CN101810560B

CN101810560B - 环孢a聚合物胶束组合物

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Publication number: CN101810560B
Application number: CN2009100781804A
Authority: CN
Inventors: 刘艳; 李馨儒; 周艳霞; 张燕惠
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2009-02-20
Filing date: 2009-02-20
Publication date: 2013-07-10
Anticipated expiration: 2029-02-20
Also published as: CN101810560A

Abstract

本发明涉及一种环孢A聚合物胶束组合物。该组合物包含环孢A，还含有两亲性嵌段共聚物构成的聚合物胶束。本发明组合物制备方法简单，并可提高环孢A口服的生物利用度，延长环孢A注射时在血液中的循环时间。该组合物可使环孢A用于口服给药，并也可用于注射给药。

Description

环孢A聚合物胶束组合物

技术领域

本发明涉及一种用于口服的环孢A聚合物胶束组合物，该组合物也可用于注射给药。

背景技术

随着现代医学的发展，器官移植也取得了飞快的发展，然而器官移植会产生强烈的免疫抑制反应，这就促进了免疫抑制剂的发展。基础研究的不断深入，对器官移植临床发展起了积极的推动作用。人类基因组计划研究结果，将会对免疫应答的了解提供更完整的信息，并提供干预的机会和方法。蛋白组计划的发展从分子生物学角度使临床移植水平得到提高，有可能对免疫应答的调节提供更全面的理解。通过对细胞因子和其他基因的多态性研究，有可能确定高或低免疫反应者的基因型，为合理应用免疫抑制剂提供依据。

环孢霉素A(Cyclospor ine A，CyA)是含11个氨基酸的亲脂性环状多肽，分子量为1203D，是一种强效免疫抑制药，主要用于器官移植或组织移植后排异反应的防治和自身免疫性疾病的治疗。由于环孢素A分子量较大，难溶于水，容易被肠道黏膜和肝脏P4503A4酶系降解，而且CyA是小肠黏膜P-glycoprotein的底物，上述因素致使CyA口服生物利用度较低(10％-60％)，口服吸收不规则。Sandoz公司研制的CyA微乳制剂新山地明(Sandimmune Neoral)口服后遇胃肠道消化液可以自乳化形成粒径30nm左右的微乳，能够显著增加CyA的口服吸收(平均生物利用度较山地明高29％)，降低患者间的个体差异，减小胃肠道生理因素CyA口服吸收的影响。但其处方中含有较高剂量的表面活性剂CremophorRH40，有报道称Cremophor RH40具有肾脏毒性，并容易引起过敏反应。

张强等(张强，叶国庆等.环孢素A硬脂酸纳米球的实验研究.药学学报，1999，34(4)：308-312)应用熔化-匀化法，采用了硬脂酸、卵磷脂、泊洛沙姆制备了环孢素A硬脂酸纳米粒，粒径为316.1nm，包封率为88.36％，载药量为8.98％，以市售新山地明为对照，大鼠口服的相对生物利用度为79.77％。但该纳米粒的粒径大，粒径分布不均匀，制备工艺复杂，相对生物利用度较低。

戴俊东等(戴俊东，王学清，等.环孢素A pH敏感性纳米粒的制备与大鼠口服药代动力学.药学学报，2004，39(12)：1023-1027)应用改良的乳化-溶剂扩散技术制备了CyA pH敏感性纳米粒，制备过程中采用了Pluronic F68、Eudragit、无水乙醇为材料。所制备的纳米粒粒径为100nm左右，包封率＞90％，载药量约为20％，以市售新山地明为对照，四种不同Eudragit载体材料所制备的纳米粒大鼠灌胃给药后，均与新山地明生物等效。但此文献所采用的制备工艺复杂，而且较高浓度的Eudragit具有细胞毒性。

王学清等(王学清，戴俊东，等.环孢素A-羟丙甲纤维素酚酞酯纳米粒的大鼠相对生物利用度.药学学报，2004，39(6)：463-466)应用溶剂扩散法制备了环孢A羟丙甲纤维素酚酞(HPMCP)纳米粒，粒径为50nm，包封率为97％，以市售新山地明为对照，大鼠口服的相对生物利用度为82.3％，119.6％。但该纳米粒为高度分散的热力学不稳定体系，在贮存过程中易发生粒子的聚集和沉降。

王学清等(王学清，张涛，等.环孢素A聚乳酸纳米粒胶体的制备与大鼠生物利用度的测定.药学学报，2004，39(1)：68-71)和黎洪珊等(5黎洪珊，赵京玲.环孢菌素A聚乳酸纳米粒胶体的制备和大鼠的口服吸收.中国药学杂志，1999，34(8)：532-536)分别应用溶剂-非溶剂法制备了环孢A聚乳酸纳米粒，以市售新山地明为对照，大鼠口服的相对生物利用度分别为101.6％和112.39％。但该纳米粒的制备工艺复杂，为高度分散的热力学不稳定体系，在贮存过程中易发生粒子的聚集和沉降，而且粒径很不均匀，会造成吸收不稳定。

