CN101191139A - 海参多肽、多糖的综合提取工艺 - Google Patents
海参多肽、多糖的综合提取工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101191139A CN101191139A CNA2007100147345A CN200710014734A CN101191139A CN 101191139 A CN101191139 A CN 101191139A CN A2007100147345 A CNA2007100147345 A CN A2007100147345A CN 200710014734 A CN200710014734 A CN 200710014734A CN 101191139 A CN101191139 A CN 101191139A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sea cucumber
- ethanol
- hydrolysis
- mixture
- polysaccharides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 title claims abstract description 107
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 74
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 71
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 62
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 51
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 51
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 84
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 23
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 claims description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 claims 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 abstract description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 abstract description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 abstract description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 abstract 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 8
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 3
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 3
- RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N anthrone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 3
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 3
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 2
- 230000007073 chemical hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 2
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002929 anti-fatigue Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N furfural Chemical class O=CC1=CC=CO1 HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L molybdic acid Chemical compound O[Mo](O)(=O)=O VLAPMBHFAWRUQP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特点是以鲜海参为原料，先胶体化，在复合胰蛋白酶作用下水解，离心分别收集沉淀和上清液，上清液加入乙醇沉淀离心，所得上清液为海参多肽的混合物，合并两次离心沉淀加入A.S1398精制中性蛋白酶进行水解，离心，上清液加入乙醇后沉淀离心，合并两次上清液为海参多肽混合物，沉淀为粗多糖；将海参多肽的混合物溶于水，用不同孔径超滤膜进行不同分子量的分段分离纯化，经脱苦脱色后冷冻干燥得不同分子量段的海参多肽粉末；将粗多糖配成5％的水溶液，离心、脱色、再离心，收集沉淀后洗涤，配制成水溶液后透析，加入乙醇至少重复沉淀三次得精制海参多糖；即在制备不同分子量段海参多肽的同时制备海参多糖，得率高、纯度高、安全性高，反应条件温和。
