CN101161871B - 蛋白质结晶板及结晶方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分(10)，以及在结晶板主体上以阵列形式分布的储槽单元(20)，每一所述储槽单元(20)具有第一面板(240)，在所述第一面板中间位置形成一凹槽，所述凹槽底部为第二面板(250)，在所述第二面板中间位置或靠近一侧的位置凹入形成第一储槽(220)，所述第一储槽(220)至少一侧的第二面板(250)中形成有至少一个滴液槽(230)，所述第一面板(240)与第二面板(250)通过连接部(260)连接，所述结晶板主体部分(10)在其四周具有支撑部(300)。本发明还涉及一种利用上述结晶板进行蛋白质结晶的方法。

Description

蛋白质结晶板及结晶方法

技术领域

本发明总体涉及一种用于生物领域的结晶板，特别涉及一种用于高通量(生产量)的蛋白质结晶并符合SBS标准中的前三项标准的结晶板，以及利用上述结晶板的晶体生长方法。

背景技术

蛋白质是生命活动的主要承担者，对其三维结构的了解是理解蛋白质功能的前提。例如，许多疾病是由于某些蛋白质在空间的错误折叠，形成异常的三维结构而引发。生物大分子结构特别是蛋白质结构的解析，不仅对人类理解蛋白质功能、探讨生命的本质和起源有着重要意义，而且为致病机理以及药物靶标的发现与合理化的药物设计等提供了重要的依据。蛋白质结构数据库PDB(ProteinData Bank)最近的结果显示，到2006年3月14日，已有35579种蛋白结构被解析，其中86％以上的蛋白结构是通过X射线晶体学完成的。可见，X射线晶体学迄今仍然是解析蛋白三维结构的最重要手段。X射线单晶衍射方法测定蛋白质结构大体流程可以顺次分为克隆、表达、纯化、结晶以及晶体结构解析这五个步骤。由于所需的步骤较多、时间消耗相应较长、仪器设备需求也较复杂，解析每个蛋白晶体结构的消耗还是很大的。根据美国NIH统计资料，就目前的水平，平均解析一个蛋白晶体结构需要十万美元以上的费用。得到具有衍射能力的蛋白质单晶样品是晶体结构解析的前提，也是目前X射线晶体结构解析的“瓶颈”步骤。从理论上讲，只要找到合适的晶体生长条件，可溶性的蛋白质都可以得到高质量、适用于晶体结构解析的单晶。但是目前蛋白晶体生长条件的筛选及优化很大程度上更像一门艺术，这个“合适条件”的寻找需要大量的尝试，进行繁琐的初筛和优化。

目前常用的蛋白质结晶方法有悬滴气相扩散法、坐滴气相扩散法、油覆法等。悬滴气相扩散法是指在涂有密封材料(如凡士林)的玻璃片、塑料片或专用胶带上滴加待结晶的蛋白质溶液和结晶筛选溶液等，并倒扣在含有上述结晶筛选溶液的池液上。坐滴气相扩散法需要将待结晶的蛋白质溶液和结晶筛选溶液的混合液滴加在一个滴液槽内，并用专用塑料膜或胶带密封。

图1和图2分别描述了悬滴法和坐滴法蛋白质结晶的示意图，而图3示出了现有技术用于悬滴法的24孔板的立体图。

图1为悬滴法的示意图。大储槽2中的用于蛋白质结晶筛选的溶液通常包含缓冲剂或沉淀剂等。蛋白质溶液的小液滴4中也包含按一定比例加入的相同的蛋白质结晶筛选溶液以及待结晶的蛋白质溶液，使得这些溶液中的诸如缓冲剂或沉淀剂的浓度低于大储槽2中的溶液，在密封后，使得各单元内通过大储槽2的溶液与小液滴4两者之间的蒸汽扩散达到进行蛋白质结晶的动态平衡的内部环境。

图2为坐滴法的示意图。在这种方法中，将蛋白质小液滴4置于储槽溶液2上方的支架上，这与悬滴法是相反的。随着人们对蛋白结晶过程认识的加深以及对各种试剂的大量尝试与组合，晶体筛选条件日益增多，以Hampton公司常用的筛选条件为例，Screen KitI、II及Index，共192个筛选条件，常用来优化晶体的添加剂试剂盒也有近100个条件，其他公司或实验室可以提供的常用晶体筛选条件也有几百到上千种。对每一种蛋白可以进行成千条件的筛选，但大量条件的“海选”是以大量时间及试剂的消耗为前提的，并且也需要更多的蛋白，很多情况下大量蛋白质的生产表达及纯化是非常困难的。

目前进行蛋白质晶体生长的通常采用量在0.1～4.0μL之间，进行筛选的结晶板多为塑料制品。对于高通量、完全自动化晶体生长来说，通常采用符合国际标准(ANSI标准SBS(Society forBiomolecular Sciences))的96孔、384孔甚至1536孔结晶板，筛选条件多、加样量小，大大节省了样品和筛选试剂。但同时由于池液槽和滴液槽太小，排列紧密，非常不适于人工操作，反而减慢了手动操作的工作效率。

而对于大多数实验室，晶体生长和筛选一般还是由手工操作完成，使用传统的24孔结晶板(图3所示)，但是该结晶板不适合于坐滴气相扩散法。此外，目前市场有许多针对符合SBS国际标准的工具和自动化仪器，如加样器(如Multi-channel Pipette)、自动化晶体生长观测系统，而传统24孔结晶板因为不符合SBS国际标准而不能使用这些先进技术。

另一方面，样品易挥发、试剂加样量少等这些因素都严重影响实验结果的可重复性，尤其是在人工操作下准确性更差、操作比较慢。此外蛋白质及溶液性质不同，蛋白质晶体生长的速度可以从几小时到几周甚至几个月不等，因此对于晶体生长环境体系的封闭性要求很高。但是目前许多适用于高通量的结晶板都普遍存在不同程度的泄漏问题。