CN1239432A公开了包含环孢菌素和阴离子型表面活性剂的固体药物组合物，采用固体混合技术制备了包含环孢菌素和阴离子性表面活性剂的固体药物组合物，达到了与新山地明生物等效的效果。但表面活性剂月桂醇硫酸钠的用量高达环孢A的80％，毒性和对胃肠道的刺激性大。

CN1418703A公开了供口服的纳米粒给药系统，采用溶剂-非溶剂法制备了环孢素A的口服肠溶性纳米粒，以市售新山地明为对照，相对生物利用度为82.4％，119.6％。但处方和工艺复杂，不适于工业化生产。

CN1128671A公开了含环孢菌素的软胶囊组合物，制备了含有环孢素A的微乳浓缩液的软胶囊，与市售新山地明生物等效，解决了新山地明中乙醇易挥发的问题。但处方复杂并含有大量的表面活性剂，对胃肠道具有刺激性。

因此，仍需要研制出一种处方和制备工艺简单、适于工业化生产、稳定性好、安全性好、生物利用度高的适于口服和注射的环孢A组合物。

嵌段共聚物胶束具有良好的生物相容性，可以通过独立的聚合物单元进行分子间络合，在一定条件下可重新解离为独立的嵌段链，而且目前研究中采用的共聚物，大多具有生物相容性和生物可降解性，便于从机体内清除；通过内核的疏水区域增溶水难溶性药物而使其溶解度增加；处于胶束内核中的药物由于被很好地隔离起来，所以不会与体内的生物环境相互作用，从而延缓了药物的降解，并减少了不良副反应发生的机会；作为口服药物的载体，可以减少药物在胃肠道被代谢，增加药物的吸收；胶束粒径可以小至几十纳米，可以增加药物在小肠上皮的黏附延长药物的作用时间，改善吸收；两亲性的高分子聚合物具有非常低的临界胶束浓度，在体内十分稳定。

发明内容

一方面，本发明提供一种环孢A的聚合物胶束组合物。

另一方面，本发明提供环孢A的聚合物胶束组合物用于口服给药的用途，也可用于注射给药。

根据本发明的一个方面，其提供一种用于口服和注射的环孢A的聚合物胶束组合物，其包含环孢A和两亲性的嵌段共聚物构成的胶束。

本发明还涉及制备聚合物胶束组合物的方法，该方法选自透析法、薄膜分散法、乳化法、溶剂挥发法、冻干法、共溶剂挥发法、注入法等。胶束的平均粒径在200nm以下。

本发明组合物可根据任何常规方法配制成各种制剂，例如口服液、片剂、胶囊剂、注射剂等。

本发明组合物可用于制备防治器官移植或组织移植后排异反应和治疗自身免疫性疾病等相关疾病的药物。

本发明组合物用于制备治疗上述疾病的药物可通过口服和注射途径给药。优选口服给药。

本发明组合物包括作为活性成分的环孢A，还包括由两亲性嵌段共聚物构成的胶束。本发明的组合物使环孢A的口服生物利用度大大提高，并使环孢A注射后在血中的循环时间延长。本发明组合物中的环孢A的代表性例子是环孢A和其变异体。本发明组合物中的环孢A至少是其中的一种，本发明组合物中环孢A与嵌段共聚物的重量比为1∶100-1∶1，优选1∶10-1∶4。

两亲性嵌段共聚物是构成本发明组合物中胶束的主要成分。可在本发明中使用的两亲性嵌段共聚物包含选自下述的亲水链段：聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯(PEO)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚醚(如Pluronic，Poloxamer)等。优选聚乙二醇。聚乙二醇为聚乙二醇或聚乙二醇单甲醚，具有1000-20000Da的分子量，优选2000Da-6000Da。在本发明中使用的两亲性嵌段共聚物包含选自下述的疏水链段：聚氧丙烯、磷脂、磷脂衍生物、聚酯、聚氨基酸等，如聚赖氨酸、聚门冬氨酸、聚(N-麦芽糖酰-L-赖氨酸)、聚精氨酸、聚乳酸(PLA)、聚(N-硬脂酸苄酯-L-赖氨酸)、聚油酸乙烯酯、聚乙交酯、聚己内酯、聚乙交酯丙交酯(PLGA)等。另外也有不可降解的聚苯乙烯、聚异丙基丙烯酰胺(PIPAA)等疏水链段。优选聚酯。优选PLA和PLGA，更优选PLA。两亲性嵌段共聚物是二嵌段共聚物和三嵌段共聚物和/或它们的混合物。

另外，本发明的组合物还包括任选的药学上可接受的添加剂。

为了达到本发明的目的，本发明进行了经大鼠口服本发明组合物的药代动力学试验。

附图说明

参考附图1和2，通过本发明的以下描述，本发明的上述及其它目的和特征将是显而易见的。附图1显示了本发明实施例1的粒径分布。附图2显示了本发明实施例1和市售新山地明软胶囊口服给药的药时曲线。

