为单细胞油，如在美国专利号5,374,567; 5,550,156和5,397,591中所教导的，这些公开在此以其整体引入作为参考。但是，本发明不仅仅局限于这些油。
在一个实施方案中，包含EPA的LCPUFA来源与长双歧杆菌AH1206组合使用。在另一个实施方案中，基本上不含有EPA的LCPUFA来源与长双歧杆菌AH1206组合使用。例如，在本发明的一个实施方案中，在含有少于约16 mg EPA/100 kcal的婴儿配制食品中添加长双歧杆菌AH1206并用于本发明的方法。在另一个实施方案中，在含有少于约10 mg EPA/100 kcal的婴儿配制食品中添加长双歧杆菌AH1206并用于本发明的方法。还在另一个实施方案中，在含有少于约5 mg EPA/100 kcal的婴儿配制食品中添加长双歧杆菌AH1206并用于本发明的方法。本发明的另一个实施方案包括甚至不含痕量EPA的添加长双歧杆菌AH1206的婴儿配制食品。
应当理解双歧杆菌AH1206和益生菌、益生素、LCPUFA或其他活性成分的组合可以单一制剂施用或以分开的制剂在相同或不同时间施用，并使用相同或不同的施用途径。
在本发明的一个实施方案中，制剂可用于免疫和接种方案。使用益生菌作为载体的口服免疫不仅能保护宿主免受感染，还可替代致病原正常引发的免疫刺激，因此有助于宿主的免疫培养（immunological education）。
在本发明的一个实施方案中，制剂在治疗、减轻和/或预防炎症中有作用。如本文所用，术语“治疗”指改善、改进或补救疾病、紊乱或疾病或病症的症状。术语“减轻”指在范围、量或程度上减少。术语“预防”指通过某种作用终止或阻碍疾病、紊乱或疾病或病症的症状。
在一个具体的实施方案中，本发明包含长双歧杆菌AH1206在制造用于减轻或预防婴儿或儿童中的炎症的组合物中的用途。实施例2-6每个显示施用长双歧杆菌AH1206可减轻或预防婴儿或儿童中的炎症。可在胃肠道、呼吸道中降低或预防炎症，或可系统地减轻炎症。减轻或预防炎症可改善过敏或气喘。
在此实施方案中，炎症可为呼吸系统炎症，例如气喘、过敏性鼻炎、鼻窦炎、气道组织炎症、上呼吸道感染、流感、喉炎、呼吸道合胞病毒、气管炎、支气管炎、肺炎或气道腔炎症。类似地，炎症可为胃肠系统炎症，例如腹泻、炎性肠病、克罗恩病（Crohn's disease）、肠炎、溃疡性结肠炎、过敏性结肠炎、肠易激综合症、憩室炎、感染后结肠炎、艰难梭菌（Chlostridium difficile）相关性腹泻、轮状病毒相关性腹泻、或感染后腹泻，或由于感染原(infectious agent)例如大肠杆菌引起的腹泻疾病。在其他实施方案中，炎症可为系统性的，例如风湿性关节炎。如本文所用，术语“系统性的”指涉及或影响整个身体。
在一些实施方案中，炎症的减轻或预防可改善或预防特应性病症或疾病。例如，炎症的减轻或预防可改善或预防特应性皮炎。在一个具体的实施方案中，炎症的减轻或预防可改善或预防常见婴儿或儿童期疾病。例如，炎症的减轻或预防可改善或预防腹泻或急性中耳炎。还在另一个实施方案中，炎症的减轻或预防可改善或预防食物过敏。
认为长双歧杆菌AH1206通过拮抗和排除来自胃肠道或炎症部位的促炎性微生物起作用。还认为长双歧杆菌AH1206通过降低促炎性细胞因子的水平起作用。