针对上述问题，结合加样工具和观测系统等发展的技术现状，并考虑到目前国内外多数实验仍然采用人工或半自动化方法进行蛋白质晶体生长，本发明提出了一种蛋白质结晶板以及蛋白质结晶方法，即适用于高通量的完全自动化晶体生长和观测筛选系统，又满足多数实验室半自动化的需要。

发明内容

基于上述需要，本发明的一个方面提供了一种用于高通量蛋白质结晶的蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分，以及在结晶板主体上以阵列形式分布的储槽单元，每一所述储槽单元具有第一面板，在所述第一面板中间位置形成一凹槽，所述凹槽底部为第二面板，在所述第二面板中间位置凹入形成第一储槽，在所述第一储槽至少一侧的第二面板中形成有至少二个滴液槽，所述第一面板与第二面板通过连接部连接，所述结晶板主体部分在其四周具有支撑部。

优选地，所述阵列形式分布的储槽单元为24个或48个；而所述至少二个滴液槽为两个、三个、四个、五个或六个。

优选地，所述结晶板是由高纯度热塑性塑料制成的，如聚酰胺(PA)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、苯乙烯-丙烯腈树脂(SAN)、聚环烯腈聚合物(COP)等。

优选地，所述结晶板由封口带或封板膜进行密封。

优选地，所述第一储槽的体积为0.04～1.4ml，所述滴液槽的体积为0.2～7μl。

更优选地，所述结晶板由聚苯乙烯制成。

优选地，其中，滴液槽与第一储槽的形状独立选自由圆柱体、半球体、倒置的圆台体或圆锥体、立方体、长方体构成的组。

更优选地，其中，所述结晶板为24(即4×6)孔板或48(即8×6)孔板，其尺寸符合SBS标准，即符合标准ANSI/SBS1-2004：覆盖区尺寸、ANSI/SBS2-2004：高度尺寸、ANSI/SBS3-2004底部外侧凸缘尺寸，并对ANSI/SBS4-2004：孔位置标准进行了改进。

更优选地，其中，所述结晶板为48(即8×6)孔板，包括结晶板主体部分，所述主体部分的第一面板的总长度为120.5～125.5mm，总宽度为78.5～83.5mm；其中，每一储槽单元的长度为13.5～15.5mm、宽度为6.5～7.5mm；第一面板和第二面板上表面之间的距离为2～8mm；第一储槽的宽度为3.0～6.0mm、长度为6.5～7.5mm、深度为3.5～9.5mm；滴液槽的上端直径R_上为3.0≥R_上≥1.5mm、下端直径R_下为2.5≥R_下≥0.5mm，滴液槽的深度为0.2～1.0mm；在储槽单元四周的第一面板的宽度为1.5～4.5mm，而在结晶板主体部分的最外周的储槽单元外周的第一面板的宽度为5.5～10.5mm；所述支撑部的总高度为13.8～14.6mm。

更优选地，其中，所述结晶板为24(即4×6)孔板，包括结晶板主体部分，所述主体部分的第一面板的总长度为120.5～125.5mm，总宽度为78.5～83.5mm；其中，每一所述储槽单元的长度为15.0～16.5mm、宽度为15.0～16.5mm；所述第一面板和第二面板上表面之间的距离为2～8mm；第一储槽的长度为15.0～16.5mm、宽度为5～9mm、深度为3.5～9.5mm；滴液槽的上端直径R_上为3.0≥R_上≥1.5mm、下端直径R_下为2.5≥R_下≥0.5mm，滴液槽的深度为0.2～1.0mm；在储槽单元四周的第一面板的宽度为1.5～3.0mm，而在结晶板主体部分的最外周的储槽单元外周的第一面板的宽度为5.5～10.0mm；支撑部的总高度为13.8～14.6mm。更优选地，其中，所述支撑部由上支撑部、下支撑部以及连接上下支撑部的支撑连接部构成，其中上支撑部的高度为6.1～12.5mm、下支撑部的高度为2.0～8.0mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部的宽度为1.0～4.0mm。再优选地，其中，上支撑部的高度为7.6～8.9mm、下支撑部的高度为2.7～6mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部的宽度为1.5～3.0mm。

优选地，所述结晶板的第一面板在其宽度方向上的一端分别具有两个导角α和β；而所述结晶板的上支撑部、及支撑连接部也分别具有对应于结晶板的第一面板的导角α和β。更优选地，导角α和β为135+/-10°。

优选地，所述结晶板进一步包括上部壳体，所述壳体由与所述结晶板主体部分相适应的上表面和多个侧面组成，并支撑于所述支撑部之上，用于所述结晶板的防尘与堆叠。

根据本发明的另一个方面，提供了一种利用高通量蛋白质结晶板进行蛋白质结晶的方法，包括以下步骤：

a.将适当体积的由选自缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合组成的结晶池液加入到每个储槽单元内的第一储槽中；

b.将适当体积与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例分别加入到每个所述储槽单元中的至少一个滴液槽中，同时还可根据需要在滴液槽中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.利用封口带或封板膜覆盖在所述储槽单元的第一面板上，将在所述结晶板主体上以阵列形式分布的每一储槽单元内部密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将该结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

根据本发明的又一个方面，提供了另一种利用高通量结晶板进行蛋白质结晶的方法，包括以下步骤：

a.将适当体积的选自缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合组成的结晶池液加入到每个储槽单元中的第一储槽中；

b.将适当体积的与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例根据所述结晶板的储槽单元的分布情况滴加到封口带或封板膜之上，同时还可根据需要在上述液滴中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.将所述封口带或封板膜倒置并覆盖在所述储槽单元的第一面板上，利用所述封口带或封板膜提供在所述结晶板主体上以阵列形式分布的每一储槽单元内部的密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将该结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

