CN101405276A

CN101405276A - 用于抑制磷脂酶a2的组合物和方法

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Publication number: CN101405276A
Application number: CNA2006800535537A
Authority: CN
Inventors: 吉勒·吉夏尔; 格尔桑德·列娜; 帕斯卡尔·穆勒; 迪迪埃·罗格南; 埃里克·布瓦拉尔; 热拉尔·朗博
Original assignee: NATIONAL CENTER FOR SCIENTIFIC RESEARCH; ImmuPharma France SA
Current assignee: NATIONAL CENTER FOR SCIENTIFIC RESEARCH; ImmuPharma France SA
Priority date: 2005-12-29
Filing date: 2006-12-28
Publication date: 2009-04-08
Also published as: EP1966169A2; WO2007074169A3; AU2006331355A1; JP2009522234A; CA2635354C; AU2006331355A2; CA2635354A1; WO2007074169A2; AU2006331355B2

Abstract

本发明涉及新型取代的二肽衍生的含氮杂环化合物、它们的药学可接受的盐的衍生物以及它们的应用方法。

Description

用于抑制磷脂酶A2的组合物和方法

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2005年12月29日提交的美国临时专利序列号第60/755,631号，其名称为“用于合成新型杂环治疗剂的组合物和方法(Compsitions and Methods forSynthesizing Novel Heterocyclic Therapeutics)”和于2005年12月29日提交的美国临时专利序列号第60/755,632号，其名称为“用于治疗和预防疾病的组合物和方法(Compositions and Methods forTreatment and Prevention of Disease)”，以及于2005年12月29日提交的美国临时专利系列第60/755,626号，其名称为“用于抑制磷脂酶A2的组合物和方法(Compositions and Methods for the Inhibitionof Phospholipase A2)”的优先权。它们的全部内容以引用方式结合于此作为参考。

本发明涉及于2006年12月22日提交的美国非临时专利申请“用于治疗和预防疾病的组合物和方法(Compositions and Methodsfor the Treatment and Prevention of Disease)”(快递邮件编号(ExpressMail No.)：EV 902583365US)和于2006年12月22日提交的美国非临时专利申请“用于合成杂环治疗化合物的组合物和方法(Compositions and Methods for Synthesizing Heterocyclic TherapeuticCompounds)”(快递邮件编号：EV 902583374US)，其全部内容以引用方式结合于此作为参考。

技术领域

本发明涉及7元环和8元环的二肽衍生的含氮杂环化合物，及其可用于抑制磷脂酶A2(PLA2)的药学上可接受的盐。此外，本发明还涉及用于抑制PLA2酶，用于治疗或预防，或治疗并预防个体炎症的组合物。

背景技术

磷脂酶A2酶类(PLA2)是催化磷脂水解以释放游离脂肪酸和溶血磷脂的一类酶。这种催化反应对于与各种生理学和病理生理学过程有关的脂质的产生是必需的，所述脂类例如是前列腺素、白三烯、血栓素、血小板激活因子、脂氧素或溶血磷脂酸。可将PLA2分成两组：胞内酶，包括依赖钙的IV族PLA2组和非依赖钙的VI族PLA2；以及分泌的PLA2(sPLA2)，其是一种具有Ca²⁺依赖的催化活性的低分子量蛋白。迄今为止，已经确定了12种哺乳动物的sPLA2并将其分为三个主要的形态集合(collection)：组I/II/V/X、组III，以及组XII。

尽管已在患有感染性休克、类风湿性关节炎、急性胰腺炎、多发性损伤、患有镰状红细胞贫血症患者中的急性胸综合症、支气管肺泡灌洗(BAL)的患者以及患有急性呼吸窘迫综合症(ARDS)的患者中检测到血清中的sPLA2显著增加，但sPLA2在生理-病理学过程中的确切功能还不确定。GIIA似乎在革兰氏阳性细菌的膜水解中非常有效并可能与对微生物的宿主防御有关。重要的是，在眼、免疫赦免器官中发现hGIIA浓度升高。

对成长中的身体的研究涉及在许多重要的生理学和病理学条件下的PLA2功能。正因为如此，PLA2抑制剂的开发不仅对于研究和进一步阐明PLA2的功能化和其病理生理学作用很重要，而且对开发用于治疗涉及PLA2功能的病症(例如炎性疾病)的药物也很重要。

还需要设计并开发一种能够识别PLA2功能模式(即抑制酶活力，以及诱导M-型受体的配体的异构变化)中的一种的疗法，并且可替代地，开发对抑制所有PLA2功能的两种模式都有效的疗法。

发明内容

本发明涉及一种用于有效治疗和/或预防个体中的疾病的化合物以及合成该化合物的方法。一方面，本发明涉及用本发明的方法合成的新型二肽衍生的杂环化合物。本发明还涉及包含有效量的所述化合物的药物组合物，以及通过向需要该药物组合物的个体给予该组合物的治疗方法。

本发明一方面涉及用于合成由化学式I表示的新型二肽衍生的杂环化合物的方法。

其中，W是选自以下组中一个成员：-C(R⁵)(R^5a)-、-C(R⁶)(R^6a)-C(R⁷)(R^7a)-、-C(R⁸)＝C(R⁹)-、-N(R¹⁰)及它们的组合；

X是选自以下组中的一个成员：-N(R^1a)C(＝Y)N(R⁴)-、-OC(＝Y)N(R⁴)-、-N(R^1a)C(＝Y)O-、-N(R^1a)S(＝O)N(R⁴)-、-N(R^1a)S(＝O)₂N(R⁴)-、-C(R^1a)(R^3a)C(＝Y)N(R⁴)-及它们的组合；

Y和Z彼此独立地代表选自由氧(“O”)和硫(“S”)组成的组中的一个成员；以及

R¹、R^1a、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R^5a、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸、R⁹，和R¹⁰彼此独立地代表选自由以下基团组成的组中的一个成员：氢原子、氨基酸侧链、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、(C5-C12)单环或双环芳基、(C5-C14)单环或双环芳烷基、单环或双环(C5-C14)杂芳烷基，以及具有多达5个选自N、O、S和P的杂原子的(C1-C10)单环或双环杂芳基，所述基团可以是非取代的或进一步被选自以下基团组成的组的1-6个取代基取代：卤原子、NO₂、OH、脒、苄脒、咪唑、1，2，3-三唑、烷氧基、(C1-C4)、氨基、哌嗪、哌啶、二烷基胺、胍基、二烷基化或二酰化的胍基、羧酸、氨甲酰、酯、氧肟酸、次膦酸、膦酸酯(盐)、膦酰胺酯(膦酰胺盐，phosphonamidate)、巯基和它们的任意组合。

在任意优选实施方式中，本发明包括由上述化学式表示的二肽衍生杂环化合物的自由的碱或酸的形式，及其盐的形式。本发明还包括旋光异构体、类似物、以及由上述化学式表示的化合物的衍生物。在本发明的其他实施方式中，包括得自单个准备步骤、组合，或互换的对映异构体和/或非对映异构体的混合物。在本发明的其他实施方式中，药学可接受的形式中包括由化学式I描述的化合物，并可选地包括至少一种其他成分，例如一种适合的载体、赋形剂、其他药物活性成分或它们的组合。

本发明还提供了上述类似物和衍生物的前药形式，其中该前药在体内被代谢以产生如上所述的类似物或衍生物。事实上，上述的类似物或衍生物中的一些可以是另一种类似物或衍生物的前药。

术语“前药”是本领域中公知的并且在哺乳动物系统中包括转化为本发明的药物活性化合物的化合物。例如，参见Remington’sPharmaceutical Sciences，1980，vol.16，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，61和424。

在本发明的另一方面，提供了包含上述化合物的组合物。优选地，通过包含适合的载体或赋形剂，可将该组合物配制成适合用于制药或农业用途。

在本发明的另一方面，提供了为了治疗和/或预防疾病，而将本文中描述的化合物的药学可接受的形式以适合的量对需要它的哺乳动物(例如人)给药的方法。在一种实施方式中，本发明包含用于抑制PLA2酶的方法。

在另一实施方式中，本发明包含为了治疗和/或预防炎性疾病，将本文中描述的化合物的药学可接受的形式以适合的量对需要它的哺乳动物给药的方法。

下文的详细描述将使本发明的其他有利特点和与系统有关的功能、方法以及过程显而易见。

附图说明

图1：1，3，5-三唑-2，6二酮骨架B与2，5-二酮哌嗪A的对比。

图2：a)EtOCOCl、NMM、THF，-20℃，然后H₂O中的NaN₃；b)甲苯，65℃，然后HOSu和吡啶；c)TFA，30分钟；d)DIEA，MeCN；e)PS-DIEA，CH₂Cl₂。g＝双(gem)，是指相应于根据由Chorev和Goodman提出的命名法的相应氨基酸的2-烷基双-二氨基衍生物。