在一个具体的实施方案中，菌株可改变受试者的IL-10水平。IL-10由T细胞、B细胞、单核细胞和巨噬细胞产生。此细胞因子增加B细胞的增殖及B细胞至抗体分泌细胞的分化。IL-10主要展示了抗炎症活性。其通过单核细胞上调IL-1RA的表达，并抑制大部分的单核细胞炎症活性。IL-10通过反馈机制抑制单核细胞产生的细胞因子、活性氧和氮中间体、II类主要组织相容性复合物（MHC）的表达、杀死寄生物（parasite killing）和IL-10的产生。还已显示此细胞因子通过干预前列腺素E2-环腺苷单磷酸（PGE2-cAMP）依赖途径来阻断单核细胞产生肠胶原酶和IV型胶原酶，因此其可能是在慢性炎症疾病中所见的结缔组织破坏的重要调节子。因此，在一个实施方案中，菌株可在食用菌株的婴儿或儿童中上调IL-10水平或诱导IL-10的分泌。
在其他实施方案中，长双歧杆菌AH1206下调或降低TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5和/或 IFN-γ或其他促炎性细胞因子或趋化因子的分泌。促炎性细胞因子TNF-α起始引起炎症状态的细胞因子和生物效应的级联反应。在一些实施方案中，施用长双歧杆菌AH1206可提高T调节性细胞的百分比。在其他实施方案中，施用长双歧杆菌AH1206抑制OVA特异性IgE反应的诱导。
在一些实施方案中，本发明的制剂对维持免疫系统的体内稳态有作用。在其他实施方案中，本发明的制剂对改善或增强受试者的免疫力有作用。
在一些实施方案中，免疫力的增强或炎症的抑制可包括刺激肠完整性；降低肠渗透性；改善粘蛋白的合成、分泌和/或质量；改善肠上皮的成熟和分化；改善营养吸收；增加传递抗微生物活性的可溶因子的产生；刺激、改善或支持对感染的抵抗力；支持针对病毒或细菌感染的细胞或体液反应；提高的细胞毒性（抗病毒和抗肿瘤）；支持系统和/或粘膜的接种反应；提高或支持细胞和/或体液免疫；提高或支持天然免疫（包括嗜中性粒细胞、吞噬细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞活性）；提高或支持适应性T和B细胞免疫力；刺激辅助性T细胞1（Th1）的细胞因子模式（提高的IL-1、IL-2、IFN-γ、 IL-12、TNF-α；人白细胞抗原-Dr（HLA-Dr）表达）；抑制炎症或产生系统和粘膜的炎症介质(mediator)（包括细胞因子和/或趋化因子）；通过降低总的和/或过敏原-特异性的IgE来降低致敏；降低过敏性细胞因子的产生；降低Th2支持的免疫球蛋白谱；及其组合。
遍及广泛肿瘤类型范围的多功能细胞因子的产生提示在癌症患者中发生了显著的炎症反应。因此，在本发明的一个实施方案中，长双歧杆菌AH1206可在治疗癌症症状中有作用。由于长双歧杆菌AH1206的抗炎症性能，此细菌菌株可降低恶性细胞转化的速率。此外，肠细菌可从膳食化合物中产生具有基因毒性的、致癌的和促肿瘤活性的物质，肠细菌可将原致癌物活化为DNA反应剂。一般地，与其他肠内种群例如类杆菌、真细菌和梭菌相比，双歧杆菌物种具有低的异生物质代谢酶活性。因此，在肠内提高双歧杆菌细菌的数量可有益地改变这些酶的水平。
在具体的实施方案中，长双歧杆菌AH1206可与抗炎症疗法例如非类固醇抗炎症药物（NSAID）或英夫利昔单抗组合施用。
婴儿肠微生物群在出生后最初几周内迅速建立。该肠内定居的特性最初由早期暴露于环境微生物源和婴儿的健康决定。经剖宫手术出生的婴儿、早产或其他在无菌保育箱中度过生命最初部分的婴儿，和/或在生命早期施用抗生素的婴儿可能在健康肠微生物群的发育上显著延迟。因为这些婴儿没有机会从他们的母亲或环境处获得健康的肠微生物群，食用长双歧杆菌AH1206可对肠免疫系统的适当发育和功能起有益作用。
在本发明的一些实施方案中，婴儿或儿童需要治疗、减轻或预防炎症。由于遗传倾向、饮食、生活方式、疾病或紊乱，受试者可能具有患炎症的风险。例如，早产或免疫抑制的婴儿可能具有患炎症的风险，因此可能需要这些治疗、减轻或预防。