其中，每一储槽单元中的蛋白质溶液可以是相同的或不同的；而不同的储槽单元中的蛋白质溶液也可以是相同的或不同的。

其中，蛋白质结晶过程由自动化蛋白质晶体生长观测系统、照相机、摄像机或人工进行监测。

可选地，在步骤b的溶液中可以进一步添加其他的添加剂。优选地，所述至少二个滴液槽为多个，在所述第一储槽一侧或两侧的第二面板中形成有多个滴液槽。

由于根据本发明的高通量蛋白质结晶板尺寸符合SBS(Societyfor Biomolecular Sciences)标准，即符合标准ANSI/SBS1-2004：覆盖区尺寸、ANSI/SBS2-2004：高度尺寸、ANSI/SBS3-2004底部外侧凸缘尺寸，并对ANSI/SBS4-2004：孔位置标准进行了改进，因而可方便地用于机械化操作，并且其结构简单，使用方便。根据本发明的蛋白质结晶板在每一储槽单元内的第一储槽和至少二个滴液槽之间形成了进行蛋白质结晶的动态平衡的内部环境，同时在不同的储槽单元内部各自形成了气体密封。

本发明提供的结晶板既适合于大多数实验室中晶体生长和筛选的手工操作，又适合于坐滴气相扩散法。此外，本发明提供的结晶板的结构与目前市场上的符合SBS国际标准的工具和自动化仪器，如加样器(如Multi-channel Pipette)、自动化晶体生长观测系统等相匹配，因而可以利用符合SBS国际标准的这些先进技术。

利用根据本发明的蛋白质结晶板进行蛋白质结晶，由于每个储槽单元有多个滴液槽，可以同时进行几种不同蛋白质的结晶条件筛选，减少平均每个蛋白质结晶条件筛选的试剂用量，因而可以降低蛋白质筛选的成本，而且由于在每一储槽单元内的各滴液槽或者是分散的，或者相邻两者之间的距离大于现有技术中的各滴液槽之间的距离，为手工操作提供了更大的工作空间，同时该晶体板遵守SBS标准，可以用自动化设备进行操作。此外，每个储槽单元之间的距离较大，在很大程度上克服了目前许多高通量结晶板密封性差，泄露的问题。

应该理解，以上的一般性描述和以下的详细描述都是出于列举和说明性的目的，是为了对本发明提供进一步的说明，并不用于限制本发明。

附图说明

构成说明书一部分的附图有助于进一步理解本发明，这些附图图示说明了本发明的一些实施例，并可与说明书一起用来说明本发明的原理。

图1示出了现有技术的悬滴法的蛋白质结晶的示意图；

图2示出了现有技术的坐滴法的蛋白质结晶的示意图；

图3示出了现有技术的悬滴法的24孔板的示意图；

图4示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)的立体图；

图5示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)的俯视图；

图6示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)沿第A行的滴液槽中心线的纵剖图；

图7示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)沿第1列的滴液槽中心线的纵剖图；

图8示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)的一个储槽单元的纵剖图；

图9示出了根据本发明的一种蛋白质结晶板(48×2，即(8×6)×2结晶板)在结晶板主体边缘两个连续储槽单元的局部纵剖图；

图10a示出了根据本发明的另一种蛋白质结晶板(24×3，即(4×6)×3结晶板)的立体图；

图10b示出了根据本发明的另一种蛋白质结晶板(24×3，即(4×6)×3结晶板)的俯视图；

图11示出了根据本发明的另一种蛋白质结晶板(24×3，即(4×6)×3结晶板)沿第A行中的一行滴液槽中心线的纵剖图；

图12示出了根据本发明的另一种蛋白质结晶板(24×3，即(4×6)×3结晶板)沿第1列的滴液槽中心线的纵剖图；

图13示出了根据本发明的又一种蛋白质结晶板(24×6，即(4×6)×3结晶板)的俯视图；

图14示出了根据本发明的镜像对称的蛋白质结晶板的一个储槽单元中的滴液槽可能的平面布置图；

图15示出了根据本发明的非镜像对称的蛋白质结晶板沿第A行的滴液槽中心线的纵剖图，以及对应的在一个储槽单元中的滴液槽可能的平面布置图；

图16示出了图4中的用于蛋白质结晶的48×2(即(4×6)×2)结晶板的局部立体图；

图17示出了图16中的48×2，即(8×6)×2结晶板在利用无接缝的封口带(胶带)进行密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况的放大照片；

图18示出了图16中的48×2，即(8×6)×2结晶板利用在相邻的两个储槽单元之间的第一面板上搭接的封口带(胶带)进行密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况的放大照片；

图19示出了图16中的48×2，即(8×6)×2结晶板利用在相邻的两个储槽单元之间的第一面板上搭接的封口带(胶带)进行密封时搭接的封口带(胶带)的示意图；

图20示出了现有技术中的结晶板在利用无接缝的封口带(胶带)进行密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况的放大照片；

图21示出了现有技术中的结晶板利用在相邻的两个储槽单元之间的第一面板上搭接的封口带(胶带)进行密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况的放大照片；以及

图22示出了图16中的48×2，即(8×6)×2结晶板利用无接缝的封口带(胶带)进行密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况、利用刀片将其中的一个储槽单元上方的封口带打开、以及将打开的一个储槽单元的封口带再密封后的放大照片，其中左侧的图代表进行密封、切割并取出晶体、以及再密封操作时封口带的状态，右侧的图代表进行的密封、切割并取出晶体、以及再密封操作时封口带密封情况的放大照片。

具体实施方式

以下对于某些实施例的详细说明给出了对本发明的具体实施例的各种描述。但是本发明可以由权利要求所限定和覆盖的多种不同方式来实施。该具体实施方式将结合附图进行，并且在附图中相同或相应的要素或部件或部位用同一标号表示。

参见图4至图16，根据本发明的一个方面，在本发明的一个具体实施例中，提供了一种用于高通量蛋白质结晶的蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分10，以及在结晶板主体上以阵列形式分布的储槽单元20，每一储槽单元20具有第一面板240，在第一面板中间位置形成一凹槽，该凹槽底部为第二面板250，在第二面板中间位置或靠近一侧的位置凹入形成第一储槽220，在第一储槽220至少一侧的第二面板250中形成有至少二个滴液槽230，第一面板240与第二面板250通过连接部260连接，结晶板主体部分10在其四周具有支撑部300。优选地，支撑部300由上支撑部320和下支撑部340及连接上下支撑部的支撑连接部360构成。