Description
技术领域
本发明涉及海洋生物的开发应用技术领域，具体地讲是海参多肽、多糖的综合提取工艺。
背景技术
近年来，随着国内外运用现代科学技术对海参品种鉴定与分类，海参的生理与生化，海参生物活性物质的分离、鉴定及其生物医学作用等研究的不断深入，人们发现海参含有许多具有重要生物学活性的物质，如多肽、海参多糖、海参皂苷、海参毒素等。现代营养学研究表明，低分子肽可不经胃消化直接被肠粘膜吸收。此外，海参肽还具有抗肿瘤、降血压、抗疲劳、延缓衰老、提高免疫力等功效。海参多糖具有提高免疫力、抑制肿瘤、抗凝血、保护神经组织等多种生理功能。从海参各类生物活性物质中寻找和开发新药，以及加工功能性食品已经成为海参深度开发利用的重要方向。目前，有采用化学法水解海参蛋白、也有采用酶解法，都是通过一步水解法进行单独海参多肽或者海参多糖的提取，上述方法只能得到一种海参活性物质(或海参多肽或海参多糖)，其它有效的海参活性物质在提取的同时被浪费掉，并且得到的海参多肽为多种分子量混合的物质，因为具有活性的海参肽通常为二肽、三肽等小分子肽，其中的大分子量的海参肽不利于吸收；另外化学法水解海参蛋白在提取海参活性物质的同时容易产生有毒物质。
发明内容
本发明的目的是克服上述已有技术的不足，而提供一种海参多肽、多糖的综合提取工艺，主要解决了现有的提取工艺只能获得单一的海参活性物质、且多肽中含有大分子量的多肽及化学法水解海参蛋白易产生有毒物质的问题。
为了达到上述目的，本发明是这样实现的：海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特殊之处在于它包括如下步骤：
a选取鲜海参为原料，洗净除去泥沙及内脏，放入超低温冰箱速冻4-5小时，切成块状后放入绞肉机绞碎，然后放入胶体磨中研磨使成胶体化；
b将胶体化状态的海参50-60℃下加热20-30分钟；
c将经过上述前处理的海参加入全自动水解反应器，加入去离子水和复合胰蛋白酶，去离子水的量为清洗去内脏的鲜海参重量的5-7倍，进行水解；
d水解结束后高温灭菌灭酶；
e取出水解液离心去除沉淀及不溶物，加入乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为水溶性海参多肽的混合物；
f合并水解离心沉淀物和加入乙醇后离心沉淀物，加入去离子水混合配成水溶液，加入A.S1398精制中性蛋白酶进一步水解；
g取出上述步骤水解液离心去除沉淀及不溶物，加入乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为海参多肽的混合物并与e步骤水解离心上清液合并，沉淀为粗多糖；
h将合并的上清液——海参多肽的混合物利用旋转蒸发器浓缩，冷冻干燥得粉末多肽混合物；
i将上述粉末多肽混合物配制成5％的水溶液，用不同孔径超滤膜进行分级分离，脱苦脱色，真空浓缩后冷冻干燥得到溶解性良好的不同分子量段的海参多肽粉末；
j将g步骤的粗多糖配成质量百分比为5～7％的水溶液，离心除去不溶性杂质，上清液用双氧水氧化脱色，加入乙酸钾冷藏过夜，离心收集沉淀；
k沉淀经去离子水洗涤，配制成质量百分比为30％水溶液，经48小时透析，加入乙醇作为沉淀剂，乙醇与水体积比为8∶2，至少重复沉淀三次得精制海参多糖。
本发明的海参多肽、多糖的综合提取工艺，步骤a所述的超低温冰箱的温度为-70℃。
本发明的海参多肽、多糖的综合提取工艺，步骤c所述的复合胰蛋白酶的量(8000U/g)为清洗去内脏的鲜海参重量的1.0％，酶解温度50℃，水解时间2h。
本发明的海参多肽、多糖的综合提取工艺，步骤f所述的去离子水的量为合并的沉淀物重量的3倍，A.S1398精制中性蛋白的量(13万U/g)为合并的沉淀物重量的1.0％，温度为30℃，水解时间为3小时。
本发明的海参多肽、多糖的综合提取工艺，所述的乙醇为95％乙醇。
本发明所述的海参多肽、多糖的综合提取工艺与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步，1、采用两步法水解，使复合胰蛋白酶和A.S1398精制中性蛋白酶水解海参蛋白的功能得到互补，从而使海参多肽的得率大大提高，另一方面也有利于在得到海参多肽的同时分离制备高得率及高纯度的海参多糖；2、多肽得率可以达到68.2％。将粗多糖分离纯化后，以鲜品海参的重量计，多糖得率为鲜重的0.42％，海参多肽中分子量小于1000Da的多肽占80％以上。3、由于很好地解决了综合提取制备技术难题，不仅有利于对海参多肽和海参多糖的进一步系统、深入研究，而且大大提高了得率和纯度降低了成本从而有利于产业化；4、克服了化学法水解海参蛋白容易产生有毒物质的缺点，安全性高，反应条件温和，水解反应在全自动水解反应器中进行，使水解过程容易控制，比较完整的保持了海参多糖，并且不破坏氨基酸结构和其它营养成分，保留了海参多肽的有效成分。
具体实施方式
为了更好地理解与实施，下面结合实施例详细说明本发明海参多肽、多糖的综合提取工艺。
实施例1，以产于山东烟台芝罘岛的鲜刺参为原料，洗净除去泥沙及内脏，放入-70℃超低温冰箱速冻4.5小时，切成块状后放入绞肉机绞碎，然后放入胶体磨中研磨使成胶体化，将胶体化状态的海参55℃下加热25分钟，然后加入全自动水解反应器，加入去离子水和复合胰蛋白酶，去离子水的量为清洗去内脏的鲜海参重量的6倍，进行水解，水解结束后高温灭菌灭酶，取出水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为水溶性海参多肽的混合物；合并水解离心沉淀物和加入乙醇后离心沉淀物，加入去离子水混合配成水溶液，去离子水的量为合并的沉淀物重量的3倍，加入A.S1398精制中性蛋白的量(13万U/g)为合并的沉淀物重量的1.0％，温度为30℃，水解时间为3小时，上述水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为海参多肽的混合物并与上述的水解离心上清液合并，沉淀为粗多糖；将合并的上清液混合物利用旋转蒸发器浓缩，冷冻干燥得粉末多肽混合物，然后配制成5％的水溶液，用不同孔径超滤膜进行分级分离，脱苦脱色，真空浓缩后冷冻干燥得到溶解性良好的不同分子量段的海参多肽粉末；