本发明的组合物可包装进本领域已知的用于贮存营养产品的任意种类容器，例如玻璃、带内衬的纸板（lined paperboard）、塑料和带涂层的金属罐。在一些实施方案中，组合物经吹瓶-灌装-封口（blow-fill-seal）包装技术包装。在其他实施方案中，在单剂量容器中提供组合物。组合物的包装可在无菌条件下进行。在一些实施方案中，制备组合物以使其可接受用于经鼻饲管、鼻十二指肠管或鼻空肠管直接递送至早产婴儿。
本发明的组合物可为耐贮存（shelf stable）的。“耐贮存”指可即食形式的组合物维持单一均相（即在肉眼检查下不分离为多于1相），和/或在冰箱中贮存过夜后在肉眼检查下没有出现沉淀物。
以下实施例描述了本发明的各种实施方案。在考虑了如本文公开的说明书或本发明的实施后，在本文的权利要求范围内的其他实施方案对本领域技术人员来说是显而易见的。说明书和实施例旨在被认为是仅示例性的，本发明的范围和精神在实施例部分之后的权利要求书中指明。在实施例中，除非另外说明，所有百分比均基于重量给出。
实施例1
此实施例说明从婴儿粪便中分离的细菌的表征。
益生菌的分离
从2天大母乳喂养的男婴处取得新鲜粪便，将连续稀释液在添加0.05%半胱氨酸和莫匹罗星的TPY（胰蛋白酶解酪蛋白、蛋白胨和酵母提取物）和MRS（deMann, Rogosa和 Sharpe）培养基上涂板。平板在厌氧培养罐（BBL, Oxoid）中使用CO2生成试剂盒(Anaerocult A, Merck)在37℃孵育2-5天。对革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的杆状或二分叉/多形细菌分离物在复合非选择性培养基（MRS和TPY）上划线纯化。除非另外说明，分离物在MRS或TPY培养基上于37℃在厌氧条件下进行常规培养。在40%甘油中储存推测的双歧杆菌并贮存于-20℃和-80℃。
在分离了纯双歧杆菌菌株后，将其命名为AH1206，评估了其微生物特征并总结于下表1。AH1206为革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的多形细菌，其果糖-6-磷酸磷酸酮酶阳性证明其身份为双歧杆菌。使用添加单一碳源的最低限度培养基，AH1206能够在所有检测的碳源(葡萄糖、乳糖、核糖、阿拉伯糖、半乳糖、蜜三糖、果糖、麦芽提取物、甘露糖、麦芽糖、蔗糖)上生长。
表1. 长双歧杆菌AH1206的物化特征
Figure 992821DEST_PATH_IMAGE001
* 代表果糖-6-磷酸磷酸酮酶试验。
物种鉴定
进行了16s基因间的间隔区（IGS）测序以鉴定分离的双歧杆菌的物种。简言之，使用100 μl提取液和25 μl组织制备液（Sigma, XNAT2试剂盒）从AH1206中分离DNA。样品在95℃孵育5分钟，之后加入100 μl中和液（XNAT2试剂盒）。使用Nanodrop分光光度计定量基因组DNA溶液并将其储存于4℃。使用IGS引物进行PCR，基于SEQ ID NO. 1的IGS L: 5’-GCTGGATCACCTCCTTTC-3’ (SEQ ID No. 3)和基于SEQ ID NO. 2的IGS R: 5’-CTGGTGCCAAGGCATCCA-3’ (SEQ ID No. 4)。循环条件为94℃ 3分钟 (1个循环), 94℃ 30秒, 53℃ 30秒, 72℃ 30秒 (28个循环)。PCR反应包含4 μl (50ng) DNA, PCR混合物(XNAT2试剂盒), 0.4 μM IGS L和R引物 (MWG Biotech, Germany)。PCR反应在Eppendorf温度循环器上进行。