参见图4至图9以及图14～图15，在一具体实施例(48(8×6)孔板)中，至少二个滴液槽230为多个，可为2个(图4至图9、图14)、3个(图15)、4个(图14)、6个(图15)、或任何适宜个数；多个滴液槽230凹入在第一储槽220两侧的第二面板250中。

参见图10至图15，在另一具体实施例(24(4×6)孔板)中，至少二个滴液槽230为多个，可以为2个(图14)、3个(图16)、4个(图14)、5个(图15)、6个(图10或图15)、或任何适宜多个；多个滴液槽230凹入在第一储槽220一侧的第二面板250中。

在又一具体实施例中，结晶板主体部分10中以阵列形式分布的储槽单元20为24个，即为4×6个(即，24孔板，参见图10至15)；在另一具体实施例中，阵列形式分布的储槽单元20为48个，即为8×6个(即，48孔板，参见图4至9)；在另一个具体实施例中，阵列形式分布的储槽单元20为96个，即为8×12(即，96孔板，未示出)，在一个储槽单元20中，至少二个滴液槽230为两个、三个、四个、五个或六个。

在一具体实施例中，第一储槽220的形状为圆柱体、立方体、长方体、半球体、倒置的圆台体或圆锥体；滴液槽230的形状为圆柱体、立方体、长方体、半球体、倒置的圆台体或圆锥体。

在一具体实施例中，第一储槽220的体积为0.04～1.4ml，滴液槽230的体积为0.2～7μl。

结晶板由不限于以下的材料制成，即由高纯度热塑性塑料制成，如聚酰胺(PA)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、苯乙烯-丙烯腈树脂(SAN)、聚环烯腈聚合物(COP)等等。优选的聚合材料聚乙烯-丙烯腈树脂、聚丙烯等。最优选的聚合材料为聚苯乙烯。在一具体实施例中，结晶板由封板膜或封口带进行密封，优选由封口带密封。在一具体实施例中，结晶板进一步包括上部壳体(未示出)，该壳体由与结晶板主体部分10相适应的上表面和多个侧面组成，并支撑于结晶板的支撑连接部360之上，用于结晶板的防尘与堆叠。

在一具体实施例(48(即8×6×2镜面对称)孔板)中，蛋白质结晶板包括：结晶板主体部分10，主体部分的第一面板240的总长度为120.5～125.5mm，总宽度为78.5～83.5mm；每一储槽单元20的长度为13.5～15.5mm、宽度为6.5～7.5mm，其中第一储槽220的长度为6.5～7.5mm、宽度为3.0～6.0mm、深度为3.5～9.5mm，而滴液槽230的深度为0.2～1.0mm，直径为1.6～2.4mm；支撑部300的总高度为13.8～14.6mm；在储槽单元20四周的第一面板240的宽度为1.5～4.5mm，而在结晶板主体部分10的最外周的储槽单元20四周的第一面板240的宽度为5.5～10.5mm；上支撑部320的高度为6.1～12.5mm、下支撑部340的高度为2.0～8.0mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度1.0～4.0mm。

在一优选实施例中，上支撑部320高度为7.6～8.9mm、下支撑部340高度为2.7～6.0mm，及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度为1.5～3.0mm。

更优选地，每一储槽单元20的长度为14.5+/-0.25mm、宽度为7.25+/-0.25mm，第一储槽220的长度为7.25+/-0.5mm、宽度为4.0+/-0.5mm、深度为8.25+/-0.5mm，滴液槽230的深度为0.4+/-0.1mm、为上下端直径分别为2.2+/-0.3mm与1.7+/-0.3mm的圆台状；上支撑部320的高度为8.25+/-0.5mm、下支撑部340的高度为6.10+/-0.38mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度为1.8+/-0.5mm。

在另一具体实施例(24(即4×6×n)孔板)中，蛋白质结晶板包括：结晶板主体部分10，主体部分的第一面板240的总长度为120.5～125.5mm，总宽度为78.5～83.5mm；每一储槽单元20的长度为15.0～16.5mm、宽度为15.0～16.5mm，其中第一储槽220的长度为15.0～16.5mm、宽度为5～9mm、深度为3.5～9.5mm，而滴液槽(230)的上端直径R_上为3.0≥R_上≥1.5mm、下端直径R_下为2.5≥R_下≥0.5mm，滴液槽的深度为0.2～1.0mm；支撑部300的总高度为13.8～14.6mm；上支撑部320的高度为6.1～12.5mm、下支撑部340的高度为2.0～8.0mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度为1.0～4.0mm；在储槽单元20四周的第一面板240的宽度为1.5～3.0mm，而在结晶板主体部分10的最外周的储槽单元20四周的第一面板240的宽度为5.5～10.0mm。

在一优选实施例中，上支撑部320高度为7.6～8.9mm、下支撑部340高度为2.7～6.0mm，及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度为1.5～3.0mm。

更优选地，每一储槽单元20的长度为16.0+/-0.25mm、宽度为16.0+/-0.25mm，第一储槽220的长度为16.0+/-0.5mm、宽度为8.0+/-0.5mm、深度为8.25+/-0.5mm，滴液槽230的深度为0.4+/-0.1mm、为上下端直径分别为2.2+/-0.3mm与1.7+/-0.3mm的圆台状或深度为1.0+/-0.2mm、直径为2.0+/-0.3mm的近半球状。上支撑部320的高度为8.25+/-0.5mm、下支撑部340的高度为6.10+/-0.38mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部360的宽度为2.8mm+/-0.5mm。

在另一具体实施例中，结晶板由封板膜进行密封。

如图4、图6、图7、图9、图10a、图11和图12所示，支撑部300由上支撑部320、下支撑部340以及连接上下支撑部320、340的支撑连接部360构成。

如图5、图10a、图10b和图13所示，结晶板的第一面板240在其宽度方向上的一端分别具有两个导角α和β。相应地，此处的上支撑部320、及支撑连接部360也分别具有导角α和β。优选地，上述导角α和β为135+/-10°。更优选地，导角α、β之间的第一面板240的长度为8.0～10.0mm，最优选地，导角α、β之间的第一面板240的长度为9.0+/-0.5mm。

