CN109996879A

CN109996879A - 具有缩短的到开花时间的植物

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Publication number: CN109996879A
Application number: CN201780072118.7A
Authority: CN
Inventors: L·博维特; S·格伊菲特; H·拉帕拉
Original assignee: Philip Morris Products SA
Current assignee: Philip Morris Products SA
Priority date: 2016-12-20
Filing date: 2017-12-15
Publication date: 2019-07-09
Anticipated expiration: 2037-12-15
Also published as: KR102606956B1; CA3039428A1; WO2018114641A1; BR112019010484A2; CN109996879B; US11685929B2; RU2019122308A3; AR110539A1; EP3559244A1; EP3559244C0; MX2019006894A; EP3559244B1; IL267308A; AU2017380893A1; US20200208164A1; KR20190094161A; RU2019122308A

Abstract

本文描述了一种突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其具有降低的编码顶生花1(TFL1)的基因的表达或降低的由TFL1编码的蛋白质的活性，所述TFL1包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；其中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性与对照植物相比降低，在所述对照植物中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性不降低。

Description

具有缩短的到开花时间的植物

技术领域

本发明公开了编码来自普通烟草(Nicotiana tabacum)的顶生花1(TFL1)的基因的多核苷酸序列以及其变体、同源物和片段。还公开了由其编码的多肽序列以及其变体、同源物和片段。还公开了一种或多种基因的表达或由其编码的蛋白质的活性的修饰，以调节植物的到开花时间。在一个实施例中，一种或多种基因的表达或由其编码的蛋白质的活性降低以便缩短到开花时间。还描述了具有改变的到开花时间的植物、植物材料等等。

背景技术

开花时间是植物中的对存活和繁殖有直接影响的严格控制机制。花转变还与作物产量直接相关。植物已经建立了导致形成生殖结构而不是叶子的专门的信号传导途径。开花基因座T(FT)和TFL1是磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)家族成员，其类似于哺乳动物PEBP并且充当转录因子。TFL1通过延迟成花(floral commitment)而拮抗地起作用。FT蛋白在芽顶端分生组织处与开花基因座D(FD)bZIP转录因子相互作用以促进开花。TFL1蛋白还结合FD以便抑制下游基因，如LEAFY(LFY)和APETALA1(AP1)。在花转变时，TFL1上调以抗衡FT活性。

本领域的一般需求是开发具有缩短的到开花时间的植物，因为这可以产生许多优势，尤其与植物的商业生产相关的优势。举例来说，其可以提供更短的从播种/种植到收获的时间段，这可以缩短生长季节。其可以实现更快通过杂交来引入新性状。这可以促成商业植物生产的成本节约。本发明试图解决这一需要。

发明内容

本发明的发明内容

已经在普通烟草中鉴定出七种TFL-1基因，即TFL1-1S(SEQ ID NO:1或2)、TFL1-1T(SEQ ID NO:4或5)、TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)、TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)、TFL1-3T(SEQ ID NO:13或14)、TFL1-4S(SEQ ID NO:16或17)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)。令人惊讶地，本发明人发现，当这些基因中的每一个的表达破坏(例如降低)时，仅TFL1-2S(SEQID NO:7或8)和TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)通过改变(例如加速)花发育并且因此改变(例如缩短)到开花时间而影响到开花时间。出乎意料地，TFL1-1S(SEQ ID NO:1或2)和TFL1-1T(SEQ ID NO:4或5)、TFL1-3T(SEQ ID NO:13或14)和TFL1-4S(SEQ ID NO:16或17)对到开花时间几乎无影响。已经鉴定TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)和TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)内的某些基序，其可以靶向基因破坏(例如RNAi敲除、诱变等等，如本文所描述)以改变到开花时间(参见例如实例4)。这些基序可以用作靶区域以改变其各自的基因表达以开发更早或更晚开花的稳定品系。不希望受理论所束缚，据相信，破坏一种或多种负责维持营养态的TFL1基因的表达将有利于FT基因与花基因启动子的相互作用，因此缩短到开花时间。

本发明的方面和实施例

本发明的方面和实施例在所附权利要求书中阐述。

在第一方面，提供了一种突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其具有降低的编码顶生花1(TFL1)的基因的表达或降低的由TFL1编码的蛋白质的活性，所述TFL1包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ IDNO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；其中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性与对照植物相比降低，在所述对照植物中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性不降低。

合适地，多核苷酸的降低表达或多肽的降低活性与对照植物相比缩短了到开花时间，合适地，其中到开花时间缩短至少8％或至少20％或至少28％或至少30％。

合适地，叶片数减少至少16％或至少22％。

合适地，植物高度降低至少13％或至少23％或大致相同。

合适地，所述植物在编码TFL1的多核苷酸序列中包括至少一个基因改变。

合适地，所述植物在编码TFL1的多核苷酸序列中包括至少一个突变。

合适地，所述至少一个突变选自由以下组成的群组：在SEQ ID NO:9中的位置T143或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120或G129或P131处的突变；或在SEQ IDNO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合；合适地，其中所述突变是SEQ ID NO:9中的T143I或G129R或G129E或H84STOP；或其中所述突变是SEQ ID NO:12中的R120C或G129E或P131S；或其中所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L或H86STOP，或其两个或更多个的组合。

合适地，所述植物在SEQ ID NO:12中的位置P131处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P131S。

合适地，所述植物在SEQ ID NO:21中的位置P110处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P110L。合适地，所述植物是或源自烟草(Nicotiana)属，合适地，其中所述植物是普通烟草。

在另一方面，提供了源自或可源自本文所述的植物的植物材料。

在另一方面，提供了一种植物产品，其包括所述植物的至少一部分或本文所述的植物材料

在另一方面，提供了一种缩短植物的到开花时间的方法，其包括通过降低所述植物中的至少一种TFL1基因的表达或至少一种由其编码的蛋白质的活性来修饰所述植物。

合适地，所述方法包括：(a)提供植物或其部分，其包括：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ IDNO:21具有至少72％序列一致性的多肽；和(b)降低所述植物中的所述TFL1基因的所述表达或所述TFL1蛋白的所述活性；和(c)获得与对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物，在所述对照植物中所述TFL1基因的表达或所述TFL1蛋白的活性不降低。

在另一方面，提供了降低的至少一种TFL1基因的表达或至少一种由其编码的蛋白质的活性的用途，其用于缩短植物的到开花时间。

合适地，TFL1的表达或TFL1的活性通过选自由以下组成的群组的方法来降低：a)突变所述植物中的所述TFL1基因；b)表达所述植物中的外源多核苷酸或多肽；和c)消除所述植物中的所述TFL1基因，或其一个或多个的组合。

合适地，所述至少一个突变是在SEQ ID NO:12中的位置P131处的突变，合适地，其中所述突变是P131S。

合适地，所述至少一个突变是在SEQ ID NO:21中的位置P110处的突变，合适地，其中所述突变是P110L。合适地，所述突变是在SEQ ID NO:12中的位置P131处的突变，合适地，其中所述突变是P131S，和在SEQ ID NO:21中的位置P110处的突变，合适地，其中所述突变是P110L。

在另一方面，提供了一种产生与对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物材料的方法，所述方法包括：(a)提供如本文所描述的植物或植物材料；(b)从所述植物收获植物材料；(c)任选地烘烤或干燥所述植物材料一段时间；和(d)获得与所述对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物材料。

在另一方面，提供了通过如本文所描述的方法或用途获得或可获得的植物材料。

在另一方面，提供了一种分离的多核苷酸序列，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列。

在另一方面，提供了一种由根据权利要求16所述的多核苷酸编码的分离的多肽或与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽。

合适地，在所述分离的多肽中，至少一个突变选自由以下组成的群组：在SEQ IDNO:9中的位置T143或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120或G129或P131处的突变；或在SEQ ID NO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合；合适地，其中所述突变是SEQ ID NO:9中的T143I或G129R或G129E或H84STOP；或其中所述突变是SEQID NO:12中的R120C或G129E或P131S；或其中所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L或H86STOP，或其两个或更多个的组合。

在另一方面，提供了一种特异性结合本文所述的分离的多肽的抗体。

在另一方面，提供了一种包括本文所述的分离的多核苷酸的构建体、载体或表达载体。

在另一方面，提供了一种包括本文所述的构建体、载体或表达载体的植物或植物材料或植物细胞。

在另一方面，提供了一种源自或可源自本文所述的植物或植物材料的植物细胞。

在另一方面，提供了包括本文所述的细胞的植物材料。

在另一方面，提供了一种包括本文所述的植物材料的烟草产品或吸烟制品。

在另一方面，提供了一种用于抑制TFL-1基因的表达的RNAi构建体，其包括与所述TFL-1基因的mRNA上的靶序列杂交并且通过RNA干扰机制抑制所述TFL-1基因的所述表达的序列，其中所述靶序列选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:7、8、10、11、19和/或20。

在另一方面，提供了一种双链RNA，其包括彼此至少部分互补的至少两个序列，并且其中有义链包括第一序列并且反义链包括第二序列，并且其中所述序列中的至少一个包括TFL1RNA的至少10个邻接核苷酸，合适地，其中所述序列中的至少一个包括TFL1RNA的21至23个邻接核苷酸。

合适地，所述双链RNA包括具有TFL1的至少10个核苷酸，合适地TFL-1的21至23个核苷酸的第一序列；第二序列；和置于与所述第一序列相同的定向、具有所述第一序列的反向互补序列的第三序列，其中所述第二序列置于所述第一序列与所述第三序列之间，并且所述第二序列可操作地连接于所述第一序列和所述第三序列。

合适地，所述第一序列选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20，和/或其中所述第三序列是SEQID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的对应序列的反向互补序列。

合适地，所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:22并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:23；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:25并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:26；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:27并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:28；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:29并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:30；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:32并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:33；或所述第一序列包括或其组成为SEQ IDNO:34并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:35；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:36并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:37；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:39并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:40。

合适地，所述双链RNA包括或其组成为选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41。

在另一方面，提供了一种分离的多核苷酸序列，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的至少21个邻接核苷酸的序列，合适地，其中所述序列包括、其组成为或其组成基本上为至少21至23个邻接核苷酸。

在另一方面，提供了一种鉴定调节TFL1多核苷酸或TFL1多肽的活性或表达的分子的方法，所述方法包括：(a)使所述分子与植物接触，所述植物包括如本文所描述的多核苷酸或多肽，如包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或由所述多核苷酸编码的多肽；或与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；(b)监测以下中的一个或多个：(i)所述植物中的所述TFL1多核苷酸的表达水平；(ii)所述植物中的所述TFL1多肽的表达水平；(iii)所述植物中的所述TFL1多肽的活性的调节；或(iv)所述植物中的所述TFL1多核苷酸的活性的调节；和(c)鉴定调节所述TFL1多核苷酸或所述TFL1多肽的所述活性或表达的分子。

还公开了所阐述的一个或多个实施例的组合。

一些优势

快速开花性状可以实现晚开花植物品种的育种。

快速开花性状可以实现适应于气候条件的商业植物品种的产生。

控制开花时间可以提高种子或果实生产率以及花提取生产率。

控制开花时间可以避免对成熟处理的需要。

快速开花性状可以实现更短的从播种/种植到收获的时间段，这可以缩短生长季节。

快速开花性状可以实现更快通过杂交来引入新性状。

更短植物生命周期可以每年产生多重植物作物，这可以使得生产更加可持续。

快速开花性状可以实现花的更早扦插，这可以产生更高品质的植物产品。

有利的是开发非基因修饰生物体(非GMO)方法以通过使用基因失活来缩短植物的到开花时间。由于基因修饰作物在包含欧洲的一些国家的生长和商业化的困难，可能需要研究如下突变体，所述突变体的特征为通过用甲磺酸乙酯(EMS)等等进行处理而非通过使用基因工程技术所获得的单核苷酸多态性。即使在人工诱导突变的情况下，也不将突变体视为GMO。举例来说，在EU，不存在针对由突变育种衍生的植物的特殊法规。迄今为止，缩短到开花时间的唯一已知解决方案是过表达FT基因，这在非GMO环境中可能并不适合。通过例如选择EMS/辐射线或使用基于来自不同普通烟草品种的TFL1的天然变体或来自其它烟草物种的基因渗入形式的选择来敲除TFL1基因是一种合适的非GMO解决方案。或者，也可以考虑任何基因编辑技术，但此类技术方法的调节仍然不清楚。具有TFL1变体使得可通过DNA测试来快速育种，而无需等待开花和需要繁琐的自花授粉步骤。

附图说明

图1.田地中普通烟草(TN90)开花植物的叶片中的TFL1和FT表达。转录物数据通过每百万个映射的片段中每千碱基的外显子的片段(Fragments Per Kilobase Of Exon PerMillion Fragments Mapped，FPKM)来获得(参见《自然·生物技术(Nat Biotechnol.)》201028(5):511-5)。TFL1和FT表达通过未成熟的花、下秆叶、中秆叶、上秆叶、花瓣、根、萼片和茎中的RNA序列分析来测定。

图2.在受控条件下生长于温室中的TFL1-1S/T、TFL1-2S/T、TFL1-3T和TFL1-4TRNAi T0(20)和对照(10)植物的表型分析。四种转基因品系的开花时间(移植后天数，DAT)展示于A和D中，叶片数展示于B和E中，并且四种品系的高度展示于C和F中。展示每种植物的平均值和标准差。

图3.温室中的TFL1-2S/T RNAi植物的图像。与对照植物(Coltabaco 23RM)相比，TFL1-2S/T RNAi品系的快速开花，在盆移植之后117天(A)，和在种球生产之后，单一植物比较(B)。

图4.说明TFL1-2T-P131S突变的图。突变密码子CCT>Pro为TCT>Ser。

图5.说明TFL1-2T-P131S突变型植物在纯合植物(两个等位基因都突变)和杂合植物(一个等位基因突变)中都大致30％更快开花的条形图。与野生型烟草植物相比，突变型植物具有更少叶片，但未观察到对植物高度的影响。WT＝普通烟草；TFL1-2T-P131S wt＝无突变并且将相同表型背景中的另一对照植物视为突变型植物的突变型植物的外分离体；TFL1-2T-P131S mut homo＝纯合突变型植物；TFL1-2T-P131S mut hetero＝杂合突变型植物。N＝4。

图6.说明TFL1-4T-P110L突变的图。突变密码子CCA>Pro为CTA>Leu。

图7.说明TFL1-4T-P110L突变型植物在杂合植物(一个等位基因突变)中大致30％更快开花的条形图。与野生型烟草植物相比，突变型植物具有更少叶片，但未观察到对植物高度的影响。WT＝普通烟草；TFL1-4T-P110L mut hetero＝杂合突变型植物。N＝3。

具体实施方式

定义

在本申请的范围内使用的技术术语和表述通常被赋予在植物和分子生物学的相关领域中经常应用于它们的含义。所有以下术语定义适用于本申请的整个内容。词语“包括”不排除其它元件或步骤，且不定冠词“一(a)”或“一(an)”不排除多个/多种。单个步骤可以完成在权利要求书中列出的几个特征的功能。在给定数值或范围背景下，术语“约”、“基本上”和“大约”指在给定值或范围的20％内，10％内，或者5％、4％、3％、2％或1％内的值或范围。

术语“缩短的到开花时间”或其等效物意指与对照植物相比缩短的从播种到初花开花的时间段。时间与对照植物相比可以缩短至少约5％、6％、7％、8％、9％10％、20％、28％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％或更多。

术语“延长的到开花时间”或其等效物意指与对照植物相比更长的从播种到初花开花的时间段。时间与对照植物相比可以延长至少约5％、6％、7％、8％、9％10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％或更多。

术语“分离的”指取自其天然环境的任何实体，但所述术语不意味着任何纯化程度。

“表达载体”是包括使得核酸能够表达的核酸组分的组合的核酸媒介物。合适表达载体包含能够染色体外复制的游离基因，如环状双链核酸质粒；经线性化的双链核酸质粒；以及任何来源的其它功能等效的表达载体。如下文所定义，表达载体包括位于核酸、核酸构建体或核酸结合物上游并且与核酸、核酸构建体或核酸结合物可操作地连接的至少一个启动子。

术语“构建体”指包括一种或多种多核苷酸的双链重组核酸片段。构建体包括与互补“有义链或编码链”碱基配对的“模板链”。给定构建体可以在两个可能定向上插入载体内，所述两个可能定向是就位于载体(如表达载体)内的启动子定向而言的相同(或有义)定向或相反(或反义)定向。

“载体”指核酸媒介物，其包括允许核酸、核酸构建体和核酸结合物等等转运的核酸组分组合。合适载体包含能够染色体外复制的游离基因，如环状双链核酸质粒；经线性化的双链核酸质粒；以及任何来源的其它载体。

“启动子”指通常位于双链DNA片段上游并且与双链DNA片段可操作地连接的核酸元件/序列。启动子可以完全源自接近天然目的基因的区域，或可以由源自不同天然启动子的不同元件或合成DNA区段构成。

术语“同源性、一致性或相似性”指通过序列比对比较的两个多肽或两个核酸分子之间的序列相似性程度。合适地，术语“同源性、一致性或相似性”指两个多肽的全序列(例如全长序列)之间或两个核酸分子之间的序列相似性程度。所比较的两个不连续核酸序列之间的一致性程度随着可比较位置处的一致或匹配核苷酸数目变化。一致性百分比可通过目视检查和数学计算进行确定。或者，可以通过使用计算机程序(如ClustalW、BLAST、FASTA或Smith-Waterman)比较序列信息，来确定两个核酸序列的一致性百分比。两个序列的一致性百分比可能取不同的值，具体取决于：(i)用于比对序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同的程序中实现)，或者来自3D比较的结构比对；和(ii)比对方法使用的参数，例如局部相对于全局比对，使用的配对得分矩阵(例如BLOSUM62、PAM250、Gonnet等)和缺口罚分，例如功能形式和常量。在进行比对之后，有不同的方式计算两个序列之间的一致性百分比。举例来说，可以将一致性数目除以：(i)最短序列的长度；(ii)比对的长度；(iii)序列的平均长度；(iv)非缺口位置的数目；或(iv)不包含突出端的等价位置的数目。此外，应了解，一致性百分比也具有强烈的长度依赖性。因此，一对序列越短，可以预期偶然出现的序列一致性就越高。流行的多重比对程序ClustalW(Nucleic AcidsResearch(1994)22,4673-4680；Nucleic Acids Research(1997),24,4876-4882)是用于产生多肽或多核苷酸的多重比对的合适方式。ClustalW的合适参数可能如下：对于多核苷酸比对：缺口开放罚分＝15.0，缺口延伸罚分＝6.66，并且矩阵＝一致性。对于多肽比对：缺口开放罚分＝10.o，缺口延伸罚分＝0.2，并且矩阵＝Gonnet。对于DNA和蛋白质比对：ENDGAP＝-1，并且GAPDIST＝4。本领域技术人员将会意识到，可能有必要改变这些和其它参数以达到最佳序列比对。然后，由这样的比对合适地以(N/T)计算一致性百分比，其中N是序列共享一致残基的位置数，T是比较的位置总数，包含缺口但不包括突出端。

“变体”是指基本上相似的序列。变体可以具有与野生型序列相似的功能或基本上相似的功能。对于TFL1，相似功能为在相同条件下野生型功能的至少约50％、60％、70％、80％或90％。对于TFL1，大体上相似的功能为在相同条件下野生型功能的至少约90％、95％、96％、97％、98％或99％。与野生型多肽相比，变体可以具有一个或多个有利的突变，所述突变导致TFL1具有降低水平的活性。变体可以具有一个或多个有利的突变，所述突变导致TFL1活性被敲除(即，100％抑制，因此是非功能性多肽)。

术语“植物”指处于其生命周期或发育的任何阶段的任何植物或植物的部分以及其后代。在一个实施例中，植物是“烟草植物”，这指属于烟草属(Nicotiana)的植物。本文中描述了优选的烟草植物物种。合适地，植物是与对照植物相比一种或多种基因的表达或一种或多种蛋白质的活性被调节的突变型、非天然存在的或转基因植物。合适地，使植物成为突变型、非天然存在的或转基因植物的改变导致调节一种或多种TFL1基因的表达或调节一种或多种TFL1蛋白质的活性。在某些实施例中，改变是基因改变或基因修饰。本文描述了可并入到植物中以缩短到开花时间的突变的实例。

“植物部分”包含植物细胞、植物原生质体、可再生完整植物的植物细胞组织培养物、植物愈伤组织、植物团块以及植物或植物的部分中完整的植物细胞，所述植物的部分如胚、花粉、花药、胚珠、种子、叶、花、茎、枝、果实、根、根尖等。再生植物的后代、变体和突变体也包含在本公开的范围内，限制条件是其包括本文中所描述的引入的多核苷酸。植物的叶特别优选地用于本公开中。

“植物细胞”指植物的结构和生理单位。植物细胞可以采取不含细胞壁的原生质体、分离的单细胞或培养细胞的形式，或作为更高等组构单位的一部分，如但不限于植物组织、植物器官或完整植物。

术语“植物材料”指可得自植物的任何固体、液体或气体组合物或其组合，包含生物质、叶、茎、根、花或花的部分、果实、花粉、卵细胞、合子、种子、插条、分泌物、提取物、细胞或组织培养物、或任何其它植物部分或产物。在一个实施例中，植物材料包括生物质、茎、种子或叶，或者由生物质、茎、种子或叶组成。在另一个实施例中，植物材料包括叶或由叶组成。

术语“品种”指共享恒定特征的植物群体，所述恒定特征使其与相同物种的其它植物分开。尽管具有一种或多种独特性状，但品种的特征进一步在于所述品种内个体之间的极小整体变化。品种通常在市场上有出售。

如本文中所使用的术语“品系”或“育种品系”指示在植物育种期间使用的植物群组。品系可与品种区分，因为品系展示一种或多种目的性状在个体间的很少变化，而其它性状在个体间可能存在一些变化。

如本文中所使用的术语‘非天然存在的’描述并非天然形成或在自然界中不存在的实体(例如多核苷酸、基因突变、多肽、植物、植物细胞和植物材料)。可以通过本文中所描述或本领域已知的方法来制备、合成、起始、修饰、干预或操纵这类非天然存在的实体或人工实体。可以由人制备、合成、起始、修饰、干预或操纵这类非天然存在的实体或人工实体。因此，举例来说，可以使用基因操纵技术(如反义RNA、干扰RNA、大范围核酸酶等等)来制备非天然存在的植物、非天然存在的植物细胞或非天然存在的植物材料。进一步举例来说，可以通过第一植物或植物细胞基因渗入第二植物或植物细胞(其自身可以是天然存在的)内，或通过将一个或多个基因突变(例如一种或多种多态性)从第一植物或植物细胞转移到第二植物或植物细胞内来制备非天然存在的植物、非天然存在的植物细胞或非天然存在的植物材料，使得所得到的植物、植物细胞或植物材料或其后代包括并非天然形成或在自然界中不存在的基因组成(例如基因组、染色体或其区段)。所得到的植物、植物细胞或植物材料因此是人工的或非天然存在的。相应地，可以通过修饰第一天然存在的植物或植物细胞中的基因序列来制备人工的或非天然存在的植物或植物细胞，即使所得到的基因序列在第二植物或植物细胞中天然存在，所述第二植物或植物细胞包括与第一植物或植物细胞不同的基因背景。

术语“调节”可以指降低、抑制、增加或以其它方式影响多肽的表达或活性。所述术语还可以指降低、抑制、增加或以其它方式影响编码多肽的基因的活性，可以包含但不限于调节转录活性。术语“调节”还可以指缩短或延长到开花时间。

如本文所用，术语“降低”或“降低的”或“下降”或下降的指数量或活性约10％至约99％的降低，或者至少10％、至少20％、至少25％或28％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或至少100％或更多的降低，所述活性如但不限于多肽活性、转录活性和蛋白质表达。

如本文所用，术语“抑制”或“抑制的”指数量或活性约98％至约100％的降低，或者至少98％、至少99％但特别是100％的降低，所述活性如但不限于多肽活性、转录活性和蛋白质表达。

细胞的转化可以是稳定的或瞬时的。术语“瞬时转化”或“瞬时转化的”或其变化形式是指在外源多核苷酸不整合到宿主细胞基因组中的情况下将一个或多个外源多核苷酸引入细胞中。相反，术语“稳定转化”或“稳定转化的”是指将一个或多个外源多核苷酸引入和整合到细胞基因组中。术语“稳定转化体”是指将一个或多个外源多核苷酸稳定地整合到基因组或细胞器DNA中的细胞。应理解，用本公开的核酸、构建体和/或载体转化的生物体或其细胞可以瞬时地以及稳定地转化。在某些实施例中，稳定转化是优选的。

如本文中所使用，术语“增加”或“增加的”是指数量或活性约5％至约99％的增加，或者至少5％、至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或至少100％或更多的增加，所述活性如但不限于多肽活性、转录活性和蛋白质表达。

如本文中所使用并且当在量的背景下使用时，术语“基本上”意指所述量是与其相比的量的至少约10％、至少约9％、至少约8％、至少约7％、至少约6％、至少约5％、至少约4％、至少约3％、至少约2％、至少约1％或至少约0.1％。

在对照植物或对照植物细胞等背景下的术语“对照”意指目的基因或蛋白质的表达或活性未被调节的植物或植物细胞，因此它可以提供与其中表达或活性已被修饰的植物或植物细胞的比较或参考。因此，在本发明的上下文中，对照将不包含降低TFL1表达或活性的至少一种修饰或基因改变。对照植物或植物细胞可以包括空白载体。对照植物或植物细胞可以对应于野生型植物或野生型植物细胞等等。在所有这类情况中，出于比较目的，使用相同的方案来培养和收获主题植物和对照植物。本文中所描述的基因或多肽的水平、比例、活性或分布的改变，或植物表型的改变，可通过比较主题植物与对照植物来测量，合适地，其中使用相同的方案来培养和/或收获主题植物和对照植物。对照植物可以提供用于测量主题植物的表型变化的参照点。对表型变化的测量可以在植物的任何时期测量，包含在植物发育、衰老期间或在烘烤后。对表型变化的测量可以在任何条件下生长的植物中测量，包含在生长室、温室或在田地生长的植物。

具体实施方式

在一个实施例中，提供一种分离的多核苷酸，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与本文所述的序列中的任一种，包括序列表中所示的多核苷酸中的任一种具有至少72％序列一致性的多核苷酸序列。合适地，分离的多核苷酸包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与其具有至少72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的序列。

在另一实施例中，提供一种分离的多核苷酸，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有与以下的至少72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的多核苷酸序列：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ IDNO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22至41中的任一个。