PCR产物（10 μl）与分子量标记（100bp Ladder, Roche）在2%琼脂糖EtBr染色的胶上在TAE中电泳以确定IGS谱。使用Promega Wizard PCR纯化试剂盒纯化双歧杆菌PCR产物（单带）。纯化的PCR产物使用基因间的间隔区的引物序列（见上）进行测序。之后将序列数据在美国国家生物技术信息中心（NCBI）核苷酸数据库中检索以通过核苷酸同源性确定菌株身份。将得到的DNA序列数据输入NCBI标准核苷酸至核苷酸同源性BLAST搜索引擎(http//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)。鉴定出与序列最近的匹配，之后使用DNASTAR MegAlign软件比对序列进行比较。可在序列表中查看得到的序列，其中SEQ ID NO. 1是IGS正向序列，SEQ ID NO. 2是IGS反向序列。检索NCIMB数据库说明AH1206具有与长双歧杆菌序列同源性最近序列的唯一的IGS序列。表3的序列表的纸件和计算机可读格式已在此一起提交，在此以其整体引入作为参考。磁盘中的计算机可读文件名为AH1206_ST25.txt，大小：2 KB，创建于2008年9月12日。
为了建立AH1206的条码PCR谱，使用BOX引物进行PCR。循环条件为94℃ 7分钟 (1个循环); 94℃ 1分钟, 65℃ 8 分钟, (30个循环)和65℃ 16分钟。PCR反应包含50 ng DNA, PCR混合物(XNAT2试剂盒)和0.3 μM BOXA1R引物(5’- CTACGGCAAGGCGACGCTGACG-3’) (SEQ ID No. 5) (MWG Biotech, Germany)。PCR反应在Eppendorf温度循环器上进行。PCR产物（1 μl）与分子量标记(DNA 7500 ladder, Agilent, Germany)一起电泳，在Agilent 2100生物分析仪(Agilent, Germany)上使用DNA 7500 LabChip?进行。使用Agilent生物分析仪软件测定条码（PCR产物谱），在其中鉴定峰数（PCR产物）和大小（图1）。
抗生素敏感性谱
使用“圆盘（disc）敏感性”试验测定长双歧杆菌菌株的抗生素敏感性谱。培养物在合适的肉汤培养基中生长24-48小时，涂板（100μl）于琼脂培养基，将含有已知浓度抗生素的圆盘放置在琼脂上。在厌氧条件下于37℃孵育1-2天后检查菌株的抗生素敏感性。如果观察到1mm或更大的抑制区则认为菌株是敏感的。独立评估了各抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。克林霉素、万古霉素和甲硝唑的MIC分别为0.32, 0.75和0.38。
肠通过（intestinal transit）
为确定长双歧杆菌是否与在胃中发现的那些细菌一样能够在低pH值下存活，将从新鲜过夜培养物中收获的细菌细胞在磷酸缓冲液（pH 6.5）中洗涤2次，并重悬于pH调节至2.5的TPY肉汤（用1M HCl）。在37℃孵育细胞，在5、30、60和120分钟的时间间隔测量存活数，使用平板计数法进行。在pH2.5时AH1206可良好地存活5分钟，而30分钟后没有回收到活细胞。
离开胃后，推测的益生菌将在小肠中暴露于胆汁盐。为了确定长双歧杆菌在暴露于胆汁下的存活能力，将培养物在添加0.3% (w/v)、0.5%、1%、2%、5%、7.5%或10%猪胆汁的TPY琼脂板上划线。在含有高达1%胆汁的板上观察到长双歧杆菌AH1206的生长。