将粗多糖沉淀配成质量百分比为6％的水溶液，离心除去不溶性杂质，上清液用双氧水氧化脱色，加入乙酸钾冷藏过夜，离心收集沉淀，沉淀经去离子水洗涤，配制成质量百分比为30％水溶液，经48小时透析，加入乙醇作为沉淀剂，乙醇与水体积比为8∶2，至少重复沉淀三次得精制海参多糖。
实施例1得到的海参多肽和海参多糖采用下述方法进行测定：
1、总蛋白含量的测定
采用微量凯氏定氮法
2、多肽的纯化
磷钼酸沉淀法：利用磷钼酸可以沉淀分子量10000以上的含氮物质。取灭酶后的酶解液20mL置于50mL容量瓶中，加入15mL水及2mL钼酸钠溶液，摇匀，立即用滤纸重复过滤至滤清，将滤液稀释适当倍数后取1mL用福林酚法测定低肽的含量。上述根据是硫酸和钼酸钠作用生成钼酸，然后和试样中存在的磷酸盐作用生成磷钼酸。
3、海参多肽含量的测定
采用福林-酚法
低肽含量(％)＝低肽量/总蛋白含量×稀释倍数×100
4、多糖含量的测定
蒽酮比色法：多糖在硫酸的作用下水解成单糖分子并迅速脱水形成糖醛衍生物，再将其与蒽酮缩合形成有色化合物，在适当波长下和一定浓度范围内，吸收值与糖浓度成一定的线性关系，从而比色测定其含量。配制一系列不同浓度梯度的标准葡萄糖溶液，分别取1mL置于试管中浸于冰水浴中冷却，然后在冰浴条件下加入蒽酮试剂，同时将各管置于沸水浴中准确加热7分钟，立即取出置冰浴中冷却至室温，640nm下测吸光度绘制标准曲线。取粗多糖加水溶解稀释适当的倍数，按上述步骤操作，由回归方程得到对应的多糖的含量。
5、水解度的测定
TCA法：TCA是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉淀蛋白质和肽段。随着反应的进行，蛋白质肽链被切成大小不等的片断，TCA溶解指数提高。可以被TCA沉淀的肽段所含的最少氨基酸残基数与底物的种类有关，就特定的底物而言，TCA溶解指数可以定性的反应蛋白的分解情况，溶解指数越高，表明较短肽断的含量越高。
取5mL酶解液加入5mL10％的TCA，混合振荡，4000r/min离心20min。取上清液做适当稀释，总蛋白含量和上清液可溶性蛋白的含量分别用微量凯氏定氮法和福林-酚法测定。
DH％＝(N2-N1)/(N0-N1)
N0为海参蛋白中的总蛋白，N1为酶解反应前海参蛋白中的TCA可溶性蛋白，N2为酶解液中的TCA可溶性蛋白。
由上述方法测得：海多肽得率可以达到68.2％。将粗多糖分离纯化后，以鲜品海参的重量计，多糖得率为0.42％。且经高效液相色谱监测表明海参多肽中分子量小于1000Da的多肽占80％以上。
实施例2，以产于山东烟台芝罘岛的鲜刺参为原料，洗净除去泥沙及内脏，放入-70℃超低温冰箱速冻4小时，切成块状后放入绞肉机绞碎，然后放入胶体磨中研磨使成胶体化，将胶体化状态的海参50℃下加热30分钟，然后加入全自动水解反应器，加入去离子水和复合胰蛋白酶，去离子水的量为清洗去内脏的鲜海参重量的5倍，进行水解，水解结束后高温灭菌灭酶，取出水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为水溶性海参多肽的混合物；合并水解离心沉淀物和加入乙醇后离心沉淀物，加入去离子水混合配成水溶液，去离子水的量为合并的沉淀物重量的3倍，加入A.S1398精制中性蛋白的量(13万U/g)为合并的沉淀物重量的1.0％，温度为30℃，水解时间为3小时，上述水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为海参多肽的混合物并与上述的水解离心上清液合并，沉淀为粗多糖；将合并的上清液混合物利用旋转蒸发器浓缩，冷冻干燥得粉末多肽混合物，然后配制成5％的水溶液，用不同孔径超滤膜进行分级分离，脱苦脱色，真空浓缩后冷冻干燥得到溶解性良好的不同分子量段的海参多肽粉末；
将粗多糖沉淀配成质量百分比为5％的水溶液，离心除去不溶性杂质，
上清液用双氧水氧化脱色，加入乙酸钾冷藏过夜，离心收集沉淀，沉淀经去离子水洗涤，配制成质量百分比为30％水溶液，经48小时透析，加入乙醇作为沉淀剂，乙醇与水体积比为8∶2，至少重复沉淀三次得精制海参多糖。
实施例3，以产于山东烟台芝罘岛的鲜刺参为原料，洗净除去泥沙及内脏，放入-70℃超低温冰箱速冻5小时，切成块状后放入绞肉机绞碎，然后放入胶体磨中研磨使成胶体化，将胶体化状态的海参70℃下加热20分钟，然后加入全自动水解反应器，加入去离子水和复合胰蛋白酶，去离子水的量为清洗去内脏的鲜海参重量的7倍，进行水解，水解结束后高温灭菌灭酶，取出水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为水溶性海参多肽的混合物；合并水解离心沉淀物和加入乙醇后离心沉淀物，加入去离子水混合配成水溶液，去离子水的量为合并的沉淀物重量的3倍，加入A.S1398精制中性蛋白的量(13万U/g)为合并的沉淀物重量的1.0％，温度为30℃，水解时间为3小时，上述水解液离心去除沉淀及不溶物，加入95％乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为海参多肽的混合物并与上述的水解离心上清液合并，沉淀为粗多糖；将合并的上清液混合物利用旋转蒸发器浓缩，冷冻干燥得粉末多肽混合物，然后配制成5％的水溶液，用不同孔径超滤膜进行分级分离，脱苦脱色，真空浓缩后冷冻干燥得到溶解性良好的不同分子量段的海参多肽粉末；