在另一实施例中，提供一种分离的多核苷酸，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有与以下的至少72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的多核苷酸序列：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:17或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供一种分离的多核苷酸，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有与以下的至少72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的多核苷酸序列：SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:14或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供一种分离的多核苷酸，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有与以下的至少72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％或100％序列一致性的多核苷酸序列：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供与以下的序列具有至少约72％、75％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％序列一致性的多核苷酸变体：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22至41中的任一个。

在另一实施例中，提供与以下的序列具有至少约72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％序列一致性的多核苷酸变体：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供与以下的序列具有至少约72％、73％、74％、75％、78％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％序列一致性的多核苷酸变体：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供以下的片段：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20或SEQID NO:22至41中的任一个，与其具有相当大同源性(即序列相似性)或相当大一致性，其与以下的对应片段具有至少约72％、73％、74％、75％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22至41中的任一个。在某些实施例中，片段长度可以是21至23个邻接核苷酸。在某些实施例中，片段长度可以是至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个邻接核苷酸。在某些实施例中，片段长度可以是至少约10、15、20、30、40、50或60个或更多个邻接核苷酸。

在另一实施例中，提供以下的片段：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:20，与其具有相当大同源性(即序列相似性)或相当大一致性，其与以下的对应片段具有至少约72％、73％、74％、75％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:17或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供以下的片段：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20，与其具有相当大同源性(即序列相似性)或相当大一致性，其与以下的对应片段具有至少约72％、73％、74％、75％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供多核苷酸，其包括与以下的足够或相当大程度的一致性或相似性：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20，其编码充当顶生花1蛋白的多肽。

在另一实施例中，提供多核苷酸，其包括与以下的足够或相当大程度的一致性或相似性：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQID NO:17或SEQ ID NO:20，其编码充当顶生花1蛋白的多肽。

在另一实施例中，提供多核苷酸，其包括与以下的足够或相当大程度的一致性或相似性：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20，其编码充当顶生花1蛋白的多肽。

在另一实施例中，提供编码具有顶生花1蛋白活性的蛋白质的多核苷酸，所述活性是以下所示的蛋白质的活性的至少约72％、73％、74％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％或更多：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20。

在另一实施例中，提供编码具有顶生花1蛋白活性的蛋白质的多核苷酸，所述活性是以下所示的蛋白质的活性的至少约72％、73％、74％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％或更多：SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:21。

在另一实施例中，提供编码具有顶生花1蛋白活性的蛋白质的本文所述的多核苷酸，所述活性是以下所示的蛋白质的活性的至少约72％、73％、74％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％或更多：SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21。

为了确定多肽是否是功能性顶生花1蛋白，BLAST分析(基本局部比对搜索工具)可用于查找生物序列之间相似的区域。程序可用于将核苷酸或蛋白质序列与序列数据库比较并且计算统计显著性。TFL1转录因子的活性可以通过TFL1具有增加或下降的结合功能-如增加或下降的与其它蛋白质(例如转录因子)的结合功能或增加或下降的与一种或多种核酸的结合的能力来测定。TFL1的转录活性可以生物化学方式通过界定结合特性或通过勘察转录因子活性的结果-如靶基因回应于转录因子活性的增加或下降的表达来测定。举例来说，在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中，TFL1通过抑制LFY和AP1基因活性起作用(《发育(Development)》(1998)125:1609-1615；《发育》(1999)126:1109-1120)。TFL1的转录活性因此可以通过测量在TFL1存在和不存在下的LFY和/或AP1基因活性来测定。最终事件是减少的开花时间，以便TFL1的主要生物活性可以定义为开花的抑制。TFL1/FT在花发育中的生物作用可以通过使用对应等位基因的获得功能和失去功能来测试(参见《植物杂志(ThePlant Journal)》(2010)63:241-253)。如本文所描述的多核苷酸可以包含核苷酸聚合物，其可以是未经修饰或经修饰的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。因此，多核苷酸可以是(但不限于)基因组DNA、互补DNA(cDNA)、mRNA或反义RNA或其片段。此外，多核苷酸可以是单链或双链DNA、单链和双链区混合的DNA、包括DNA和RNA的杂交分子或具有单链和双链区的混合物的杂交分子或其片段。另外，多核苷酸可以由包括DNA、RNA或两者的三链区或者其片段构成。多核苷酸可以含有一个或多个经修饰的碱基，如硫代磷酸酯，并且可以是肽核酸。一般来说，多核苷酸可以由分离的或克隆的cDNA片段、基因组DNA、寡核苷酸或个别核苷酸或前述的组合组装。尽管本文所述的多核苷酸序列显示为DNA序列，但序列包含其相应的RNA序列以及其互补(例如完全互补)DNA或RNA序列，包含其反向互补序列。本文所述的多核苷酸可以包括一个或多个取代修饰。本文所述的多核苷酸可以包括一个或多个标记。

如本文中所描述的多核苷酸一般将会含有磷酸二酯键，尽管在一些情况下，包含多核苷酸类似物，其可能具有替代主链，包括例如氨基磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或O-甲基亚磷酰胺键；以及肽多核苷酸主链和键。其它类似多核苷酸包含具有阳性主链；非离子主链和非核糖主链的多核苷酸。核糖-磷酸主链的修饰可以出于多种原因而完成，例如增加此类分子在生理环境中的稳定性和半衰期，或作为生物芯片上的探针。可以制备天然存在的多核苷酸和类似物的混合物；或者，可以制备不同多核苷酸类似物的混合物，以及天然存在的多核苷酸和类似物的混合物。

多种多核苷酸类似物是已知的，包括例如氨基磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、O-甲基亚磷酰胺键以及肽多核苷酸主链和键。其它类似多核苷酸包含具有阳性主链、非离子主链和非核糖主链的多核苷酸。还包含含有一种或多种碳环糖的多核苷酸。

其它类似物包含作为肽多核苷酸类似物的肽多核苷酸。这些主链在中性条件下是基本上非离子的，与天然存在的多核苷酸的高度荷电的磷酸二酯主链形成对比。这可以产生优势。首先，肽多核苷酸主链可以显示出改善的杂交动力学。对于错配碱基对相对于完全匹配的碱基对，肽多核苷酸在解链温度方面具有更大变化。对于内部错配，DNA和RNA通常显示出解链温度的2-4℃下降。在非离子肽多核苷酸主链的情况下，下降接近于7-9℃。类似地，由于其非离子性质，连接至这些主链的碱基的杂交对盐浓度相对不敏感。另外，肽多核苷酸可以不被细胞酶降解或更少程度地被细胞酶降解，并且因此可以是更稳定的。

在所公开的多核苷酸以及其片段的用途中有片段作为核酸杂交分析中的探针或用于核酸扩增分析的引物的用途。这类片段一般包括DNA序列的至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个邻接核苷酸。在其它实施例中，DNA片段包括DNA序列的至少约10、15、20、30、40、50或60个或更多个邻接核苷酸。此类片段一般包括以下的至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个邻接核苷酸：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQID NO:20。在其它实施例中，DNA片段包括以下的至少约10、15、20、30、40、50或60个或更多个邻接核苷酸：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:16或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20。此类片段一般包括以下的至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个邻接核苷酸：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:20。在其它实施例中，DNA片段包括以下的至少约10、15、20、30、40、50或60个或更多个邻接核苷酸：SEQID NO:2或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:20。此类片段一般包括以下的至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个或更多个邻接核苷酸：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20。在其它实施例中，DNA片段包括以下的至少约10、15、20、30、40、50或60个或更多个邻接核苷酸：SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:20。

影响多核苷酸杂交条件选择的基本参数和设计合适条件的指导由Sambrook,J.,E.F.Fritsch和T.Maniatis(1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)描述。使用基因密码的知识与本文中所描述的氨基酸序列组合，可以制备简并寡核苷酸组。这类寡核苷酸可用作例如聚合酶链反应(PCR)中的引物，由此分离且扩增DNA片段。在某些实施例中，简并引物可以用作基因文库的探针。这类文库将包含但不限于cDNA文库、基因组文库，以及甚至电子表达序列标签或DNA文库。通过这种方法鉴定的同源序列随后用作探针，以鉴定本文中鉴定的序列的同源物。

多核苷酸和寡核苷酸还具有潜在用途(例如引物或探针)，其在严格性降低的条件下(通常为中等严格条件，且常常为高度严格条件)与如本文中所描述的多核苷酸杂交。影响杂交条件选择的基本参数和用于设计合适条件的指导可以由本领域的普通技术人员基于例如多核苷酸的长度或碱基组成而容易地确定。一种实现中等严格条件的方式涉及使用含有5×标准柠檬酸钠、0.5％十二烷基硫酸钠、1.0mM乙二胺四乙酸(pH 8.0)的预洗涤溶液，具有约50％甲酰胺、6×标准柠檬酸钠的杂交缓冲液，和约55℃的杂交温度(或其它相似的杂交溶液，如含有约50％甲酰胺的杂交溶液，伴随约42℃的杂交温度)，以及在0.5×标准柠檬酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠中，约60℃的洗涤条件。一般地，高度严格条件定义为如上的杂交条件，但使用在大约68℃下的洗涤、0.2×标准柠檬酸钠、0.1％十二烷基硫酸钠。SSPE(1×SSPE是0.15M氯化钠、10mM磷酸钠和1.25mM乙二胺四乙酸，pH 7.4)可以替代杂交和洗涤缓冲液中的标准柠檬酸钠(1×标准柠檬酸钠是0.15M氯化钠和15mM柠檬酸钠)；洗涤在杂交完成后执行15分钟。应理解，通过应用控制杂交反应和双链体稳定性的基本原则，可以根据需要调整洗涤温度和洗涤盐浓度，以实现所需严格性程度，如本领域技术人员已知的和下文进一步描述的(参见例如，Sambrook,J.,E.F.Fritsch和T.Maniatis(1989,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y)。当使多核苷酸与未知序列的靶多核苷酸杂交时，杂交物长度假定为杂交多核苷酸的长度。当杂交已知序列的多核苷酸时，可以通过比对多核苷酸的序列并且鉴定一个或多个最佳序列互补性区域来确定杂交物长度。预期到长度小于50个碱基对的杂交物的杂交温度应比杂交物的解链温度低5至10℃，其中解链温度根据下述等式确定。对于长度小于18个碱基对的杂交物，解链温度(℃)＝2(A+T碱基数目)+4(G+C碱基数目)。对于长度超过18个碱基对的杂交物，解链温度(℃)＝81.5+16.6(log10[Na+])+0.41(％G+C)-(600/N)，其中N是杂交物中的碱基数目，并且[Na+]是杂交缓冲液中的钠离子浓度(1×标准柠檬酸钠的[Na+]＝0.165M)。通常，每种这类杂交多核苷酸的长度是与它杂交的多核苷酸的长度的至少25％(通常至少50％、60％或70％，并且最常至少80％)，并且同与它杂交的多核苷酸具有至少60％序列一致性(例如至少70％、72％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)。

如本领域技术人员应理解，线性DNA具有两个可能定向：5'-至-3'方向和3'-至-5'方向。举例来说，如果参考序列以5'-至-3'方向放置，并且如果第二序列以5'-至-3'方向置于相同多核苷酸分子/链中，那么参考序列和第二序列以相同方向定向，或具有相同定向。通常，启动子序列和处于给定启动子调节下的目的基因以相同定向放置。然而，就以5'-至-3'方向放置的参考序列而言，如果第二序列以3'-至-5'方向置于相同多核苷酸分子/链中，那么参考序列和第二序列以反义方向定向，或具有反义定向。如果参考序列(5'-至-3'方向)和参考序列的反向互补序列(以5'-至-3'放置的参考序列)置于相同多核苷酸分子/链中，那么就彼此而言具有反义定向的两个序列可以替代地描述为具有相同定向。本文所示的序列以5'-至-3'方向显示。

本文提供的重组构建体可以用于转化植物或植物细胞，以便调节蛋白质表达和/或活性水平。重组多核苷酸构建体可以包括编码如本文所述的一种或多种多核苷酸的多核苷酸，所述一种或多种多核苷酸可操作地连接于适合表达多肽的调节区。因此，多核苷酸可以包括编码如本文所述的多肽的编码序列。蛋白质表达和/或活性水平经调节的植物或植物细胞可以包括突变型、非天然存在的、转基因的、人造的或经基因工程改造的植物或植物细胞。合适地，植物或植物细胞包括已通过重组DNA的稳定整合而改变的基因组。重组DNA包含已在细胞外部经基因工程改造和构建的DNA，并且包含含有天然存在的DNA或cDNA或合成DNA的DNA。植物可以包含由最初转化的植物细胞再生的植物和来自经转化的植物的以后世代或杂交的后代植物。合适地，与对照植物相比较，修饰改变本文所述的多核苷酸或多肽的表达或活性。

由重组多核苷酸编码的多肽可以是天然多肽，或对于细胞可以是异源的。在一些情况下，重组构建体含有可操作地连接于调节区的调节表达的多核苷酸。在本文中描述了合适调节区的实例。

还提供含有重组多核苷酸构建体的载体，如本文中所描述的那些。合适的载体主链包含例如本领域常规使用的载体主链，如质粒、病毒、人工染色体、细菌人工染色体、酵母人工染色体或噬菌体人工染色体。合适的表达载体包含但不限于源自例如噬菌体、杆状病毒和逆转录病毒的质粒和病毒载体。众多载体和表达系统是商购可得的。载体可以包含例如复制起点、支架附着区域或标记。标记基因可以赋予植物细胞可选择表型。举例来说，标记可以赋予杀生物剂抗性，如对抗生素(例如卡那霉素(kanamycin)、G418、博来霉素(bleomycin)或潮霉素(hygromycin))或除草剂(例如草甘膦(glyphosate)、氯磺隆(chlorsulfuron)或草胺膦(phosphinothricin))的抗性。另外，表达载体可以包含设计为促进所表达多肽的操纵或检测(例如纯化或定位)的标签序列。如荧光素酶、β-葡糖醛酸酶、绿色荧光蛋白、谷胱甘肽S-转移酶、聚组氨酸、c-myc或血凝素序列等标签序列通常表达为与所编码多肽的融合物。这类标签可以插入多肽内的任何地方，包括在羧基或氨基末端处。

植物或植物细胞可以通过使重组多核苷酸整合到其基因组来进行转化，以变得稳定转化。本文中所描述的植物或植物细胞可以是稳定转化的。稳定转化的细胞在每次细胞分裂中通常保留引入的多核苷酸。植物或植物细胞可以进行瞬时转化，使得重组多核苷酸不整合到其基因组内。瞬时转化的细胞在每次细胞分裂中通常失去引入的重组多核苷酸的全部或一部分，使得在足够数目的细胞分裂后，引入的重组多核苷酸无法在子细胞中检测到。本文还设想使用基因组编辑。

用于转化植物细胞的许多方法是本领域可用的，所述方法全部涵盖在本文中，包含生物射弹、基因枪技术、农杆菌属(Agrobacterium)介导的转化、病毒载体介导的转化和电穿孔。用于将外源DNA整合到植物染色体内的农杆菌属系统已被广泛研究、修改和开发用于植物基因工程改造。通过常规方法将包括以有义或反义定向可操作地连接于调控序列的对应于主题纯化蛋白质的DNA序列的裸重组DNA分子连接至适当的T-DNA序列。通过聚乙二醇技术或电穿孔技术将这些引入原生质体内，所述两种技术都是标准的。或者，将包括编码主题纯化蛋白质的重组DNA分子的这类载体引入活农杆菌属细胞中，所述活农杆菌属细胞随后将DNA转移到植物细胞中。通过裸DNA而无伴随T-DNA载体序列的转化可以经由原生质体与含DNA脂质体的融合或经由电穿孔来完成。不伴随T-DNA载体序列的裸DNA也可以用于经由惰性、高速度微弹转化细胞。

如果细胞或培养的组织用作转化的受体组织，那么需要时，通过本领域技术人员已知的技术，可以由经转化的培养物再生植物。

有待包含在重组构建体中的调节区的选择取决于几个因素，包含但不限于效率、可选择性、可诱导性、所需表达水平和细胞或组织优先表达。通过适当选择调节区且相对于编码序列放置调节区，调节编码序列的表达对于本领域技术人员是常规工作。多核苷酸的转录可以相似方式进行调节。一些合适的调节区仅或占优势地在某些细胞类型中起始转录。用于鉴定且表征植物基因组DNA中的调节区的方法是本领域已知的。

启动子的实例包含由存在于不同组织或细胞类型中的组织特异性因子识别的组织特异性启动子(例如根特异性启动子、芽特异性启动子、木质部特异性启动子)，或存在于不同发育阶段期间或响应不同环境条件存在。启动子的实例包含组成型启动子，其可以在大多数细胞类型中活化而不需要特定的诱导剂。用于控制RNAi多肽产生的启动子的实例包含花椰菜花叶病毒35S(CaMV/35S)、SSU、OCS、lib4、usp、STLS1、B33、nos或泛素启动子或菜豆蛋白启动子。本领域技术人员能够产生重组启动子的多种变体。

组织特异性启动子是仅在植物发育期间的特定时间，在特定细胞或组织中(如在营养组织或生殖组织中)活跃的转录控制元件。例如，当多核苷酸在某些组织中的表达是优选的时，组织特异性表达可以是有利的。在发育控制下的组织特异性启动子的实例包含可以仅(或主要仅)在某些组织中起始转录的启动子，所述组织如营养组织，例如根或叶，或生殖组织，如果实、胚珠、种子、花粉、雌蕊(pistol)、花或任何胚组织。生殖组织特异性启动子可以是例如花药特异性、胚珠特异性、胚特异性、胚乳特异性、珠被特异性、种子和种皮特异性、花粉特异性、花瓣特异性、萼片特异性或其组合。

叶特异性启动子的实例包括来自C4植物(玉蜀黍)的丙酮酸正磷酸双激酶(PPDK)启动子、来自玉蜀黍的cab-m1Ca+2启动子、拟南芥myb相关基因启动子(Atmyb5)、二磷酸核酮糖羧化酶(RBCS)启动子(例如，在叶和光生长幼苗中表达的番茄RBCS 1、RBCS2和RBCS3A基因，在发育中的番茄果实中表达的RBCS1和RBCS2，或几乎完全以高水平在叶片和叶鞘的叶肉细胞中表达的二磷酸核酮糖羧化酶启动子)。

衰老特异性启动子的实例包括在果实催熟、叶枯萎和脱落期间活跃的番茄启动子、编码半胱氨酸蛋白酶的基因的玉蜀黍启动子、82E4的启动子和SAG基因的启动子。

花药特异性启动子是其它实例。可以选择本领域技术人员已知的根优先的启动子。种子优先的启动子包括种子特异性启动子(在种子发育期间活跃的那些启动子，如种子贮藏蛋白质的启动子)和种子发芽启动子(在种子发芽期间活跃的那些启动子)。这类种子优先的启动子包含但不限于Cim1(细胞分裂素诱导的信息)；cZ19B1(玉蜀黍19kDa玉米醇溶蛋白)；milps(肌醇-1-磷酸合成酶)；mZE40-2，也称为Zm-40；nuclc；和celA(纤维素合成酶)。γ-玉米醇溶蛋白是胚乳特异性启动子。Glob-1是胚特异性启动子。对于双子叶植物，种子特异性启动子包含但不限于豆β-菜豆蛋白、油菜籽蛋白、ββ-伴大豆球蛋白、大豆凝集素、十字花科蛋白(cruciferin)等等。对于单子叶植物，种子特异性启动子包括但不限于玉蜀黍15kDa玉米醇溶蛋白启动子、22kDa玉米醇溶蛋白启动子、27kDa玉米醇溶蛋白启动子、g-玉米醇溶蛋白启动子、27kDaγ-玉米醇溶蛋白启动子(如gzw64A启动子，参见Genbank登记号S78780)、蜡质启动子、shrunken 1启动子、shrunken 2启动子、球蛋白1启动子(参见Genbank登记号L22344)、Itp2启动子、cim1启动子、玉蜀黍end1和end2启动子、nuc1启动子、Zm40启动子、eep1和eep2；lec1、硫氧还蛋白H启动子；mlip15启动子、PCNA2启动子；和shrunken-2启动子。

诱导型启动子的实例包含响应病原体攻击、厌氧条件、高温、光、干旱、寒冷温度或高盐浓度的启动子。病原体诱导型启动子包含来自发病机制相关蛋白质(PR蛋白质)的那些，所述发病机制相关蛋白质在通过病原体感染后诱导(例如PR蛋白质、SAR蛋白质、β-1,3-葡聚糖酶、壳多糖酶)。

除植物启动子之外，其它合适的启动子可源自细菌来源(例如章鱼碱合成酶启动子、胭脂碱合成酶启动子和其它源自Ti质粒的启动子)，或可源自病毒启动子(例如花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S和19S RNA启动子、烟草花叶病毒的组成型启动子、花椰菜花叶病毒(CaMV)19S和35S启动子或玄参花叶病毒35S启动子)。在某些实施例中，紫茉莉花叶病毒(MMV)启动子是优选的。在某些实施例中，35S启动子是优选的。

在另一方面，提供一种分离的多肽，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与本文所述的多肽序列中的任一种，包含序列表中所示的多肽中的任一种具有至少72％序列一致性的多肽序列。合适地，分离的多肽包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与其具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性的序列。

在一个实施例中，分离的多肽包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有与以下的至少72％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性的序列：SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:21。

在另一实施例中，分离的多肽包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列一致性的序列。

在某些实施例中，调节包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多肽的活性：编码顶生花1蛋白并且具有与以下的至少72％序列一致性的序列：SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:21。在另一实施例中，调节包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多肽的活性：编码顶生花1蛋白并且与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的序列。

多肽可以包含包括足够或相当大程度的一致性或相似性的序列的片段以充当顶生花1蛋白。多肽的片段通常保留全长序列的活性的一些或全部，如至少约95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％的活性。

如本文所讨论，多肽还包含通过引入任何类型的改变(例如，一个或多个氨基酸插入、缺失或取代；糖基化状态的变化；影响重折叠或异构化、三维结构或自缔合状态的变化)而产生的突变体，条件是它们仍具有其作为顶生花1蛋白的一些或全部功能或活性。合适地，调节、降低或抑制作为顶生花1蛋白的功能或活性。合适地，抑制作为顶生花1蛋白的功能或活性，以便顶生花1蛋白活性是不可检测的。本文描述了示例性突变体。

多肽包括通过引入任何类型的改变(例如，氨基酸的插入、缺失或取代；糖基化状态的变化；影响重折叠或异构化、三维结构或自缔合状态的变化)而产生的变体，所述变体可以是有意改造或天然分离的。改变可以是一个或多个终止密码子。变体可以具有产生沉默变化且导致功能等效蛋白质的改变。有意的氨基酸取代可以在残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和两亲性质中的相似性基础上进行，只要物质的二级结合活性被保留便可。举例来说，带负电的氨基酸包含天冬氨酸和谷氨酸；带正电的氨基酸包含赖氨酸和精氨酸；并且具有相似亲水性值含不带电极性首基的氨基酸包含亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。保守取代可以例如根据下表进行。第二列中的相同块和优选第三列中的相同行中的氨基酸可以彼此取代：

多肽可以是成熟蛋白质或不成熟蛋白质或源自不成熟蛋白质的蛋白质。多肽可以采取线性形式或使用已知方法环化。多肽通常包括至少10个、至少20个、至少30个、或至少40个、或至少50个、或至少100个、或至少200个、或至少300个、或至少400个、或至少500个、或至少600个邻接氨基酸。

还公开了与其具有100％序列一致性的由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9或SEQ IDNO:12或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:21编码的多肽，或包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多肽：SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:15或SEQ IDNO:21中所示的序列。

多肽可以通过在适合表达多肽的培养条件下培养经转化的或重组宿主细胞进行制备。所得到的表达多肽随后可以使用已知的纯化过程由这类培养物进行纯化。多肽的纯化可以包含含有与多肽结合的试剂的亲和柱；一个或多个在这类亲和树脂上的柱步骤；一个或多个涉及疏水作用色谱的步骤；或免疫亲和色谱。或者，多肽还可以促进纯化的形式表达。举例来说，它可以表达为融合多肽，如麦芽糖结合多肽、谷胱甘肽-5-转移酶、组氨酸标签或硫氧还蛋白的那些。用于融合多肽的表达和纯化的试剂盒是商购可得的。多肽可以用表位加标签，并且随后通过使用针对这类表位的特异性抗体纯化。一个或多个液相色谱步骤-如反相高效液相色谱可以用于进一步纯化多肽。前述纯化步骤中的一些或全部以各种组合可用于提供基本上均质的重组多肽。由此纯化的多肽可以基本上不含其它多肽，并且在本文中定义为“基本上纯化的多肽”；这类纯化的多肽包括多肽、片段、变体等等。多肽和片段的表达、分离和纯化可以通过任何合适技术实现，所述合适技术包含但不限于本文所述的方法。

也可以使用亲和柱(如针对多肽产生的单克隆抗体)亲和纯化所表达的多肽。这些多肽可以使用常规技术，例如在高盐洗脱缓冲液中，从亲和柱中取出，且随后透析到更低盐的缓冲液内用于使用，或取决于利用的亲和基质，通过改变pH或其它组分，或使用天然存在的亲和部分的底物竞争性取出。

公开了分离的或基本上纯化的多核苷酸或蛋白质组合物。“分离的”或“纯化的”多核苷酸或蛋白质或其生物学上的活性部分基本上或大体上不含通常伴随多核苷酸或蛋白质或者与其相互作用(如在其天然存在的环境中发现的那样)的组分。因此，分离的或纯化的多核苷酸或蛋白质在通过重组技术产生时，基本上不含其它细胞物质或培养基，或当以化学方式合成时，基本上不含化学前体或其它化学品。最佳地，“分离的”多核苷酸不含所述多核苷酸的来源生物体的基因组DNA中天然地侧接于所述多核苷酸的序列(最佳地，蛋白质编码序列)(例如，位于多核苷酸的5'和3'末端的序列)。举例来说，在各种实施例中，分离的多核苷酸可以含有少于约5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，所述核苷酸序列在所述多核苷酸的来源细胞的基因组DNA中天然地侧接于所述多核苷酸。基本上不含细胞物质的蛋白质包含具有小于约30％、20％、10％、5％或1％(以干重计)污染性蛋白质的蛋白质制剂。

多肽还可以通过已知的常规化学合成来产生。通过合成方式用于构建多肽或其片段的方法是本领域技术人员已知的。由于与天然多肽共享一级、二级或三级结构或构象特征，合成构建的多肽序列可以具有与之共同的生物特性，包含生物活性。