在鼠科模型中评估了长双歧杆菌AH1206通过胃肠道的能力。小鼠每天食用1x109 AH1206，检查粪球中喂食的微生物的存在。通过分离双歧杆菌的自发性利福平抗性变体可容易地检测AH1206。使用加入利福平的TPY平板评估通过并确保仅培养了喂食的利福平抗性双歧杆菌。每天收集粪便样品，证实长双歧杆菌通过胃肠道（图2）。
抗微生物活性
在此研究中使用的指示致病微生物在以下培养基和以下生长条件下增殖：鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）（37℃，需氧）在添加0.6%酵母提取物（TSAYE, Oxoid）的胰蛋白胨大豆肉汤/琼脂中，空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）(37℃, 厌氧)和大肠杆菌（E. coli）O157:H7 (37℃, 厌氧)在血液琼脂培养基中，艰难梭菌（Clostridium difficile）(37℃, 厌氧)在强化的梭状芽胞杆菌培养基（RCM，Oxoid）中。在用于试验前，所有菌株接种至新鲜的培养基中并培养过夜。
抗微生物活性使用延迟法检测。简言之，孵育长双歧杆菌AH1206 36-48小时。将10倍连续稀释液在TPY琼脂培养基上涂板（100μl）。过夜孵育后，在具有明显菌落的平板上覆盖指示细菌。用2%(v/v)过夜指示培养物接种熔化的覆盖层来制备指示菌苔，将其倾倒至接种的TPY平板表面。在适于指示细菌生长的条件下再次孵育平板过夜。认为具有大于1mm半径抑制区的指示培养物是对检测细菌敏感的。长双歧杆菌AH1206抑制所有检测的致病微生物的生长，对鼠伤寒沙门氏菌、空肠弯曲杆菌、大肠杆菌O157:H7 和艰难梭菌的抑制区的清楚测量分别为14、>80、13.33和17 mm。
实施例2
此实施例说明PBMC响应长双歧杆菌AH1206的细胞因子产生。PBMC从健康捐献者中通过密度梯度离心分离。用益生细菌菌株刺激PBMC，在37℃进行72小时。此时，将培养上清收集、离心、等分并贮存于-70℃直至使用流式微球阵列(BD BioSciences)评估IL-10水平。AH1206诱导人PBMC的抗炎症细胞因子IL-10的显著分泌，表明此菌株可用于体内的抗炎症剂（图3）。作为抗炎症剂，其可用于降低和预防人的炎症。
实施例3
此实施例说明长双歧杆菌AH1206在鼠类气喘模型中对减轻呼吸疾病的影响。此研究使用过敏性气道炎症的Balb/c OVA-敏化小鼠模型。通过腹腔注射OVA敏化小鼠，通过鼻内OVA攻击起始疾病。最后一次攻击后24小时（第15天），测量小鼠的气道响应性，之后进行BAL程序。OVA敏化的、盐水攻击小鼠作为对照。从第1天开始（即第一次OVA敏化时），动物连续14天通过喂食针接受长双歧杆菌AH1206。喂食MRS肉汤的动物作为对照。
通过BAL液中的炎症细胞计数评估气道炎症。通过离心将细胞从BAL液中去除，将细胞重悬于磷酸缓冲盐溶液中（1 ml）。BAL细胞用台盼蓝染色，使用血球计数仪计数活细胞。使用Cytospin (Thermo Shandon, Pittsburgh, PA)制备BAL细胞涂片，使用HEMA 3试剂(Biochemical Sciences, Swedesboro, NJ)染色用于不同细胞的计数，其中每次灌洗共计数200个细胞。与安慰剂相比，食用长双歧杆菌AH1206显著降低了总BAL计数，此差别主要在嗜酸粒细胞群中观察到（图4）。