图3：1，3，5-三唑-2，6二酮4、7和9的各自的X射线晶体结构。

图4：a)NaH(4当量)、RX(4当量)；b)KF/Al₂O₃(10当量)或NaH(2当量)、RX(1.5当量)。

图5：与Me-IDX相比，对抑制剂分子的半最大抑制曲线(HalfMaximum Inhibition Curves，半数抑制曲线)(IC50)。比较PLA2酶hGX和hGV(Y轴代表PLA2的当前活性；X轴是抑制剂浓度)；抑制剂分子的数目(例如“mol 33#”)决定了表(table)1中使用的特定化合物。

图6：与Me-IDX相比，对抑制剂分子的半最大抑制曲线(IC50)。比较PLA2酶hGX和hGV(Y轴代表PLA2的当前活性；X轴是抑制剂浓度)；抑制剂分子的数目(例如“mol 33#”)决定了表1中使用的特定化合物。

具体实施方式

当描述本发明的化合物、组合物和方法时，除非另外指出，以下术语具有下述含义。

“药学可接受的盐”意指保留生物学有效性和母体化合物特性以及作为给药剂量的生物学或其他无害的盐。由于氨基和羧基的存在，本发明的化合物能够分别形成酸式盐和碱式盐。药学可接受的碱加成盐可通过无机或有机碱来制备。由无机碱制得的盐包括，但不限于，钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。由有机碱制得的盐包括，但不限于，伯胺、仲胺和叔胺的盐；取代的胺，包括天然存在的取代的胺；环胺，包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲氨乙醇、氨基丁三醇、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(哈胺，hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、氨茶碱、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶，和N-乙基哌啶的盐。也可以认为其他羧酸衍生物可用于本发明的实践中，例如羧酸胺，包括氨甲酰、低级烷基氨甲酰、二(低级烷基)氨甲酰等。

药学可接受的酸加成盐可通过无机或有机酸来制备。盐衍生自包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等的无机酸。盐衍生自包括醋酸、丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、p-苯甲磺酸、水杨酸等的有机酸。

本文中使用的术语“治疗”包括对动物，尤其是哺乳动物，更具体地是人的病症或疾病的治疗，包括：

(i)预防在受治疗者中发生的疾病或病症，该受治疗者可能患有疾病但还未诊断出来；

(ii)抑制该疾病或病症，即，观察它的发展；缓解该疾病或病症，即，引起病症的消退；或缓解由疾病导致的病症，即，疾病的症状。

如本文中所定义的，术语“治疗有效量”是指当对需要这种治疗的哺乳动物给药时，足以影响治疗的量。治疗有效量将随受治疗者和接受治疗的疾病的状态、痛苦的严重程度和给药方式而不同，并可由本领域普通技术人员常规确定。

“杂环”是指具有4至9个碳原子和至少一个选自N、O或S的杂原子的杂环基团。

“烷基”是指具有1至6个碳原子的分支或非分支的烷基、具有1至6个碳原子的分支或非分支的烯基、具有1至6个碳原子的分支或非分支的炔基(alkinyl group)。

“氢氧基”是指当其作为有机化合物中的取代基时的官能团-OH。

“杂环基团”可以可选地由1至5个，优选为1至3个取代基所取代，所述取代基选自由以下基团组成的组：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰胺、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨酰基、氨基酰氧基(aminoacyloxy)、氧氨酰基(oxyaminoacyl)、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基(carboxyalkyl)、硫代芳氧基(thioaryloxy)、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、硫氢基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环、杂环氧基(heterocyclooxy)、羟氨基、烷氧氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-取代的烷基、-SO₂-芳基、氧代(＝O)，以及-SO₂-杂芳基。这样的杂环基团可具有单环或多元缩合(condense)的环。优选的杂环化合物包括吗啉代、哌啶基(piperidinyl)等。

氮杂环和杂芳基的实例包括，但不限于，吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹噁啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、邻二氮杂菲、异噻唑、盐酸异丙嗪(phenazine)、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑啶、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚、吗啉代、哌啶基、四氢呋喃基等以及含有杂环的N-烷氧基-氮。

术语“硫氢基”是指-SH基团。

术语“硫代烷氧基”是指-S-烷基基团。

“氨基酸”是指任何包含氨基和羧酸官能团的分子，并包括任何D、L或DL型的天然存在的氨基酸(例如Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Hyl、Hyp、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val)。天然存在的氨基酸的侧链是本领域中公知的并且包括，例如，氢(例如在甘氨酸中)、烷基(例如在丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸中)、取代的烷基(例如在苏氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸和赖氨酸中)、烷芳基(例如在苯丙氨酸和色氨酸中)、取代的芳基烷基(例如在酪氨酸中)以及取代的杂芳基烷基(heteroarylalkyl)(例如在组氨酸中)。

“脒”是指具有两个连接到带有一个碳-氮双键结合(HN＝CR′-NH″₂)的同一碳原子的氨基的官能团。

“烷氧基”是指连接有氧的烷基：R-O-，其中R是烷基。

“取代的烷基”是指具有1至10个碳原子且被选自由以下基团组成的组中的一个或多个取代基所取代的分支或非分支烷基、烯基或炔基，所述组包括：羟基、巯基、二价碳巯基(carbylmercapto)、卤素、二价碳氧基(carbyloxy)、氨基、酰氨基、羧基、环烷基、磺基或酰基。这些取代基一般基团具有与本文中定义的相应基团相同的定义的含义。

“卤素”是指氟、溴、氯和碘原子。

“芳基”代表-C(O)R_e基团，其中R_e是卤素、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、环烷基、取代的环烷基，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

“acloxy”是指-OAc基团，其中Ac是酰基、取代的酰基、杂酰基、取代的杂酰基，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

“烷基氨基”是指-NR_fR_g基团，其中R_f和R_g彼此独立，代表氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基，而这些一般的基团具有与本文中定义的相应基团相同定义的含义。

“芳基”是指具有1至18个碳原子并由至少一个芳香族或其中至少一个是芳环的多元缩合环构成的芳香族碳环基团。

“取代的芳基”是指有1至18个碳原子并由至少一个芳香族或其中至少一个是芳环的多元缩合环构成的芳香族碳环基团。该环被选自由卤素、烷基、氢氧基、二价碳巯基(carbylmercapto)、烷基氨基、二价碳氧基(carbyloxy)、氨基、酰氨基、羧基、硝基、巯基或磺基组成的组中的一个或多个取代基可选地取代，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

“杂芳基”是指至少一个环是芳环的具有4至9个碳原子以及至少一个选自N、O或S的杂原子的杂环基团。

“取代的杂芳基”是指至少一个环是芳环的具有4至9个碳原子以及至少一个选自N、O或S的杂原子的杂环基团，并且该基团被选自以下组中的基团所取代，所述组为：卤素、烷基、二价碳氧基(carbyloxy)、二价碳巯基(carbylmercapto)、烷基氨基、酰氨基、羧基、硝基、巯基或磺基，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

“羧基”是指-C(O)OR_j基团，其中R_j为氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基，而这些一般的基团具有与本文中定义的相应基团相同定义的含义。

“环烷基”是指具有3至15个碳原子的单环或多环烷基。

“取代的环烷基”是指具有3至15个碳原子并选自以下组中的基团所取代的单环或多环烷基，所述组为：卤素、烷基、二价碳氧基(carbyloxy)、二价碳巯基(carbylmercapto)、烷基氨基、酰氨基、羧基、硝基、巯基或磺基，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

“杂环烷基”是指具有3至15个碳原子且其环结构中的至少一个环碳原子被选自N、O、S或P的杂原子所替代的单环或多环烷基。

“取代的杂环烷基”是指具有3至15个碳原子且其环结构中的至少一个环碳原子被选自由N、O、S或P组成的组的杂原子所替代的单环或多环烷基，并且该组包含选自由以下基团组成的组中的一种或多种取代基：卤素、烷基、取代的烷基、二价碳氧基、二价碳巯基、芳基、硝基、巯基或磺基，而这些一般的基团具有与附图说明中定义的相应基团相同定义的含义。

术语“芳基”是指具有单环(例如苯)或多元缩合环(稠合)的具有6至20个碳原子的不饱和芳香族碳环基团，其中至少一个环是芳环(例如，萘基、二氢菲基、芴基、蒽基)。优选苯基、萘基等。

术语“烯基”是指单价基团的分支或非分支不饱和烃基，优选具有2至40个碳原子，更优选具有2至10个碳原子，并更优选具有2至6个碳原子。优选的烯基包括乙烯基(-CH＝CH₂)、正丙烯基(-CH₂CH＝CH₂)、异丙烯基(-C(CH₃)＝CH₂)等。

“咪唑”是指由通式C₃H₄N₂表示的杂环基。

“芳烷基”是指，例如，结合至具有6至10个碳原子并且碳原子的总数为7至14个的1或2芳香烃环的C1-C6烷基，例如苯基、α-萘亚甲基、茚甲基、二苯甲基、2-乙基，2-α-萘乙基、3-苯丙基、3-α-萘丙基、苯丁基、4-α-萘丁基或5-苯戊基。