遗传背景中的差异可以通过表型差异或本领域已知的分子生物学技术进行检测，所述分子生物学技术如核酸测序、遗传标记(例如微卫星RNA标记)的存在或不存在。

还提供了与本文所述的多肽具有免疫反应性的抗体。如本文所述的多肽、片段、变体、融合多肽等等可以用作产生与其免疫反应的抗体的“免疫原”。这类抗体可以经由抗体的抗原结合位点与多肽特异性结合。特异性结合抗体是特异性识别且结合多肽、同源物和变体，而不是其它分子的那些。在一个实施例中，抗体对于具有与如本文所示的氨基酸序列的多肽是特异性的，并且不与其它多肽交叉反应。

更具体来说，多肽、片段、变体、融合多肽等等含有引发抗体形成的抗原决定簇或表位。这些抗原决定簇或表位可以是线性的或构象的(不连续的)。线性表位由多肽的单个氨基酸区段组成，而构象或不连续表位由来自多肽链的不同区域的氨基酸区段组成，所述氨基酸区段在多肽折叠后达到紧密接近。表位可以通过本领域已知的方法中的任一种进行鉴定。另外，来自多肽的表位可以用作分析中的研究试剂，且纯化来自如多克隆血清或来自培养杂交瘤的上清液等物质的特异性结合抗体。这类表位或其变体可以使用本领域已知的技术如固相合成、多肽的化学或酶促切割或使用重组DNA技术产生。

针对多肽的多克隆抗体和单克隆抗体都可以通过常规技术进行制备。本文还涵盖了产生特异性针对多肽的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这类杂交瘤可以通过常规技术进行生产且鉴定。对于抗体生产，多种宿主动物可以通过用多肽、其片段、变体或突变体注射进行免疫接种。仅举几个例子，这类宿主动物可以包含但不限于兔、小鼠和大鼠。多种佐剂可以用于增加免疫应答。取决于宿主物种，这类佐剂包含但不限于弗氏(完全和不完全)、矿物凝胶如氢氧化铝，表面活性物质如溶血卵磷脂、普鲁兰尼克多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、钥孔血蓝蛋白、二硝基苯酚，以及潜在有用的人类佐剂如BCG(卡介苗)和短小棒状杆菌(Corynebacterium parvum)。单克隆抗体可以通过常规技术进行回收。这类单克隆抗体可以属于任何免疫球蛋白类别，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD以及其任何亚类。

抗体还可以用于分析中，以在体外或体内检测多肽或片段的存在。抗体还可以用于通过免疫亲和色谱纯化多肽或片段。

还公开了本文所述的多核苷酸和由其编码的多肽的片段。多核苷酸的片段可以编码保留天然蛋白质的生物活性的蛋白质片段。或者，适用作杂交探针或PCR引物的多核苷酸的片段通常不编码保留生物活性的片段蛋白质。此外，所公开的核苷酸序列的片段包含可以在本文所论述的重组构建体内组装的那些。多核苷酸序列的片段的范围可以介于至少约21个核苷酸、约22个核苷酸、约23个核苷酸、约25个核苷酸、约50个核苷酸、约75个核苷酸、约100个核苷酸、约150个核苷酸、约200个核苷酸、约250个核苷酸、约300个核苷酸、约400个核苷酸、约500个核苷酸、约600个核苷酸、约700个核苷酸、约800个核苷酸、约900个核苷酸、约1000个核苷酸、约1100个核苷酸、约1200个核苷酸、约1300个核苷酸或约1500个核苷酸、约2000个核苷酸、约3000个核苷酸、约4000个核苷酸、约5000个核苷酸、约6000个核苷酸、约7000个核苷酸、约8000个核苷酸、约9000个核苷酸、约10000个核苷酸、约15000个核苷酸、约20000个核苷酸且至多本文所述的编码多肽的全长多核苷酸。

多肽序列的片段的范围可以介于至少约25个氨基酸、约50个氨基酸、约75个氨基酸、约100个氨基酸、约150个氨基酸、约200个氨基酸、约250个氨基酸、约300个氨基酸、约400个氨基酸、约500个氨基酸、约600个氨基酸或至多本文所述的全长多肽。

调节一种或多种TFL1蛋白或一种多种TFL1核酸序列的表达或活性出于本文所述的原因是有利的。TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)或TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)或TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)的表达可以在植物中单独地调节，以便调节TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)或TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)或TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)中的仅一种的表达。TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)或TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)或TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)中的两种或更多种的表达可以在植物中进行调节，以便调节TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)或TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)或TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)中的两种或更多种的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)和TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)的表达。

TFL1-2S(SEQ ID NO:9)或TFL1-2T(SEQ ID NO:12)或TFL1-4T(SEQ ID NO:21)的活性可以在植物中单独地调节，以便调节TFL1-2S(SEQ ID NO:9)或TFL1-2T(SEQ ID NO:12)或TFL1-4T(SEQ ID NO:21)中的仅一种的表达。TFL1-2S(SEQ ID NO:9)或TFL1-2T(SEQID NO:12)或TFL1-4T(SEQ ID NO:21)中的两种或更多种的表达可以在植物中进行调节，以便调节TFL1-2S(SEQ ID NO:9)或TFL1-2T(SEQ ID NO:12)或TFL1-4T(SEQ ID NO:21)中的两种或更多种的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:9)和TFL1-2T(SEQ ID NO:12)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:9)和TFL1-4T(SEQ ID NO:21)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2T(SEQ ID NO:12)和TFL1-4T(SEQ ID NO:21)的表达。举例来说，可以调节TFL1-2S(SEQ ID NO:21)和TFL1-4T(SEQ ID NO:21)的表达。

根据某些实施例，调节(例如降低)顶生花1蛋白的表达可以使用干扰转录和/或翻译的多种分子在基因组和/或转录物水平进行，所述分子包含但不限于反义、siRNA、核酶或脱氧核酶分子。也可以使用向至少一个基因插入一个或多个突变，包括缺失、插入、位点特异性突变、锌指核酸酶等。根据其它实施例，可以使用拮抗剂或裂解多肽等的酶在蛋白质水平抑制表达。

在一个方面，描述了一种突变型植物或其部分，其在以下中包括至少一个突变：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ IDNO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；或(iv)包括(i)中所示的分离的多核苷酸的构建体、载体或表达载体，其中与不包括所述至少一个突变的对照植物相比，所述至少一个突变降低顶生花1蛋白的表达或活性。植物或植物细胞因此可以在TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)和/或TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和/或TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)中包括一个或多个突变，其中所述突变导致所述基因或由其编码的蛋白质的表达降低或功能降低。

可以调节、抑制或降低突变体的表达或功能。突变型植物或植物细胞可以在一个或多个其它基因或多肽中具有一个或多个其它突变。在某些实施例中，突变体可以在一个或多个其它基因或多肽具有一个或多个其它突变。

所述突变型植物或植物细胞的突变可以是杂合或纯合的。所述突变型植物或植物细胞的至少一个突变可以是杂合的，并且至少一个不同突变是纯合的。合适地，突变型植物或植物细胞的突变是纯合的。

本文描述了示例性突变体和突变。

在一个实施例中，所述至少一个突变选自由以下组成的群组：在SEQ ID NO:9中的位置T143和/或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120和/或G129和/或P131处的突变；或在SEQ ID NO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合。

在一个实施例中，SEQ ID NO:9中的至少一个突变选自以下位置处的突变：{T143,G129}{T143,H84}{G129,H84}{T143,G129,H84}。

在一个实施例中，SEQ ID NO:12中的至少一个突变选自以下位置处的突变：{R120,G129}{R120,P131}{G129,P131}{R120,G129,P131}{R120,P131,D142}。

在一个实施例中，SEQ ID NO:12中的至少一个突变选自以下位置处的突变：{P110,H86}。

在一个实施例中，所述至少一个突变是SEQ ID NO:12中的位置P131处的突变，合适地，其中所述突变是P131S。

在一个实施例中，所述至少一个突变是SEQ ID NO:21中的位置P110处的突变，合适地，其中所述突变是P110L。

在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:12中的位置P131处的突变，合适地，其中所述突变是P131S，和在SEQ ID NO:21中的位置P110处的突变，合适地，其中所述突变是P110L。

公开了这些突变的所有可能组合，包含选自以下的任2、3、4、5、6或7个突变：SEQID NO:9中的位置T143和G129，和SEQ ID NO:12中的位置R120和/或G129和/或P131，和SEQID NO:21中的位置P110或H86。

在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:9中的T143I。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:9中的G129R。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:9中的G129E。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:9中的H84STOP。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:12中的R120C。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:12中的G129E。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:12中的P131S。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L。在一个实施例中，所述突变是SEQ ID NO:21中的H86STOP。

公开了这些突变的所有可能组合，包含选自以下的任2、3、4、5、6、7、8或9个突变：SEQ ID NO:9中的T143I和/或G129R和/或G129E和/或H84STOP，和/或SEQ ID NO:12中的R120C和/或G129E和/或P131S，和/或SEQ ID NO:21中的P110L和/或H86STOP。

在另一方面，提供了一种缩短植物或源自所述植物的植物材料的到开花时间的方法，所述方法包括向所述植物的基因组中引入降低至少一种TFL-1基因的表达的一个或多个突变，其中所述至少一种TFL-1基因编码TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)、TFL1-2T(SEQ IDNO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)。

还提供一种鉴定具有缩短的到开花时间的植物的方法，所述方法包括筛选来自相关植物的核酸样品中TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)、TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)中的一个或多个突变的存在。

还公开了一种植物或植物细胞，其对于编码TFL1-2S(SEQ ID NO:7或8)、TFL1-2T(SEQ ID NO:10或11)和TFL1-4T(SEQ ID NO:19或20)的基因中的一个或多个突变是杂合或纯合的，其中所述突变导致基因的表达降低或由其编码的蛋白质的功能降低。

在一些实施例中，使用诱变法将有利突变引入植物或植物细胞中，并且使用本领域的技术人员已知的方法(如DNA印迹分析法、DNA测序、PCR分析法或表型分析法)鉴定或选择所引入的突变。可以使用本领域熟知的方法来确定影响基因表达或干扰所编码的蛋白质的功能的突变。基因外显子中的插入突变通常导致空突变。保守残基中的突变可以在抑制或降低所编码的蛋白质的代谢功能中特别有效。

还公开了用于获得突变型多核苷酸和多肽的方法。任何目的植物，包含植物细胞或植物材料，可以通过多种已知诱导诱变的方法进行遗传修饰，所述方法包含定点诱变、寡核苷酸指导的诱变、化学诱导的诱变、辐射诱导的诱变、利用经修饰的碱基的诱变、利用缺口双链体DNA的诱变、双链断裂诱变、利用修复缺陷型宿主株的诱变、通过全基因合成的诱变、DNA改组和其它等效方法。

突变型多肽变体可以用于制备包括一种或多种突变型多肽变体的突变型、非天然存在的或转基因植物(例如，突变型、非天然存在的、转基因、人造或基因工程改造的植物)。合适地，突变型多肽变体保留未突变多肽的活性。与未突变的多肽相比较，突变型多肽变体的活性可更高、更低或大约相同。

本文中所描述的核苷酸序列和多肽中的突变可以包含人造突变或合成突变或基因工程改造的突变。本文中所描述的核苷酸序列和多肽中的突变可以是通过包含体外或体内操纵步骤的过程获得或可获得的突变。本文中所描述的核苷酸序列和多肽中的突变可以是通过包含人为干预的过程获得或可获得的突变。作为实例，所述过程可以包含使用外源添加的化学品的诱变，如致突变、致畸形或致癌有机化合物，例如甲磺酸乙酯(EMS)，所述化学品在遗传物质中产生随机突变。进一步举例来说，所述过程可以包含一个或多个基因工程改造步骤，如本文中所描述的基因工程改造步骤中的一个或多个或其组合。进一步举例来说，所述过程可以包含一个或多个植物杂交步骤。

如果转化活性在统计上低于未经修饰以抑制所述顶生花1多肽的转化活性并且已经使用相同方案培养和收获的植物中的相同顶生花1多肽的转化活性，那么根据本公开，植物中的一种或多种顶生花1多肽的活性降低或抑制。当植物中顶生花1多肽的活性无法通过本文所述的分析方法检测时，其被视为被消除。本文描述了测定顶生花1多肽的活性的方法。

除诱变以外，可以调节本文所述的一种或多种多核苷酸或多肽的表达或活性的组合物包含但不限于：可以干扰一种或多种内源基因的转录的序列特异性多核苷酸；可以干扰RNA转录物翻译的序列特异性多核苷酸(例如双链RNA、siRNA、核酶)；可以干扰一种或多种蛋白质的稳定性的序列特异性多肽；可以干扰一种或多种蛋白质的酶促活性或者一种或多种蛋白质相对于底物或调节蛋白质的结合活性的序列特异性多核苷酸；显示出对于一种或多种蛋白质的特异性的抗体；可以干扰一种或多种蛋白质的稳定性、或者一种或多种蛋白质的酶促活性、或者一种或多种蛋白质的结合活性的小分子化合物；结合一种或多种多核苷酸的锌指蛋白；以及具有针对一种或多种多核苷酸的活性的大范围核酸酶。基因编辑技术、遗传编辑技术和基因组编辑技术是本领域众所周知的。

一种基因编辑方法涉及转录激活因子样效应物核酸酶(transcriptionactivator-like effector nuclease，TALEN)的使用，其诱导细胞可以修复机制响应的双链断裂。非同源末端连接使来自双链断裂任一侧的DNA再连接，其中存在很少的序列重叠或无序列重叠用于退火。这一修复机制经由插入或缺失、或染色体重排诱导基因组中的错误。任何这类误差可以致使在所述位置处编码的基因产物无功能。另一种基因编辑方法涉及细菌CRISPR/Cas系统的使用。细菌和古细菌显示出称为规律成簇间隔短回文重复(clusteredregularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR)的染色体元件，它是适应性免疫系统的一部分，防止侵入病毒和质粒DNA。在II型CRISPR系统中，CRISPR RNA(crRNA)与反式激活crRNA(tracrRNA)和CRISPR相关(Cas)蛋白质起作用，以在靶DNA中引入双链断裂。通过Cas9的靶切割要求在crRNA和tracrRNA之间的碱基配对，以及在crRNA和靶DNA之间的碱基配对。靶识别通过称为原型间隔序列毗邻基序(protospacer-adjacent motif，PAM)的短基序的存在得到促进，所述PAM符合序列NGG。这一系统可以用于基因组编辑。Cas9通常通过双重RNA按程序工作，所述双重RNA由crRNA和tracrRNA组成。然而，这些RNA的核心组分可以组合成单一杂交物‘引导RNA’用于Cas9靶向。对靶DNA使用非编码RNA引导用于位点特异性切割有希望比现有技术(如TALEN)明显更直截了当。使用CRISPR/Cas策略，再靶向核酸酶复合物仅要求引入新RNA序列，并且不需要再改造蛋白质转录因子的特异性。

反义技术是可以用于调节多肽表达的另一熟知方法。将待抑制基因的多核苷酸克隆且可操作地连接于调节区和转录终止序列，使得RNA的反义链被转录。重组构建体随后转化到植物细胞内，并且产生RNA的反义链。多核苷酸无需是待抑制基因的整个序列，但通常与待抑制基因的有义链的至少一部分基本上互补。

多核苷酸可以转录成核酶，或催化RNA，其影响mRNA的表达。核酶可以设计为与几乎任何靶RNA特异性配对，且切割在特定位置处的磷酸二酯主链，由此使靶RNA功能失活。异源多核苷酸可以编码设计为切割特定mRNA转录物的核酶，从而阻止多肽的表达。锤头状核酶可用于破坏特定mRNA，但可以使用在位点特异性识别序列处切割mRNA的多种核酶。锤头状核酶在由侧翼区指示的位置处切割mRNA，所述侧翼区与靶mRNA形成互补碱基对。唯一要求是靶RNA含有5'-UG-3'核苷酸序列。锤头状核酶的构建和产生是本领域已知的。锤头状核酶序列可以嵌入稳定RNA如转移RNA(tRNA)内，以增加体内切割效率。

在一个实施例中，可以干扰RNA转录物翻译的序列特异性多核苷酸是干扰RNA。RNA干扰或RNA沉默是进化上保守的过程，特异性mRNA通过其可被靶向用于酶促降解。一种双链RNA(双链RNA)通过细胞(例如双链RNA病毒、或干扰RNA多核苷酸)引入或产生，以起始干扰RNA途径。双链RNA可以通过RNA酶III而转化成21-23bp长度的多个小干扰RNA双链体，所述RNA酶III是双链RNA特异性核酸内切酶。小干扰RNA随后可以由RNA诱导沉默复合物识别，所述RNA诱导沉默复合物促进通过ATP依赖性过程的小干扰RNA的解旋。小干扰RNA的解旋的反义链将活化RNA诱导沉默复合物导向靶向mRNA，所述靶向mRNA包括与小干扰RNA反义链互补的序列。靶向mRNA和反义链可以形成A形螺旋，并且A形螺旋的大沟可以由活化RNA诱导沉默复合物识别。可以在由小干扰RNA链的5'-端的结合位点限定的单个位点处，通过活化RNA诱导沉默复合物切割靶mRNA。活化RNA诱导沉默复合物可以再循环，以催化另一切割事件。

TFL1-1S/T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:22中。TFL1-1S/T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:23中。TFL1-1S/T RNAi构建体的一实例示于SEQ IDNO:24中。

TFL1-1S的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:25中。TFL1-1S的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:26中。

TFL1-1T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:27中。TFL1-1T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:28中。

TFL1-2S/T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:29中。TFL1-2S/T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:30中。TFL1-2S/T RNAi构建体的一实例示于SEQ IDNO:31中。

TFL1-2S的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:32中。TFL1-2S的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:33中。

TFL1-2T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:34中。TFL1-2T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:35中。

TFL1-3T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:36中。TFL1-3T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:37中。TFL1-3T RNAi构建体的一实例示于SEQ ID NO:38中。

TFL1-4T的有义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:39中。TFL1-4T的反义RNAi靶序列的一实例示于SEQ ID NO:40中。TFL1-4T RNAi构建体的一实例示于SEQ ID NO:41中。

公开了用于SEQ ID NO:22、23、25、26、27、28、29、30、32、33、34、35、36、37、39、40或41中的任一个的长度在约21至23个核苷酸之间的序列。

还涵盖了使用这些编码序列的基因沉默方法以及其用途。

干扰RNA表达载体可以包括编码干扰RNA多核苷酸的干扰RNA构建体，其通过降低mRNA、mRNA前体或相关RNA变体的表达水平，显示出RNA干扰活性。表达载体可以包括置于干扰RNA构建体上游且可操作地连接于干扰RNA构建体的启动子，如本文进一步描述的。干扰RNA表达载体可以包括合适的最小核心启动子、目的干扰RNA构建体、上游(5')调节区、下游(3')调节区，包含转录终止和聚腺苷酸化信号，以及本领域技术人员已知的其它序列，如多种选择标记。

干扰RNA构建体的实例示于SEQ ID NO:24、31、38和41中。

在一个实施例中，表达载体包括启动子，如强组成型MMV(紫茉莉花叶病毒)启动子，置于干扰RNA构建体上游且可操作地连接于干扰RNA构建体，和下游(3')调节区，如根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的胭脂碱合成酶基因的3'nos终止序列。

多核苷酸可以多种形式产生，包括作为双链结构(即，包括反义链和互补有义链的双链RNA分子)、双链发夹样结构、或单链结构(即，仅包括反义链的ssRNA分子)。结构可以包括具有自互补的有义链和反义链的双链体、不对称双链体、发夹或不对称的发夹二级结构。双链干扰RNA可以酶促转化为双链小干扰RNA。小干扰RNA双链体的链之一可对靶mRNA和相关RNA变体内的互补序列退火。小干扰RNA/mRNA双链体由RNA诱导沉默复合物识别，所述RNA诱导沉默复合物可以序列依赖性方式在多个位点处切割RNA，从而导致靶mRNA和相关RNA变体的降解。

双链RNA分子可以包含以茎环结构由单个寡核苷酸组装的小干扰RNA分子，其中小干扰RNA分子的自互补的有义区和反义区借助于基于多核苷酸或基于非多核苷酸的接头以及具有两个或更多个环结构和包括自互补的有义链和反义链的茎的环状单链RNA连接，其中所述环状RNA可以在体内或体外加工，以生成能够介导干扰RNA的活性小干扰RNA分子。

双链RNA可以包括彼此至少部分互补的至少两个序列。有义链可以包括第一序列并且反义链可以包括第二序列。所述序列中的至少一个可以包括TFL1RNA的至少10个邻接核苷酸。所述序列中的至少一个可以包括TFL1RNA的约21至23个邻接核苷酸。

在一个实施例中，双链RNA具有第一序列，所述第一序列具有TFL1的至少约10个邻接核苷酸，合适地TFL-1的约21至23个邻接核苷酸。双链RNA可以具有第二序列。双链RNA可以具有第三序列，所述第三序列置于与所述第一序列相同的定向、具有所述第一序列的反向互补序列。所述第二序列可以位于所述第一序列与所述第三序列之间。所述第二序列可以可操作地连接于所述第一序列和所述第三序列。

所述第一序列可以选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ IDNO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20，和/或其中所述第三序列是SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的对应序列的反向互补序列。

所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:22并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:23；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:25并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:26；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:27并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:28；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:29并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:30；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:32并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:33；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:34并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:35；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:36并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:37；或所述第一序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:39并且所述第三序列可以包括或其组成为SEQ ID NO:40。

所述双链RNA可以包括或其组成为选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41。

还涵盖了小发夹RNA分子的使用。除了反向互补(有义)序列外，它们还包括特定的反义序列，通常由间隔物或环序列分开。间隔物或环的切割提供了单链RNA分子和其反向互补序列，使得它们可以退火以形成双链RNA分子(任选具有另外的加工步骤，可以导致来自任一或两条链的3'端或5'端的一个、两个、三个或更多个核苷酸的添加或去除)。间隔物可以具有足够长度，以在间隔物切割(和任选地，可以导致来自任一或两条链的3'端或5'端的一个、两个、三个、四个或更多个核苷酸的添加或去除的后续加工步骤)之前，允许反义和有义序列退火且形成双链结构(或茎)。间隔序列通常是位于两个互补的核苷酸序列区之间的无关核苷酸序列，当退火成双链多核苷酸时，所述两个互补的核苷酸序列区包括小发夹RNA。间隔序列一般包括约3至约100个核苷酸。

可以通过选择用于产生发夹双链体的合适序列组成、环大小和茎长，产生任何目的RNA多核苷酸。反义和有义靶RNAi序列和构建体的示例性DNA序列展示于SEQ ID NO:22至41中。用于设计发夹双链体的茎长的合适范围包括至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个核苷酸的茎长，如约14-30个核苷酸、约30-50个核苷酸、约50-100个核苷酸、约100-150个核苷酸、约150-200个核苷酸、约200-300个核苷酸、约300-400个核苷酸、约400-500个核苷酸、约500-600个核苷酸以及约600-700个核苷酸。用于设计发夹双链体的环长的合适范围包括约4-25个核苷酸、约25-50个核苷酸或如果发夹双链体的茎长相当大，那么更长的环长。在某些实施例中，双链RNA或ssRNA分子长度在约15与约40个核苷酸之间。在另一实施例中，小干扰RNA分子是长度在约15与约35个核苷酸之间的双链RNA或ssRNA分子。在另一实施例中，小干扰RNA分子是长度在约17与约30个核苷酸之间的双链RNA或ssRNA分子。在另一实施例中，小干扰RNA分子是长度在约19与约25个核苷酸之间的双链RNA或ssRNA分子。在另一实施例中，小干扰RNA分子是长度在约21至约23个核苷酸之间的双链RNA或ssRNA分子。在某些实施例中，具有长于21个核苷酸的双链区的发夹结构可以促进有效的小干扰RNA指导的沉默，与环序列和长度无关。用于RNA干扰的示例性序列示于SEQ ID NO:22至33中。

靶mRNA序列通常长度为约14至约50个核苷酸之间。因此，可以对靶mRNA进行约14至约50个核苷酸长度的区域的扫描，所述区域优选地满足靶序列的一个或多个以下标准：A+T/G+C比在约2:1和约1:2之间；在靶序列的5'端处的AA二核苷酸或CA二核苷酸；对靶mRNA独特的至少10个连续核苷酸的序列(即，序列不存在于来自相同植物的其它mRNA序列中)；以及不超过三个连续鸟嘌呤(G)核苷酸或超过三个连续胞嘧啶(C)核苷酸的“运行”。这些标准可以使用本领域已知的多种技术进行评价，例如计算机程序如BLAST可以用于搜索可公开获得的数据库，以确定所选择的靶序列是否对于靶mRNA是独特的。或者，使用商购可得的计算机软件(例如商购可得的OligoEngine、Target Finder和小干扰RNA设计工具)，可以选择靶序列(和设计的小干扰RNA序列)。

在一个实施例中，选择满足上述标准中的一个或多个、长度在约14与约30个核苷酸之间的靶mRNA序列。在另一实施例中，选择满足上述标准中的一个或多个、长度在约16与约30个核苷酸之间的靶序列。在另一实施例中，选择满足上述标准中的一个或多个、长度在约19与约30个核苷酸之间的靶序列。在另一实施例中，选择满足上述标准中的一个或多个、长度在约19与约25个核苷酸之间的靶序列。

在一示例性实施例中，小干扰RNA分子包括特异性反义序列，其与本文所述多核苷酸序列中的任一个的至少12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个邻接核苷酸互补。

由小干扰RNA分子包括的特异性反义序列可以与靶序列的互补序列一致或基本上一致。在一个实施例中，由小干扰RNA分子包括的特异性反义序列与靶mRNA序列的互补序列至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致。确定序列一致性的方法是本领域已知的，并且可以例如通过使用University of Wisconsin ComputerGroup(GCG)软件的或NCBI网站上提供的BLASTN程序进行确定。

通过在一个、两个、三个、四个或更多个核苷酸处与靶mRNA的序列不同(例如，通过核苷酸取代，包含转换或颠换)，小干扰RNA分子的特异性反义序列可以显示出变化性。当这类核苷酸取代存在于双链RNA分子的反义链中时，在有义链中取代核苷酸通常与之形成氢键碱基配对的互补核苷酸可以相应地取代或不取代。还涵盖了双链RNA分子，其中一种或多种核苷酸取代在有义序列而不是反义链中发生。如上所述，当小干扰RNA分子的反义序列包括在小干扰RNA的核苷酸序列与靶核苷酸序列之间的一个或多个错配时，错配可以在反义序列的3'端、5'端或中心部分发现。