如上所述，本发明的组合物使环孢A经口服给药的生物利用度显著提高，并略高于市售新山地明软胶囊。

以下实施例用于进一步详细说明本发明，但绝对不是对本发明范围的限制。

具体实施方式

实施例1：口服液的制备

将25.00mg的PEG5000-PLA2500与5.00mg的环孢素A充分溶解于适量的甲醇中，旋转蒸干甲醇后，加入水进行水化，经0.45μm的微孔滤膜过滤得胶束组合物。

然后将其灌装在西林瓶中，加盖，密封，辐射灭菌即得。

实施例2：片剂的制备

将20.00mg的PEG5000-PLA5000与5.00mg的环孢素A充分溶解于适量的DMSO中，然后转移至截留分子量为3500的透析袋中，在1L蒸馏水中透析24h，每隔4h更换一次新鲜蒸馏水。透析完成后将透析袋中的溶液取出，在3000rpm下离心30min，取上清液，经0.45μm的微孔滤膜过滤得胶束组合物。

在所得的胶束组合物中加入适量的PEG4000，混合均匀，冻干。然后将冻干粉过80目筛，与微晶纤维素混匀，加入淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置于40℃干燥后过12目筛整粒，加入干淀粉以及硬脂酸镁混匀后压片即得环孢A片剂。

实施例3：硬胶囊的制备

将18.00mg的PEG5000-PLA2500与5.00mg的环孢素A充分溶解于适量的甲醇中，旋转蒸干甲醇后，加入水进行水化，经0.45μm的微孔滤膜过滤得胶束组合物。

在所得的胶束组合物中加入适量的PEG4000，混合均匀，冻干。然后将冻干粉填充在胶囊中，得到一粒胶囊。

实施例4：冻干粉针的制备

将10.00mg的PEG5000-PLA15000与5.00mg的环孢素A充分溶解于适量的DMSO中，然后转移至截留分子量为3500的透析袋中，在1L蒸馏水中透析24h，每隔4h更换一次新鲜蒸馏水。透析完成后将透析袋中的溶液取出，在3000rpm下离心30min，取上清液，经0.45μm的微孔滤膜过滤得胶束组合物。

在所得的胶束组合物中加入适量的PEG4000，混合均匀，冻干，密封，辐射灭菌即得。

试验例1：口服给药的药代动力学试验

为了考察包含在本发明组合物中的环孢A口服的药代动力学特征，如下对实施例1中的本发明制剂、市售软胶囊分别进行药代动力学研究。用高效液相色谱法测定血中环孢A的含量。

将10只体重约为200g的SD大鼠随机等分为两组。试验前12小时禁食，可自由饮水。称重后按10mg/kg剂量，一组灌胃市售新山地明软胶囊液，另一组灌胃实施例1的本发明制剂。分别于给药后不同时间点眼眶静脉丛取血0.5mL(取血容器事先肝素化)，加入50μl环孢D内标溶液(60μg/ml)，然后加入1ml盐酸溶液(180mmol/ml)涡旋1min破坏血细胞，加入5ml重蒸无水乙醚后涡旋10min，在3000rpm下离心10min。吸取上层清液置于另一具塞玻璃试管中，加入1mlNaOH溶液(100mmol/ml)后涡旋5min，在3000rpm下离心10min。吸取上层清液至另一具塞玻璃试管中，40℃水浴下氮气吹干乙醚。加入120μl流动相(乙腈∶水＝80∶20)复溶，然后加入1ml正己烷，涡旋2min，在3000rpm下离心10min，弃去上层正己烷，再重复上述操作一次。取20μl进样。根据标准曲线计算血药浓度。

色谱条件如下：DiamonsilTM C18色谱柱，250×4.6mm，5μm；流动相∶乙腈水＝80∶20；流速：1ml/min；柱温：70℃；检测波长：210nm；进样量：20μl。

结果如图2和表1。

表1不同时间血中环孢A的浓度(ng/ml)

根据表1和图2的结果，两者t检验在0.05水平上无显著性差异，说明本发明制剂与市售软胶囊生物等效。

虽然已利用上述具体的实施方案对本发明进行了描述，但应认识到，本领域的技术人员还可进行各种的改进和改变，而且它们也应如权利要求书限定的本发明的范围之内。

Claims

1.一种口服聚合物胶束组合物，其包含环孢A、两亲性的嵌段共聚物及任选的其他可药用辅料；所述的嵌段共聚物为PEG-PLA。

2.如权利要求1所述的聚合物胶束组合物，其中环孢A与嵌段共聚物的重量比为1∶100-1∶1。

3.如权利要求2所述的聚合物胶束组合物，其中环孢A与嵌段共聚物的重量比为1∶10-1∶4。

4.如权利要求1-3任一项的组合物，所述组合物根据任何常规方法配制成片剂、胶囊剂。

5.如权利要求1-4任一项的组合物用于制备防治器官移植或组织移植后排异反应或治疗自身免疫性疾病的药物的用途。