将粗多糖沉淀配成质量百分比为7％的水溶液，离心除去不溶性杂质，上清液用双氧水氧化脱色，加入乙酸钾冷藏过夜，离心收集沉淀，沉淀经去离子水洗涤，配制成质量百分比为30％水溶液，经48小时透析，加入乙醇作为沉淀剂，乙醇与水体积比为8∶2，至少重复沉淀三次得精制海参多糖。
Claims (5)
1.海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特征在于它包括如下步骤：
a选取鲜海参为原料，洗净除去泥沙及内脏，放入超低温冰箱速冻4-5小时，切成块状后放入绞肉机绞碎，然后放入胶体磨中研磨使成胶体化；
b将胶体化状态的海参50-60℃下加热20-30分钟；
c将经过上述前处理的海参加入全自动水解反应器，加入去离子水和复合胰蛋白酶，去离子水的量为清洗去内脏的鲜海参重量的5-7倍，进行水解；
d水解结束后高温灭菌灭酶；
e取出水解液离心去除沉淀及不溶物，加入乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为水溶性海参多肽的混合物；
f合并水解离心沉淀物和加入乙醇后离心沉淀物，加入去离子水混合配成水溶液，加入A.S1398精制中性蛋白酶进一步水解；
g取出上述步骤水解液离心去除沉淀及不溶物，加入乙醇至体系乙醇体积分数为60％，静止12h后离心，上清液为海参多肽的混合物并与e步骤水解离心上清液合并，沉淀为粗多糖；
h将合并的上清液——海参多肽的混合物利用旋转蒸发器浓缩，冷冻干燥得粉末多肽混合物；
i将上述粉末多肽混合物配制成5％的水溶液，用不同孔径超滤膜进行分级分离，脱苦脱色，真空浓缩后冷冻干燥得到溶解性良好的不同分子量段的海参多肽粉末；
j将g步骤的粗多糖配成质量百分比为5～7％的水溶液，离心除去不溶性杂质，上清液用双氧水氧化脱色，加入乙酸钾冷藏过夜，离心收集沉淀；
k沉淀经去离子水洗涤，配制成质量百分比为30％水溶液，经48小时透析，加入乙醇作为沉淀剂，乙醇与水体积比为8∶2，至少重复沉淀三次得精制海参多糖。
2.根据权利要求1所述的海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特征在于步骤a所述的超低温冰箱的温度为-70℃。
3.根据权利要求1所述的海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特征在于步骤c所述的复合胰蛋白酶的量(8000U/g)为清洗去内脏的鲜海参重量的1.0％，酶解温度50℃，水解时间2h。
4.根据权利要求1所述的海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特征在于步骤f所述的去离子水的量为合并的沉淀物重量的3倍，A.S1398精制中性蛋白的量(13万U/g)为合并的沉淀物重量的1.0％，温度为30℃，水解时间为3小时。
5.根据权利要求1所述的海参多肽、多糖的综合提取工艺，其特征在于所述的乙醇为95％乙醇。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007100147345A CN101191139B (zh) | 2007-04-28 | 2007-04-28 | 海参多肽、多糖的综合提取工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2007100147345A CN101191139B (zh) | 2007-04-28 | 2007-04-28 | 海参多肽、多糖的综合提取工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101191139A true CN101191139A (zh) | 2008-06-04 |
| CN101191139B CN101191139B (zh) | 2011-05-11 |
Family
ID=39486340
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2007100147345A Expired - Fee Related CN101191139B (zh) | 2007-04-28 | 2007-04-28 | 海参多肽、多糖的综合提取工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101191139B (zh) |
Cited By (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101890041A (zh) * | 2010-02-10 | 2010-11-24 | 上海蓝怡科技有限公司 | 腹膜透析液及其制备方法 |
| CN101411523B (zh) * | 2008-11-14 | 2011-04-20 | 钱武刚 | 超声波萃取海参原液的方法 |
| CN102550797A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-11 | 大连海洋大学 | 海参肽提取液的生产方法 |
| CN101584483B (zh) * | 2008-05-19 | 2012-09-19 | 丹东阿里郎生物工程有限公司 | 一种超声波萃取海参活性液体的方法 |
| CN102823723A (zh) * | 2012-08-27 | 2012-12-19 | 楚大波 | 一种核苷多肽组合物、其制备方法及用途 |