在另一实施例中，小干扰RNA分子包括特异性反义序列，在严格条件下，所述特异性反义序列能够与天然存在的靶基因或靶mRNA的一部分选择性杂交。如本领域普通技术人员已知的，可以通过改变用于杂交和洗涤步骤的时间、温度或溶液浓度，来实现杂交条件的严格性中的变化。合适条件还可以部分取决于使用的具体核苷酸序列，例如靶mRNA或基因的序列。

一种用于在植物中诱导双链RNA沉默的方法是用产生发夹RNA的基因构建体转化(参见Smith等人.(2000)Nature,407,319-320)。这类构建体包括由适当间隔物分开的靶基因序列的反向区。由于内含子剪接的发夹RNA的生成，功能性植物内含子区作为间隔物片段的插入另外增加基因沉默诱导的效率(Wesley等人.(2001)Plant J.,27,581-590)。合适地，茎长为约50个核苷酸至约1千个碱基长度。用于产生内含子剪接的发夹RNA的方法在本领域中充分描述(参见例如Bioscience,Biotechnology,and Biochemistry(2008)72,2,615-617)。

具有双链体或双链结构的干扰RNA分子，例如双链RNA或小发夹RNA可具有平端，或可具有3'或5'突出端。如本文所用，“突出端”指当一个RNA链的3'端延伸超出另一条链的5'端(3'突出端)，或反之亦然(5'突出端)时，由双链体结构突出的一个或多个不成对的核苷酸。包括突出端的核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。在一个实施例中，干扰RNA分子的至少一条链具有长度约1至约6个核苷酸的3'突出端。在其它实施例中，3'突出端长度为约1至约5个核苷酸、约1至约3个核苷酸以及约2至约4个核苷酸。

当干扰RNA分子在分子的一端包括3'突出端时，另一端可以是平端的或也具有突出端(5'或3')。当干扰RNA分子在分子的两端包括突出端时，突出端的长度可以是相同的或不同的。在一个实施例中，干扰RNA分子在分子的两端包括约1至约3个核苷酸的3'突出端。在另一实施例中，干扰RNA分子是在分子的两端具有2个核苷酸的3'突出端的双链RNA。在另一实施例中，构成干扰RNA的突出端的核苷酸是TT二核苷酸或UU二核苷酸。

当确定包括一个或多个突出端的干扰RNA分子与靶mRNA序列的一致性百分比时，一个或多个突出端可加以考虑或不加以考虑。举例来说，来自3'突出端的核苷酸以及来自双链的5'或3'端的至多2个核苷酸可以进行修饰，而小干扰RNA分子活性无明显丧失。

干扰RNA分子可以包括一个或多个5'或3'帽状结构。干扰RNA分子可以包括在干扰RNA分子的有义链、反义链、或有义链和反义链两者的3'端处；或者在有义链、反义链、或有义链和反义链两者的5'端处的帽状结构。或者，干扰RNA分子可以包括在干扰RNA分子的3'端和5'端两者处的帽状结构。术语“帽状结构”指在寡核苷酸的任一端处并入的化学修饰，这使分子免于核酸外切酶降解，并且还可以促进在细胞内的递送或定位。

另一种可应用于干扰RNA分子的修饰是干扰RNA分子与一个或多个部分或结合物的化学连接，这增强干扰RNA分子的活性、细胞分布、细胞摄取、生物利用度或稳定性。多核苷酸可以通过本领域充分确定的方法进行合成或修饰。化学修饰可以包含但不限于2'修饰、非天然碱基的引入、与配体的共价连接以及用硫代磷酸酯键替换磷酸酯键。在这个实施例中，双链体结构的完整性通过至少一个，且通常为两个化学键得到加强。化学连接可以通过多种众所周知技术中的任一种实现，例如通过引入共价键、离子键或氢键；疏水作用、范德华力(van der Waals)或堆积相互作用；借助于金属离子配位，或通过使用嘌呤类似物。

可以修饰两条单链中的一条或两条的核苷酸以调节细胞酶的活化，如但不限于某些核酸酶。用于降低或抑制细胞酶活化的技术是本领域已知的，包括但不限于2'-氨基修饰、2'-氟修饰、2'-烷基修饰、不带电的主链修饰、吗啉代修饰、2'-O-甲基修饰和氨基磷酸酯。因此，双链RNA上的核苷酸的至少一个2'-羟基替换为化学基团。另外，至少一个核苷酸可以进行修饰，以形成锁核苷酸。这类锁核苷酸含有连接核糖的2'-氧与核糖的4'-碳的亚甲基或亚乙基桥。锁核苷酸引入寡核苷酸内改善互补序列的亲和力，并且使解链温度升高几度。

配体可以结合至干扰RNA分子，例如以增强其细胞吸收。在某些实施例中，疏水性配体结合至分子，以促进细胞膜的直接渗透。这些方法已经用于促进反义寡核苷酸的细胞渗透。在某些情况下，阳离子配体与寡核苷酸的结合通常使得对核酸酶的抗性改善。阳离子配体的代表性实例包括丙铵和二甲基丙铵。当阳离子配体分布遍及寡核苷酸时，反义寡核苷酸可以保留其与mRNA的高结合亲和力。

本文所述的分子和多核苷酸可以使用众所周知的固相合成技术进行制备。可以另外或替代地采用本领域已知的用于这类合成的任何其它方式。

多个实施例涉及包括本文所述的多核苷酸中的一种或多种或者一种或多种干扰RNA构建体的表达载体。图21中示出了示例性构建体。

多个实施例涉及包括一种或多种多核苷酸或一种或多种干扰RNA构建体的表达载体，所述干扰RNA构建体编码本文所述的一种或多种干扰RNA多核苷酸，其能够自我退火以形成发夹结构，其中所述构建体包括(a)本文所述的多核苷酸中的一种或多种；(b)编码间隔元件的第二序列，所述间隔元件形成发夹结构的环；和(c)置于与第一序列相同的定向、包括第一序列的反向互补序列的第三序列，其中第二序列置于第一序列和第三序列之间，并且第二序列可操作地连接于第一序列和第三序列。

所公开的序列可以用于构建不形成发夹结构的多种多核苷酸。举例来说，可以通过(1)通过可操作地连接于第一启动子来转录DNA的第一条链，和(2)通过可操作地连接于第二启动子来转录DNA片段的第一条链的反向互补序列，来形成双链RNA。多核苷酸的每条链可以由相同表达载体或不同表达载体转录。具有RNA干扰活性的RNA双链体可以酶促转化为小干扰RNA，以调节RNA水平。

因此，多个实施例涉及包括一种或多种本文所述的多核苷酸或编码能够自我退火的干扰RNA多核苷酸的干扰RNA构建体的表达载体，其中所述构建体包括(a)本文所述的多核苷酸中的一种或多种；和(b)置于与第一序列相同的定向、包括第一序列的互补(例如反向互补)序列的第二序列。

提供了通过促进基因表达的共抑制，用于调节本文所述多肽中的一种或多种(或如本文所述的其任何组合)的内源表达水平的多种组合物和方法。由于将转基因的多个拷贝引入植物细胞宿主内，发生共抑制现象。转基因的多个拷贝的整合可以导致转基因和靶向内源基因的调节表达。共抑制程度取决于转基因和靶向内源基因之间的序列一致性程度。内源基因和转基因两者的沉默都可以通过沉默基因座(即内源启动子和内源目的基因)的广泛甲基化而发生，所述广泛甲基化可以阻碍转录。或者，在一些情况下，内源基因和转基因的共抑制可以通过转录后基因沉默而发生，其中可以产生转录物，但增强的降解速率阻碍转录物的累积。通过转录后基因沉默的共抑制机制被认为类似RNA干扰，因为RNA看起来是这些过程中的重要起始子和靶，并且可以至少部分地通过相同分子机制、可能通过RNA指导的mRNA降解进行介导。

可以通过将核酸或其片段的多个拷贝作为转基因整合到目的植物的基因组内来实现核酸的共抑制。宿主植物可以用表达载体进行转化，所述表达载体包括可操作地连接于核酸或其片段的启动子。多个实施例涉及用于促进内源基因的共抑制的表达载体，所述内源基因包括可操作地连接于多核苷酸的启动子。

多个实施例涉及通过将多核苷酸的多个拷贝整合到植物基因组内，用于调节本文所述的多核苷酸中的一种或多种(或如本文所述的其任何组合)的表达水平的方法，其包括：用表达载体转化植物细胞宿主，所述表达载体包括可操作地连接于多核苷酸的启动子。

提供了通过调节mRNA的翻译用于调节内源基因表达水平的多种组合物和方法。宿主植物细胞可以用表达载体转化，所述表达载体包括：可操作地连接于多核苷酸的启动子，所述多核苷酸以就启动子而言的反义定向放置，以使得能够表达具有与mRNA的一部分互补的序列的RNA多核苷酸。

用于调节mRNA翻译的多种表达载体可以包括：可操作地连接于多核苷酸的启动子，其中序列以就启动子而言的反义定向放置。反义RNA多核苷酸的长度可以改变，并且可以是约15-20个核苷酸、约20-30个核苷酸、约30-50个核苷酸、约50-75个核苷酸、约75-100个核苷酸、约100-150个核苷酸、约150-200个核苷酸以及约200-300个核苷酸。

还可以通过将转座子(例如，IS元件)引入目的植物的基因组内来靶向基因以灭活。这些活动基因元件可以通过伴性异花受精而引入，并且可以就蛋白质活性的丧失筛选插入突变体。通过例如伴性异花受精，通过使亲本植物与未实施转座子诱导诱变的植物杂交，可将亲本植物中的破坏基因引入其它植物内。可以利用本领域技术人员已知的任何标准育种技术。在一个实施例中，可以通过插入一个或多个转座子灭活一种或多种基因。突变可能导致一种或多种基因的纯合破坏、一种或多种基因的杂合破坏，或如果破坏超过一种基因，那么可能导致纯合和杂合破坏两者的组合。合适的转座元件包含反转录转座子、反转座子和SINE样元件。这类方法是本领域技术人员已知的。

或者，可以通过将源自许多小环状RNA的核酶引入植物中来靶向基因以灭活，所述小环状RNA能够自切割和复制。这些RNA可以单独复制(类病毒RNA)或伴随辅助病毒(卫星RNA)而复制。合适RNA的实例包含源自鳄梨日斑病类病毒的那些，以及源自烟草环斑病毒、苜蓿短暂条纹病毒、绒毛烟草斑驳病毒、莨菪斑驳病毒和地下三叶草斑驳病毒的卫星RNA。多种靶RNA特异性核酶是本领域技术人员已知的。

如本文所讨论，可以通过非转基因方式来调节一种或多种多肽的表达，如本文所讨论的在一个或多个基因中产生一个或多个突变。在基因序列中随机引入突变的方法可以包含化学诱变、EMS诱变和辐射诱变。将一个或多个靶向突变引入细胞内的方法包含但不限于基因组编辑技术(确切地说锌指核酸酶介导的诱变和靶向诱导的基因组局部损伤(TILLING))、同源重组、寡核苷酸引导的诱变和大范围核酸酶介导的诱变。在一个实施例中，使用TILLING。这是可以用于生成和/或鉴定编码具有修饰的表达和/或活性的多肽的多核苷酸的诱变技术。TILLING还允许选择携带这类突变体的植物。TILLING组合高密度诱变与高流通量筛选方法。用于TILLING的方法是本领域众所周知的(参见McCallum等人,(2000)Nat Biotechnol 18:455-457和Stemple(2004)Nat Rev Genet 5(2):145-50)。

突变的一些非限制性实例是至少一个核苷酸的缺失、插入和错义突变，单核苷酸多态性和简单序列重复。在突变后，可以执行筛选，以鉴定产生提前终止密码子或者无功能基因的突变。在突变后，可以执行筛选以鉴定产生功能基因的突变，所述功能基因能够以升高水平表达。可以通过测序或使用特异性针对基因或蛋白质的一个或多个探针或引物进行突变体的筛选。还可以产生多核苷酸中的特异性突变，其可以导致基因表达被调节、mRNA的稳定性被调节或蛋白质的稳定性被调节。这类植物在本文中被称为“非天然存在的”或“突变型”植物。通常，突变型或非天然存在的植物包含外源或合成或人造核酸(例如DNA或RNA)的至少一部分，其在被操纵前不存在于植物中。外源核酸可以是单个核苷酸、两个或更多个核苷酸、两个或更多个邻接核苷酸、或者两个或更多个非邻接核苷酸，如至少10、20、30、40、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400或1500个或更多个邻接或非邻接核苷酸。

突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有一个或多个基因中的一个或多个突变的任何组合，所述一个或多个突变使得蛋白质水平得以调节。举例来说，突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有单个基因中的单个突变；单个基因中的多个突变；两个或更多个或者三个或更多个或者四个或更多个基因中的单个突变；或者两个或更多个或者三个或更多个或者四个或更多个基因中的多个突变。这些突变的实例描述于本文中。进一步举例来说，突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有在基因的特定部分中的一个或多个突变，所述特定部分如在基因中编码蛋白质的活性位点或其一部分的区域中。进一步举例来说，突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有在一个或多个基因外部区域中的一个或多个突变，所述区域如在其调节的基因的上游或下游区域，只要其调节基因的活性或表达。上游元件可以包括启动子、增强子或转录因子。一些元件如增强子可以置于它调节的基因的上游或下游。元件无需定位接近于它调节的基因，因为一些元件已发现位于它调节的基因上游或下游几百上千个碱基对处。突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有位于基因的前100个核苷酸内、基因的前200个核苷酸内、基因的前300个核苷酸内、基因的前400个核苷酸内、基因的前500个核苷酸内、基因的前600个核苷酸内、基因的前700个核苷酸内、基因的前800个核苷酸内、基因的前900个核苷酸内、基因的前1000个核苷酸内、基因的前1100个核苷酸内、基因的前1200个核苷酸内、基因的前1300个核苷酸内、基因的前1400个核苷酸内、或基因的前1500个核苷酸内的一个或多个突变。突变型或非天然存在的植物或植物细胞可以具有位于基因的100个核苷酸的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四或第十五集合或其组合内的一个或多个突变。公开了包括突变型多肽变体的突变型或非天然存在的植物或植物细胞(例如，如本文所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或植物细胞等)。

在一个实施例中，使来自植物的种子诱变且随后生长成第一代突变型植物。随后使第一代植物自花授粉，并且使来自第一代植物的种子生长成第二代植物，所述第二代植物随后就其基因座中的突变进行筛选。尽管诱变的植物材料可以针对突变进行筛选，但筛选第二代植物的优点在于所有体细胞突变都对应于生殖系突变。本领域技术人员应理解，包含但不限于种子、花粉、植物组织或植物细胞的多种植物材料可以进行诱变，以便产生突变型植物。然而，经过诱变的植物材料的类型可能影响植物核酸针对突变进行筛选的时间。举例来说，当在非诱变植物授粉之前对花粉实施诱变时，使授粉获得的种子生长成第一代植物。第一代植物的每一个细胞将含有在花粉中产生的突变；因此这些第一代植物随后可针对突变进行筛选，而不是等到第二代进行。

可使用主要产生点突变和短缺失、插入、颠换和或转换的诱变剂来产生突变，所述诱变剂包含化学诱变剂或辐射。诱变剂包含但不限于甲磺酸乙酯、甲磺酸甲酯、N-乙基-N-亚硝基脲、三乙基蜜胺、N-甲基-N-亚硝基脲、丙卡巴肼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、硫酸二乙酯、丙烯酰胺单体、美法仑、氮芥、长春新碱、二甲基亚硝胺、N-甲基-N'-硝基-亚硝基胍、亚硝基胍、2-氨基嘌呤、7,12-二甲基苯并蒽、环氧乙烷、六甲基磷酰胺、白消安、二环氧烷烃(二环氧辛烷、二环氧丁烷等)、2-甲氧基-6-氯-9[3-(乙基-2-氯乙基)氨丙基氨基]吖啶二盐酸盐和甲醛。

还设想了可能不是由诱变剂直接引起的基因座中的自发突变，只要它们产生所需表型。合适的诱变试剂还可以包含例如电离辐射，如X射线、γ射线、快中子照射和UV辐射。本领域技术人员已知的植物核酸制备的任何方法都可以用于制备用于突变筛选的植物核酸。

可以任选地合并由个别植物、植物细胞或植物材料制备的核酸，以便加速源于诱变的植物组织、细胞或材料的植物群体中的突变筛选。可以筛选植物、植物细胞或植物材料的一个或多个后续世代。任选合并的群组的大小取决于使用的筛选方法的灵敏度。

在核酸样品任选合并后，可以对它们实施多核苷酸特异性扩增技术，如聚合酶链反应。特异性针对基因或与基因紧邻的序列的任何一个或多个引物或探针可以用于扩增任选合并的核酸样品内的序列。合适地，一个或多个引物或探针设计为扩增最可能出现有用突变的基因座的区域。最优选地，引物设计为检测多核苷酸区域内的突变。另外，引物和探针优选避免已知的多态性位点，以便容易筛选点突变。为了便于扩增产物的检测，可以使用任何常规标记方法来标记一个或多个引物或探针。使用本领域充分理解的方法，可以基于本文中所描述的序列来设计引物或探针。

为了便于检测扩增产物，可以使用任何常规标记方法来标记引物或探针。使用本领域充分理解的方法，可以基于本文中所描述的序列来设计这些引物或探针。可以通过本领域已知的方法鉴定多态性，并且一些多态性已在文献中得到描述。

在另一方面，提供了一种制备突变型植物的方法。所述方法涉及提供包括编码本文所述的功能性多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)的基因的植物的至少一个细胞。接下来，植物的至少一个细胞在有效调节本文所述的多核苷酸的活性的条件下进行处理。至少一个突变型植物细胞随后繁殖成突变型植物，其中与对照植物相比较，所述突变型植物具有调节水平的所述多肽(或如本文所述的其任何组合)。在这一制备突变型植物的方法的一个实施例中，处理步骤涉及在有效获得至少一个突变型植物细胞的条件下，使至少一个细胞经受如上所述的化学诱变剂。在这一方法的另一个实施例中，处理步骤涉及在有效获得至少一个突变型植物细胞的条件下，使至少一个细胞经受辐射源。术语“突变型植物”包含这样的突变型植物，与对照植物相比较，所述突变型植物中的基因型适当地通过除了基因工程改造或基因修饰之外的方式进行修饰。

在某些实施例中，突变型植物、突变型植物细胞或突变型植物材料可以包括一个或多个突变，所述一个或多个突变在另一种植物、植物细胞或植物材料中天然存在，且赋予所需性状。可以将这一突变并入(例如基因渗入)到另一种植物、植物细胞或植物材料(例如，具有与得到突变的植物不同的基因背景的植物、植物细胞或植物材料)中以产生在所述植物中非天然存在的突变并赋予其性状。因此，例如，在第一植物中天然存在的突变可以引入到第二植物中，如与第一植物具有不同基因背景的第二植物。技术人员因此能够搜索且鉴定在基因组中天然携带本文中所描述基因的一种或多种突变等位基因的植物，所述基因赋予所需性状。在某些实施例中，一个等位基因中的一个或多个突变足以缩短到开花时间。可以通过多种方法(包含育种、回交和基因渗入)将天然存在的突变体等位基因转移到第二植物，以产生在本文中所描述基因中具有一个或多个突变的品系、品种或杂交物。可以在突变型植物的库中筛选展示所需性状的植物。合适地，利用如本文中所描述的核苷酸序列的知识进行选择。因此，能够与对照相比筛选基因性状。这类筛选方法可以涉及如本文中所讨论的常规核酸扩增和/或杂交技术的应用。因此，另一方面涉及一种鉴定与对照植物相比具有缩短的到开花时间的突变型植物的方法，其包括：(a)提供来自待筛选的植物的样品；(b)确定所述样品是否包括本文所述的多核苷酸中的一种或多种中的一个或多个突变；和(c)测定所述植物的开花速度。

在另一方面，提供了一种制备与对照植物相比具有缩短的到开花时间的突变型植物的方法，其包括以下步骤：(a)提供来自第一植物的样品；(b)确定所述样品是否包括本文所述的多核苷酸中的一种或多种中的导致到开花时间缩短的一个或多个突变；和(c)将所述一个或多个突变转移到第二植物中。可以使用本领域已知的多种方法，如通过基因工程改造、基因操纵、基因渗入、植物育种、回交等等，将突变转移到第二植物内。在一个实施例中，第一植物是天然存在的植物。在一个实施例中，第二植物具有与第一植物不同的基因背景。

在另一方面，提供了一种制备与对照植物相比具有缩短的到开花时间的突变型植物的方法，其包括以下步骤：(a)提供来自第一植物的样品；(b)确定所述样品是否包括本文所述的多核苷酸中的一种或多种中的导致到开花时间缩短的一个或多个突变；和(c)将来自第一植物的所述一个或多个突变基因渗入到第二植物中。在一个实施例中，基因渗入步骤包括植物育种，任选地包含回交等等。在一个实施例中，第一植物是天然存在的植物。在一个实施例中，第二植物具有与第一植物不同的基因背景。在一个实施例中，第一植物不是栽培品种或优良栽培品种。在一个实施例中，第二植物是栽培品种或优良栽培品种。

另一方面涉及通过本文中所描述的方法获得或可获得的突变型植物(包含栽培品种或优良栽培品种突变型植物)。在某些实施例中，“突变型植物”可以具有仅定位于植物的特定区域，如在本文中所描述的一种或多种多核苷酸的序列内的一个或多个突变。根据这一实施例，突变型植物的剩余基因组序列将与诱变前的植物相同或基本上相同。

在某些实施例中，突变型植物可以具有定位于植物的超过一个区域，如在本文所述的多核苷酸中的一种或多种的序列内以及基因组的一个或多个其它区域中的一个或多个突变。根据这一实施例，突变型植物的剩余基因组序列将与诱变前的植物不同或基本上不同。在某些实施例中，突变型植物可能不具有本文所述的多核苷酸的一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、或者五个或更多个外显子中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、或者五个或更多个内含子中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的启动子中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的3'非翻译区中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的5'非翻译区中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的编码区中的一个或多个突变；或可能不具有本文所述的多核苷酸的非编码区中的一个或多个突变；或其部分中的其两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个；或者六个或更多个的任何组合。

在另一方面，提供了鉴定在基因中包括突变的植物、植物细胞或植物材料的方法，所述基因编码本文所述的多核苷酸，所述方法包括：(a)对植物、植物细胞或植物材料实施诱变；(b)由所述植物、植物细胞或植物材料或其后代获得核酸样品；和(c)测定编码本文所述的多核苷酸的基因或其变体或片段的核酸序列，其中所述序列中的差异指示其中的一个或多个突变。

锌指蛋白也可以用于调节本文所述的多核苷酸中的一种或多种的表达或活性。在多个实施例中，通过锌指核酸酶介导的诱变修饰包括多核苷酸编码序列的一部分或全部的基因组DNA序列。在基因组DNA序列中搜索锌指蛋白结合的独特位点。或者，在基因组DNA序列中搜索锌指蛋白结合的两个独特位点，其中两个位点在相反链上且紧靠在一起，例如相隔1、2、3、4、5、6个或更多个碱基对。相应地，提供了与多核苷酸结合的锌指蛋白。

锌指蛋白可以进行工程改造，以识别基因中的所选靶位点。通过截短或扩增或与选择方法偶联的定点诱变过程(所述选择方法如但不限于噬菌体展示选择、细菌双杂交选择或细菌单杂交选择)，锌指蛋白可以包括源自天然锌指DNA结合结构域和非天然锌指DNA结合结构域的任何基序组合。术语“非天然锌指DNA结合结构域”指锌指DNA结合结构域，其结合靶核酸内的三碱基对序列，并且在包括待修饰的核酸的细胞或生物中不存在。用于设计结合特异性核苷酸序列的锌指蛋白的方法是本领域已知的，所述特异性核苷酸序列对于靶基因是独特的。

可以通过制备编码结合多核苷酸的锌指蛋白的第一多核苷酸以及编码非特异性核酸内切酶的第二多核苷酸(如但不限于IIS型核酸内切酶的那些)的融合物来构建锌指核酸酶。在锌指蛋白和核酸酶之间的融合蛋白可以包括由两个碱基对组成的间隔物，或者，间隔物可以由三个、四个、五个、六个、七个或更多个碱基对组成。在多个实施例中，锌指核酸酶在多核苷酸的基因组DNA序列的调节区、编码区或非编码区中引入双链断裂，且导致多核苷酸的表达水平降低，或由其编码的蛋白质活性降低。通过锌指核酸酶的切割通常导致在通过非同源末端连接的DNA修复后在切割位点处的DNA缺失。

在其它实施例中，可以选择锌指蛋白以结合于多核苷酸的调节序列。更具体来说，调节序列可以包括转录起始位点、起始密码子、外显子区、外显子-内含子边界、终止子或终止密码子。相应地，本公开提供了在本文所述的一种或多种多核苷酸附近或其内通过锌指核酸酶介导的诱变产生的突变型、非天然存在的或转基因植物或植物细胞，以及通过锌指核酸酶介导的诱变用于制备这类植物或植物细胞的方法。用于将锌指蛋白和锌指核酸酶递送至植物的方法类似于下文对于大范围核酸酶递送描述的那些。

在另一方面，描述了使用大范围核酸酶如I-CreI，用于产生突变型、非天然存在的或转基因或以其它方式遗传修饰的植物的方法。天然存在的大范围核酸酶以及重组大范围核酸酶可以用于特异性引起在植物基因组DNA的单个位点或相对少数位点处的双链断裂，以允许破坏本文所述的一种或多种多核苷酸。大范围核酸酶可以是具有改变的DNA识别特性的经工程改造的大范围核酸酶。大范围核酸酶蛋白质可以通过本领域已知的多种不同机制递送到植物细胞内。

本公开还涵盖使用大范围核酸酶使植物细胞或植物中的本文所述的多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)失活。具体来说，本公开提供了一种使用大范围核酸酶使植物中的多核苷酸失活的方法，其包括：a)提供包括如本文所述的多核苷酸的植物细胞；(b)将大范围核酸酶或编码大范围核酸酶的构建体引入所述植物细胞内；和(c)允许大范围核酸酶使多核苷酸基本上失活