根据本发明的另一方面，在本发明的一个具体实施例中提供了一种利用高通量蛋白质结晶板进行的坐滴法蛋白质结晶方法，包括以下步骤：

a.将适当体积的由缓冲剂、沉淀剂、去垢剂等或其组合组成的结晶池液2加入到每个储槽单元20中的第一储槽220中；

b.将适当体积与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例分别加入到每个储槽单元20内的至少一个滴液槽230中，同时还可根据需要在滴液槽中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.利用封口带或封板膜覆盖在所述储槽单元20的第一面板240上，将在所述结晶板主体上以阵列形式分布的每一储槽单元20密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将该结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

根据本发明的另一方面，在本发明的一个具体实施例中提供了一种利用高通量蛋白质结晶板进行的悬滴法蛋白质结晶方法，包括以下步骤：

a.将适当体积的由缓冲剂、沉淀剂、添加剂、去垢剂等或其组合组成的结晶池液2加入到每个储槽单元20中的第一储槽220中；

b.将适当体积的与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例根据结晶板10的储槽单元20的分布情况滴加到封口带或封板膜6之上，同时还可根据需要在上述液滴中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.将所述封口带或封板膜6倒置并覆盖在储槽单元20的第一面板240上，利用封口带或封板膜提供在结晶板主体10上以阵列形式分布的每一储槽单元20的密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将该结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

在一具体实施例中，在每一储槽单元20中的蛋白质溶液是相同的，在另一个具体实施例中，在每一储槽单元20中的蛋白质溶液是不同的。

在一具体实施例中，利用封板膜或封口带覆盖在储槽单元20四周的第一面板240上，来密封每一储槽单元20。

在一具体实施例中，蛋白质结晶过程或结果由自动化结晶观测系统进行监测。在另一实施例中，蛋白质结晶过程或结果由照相机进行监测。在又一实施例中，蛋白质结晶过程或结果由摄像机进行监测。在另一实施例中，蛋白质结晶过程或结果由人工进行监测。

应该理解，虽然本发明的上述用于蛋白质结晶的结晶板仅以坐滴法或悬滴法为例进行了说明，但上述用于蛋白质结晶的结晶板并不仅限于蛋白质结晶，其还适用于其他的蛋白质培养、蛋白质染色实验、蛋白质的特异性结合实验等用途。尤其是，适用于所有利用24孔、48孔或96孔结晶板所进行的实验研究中。

由于本发明的结晶板的结构尺寸至少符合SBS(Society forBiomolecular Sciences)标准之三，即符合ANSI/SBS1-2004、ANSI/SBS2-2004、ANSI/SBS3-2004标准，并对ANSI/SBS4-2004标准进行了改进。根据本发明的高通量蛋白质结晶板可方便地用于机械化操作，即机器人操作，又可进行人工操作。根据本发明的结晶板结构简单，使用方便，并且在每一储槽单元内的第一储槽和至少二个滴液槽之间形成了进行蛋白质结晶的动态平衡的内部环境，同时在不同的储槽单元内部各自形成了气体密封。

由于根据本发明的蛋白质结晶板在每一储槽单元中都具有一个第一储槽和多个滴液槽，因此可以同时在相同的条件、相同的蛋白质浓度、相同的缓冲剂以及相同的沉淀剂条件下得到平行的实验数据，可以同时获得2、3、4、5或6组平行实验数据，从而可以验证平行实验的可靠性。

同时，在不同的储槽单元中，又可以同时进行若干组不同条件的实验，如不同的蛋白质浓度、不同的缓冲剂种类和浓度、不同的沉淀剂种类和浓度，可以同时进行若干组(如24或48组)不同条件的蛋白质结晶的条件筛选的实验，加快了蛋白质结晶条件的筛选速度。并且同一储槽的不同滴液槽可以滴加不同的蛋白质，进行多组蛋白质的平行筛选，从而大大提高筛选的效率，最终实现了高通量的蛋白质结晶条件筛选。本发明提供的24(4×6)孔板或48(8×6)孔板既可以适用于手工操作，又适用于机械自动化操作。

此外，本发明提供的蛋白质结晶板在相邻的两储槽单元10之间的第一面板240的宽度远大于现有技术的宽度，其中第一面板240的宽度至少为1.5mm，因此，使得对结晶板的分区密封成为可能。即，在每一行或每一列装填蛋白质溶液后即可利用封口带(胶带)进行该行或该列的密封，由此避免了人工操作时由于时间长而引起的溶液浓度的变化使得结晶实验的重复性差的问题。因而，本发明的24或48孔板尤其适于在人工操作条件下，对结晶板的分区密封，同时保证了各相邻储槽单元20内部的气密性。

此外，如图14和图15所示，本发明的蛋白质结晶板中的每一储槽单元10内不同的滴液槽230或者是位于第一储槽220的不同侧，或者位于第一储槽220同一侧的相邻滴液槽230间距离大于现有技术的结晶板，因此在利用坐滴法进行蛋白质结晶时，可以实现在顶部准确地滴液，避免了蛋白液的错加、漏加或混杂，并在加入结晶筛选溶液和待结晶的蛋白质溶液后可以进行可靠的样品密封，从而提高蛋白质晶体的效率。

实施例1  48×2镜像对称的结晶板

参见图4至图9，示出一种用于高通量蛋白质结晶的48×2镜像对称的蛋白质结晶板，其尺寸符合SBS标准，即：符合ANSI/SBS1-2004覆盖区尺寸、ANSI/SBS2-2004高度尺寸和ANSI/SBS3-2004底部外侧凸缘尺寸的标准、并对ANSI/SBS4-2004：孔位置标准进行了改进，每一储槽单元20具有的第一面板240的宽度在SBS标准的基础上进行了改进。其由聚苯乙烯制成。本实施例的48×2结晶板为八行×六列×2(即8×6×2)的结晶板，不同于现有技术的六行×八列×2(即6×8×2)的结晶板。