| CN102907558A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-06 | 山东省海洋水产研究所 | 一种海参多肽的加工方法 |
| CN103005138A (zh) * | 2012-12-17 | 2013-04-03 | 江苏海辰科技集团有限公司 | 海参肽的提取工艺 |
| CN103120328A (zh) * | 2013-01-22 | 2013-05-29 | 浙江大学舟山海洋研究中心 | 一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法 |
| CN103255186A (zh) * | 2013-04-23 | 2013-08-21 | 集美大学 | 鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法 |
| CN103265642A (zh) * | 2013-05-13 | 2013-08-28 | 中国科学院海洋研究所 | 一种从海参加工废弃物中提取活性物质的方法 |
| CN103320487A (zh) * | 2013-07-04 | 2013-09-25 | 威海益合元生物科技有限公司 | 一种可溶性酶与固定化酶联合水解制备海参肽的方法 |
| CN103911414A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-09 | 刘凯 | 海参内脏降压活性肽及其制备方法 |
| CN103937860A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-07-23 | 刘凯 | 促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法 |
| CN103951759A (zh) * | 2014-04-22 | 2014-07-30 | 钦州市山海生物科技有限公司 | 一种从海参中提取海参多糖的方法 |
| CN104137996A (zh) * | 2013-05-06 | 2014-11-12 | 烟台华康海洋食品有限公司 | 一种海参内脏的处理加工方法 |
| CN104397689A (zh) * | 2014-11-18 | 2015-03-11 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种具有免疫调节作用的营养品及其制备方法 |
| CN104544454A (zh) * | 2014-12-19 | 2015-04-29 | 渤海大学 | 一种海参肽营养粉及其制备方法 |
| CN105211794A (zh) * | 2015-09-10 | 2016-01-06 | 杨丽敏 | 超低温提取马铃薯活性的全营养液的方法 |
| CN105651921A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-06-08 | 中国海洋大学 | 一种利用硫酸寡糖组鉴别北极刺参的方法 |
| CN105695545A (zh) * | 2016-03-02 | 2016-06-22 | 集美大学 | 一种海参岩藻聚糖硫酸酯和海参糖蛋白的制备方法 |
| CN105942297A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-09-21 | 李涛 | 一种海参粉及制备方法 |
| CN106726669A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-05-31 | 名臣健康用品股份有限公司 | 一种含有海参多肽的抗衰老化妆品基质及其制备方法 |
| CN106916202A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 海参生物活性肽在制备抗氧化、延衰保健食品和化妆品中的应用 |
| CN106916867A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 一种海参多肽及其制备方法与应用 |
| CN107385001A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-11-24 | 烟台参福元海洋科技有限公司 | 从海参深加工副产物中提取海参低聚肽和海参多糖的工艺 |
| CN107397226A (zh) * | 2017-06-30 | 2017-11-28 | 宁德师范学院 | 一种降血脂海参多肽微胶囊及其制备方法 |
| CN107541533A (zh) * | 2017-06-13 | 2018-01-05 | 湖南民康生物技术研究所 | 一种药食真菌菌丝多糖多肽免疫增强剂的制备方法 |
| CN107955081A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-04-24 | 黑龙江美丽石岛科技开发有限公司 | 一种海参中多种营养物质的联合提取方法 |
| CN108546282A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-09-18 | 北京同仁堂健康（大连）海洋食品有限公司 | 一种海参低聚糖肽的制备方法 |
| CN108753893A (zh) * | 2018-06-21 | 2018-11-06 | 重庆申高生化制药股份有限公司 | 海参肽及其酶解提取工艺 |
| CN109106665A (zh) * | 2018-08-31 | 2019-01-01 | 青岛银色世纪健康产业集团有限公司 | 一种海洋生物肽祛痘修复面膜及其制备方法 |