大范围核酸酶可以用于切割在多核苷酸的编码区内的大范围核酸酶识别位点。这类切割通常导致在通过非同源末端连接的诱变DNA修复后，在大范围核酸酶识别位点处的DNA缺失。基因编码序列中的这类突变通常足以使基因失活。这种修饰植物细胞的方法首先涉及使用合适的转化方法将大范围核酸酶表达盒递送至植物细胞。为了最高效率，期望将大范围核酸酶表达盒连接至可选标记，且在选择剂的存在下选择成功转化的细胞。这种方法使得大范围核酸酶表达盒整合到基因组内，然而，如果植物可能需要监管机构批准，那么这可能是不理想的。在这类情况下，使用常规育种技术，大范围核酸酶表达盒(和连接的可选标记基因)可以在后续植物世代中分离开。或者，植物细胞可以最初用缺乏可选标记的大范围核酸酶表达盒进行转化，并且可以在缺乏选择剂的培养基上生长。在这类条件下，经处理的细胞的一部分获得大范围核酸酶表达盒，并且瞬时表达经工程改造的大范围核酸酶，而不将大范围核酸酶表达盒整合到基因组内。因为它不负责转化效率，所以后面这种转化程序需要筛选更多数目的经处理的细胞，以获得所需基因组修饰。当利用锌指蛋白或锌指核酸酶时，上述方法还可以应用于修饰植物细胞。

在大范围核酸酶表达盒递送后，植物细胞最初在对于使用的具体转化程序典型的条件下生长。这可能意味着在低于26℃的温度下，通常在黑暗中，使经转化的细胞在培养基上生长。这类标准条件可以使用一段时间，优选1-4天，以允许植物细胞从转化过程恢复。在此最初恢复期后的任何点，生长温度可以上升，以刺激经工程改造的大范围核酸酶的活性，从而切割且突变大范围核酸酶识别位点。

对于某些应用，可能期望精确地从植物的基因组中去除多核苷酸。这类应用可能使用一对经工程改造的大范围核酸酶，所述一对大范围核酸酶各自切割在预期缺失的任一侧上的大范围核酸酶识别位点。还可以使用TAL效应物核酸酶(TALEN)，其能够识别且结合基因，并且将双链断裂引入基因组内。因此，在另一方面，涵盖了使用TAL效应物核酸酶，用于生产如本文所述的突变型、非天然存在的或转基因或以其它方式遗传修饰的植物的方法。

适用于本公开的植物包含但不限于单子叶和双子叶植物和植物细胞系统，包含来自以下各科之一的物种：爵床科(Acanthaceae)、葱科(Alliaceae)、六出花科(Alstroemeriaceae)、石蒜科(Amaryllidaceae)、夹竹桃科(Apocynaceae)、棕榈科(Arecaceae)、菊科(Asteraceae)、小檗科(Berberidaceae)、红木科(Bixaceae)、十字花科(Brassicaceae)、凤梨科(Bromeliaceae)、大麻科(Cannabaceae)、石竹科(Caryophyllaceae)、三尖杉科(Cephalotaxaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、秋水仙科(Colchicaceae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、薯蓣科(Dioscoreaceae)、麻黄科(Ephedraceae)、古柯科(Erythroxylaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、唇形科(Lamiaceae)、亚麻科(Linaceae)、石松科(Lycopodiaceae)、锦葵科(Malvaceae)、黑药花科(Melanthiaceae)、芭蕉科(Musaceae)、桃金娘科(Myrtaceae)、蓝果树科(Nyssaceae)、罂粟科(Papaveraceae)、松科(Pinaceae)、车前草科(Plantaginaceae)、禾本科(Poaceae)、蔷薇科(Rosaceae)、茜草科(Rubiaceae)、杨柳科(Salicaceae)、无患子科(Sapindaceae)、茄科(Solanaceae)、红豆杉科(Taxaceae)、山茶科(Theaceae)或葡萄科(Vitaceae)。

合适物种可以包含以下各属的成员：黄葵属(Abelmoschus)、冷杉属(Abies)、槭属(Acer)、剪股颖属(Agrostis)、葱属(Allium)、六出花属(Alstroemeria)、凤梨属(Ananas)、穿心莲属(Andrographis)、须芒草属(Andropogon)、蒿属(Artemisia)、芦竹属(Arundo)、颠茄属(Atropa)、小檗属(Berberis)、甜菜属(Beta)、红木属(Bixa)、芸苔属(Brassica)、金盏菊属(Calendula)、山茶属(Camellia)、喜树属(Camptotheca)、大麻属(Cannabis)、辣椒属(Capsicum)、红花属(Carthamus)、长春花属(Catharanthus)、三尖杉属(Cephalotaxus)、菊属(Chrysanthemum)、金鸡纳属(Cinchona)、西瓜属(Citrullus)、咖啡属(Coffea)、秋水仙属(Colchicum)、鞘蕊花属(Coleus)、甜瓜属(Cucumis)、南瓜属(Cucurbita)、狗牙根属(Cynodon)、曼陀罗属(Datura)、石竹属(Dianthus)、洋地黄属(Digitalis)、薯蓣属(Dioscorea)、油棕属(Elaeis)、麻黄属(Ephedra)、蔗茅属(Erianthus)、古柯属(Erythroxylum)、桉树属(Eucalyptus)、羊茅属(Festuca)、草莓属(Fragaria)、雪花莲属(Galanthus)、大豆属(Glycine)、棉属(Gossypium)、向日葵属(Helianthus)、橡胶树属(Hevea)、大麦属(Hordeum)、天仙子属(Hyoscyamus)、麻风树属(Jatropha)、莴苣属(Lactuca)、亚麻属(Linum)、黑麦草属(Lolium)、羽扇豆属(Lupinus)、番茄属(Lycopersicon)、石松属(Lycopodium)、木薯属(Manihot)、苜蓿属(Medicago)、薄荷属(Mentha)、芒属(Miscanthus)、芭蕉属(Musa)、烟草属、稻属(Oryza)、黍属(Panicum)、罂粟属(Papaver)、银胶菊属(Parthenium)、狼尾草属(Pennisetum)、矮牵牛属(Petunia)、虉草属(Phalaris)、梯牧草属(Phleum)、松属(Pinus)、早熟禾属(Poa)、一品红属(Poinsettia)、杨属(Populus)、萝芙木属(Rauwolfia)、蓖麻属(Ricinus)、蔷薇属(Rosa)、甘蔗属(Saccharum)、柳属(Salix)、血根草属(Sanguinaria)、赛莨菪属(Scopolia)、黑麦属(Secale)、茄属(Solanum)、高粱属(Sorghum)、米草属(Spartina)、菠菜属(Spinacea)、菊蒿属(Tanacetum)、红豆杉属(Taxus)、可可属(Theobroma)、小黑麦属(Triticosecale)、小麦属(Triticum)、北美穗草属(Uniola)、藜芦属(Veratrum)、长春花属(Vinca)、葡萄属(Vitis)和玉蜀黍属(Zea)。

合适物种可以包含黍属物种(Panicum spp.)、高粱属物种(Sorghum spp.)、芒属物种(Miscanthus spp.)、甘蔗属物种(Saccharum spp.)、蔗茅属物种(Erianthus spp.)、杨属物种(Populus spp.)、大须芒草(Andropogon gerardii)(大蓝秆草)、象草(Pennisetum purpureum)(象草)、虉草(Phalaris arundinacea)(草芦)、狗牙根(Cynodondactylon)(狗牙根)、高羊茅(Festuca arundinacea)(高羊茅)、互花米草(Spartinapectinata)(草原索草)、苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、芦竹(Arundo donax)(芦竹)、黑麦(Secale cereale)(黑麦)、柳属物种(Salix spp.)(柳树)、桉树属物种(Eucalyptusspp.)(桉树)、小黑麦(Triticosecale)(小麦杂交黑麦)、竹、向日葵(Helianthus annuus)(向日葵)、红花(Carthamus tinctorius)(红花)、桐油树(Jatropha curcas)(麻风树)、蓖麻(Ricinus communis)(蓖麻)、油棕(Elaeis guineensis)(棕榈)、亚麻(Linumusitatissimum)(亚麻)、芥菜(Brassica juncea)、甜菜(Beta vulgaris)(甜菜)、木薯(Manihot esculenta)(木薯)、番茄(Lycopersicon esculentum)(番茄)、莴苣(Lactucasativa)(生菜)、香蕉(Musyclise alca)(香蕉)、马铃薯(Solanum tuberosum)(土豆)、甘蓝(Brassica oleracea)(绿花椰菜、花椰菜、抱子甘蓝(Brussels sprouts))、山茶(Camelliasinensis)(茶)、草莓(Fragaria ananassa)(草莓)、可可(Theobroma cacao)(可可)、咖啡(Coffeycliseca)(咖啡)、葡萄(Vitis vinifera)(葡萄)、菠萝(Ananas comosus)(菠萝)、辣椒(Capsicum annum)(辣椒和甜椒)、洋葱(Allium cepa)(洋葱)、甜瓜(Cucumis melo)(甜瓜)、黄瓜(Cucumis sativus)(黄瓜)、笋瓜(Cucurbita maxima)(南瓜)、南瓜(Cucurbita moschata)(南瓜)、菠菜(Spinacea oleracea)(菠菜)、西瓜(Citrulluslanatus)(西瓜)、秋葵(Abelmoschus esculentus)(秋葵)、茄子(Solanum melongena)(茄子)、蔷薇属物种(Rosa spp.)(玫瑰)、香石竹(Dianthus caryophyllus)(康乃馨)、矮牵牛属物种(Petunia spp.)(矮牵牛)、一品红(Poinsettia pulcherrima)(一品红)、白羽扇豆(Lupinus albus)(羽扇豆)、燕麦(Uniola paniculata)(燕麦)、翦股颖(翦股颖属物种(Agrostis spp.))、美洲山杨(Populus tremuloides)(白杨)、松属(Pinus spp.)(松树)、冷杉属物种(Abies spp.)(冷杉)、槭属物种(Acer spp.)(枫木)、大麦(Hordeum vulgare)(大麦)、草地早熟禾(Poa pratensis)(早熟禾)、黑麦草属物种(Lolium spp.)(黑麦草)和猫尾草(Phleum pratense)(梯牧草)、柳枝稷(Panicum virgatum)(柳枝稷)、高粱(Sorghu52yclise52)或(高粱、苏丹草)、芒草(Miscanthus giganteus)(芒草)、甘蔗属物种(Saccharum sp.)(能源蔗)、香脂杨(Populus balsamifera)(白杨)、玉蜀黍(Zea mays)(玉米)、大豆(Glycine max)(黄豆)、油菜(Brassica napus)(芸苔)、小麦(Triticumaestivum)(小麦)、陆地棉(Gossypium hirsutum)(棉花)、水稻(Oryza sativa)(稻)、向日葵(Helianthus annuus)(向日葵)、苜蓿(Medicago sativa)(苜蓿)、甜菜(Beta vulgaris)(甜菜)或珍珠粟(Pennisetum glaucum)(珍珠粟)。

多个实施例涉及突变型、非天然存在的或转基因植物或植物细胞，其经修饰以调节基因表达水平，由此产生与对照相比较，其中多肽的表达水平在目的组织中经调节的植物或植物细胞(如烟草植物或烟草植物细胞)。所公开的组合物和方法可以应用于烟草属的任何物种，包含黄花烟草(N.rustica)和普通烟草(例如LA B21、LN KY171、TI 1406、Basma、Galpao、Perique、Beinhart 1000-1和Petico)。其它物种包含无茎烟草(N.acaulis)、尖叶烟草(N.acuminata)、非洲烟草(N.africana)、花叶烟草(N.alata)、阿米基诺氏烟草(N.ameghinoi)、抱茎烟草(N.amplexicaulis)、阿伦兹氏烟草(N.arentsii)、渐狭叶烟草(N.attenuata)、阿姆布吉烟草(N.azambujae)、贝纳莫特氏烟草(N.benavidesii)、本赛姆氏烟草(N.benthamiana)、印度烟草(N.bigelovii)、博内里烟草(N.bonariensis)、洞生烟草(N.cavicola)、克利夫兰氏烟草(N.clevelandii)、心叶烟草(N.cordifolia)、伞床烟草(N.corymbosa)、迪伯纳氏烟草(N.debneyi)、木丝烟草(N.excelsior)、福尔吉特氏烟草(N.forgetiana)、香烟草(N.fragrans)、粉蓝烟草(N.glauca)、粘烟草(N.glutinosa)、古特斯比氏烟草(N.goodspeedii)、哥西氏烟草(N.gossei)、杂交烟草(N.hybrid)、因古儿巴烟草(N.ingulba)、卡瓦卡米氏烟草(N.kawakamii)、奈特氏烟草(N.knightiana)、郎氏烟草(N.langsdorffii)、渐尖叶烟草(N.linearis)、长花烟草(N.longiflora)、海滨烟草(N.maritima)、特大管烟草(N.megalosiphon)、摩西氏烟草(N.miersii)、夜花烟草(N.noctiflora)、裸茎烟草(N.nudicaulis)、欧布斯特烟草(N.obtusifolia)、西方烟草(N.occidentalis)、西方亚种香芥烟草(N.occidentalis subsp.hesperis)、耳状烟草(N.otophora)、圆锥烟草(N.paniculata)、少花烟草(N.pauciflora)、矮牵牛状烟草(N.petunioides)、蓝茉莉叶烟草(N.plumbaginifolia)、夸德瑞伍氏烟草(N.quadrivalvis)、雷蒙德氏烟草(N.raimondii)、波缘烟草(N.repanda)、莲座烟草(N.rosulata)、莲座亚种因古儿巴烟草(N.rosulata subsp.ingulba)、圆叶烟草(N.rotundifolia)、赛特氏烟草(N.setchellii)、拟似烟草(N.simulans)、茄叶烟草(N.solanifolia)、斯佩格茨氏烟草(N.spegazzinii)、斯托可通氏烟草(N.stocktonii)、香甜烟草(N.suaveolens)、美花烟草(N.sylvestris)、拟穗状烟草(N.thyrsiflora)、绒毛烟草(N.tomentosa)、绒毛状烟草(N.tomentosiformis)、三角叶烟草(N.trigonophylla)、荫生烟草(N.umbratica)、波叶烟草(N.undulata)、颤毛烟草(N.velutina)、序叶烟草(N.wigandioides)和花烟草(N.xsanderae)。

本文还涵盖使用烟草栽培品种和优良烟草栽培品种。因此，转基因、非天然存在的或突变型植物可以是烟草品种或优良烟草栽培品种，其包括一种或多种转基因、或者一个或多个基因突变或其组合。基因突变(例如，一种或多种多态性)可以是非天然存在于个别烟草品种或烟草栽培品种(例如，优良烟草栽培品种)中的突变，或可以是的确天然存在的基因突变，条件是所述突变并非天然存在于个别烟草品种或烟草栽培品种(例如，优良烟草栽培品种)中。

特别有用的烟草品种包含白肋型、深型、烟道烘烤型和东方型烟草。品种或栽培品种的非限制性实例是：BD 64、CC 101、CC 200、CC 27、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC700、CC 800、CC 900、Coker 176、Coker 319、Coker 371Gold、Coker 48、CD 263、DF911、DT538LC Galpao烟草、GL 26H、GL 350、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、HB 04P、HB 04P LC、HB3307PLC、杂交403LC、杂交404LC、杂交501LC、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K730、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY10、KY14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KY14xL8LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、窄叶Madole、窄叶Madole LC、NBH 98、N-126、N-777LC、N-7371LC、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal Smith Madole、OXFORD 207、PD 7302LC、PD 7309LC、PD 7312LC、'Periqe'烟草、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN 97、TN97LC、TND94、TN D950、TR(Tom Rosson)Madole、VA 309、VA359、AA 37-1、B13P、Xanthi(Mitchell-Mor)、Bel-W3、79-615、Samsun Holmes NN、KTRDC2号杂交49、白肋21、KY8959、KY9、MD 609、PG01、PG04、PO1、PO2、PO3、RG11、RG 8、VA509、AS44、Banket A1、Basma Drama B84/31、BasmaI Zichna ZP4/B、Basma Xanthi BX 2A、Batek、Besuki Jember、C104、Coker 347、CriolloMisionero、Delcrest、Djebel 81、DVH 405、Comum、HB04P、希克斯阔叶、KabakulakElassona、Kutsage E1、LA BU 21、NC 2326、NC 297、PVH 2110、Red Russian、Samsun、Saplak、Simmaba、Talgar 28、Wislica、Yayaldag、Prilep HC-72、Prilep P23、Prilep PB156/1、Prilep P12-2/1、Yaka JK-48、Yaka JB 125/3、TI-1068、KDH-960、TI-1070、TW136、Basma、TKF 4028、L8、TKF 2002、GR141、Basma xanthi、GR149、GR153、Petit Havana。即使本文未特别指明，也设想上述的低转化亚变种。

实施例还涉及用于产生突变型植物、非天然存在的植物、杂交植物或转基因植物的组合物和方法，所述植物已进行修饰，以调节本文所述的多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)的表达或活性。多种表型特征，如成熟程度、每一植物叶数、秆高、叶插入角度、叶大小(宽度和长度)、节间距离以及叶片-中脉比可以通过田地观测进行评价。

一个方面涉及本文所述的突变型植物、非天然存在的植物、杂交植物或转基因植物的种子。优选地，所述种子是烟草种子。另一方面涉及本文所述的突变型植物、非天然存在的植物、杂交植物或转基因植物的花粉或胚珠。另外，提供了如本文所述的突变型植物、非天然存在的植物、杂交植物或转基因植物，其还含有赋予雄性不育的核酸。

还提供了如本文所述的突变型植物、非天然存在的植物、杂交植物或转基因植物或其一部分的可再生细胞的组织培养物，其中培养物再生能够表达亲本的所有形态和生理特征的植物。可再生细胞包含但不限于来自以下的细胞：叶子、花粉、胚、子叶、下胚轴、根、根尖、花药、花和其一部分、胚珠、枝条、茎、秆、髓和荚膜或源自其的愈伤组织或原生质体。

又另一方面涉及一种源自或可源自突变型、非天然存在的或转基因植物或细胞的烘烤的植物材料，如烘烤的叶或烘烤的烟草。

实施例还涉及用于产生突变型、非天然存在的或转基因植物或植物细胞的组合物和方法，所述植物或植物细胞已进行修饰，以调节本文所述多核苷酸或多肽中的一种或多种的表达或活性，所述修饰可以产生到开花时间缩短的植物。

在另一方面，提供一种缩短植物的到开花时间的方法，其包括：(i)调节(例如降低)本文所述的多肽或多核苷酸中的一种或多种的表达或活性；(ii)测量在步骤(i)中获得的突变型、非天然存在的或转基因植物的开花速度；和(iii)鉴定与对照植物相比具有缩短的到开花时间的突变型、非天然存在的或转基因植物。合适地，所述植物是烟草植物。

与对照相比，表达的降低可以是约5％至约100％，或者至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的降低，这包含转录活性或多核苷酸表达或多肽表达或其组合的降低。

与对照相比，活性的降低可以是约5％至约100％，或者至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的降低。

本文所述的多核苷酸和重组构建体可以用于调节目的植物物种(合适地，烟草)中的表达。

许多基于多核苷酸的方法可以用于增加例如在植物和植物细胞中的基因表达。作为实例，可以制备与待转化的植物相容的构建体、载体或表达载体，其包括目的基因连同能够在植物或植物细胞中过表达所述基因的上游启动子。示例性启动子在本文中描述。在转化之后并且当在合适的条件下生长时，启动子可以驱动表达。在一个示例性实施例中，生成携带本文所述的一种或多种多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)的载体，以在植物或植物细胞中过表达所述基因。所述载体携带位于转基因上游的合适启动子(如花椰菜花叶病毒CaMV 35S启动子)，从而驱动所述转基因在植物的所有组织中的组成型表达。所述载体还携带抗生素抗性基因，以便对经转化的愈伤组织和细胞系赋予选择。

各种实施例涉及通过将多核苷酸的多个拷贝整合到植物基因组内来降低本文中所描述的一种或多种多核苷酸的表达水平的方法，其包括：用包括可操作地连接于本文中所描述的一种或多种多核苷酸的启动子的表达载体转化植物细胞宿主。由重组多核苷酸编码的多肽可以是天然多肽，或对于细胞可以是异源的。

携带本文中所描述的一种或多种多核苷酸(或如本文中所描述的其任何组合)的突变体等位基因的植物可以用于植物育种计划，以产生有用的品系、品种和杂种。特别地，可以使所述突变体等位基因基因渗入上述商业上重要的品种内。因此，提供了用于植物育种的方法，其包括将如本文所述的突变型植物、非天然存在的植物或转基因植物与含有不同遗传一致性的植物进行杂交。所述方法可以进一步包括将后代植物与另一植物杂交，且任选地重复杂交直到获得具有期望的基因性状或基因背景的后代。这类育种方法发挥的一个目的是将期望的基因性状引入其它品种、育种品系、杂种或栽培品种，尤其是具有商业利益的那些。另一个目的是便于在单个植物品种、品系、杂种或栽培品种中叠加不同基因的基因修饰。考虑种内以及种间交配。源自这类杂交的后代植物，也称为育种品系，是本公开的非天然存在的植物的实例。

在一个实施例中，提供了用于产生非天然存在的植物的方法，其包括：(a)将突变型或转基因植物与第二植物杂交，以获得后代烟草种子；(b)在植物生长条件下，使后代种子生长，以获得非天然存在的植物。所述方法可进一步包括：(c)将非天然存在的植物的上一代与自身或另一植物杂交，以获得后代种子；(d)在植物生长条件下，使步骤(c)的后代种子生长，以获得另外的非天然存在的植物；和(e)将(c)和(d)的杂交和生长步骤重复多次，以产生非天然存在的植物的更多世代。所述方法可以任选包括在步骤(a)之前提供亲本植物的步骤，所述亲本植物包括得到表征且不同于突变型或转基因植物的遗传一致性。在一些实施例中，取决于育种计划，将杂交和生长步骤重复0至2次、0至3次、0至4次、0至5次、0至6次、0至7次、0至8次，0至9次或0至10次，以便产生非天然存在的植物的世代。回交是这类方法的实例，其中后代与其亲本之一或与其亲本基因相似的另一植物进行杂交，以便获得在下一代中具有更接近于亲本之一的基因一致性的后代植物。用于植物育种，特别是植物育种的技术是众所周知的，并且可用于本公开的方法中。本公开还提供了通过这些方法产生的非天然存在的植物。某些实施例不包含选择植物的步骤。

在本文中所描述方法的一些实施例中，使用标准田地程序在田地评估源自育种和筛选变体基因的品系。包含原始未诱变亲本的对照基因型包含在内，并且按随机化完全区组设计或其它适当的田地设计，将入选者(entry)排列于田地。对于烟草，使用标准的农学实践，例如将烟草收获、称量且取样，以用于在烘烤或干燥之前和期间的化学及其它常见测试。执行数据的统计分析，以确认所选择品系与亲本品系之间的相似性。任选地执行所选植物的细胞基因学分析，以确认染色体组和染色体配对关系。

DNA指纹鉴定、单核苷酸多态性、微卫星标记或类似技术可用在标记辅助选择(MAS)的育种计划中，以将基因的突变体等位基因转移或培育到其它植物内，如本文中所描述。举例来说，育种者可通过含有突变体等位基因的基因型与农学期望的基因型的杂交来产生分离的群体。可使用本文中所列出的技术之一，使用从基因组序列或其片段所开发的标记来筛选F2中的植物或回交世代。鉴定为具有突变体等位基因的植物可以回交或自花授粉，以产生待筛选的第二群体。取决于预期遗传模式或所用MAS技术，有必要在每轮回交之前对所选择的植物进行自花授粉，以帮助鉴定所需个体植物。可重复进行回交或其它育种操作，直到恢复轮回亲本的所需表型。

在育种计划中，成功的杂交产生可育的F1植物。所选择的F1植物可与亲本之一杂交，并且第一回交世代植物进行自花授粉，以产生再次筛选变体基因表达(例如，基因的无效版本)的群体。将回交、自花授粉和筛选的过程重复例如至少4次，直到最终筛选产生可育且与轮回亲本相当相似的植物。如果需要的话，这种植物进行自花授粉，并且随后再次筛选后代，以确认植物展现变体基因表达。在一些实施例中，F2代中的植物群体针对变体基因表达进行筛选，例如，根据标准方法，例如通过使用利用引物的PCR方法，鉴定由于基因缺失而未能表达多肽的植物，所述引物基于本文中所描述的多核苷酸(或如本文中所描述的其任何组合)的核苷酸序列信息。

杂交品种可通过以下方式产生：阻止第一品种的雌性亲本植物(即，种子亲本)自花授粉，允许来自第二品种的雄性亲本植物的花粉使雌性亲本植物受精，且允许F1杂种种子在雌性植物上形成。可通过在花发育早期阶段将花朵去雄来阻止雌性植物的自花授粉。或者，可使用雄性不育的形式阻止在雌性亲本植物上形成花粉。举例来说，可通过细胞质雄性不育(CMS)或转基因雄性不育来产生雄性不育，其中转基因抑制小孢子和/或花粉形成、或自交不相容。含有CMS的雌性亲本植物是特别有用的。在雌性亲本植物是CMS的实施例中，从雄性可育植物收获花粉并人工施用于CMS雌性亲本植物的柱头，并且收获所得到的F1种子。

本文中所描述的品种和品系可用于形成单杂交F1杂种。在这类实施例中，亲本品种的植物可生长为基本上同质的相邻群体，以便于雄性亲本植物与雌性亲本植物的天然异花授粉。通过常规方式选择性地收获在雌性亲本植物上形成的F1种子。还可大批种植两个亲本植物品种，并收获由于自花授粉而在雌性亲本上形成的F1杂种种子和在雄性亲本上形成的种子的掺合物。或者，可进行三系杂交，其中单杂交F1杂种用作雌性亲本，并且与不同的雄性亲本杂交。作为另一替代方案，可产生双杂交杂种，其中两个不同单杂交的F1后代进行自身杂交。

可在突变型、非天然存在的或转基因植物群体中，筛选或选择具有所需性状或表型的那些群体成员。所需性状或表型可以是与野生型植物相比缩短的到开花时间(例如，与野生型植物相比，至少30％缩短的到开花时间)和任选地更少叶片，以及任选地与野生型植物相同的高度。

举例来说，可以在单一转化事件的后代群体中筛选具有由其编码的多肽的所需表达或活性水平的那些植物。可使用物理和生物化学方法来鉴定表达或活性水平。这些方法包含用于检测多核苷酸的DNA分析或PCR扩增；用于检测RNA转录物的RNA印迹法、S1RNA酶保护、引物延伸或RT-PCR扩增；用于检测多肽和多核苷酸的酶或核酶活性的酶促分析；以及检测多肽的蛋白质凝胶电泳、蛋白质印迹法、免疫沉淀和酶联免疫分析。还可使用如原位杂交、酶染色和免疫染色以及酶分析等其它技术来检测多肽或多核苷酸的存在或表达或活性。