本实施例的48×2(即8×6×2)镜像对称的蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分10，该主体部分的第一面板的总长度为124+/-1mm，总宽度为82+/-1mm；

在结晶板主体10上以8×6阵列形式分布的储槽单元20，每一所述储槽单元20的长度为14.5+/-0.25mm、宽度为7.25+/-0.25mm；每一储槽单元20在第一面板240中间位置形成一凹槽，在该凹槽底部为第二面板250，在第二面板250正中间位置凹入形成一个第一储槽220，在第一储槽220对称两侧的第二面板250中形成有两个滴液槽230，第一面板240与第二面板250通过连接部260连接，结晶板主体部分10在其四周具有支撑部300，该支撑部由上支撑部320、下支撑部340以及连接上下支撑部的支撑连接部360构成。

其中，第一面板240和第二面板250上表面之间的距离为3.0+/-0.5mm；第一储槽220的宽度为4.0+/-0.5mm，第一储槽220的长度为7.25+/-0.5mm，第一储槽220的深度为8.25+/-0.5mm；滴液槽230的上端直径R_上为2.2+/-0.3、下端直径R_下为1.7+/-0.3mm，滴液槽230的深度为0.4+/-0.1mm，为圆台状；相邻两储槽单元20之间沿结晶板长度方向的第一面板240的宽度为3.5+/-0.25mm，沿结晶板宽度方向的第一面板240的宽度为1.75+/-0.25mm；支撑部300的总高度为14.35+/-0.25mm，其中上支撑部320的高度为8.25mm+/-0.5mm、下支撑部340的高度为6.10+/-0.38mm、而支撑连接部360的宽度为1.8+/-0.5mm。

结晶板的第一面板240在其宽度方向上的一端分别具有两个为135+/-10°的导角α和β；而结晶板的上支撑部320、及支撑连接部360也分别在相应的位置具有135+/-10°的导角α和β。

导角α、β之间的第一面板240的长度为9.0+/-0.5mm。

其中，在两个相邻的储槽单元20之间的第一面板240的宽度为约3.5mm，其远大于现有技术中的蛋白质结晶板的宽度(约0.5mm)。因此，利用本发明的48×2(即8×6×2)蛋白质结晶板可以在每一列或每一行储槽单元装填蛋白质完毕后进行每一列或每一行储槽单元的密封，并且密封后的各储槽单元与周围的储槽单元可以实现真正的完全密封。在图17～图21中示出了本申请中的48×2(即8×6×2)镜像对称蛋白质结晶板与现有技术中的蛋白质结晶板在密封后的各储槽单元密封情况的照片。

从图17和图20可看出，当本发明的48×2(即8×6×2)结晶板在利用无接缝的封口带(胶带)进行密封时相邻两个储槽单元内部各自的密封情况好于现有技术的结晶板的密封情况，但后者也基本上实现了相邻两个储槽单元内部各自的密封。

但是从图18和图21可看出，当本发明的48×2(即8×6×2)结晶板利用在相邻的两个储槽单元之间的第一面板240上搭接的封口带(胶带)进行密封时，相邻两个储槽单元内部各自的密封情况远好于现有技术的结晶板的密封情况，前者实现了相邻两个储槽单元内部各自的完全密封，但后者在相邻的两个储槽单元之间出现了泄漏。

图19示出了图16中的48×2(即8×6×2)镜像对称结晶板利用在相邻的两个储槽单元之间的第一面板上搭接的封口带(胶带)进行密封时搭接的封口带(胶带)的示意图；从图中看出，由于本发明的48×2结晶板在相邻的两个储槽单元之间具有比现有技术的结晶板更宽的第一面板240，因此使得在其上搭接的两封口带(胶带)之间形成密封。

由于本实施例中的48×2(即8×6×2)蛋白质结晶板是镜像对称的，在每一储槽单元20中的两个滴液槽230的位置相对于第一储槽220完全对称地凹入在第一储槽220两侧的第二面板250中，而且本发明的48×2结晶板在相邻的两个储槽单元之间具有比现有技术的结晶板更宽的第一面板240，因此使得在其上搭接的封口带(胶带)之间形成密封，因而，本发明的蛋白质结晶板既实现了相邻两个储槽单元内部各自的可靠密封，又在每一储槽单元内提供了完全相同的结晶条件，从而保证了结晶结果的可靠性和重现性。

此外，由于本实施例中的48×2(即8×6×2)蛋白质结晶板是镜像对称的，两个滴液槽230位于每一储槽单元20中的第一储槽220两侧的第二面板250中，因而避免了在加样过程中两个滴液槽230之间要结晶的蛋白质溶液相互渗漏。

图22示出了图16中的48×2(即8×6×2)结晶板利用无接缝的封口带密封时相邻的两个储槽单元内部各自的密封情况、利用刀片将其中的一个储槽单元上方的封口带打开、以及将打开的一个储槽单元的封口带再密封后的放大照片，其中左侧的图代表进行密封、切割并取出晶体、以及再密封操作时封口带的状态，右侧的图代表进行密封、切割并取出晶体、以及再密封操作时封口带密封情况的放大照片。

从图中可以看出，在将良好密封的覆盖在其中的一个储槽单元之上的封口带利用刀片切割开来之后，可以进行取出晶体的操作，并且在完成该操作之后可以再次对该储槽单元进行良好密封。

其中，左侧上部虚线框内示出了无接缝的封口带在相邻的储槽单元之上的密封。左侧中间虚线框内示出了利用刀片切割其中一个储槽单元之上密封的封口带；将封口带打开，利用移取晶体的工具(如Cryo-loop)移出晶体。左侧下部虚线框内示出了打开的封口带在储槽单元之上的密封。相对应地，右侧上部示出了无接缝的封口带在相邻的储槽单元间的密封状况良好。右侧中间示出了封口带打开时的储槽单元以及封口带在与之相邻的储槽单元之上的密封状况良好。右侧下部示出了打开的封口带在储槽单元之上的再密封状况良好。