| CN109457005A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-12 | 胜田(福清)食品有限公司 | 一种分步高效制备海参内脏抗氧化肽的制备方法 |
| CN110195090A (zh) * | 2019-05-15 | 2019-09-03 | 池州市月亮湾生物科技有限公司 | 海参肠卵多肽粉的制备方法及所得海参肠卵多肽粉 |
| US20210301314A1 (en) * | 2020-03-26 | 2021-09-30 | Chenland Nutritionals Inc. | Preparation method and application of sea cucumber protein peptides |
| CN115067484A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-09-20 | 泸州品创科技有限公司 | 海参基料及其制备方法和应用 |
| CN115786431A (zh) * | 2022-12-01 | 2023-03-14 | 大连民族大学 | 一种海参小分子水溶性多肽的提取方法 |
| CN115948492A (zh) * | 2023-01-31 | 2023-04-11 | 海南华研胶原科技股份有限公司 | 一种高海参多糖含量的海参肽及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1871945B (zh) * | 2005-06-01 | 2010-05-26 | 王伟成 | 一种海参活性物质冻干速溶粉的提取方法 |
-
2007
- 2007-04-28 CN CN2007100147345A patent/CN101191139B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101584483B (zh) * | 2008-05-19 | 2012-09-19 | 丹东阿里郎生物工程有限公司 | 一种超声波萃取海参活性液体的方法 |
| CN101411523B (zh) * | 2008-11-14 | 2011-04-20 | 钱武刚 | 超声波萃取海参原液的方法 |
| CN101890041A (zh) * | 2010-02-10 | 2010-11-24 | 上海蓝怡科技有限公司 | 腹膜透析液及其制备方法 |
| CN101890041B (zh) * | 2010-02-10 | 2012-07-25 | 上海蓝怡科技有限公司 | 腹膜透析液及其制备方法 |
| CN102550797A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-11 | 大连海洋大学 | 海参肽提取液的生产方法 |
| CN102550797B (zh) * | 2012-03-02 | 2015-01-21 | 大连海洋大学 | 海参肽提取液的生产方法 |
| CN102823723B (zh) * | 2012-08-27 | 2014-02-26 | 楚大波 | 一种核苷多肽组合物、其制备方法及用途 |
| CN102823723A (zh) * | 2012-08-27 | 2012-12-19 | 楚大波 | 一种核苷多肽组合物、其制备方法及用途 |
| CN102907558A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-06 | 山东省海洋水产研究所 | 一种海参多肽的加工方法 |
| CN103005138A (zh) * | 2012-12-17 | 2013-04-03 | 江苏海辰科技集团有限公司 | 海参肽的提取工艺 |
| CN103120328A (zh) * | 2013-01-22 | 2013-05-29 | 浙江大学舟山海洋研究中心 | 一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法 |
| CN103255186A (zh) * | 2013-04-23 | 2013-08-21 | 集美大学 | 鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法 |
| CN103255186B (zh) * | 2013-04-23 | 2015-03-25 | 集美大学 | 鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法 |
| CN104137996A (zh) * | 2013-05-06 | 2014-11-12 | 烟台华康海洋食品有限公司 | 一种海参内脏的处理加工方法 |
| CN103265642A (zh) * | 2013-05-13 | 2013-08-28 | 中国科学院海洋研究所 | 一种从海参加工废弃物中提取活性物质的方法 |
| CN103265642B (zh) * | 2013-05-13 | 2015-07-15 | 中国科学院海洋研究所 | 一种从海参加工废弃物中提取活性物质的方法 |
| CN103320487A (zh) * | 2013-07-04 | 2013-09-25 | 威海益合元生物科技有限公司 | 一种可溶性酶与固定化酶联合水解制备海参肽的方法 |
| CN103320487B (zh) * | 2013-07-04 | 2015-01-07 | 威海益合元生物科技有限公司 | 一种可溶性酶与固定化酶联合水解制备海参肽的方法 |