如本文所述的突变型、非天然存在的或转基因植物细胞和植物包括一种或多种重组多核苷酸、一种或多种多核苷酸构建体、一种或多种双链RNA、一种或多种结合物或者一种或多种载体/表达载体。

无限制地，在表达或活性已根据本公开进行调节之前或之后，本文所述的植物可出于其它目的进行修饰。下列遗传修饰中的一种或多种可存在于突变型、非天然存在的或转基因植物中。在一个实施例中，修饰涉及含氮代谢中间产物转化的一种或多种基因，使得植物(如叶子)相比于对照植物在烘烤时产生水平更低的至少一种烟草特异性亚硝胺。可进行修饰的基因的非限制性实例包含编码天冬酰胺合成酶的基因，如CYP82E4、CYP82E5和CYP82E10，其参与烟碱向降烟碱的转化，并且描述在WO2006091194、WO2008070274、WO2009064771和PCT/US2011/021088中且如本文中所描述。在另一实施例中，修饰涉及重金属摄取或重金属转运的一种或多种基因，使得植物或植物部分(如叶子)相比于无修饰的对照植物或其部分具有更低的重金属含量。非限制性实例包含多药抗性相关蛋白质家族、阳离子扩散协助蛋白(CDF)家族、Zrt-,Irt样蛋白(ZIP)家族、阳离子交换剂(CAX)家族、铜转运蛋白(COPT)家族、重金属P型ATP酶家族(例如HMA，如WO2009074325中所述)、天然抗性相关巨噬细胞蛋白(NRAMP)同系物家族、以及参与重金属如镉转运的ATP结合盒(ABC)转运蛋白家族(例如MRP，如WO2012/028309中所述)中的基因。如本文中所使用，术语重金属包含过渡金属。其它修饰的实例包含除草剂耐受性，例如，草甘膦是许多广谱除草剂的活性成分。通过转移aroA基因(来自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌(E.coli)的草甘膦EPSP合成酶)，已开发草甘膦抗性转基因植物。通过转化来自拟南芥属的突变体ALS(乙酰乳酸合成酶)基因，已产生磺脲抗性植物。来自突变绿穗苋(Amaranthushybridus)的光系统II的OB蛋白已转移到植物内，以产生莠去津抗性转基因植物；并且通过掺入来自细菌肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的bxn基因，已产生溴苯腈抗性转基因植物。另一示例性修饰导致对昆虫具有抗性的植物。苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)(Bt)毒素可提供延迟Bt抗性害虫出现的有效途径，如最近在绿花椰菜中所示，其中金字塔式的cry1Ac和cry1C Bt基因控制小菜蛾(diamondback moth)对任一单一蛋白质的抗性，且明显延迟抗性昆虫的进化。另一示例性修饰产生对由病原体(例如病毒、细菌、真菌)引起的疾病具有抗性的植物。已工程改造了表达Xa21基因(对白叶枯病的抗性)的植物，以及表达Bt融合基因和壳多糖酶基因(对三化螟的抗性和对鞘(sheath)的耐受性)两者的植物。另一示例性修饰产生改变的生殖能力，例如雄性不育。另一示例性修饰产生耐受非生物胁迫(例如，干旱、温度、盐度)的植物，并且通过转移来自拟南芥属的酰基甘油磷酸酶，已产生耐受的转基因植物；编码甘露醇脱氢酶和山梨糖醇脱氢酶的基因改善抗旱性，所述甘露醇脱氢酶和山梨糖醇脱氢酶涉及甘露醇和山梨糖醇合成。其它示例性修饰可产生具有改善的贮藏蛋白和油的植物、具有增强的光合效率的植物、具有延长的贮存期限的植物、具有增强的碳水化合物含量的植物，以及对真菌具有抗性的植物；编码涉及生物碱生物合成的酶的植物。也可设想S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)和/或胱硫醚γ-合酶(CGS)的表达已被调节的转基因植物。

一种或多种此类性状可基因渗入来自另一栽培品种的突变型、非天然存在的或转基因植物，或可直接转化到其内。性状基因渗入到突变型、非天然存在的或转基因植物中可通过本领域中已知的任何植物育种方法实现，例如谱系育种、回交、双单倍体育种等(参见Wernsman,E.A和Rufty,R.C.1987.第十七章。Tobacco.第669-698页于：CultivarDevelopment.Crop Species.W.H.Fehr(编),MacMillan Publishing Co,Inc.,New York,N.Y第761页)。上述基于分子生物学的技术，特别是RFLP和微卫星标记可用于这类回交中，以鉴定与轮回亲本具有最高基因一致性程度的后代。这允许加速生产与轮回亲本具有至少90％、优选至少95％、更优选至少99％遗传一致性、再更优选与轮回亲本遗传一致的品种，且还包括由供体亲本基因渗入的性状。这类基因一致性的确定可基于本领域已知的分子标记。

最后的回交世代可进行自交，以给出对于被转移的核酸纯的育种后代。除转移的性状(例如，一种或多种单基因性状)之外，所得到的植物一般具有突变型、非天然存在的或转基因烟草植物的基本上所有形态和生理特征。确切的回交方案将取决于被改变的性状，以确定合适的测试方案。虽然在被转移的性状是显性等位基因时，回交方法是简化的，但也可转移隐性等位基因。在这种情况下，可能有必要引入对后代的测试，以确定是否已成功转移所需性状。

多个实施例提供了突变型植物、非天然存在的植物或转基因植物以及生物质，其中多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)的表达水平被降低，以缩短到开花时间。

多个实施例提供了突变型植物、非天然存在的植物或转基因植物以及生物质，其中多肽(或如本文所述的其任何组合)的活性被降低，以缩短到开花时间。

这类植物，特别是烟草植物的部分，并且更特别是烟草植物的叶片和中脉可掺入或用于制造多种消费品，包含但不限于气溶胶形成材料、气溶胶形成装置、吸烟制品、可抽吸制品、无烟产品和烟草产品。气溶胶形成材料的实例包含但不限于烟草组合物、烟草、烟草提取物、烟丝、切丝填料、经烘烤或干燥的烟草、膨胀烟草、均质烟草、再造烟草和烟斗烟草。吸烟制品和可抽吸制品是气溶胶形成装置的类型。吸烟制品或可抽吸制品的实例包含但不限于香烟、小雪茄和雪茄。无烟产品的实例包括嚼烟和鼻烟。在某些气溶胶形成装置而不是燃烧中，烟草组合物或另一气溶胶形成材料被例如一个或多个电加热元件或碳热源进行加热，以产生气溶胶。通常在这类加热式吸烟制品中，通过从热源到物理上分开的气溶胶形成基质或材料的热转移而生成气溶胶，所述气溶胶形成基质或材料可位于热源内、热源周围或热源下游。在吸烟期间，挥发性化合物通过来自热源的热传递而从气溶胶形成基质释放并且夹带在被抽吸通过吸烟制品的空气中。随着所释放的化合物冷却，所述化合物冷凝以形成由使用者吸入的气溶胶。此类装置包括例如电加热的气溶胶生成装置，其中通过从气溶胶生成装置到加热式吸烟制品的气溶胶形成基质的热转移而生成气溶胶。合适地，在气溶胶形成基质的加热期间，不发生烟草的燃烧。合适的气溶胶形成制品描述在WO2013/098405中并且包括气溶胶形成基质，用于在被气溶胶生成装置的内部加热元件加热时生成可吸入的气溶胶。它可以包括具有内部加热元件的电加热气溶胶生成装置。它还可以线性顺序排列包含气溶胶形成基质、位于气溶胶形成基质紧下游的支撑元件、位于支撑元件下游的气溶胶冷却元件以及围绕气溶胶形成基质、支撑元件和气溶胶冷却元件的外包装。支撑元件可以邻接气溶胶形成基质。气溶胶形成基质可被气溶胶生成装置的加热元件穿透。

如本文所用，术语“燃烧”是指氧化还原化学反应，其中反应物分子(即，燃料和氧化剂)混合并重新排列成同时释放热量的产物分子。燃烧可以通过在气态产物中存在相关量的氮氧化物而肯定地指示出来，氮氧化物不是由存在于原始反应物基质中的硝酸盐的分解所形成，并且明确证明同时发生总体放热过程。燃烧的气体产物中氮氧化物的相关量的演变可以通过比较在相关条件中(例如在空气中)形成的氮氧化物与在相同条件下但在没有的氧气(例如，在纯氮气或氦气气氛中)形成的氮氧化物的总量来确定。在另一类型的被加热的气溶胶形成装置中，通过将热量从可燃性燃料元件或热源转移到物理上分开的气溶胶形成材料来产生气溶胶，所述气溶胶形成材料可以位于热源内、热源周围或热源下游。无烟烟草产品和多种含烟草的气溶胶形成材料可含有任何形式的烟草，包含沉积在其它成分上、混合于其它成分中、由其它成分包围或以其它方式与其它成分组合的干燥颗粒、碎片、小颗粒、粉末或浆，所述其它成分采取任何形式，如薄片、膜、突片、泡沫或珠子。如本文所用，术语‘烟’用于描述一类气溶胶，其由吸烟制品如可燃香烟、或通过燃烧气溶胶形成材料而产生。

在某些实施例中，加热而不燃烧植物材料是优选的。

在一个实施例中，还提供了来自本文所述的突变型、转基因和非天然存在的烟草植物的经烘烤的植物材料。烘烤绿色烟叶的工艺是本领域普通技术人员已知的，并且包含但不限于晾制、明火烘烤、烟道烘烤和日光烘烤。烘烤绿色烟叶的工艺取决于收获的烟草类型。例如，白肋烟和某些深色品系通常是晾制的，而烟斗烟草、嚼烟和鼻烟通常是明火烘烤的。

在另一实施例中，还提供了来自本文所述的突变型、转基因和非天然存在的植物的经干燥的植物材料。干燥叶子的工艺是本领域普通技术人员已知的，并且包含但不限于风干和晒干。干燥叶子的确切工艺取决于收获的植物类型。合适地，植物材料在收获之后干燥。因此，本文设想使用干燥材料和收获后的干燥材料。

在另一实施例中，描述了包含含有烟草的气溶胶形成材料的烟草产品，所述气溶胶形成材料包括来自本文所述的突变型烟草植物、转基因烟草植物或非天然存在的烟草植物的植物材料，如叶，优选经烘烤或干燥的叶。本文中所描述的烟草产品可以是掺合的烟草产品，其还可包括未修饰的烟草。

本公开还提供了用于产生种子的方法，其包括培养本文所述的突变型植物、非天然存在的植物或转基因植物，并且从栽培的植物收集种子。来自本文所述植物的种子可通过本领域中已知的方式进行条件处理，且包装在包装材料中，以形成制造物品。如纸和布等包装材料是本领域众所周知的。种子的包装可带有描述其中种子的性质的标记，例如固定到包装材料的标签或标记、印刷在包装上的标记。

用于对植物基因分型以鉴定、选择或育种的组合物、方法和试剂盒可包括检测多核苷酸样品中的多核苷酸(或如本文中所描述的其任何组合)存在的方式。相应地，描述了组合物，其包括用于特异性扩增多核苷酸中的一种或多种的至少一部分的一个或多个引物，以及用于进行扩增或检测的任选地一个或多个探针和任选地一种或多种试剂。

相应地，公开了基因特异性的寡核苷酸引物或探针，其包含对应于本文所述的多核苷酸的约10个或更多个邻接多核苷酸。所述引物或探针可包括以下或由以下组成：约15、20、25、30、40、45或50个或更多个邻接多核苷酸，所述引物或探针与本文所述的多核苷酸杂交(例如，特异性杂交)。在一些实施例中，所述引物或探针可包括以下或由以下组成：约10至50个邻接核苷酸、约10至40个邻接核苷酸、约10至30个邻接核苷酸、或约15至30个邻接核苷酸，其可用于基因鉴定(例如，DNA杂交)、或分离(例如，细菌菌落或噬菌体噬菌斑的原位杂交)、或基因检测(例如，作为核酸扩增或检测中的一个或多个扩增引物)的序列依赖性方法。可设计一个或多个特异性引物或探针，且用于扩增或检测多核苷酸的部分或全部。作为具体实例，两个引物可用于聚合酶链反应方案中，以扩增编码核酸如DNA或RNA的核酸片段。还可使用源自核酸序列的一个引物和第二引物(其与核酸序列上游或下游的序列杂交，所述序列如启动子序列、mRNA前体的3'端或源自载体的序列)执行聚合酶链反应。可用于多核苷酸体外扩增的热和等温技术的实例是本领域众所周知的。样品可以是或可源自植物、植物细胞或植物材料，或者由如本文所述的植物、植物细胞或植物材料制备或衍生的烟草产品。

在另一方面，还提供了检测样品中本文所述的多核苷酸(或如本文所述的其任何组合)的方法，其包括以下步骤：(a)提供包括或疑似包括多核苷酸的样品；(b)使所述样品与多个引物之一或一个或多个探针接触，用于特异性检测多核苷酸的至少一部分；和(c)检测扩增产物的存在，其中扩增产物的存在指示样品中存在多核苷酸。在另一方面，还提供了一个或多个引物或探针用于特异性检测多核苷酸的至少一部分的用途。还提供了用于检测多核苷酸的至少一部分的试剂盒，其包括用于特异性检测多核苷酸的至少一部分的多个引物或探针之一。试剂盒可包含用于多核苷酸扩增(如PCR)的试剂，或用于探针杂交检测技术(如DNA印迹、RNA印迹、原位杂交或微阵列)的试剂。试剂盒可包括用于抗体结合检测技术(如蛋白质印迹、ELISA、SELDI质谱法或测试条)的试剂。试剂盒可包括用于DNA测序的试剂。

在一些实施例中，试剂盒可包括用于所述方法中的一种或多种的说明书。所述试剂盒可用于遗传一致性确定、系统发生研究、基因分型、单倍体分型、谱系分析或植物育种，特别是共显性评分。

本公开还提供了对包括如本文所述的多核苷酸的植物、植物细胞或植物材料进行基因分型的方法。基因分型提供了区分染色体对的同源物的手段，并且可用于区分植物群体中的分离体。分子标记方法可用于系统发生研究、表征作物品种之间的遗传关系、鉴定杂交或体细胞杂种、定位影响单基因性状的染色体区段、图位克隆和定量遗传研究。基因分型的具体方法可采用任意数目的分子标记分析技术，包含扩增片段长度多态性(AFLP)。AFLP是由核苷酸序列变异性引起的扩增片段之间的等位基因差异的产物。因此，本公开还提供了使用如AFLP分析这样的技术来跟踪一种或多种基因或核酸以及遗传连锁至这些基因或核酸的染色体序列的分离的手段。

在一个实施例中，还提供了来自本文所述的突变型、转基因和非天然存在的植物的经烘烤或干燥的植物材料。举例来说，烘烤或干燥烟叶的工艺是本领域技术人员已知的，并且包含但不限于晾制、明火烘烤、烟道烘烤和日光烘烤。烘烤绿色烟叶的工艺取决于如本文中所描述收获的烟草类型。

在另一实施例中，描述了烟草产品，其包含包括来自本文所述的突变型、转基因和非天然存在的植物的植物材料(如叶，经适当烘烤的植物材料，如经烘烤或干燥的叶)的烟草产品，或通过本文所述的方法生产的烟草产品。本文中所描述的烟草产品还可包括未修饰的烟草。

在另一实施例中，描述了烟草产品，其包括来自本文所述的突变型、转基因和非天然存在的植物的植物材料，优选叶，如经烘烤或干燥的叶。举例来说，所述植物材料可加入烟草产品内部或外部，并且因此在燃烧后释放期望的香气。根据此实施例的烟草产品甚至可以是未修饰的烟草或经修饰的烟草。根据此实施例的烟草产品甚至可源自突变型、转基因或非天然存在的植物，其在除了本文公开的基因之外的一种或多种基因中具有修饰。

在另一方面，提供了一种鉴定调节TFL1多核苷酸或TFL1多肽的活性或表达的分子的方法。本文描述了此类方法中可使用的示例性分子，包含反义、siRNA、核酶分子、脱氧核酶分子、TALENS、锌指核酸酶等等。还涵盖化学化合物的用途。

还描述了一种突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其具有调节(例如降低或增加)的编码顶生花1(TFL1)的基因的表达或调节(例如降低或增加)的由TFL1编码的蛋白质的活性，所述TFL1包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；其中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性与对照植物相比调节(例如降低或增加)，在所述对照植物中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性不调节(例如降低或增加)。

所述多核苷酸的调节表达或所述多肽的调节活性与所述对照植物相比调节到开花时间，合适地，其中，所述到开花时间时间被调节至少8％或至少20％。

所述多核苷酸的增加表达或所述多肽的增加活性与所述对照植物相比延长了到开花时间，合适地，其中，所述到开花时间延长至少8％或至少20％。

还公开了一种调节(例如增加或减少)植物的到开花时间的方法，其包括通过调节所述植物中的至少一种TFL1基因的表达或至少一种由其编码的蛋白质的活性来修饰所述植物；合适地，其中所述方法包括(a)提供植物或其部分，其包括：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ IDNO:21具有至少72％序列一致性的多肽；和(b)调节(例如增加或降低)所述植物中的所述TFL1基因的所述表达或所述TFL1蛋白的所述活性；和(c)获得与对照植物相比具有调节的到开花时间的植物，在所述对照植物中所述TFL1基因的表达或所述TFL1蛋白的活性不被调节。

合适地，TFL1的表达或TFL1的活性通过选自由以下组成的群组的方法来调节：a)突变所述植物中的所述TFL1基因；b)表达所述植物中的外源多核苷酸或多肽；和c)消除所述植物中的所述TFL1基因，或其一个或多个的组合。

还公开了一种增加植物的到开花时间的方法，其包括通过增加所述植物中的至少一种TFL1基因的表达或至少一种由其编码的蛋白质的活性来修饰所述植物；合适地，其中所述方法包括(a)提供植物或其部分，其包括：(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；和(b)增加所述植物中的所述TFL1基因的所述表达或所述TFL1蛋白的所述活性；和(c)获得与对照植物相比具有延长的到开花时间的植物，在所述对照植物中所述TFL1基因的表达或所述TFL1蛋白的活性不被调节。

合适地，TFL1的表达或TFL1的活性通过选自由以下组成的群组的方法来增加：a)突变所述植物中的所述TFL1基因；b)表达所述植物中的外源多核苷酸或多肽；和c)消除所述植物中的所述TFL1基因，或其一个或多个的组合。

还描述了一种产生与对照植物相比具有调节的到开花时间的植物材料的方法，所述方法包括：(a)提供本文所述的植物或植物材料；(b)从所述植物收获植物材料；(c)任选地烘烤或干燥所述植物材料一段时间；和(d)获得与所述对照植物相比具有调节的到开花时间的植物材料。

还描述了一种产生与对照植物相比具有延长的到开花时间的植物材料的方法，所述方法包括：(a)提供本文所述的植物或植物材料；(b)从所述植物收获植物材料；(c)任选地烘烤或干燥所述植物材料一段时间；和(d)获得与所述对照植物相比具有延长的到开花时间的植物材料。

还在以下实例中描述了本发明，提供所述实例以更详细地描述本发明。这些实例阐述目前设想用于进行本发明的优选模式，意图说明而不是限制本发明。

实例

实例1-烟草TFL1基因的鉴定

鉴定烟草中的TFL1基因家族并且测定7种烟草TFL1基因的一致性。其名称为：TFL1-1S、TFL1-1T、TFL1-2S、TFL1-2T、TFL1-3T、TFL1-4T和TFL1-3S。这些基因的序列在本文中描述。

实例2-TFL1表达水平的分析

为了鉴定营养叶和根组织中的TFL1的活性形式，使三种不同品种(Burley-TN90、Virginia-K326和Oriental-BX_Basma Xanthi)的普通烟草植物生长在细菌培养用琼脂-MSmagenta盒上，并且在分离RNA和对对应的cDNA文库测序之后计算表达数据(FPKM)(《自然通讯(Nat Commun)》.(2014)5:3833)。数据展示于表1中。TFL1主要在根组织中表达。在这些条件(营养态)下在根中表达的主要TFL1基因是TFL1-2S、TFL1-2T、TFL1-3T和TFL1-4T。可以看出，TFL1-4S转录物未在Virginia(K326)、Burley(TN90)或深色(Dark)烟草中鉴定出，而仅极少RNA拷贝可见于oriental Basma Xanthi(BX)的根中。在K326和TN90中未检测到转录物的原因不清楚，但可以由启动子破坏推导出，因为无法鉴定K326和TN90中的2kB启动子的5'端。

为了确定开花植物中的基因表达谱是否不同，使普通烟草(栽培品种TN90)生长于田地，并且紧接在初花开始之后分离未成熟的花、下秆叶、中秆叶、上秆叶、花瓣、根、萼片和茎中的RNA。结果展示于图1中。在这些植物中，TFL1-2T和TFL1-4T保持略微表达于根、茎和未成熟的花中(FPKM值不超过1.1)。

实例3-TFL1的遗传操纵：TFL1-RNAi烟草植物

四种特异性DNA片段被设计成沉默六个表达的TFL1拷贝(参见SEQ ID NO:24、27、30和33)，并且在强组成型MMV(紫茉莉花叶病毒)启动子与根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens的胭脂碱合成酶基因的3'nos终止序列之间克隆(植物分子生物学《(PlantMol Biol)》.(1999)40:771-82)：(1)C100S3-MMVp-GW-pDONR221-TFL1-1S/T；(2)C100S3-MMVp-GW-pDONR221-TFL1-2S/T；(3)C100S3-MMVp-GW-pDONR221-TFL1-3T；(4)C100S3-MMVp-GW-pDONR221-TFL1-4T。

使用标准农杆菌属介导的转化方案用四种构建体中的每一种转化深色烟草品种(《冷泉港定量生物学讨论会(Cold Spring Harb Symp Quant Biol)》.(1985)50:433-437)。从每种构建体选择20个独立T0植物于卡那霉素上，并且然后转移到土壤中，温室隔室设置为9小时亮(24℃+/-3℃)和15小时暗(18℃+/-3℃)，持续前三个月，随后是15小时亮和9小时暗。对照植物遵循相同体外程序(无转化步骤)并且也同时转移到温室。将小植株首先在托盘中培养并且在25天之后移植到5lt盆。每天用受精溶液(雅苒(Yara),荷兰(Netherlands))对植物浇水。表型分析来自四种构建体和其各自的对照的每个植物，并且数据记录为移植后花出现(DAT)、高度和叶片数(参见图2和表2)。来自TFL1-1S/T和TFL1-4TRNAi植物和其各自的对照的数据(图2A,B,C)必须与TFL1-2S/T和TFL1-3T组(图2D,E,F)单独地比较，因为第一组植物在第二组植物后3周移植和培养于温室中。所有植物都在类似温室条件下生长。数据显示，TFL1-2S/T RNAi转基因品系比对照植物显著更快开花，展示20％的开花时间减少。另外，TFL1-2S/T RNAi品系还展现显著高度和叶片数减少，这与缩短的到开花时间一致(图2A,B,C)。数据对于所有测量的参数都是统计上相关的(P<0.001)，并且表型在温室中明显可见(图3)。另外，另一TFL1基因产物，TFL1-4T，似乎在调节开花时间中起一定作用。实际上，观察到8％的开花时间减少，但与对照相比不显著，两个其它测量的参数是统计上相关的：高度(与对照相比，16％降低)和叶片数(与对照相比，13％减少)。

由RNAi植物收集的数据结合表达数据表明，TFL1-1S和TFL1-1T在调节开花时间和维持植物的营养态方面的贡献很微小。

总之，数据表明，用于维持烟草在所描述生长条件下的营养态的最有效TFL1基因是：TFL1-2S、TFL1-2T>TFL1-4T>TFL1-3T>TFL1-1S、TFL1-1T。因此，沉默或敲除TFL1-2S和/或TFL1-2T和/或TFL1-4-T有可能是缩短到开花时间的解决方案。

实例4–缩短到开花时间的TFL1突变

对于烟草育种，针对TFL1中的突变筛选烟草栽培品种的EMS群体。使用SIFT程序针对可能的对蛋白质功能的影响分析TFL1-2S、TFL1-2T和TFL-4T中鉴定的所有氨基酸取代(《核酸研究(Nucleic Acids Res)》.(2003)1；31(13):3812-4)。较低SIFT分数(<0.05)意指在功能性水平下不太可能耐受氨基酸残基。在TFL1-2S、TFL1-2T和TFL-4T中，鉴定SIFT分数比低于0.05的七个突变，如下文所示：

TFL1-2S_G129E 0.0002

TFL1-2S_G129R 0.0002

TFL1-2S_T143I 0.0011

TFL1-2T_R120C 0

TFL1-2T_P131S 0.0007

TFL1-2T_G129E 0.0002

TFL1-4T_P110L 0

SIFT分数用作工具以便于选择突变。在温室实验中，测试突变和突变组合并且测量开花速度。

在TFL1-2S、TFL1-2T和TFL1-4T中，His88基序分别在位置84、88和86处保守。这个氨基酸位置处的突变(例如错义突变)可以破坏转录因子的三维结构，从而影响启动子上的结合特性。合适地，突变可以是终止突变。

Asp144基序在TFL1-2S和TFL1-2T中分别在位置138和142处保守。其在TFL1-4T中在位置139处被谷氨酸酯置换。接近TFL1-2S(D138)、TFL1-2T(D142)的三个突变分别接近这个区域被鉴定，并且可以影响转录因子的三维结构并且从而改变启动子结合。

实例5-TFL1-2T-P131S突变

使含有TFL1-2T-P131S突变(如图4中所示)的烟草植物在温室条件下生长。相对于野生型植物监测突变型植物的开花时间、叶片数和高度。当TFL1-2T拷贝在纯合子和杂合子中都具有突变P131S时，含有这一突变的烟草植物30％更快开花并且具有更少叶片(6-7)。未见对植物高度的影响。突变型烟草植物与野生型植物相比具有缩短的到开花时间。

实例6-TFL1-4T-P110L突变使含有TFL1-4T-P110L突变(如图6中所示)的烟草植物在温室条件下生长。相对于野生型植物监测突变型植物的开花时间、叶片数和高度。对于这种突变体不可获得纯合植物，但如对于TFL1-2T-P131S所观察，当TFL1-4T具有杂合突变P110L时，烟草植物约30％更快(例如约28％更快)开花并且具有更少叶片(8-9)。未见对高度的影响。突变型烟草植物与野生型植物相比具有缩短的到开花时间。数据表明，对于两种突变TFL1-2T-P131S和TFL1-4T-P110L，仅一个等位基因足以驱动更快开花。