而现有技术的结晶板，相邻的储槽单元之间的第一面板过窄，无法实现上述的封口带的切割以及再密封。

实施例2  24×3非镜像对称的结晶板

参见图10a至图12及图15，示出了一种用于高通量蛋白质结晶的24×3(即4×6×3)非镜像对称的蛋白质结晶板，其尺寸符合SBS标准，即：符合ANSI/SBS1-2004覆盖区尺寸、ANSI/SBS2-2004高度尺寸和ANSI/SBS3-2004底部外侧凸缘尺寸的标准、并对ANSI/SBS4-2004：孔位置标准进行了改进，而每一储槽单元20具有的第一面板240的宽度在SBS标准的基础上进行了改进。

24×3非镜像对称的蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分10，该主体部分的第一面板240总长度为124+/-1mm，总宽度为82+/-1mm；在结晶板主体10上以4×6阵列形式分布的储槽单元20，每一所述储槽单元20的长度为16.0+/-0.25mm、宽度为16.0+/-0.25mm；每一储槽单元20在第一面板240中间位置形成一凹槽，在该凹槽底部为第二面板250，在第二面板250一侧位置凹入形成一个第一储槽220，在第一储槽220对侧的第二面板250中形成有三个滴液槽230，第一面板240与第二面板250通过连接部260连接，结晶板主体部分10在其四周具有支撑部300，该支撑部由上支撑部320、下支撑部340以及连接上下支撑部的支撑连接部360构成。

其中，第一面板240和第二面板250上表面之间的距离为3.0+/-0.5mm；第一储槽220的宽度为8.0+/-0.5mm，第一储槽220的长度为16.0+/-0.5mm，第一储槽220的深度为8.25+/-0.5mm；滴液槽230的深度为0.4+/-0.1mm、为上端直径R_上为2.2+/-0.3、下端直径R_下为1.7+/-0.3mm的圆台状或深度为1.0+/-0.2mm、直径为2.0+/-0.3mm的近半球状；相邻两储槽单元20之间沿结晶板长度方向的第一面板240的宽度为2.0+/-0.5mm，沿结晶板宽度方向的第一面板240的宽度为2.0+/-0.5mm；支撑部300的总高度为14.35+/-0.25mm，其中上支撑部320的高度为8.25mm+/-0.5mm、下支撑部340的高度为6.10+/-0.38mm、而支撑连接部360的宽度为2.8+/-0.5mm。

结晶板的第一面板240在其宽度方向上的一端分别具有两个为135°的导角α和β；而结晶板的上支撑部320、及支撑连接部360也分别在相应的位置具有135+/-10°的导角α和β。

导角α、β之间的第一面板240的长度为9.0+/-0.5mm。

其中，在两个相邻的储槽单元20之间的第一面板240的宽度约为2.0mm，其远大于现有技术中的蛋白质结晶板的宽度(≤0.5mm)。因此，利用本发明的24×3蛋白质结晶板可以在每一行或每一列储槽单元装填蛋白质完毕后进行每一行或每一列储槽单元的密封，并且密封后的各储槽单元与周围的储槽单元可以实现真正地完全密封。

此外，在图13中示出了24×6(即4×6×6)的蛋白质结晶板。在图14中示出了其他可能的镜像对称的48×4(即8×6×4)结晶板的滴液槽230的形状与分布。其中40是ANSI/SBS4-2004中96孔板的储槽单元位置和加样中心，可以看出对于48×4结晶板的滴液槽230不遵守96孔板的加样中心，因此提示在设计类似方案时，应考虑结晶板是否需要遵守标准96孔板的自动化加样位置。

在图15中示出了其他可能的非镜像对称的24×n(n＝5或6)结晶板的滴液槽230的形状与分布。其中40是ANSI/SBS4-2004中96孔板的储槽单元位置和加样中心，可以看出每一储槽单元20中只是部分液滴槽230遵守标准96孔板的自动化加样位置。

实施例3  利用48×2镜像对称的结晶板的坐滴法蛋白质结晶

利用高通量蛋白质结晶板的坐滴法蛋白质结晶方法，包括以下步骤：

1.将适当体积的含有缓冲剂、去垢剂、沉淀剂或其组合的结晶池液加入到每个储槽单元20中的第一储槽220中；其中可利用8道枪加样装置进行手动加样，也可利用自动多通道加样设备进行自动加样。

2.将适当体积的含有缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合的结晶池液与要进行结晶的蛋白质溶液以一定比例，例如体积比为1∶1，加入到每个储槽单元20中的两个滴液槽220中，同时还可根据需要在滴液槽中加入添加剂、去垢剂或其组合；

3.利用封口带6覆盖在储槽单元20四周的第一面板240上，将在结晶板主体上以阵列形式分布的每一储槽单元密封，而在每一储槽单元内部形成了进行蛋白质结晶的动态平衡的内部环境；

4.将结晶板置于适于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

其中，每一储槽单元中不同的滴液槽中的蛋白质溶液可以是相同的或不同的，而不同的每一储槽单元中不同的滴液槽中的蛋白质溶液也可以是相同的或不同的。

可选地，蛋白质结晶过程或结果由自动化结晶观测系统、照相机、摄像机或人工进行监测。

实施例4  利用48×2镜像对称的结晶板的悬滴法蛋白质结晶

类似地，也可以利用48×2(即8×6×2)镜像对称的结晶板进行悬滴法蛋白质结晶，包括以下步骤：

1.将适当体积的含有缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合的结晶池液加入到每个储槽单元20中的第一储槽220中；其中可利用8道枪加样装置进行手动加样，也可利用自动多通道加样设备进行自动加样。

2.将适当体积的与步骤1中相同的池液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例，例如1∶2，并根据结晶板10的储槽单元20的分布情况滴加到封板膜6之上，同时还可根据需要在上述液滴中加入添加剂、去垢剂或其组合；

3.将封板膜6倒置并覆盖在储槽单元20四周的第一面板240上，利用封板膜提供在结晶板主体10上以阵列形式分布的每一储槽单元20的密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