| CN103937860A (zh) * | 2014-03-26 | 2014-07-23 | 刘凯 | 促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法 |
| CN103937860B (zh) * | 2014-03-26 | 2016-04-06 | 刘凯 | 促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法 |
| CN103911414A (zh) * | 2014-04-10 | 2014-07-09 | 刘凯 | 海参内脏降压活性肽及其制备方法 |
| CN103911414B (zh) * | 2014-04-10 | 2016-05-18 | 北京灵净泉生物科技有限公司 | 海参内脏降压活性肽及其制备方法 |
| CN103951759A (zh) * | 2014-04-22 | 2014-07-30 | 钦州市山海生物科技有限公司 | 一种从海参中提取海参多糖的方法 |
| CN104397689A (zh) * | 2014-11-18 | 2015-03-11 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种具有免疫调节作用的营养品及其制备方法 |
| CN104544454A (zh) * | 2014-12-19 | 2015-04-29 | 渤海大学 | 一种海参肽营养粉及其制备方法 |
| CN105211794A (zh) * | 2015-09-10 | 2016-01-06 | 杨丽敏 | 超低温提取马铃薯活性的全营养液的方法 |
| CN106916867A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 一种海参多肽及其制备方法与应用 |
| CN106916202A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 无限极（中国）有限公司 | 海参生物活性肽在制备抗氧化、延衰保健食品和化妆品中的应用 |
| CN105651921A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-06-08 | 中国海洋大学 | 一种利用硫酸寡糖组鉴别北极刺参的方法 |
| CN105695545A (zh) * | 2016-03-02 | 2016-06-22 | 集美大学 | 一种海参岩藻聚糖硫酸酯和海参糖蛋白的制备方法 |
| CN105942297A (zh) * | 2016-07-07 | 2016-09-21 | 李涛 | 一种海参粉及制备方法 |
| CN106726669A (zh) * | 2016-11-18 | 2017-05-31 | 名臣健康用品股份有限公司 | 一种含有海参多肽的抗衰老化妆品基质及其制备方法 |
| CN107541533B (zh) * | 2017-06-13 | 2021-03-19 | 湖南民康生物技术研究所 | 一种药食真菌菌丝多糖多肽免疫增强剂的制备方法 |
| CN107541533A (zh) * | 2017-06-13 | 2018-01-05 | 湖南民康生物技术研究所 | 一种药食真菌菌丝多糖多肽免疫增强剂的制备方法 |
| CN107397226A (zh) * | 2017-06-30 | 2017-11-28 | 宁德师范学院 | 一种降血脂海参多肽微胶囊及其制备方法 |
| CN107385001A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-11-24 | 烟台参福元海洋科技有限公司 | 从海参深加工副产物中提取海参低聚肽和海参多糖的工艺 |
| CN107955081A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-04-24 | 黑龙江美丽石岛科技开发有限公司 | 一种海参中多种营养物质的联合提取方法 |
| CN108546282A (zh) * | 2018-04-13 | 2018-09-18 | 北京同仁堂健康（大连）海洋食品有限公司 | 一种海参低聚糖肽的制备方法 |
| CN108753893A (zh) * | 2018-06-21 | 2018-11-06 | 重庆申高生化制药股份有限公司 | 海参肽及其酶解提取工艺 |
| CN108753893B (zh) * | 2018-06-21 | 2022-06-24 | 重庆申高生化制药股份有限公司 | 海参肽及其酶解提取工艺 |
| CN109106665A (zh) * | 2018-08-31 | 2019-01-01 | 青岛银色世纪健康产业集团有限公司 | 一种海洋生物肽祛痘修复面膜及其制备方法 |
| CN109457005A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-12 | 胜田(福清)食品有限公司 | 一种分步高效制备海参内脏抗氧化肽的制备方法 |
| CN110195090A (zh) * | 2019-05-15 | 2019-09-03 | 池州市月亮湾生物科技有限公司 | 海参肠卵多肽粉的制备方法及所得海参肠卵多肽粉 |
| US20210301314A1 (en) * | 2020-03-26 | 2021-09-30 | Chenland Nutritionals Inc. | Preparation method and application of sea cucumber protein peptides |