“胍”通常是指氨基甲酸的脒并具有通式：C(NH₂)₃。

术语“芳烷基”和“杂芳烷基”根据上述定义分别是指包含芳基或杂芳基以及烷基和/或杂烷基和/或碳环和/或杂环烷基环体系。

本发明涉及由以下通式I表示的含氮的杂环化合物：

其中，W选自由以下基团组成的组：-C(R⁵)(R^5a)-、-C(R⁶)(R^6a)-C(R⁷)(R^7a)-、-C(R⁸)＝C(R⁹)-、-N(R¹⁰)及其组合；

X选自由-N(R^1a)C(＝Y)N(R⁴)-、-OC(＝Y)N(R⁴)-、-N(R^1a)C(＝Y)O-、-N(R^1a)S(＝O)N(R⁴)-、-N(R^1a)S(＝O)₂N(R⁴)-、-C(R^1a)(R^3a)C(＝Y)N(R⁴)-组成的组及其组合；

Y和Z各自独立地代表选自由氧(“O”)和硫(“S”)组成的组的成员；以及

R¹、R^1a、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R^5a、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸、R⁹和R¹⁰各自独立地代表选自以下基团组中的成员：氢原子、氨基酸侧链、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、(C5-C12)单环或双环芳基、(C5-C14)单环或双环烯基、单环或双环(C5-C14)杂芳烷基，以及具有多达5个选自N、O、S和P的杂原子的(C1-C10)单环或双环杂芳基，所述基团可以是非取代的或进一步被选自以下基团组成的组的1-6个取代基取代：卤原子、NO₂、OH、脒、苄脒、咪唑、1，2，3-三唑、烷氧基、(C1-C4)、氨基、哌嗪、哌啶、二烷基胺、胍基、二烷基化或二酰化的胍基、羧酸、氨甲酰、酯、氧肟酸、次膦酸、膦酸酯(盐)、膦酰胺酯(膦酰胺盐，phosphonamidate)、巯基和它们的组合。

可以通过在有机合成化学中常规使用的纯化方法来分离和纯化所述过程中的中间物和希望得到的化合物，例如，中和、过滤、萃取、洗涤、干燥、浓缩、重结晶以及各种层析法。可使中间物经历随后的反应而不需进行纯化。

本发明覆盖了全部可能的异构体(包括互变异构体)以及它们的混合物。手性碳使它们自身具有两种不同的对映异构体，这两种对映异构体预期并且实施了分离成两种对映异构体。

在需要一种化合物的盐并且该化合物是以盐的形式制成的情况下可以经历这样的纯化过程。在该化合物是以游离态的性质制成且需要其盐的情况下，将该化合物溶解或悬浮在适合的有机溶剂中，然后通过添加酸或碱以形成盐。

本发明还涉及药学可接受的盐、外消旋化合物、及其化学式I的旋光异构体。本发明的化合物通常包含一个或多个手性碳。因此，本发明倾向于包括消旋混合物、非对映异构体(diasteromer)、对映异构体以及富含一种或多种立体异构体的混合物。本发明所描述和要求保护的范围包括化合物以及单个异构体和其非消旋混合物的消旋式。

在本发明的另一方面，提供了利用上述类似物和衍生物以及组合物的方法。这些方法包括利用本发明的化合物来抑制PLA2酶、治疗或预防人类和农作物疾病和病症或二者。人类疾病或病症的实例包括，但不限于，炎症、感染性休克、类风湿性关节炎、急性胰腺炎、镰状红细胞贫血症患者中的急性胸综合症、急性呼吸窘迫综合症(ARDS)、肥胖症、与肥胖症有关的胰岛素抵抗、痛觉过敏、肺水肿、大肠炎、局部缺血、胸膜炎、微生物感染、类风湿性关节炎、皮肤感染、牛皮癣、癌症、骨质疏松症、哮喘、自身免疫疾病、HIV、AIDS、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、I型胰岛素依赖性糖尿病、组织移植、疟疾、非洲昏睡病、查加斯病、弓形体病、牛皮癣、再狭窄、作为美容抑制以抑制不需要的毛发生长、甲状旁腺功能亢进症、炎症、消化性溃疡的治疗、青光眼、阿尔茨海默(氏)病、房性心动过速的抑制、肠能动性的刺激或抑制、克罗恩病以及其他炎性肠疾病、高血压(血管舒张)、中风、癫痫、焦虑、神经变性疾病、痛觉过敏状态、听力丧失的防护(尤其是癌症化疗诱导的听力丧失)，以及可卡因强化的药理学处理和治疗在可卡因成瘾性和超量的成瘾以及其他真菌、病毒和寄生虫病。

在本发明的另一方面，提供了含有上述化合物的组合物。优选地，该组合物可通过加入适合的载体或赋形剂而被配制成适合用于制药或农业应用。

在本发明的另一方面，提供了以药学可接受的形式以适合的量对需要其的哺乳动物(例如人)给予本文描述的化合物以用于治疗和/预防疾病的方法。在一种实施方式中，本发明包含抑制PLA2酶的方法。在另一实施方式中，本发明包含表1中列出的分子，其可用于抑制PLA2。具体地，分子49、33、40、9、5、4和3可用于抑制组V和组X sPLA2。这些分子分别表明在sPLA2抑制中的以下等级(hierarchy)：分子40＞分子33＞分子40；以及分子9＞分子5≈分子4≈分子3。

在另一实施方式中，本发明包含以药学可接受的形式以适合的量对有需要的哺乳动物(例如人)给予本文描述的化合物以用于治疗和/预防炎症的方法。

通过在3D空间中有效地排布所选择的药效基团来设计并合成环状/多环分子骨架的组合化学技术是一种确定小分子能够调节生物过程和分析生物学途径的重要方法。由于容易进入、肽的衍生物的化学和立体化学多样性以及由于增加的操作带来的多样性增强，对衍生自肽的小环或中环分子(例如，2，5-二酮哌嗪类)尤其感兴趣。为了进一步增加肽底物可达到的骨架多样性，我们研究可合成稠密官能化(五点差异)的二肽衍生的1，3，5-三氮杂环庚烷-2，6-二酮骨架并表明其通过筛选一个小的“探测(prospecting)”库来对抗PLA2的应用。

本文中所包含的实施方式的描述是以举例的方式给出的，并不限制本发明的范围。通过以下实施例将使与本发明的系统、方法和过程有关的其他有利特征和功能性显而易见。

实施例

迄今为止，已经确定了12种哺乳动物sPLA2并将其分为三个主要的分类(collection)：组I/II/V/X、组III，以及组XII。

尽管已经在感染性休克、类风湿性关节炎、急性胰腺炎、多发性损伤、患有镰状红细胞贫血症患者中的急性胸综合症、以及患有急性呼吸窘迫综合症(ARDS)的患者的支气管肺泡灌洗(BAL)的血清中sPLA2活性的显著增加，但sPLA2在生理-病理学过程中的确切功能还不确定。GIIA似乎在革兰氏阳性细菌的膜水解中非常有效并可能与对微生物的宿主防御有关。重要的是，在眼、免疫赦免器官中的hGIIA浓度升高。

人们发现在GIB胰腺中处于高水平，在胆汁中存在脱氧胆酸盐、洗涤剂的情况下，其对底物具有增强的活性，并且在肠中被胰岛素激活。由此可以提出GIB在磷脂消化作用中的作用。敲除用于编码这种酶的基因不能显示出开始时其在脂质吸收中的重要作用，但用高脂饮食饲喂小鼠却表现出GIB敲除的小鼠较少发生肥胖症和与肥胖症有关的胰岛素抵抗。

向各种哺乳动物细胞中外源性加入GV和GX会导致花生四烯酸盐(酯)和类花生酸代(generation)的释放，甚至没有激活cPLA2。此外，来自GV敲除的小鼠的用酵母聚糖处理过的腹膜巨噬细胞的前列腺素E2(PGE2)和白三烯C4(LTC4)的产生减少。因此，GV和GX在某些情况下可能与类花生酸类物质的产生有关。GIIC、GIIE、GIIF、GUI、GXIIA和GXIIB的生理学作用还不清楚，但一些证据表明GXII可能与脊椎动物的神经(neuronal)发育有关，甚至是在缺乏任何催化活性的情况下。