重复进行此研究以进一步研究益生细菌菌株长双歧杆菌AH1206是否在过敏性气道炎症的OVA-敏化小鼠模型中抑制过敏性反应。简言之，在第0天和第6天经腹腔注射OVA敏化成年雄性BALB/c小鼠。在第12天和第14天，用OVA经鼻内攻击小鼠。最后一次攻击（第15天）后24小时，测量小鼠的气道反应性，之后进行BAL程序。OVA/铝敏化的、盐水攻击小鼠作为对照。动物在试验中始终接受益生菌或安慰剂。通过BAL液中的炎症细胞计数评估气道炎症（细胞因子和细胞计数）。也使用Buxco全身容积记录器测量气道响应性。从OVA敏化的小鼠中也分离了脾细胞并在抗CD3和抗CD28抗体存在下孵育，之后通过流式细胞仪测量了上清中的细胞因子水平。
与喂食肉汤的动物相比，长双歧杆菌AH1206处理引起在OVA攻击后从BAL液中回收的细胞显著减少（图5）。测量了气道反应性，与用盐水攻击的小鼠相比，OVA敏化小鼠显示了对乙酰甲胆碱增强的气道高反应性（AHR）。然而通过评估增强的呼吸间歇的改变，没有观察到对此乙酰甲胆碱增强的气道反应性的调节（图6）。
通过流式微珠阵列（cytometric bead array）测量BAL细胞因子水平，未发现IL-10、IFN-γ、IL-6和CCL2的水平有显著差别。与OVA对照相比，AH1206显著降低了TNF-α水平（图7）。
在体外OVA或抗CD3抗CD28刺激后，通过流式微珠阵列（CBA）定量了脾细胞上清中的细胞因子水平。在喂食AH1206的小鼠中，未观察到伴随体内OVA敏化的、OVA刺激的脾细胞中IL-10释放的提高。 IL-6、TNF和MCP-1 (CCL2)水平没有显著差异。在喂食AH1206的小鼠中，CD3/CD28脾细胞的IL-10释放没有提高。然而，在喂食AH1206的动物脾细胞培养上清中，促炎性细胞因子TNF-α和IFN-γ的分泌显著降低(图8)。未发现测量的其他细胞因子的显著变化。
实施例4
此研究的目的是研究益生细菌长双歧杆菌AH1206是否在OVA诱导的过敏小鼠模型中抑制过敏性反应。将BALB/c小鼠分组（8只/组）并喂食4周安慰剂、长双歧杆菌AH1206或蒸馏水。除蒸馏水组中的1组仅口腔喂食300μl PBS作为对照以外，所有小鼠经口腔每周喂食溶于300μl磷酸缓冲盐溶液（PBS）的卵清蛋白和霍乱毒素。处理4周后，经面部静脉穿刺收集各个小鼠的血液样品，之后进行酶联免疫吸附试验（ELISA）测量OVA特异性IgE水平。分离脾和肠系膜淋巴结细胞并在体外用LPS、抗CD3/CD28和免疫优势OVA肽刺激。通过细胞计数的CBA测量Th1和Th2细胞因子。
与安慰剂和阳性对照组相比，在AH1206喂食组中诱导出显著更少的OVA特异性IgE（图9）。阴性对照组和AH1206喂食组没有差异，表明AH1206的喂食完全防止了OVA特异性IgE反应的诱导。此实施例进一步表明施用AH1206可预防在人中的炎症发作。使用不配对T检验计算统计数字。
从喂食益生菌、安慰剂和蒸馏水的BALB/c小鼠中分离脾细胞，不刺激或用脂多糖（LPS）、抗CD3/CD28或免疫优势OVA肽刺激，之后通过Th1/Th2流式微珠阵列分析TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-5的细胞因子产生。细胞因子的结果总结于表2。
表2 细胞因子总结
未刺激的脾细胞
菌株 TNF-α IL-2 IFN-γ IL-4 IL-5
AH1206
LPS刺激的脾细胞
Figure 606205DEST_PATH_IMAGE002
抗CD3/CD28刺激的脾细胞
Figure 405534DEST_PATH_IMAGE003
rt=相对于
NC=阴性对照（喂食水，PBS攻击）
PC=阳性对照（喂食水，OVA和CT攻击）。