| CN115067484A (zh) * | 2022-06-27 | 2022-09-20 | 泸州品创科技有限公司 | 海参基料及其制备方法和应用 |
| CN115786431A (zh) * | 2022-12-01 | 2023-03-14 | 大连民族大学 | 一种海参小分子水溶性多肽的提取方法 |
| CN115948492A (zh) * | 2023-01-31 | 2023-04-11 | 海南华研胶原科技股份有限公司 | 一种高海参多糖含量的海参肽及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101191139B (zh) | 2011-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101191139A (zh) | 海参多肽、多糖的综合提取工艺 | |
| CN103255186B (zh) | 鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法 | |
| CN104513843B (zh) | 一种多糖和蛋白肽的联合制备方法 | |
| CN104152519B (zh) | 一种酶溶性高纯超螺旋结构ⅰ型胶原蛋白的制备方法 | |
| CN101555290A (zh) | 黄芪均多糖的制备方法 | |
| CN107325205B (zh) | 一种菊粉和低聚果糖糖浆联产方法 | |
| TWI605760B (zh) | Mucin and collagen extraction method respectively | |
| CN102070727B (zh) | 一种肝素钠的提取方法 | |
| CN103450703A (zh) | 一种制备高纯度脱味紫甘薯色素的方法 | |
| CN109943612B (zh) | 一种酶解鲢鱼鱼鳞生产高活性鱼糜及制品抗冻剂的方法 | |
| WO2025200155A1 (zh) | 一种含矿物质的高纯度胶原三肽及其制备方法 | |
| CN108546281A (zh) | 一种人参低聚肽及其制备方法和应用 | |
| CN109439717B (zh) | 一种小分子黄精多肽的提取方法 | |
| CN102617746A (zh) | 从大枣中分离纯化制备多种低聚糖的方法 | |
| CN115594775B (zh) | 一种银耳多糖的制备方法及应用 | |
| CN103734640A (zh) | 一种黑蒜浓缩液的制备方法 | |
| CN102304191B (zh) | 一种海肠废弃内脏中粗多糖的提取方法 | |
| CN108409805A (zh) | 一种飞燕草素-3-o-半乳糖苷的分离纯化方法及其应用 | |
| CN114250261B (zh) | 一种红枣核多肽的提取方法 | |
| CN108409807B (zh) | 一种分离制备锦葵素-3-o-葡萄糖苷的方法 | |
| CN108864224B (zh) | 一种锦葵素-3-o-阿拉伯糖苷的分离纯化方法及其应用 | |
| CN116554264B (zh) | 刺梨中分离的寡肽及其制备方法、抗氧化性应用和制品 | |
| CN104131060A (zh) | 一种河蚬抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN107836613A (zh) | 小球藻生长因子螺旋藻多糖功能饮品制备方法 | |
| CN109468358B (zh) | 一种肉苁蓉螯合肽的提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: HU NAN QIU ZEYOU PATENT STRATEGIC PLANNING CO., LT Free format text: FORMER OWNER: QIU ZEYOU Effective date: 20101029 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 410011 28/F, SHUNTIANCHENG, NO.59, SECTION 2 OF FURONG MIDDLE ROAD, CHANGSHA CITY, HU NAN PROVINCE TO: 410205 JUXING INDUSTRY BASE, NO.8, LUJING ROAD, CHANGSHA HIGH-TECH. DEVELOPMENT ZONE, YUELU DISTRICT, CHANGSHA CITY, HU NAN PROVINCE |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20101108 Address after: 266100 Shandong Province, Qingdao city Laoshan District Songling Road No. 238 Applicant after: Ocean University of China Address before: 264003 School of chemical and biological engineering, Yantai University, 30 Qingquan Road, Laishan, Shandong, Yantai Applicant before: Fu Xuejun |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110511 Termination date: 20130428 |