最近有证据表明PLA2蛋白不仅水解蛋白质，而且还作为不同结合蛋白的配体。人们最为熟知的sPLA2结合蛋白是M-型受体(MtR)。这种受体最初被克隆为具有与巨噬细胞甘露糖受体，以及最近克隆的受体Endo-180和Dec-205相同的一般特性的跨膜糖蛋白。这种受体具有包含富含半胱氨酸域、II型纤维连接样蛋白域、八个凝集素样域(CTLD)、单个跨膜区以及短细胞质尾区的N-末端的大的胞外域。该M型受体可快速将sPLA2内化(internalize)，从而起到清除sPLA2的作用。识别该可抑制sPLA2结合的酶活的受体的可溶形式也与这种观点相同。此外，从受体基因靶向和其他利用胰腺sPLA2进行的研究中获得的结果表明，M-型受体通过sPLA2结合起到胞内信号分子的作用，例如通过激活MAPK级联(cascade)、诱导促炎性反应表型，以及增量调节细胞表面的Fas受体表达。

对于发现组HA特异性sPLA2抑制剂的基于结构的策略导致抑制这种具有纳摩尔亲和力的sPLA2吲哚类似物识别。一种类似物LY311727能够抑制由在含有巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和上皮细胞的豚鼠BAL液中外源性添加的hGIIA触发的血栓素A2的释放。LY311727还能够抑制由ARDA豚鼠模型中的脂多糖类诱导的sPLA2活性。此外，对过表达hGIIA的转基因小鼠进行静脉给药LY311727会导致血液中的sPLA2催化活性丧失，表明这种抑制剂可以在这些动物体内被激活，至少是在血液循环中。在鼠类弓形体病的实验模型中，注射LY311727会导致早期死亡，在这些小鼠中的对这种抑制剂敏感的sPLA2中的至少一种起到防护的作用。此外，观察到在3个不同的痛觉增敏的实验大鼠模型中LY311727的腰椎鞘内注射给药使所有与炎症有关的症状减弱。

第二代吲哚诱导的抑制剂称为S-5920/LY315920Na，使肺顺应性、肺水肿、血管渗透性、以及在家兔的由油酸诱导的剂型肺损伤模型中的肺表面活性物质的分解显著减弱。sPLA2的其他两种抑制剂LY333013(S-3013)和5-(4-苄氧苯基)-4s-(7-苯基庚酰胺)-戊酸可保护大鼠免患硫酸葡聚糖和三硝基苯磺酸诱导的大肠炎。口服5-(4-苄氧苯基)-4s-(7-苯基庚酰胺)-戊酸也可以使大鼠的肠免受局部缺血和再灌注的损伤。

在小鼠中由四cenoyl佛波醇-13-醋酸盐诱导的耳水肿可通过YM-26734得到减少，YM-26734是一种已知为mGIIA、mGIID、mGIIE、mGV和mGX的蛋白抑制剂的分子。同一种药物也可以显著减少在carageenin诱导的胸膜炎大鼠模型中渗出液和粒细胞的蓄积。尽管预见了sPLA2的效果，但在将S-5920/LY315920Na用于与人类败血症和器官衰竭有关的临床研究中没有发现用PLA2抑制剂治疗和对照组之间的显著差异。然而，由于GIIA和PLA2具有抗菌特性，并且感染性休克是由微生物入侵引起的，则可以论证sPLA2抑制剂用于感染性休克治疗药是否有意义。

最近，利用其他sPLA2抑制剂口服分布的LY333013的临床试验在患有类风湿性关节炎的患者中在试验的第一周使病状显著减少，但此后这种益处消失。在随后的报告中，作者报告了静脉给药这种抑制剂时对病状的积极影响。在患有哮喘的患者中，同样的抑制剂不能表现出对吸入的变应原激发的任何益处。注意到这些患者对LY333013的强耐药性是很重要的。

因此，给药途径(例如口服、肠胃外、肠内、皮下、静脉、直肠等)和用于抑制剂的生物系统能够影响它的效力。例如，BMS-1881162(一种GIIA和cPLA2的抑制剂)在患有由反复照射诱导佛波酯(phorbol ester)诱导的慢性皮肤感染的小鼠模型中被用于局部制剂时，具有非常有效的抗炎活性。这种抑制剂对牛皮癣患者没有效果。在志愿者中使用的标记的BMS-1881162表现出几乎不可识别的药物渗透性，这很可能是由于与鼠相比，人类的角质层较厚。

一种抑制由大鼠胃上皮细胞中的TGF-α和IL-I诱导产生的PGE2的吲哚抑制剂称为indoxam(IDX)。Me-indoxam(Me-IDX)是indoxam的一种衍生物，其对于抑制hGIIA的效力约为LY311727的20倍。这种吲哚类似物适合用于对哺乳动物细胞的研究，并且其不仅抑制hGIIA的酶活性，而且还抑制其他组I/II/V/X sPLA2。IDX及其相关的吲哚化合物影响哺乳动物细胞和动物模型中的各种炎性信号这一事实指出，至少一种来自组I/II/V/X的sPLA2与这些过程有关。

由于已知Me-IDX结合至sPLA2并从sPLA2伸出，其能够干扰分子之间而不是磷脂之间的相互作用。事实上，已经示出了IDX能够阻断猪胰脏组IB和组X sPLA2对表达具有良好效力(IC₅₀分别＝130nM和900nM)的M-型受体的鼠细胞的结合。然而，还不知道这种观察在内源性环境中是否可推延至其他的sPLA2，例如，利用来自鼠的sPLA2和M-型受体。这种研究对于可能与结合至受体的sPLA2有关的病理生理学紊乱非常重要。确实，缺乏M-型受体的小鼠对于内毒素性休克有抵抗力，并且与M-型受体表达小鼠相比，其在LPS处理之后具有较低的循环IL-I和TNF-α浓度。尽管如此，在野生型小鼠中由脂多糖类诱导的感染性休克可以通过indoxam治疗而得以缓解。最近，我们发现不仅是组IB和组IIAsPLA2，而且若干种来自组I/II/V/X的小鼠sPLA2最初都可以结合至由蛇毒sPLA2 OS2识别的M-型受体，这导致了以下推断：一种或多种sPLA2与这些过程有关，以及indoxam的效果可能是由于酶活性的抑制或与M-型受体的结合。

通过分析在存在Me-IDX的细胞膜上进行的放射示踪的哺乳动物sPLA2的直接结合特性得到的结果，以及明显地表明在不同的研究中用sPLA2抑制剂所观察到的效果的已知作为sPLA2的抑制剂的各种其他分子的抑制效果的评价可能不仅是由于sPLA2催化活性的抑制，而且还由于sPLA2与其受体的结合特性的调节。

对于设计和评价二肽衍生的1，3，5-三氮杂环庚烷-2，6-二酮骨架的兴趣来源于从由具有二氮杂卓(diazepine)和三氮杂卓(triazepine)骨架的分子的标记的生物学活性。近年来尤其更加关注应用于HIV蛋白酶的开发，以及转录酶抑制剂、因子Xa抑制剂、β-内酰胺酶抑制剂、磷脂酶C抑制剂以及趋化因子受体拮抗剂的转化的七元环脲类。

以下的研究确立了本发明的新型7元环和8元环含氮杂环化合物可用于PLA2，并且对于治疗和预防炎性疾病是有效的。

I.用[³H]-油酸标记E.coli膜：

1)用E.coli菌株的单克隆在Luria Broth(LB)w/或w/o氨苄西林中制备10ml的隔夜预培养物。DH 10B和XL-1菌株似乎要优于JM101菌株，即它们能够给出较少背景的膜并且在PLA2测试中更容易成片(pellet)。饱和的隔夜预培养物的OD_600nm为大约2UDO。稀释1/5并测定OD_600nm。

2)将100ml的新鲜LB中稀释预培养物直至0.05UOD_600nm并添加25μl的[³H]-油酸(NET289，NEN，5mCi/ml，酒精溶液)。在罩中打开装有储备溶液的管型瓶并在关闭之前用N₂冲洗该管型瓶。保留10μl的培养物以用于之后与油酸混合的定量化。

3)在37℃下使细胞在剧烈摇动(200-300rpm)下生长5小时达到1UOD_600nm。

4)将培养物旋转15分钟/4,000rpm/50ml隼式管/RT。保留50μl的上清液用于之后与油酸混合的定量化。除去上清液并将片状沉淀在50ml的LB中再悬浮，并使细胞在摇动下在37℃再生长30分钟(这个步骤使得剩余的未混和的标记的油酸混合至磷脂中)。

5)如上述旋转。保留50μl上清液用于之后的定量化。除去上清液并将片状沉淀在50ml的洗涤缓冲液中再悬浮。

6)如上述旋转。保留50μl上清液用于之后的定量化。除去上清液并将片状沉淀在2ml的洗涤缓冲液(不含有BSA)中再悬浮。保留2μl的部分用于计数并将剩余的溶液转移至Corex玻璃管中。用铝箔作为盖子并进行高温灭菌(20分钟，120℃，1.5巴)。这个步骤可以通宵进行。