在未刺激的脾细胞中，与对照动物相比未观察到变化。与阴性对照相比，喂食AH1206的动物中LPS刺激的脾细胞的TNF-α和 IFN-γ释放显著更高，但这些水平与OVA敏化的和施用霍乱毒素的阳性对照中观察到的那些一致。CD3/CD28刺激显示在喂食益生菌的组中淋巴细胞信号转导的巨大变化。喂食AH1206的动物与阳性对照相比分泌显著更少的TNF-α，但与阴性对照相比TNF-α水平较高（图10）。喂食AH1206的动物与没有喂食益生菌的阳性对照相比具有显著更低的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5水平。
实施例5
此研究研究了在健康小鼠中食用益生菌对调节性T细胞数目和活性的影响。对BALB/c小鼠（10只/组）喂食3周长双歧杆菌AH1206或安慰剂。食用益生菌/安慰剂之后，分离CD4+CD25+ T调节性细胞并通过流式细胞仪测量抗CD3/CD28刺激的CFSE标记的CD4+应答T细胞的增殖以测定它们的体外抑制活性。CD4+应答T细胞与CD4+CD25- T细胞共孵育作为对照。在喂食益生菌或安慰剂的小鼠脾中测量了也为FoxP3阳性的CD4+CD25+细胞（调节性T细胞）在鼠脾细胞中的百分比。
将与喂食益生菌/安慰剂的小鼠的CD4+CD25+细胞共孵育时增殖的CD4+细胞百分比和与相同试验小鼠的CD4+CD25-细胞共孵育时增殖的CD4+细胞百分比相比较。在每种情况下，与单独含有CD4细胞并去除CD25+细胞的培养物相比，含有CD4+CD25+细胞的培养物中的T细胞增殖较少（图11）。
测定了在CD4+群中也为CD25+的细胞百分比（图12）。喂食长双歧杆菌AH1206的组比喂食安慰剂的对应组具有显著更多的也为CD25+（即T调节性细胞）的CD4+ T细胞(p= 0.0081)。这提示通过喂食AH1206，在CD4+群中的T调节性细胞的百分比显著提高。此结果表明施用AH1206可减轻或预防人体内的炎症。
也测定了喂食益生菌或安慰剂的小鼠的所有脾细胞群中的CD4+CD25+FoxP3+细胞的数量。与喂食安慰剂或未喂食的小鼠相比，喂食益生菌的小鼠脾中表达FoxP3的CD4+CD25+ T调节性细胞的数量没有变化。
实施例6
购买6周龄的无菌小鼠，在UCC的生物服务单位的无菌单位中饲养。动物食用14天益生菌株长双歧杆菌AH1206或保持无菌。通过流式细胞仪评估T调节性细胞的诱导。
喂食AH1206后，喂食AH1206的无菌动物脾中的CD4+CD25+Foxp3+细胞的数量显著提高（图13）。此结果再次表明施用AH1206可减轻或预防人体内的炎症。总CD3/CD4或CD3/CD8计数保持不变。
实施例7：稳定性结果
在30℃下用3个月时间评估益生菌株AH1206的稳定性（图13）。结果表明在检测期中LGG表现很差，在3个月时间内降低了2个log，而AH1206十分稳定，在此期间没有记录活力的丧失。
在此说明书中引用的所有参考文献，包括但不限于所有论文、出版物、专利、专利申请、产品介绍（presentation）、教科书、报告、手稿、小册子、书、互联网发布、杂志文章和学术期刊在此以其整体引入此说明书作为参考。本文对参考文献的讨论仅仅旨在总结其作者的主张，不承认任意参考文献构成现有技术。申请人保留对所引用的参考文献的准确性和相关性质疑的权利。
在不背离本发明的精神和范围（更具体的阐述于所附权利要求中）的前提下，本领域普通技术人员可对本发明实施这些或其他修改和改变。此外，应当理解不同实施例的方面可以整体或部分互换。而且，本领域普通技术人员将理解，前面的描述仅为示例性的而无意这样限制在这些所附权利要求中进一步描述的发明。因此，所附权利要求的精神和范围不应当被其中包含的描述形式限制。
序列表
 