4.将结晶板置于适于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

其中，每一储槽单元中不同的滴液槽中的蛋白质溶液可以是相同的或不同的，而不同的每一储槽单元中不同的滴液槽中的蛋白质溶液也可以是相同的或不同的。

可选地，蛋白质结晶过程或结果由自动化蛋白质晶体生长观测系统、照相机、摄像机或人工进行监测。

实施例5  利用24×3非镜像对称的结晶板的蛋白质结晶方法

具体操作与实施例3相似，只是每一储槽单元20中的多个滴液槽230位于第一储槽220的一侧，具体的蛋白质结晶操作与实施例3或4相似，可以进行手动加样和自动加样。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明所附的权利要求书的保护范围之内。

Claims (14)

1.一种蛋白质结晶板，包括结晶板主体部分(10)，以及在所述结晶板主体上以阵列形式分布的储槽单元(20)，每一所述储槽单元(20)具有第一面板(240)，在所述第一面板中间位置形成一凹槽，所述凹槽底部为第二面板(250)，在所述第二面板中间位置或靠近一侧的位置凹入形成第一储槽(220)，在所述第一储槽(220)至少一侧的第二面板(250)中形成有至少二个滴液槽(230)，所述第一面板(240)与第二面板(250)通过连接部(260)连接，所述结晶板主体部分(10)在其四周具有支撑部(300)，其中，所述结晶板为48孔板，包括结晶板主体部分(10)，所述主体部分(10)的第一面板(240)的总长度为120.5～125.5mm，总宽度为78.5～83.5mm；其中，每一所述储槽单元(20)的长度为13.5～15.5mm、宽度为6.5～7.5mm；所述第一面板(240)和第二面板(250)上表面之间的距离为2～8mm；第一储槽(220)的宽度为3.0～6.0mm，第一储槽(220)的长度为6.5～7.5mm，第一储槽(220)的深度为3.5～9.5mm；滴液槽(230)的上端直径R_上为3.0≥R_上≥1.5mm、下端直径R_下为2.5≥R_下≥0.5mm，滴液槽(230)的深度为0.2～1.0mm；在储槽单元(20)四周的第一面板(240)的宽度为1.5～4.5mm，而在所述结晶板主体部分(10)最外周的储槽单元(20)外周的第一面板(240)的宽度为5.5～10.5mm；所述支撑部(300)的总高度为13.8～14.6mm。

2.根据权利要求1所述的结晶板，其中，所述至少二个滴液槽(230)为多个，在所述第一储槽(220)的一侧或两侧的第二面板(250)中形成有多个滴液槽(230)，所述阵列形式分布的储槽单元(20)为48个；而所述至少二个滴液槽(230)为两个、三个、四个、五个或六个。

3.根据权利要求1的结晶板，其中，所述滴液槽(230)与所述第一储槽(220)的形状独立选自由圆柱体、半球体、倒置的圆台体或圆锥体、立方体、长方体构成的组。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述结晶板是由高纯度热塑性塑料制成的。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述结晶板由封口带或封板膜进行密封。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述结晶板为48孔板，其尺寸符合SBS标准中的三个，即符合标准ANSI/SBS1-2004：覆盖区尺寸、ANSI/SBS2-2004：高度尺寸、ANSI/SBS3-2004：底部外侧凸缘尺寸，并对ANSI/SBS4-2004：孔位置进行了改进。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述第一储槽(220)的体积为0.04～1.4ml，所述滴液槽(230)的体积为0.2～7μl。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述支撑部(300)由上支撑部(320)、下支撑部(340)以及连接上下支撑部的支撑连接部(360)构成，其中所述上支撑部(320)的高度为6.1～12.5mm、下支撑部(340)的高度为2.0～8.0mm，以及连接上下支撑部的支撑连接部(360)的宽度为1.0～4.0mm。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的结晶板，其中，所述结晶板的第一面板(240)至少在其宽度方向上的一端分别具有两个导角α和β；上支撑部(320)、及支撑连接部(360)也分别具有对应于所述结晶板的第一面板(240)的导角α和β，所述导角α和β为135+/-10°。

10.根据权利要求4所述的结晶板，所述结晶板由选自聚酰胺、聚丙烯、聚苯乙烯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、苯乙烯-丙烯腈树脂或聚环烯腈的高纯度热塑性塑料制成。

11.根据权利要求4所述的结晶板，所述结晶板由聚苯乙烯制成。

12.一种利用权利要求1～11任一项所述的结晶板进行蛋白质结晶的方法，包括以下步骤：

a.将适当体积由选自缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合组成的结晶池液(2)加入到每个储槽单元(20)中的第一储槽(220)中；

b.将适当体积与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例分别加入到每个所述储槽单元(20)内的至少一个滴液槽(230)中，同时还可根据需要在滴液槽中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.利用封口带或封板膜覆盖在所述储槽单元(20)的第一面板(240)上，将在所述结晶板主体上以阵列形式分布的每一储槽单元(20)的密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将所述结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶。

13.一种利用权利要求1～11任一项所述的结晶板进行蛋白质结晶的方法，包括以下步骤：

a.将适当体积的由选自缓冲剂、沉淀剂、去垢剂或其组合组成的结晶池液(2)加入到每个储槽单元(20)中的第一储槽(220)中；

b.将适当体积的与步骤a中相同的溶液与要进行结晶的蛋白质溶液按照一定比例根据所述结晶板(10)的储槽单元(20)的分布情况滴加到封口带或封板膜(6)之上，同时还可根据需要在上述液滴中加入添加剂、去垢剂或其组合；

c.将所述封口带或封板膜(6)倒置并覆盖在所述储槽单元(20)的第一面板(240)上，利用所述封口带或封板膜提供在所述结晶板主体(10)上以阵列形式分布的每一储槽单元(20)的密封，而在每一储槽单元内部形成维持蛋白质结晶的动态平衡环境；

d.将所述结晶板置于蛋白质结晶的温度下进行蛋白质结晶实验。

14.根据权利要求12或13所述的蛋白质结晶的方法，所述蛋白质结晶过程或结果由自动化蛋白质晶体生长观测系统、照相机、摄像机或人工进行监测。

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