7)第二天，保留2μl的部分用于计数并将剩余的溶液转移至2个离心分离管(埃彭道夫管)中。用1ml的洗涤缓冲液与2ml溶液混合来清洗Corex管。

8)以14,000rpm(RT)旋转1分钟。保留10μl上清液用于之后的定量化。除去上清液并用1.5ml的洗涤缓冲液将每一片状沉淀。重复这个步骤四次或更多次。

9)在5ml洗涤缓冲液中再悬浮片状沉淀并计数5μl用于与油酸混合的定量化。将该溶液稀释至10,000dpm/μl并取30μl。

10)对不同的上清液计数并计算在第9步中与输入量相比放射性的百分比。通常，混合的放射性比在第2步中加入的输入放射性大30-40％。

II.PLA2测试：

1)制备底物：

移取所需量的放射性(100,000dpm标记的膜每反应x编号的反应)并在离心分离管中稀释至1ml的PLA2活性缓冲液。

以14,000rpm(RT)旋转1分钟。除去上清液。将片状沉淀小心地再悬浮于150μl的PLA2活性缓冲液中并加入对于反应总数的PLA2活性缓冲液。在室温下储存反应池(pool)(不要事先制备太多的反应池)。

2)PLA2测试反应：

在离心分离管中进行典型反应并且150μl的总体积包括由50μl制成的PLA2活性缓冲液、可忽略酶溶液的体积以及100μl的上述底物池(加入相当大量的多个移液管(multipipette)的底物导致足够的混合以使在添加底物之后不必进行涡旋混合(vortex))。

在25℃或37℃下将反应混合物用不同量的酶培养不同的时间周期达到1小时(培养是在室温(RT)下常规进行的)。将培养时间和试样的体积调节到确保水解率在酶测试的线行范围内(通常为10-20％总底物水解)。平行进行不添加sPLA2的对照培养并用于计算特异性水解。

3)通过加入300μl的终止缓冲液来终止反应。将管在室温下在14,000rpm下旋转3分钟。收集含有释放的标记的油酸的上清液并计数。

对3或4份100μl的底物池进行计数以确定诸如的放射性/反应的总量。

注意，我们通常认为在上清液中的计数是从膜磷脂中释放出的上述相应于游离³H-油酸根的总数。人们可以通过在可将游离的油酸和磷脂分离的条件下在硅胶60上实施薄层层析来证实这些计数是真正游离的油酸。

还应注意这种实验设计不是对特别针对sPLA2检测的，其也可以用于检测胞质PLA2的活性。

材料：

DH 10B或XL-1E.coli菌株(可以是携带或不携带质粒的菌株)；[³H]-油酸(乙醇中的NET289，NEN，5mCi/ml)；成分V脂肪酸游离BSA(Sigma#A6003或A7511)；成分V BSA(sigma#A7906)；Corex玻璃管或等同物。缓冲液：洗涤缓冲液：0.1MTris/HCl pH 8.0，1mM含有0.5％脂肪酸游离BSA的EDTA；PLA2活性缓冲液：0.1M Tris/HCl pH 8.0，10mM CaCl2，0.1％BSA；终止缓冲液：0.1M含有0.2％脂肪酸游离BSA的EDTA。

治疗给药

本发明的一种实施方式包括一种抑制PLA2酶的方法。本发明的另一实施方式包括含有本发明的药学可接受形式的治疗组合物。在另一实施方式中，本发明包括用于在诸如人类的哺乳动物中治疗和/或预防诸如炎性疾病的疾病的方法，包括以药学可接受形式给予有效量的本发明的化合物。本发明的化合物可选地可与至少一种载体、赋形剂、另一种生物活性剂及其任意组合一起给药。

适合的给药途径包括口服、直肠、血管、局部(包括眼、口和舌下)、阴道和母体(包括皮下、肌内、玻璃体内、静脉、皮内、膜内和硬膜外)。除了临床医生已知的其他情况之外，优选的给药途径还取决于患者的病况、化合物的毒性以及感染的部位。

本发明的治疗组合物包含约1％至约95％的活性成分，单剂量形式的给药优选包含约20％至约90％的活性成分并且给药的形式单剂量形式优选包含约5％是约20％的活性成分。单位剂量形式是，例如包衣片剂、片剂、针剂、管形瓶(西林瓶，vial)、栓剂或胶囊剂。其他形式的给药是，例如，软膏剂、乳膏剂、糊剂、霜剂、酊剂、唇膏剂(lipstick)、滴剂、喷雾剂、散剂等。胶囊剂的实例包含约0.05g至约1.0g的活性成分。

本发明的药物组合物是以本身已知的方式制备的，例如是通过常规的混合、造粒、涂覆、溶解或冻干过程来制备。

优选地，使用该活性成分的溶液，并且此外还有除混悬液或分散液，尤其是等渗水溶液、分散液或混悬液，例如在包含活性物质本身或与载体(例如甘露醇)一起的低压冻干组合物的情况下。可将该药物组合物灭菌和/或使其包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压和/或缓冲液的盐，并且其是以本身已知的方式制备的，例如通过常规的溶解或低压冻干过程。所述溶液或混悬液可以包括粘度增加的物质，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。

药学可接受的形式包括，例如，凝胶(gel)、洗液、喷雾、粉末、丸剂、片剂、控释片剂、缓释片剂、速率控释片剂(rate controllingrelease tablet)、肠溶衣、乳剂、液体、盐、糊剂、凝胶剂、气雾剂、软膏剂、胶囊剂、胶体囊(gel cap)或本领域普通技术人员清楚知道的任何其他适合的形式。

在油中的混悬剂包含，通常用于注射目的的作为含油组分的植物油、合成或半合成油。具体地，所述的油是包含作为酸组分的具有8-22个，尤其是具有12-22个碳原子长链脂肪酸的液态脂肪酸酯，例如，月桂酸、十三(烷)酸、豆蔻酸、十五(烷)酸、棕榈酸、十七(烷)酸、硬脂酸、花生四烯酸、山萮酸或相应的不饱和酸，例如，油酸、反油酸、芥酸(euric acid)、巴西酸(brasidic acid)和亚油酸，如果适宜添加抗氧化剂，例如，维生素E、β-胡萝卜素或3，5-二-叔-丁基-4-苯甲醇。这些脂肪酸酯的醇成分具有不多于6个碳原子并且是单羟基或多羟基的，例如一元醇、二元醇或三元醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇，或其异构体，但尤其是乙二醇和丙三醇。因此，脂肪酸酯是，例如：油酸乙酯、豆蔻酸异丙酯、“Labrafil M2375”″(聚氧乙烯甘油三油酸酯，来自Gattefosee，巴黎)、“LabrafilM 1944CS”(通过杏仁油醇解而制备的不饱和聚乙二醇化的甘油酯且由甘油酯和聚乙二醇酯组成；来自Gattefosee，巴黎)、“Labrasol”(通过TCM醇解而制备的不饱和聚乙二醇化的甘油酯且由甘油酯和聚乙二醇酯组成；来自Gattefosee，巴黎)和/或“Miglyol 812”(来自链长C₈至C₁₂的不饱和脂肪酸的甘油三酯，来自HuIs AG，德国)，并且具体地是植物油，例如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、大豆油，尤其是花生油。

注射组合物的制备是在无菌的条件下通过常用的方式来进行的，正如装瓶(例如安瓿瓶或管型瓶)，并闭合容器。

例如，通过将活性成分与一种或多种固体载体组合而获得用于口服的药物组合物，如果得到的混合物适合造粒，并且如果需要的话，则可将混合物或颗粒制成包衣片的核，如果适合加入额外的辅料的话。

具体地，适合的载体是诸如糖的充填剂(例如乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨糖醇纤维素)和/或磷酸钙(例如磷酸三钙或磷酸氢钙)，以及此外的诸如淀粉的粘结剂(例如玉米、小麦、稻米或土豆淀粉、)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯-吡咯烷，和/或粉碎机(desintegrator)(如果需要的话)，例如上述淀粉、以及羧甲基淀粉、交联的聚乙烯-吡咯烷酮、海藻酸或它们的盐，例如海藻酸钠。具体地，额外的辅料是流量调节剂、润滑剂，例如水杨酸、滑石、硬脂酸或它们的盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)，和/或聚乙二醇，或它们的衍生物。

可以提供具有适合的包衣的包衣片剂的核，如果适合的话，包衣可抵御胃液，此外，该包衣可以由以下溶液制成：浓缩的糖溶液，如果适合的话，包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷、聚乙二醇、和/或二氧化钛；在适合的有机溶剂或溶剂混合物中的用于制备抵抗胃液的包衣的包衣溶液；或制备适合的纤维素(例如邻苯二酸乙酰纤维素或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯)的溶液。

通过“控释”意指为实现本发明的目的，以受控速率或在特异性位点(例如在肠中)从该制剂释放治疗活性化合物或二者，从而使对治疗有利的血中浓度(但低于毒性浓度)保持超过时间的延长期，例如，提供12小时或24小时的剂量形式。