在本文中引用的或描述的任何出版物都提供了在本申请的提交日期之前公开的有关信息。本文中的陈述不应解释为承认发明人丧失先于这样的公开的资格。在上面的说明书中提及的所有出版物都通过引用并入本文。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明的各种修改和变化对于所属领域的技术人员来说将是显而易见的。尽管已经结合特定优选实施例来描述本发明，但应理解，如所要求的本发明不应不恰当地限于此类特定实施例。实际上，细胞生物学、分子生物学和植物生物学或有关领域的技术人员显而易见的用于实现本发明的所描述模式的不同改进意图在以下权利要求书的范围内。

表1

在细菌培养用琼脂-MS条件下生长的营养(非开花)植物中的TFL1表达数据(FPKM)。在TN90和K326中未检测到转录物(无)。

表2

使用Welch修正双样本t检验执行的图2中呈现的数据的统计分析(Biometrika(1947)34(1-2):28-35；生物医学中心医学研究方法(BioMed Central Medical ResearchMethodology)(2012)12:78)。

A

B

序列

SEQ ID NO:1

普通烟草TFL1-1S基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:2

普通烟草TFL1-1S基因的基因组序列

atggcaaggaatgtagagcctctagtagtagggagagtagtaggggatgttcttgattcatttagtcccacagttaaaatgacagtcacttacaacaataaacaagtttgcaatggccaagagctcttcccttctgcagtcactattagacctagggttgaagttcaaggtggtgatatgagaactttcttcacattggtaacttttctaattttccttcaggttattaacttttcattgctatatagacatctttcaaacctgtctagaagattcttttcttgagctgagggttcggagacagcctctctatcccacacaagataaggttaacgtctgcatataccttgccgtcccctgacaccacatatgggattatactgcgtatgttgttgttgttgtattgctatatagacatctttgataaatcactaatcatgcatgatattattcttcttattgtaggtcatcacagatcctgatgtacctggccctagtgatccgtatctgagagaacatgttcactggtatgtactacattcaagaaaatctatggaaaaaaaataactagaagagatgagtccaaaagaaaggagattaattattgtttgatttgtattttttatttgcattagattaagtcatgcaattacctagtaataaattcgttataaggacatacacaaaaggtatgctcaacataattaaagaaagaaaagcataagcattatattcttatatgcaagctcccaatctgattgtggcgaagctaagaatttcttcgggtgtttaaatttaaaagaagtgaaaaaaaatccgataaaaaatttatgtgttatatacctctaaaacttaatattgtacctatatacatattgtaatttttcgacgaatgaccactcttattgcccatgctgccaatgccaatatgtaaaatacttcgccaatagacaaatatgtatcacattaattagttacctaaataggtaattatccataataagtgggactcgtaacttgaaaaatatggttagtaatttgctacaacatgttaagatacagtgagaatgtaaatgtatatatgtcctttcacgccgtcgtaagtttatataagttaaatctggttaacaatgtaggtcatcataacactcacaattgggaataataactcttaatcatacttctttacattcatatttgcaggatagtgactgatattccaggaactacagatgccacctttggtaaattggctattttggtttcttttattaagctggtgtttgacatgctagaattaatgtactttaattttgagcaggaaaagagttggttagctatgagatcccaaggcctaatattggaatacataggtttgtgtttgttctctttaagcagaaatgcagacaatcagtcagcccacctacttcaagggatcatttcaacactcgcaactttgccaacgtaaatgaccttggtccgcctgtcgccgccgtcttcttcaatgcacaacgagagaccgccgccaggaggcgctaa

SEQ ID NO:3

源自以下的普通烟草TFL1-1S基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

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SEQ ID NO:4

普通烟草TFL1-1T基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:5

普通烟草TFL1-1T基因的基因组序列

atggcaaggaatgtagagcctctagttgtagggagagtagtaggggatgttcttgattcattcagtcccaaagttaaaatgacagtcacttacaacaataaacaagtttgcaatggccaagagctcttcccttctgcggtcaccattagacctagggttgaggttcaaggtggtgatatgagaactttcttcacattggtaacttttctaaattctccttaaggttattaacttttcatttctatatagacacatcgagggtcaacagagacaactctatctcacacaaggtaggggtaaggtattcgtataccctacccggcccacatgtgagatcacactgaatatgttgttgttgtcgcatttaggggtgtacaaatgaaactgacaaactgcaccaatctgataatccgagtcaaatcgagaaaaaatccgattatggtttggtttgatttggtttggtgatggaaaaaaccccgacatatttggttttgtttggttttaactaaaaaaagtcaaaccgaaaccaaaccaaccagacattatatgtgtagaaattttaaatatatttaatacataaaaatatttatggtagtgtaatttataaatatttcttaagatttttcatagtttatcttttaacgtattatttcaaacttgggcttataatttttggatgctccaataagttttatagtccataaatgttagtaactcaaataaatcctaaaccaaaatcaaatcaatactaatgctaataaaagacattcaattcaattgtactatgaatgaaaatagtgttggatatatatttttatagtttttccacggtttagataaaatgtataacttatttttctttgagtatggttagtcatgtaaataatcttattaatcataattttaaattatgtttatttttattatggcttattaataatatttaattttttgtgcaattttattatctttattgttgaatattttagtacaatgccacgactcatctcatatttatgttattttattgaaaaacacctcatatagttctgcctcattaggattaaaaaaatatttggagcacaaattttactttttgtgttatgaagactttatgaaaaaaaaataaaataaaaacccgaaaacccgaaacctcgagaaaaatcgagattaaaaatccgacttttattggtttggtttggtatttagatttaataacccgatacaattagtttggtttggtaattagaaaatccgaatcaaacccctaaccgtgtacacccctagtcgtattggtatatagacatctttgataaatcattaatcatgcatgatattcttcgatctccttattgtaggtcatgacagaccctgatgttcctggccctagtgatccgtatctgagagaacatcttcactggtatgcactatattcaagaaaagctatggaaaaaaataactagatgagataggtaaaaaagaaaggagtttaatgattgtttgatttgcattaattatattaagtcatgccattatctagtaataaactggttataaggacatacacaaaaggtatggtcaacatataatcaaagaaagaaaagcataagcatccttatgcaagctgccaatgtcatgtaaaatacttcgctaatagacaaatatatattacattagttacctaaaagataggtatataatcagtgggactcctaacttaaaaaataaggttagtaatctgctataacgatacactgagaatcgtcgtcgtcagtttataagttaaaaattaatgtaggtcatcacaacactcacaaagagtgcctcaattgggaagagtatgttatatagttagaatttatgttacatatggaaccacagtactacagaaggataactcttaaacatacttctttaccatcatatttgcaggatagtgactgatattccaggaacaacagatgccacctttggtaagctcactattttggcattttcatttttccttcaatttcttttagtatatagctaggttggtttttgacatgctaattttgagcaggaaaagagttggttagctatgagatcccacggcctaatattggaatacataggtttgtgtttgttctgtttaagcagaaatgcagacagtcagttagtccacatgatgtttccagagatcacttcaacactcgcaactttgccaacgtaaacgatcttggcccgcctgtcgccgccgtcttcttcaatgcacaacgagagaccgccgccaggagacgctaa

SEQ ID NO:6

源自以下的普通烟草TFL1-1T基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5。

MARNVEPLVVGRVVGDVLDSFSPKVKMTVTYNNKQVCNGQELFPSAVTIRPRVEVQGGDMRTFFTLVMTDPDVPGPSDPYLREHLHWIVTDIPGTTDATFGKELVSYEIPRPNIGIHRFVFVLFKQKCRQSVSPHDVSRDHFNTRNFANVNDLGPPVAAVFFNAQRETAARRR

SEQ ID NO:7

普通烟草TFL1-2S基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:8

普通烟草TFL1-2S基因的基因组序列

atgtctgttacttataacagcagcaagcatgtttataatgggcatgaactctttccttcctcagtcacctctaaacctagggttgaagttcatggaggtgatttgagatctttctttacaatggtacatactgcttccttcgattttcaatacttttattaggggtggagcttagcggcggagccaagattttaactaaggggagtcaaaatataaataagtaagcacacaaaaaaatcaagggggtcaacgtatagtatatacacataaaattaagaatttaacatatttataccgtgtaattttccagcgaaggggtgtcaattgactctccttgccaatgagtggctccgccactggcggagctagagttctagttacggttcgttgtattgtgttaagaagtccacttatactgtcttttctagaatttagaattcataaattcaaaattatggctctgcccttaaatttatttttatacatttctattatatagtaaatcgtttatattgaccccttatttttcttttttaccttaattgacagatcatgatagacccagatgttcctggtcctagtgatccatatctcagggaacacctacactggtaaagaaataagttttttaattactaactcattcaattttatcgtcccttcttttccttgtttacttggagggaaaataatacgatctcatcgaaaagataaaaattcttcaggcttgttatctaaaaacttgttaaaaaataccgtaatgaaaagacatatgagtttgttattaggtatttgactaaatatgatcgatcatatggtgttcggacaagaaatattttgtgaaaaggtccgcatacttttaaaaaaagaaaatctgccttgactcttgagtttgtgcttctcgggaaaacaatttcttccttctttttttttttttttttggtttattgacctttacatattaaagacaccactgagacacatatctagaaaaattgtatttgggaacgcaaaagcaaagaaaacatgtgttattaatcttatgtcaatgccaccagcagctcaggaaaaatatggtcgatatattgtgatttgcttgcaaaaggagcaaagaagaaatcttttgataatgtttgttatgacgatgtacttaaagcaaataagttagaggtcgtttggtacatgggataaggataataattttgggataaagtttaggattaactttatcttatatttggtttggagtattagctaaccgcgaggtatttttcaaactaaaatagtgggattagctatcccatataaaaagtaggatagctaatcccatgggatatcccaccctatcggatagtaatagtccaataggagacaactctaatttgtacagacataatgtccagtcacaccttgtttttttgtcatgacacatattaagcatgaataataatatttcgacaatcttgtagcatttgattagacttagcaaattataaatatgtccaataattggtcacattgttctaataattacttgtttcccttatcattatatatagtgcttcattcactaaacagaacccaaaaaaaaaaaaaaaaaaactgcaaaatggtcatatcatgtagtaacggaataaaaacgtactcagttttatgataaaatcaaagtgacatatttgtacgctttgatagttgacaaatacctgaaaaaagaatttgaccatctttacaggattgtcacagacattccaggcactacagattgctcgtttggtatgtatctttaacccaaatttcaagcttcgaaatagtaacagcttttgtttttaatattttatttgtcttaaatacatattttccttattataaatttcttcgcctagtggtaacgggatcaggtattgattcgtatttattttttattgatcaacaaaaaaagagtacaaaagaaagaattgtttttctacacttagatttatatatatgcaatgtctagaaattaatgagtttacaaattcattgatgtgtatatctcacaatcaaatccaaaatactgatccaaaaattttgatcagggaaagaaatagttggctatgaaatgccaaggccaaatattggaattcacaggtttgtatttctgctgttcaagcagaagaagaggcaaacagtattgactgcacctctctccagggatcgatttaatacgcgtaaattcgcagaagaaaatgagcttgggtctcctgttgcagcagttttcttcaattgccagagggaaactgctgccagaaggcgttga

SEQ ID NO:9：源自以下的普通烟草TFL1-2S基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8

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SEQ ID NO:10：普通烟草TFL1-2T基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:11：普通烟草TFL1-2T基因的基因组序列

atgtctgttacttataacagcagcaagcatgtctataatggacatgaactctttccttcctcagtcacctctaaacctagggttgaagttcatggaggtgatttgagatctttctttacactggtacatactccttcgattttcactacttttaatttattaggggcgaagctagagttctagctacgggttcgttgtattaattgtgttaagaagtccacttaagctgtcttttttagaatttagaatccataaactcaaaatagtgactttgcttctaaattaatttttatgcatttctcttatatcgtgtatgtgaatattgaccccttattttttcttttttaccttaattgacagatcatgatagacccagatgttcctggtcctagtgatccatatctcagggaacatctacactggtaaagacatacgttttttaattactaactcattcaattttatcgccccttcttttccttgtttacttggagggaaaataatacgatctcgtcaagaagatcaaaaatcttcaggcttgttatttaggaacttgttcaaaaataccgttttgaaaagaacatatgagtttgttattaggtatttgactaaataggaacgatcatatggtgttcggacaagaaaatttttgtgaaaaggtccgcatactttaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaatccgccttgactcttgagtttctgcttcttggaaaaaacatttcttctttttttttttgggttttttgacctttatatattaattaaagacaccactgagacacttaattaaaaaattgtatatgggaacgcaaaaagaaaaaaaaacatgtgttattaatcttatgtcaatgccatcagcaactcaggaaaatacggtcgatatactgtgatttgcttgcgaaaggagcaaagaagaaatcttttgataatgtttgttatgacgatgcacttaacctaaaataagttaggggccgtttggtaaatgaaataaggataataatctcggaacaaagtttaggattaactttatcccatatttgatttggagtattagttaattgcgggataactttcaaattaaaatagtaggattagttatctcatatataaagtaaaatacctaatcccaataatataataggagacaactctaatttgcgtagacataatgtccagtctcactttgtatatttgtcatgacgcatattaagcatgaatgataatatttcgacaatcttgtggcatttgattacactcagcaaattataaatatgtccaataattgcattaataattacttgttcctcttatcattatagtgcctcattcactaaaccgaacccaaaagaacactgcaaaatggtcatatcatgtagtaacagaaaaaaaaaacgtactcgattttatgataaaatcaaagtgacatatgtgtcgctttgataattgacaaatacctgaaaaaagaatttgaccatctttacaggattgtcacagacattccaggcactacagattgctcgtttggtatgtatctttaacccaaagttcaagctatgaaatagtaacagcttttctttttaatattttatttgtcttaaatacatattttccttattataaatttattcgcctagtggtaacgggatcaggtattgattcgtatttaatttttattgttcaacaaaaaagagtacaaaaagaaagaattgattttctacacttagatttatatgcaatatctagaaatcagaagatcagcaatgagtttactaattcatcgatgtgtatatcgcacaatcaaatccaattactaataatactgatctaaaaatttcgatcagggagagaaatagttgggtatgaaatgccaaggccaaatattggaatccacaggtttgtatttctgctgttcaagcagaagaagaggcaaacattattgagtgcacctctctccagggatcgatttaatacgcgcaaattctcagaagaaaatgagcttgggtctcctgttgcagcagctttcttcaattgccagagggaaaccgctgccagaaggcgttga

SEQ ID NO:12：源自以下的普通烟草TFL1-2T基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11

MSVTYNSSKHVYNGHELFPSSVTSKPRVEVHGGDLRSFFTLIMIDPDVPGPSDPYLREHLHWIVTDIPGTTDCSFGREIVGYEMPRPNIGIHRFVFLLFKQKKRQTLLSAPLSRDRFNTRKFSEENELGSPVAAAFFNCQRETAARRR

SEQ ID NO:13：普通烟草TFL1-3T基因的基因组序列，在ATG之前包含2kB

SEQ ID NO:14：普通烟草TFL1-3T基因的基因组序列

atggctcaaatgacagatccccttgtgattagtagggtggttggagatgttgttgattatttctctccaagtgttaagatgtgtgttatttataaccccagtaagcatgtctataatgggcatgaactctttccatcccttgttacctctaaacctaaggttgaagttcatggaggtgacatgagatccttctttacactggtaattaattcacactacttcaatagttttcttgttcttatattttattatctatctatatatatataataaaggagcggcaaagccaccatataaatgacaaatgtaaacttttaggacaaaactccaaaaaagttggagttttaaaattattttatatataaaataaataaataaataaataaataaactatcaattcaaattggggagtagtttcttactaatatgatagctatatctatatctatatctatctatatatgtaaaacatttatatgatgccaagtggcataaccactgataagatttttaaatttgaatatgaatgaattttaaatgaagttctaacttcttaaaaataaaccctaatataggttactatttttagtaatgattgaaattattattaaaatattttgttgaaaacaacatagagataaaatttgattattaaatttatgtattacaacaataataattattgaaaatattgctaaaattttcatgaaaggattcacccataattattagtataatagaaaactaaaaaattattaagtctaaagttctagatctctatatttataaacgtataaactgttattttattttctgaaaaaagcaaaaatactgaagagaaaaatgataaaaatattttaaaatatgtaagtcatgtgcaaataataaagtgaacaaatgatgtagtagtatactgaataagatatgtttttttgtcataaaataagtatatgcataactcatctcaataatttgctgactccatctgagtcaaaatatcttctaaattcaagcgaagataattatctatcgcattatttttttatcattaatataaggcaagacgaatctatatctcatatgggactttttaaatagatacatctttataaatgaaccactttatgagttttatcacgaattacaagtaagaataacttgaagattgaaagaatttttggatttatttaattataatatatttttattcattttaaattaatttatattttcaaattatttgtagcaacctatataattatgatatttgagtattatcttataagttatttgatgattgtcgtttgatttaattattgaactattactacaggggacataagatgataattataattttgtagaaacatatgatctaatgtgctcaaataaattactatcatactttgatatgactaatattctttaataatttttgcgcatcgggcgggtactaatactagttcttaaaaaaagggtagcgcgatgcacaaagcattccgcattcacacaggatcctaggaattgggtcgcaccccacagtctaccctaatgcaaacattagcgactactttcacggctcgaactcgtcacttatagatcatacagagacaaatttactgttgctccaagttccctttcttattttattattcttataatttctattcttatattgttataaattatttttttctttttgatagatcatgactgaccctgatgttcctggtcctagcgatccatatcttagggagcacttacattggtatgtatcatactatcatcaactttgaaagcttaaaacactgtaaagttgatgattcacaccaaagattttaatcgtcgtcgtgttacttccatataaatcagtatcgagaagtatgtggccatcactccatcaacgacaccaaaatgaaataaagagtccctatatcaatacaatataaattaatcttaaacatgaagttgactttaaattggataaattgtttccactactaagcttagcgtataaattagtcctttgactttcaattttgtataataatgcgaagctttttttcttgtaaatgcaatttttgtccttgagggtttgcaacttcttttttaaggaaaaaaaaaagactaaagttgtgtgacactaaaaccaagagttagcttaatacttcatggacacacgttagcataaaacatataaccgatattcaaaattacaaaaatgatagaatcataatttttgtttctatttaaaaaggaagtaagccaaattactactaacatagtggacttaaagggtattaattttttgttattttaatgatatctgttcatgacttcttgactacttctactcctttatatcaatcaaattataatttacttcgtttgactatctaatttacagggtaattacagacattccaggcactacagattcctcgtttggtatggaataatattgtattccttttttacttttctgcctagcatttctaaatagagtagtccgatacacgaaatatttcactttacgcaggatccagaaataaaggaccataccccaattgggtgtaatataagtagtcatgggcgcatgcagtattttagtgacgggtttaattgcactcataattttggacgcttagcataaagtagtagatatgtatccataacttcaaaaatataataggttcaatgttaaaaatttcaaaagagatgaactcatagagtttaaatcatgatccgcctctgtaggcagtctaccctaatgaaagaatcagtggctgatttcacagttcaaaaccgtaacctatgaatcacataaagccaactttaccatcgctccaagactcgccttcttctgcctaacattactactgctaataaagagaattttaataaaactactaatgctaattattattctttgctaaaatcttcatcaggaaaagaagtggtgggctatgaaatgccaatgcctaacattggaatccataggtttgtgtttctgctcttcaagcagaagaagaggcaaacagtgagcgcaccattatccagggaccgattcaatacgcggaaatacgcagaagaaaatgagcttggctctccagttgctgctgttttcttcaactgccaaagggaaaccgcggccagaaagcgttga

SEQ ID NO:15：源自以下的普通烟草TFL1-3T基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14

MAQMTDPLVISRVVGDVVDYFSPSVKMCVIYNPSKHVYNGHELFPSLVTSKPKVEVHGGDMRSFFTLIMTDPDVPGPSDPYLREHLHWVITDIPGTTDSSFGKEVVGYEMPMPNIGIHRFVFLLFKQKKRQTVSAPLSRDRFNTRKYAEENELGSPVAAVFFNCQRETAARKR

SEQ ID NO:16：普通烟草TFL1-4S基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:17：普通烟草TFL1-4S基因的基因组序列

atggcaagaagtttagagcctctaattgttgggagagtagtaggagatgttcttgattcatttagtcctataatgaaaatgacaatatcatataacaacaaattagtgtgcaatggccatgaactccttccttctgttgtcactgctagacctaaagttgaagttcaagggggagatttgagaactttcttcacattggtatttttttcttgatttctacttaatttccaagatcatcaagttcccattatttctttaaaaaaaaaaaaagcagttcggtgcactaaactcccgctatgcgcggggttcggtgaagcaccgaaccataagggtctattgtacgcaaccttaccctgcatttatgcaagaggcttgctcaccattacaagttatattaatttaacatgttatatataaccacaaaggctgtcgtgggatggtaaatatccttctatccttaatcagaagtttcgggttcaagttatagccctaggaatatagtcgtctttggtagggatcctttacccccaaaactttccgccgtgaatccagattagtaaacctcaaagcgggtatcgggcattggatgacaaaccaaaaaaacttcaacgtgttatagcatgttataacttattacagttaatttagttttccagtcgatactatattaaatagagtgcctgtaatttactttggagtgatttgattgttattttttcgcatcgtcagtacataaaacttatattaattttcgaatatgtaggtcatgacagaccctgatgttcctggccctagtgatccttatctaagagagcatctccactggtatgccctaaactcaatttttttttaaaaaaaaaaaatagaaaatgagaaaaaatatgtaaaaatctacaaatatgagaagatcatgattaattggaactatttttactgactatttgacaggatagtaactgacattccaggtaccactgatgctacttttggtaagttctctgtatcttctgcaaaattacaagcacatgtgaagataaaagaagtttttctattattcacttattttgtctagctagttatatagaataattataagatcaacaattttgtatagtagtgaatgttggacttctaaagtcgaacatgtccacttgatgagtgtcacaaaaatgtagaaactaaacaatcgtttggacataaaaaaaaaagtaagtttttttgagttaaattgaaaaagaaaatatttagaatttgaaattgtggatatacatttaaattgaaaagcattgcagttttgtaaggaaaataaactttcatatacataaaaaagtgattttttggaaactcatcttcaagaatatttttaaaaatttccgtccaatgtataaccaaacattattttgaaaaagattaaaaaaaggaaaaactttaggaacaacgggtcccaagataaatgtgtctagtcatataagattagataaattaggattttattatatttggtagaaggtgcaagaagcatatgtaaataataaattgagaagtcacttaagatattttgatcatgtcccacatcgataacaagaggtaccattctatatatgttaaatcatggtaagttaaagtattatatcacatattaaatggtgatataatagacctaaatcacatgaaacgaaattgtcccgaaaggtctataaatttttgaaattcatgtagacgaagctaaaagtaggatacaataaaaaaaaaattaaagatctatattggcgatactatttagttgggattgcattttagttattctagtacatttactttaatctaatttttgctagctaggagtcttttaatcttattagaaatttacataccaaaaaatttagagaacttgctaggacaattggtatttctttatataatattgtggaagttgtattagagtatgttgtttacattacactctttgagtgcgttccttctccgaactagctaatgcatgaacacgagatgccttctgcaccgtgctaccctattaatatataaaaaaatggtagcccggtgcattaagctcccgctatgcgcgggttccgaaaaaggatcagaccacaagggtctatgtttgcaaccttacttgtatttctgcaagaaactgtttccacggctcgaacccatgatcttctggtcacatgacaataactttaccggttacaccaaggttccccttcacgcgctgcccttttaatattgtctattaatatttcctactagagttatacacccctttgttattactcactcttagggtgattattaacatataatatgtttaatatttatactaaaaacaggacgagaattggttagctatgagattccaatgccaaatattggaatccataggtttgtatttgtacttttcaagcaaaaacgaagacaatcagttagctctcctacttcaagggatcacttcaacactagaaattttgctgaagaaaatgatcttggccaacctgttgctgctgttttcttcaatgcacagcgagaaaccgccgcacgaagacgctaa

SEQ ID NO:18：源自以下的普通烟草TFL1-4S基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17。

MARSLEPLIVGRVVGDVLDSFSPIMKMTISYNNKLVCNGHELLPSVVTARPKVEVQGGDLRTFFTLVMTDPDVPGPSDPYLREHLHWIVTDIPGTTDATFGRELVSYEIPMPNIGIHRFVFVLFKQKRRQSVSSPTSRDHFNTRNFAEENDLGQPVAAVFFNAQRETAARRR

SEQ ID NO:19：普通烟草TFL1-4T基因的基因组序列，在ATG(呈粗体)之前包含2kB

SEQ ID NO:20：普通烟草TFL1-4T基因的基因组序列

atggcaagaagtttggagcctctaatagttgggagagtagtaggagatgttcttgattcatttagtcctatagtgaaaatgacaattacttataacaacaaattagtgtgcaatggtcatgaattctttccttctattgtcacttctagacctaaggttgaagttcaaggaggagatttgagaactttcttcacactggtaatttttcttgattttttccttaattccaagatcatcaagttccatttatttctttacaagttatattaatttaaccctttataatcaccaaaggctggcgtgggttgctaagtaaccttccatcgttaatcagatgtttcgggttcgagctagccctgggattacaatcgttttttgtaggaagcgctttaacccccaaaatttttcagcacgaacccggattagtaaacctcaaaactcgtgccaaatactagatgacaaaccaaaagagttttcaacctgttataacatatgttacttgttacaattattagttttccggtcaatagtatattatgtaattttctttgaagtgacttgattgttattttttcacattatcagtgcataaaacttatactattattttttaatatgtaggtcatgacagaccctgatgttcccggccctagtgatccttatctacgagagcatctccactggtacactctctataatagtttcatttgttccgaattttcttggctgttatataaaaaatatattataacatagcatgaaaattggttccacaaaaacttaatttttatagtgaataattgttatatattgatattgttatagagaggtctgtctatatgccctaaactcaatgaaaaaaaatagaaaatgagaaaaaatatgtaaaatctacaaatatgagaagatcatttttagttgaaactatccttatatactactgaatatttagctggcaaataaaattgacagtgttttactgattgtttgacaggatagtaactgacattccaggtaccactgatgctacttttggtaagttttattagtttcttctgcaagattacaagcacatgtgaagaagatacaagatgtttttccattactcacttattttgtcttgctaataattatatagaacaattgtaagatcaacagtgttatataatagtgaatgttggacttctaaagtcgaacatgtccacatgatgagcgtcacaaaaatgcagatacgagctcgtttggattgacttaaaaaatgtggtttttcagcaaaaataacttttaagccaaaaaacaataagttagggttgtccacctttttgcttttggcttaatttaagcattttaaaatttattttaagcaatttttgacttagccaaacaccgaaaaaagctaaaagaaacttaaaagctgatttgactagcttaaaagtaaatccaaacaccctctaactaagcatttggacataaaaaaaatatgtcatttttgaaaaaagtagttcttttgagttaagtcaaaaaagaatatataaaatttgaaattgtatttagacatgcatttcacttgaaaattattagagttttatgagaaaaatgaacttttagatgaaaaagtggtttttggaaactcatcttcaagaatttttccaaaacttcagtccaatcgtataaccaaacattattttgataaaaacatcgaaaataaaaataaatctatggagaaacgggtcccaagataaatgtgtctagtcatataagattattcaaaattaagaatttatcacatttgtaaaagatgtaagtagcatatgtaaatgataaaatgagaagtcacttgagatgttttgatcatgtcctacgtcgatcttcagaggtaccattccgtatacgtgattggtaagtaaaggtattaaaaagagacataatggacctaaattacgtgaaacgaaattgtcttgaaaagtctttcaaatttttgaaatccatgtagacgaatcgaaaagtagggcacaatgaaatatgatcaaaggtttataatggtgatacaagttagttgggattacgttttagttatgccagtatatttactttaatctaatattttcttggagttttttaatcttattagaaatttacttaccaaaaatttagagaacttgctagaacaatataattgataattcttcatatatattgtcttcgagctgtagaaacagccactaatgtttgcattaggatatgttgtctacatcacacttattgtgtgttgccctcaccggaccctgcatgaacgtatgatgccttatgcaccgcgccccttttaatattatttattaattaatatttcctgctagagttatactcctttgttattactcattcttaggttgatgattaacttataatatgcttaatctttatactaaaaataggaagagaattggttagctatgagattccaaggccaaatattggaatccataggtttgtatttgtacttttcaagcaaagacgaagacaatcagttagccctcctacttcaagggaaaacttcaacactagaaattttgccgaagaaaatgatcttagccaacctgttgctgctgttttcttcaatgcacagcgagaaaccgccgcgcgaagacgctaa