<110>  Russell, Michael
       Ceddia, Michael
 
<120>  益生菌婴儿产品
 
 
<130>  MJE00254
 
<160>  5    
 
<170>  PatentIn version 3.5
 
<210>  1
<211>  488
<212>  DNA
<213>  长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）
 
 
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cgtnttgntt gngtncacta tncagttttn aagccaccac gcaccancac gccgtncgga      240
 
cgggaccagc ccgncatnag gnacgatggg catngaatcg cgccnggnca aancctgggg      300
 
tggcgatncg ggagcccaaa agcgcatnca caccactncc gcggaacatt ccacgacgga      360
 
cgcnccgnaa gnccatgatn tttttcacac cagcagcccc aagncgccgc gactgncgcg      420
 
acgccngggc tcgcaccgnc ggacgaacat ncggccgtat tntncgtana aaggaggtat      480
 
cccancaa                                                               488
 
 
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agtggtgtgg atgcgctttt gggctcccgg atcgccaccc caggctttgg cctggcgcga      180
 
ttcgatgccc atcgtgcctg atggcgggct ggtcccgtcc ggacggcgtg gtggtgcgtg      240
 
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<213>  未知
 
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<223>  合成的
 
<400>  3
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<212>  DNA
<213>  未知
 
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<223>  合成的
 
<400>  4
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<210>  5
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<212>  DNA
<213>  未知
 
<220>
<223>  合成的
 
<400>  5
ctacggcaag gcgacgctga cg                                                22

Claims (15)

1.婴儿配制食品，其包含蛋白质来源、脂肪来源、碳水化合物来源和长双歧杆菌（B. Longum）AH1206。
2.权利要求1的婴儿配制食品，其中所述婴儿配制食品包含每克婴儿配制食品约1×104 cfu至约1×1010 cfu范围的长双歧杆菌AH1206。
3.权利要求1的婴儿配制食品，其中所述长双歧杆菌AH1206为存活的。
4.权利要求1的婴儿配制食品，其中所述长双歧杆菌AH1206为非存活的。
5.权利要求1的婴儿配制食品，其还包含另外的益生菌。
6.权利要求5的婴儿配制食品，其中所述另外的益生菌包含LGG。
7.权利要求1的婴儿配制食品，其还包含益生素。
8.权利要求7的婴儿配制食品，其中所述益生素选自乳果糖、寡葡萄糖、菊粉、聚葡萄糖、寡半乳糖、寡果糖、寡异麦芽糖、大豆寡糖、乳果糖、寡木糖和寡龙胆糖。
9.权利要求1的婴儿配制食品，其还包含至少一种LCPUFA。
10.权利要求1的婴儿配制食品，其还包含ARA和DHA。
11.儿童营养产品，其包含蛋白质来源、脂肪来源、碳水化合物来源和长双歧杆菌AH1206。
12.减轻或预防婴儿或儿童中的炎症的方法，其包括对所述婴儿或儿童施用长双歧杆菌AH1206。
13.权利要求12的方法，其中所述炎症的减轻或预防改善过敏。
14.权利要求12的方法，其中所述炎症的减轻或预防改善气喘。
15.权利要求12的方法，其中所述炎症的减轻或预防改善选自腹泻、呼吸道感染和中耳炎的疾病。
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