本文中使用的术语“速率控制聚合物”包括能够延缓组合物在体内释放的亲水聚合物、疏水聚合物或亲水和/或疏水聚合物的混合物。此外，许多相同的聚合物也可被用于制造药物、药物混悬剂或药物基质的肠溶衣。通过改变包衣的厚度、渗透率以及溶解特性以提供所需的控释结构(例如药物释放率和部位)是本领域技术人员所具备的技能而不需要进行过度实验。

本发明是使用的适合的控释聚合物的实例包括羟基烷基纤维素，例如羟丙纤维素和羟丙基甲基纤维素；聚(乙烯)氧化物；烷基纤维素，例如乙基纤维素和甲基纤维素；羧甲基纤维素；亲水纤维素衍生物；聚乙二醇；聚乙烯吡咯烷酮；乙酸纤维素；乙酸丙酸纤维素、苯二甲酸醋纤维素；乙酸苯三酸纤维素；聚乙烯乙酸邻苯二甲酸酯；羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯；羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯；聚(烷基异丁烯酸酯)以及聚(乙酸乙烯酯)。其他疏水聚合物包括衍生自丙烯酸酯或异丁烯酸酯的聚合物或共聚物、丙烯酸酯或异丁烯酸酯的共聚物、玉米醇溶蛋白、蜡、虫胶和氢化植物油。

为了确保正确的释放动力学，本发明的控释制剂含有以重量计约5％和75％，优选以重量计约20％和50％，更优选以重量计约30％至45％的控释聚合物以及以重量计约1％至40％，优选以重量计约3％至25％的活性化合物。本发明的控释制剂可优选包括佐剂，例如稀释剂、润滑剂和/或熔结剂(melting binder)。优选地，选择辅料以使该制剂的含水量最小化。优选地，该制剂包括抗氧化剂。适合的稀释剂包括药学可接受的惰性充填剂，例如微晶纤维素、乳糖、二碱式磷酸钙、糖类，和/或前述任意混合物。该稀释剂适合是一种水溶性稀释剂。稀释剂的实例包括诸如Avicel ph112、Avicel pH101和Avicel pH102的微晶纤维素；诸如乳糖一水合物、无水乳糖和Pharmatose DCL 21的乳糖；诸如Emcompress的二碱式磷酸钙；甘露醇；淀粉；蔗糖和葡萄糖。仔细选择稀释剂以配合特定制剂的压制特性。适合的润滑剂包括起到将要被挤压的粉末的流动性作用的试剂，例如，诸如Aerosil 200、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁和硬脂酸钙的胶体二氧化硅。适合的低温熔结剂包括诸如PEG 6000的聚乙二醇；十八十六醇(硬脂酸十六醇，cetostearyl alcohol)；鲸蜡醇；聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯蓖麻油衍生物；聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯；聚氧乙烯硬脂酸酯、聚羟体和蜡。

为了改善控释制剂的稳定性，可以包括抗氧化剂。适合的抗氧化剂包括偏亚硫酸氢钠；诸如α、β或δ生育酚酯类和醋酸α-生育酚的生育酚；抗坏血酸和其药学可接受的盐；抗坏血酸棕榈酸盐；诸如丙基没食子酸酯、Tenox PG、Tenox s-1的烷基没食子酸酯；亚硫酸酯或其药学可接受的盐；BHA；BHT以及二羟丙基硫醇。

本发明的控释制剂优选可以通过将该含有控释聚合物的化合物和辅药掺合后直接进行压制而成。用于制造该制剂的其他方法包括熔融造粒。优选的熔融造粒技术包括与速率控制聚合物和稀释剂一起进行熔融造粒然后压成颗粒，并随后将掺有速率控制聚合物和稀释剂进行熔融造粒，然后对掺和物进行压制。在压制之前，需要将掺和物和/或颗粒与佐剂进行筛分和/或混合直至得到易于流出的均匀混合物。

本发明的控释制剂的口服剂型可以是以下的形式：片剂、包衣片、肠溶衣片或多微粒(multiparticulate)(例如是小丸或小片的形式)。如果需要的话，胶囊(例如硬胶囊或软胶囊)可含有该多微粒。如果需要的话，多微粒口服剂量形式可包含一种在体外和/或体内释放曲线中具有不同控释的小丸或小片的至少两个群(population)的掺和物。如果需要的话，小丸或小片群中的至少一个可以包含立即释放的多颗粒，例如通过常规方式产生的多颗粒。

如果需要的话，本发明的控释基质片和多颗粒可以被一层控释聚合物所包裹从而提供额外的控释特性。可被用于形成该控释层的聚合物包括以上列出的速率控制聚合物。

如果需要的话，可为本发明的片剂、小丸或小片提供避光和/或屏蔽层(cosmetic film)涂层，例如，成膜物、颜料、防粘剂和增塑剂、这样的成膜物可由速溶成分组成，例如低粘度的羟基丙基甲基纤维素，例如甲基纤维素Methocel E5或D14或Pharmacoat 606(Shin-Etsu)。该膜涂层还可以包括通常在膜-涂层过程中使用的赋形剂，例如避光颜料，例如氧化铁、二氧化钛、防粘剂(例如滑石)，以及适合的增塑剂(例如PEG 400、PEG 6000、二乙基邻苯二甲酸酯和柠檬酸三乙酯)。

本发明的控释聚合物可由水凝胶基质构成。例如，该化合物可被压制成含有速率控制聚合物的剂量形式(例如HPMC)，或聚合物的混合物(当潮气使其膨胀以形成水凝胶时)。可通过溶胀药片的质量(mass)的扩散和药片表面随时间的侵蚀来控制从这种剂量形式的释放速率。可通过每片含有的聚合物的量和所用的聚合物的固有粘度来控制释放速率。

可将染料或颜料掺入片剂或片剂的涂层中，例如用于确认或鉴定活性成分的不同剂量。

用于口服的药物组合物也可以是硬胶囊或软胶囊、明胶的闭合胶囊以及增塑剂(plasticizer)，例如甘油或山梨醇。硬胶囊可以含有颗粒形式的活性物质，例如与诸如玉米淀粉、粘结剂和/或润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)之类的充填剂以及稳定剂(如果适当的话)混合。在软胶囊中，优选将活性成分溶解或悬浮于适合的液体赋形剂中，例如滑脂油(greasy oil)、液状石蜡或液态聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯，同样也可以加入稳定剂和去污剂，例如聚乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯型。

例如，给药的其他口服形式是以习惯的方式制备的糖浆基剂，其含有活性成分，例如以悬浮的形式或浓度为约5％至20％，优选约10％的形式或可带来适合的个体剂量的类似浓度的形式，例如按配量给予5ml或10ml时。其他形式是，例如，也是通过振动而制备的粉状或液状的浓缩剂，例如在乳中。这样的浓缩剂也可以单位剂量的份量进行分装。

可用于直肠给药的药物组合物，例如栓剂，可由含有栓剂基质的活性成分的组合。适合的栓剂基质是，例如，天然存在或合成的甘油三酯、链烷烃类、聚乙二醇或高级链烯醇类。

适合用于肠胃外给药的组合物是水溶性形式(例如水溶性盐)的活性成分的水溶液或水性注射混悬液，其含有粘度增加的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。以及稳定剂(如果适合的话)。活性成分能也可以冷冻干燥的形式存在(如果适合与赋形剂一起冷冻干燥的话)，并在肠胃外给药之前通过加入适合的溶剂将其溶解。例如，用于肠胃外给药所用的溶液也可用作注射溶液。优选的防腐剂是，例如，诸如抗坏血酸的抗氧化剂和诸如山梨酸和苯甲酸的杀微生物剂。

软膏剂是水包油乳液，其包含不多于70％，但优选20-50％的水或水相。脂肪相包含烃类以改善与水结合的能力，具体地，包含凡士林、液状石蜡或硬质石蜡(hard paraffin′s)，优选包含适合的羟基化合物，例如脂肪醇或其酯的羟基化合物，例如鲸蜡醇或诸如羊毛蜡的羊毛蜡醇。乳化剂是相应的亲脂物质，例如山梨糖醇酐脂肪酸酯(Spans)，例如去水山梨糖醇单油酸酯和/或去水山梨糖醇。水相中的添加剂是，诸如润湿剂的多元醇，例如甘油、丙二醇、山梨醇和/或聚乙二醇，或防腐剂和芳香物质。

脂肪软膏剂是无水的或包含作为基质的烃类，具体地，例如是石蜡、凡士林或石蜡油，以及其他天然存在或班合成的脂肪类，例如氢化椰子脂肪酸甘油三酯，或优选氢化油，例如氢化花生油或氢化蓖麻油，以及其他脂肪酸甘油的部分酯类(partial ester)，例如甘油单硬脂酸酯或二硬脂酸酯，以及例如脂肪醇。其也可含有所述的与增加水的吸收的乳膏剂相联系的乳化剂和/或添加剂。

霜剂是油包水乳液，其含有多于50％的水。具体地，使用的油基是诸如月桂醇、鲸蜡醇或硬脂醇的脂肪醇；诸如棕榈酸或硬脂酸的脂肪酸；诸如十四酸异丙酯、羊毛蜡或蜂蜡的液-固蜡(liquid tosolid waxe)和/或诸如凡士林(矿物油)或石蜡油的烃类。乳化剂是主要具有亲水特性的表面活性物质，例如相应的非离子乳化剂，例如多元醇或其乙烯基氧加成物的脂肪酸酯，例如聚甘油酸脂肪酸酯或聚乙烯山梨醇脂肪酯(Tweens)，以及其他聚氧乙烯脂肪醇酯或聚氧乙烯脂肪酸酯；或相应的离子型乳化剂，例如脂肪醇硫酸酯的碱金属盐，例如月桂基硫酸钠、鲸蜡基硫酸钠或十八烷基硫酸钠其通常被用于例如鲸蜡基硬脂醇或硬脂醇的脂肪醇存在的情况下。此外，添加至水相的添加剂是防止霜剂变干的试剂，例如是诸如甘油、山梨醇、丙二醇和/或聚乙二醇的多元醇，以及其他防腐剂和芳香物质。

糊剂是具有分泌吸收粉状成分(例如诸如氧化钛或氧化锌的金属氧化物)的霜剂和乳膏剂，以及具有与水分或存在的分泌物结合作用的滑石和/或硅酸铝。

从喷雾剂容器进行泡沫的给药并且其为以气溶胶形式存在的液态水包油乳液。使用的喷射气体是输入低级氯氟烃类的卤代烃，例如二氯氟甲烷和二氯四氟乙烷，或优选地，是非卤代的气态烃、空气、N₂O或二氧化碳。此外，所使用的油相是上述软膏剂和霜剂，以及可以使用的所述添加剂。

酊剂和溶液通常包含用于减少蒸发的水-醇基(aqueous-ethanolic base)，例如诸如甘油、山梨醇、丙二醇和/或聚乙二醇的多元醇，以及诸如具有低级聚乙二醇的脂肪酸酯的再加油(re-oiling)物质，即可溶于水性混合物以取代用乙醇从皮肤除去的亲脂物质，并且如果需要的话，也可以混入其他辅料和添加剂。

本发明还涉及用于治疗上述疾病状态的过程和方法。可出于预防或治疗目的以这样的方式或以药物组合物的形式给予该化合物，优选以有效抵抗所述疾病的量。对于需要这种治疗的温血动物(例如人)，具体地，以药物组合物的形式使用该化合物。对于约70kg的体重，本发明的化合物的日剂量为约0.1至约5g，优选0.5g至约2g。

可以认为本文中描述的实施例和实施方式仅用于举例说明的目的，并且各种些许的(in light)替代、修改或变化将使本领域技术人员将从中得到暗示，并且包括在本申请的精神和范围内以及被认为是落在所附权利要求的范围内。以下实施例是以优选实施方式的方式给出的，而不是以任何方式限制本发明。例如成分的相对数量可以不同以达到不同的所需效果，可以加入额外的成分，和/或可以用一种或多种所需成分取代类似的成分。本文中引用的所有的出版物、专利和专利申请都以引用的方式将其全文结合于此作为参考。

一般合成方案(scheme)和程序的实施例：

实施例1：[1，3，5]氧二氮杂环庚烷-2，6-二酮(化学式Ia)的合成

Ia的一般方案合成方案：

a)双三氟乙酸碘苯(lBTFA)，THF/H₂O；b)BoC₂O；c)p-硝基苯基氯甲酸酯，CH₂Cl₂，二异丙基乙胺；d)三氟乙酸；e)DIEA、HOBt；f)NaH、R³Br。

实施例2：2-硫代-[1，3，5]三叠氮-6-酮(化学式Ib)的合成

Ib的一般合成方案：

步骤a)在起始材料耗尽之后，将二肽酰胺Ib-pl溶解于THF/水(3∶1))并用双三氟乙酸碘苯(1.2当量)处理3小时。在真空装除去溶剂并加入Et2θ。收集形成的固体并用Et2θ洗涤以产生用于下一步骤的相应的双-二氨基衍生物，而不进行进一步的纯化。定量产率。

步骤b)在室温(rt)下将双(苯并三唑-1-基)甲硫酮(bis(benzotriazol-l-yl)methanethione)(1当量)溶解于CH₂Cl₂。逐滴加入之前合成的双-二氨基衍生物并将反应混合物搅拌18小时。在真空下除去溶剂并将残余物重新溶解于EtOAc并在用无水硫酸钠之上进行干燥之前用5％水性碳酸钠、水和盐水洗涤。在真空下除去溶剂并将Ib-p2从乙酸乙酯进行重结晶。

步骤c)在0℃用TFA处理1-硫代氨甲酰苯并三唑。30分钟后，通过与己烷共蒸发除去TFA并加入二乙醚以使TFA盐沉淀。通过过滤收集得到的盐Ib-p3并在高真空下进行干燥。其将被用于下一步骤而不需进行纯化。

步骤d)将TFA盐Ib-p3溶解于MeCN然后加入二异丙基乙胺(2.5当量)并将反应混合物搅拌24小时。在真空中除去溶剂并将残余物重新溶解于EtOAc，在用无水硫酸钠之上进行干燥之前用的水性碳酸钠、1M HCl、水和盐水洗涤。在真空中除去溶剂并通过从醚中重结晶来纯化环状Ib-1。

实施例3：4-苄基-6-甲基-[1，3，6]噁二唑-2，5-二酮(化学式Ib-1)的合成

Ib-1的一般合成方案：

步骤b)在室温下将双(苯并三唑-1-基)甲硫酮(bis(benzotriazol-l-yl)methanethione)(1当量)溶解于CH₂Cl₂。逐滴加入之前合成的双-二氨基衍生物并将反应混合物搅拌18小时。在真空下除去溶剂并将残余物重新溶解于EtOAc并在用无水硫酸钠之上进行干燥之前用5％水性碳酸钠、水和盐水洗涤。在真空下除去溶剂并将Ib-p2从乙酸乙酯进行重结晶。

步骤d)将TFA盐Ib-p3溶解于MeCN，然后加入二异丙基乙胺(2.5当量)并将反应混合物搅拌24小时。在真空中除去溶剂并将残余物重新溶解于EtOAc，在用无水硫酸钠之上进行干燥之前用的水性碳酸钠、1M HCl、水和盐水洗涤。在真空中除去溶剂并通过从CH₂Cl₂/二异丙基醚中重结晶来纯化环状Ib-1。

实施例4：2-硫代-[1，3，5]氧二叠氮-6-酮(化学式Ic)的合成

Ic的一般合成方案：

a)双三氟乙酸碘苯(lBTFA)，THF/H₂O；b)BoC₂O；c)双(苯三偶氮基)甲硫酮(methanethione)、CH₂Cl₂；d)三氟乙酸；e)二异丙基乙胺、MeCN、NaH。

实施例5：[1，3，6]氧杂二氧杂环辛烷-2，5-二酮(化学式Id)的合成

Id的一般合成方案：

a)对-硝基苯基氯甲酸酯(2当量)、吡啶(1.1当量)、CH₂Cl₂、TA过夜；b)TFA、TA 30分钟；c)DIEA(2.6当量)、HOBt，(1当量)、MeCN、TA 3天。

实施例6：4-苄基-6-甲基-[1，3，6]氧二叠氮-2，5-二酮(化学式Id-I)的合成

Id-1的一般合成方案：

a)邻-硝基苯基氯甲酸酯(2当量)、吡啶(1.1当量)、CH2Cl2，TA过夜；b)TFA，TA 30分钟；c)DIEA(2.6当量)、HOBt(1当量)，MeCN，TA 3 jours。

1)p-硝基苯基碳酸酯Id-p2的合成

将起始二肽醇Id-pl(300mg，0.93mmol，1eq)溶解于5mL的CH₂Cl₂和82μL的吡啶(1.02mmol，1.1eq)中。2mL的4-硝基苯基氯甲酸酯溶液(0.37g，1.86mmol，2eq)。

在搅拌24小时之后，将反应混合物用15mL的CH₂Cl₂进行稀释，并用1N的NaHCO₃洗涤。将有机相在Na₂SO₄上进行干燥，通过快速色谱法进行浓缩和纯化(洗脱液1∶2AE/环己烷)以产生纯的碳酸酯Id-p2(产率为59％)。HPLC tR 14.1(梯度30-100％B，20分钟)。

¹H NMR(300MHz，CDC13)δ8.3(m，2H，原子-Hα-NO₂)，7.39(m，2H，原子-H β-NO2)，7.24(m，5H，原子-H)，5.34(m，J＝10.55Hz，IH NH)，4.85(q，J＝14.9，7.9Hz，IH α-NH)，4.314.14(dd，J＝9.97，5.1Hz，2H α-O)，3.77 3.54(dd，J＝14.5，5.2Hz，2H α-NMe)，2.98(m，2Hα-Phe)，2.79(s，3H NMe)，1.43(s，9H Boc)。

¹³C NMR(100MHz，CDC13)δ171.8(CO酰胺)，154.8(CO氨基甲酸酯)，154.5(CO碳酸酯)，151.6(C原子α-NO2)，144.8(C原子δ-NO2)，135.5(C原子Phe)，128.8(2CHPhe)，128.7(2CH Phe)，127.8(CH-Phe)，124.7(CH原子)，121.1(CH-原子)，79.3(C Boc)，66.0(CH2α-O)，50.9(CH α-NH)，46.447.0(CH2α-N)，39.4(CH2Phe)，35.833.6(CH3 NMe)，27.7(3 CH3 Boc)。

2)成环化成为Id-p1

用三氟乙酸处理p-硝基苯基碳酸酯30分钟。加入醚可使相应的TFA沉淀为白色固体。对其进行过滤以用于下一步骤而不需进行纯化。将溶解于MeCN(10mL)中的TFA盐(220mg，0.44mmol，1eq)缓慢加入到二异丙基乙胺溶液中(194μL，1.14mmol，2.6eq)和25mL MeCN中的羟基苯并三唑(HOBt)(60mg，0.44mmol，1eq)。将反应混合物搅拌3天并在真空中进行浓缩。然后加入CH₂Cl₂并用1N的NaHCO₃、盐水洗涤有机相，Na2SO4上方进行干燥并在真空中浓缩。然后通过硅胶层析法对残余物(110mg)提纯。

[CHCl₃/MeOH/AcOH(20∶0.5∶0.1)然后加上CHCl₃/MeOH[20∶1])以提供42mg的Id-I。

HPLC t_R(Id-I)5.88(梯度30-100％B，20分钟)。

用HRMS(ESI)计算Ci₃Hi₆N₂O₃249.1234，得到249.1230。

¹H NMR Id-I(300MHz，CDCl₃)δ7.25(m，5H，arom-H)，6.10(d，H⁴)，4.75(dd，J＝8.9，7.4Hz，H⁵)，4.20(m，2H³)，4.15(m，H²)，3.28(dd，J＝14.0，7.6Hz，IH⁶)，3.17(m，H²′)，3.02(dd，IH⁶)，3.0(8，3H¹)。

¹³C NMR Id-I(100MHz，CDCl₃)δ172.3(CO酰胺)，157.7(CO碳酸酯)，136.9(C-原子)，129.3(2CH原子)，128.6(2CH原子)，126.8(CH原子)，69.6(CH₂α-O)，54.0(CH α-N)，52.9(CH₂α-N)，36.6(CH₃Me)，35.7(CH₂Phe)。

实施例7：1，1-二氧-1λ-[1，2，5，8]硫杂三叠氮-4-酮(化学式If)的合成

If的一般合成方案：

i)(a)TFA；(b)饱和的NaHCO₃，DCM；ii)Burgess试剂(2.5eq)，THF，70℃两小时。

实施例8：10-甲基-6，6，11-三氧-8，9，10，11，11a，12-六氢-5H-6λ-硫杂-5a，7，10-三氮杂-环辛基[b]萘-7-羧酸甲酯(化学式If-1)的合成

If-1的一般合成方案：

(i)(a)TFA，0℃，30分钟；(b)饱和的NaHCO₃，DCM；ii)Burgess试剂(2.5eq)，THF，70℃2小时。

i)在0℃下用TFA对N-Boc保护的二肽醇处理30分钟。在真空下除去TFA并将残余物溶解于AcOEt。边搅拌边加入饱和的NaHCO₃并在10分钟后用Na₂SO₄干燥有机相，并在真空下进行浓缩得到If-pl。

ii)将化合物If-p1(175mg，0.75mmol，1 eq)溶解于10mL的无水THF并加入Burgess试剂(534mg，2.24mmol，2.5eq)。然后在约70℃至约90℃下在回流下将该溶液加热2天。然后将反应混合物倒入饱和的NH₄Cl(40mL)溶液中。用CH₂Cl₂萃取该混合物并用H₂O洗涤有机相，在Na₂SO₄上方进行干燥并在真空下进行浓缩。然后通过硅胶层析法(CHCl₃/MeOH/AcOH(18∶1∶0.2)对粗制混合物进行纯化以产生If-1。

Claims

1.一种用于抑制PLA2酶的化合物，包含化学式I：

或其药学可接受的盐，

其中，W是选自以下组成的组中的一个成员：

-C(R⁵)(R^5a)-、-C(R⁶)(R^6a)-C(R⁷)(R^7a)-、-C(R⁸)＝C(R⁹)-、-N(R¹⁰)及其组合；

X是选自以下组成的组中的一个成员：

-N(R^1a)C(＝Y)N(R⁴)-、-OC(＝Y)N(R⁴)-、-N(R^1a)C(＝Y)O-、-N(R^1a)S(＝O)N(R⁴)-、-N(R^1a)S(＝O)₂N(R⁴)-、-C(R^1a)(R^3a)C(＝Y)N(R⁴)-及其组合；

R¹、R^1a、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R^5a、R⁶、R^6a、R⁷、R^7a、R⁸、R⁹，和R¹⁰彼此独立地代表选自由以下基团组成的组中的一个成员：氢原子、氨基酸侧链、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烯基、(C1-C10)炔基、(C5-C12)单环或双环芳基、(C5-C14)单环或双环芳烷基、单环或双环(C5-C14)杂芳烷基，以及具有多达5个选自N、O、S和P的杂原子的(C1-C10)单环或双环杂芳基，所述基团可以是非取代的或进一步被选自以下基团组成的组中的1-6个取代基取代：卤原子、NO₂、OH、脒、苄脒、咪唑、1，2，3-三唑、烷氧基、(C1-C4)、氨基、哌嗪、哌啶、二烷基胺、胍基、二烷基化或二酰化的胍基、羧酸、氨甲酰、酯、氧肟酸、次膦酸、膦酸酯(盐)、膦酰胺酯、巯基和它们的任意组合。

2.一种用于治疗或预防个体炎症的治疗组合物，包含有效量的具化学式I的化合物：

或其药学可接受的盐，

其中，W是选自以下组成的组中一个成员：-C(R⁵)(R^5a)-、-C(R⁶)(R^6a)-C(R⁷)(R^7a)-、-C(R⁸)＝C(R⁹)-、-N(R¹⁰)及其组合；

X是选自以下组成的组中的一个成员：

-N(R^1a)C(＝Y)N(R⁴)-、-OC(＝Y)N(R⁴)-、-N(R^1a)C(＝Y)O-、-N(R^1a)S(＝O)N(R⁴)-、-N(R^1a)S(＝O)₂N(R⁴)-、C(R^1a)(R^3a)C(＝Y)N(R⁴)-及其组合；

3.根据权利要求2所述的治疗组合物，进一步包含药学可接受的载体、赋形剂、佐剂、另一种生物学活性剂或它们的组合中的至少之一。

4.根据权利要求3所述的治疗组合物，其中，所述生物学活性剂包括类固醇、非类固醇抗炎剂、乙酰水杨酸、环氧合酶抑制剂或它们的组合中的至少之一。

5.根据权利要求3所述的治疗组合物，其中，所述治疗组合物以药学可接受的形式存在。

6.根据权利要求5所述的治疗组合物，其中，所述药学可接受的形式包括具有肠溶衣的片剂或胶囊剂。

7.一种用于治疗或预防炎性疾病或病症的方法，包括

对有需要的个体给药有效量的权利要求2所述的治疗组合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述治疗组合物进一步包括选自以下组成的组中的至少一种其他成分：药学可接受的载体、赋形剂、佐剂、另一种生物活性剂或它们的组合。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述生物活性剂包括类固醇、非类固醇抗炎剂、乙酰水杨酸、环氧合酶抑制剂或它们的组合。

10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述治疗组合物以药学可接受的形式给药。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述药学可接受的形式包括用于口服给药的片剂或具有肠溶衣的胶囊剂。

12.根据权利要求7所述的方法，其中，所述治疗组合物是肠胃外给药的。

13.根据权利要求7所述的方法，其中，所述炎性疾病或病症选自由以下组成的组：组织损伤、类风湿性关节炎、骨关节炎、湿疹、狼疮、IBD、克罗恩病、ARDS、大肠炎、牛皮癣、哮喘、囊性纤维化病、AIDS、狭窄、再狭窄、阿尔茨海默病、帕金森病、癌症、动脉粥样硬化、动脉硬化，以及与心肺有关的疾病。

14.一种用于治疗或预防与炎症有关的生理学疾病的试剂盒，所述试剂盒包括多个容器，其中，至少一个所述容器装有权利要求2所述的治疗组合物或其药学可接受的盐。