SEQ ID NO:21：源自以下的普通烟草TFL1-4T基因的氨基酸序列：SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20。

MARSLEPLIVGRVVGDVLDSFSPIVKMTITYNNKLVCNGHEFFPSIVTSRPKVEVQGGDLRTFFTLVMTDPDVPGPSDPYLREHLHWIVTDIPGTTDATFGRELVSYEIPRPNIGIHRFVFVLFKQRRRQSVSPPTSRENFNTRNFAEENDLSQPVAAVFFNAQRETAARRR

SEQ ID NO:22：普通烟草TFL1-1S/T有义RNAi靶序列的DNA序列

agttaaaatgacagtcacttacaacaataaacaagtttgcaatggccaagagctcttc

SEQ ID NO:23：普通烟草TFL1-1S/T反义RNAi靶序列的DNA序列

Gaagagctcttggccattgcaaacttgtttattgttgtaagtgactgtcattttaact

SEQ ID NO:24：普通烟草TFL1-1S/T RNAi构建体的DNA序列Ggtaccacaagtttgtacaaaaaagcaggctaagcttgtcgaccatggagttaaaatgacagtcacttacaacaataaacaagtttgcaatggccaagagctcttctggtaacctttaatgtttaaccgttcacatttctaatatttacttatttgtaacatgtcgtcacgtgttagtttcattctttttatgaaccaaacatgcatgcaaagatatttttagatatttggacggcgagtgagatttgaaactaggaccgtttgcctgatacaatattaaaatatgtaaccattttatgtacaagtttaaactgttgatagtagcatattttttacttttatttaagtatactatattccaacaggtaagttaacgaagagctcttggccattgcaaacttgtttattgttgtaagtgactgtcattttaactggcgcgcccgggcaattgacccagctttcttgtacaaagtggtgagctc

SEQ ID NO:25：普通烟草TFL1-1S有义RNAi靶序列的DNA序列

tgcagtcactattagacctagggttgaagttcaaggtggtgatatgagaactttcttcacattggtcatcacagatcctgatgtacct

SEQ ID NO:26：普通烟草TFL1-1S反义RNAi靶序列的DNA序列

aggtacatcaggatctgtgatgaccaatgtgaagaaagttctcatatcaccaccttgaacttcaaccctaggtctaatagtgactgca

SEQ ID NO:27：普通烟草TFL1-1T有义RNAi靶序列的DNA序列

tgcggtcaccattagacctagggttgaggttcaaggtggtgatatgagaactttcttcacattggtcatgacagaccctgatgttcct

SEQ ID NO:28：普通烟草TFL1-1T反义RNAi靶序列的DNA序列

aggaacatcagggtctgtcatgaccaatgtgaagaaagttctcatatcaccaccttgaacctcaaccctaggtctaatggtgaccgca

SEQ ID NO:29：普通烟草TFL1-2S/T有义靶RNAi序列的DNA序列

catgaactctttccttcctcagtcacctctaaacctagggttgaagttcatggaggtgatttgagatctttctttaca

SEQ ID NO:30：普通烟草TFL1-2S/T反义靶RNAi序列的DNA序列

tgtaaagaaagatctcaaatcacctccatgaacttcaaccctaggtttagaggtgactgaggaaggaaagagttcatg

SEQ ID NO:31：普通烟草TFL1-2S/T RNAi构建体的DNA序列ggtaccacaagtttgtacaaaaaagcaggctaagcttgtcgaccatggcatgaactctttccttcctcagtcacctctaaacctagggttgaagttcatggaggtgatttgagatctttctttacatggtaacctttaatgtttaaccgttcacatttctaatatttacttatttgtaacatgtcgtcacgtgttagtttcattctttttatgaaccaaacatgcatgcaaagatatttttagatatttggacggcgagtgagatttgaaactaggaccgtttgcctgatacaatattaaaatatgtaaccattttatgtacaagtttaaactgttgatagtagcatattttttacttttatttaagtatactatattccaacaggtaagttaactgtaaagaaagatctcaaatcacctccatgaacttcaaccctaggtttagaggtgactgaggaaggaaagagttcatgggcgcgcccgggcaattgacccagctttcttgtacaaagtggtgagctc

SEQ ID NO:32：普通烟草TFL1-2S有义靶RNAi序列的DNA序列

gaaagaaatagttggctatgaaatgccaaggccaaatattggaattcacaggtttgtatttctgctgttcaagcagaagaagaggcaaacagtattgactgcacctctctccagggatcga

SEQ ID NO:33：普通烟草TFL1-2S反义靶RNAi序列的DNA序列

tcgatccctggagagaggtgcagtcaatactgtttgcctcttcttctgcttgaacagcagaaatacaaacctgtgaattccaatatttggccttggcatttcatagccaactatttctttc

SEQ ID NO:34：普通烟草TFL1-2T有义靶RNAi序列的DNA序列

gagagaaatagttgggtatgaaatgccaaggccaaatattggaatccacagcagctttcttcaattgccagagggaaaccgctgccagaaggcgttgaagaagatgttta

SEQ ID NO:35：普通烟草TFL1-2T反义靶RNAi序列的DNA序列

taaacatcttcttcaacgccttctggcagcggtttccctctggcaattgaagaaagctgctgtggattccaatatttggccttggcatttcatacccaactatttctctc

SEQ ID NO:36：普通烟草TFL1-3T有义靶RNAi序列的DNA序列

atggctcaaatgacagatccccttgtgattagtagggtggttggagatgttgttgattatttctctccaagtgttaagatgtgtgttatttataaccccagtaagcatgtctataatgggcatgaactctttccatcc

SEQ ID NO:37：普通烟草TFL1-3T反义靶RNAi序列的DNA序列

ggatggaaagagttcatgcccattatagacatgcttactggggttataaataacacacatcttaacacttggagagaaataatcaacaacatctccaaccaccctactaatcacaaggggatctgtcatttgagccat

SEQ ID NO:38：普通烟草TFL1-3T RNAi构建体的DNA序列ggtaccacaagtttgtacaaaaaagcaggctaagcttgtcgaccatggatggctcaaatgacagatccccttgtgattagtagggtggttggagatgttgttgattatttctctccaagtgttaagatgtgtgttatttataaccccagtaagcatgtctataatgggcatgaactctttccatcctggtaacctttaatgtttaaccgttcacatttctaatatttacttatttgtaacatgtcgtcacgtgttagtttcattctttttatgaaccaaacatgcatgcaaagatatttttagatatttggacggcgagtgagatttgaaactaggaccgtttgcctgatacaatattaaaatatgtaaccattttatgtacaagtttaaactgttgatagtagcatattttttacttttatttaagtatactatattccaacaggtaagttaacggatggaaagagttcatgcccattatagacatgcttactggggttataaataacacacatcttaacacttggagagaaataatcaacaacatctccaaccaccctactaatcacaaggggatctgtcatttgagccatggcgcgcccgggcaattgacccagctttcttgtacaaagtggtgagctc

SEQ ID NO:39：普通烟草TFL1-4T有义靶RNAi序列的DNA序列

tagtcctatagtgaaaatgacaattacttataacaacaaattagtgtgcaatggtcatgaattctttccttctattgtcacttctagacctaa

SEQ ID NO:40：普通烟草TFL1-4T反义靶RNAi序列的DNA序列

ttaggtctagaagtgacaatagaaggaaagaattcatgaccattgcacactaatttgttgttataagtaattgtcattttcactataggacta

SEQ ID NO:41：普通烟草TFL1-4T RNAi构建体的DNA序列Ggtaccacaagtttgtacaaaaaagcaggctaagcttgtcgaccatggtagtcctatagtgaaaatgacaattacttataacaacaaattagtgtgcaatggtcatgaattctttccttctattgtcacttctagacctaatggtaacctttaatgtttaaccgttcacatttctaatatttacttatttgtaacatgtcgtcacgtgttagtttcattctttttatgaaccaaacatgcatgcaaagatatttttagatatttggacggcgagtgagatttgaaactaggaccgtttgcctgatacaatattaaaatatgtaaccattttatgtacaagtttaaactgttgatagtagcatattttttacttttatttaagtatactatattccaacaggtaagttaacttaggtctagaagtgacaatagaaggaaagaattcatgaccattgcacactaatttgttgttataagtaattgtcattttcactataggactaggcgcgcccgggcaattgacccagctttcttgtacaaagtggtgagctc

序列表

<110> Philip Morris Products S.A.

<120> 具有缩短的到开花时间的植物

<130> P10400EP

<140> EP16205377.1

<141> 2017-01-05

<160> 41

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3539

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 1

tgtttattgt acattttgaa ctgcatcgag ctgcacgatt gacagatcta gtctgcaaca 60

gagtactttg gtttctaatt atagtaatcc taacacctca gaaatttcca aaattggaat 120

tatgggtgca aatcatcttt atatatactc tcaaatgact tctcagatct tacggtcact 180

aattgtctgt aaattaagta tggtggagtt cactttatat actctgagcg gtgtgcccat 240

cctcctccat cagaatatca cttaaaacaa ttaacgtact ttataatctt tccctattgt 300

ttacacacaa tttaggaaag tttctaacaa agataagccc atatttcaag attagtgtct 360

taggattacc ctaaatgaaa aaagcaatag attccctggc aatatgttta cttatatttt 420

gaatttttgc aaaaaaaata aataaatgtg tgtcaacttg cttagttggg accacatgca 480

aaaactaatt caaggatttc atctgataat tttatagtgg agaggaaaag gcttggatta 540

atttaagtac ttattatgta gggcaaatat cacttttagc ctgcggccac catatttata 600

ttcaagccgt aaaagtgtat aaaatttgta tttttttata tataatatac ggaaatgtgt 660

gtatatatat atatatatat atatatatat atatataaga aatataaaaa aaattggcta 720

ttatttttca gagcagctat acaatatcat tttccatatc aggtaagctg aacaacaaat 780

catggaccaa ttcgaagagc accagtcagg tgtgaaagag aactgacatg atagcataaa 840

atacatatca ctaactcctc cacatctaag agcatacatt taatttccta tatggaagat 900

aagattaatt agaaaagtgt ttgataaagc taagatatgt tagtaccagt ttgtagtatc 960

cagttgaaat tttagtgtca acttaaggat aattttacta tgattagaag acagttatac 1020

attcacaaag tttctgaaag gaacttataa gtcttctttt tattgtactt acatttgtca 1080

agtcatatat agtacatatg acccctccta aaggaaaaga aagtagggaa agtaccaagc 1140

tagggcatat ttaaaggaaa ataaaatggc aattttaaga tgttagagta agggcagggg 1200

taggccaaag aagtattggg gagaagtgat tagacaagac atgccactgc ttcacctaac 1260

cgcggacata actagcgata ggaagatgtg gaggtcgaga attaaggttg tgagttgaca 1320

ggtagttatg agtttactag taatactagt actattcttg tattctttta ttcttagttt 1380

tttattactt tgttatgtca ctcgcttcca ttactagtta tctgttgtta ttgcttgttg 1440

ctttattttt accatttttt tagccgaggg tctatcaaaa acagtctctc tgcctttata 1500

ggataggggt aaggctgcgt acacactacc ctttccagac cccacgtatg ggattaatcc 1560

gagtttgttg ttgttgttgt tgttgatgtt gttgttgttg aaaaggaaac gtttataatt 1620

aagtacatgt attaagattt cattattttc ggggaagaat ttcgaatgta tttaaaccat 1680

aaaacgtcat tctcctgcaa gtatttttgg tgatcaagat aagtatagtt aaaaattgag 1740

caatcttctt tgcctacgat gtcctgtata aaactaacaa agaaaaaatt cagtttattt 1800

ttcaggggta gggttacttt ttttttaaaa aatattctat ttgaagttcc ataaaatccc 1860

attttttatt tgcaactata ttgagtagat gttccgagac agcaactata agtgaggctc 1920

tatttcactg ttcaaccaaa atctctcaca agctaagttc cttgcaatcc aaaagatctc 1980

tctctctctc tctctctcta atggcaagga atgtagagcc tctagtagta gggagagtag 2040

taggggatgt tcttgattca tttagtccca cagttaaaat gacagtcact tacaacaata 2100

aacaagtttg caatggccaa gagctcttcc cttctgcagt cactattaga cctagggttg 2160

aagttcaagg tggtgatatg agaactttct tcacattggt aacttttcta attttccttc 2220

aggttattaa cttttcattg ctatatagac atctttcaaa cctgtctaga agattctttt 2280

cttgagctga gggttcggag acagcctctc tatcccacac aagataaggt taacgtctgc 2340

atataccttg ccgtcccctg acaccacata tgggattata ctgcgtatgt tgttgttgtt 2400

gtattgctat atagacatct ttgataaatc actaatcatg catgatatta ttcttcttat 2460

tgtaggtcat cacagatcct gatgtacctg gccctagtga tccgtatctg agagaacatg 2520

ttcactggta tgtactacat tcaagaaaat ctatggaaaa aaaataacta gaagagatga 2580

gtccaaaaga aaggagatta attattgttt gatttgtatt ttttatttgc attagattaa 2640

gtcatgcaat tacctagtaa taaattcgtt ataaggacat acacaaaagg tatgctcaac 2700

ataattaaag aaagaaaagc ataagcatta tattcttata tgcaagctcc caatctgatt 2760

gtggcgaagc taagaatttc ttcgggtgtt taaatttaaa agaagtgaaa aaaaatccga 2820

taaaaaattt atgtgttata tacctctaaa acttaatatt gtacctatat acatattgta 2880

atttttcgac gaatgaccac tcttattgcc catgctgcca atgccaatat gtaaaatact 2940

tcgccaatag acaaatatgt atcacattaa ttagttacct aaataggtaa ttatccataa 3000

taagtgggac tcgtaacttg aaaaatatgg ttagtaattt gctacaacat gttaagatac 3060

agtgagaatg taaatgtata tatgtccttt cacgccgtcg taagtttata taagttaaat 3120

ctggttaaca atgtaggtca tcataacact cacaattggg aataataact cttaatcata 3180

cttctttaca ttcatatttg caggatagtg actgatattc caggaactac agatgccacc 3240

tttggtaaat tggctatttt ggtttctttt attaagctgg tgtttgacat gctagaatta 3300

atgtacttta attttgagca ggaaaagagt tggttagcta tgagatccca aggcctaata 3360

ttggaataca taggtttgtg tttgttctct ttaagcagaa atgcagacaa tcagtcagcc 3420

cacctacttc aagggatcat ttcaacactc gcaactttgc caacgtaaat gaccttggtc 3480

cgcctgtcgc cgccgtcttc ttcaatgcac aacgagagac cgccgccagg aggcgctaa 3539

<210> 2

<211> 1539

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 2

atggcaagga atgtagagcc tctagtagta gggagagtag taggggatgt tcttgattca 60

tttagtccca cagttaaaat gacagtcact tacaacaata aacaagtttg caatggccaa 120

gagctcttcc cttctgcagt cactattaga cctagggttg aagttcaagg tggtgatatg 180

agaactttct tcacattggt aacttttcta attttccttc aggttattaa cttttcattg 240

ctatatagac atctttcaaa cctgtctaga agattctttt cttgagctga gggttcggag 300

acagcctctc tatcccacac aagataaggt taacgtctgc atataccttg ccgtcccctg 360

acaccacata tgggattata ctgcgtatgt tgttgttgtt gtattgctat atagacatct 420

ttgataaatc actaatcatg catgatatta ttcttcttat tgtaggtcat cacagatcct 480

gatgtacctg gccctagtga tccgtatctg agagaacatg ttcactggta tgtactacat 540

tcaagaaaat ctatggaaaa aaaataacta gaagagatga gtccaaaaga aaggagatta 600

attattgttt gatttgtatt ttttatttgc attagattaa gtcatgcaat tacctagtaa 660

taaattcgtt ataaggacat acacaaaagg tatgctcaac ataattaaag aaagaaaagc 720

ataagcatta tattcttata tgcaagctcc caatctgatt gtggcgaagc taagaatttc 780

ttcgggtgtt taaatttaaa agaagtgaaa aaaaatccga taaaaaattt atgtgttata 840

tacctctaaa acttaatatt gtacctatat acatattgta atttttcgac gaatgaccac 900

tcttattgcc catgctgcca atgccaatat gtaaaatact tcgccaatag acaaatatgt 960

atcacattaa ttagttacct aaataggtaa ttatccataa taagtgggac tcgtaacttg 1020

aaaaatatgg ttagtaattt gctacaacat gttaagatac agtgagaatg taaatgtata 1080

tatgtccttt cacgccgtcg taagtttata taagttaaat ctggttaaca atgtaggtca 1140

tcataacact cacaattggg aataataact cttaatcata cttctttaca ttcatatttg 1200

caggatagtg actgatattc caggaactac agatgccacc tttggtaaat tggctatttt 1260

ggtttctttt attaagctgg tgtttgacat gctagaatta atgtacttta attttgagca 1320

ggaaaagagt tggttagcta tgagatccca aggcctaata ttggaataca taggtttgtg 1380

tttgttctct ttaagcagaa atgcagacaa tcagtcagcc cacctacttc aagggatcat 1440

ttcaacactc gcaactttgc caacgtaaat gaccttggtc cgcctgtcgc cgccgtcttc 1500

ttcaatgcac aacgagagac cgccgccagg aggcgctaa 1539

<210> 3

<211> 172

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 3

Met Ala Arg Asn Val Glu Pro Leu Val Val Gly Arg Val Val Gly Asp

1 5 10 15

Val Leu Asp Ser Phe Ser Pro Thr Val Lys Met Thr Val Thr Tyr Asn

20 25 30

Asn Lys Gln Val Cys Asn Gly Gln Glu Leu Phe Pro Ser Ala Val Thr

35 40 45

Ile Arg Pro Arg Val Glu Val Gln Gly Gly Asp Met Arg Thr Phe Phe

50 55 60

Thr Leu Val Ile Thr Asp Pro Asp Val Pro Gly Pro Ser Asp Pro Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Glu His Val His Trp Ile Val Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr

85 90 95

Asp Ala Thr Phe Gly Lys Glu Leu Val Ser Tyr Glu Ile Pro Arg Pro

100 105 110

Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Lys Gln Lys Cys

115 120 125

Arg Gln Ser Val Ser Pro Pro Thr Ser Arg Asp His Phe Asn Thr Arg

130 135 140

Asn Phe Ala Asn Val Asn Asp Leu Gly Pro Pro Val Ala Ala Val Phe

145 150 155 160

Phe Asn Ala Gln Arg Glu Thr Ala Ala Arg Arg Arg

165 170

<210> 4

<211> 4283

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 4

ttcgagtcgt gataagtgtt ttgcaaaaat ataagataag actgcatgcg tacaatagac 60

tcttttggtc cggccctttt ctggaccctg cgcataacgg aagcttagtg cacccggcaa 120

ccgtttttca acgttccaga tgcaagaata ttataaggag gctttttgac acttttaaat 180

ttaatctaat agagtttaag tttcatgcat cgactgtcaa aaaaatattt atataatcac 240

taatacgata attacaagtg aaatgctata ctaaacatta agtagtaacc taataaaacg 300

gtagctagct aatctactat atatcacgta gtattaaaat tacacttatg taaaaatctt 360

tacggtgtta agaataactt aaaagcaatt tagtaataca ttaatgagtg aaaaaggtga 420

agaggaaacg tggtgtgttt tgaactgcat cgagctgcac gattgacaga gctagtctgg 480

aacagagtac tttggtttct aattatagta atcctaacat ctcagaaatt tccataatag 540

gaattatggg tgcaaatcat ctttatatat actctcaaat taatgacttc tcagcaagta 600

ctgtcattgt ctgtaaatta agtatggtgg agttcacttt atactctgag cagtgtgccc 660

atcctcctcc atcacttaaa acaattaatg tactttataa tctttcccta ttgtttacac 720

acacaattta ggaaagtttt taacaaagac aagcccatgt ttcaagattt gtttcttagg 780

attaccctaa atgaaaaaag caatagattc cctggcaatt tacttatatt ttgaattttt 840

gcaaaaacaa aaagaaaaag tgacaacttg cttagttggg accacatgca aaaactaatt 900

taaggaattc atctgatatt tttatagtgg agaggaaaag ggctggatta atttaaatat 960

tccttatttg ccaaaattat ttatattcga tagctgtaaa aatatataaa atttgtatat 1020

ttgtttttgt atagtataca cggaaatgta tatatataca agaaattaaa aaaaaactat 1080

tattttcaga gcagttatac aatattattt tccctatcat gtaagcttag cttatcaaca 1140

aatcatggac caattctaag agctccattc aggtgtgaaa gagagctgac atgatagtat 1200

aaaatacaca tcactaactc ctccacattt gagagctata gattaatttc ctatatggaa 1260

gataagatta attagaaaag tgtttgaata agctaagatg tgttagtacc agtttgtaat 1320

atcaagctaa aattttagtg tcaatttaag gataatttta ctatgattag aagacaagtt 1380

atcattcaca aatttctgaa aggaacttat aagacttttt atttttattt tttattgtac 1440

ttacatttgt caattaagta catgtgaccc ctcctaaagg aaaagaaagt agggaaatta 1500

aagtaccaag ttagcgcata cttaaagcca aggtaagcaa aatggcaatt ttaaggtgtt 1560

gtagaggaaa cgtttataat taagtacacg tactaagatt tcattatttt cgtggaagaa 1620

atttagaatg tatttaaacc ataaaacgtc attctcgtgc aagtattttt ggtgatcaag 1680

ataagtatag ttaacgttga acaatcttct ttgcttacta tgtcttgtat aaaactaaca 1740

aagaaaaatt cagtttattt ttcaggggta gggttacttt tttaaaaaaa aatattctat 1800

ttgaagttcc ataagatccc atttttaatt tgtaactata ttgagtagat attccaagac 1860

agcaactata aatgaggatc tatttcaccg ttcaatcaaa atctctcaca agctaagttc 1920

ctagcaatcc aaaaaagatc tctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc 1980

tctctctctc tctctctcta atggcaagga atgtagagcc tctagttgta gggagagtag 2040

taggggatgt tcttgattca ttcagtccca aagttaaaat gacagtcact tacaacaata 2100

aacaagtttg caatggccaa gagctcttcc cttctgcggt caccattaga cctagggttg 2160

aggttcaagg tggtgatatg agaactttct tcacattggt aacttttcta aattctcctt 2220

aaggttatta acttttcatt tctatataga cacatcgagg gtcaacagag acaactctat 2280

ctcacacaag gtaggggtaa ggtattcgta taccctaccc ggcccacatg tgagatcaca 2340

ctgaatatgt tgttgttgtc gcatttaggg gtgtacaaat gaaactgaca aactgcacca 2400

atctgataat ccgagtcaaa tcgagaaaaa atccgattat ggtttggttt gatttggttt 2460

ggtgatggaa aaaaccccga catatttggt tttgtttggt tttaactaaa aaaagtcaaa 2520

ccgaaaccaa accaaccaga cattatatgt gtagaaattt taaatatatt taatacataa 2580

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aacgtattat ttcaaacttg ggcttataat ttttggatgc tccaataagt tttatagtcc 2700

ataaatgtta gtaactcaaa taaatcctaa accaaaatca aatcaatact aatgctaata 2760

aaagacattc aattcaattg tactatgaat gaaaatagtg ttggatatat atttttatag 2820

tttttccacg gtttagataa aatgtataac ttatttttct ttgagtatgg ttagtcatgt 2880

aaataatctt attaatcata attttaaatt atgtttattt ttattatggc ttattaataa 2940

tatttaattt tttgtgcaat tttattatct ttattgttga atattttagt acaatgccac 3000

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<210> 5

<211> 2283

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 5

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<210> 6

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<212> PRT

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Leu Arg Glu His Leu His Trp Ile Val Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr

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Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Lys Gln Lys Cys

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Arg Asn Phe Ala Asn Val Asn Asp Leu Gly Pro Pro Val Ala Ala Val

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<210> 7

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<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 7

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cccttatcat tatatatagt gcttcattca ctaaacagaa cccaaaaaaa aaaaaaaaaa 3600

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Gly Asp Leu Arg Ser Phe Phe Thr Met Ile Met Ile Asp Pro Asp Val

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Leu Leu Phe Lys Gln Lys Lys Arg Gln Thr Val Leu Thr Ala Pro Leu

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tttatcgccc cttcttttcc ttgtttactt ggagggaaaa taatacgatc tcgtcaagaa 2520

gatcaaaaat cttcaggctt gttatttagg aacttgttca aaaataccgt tttgaaaaga 2580

acatatgagt ttgttattag gtatttgact aaataggaac gatcatatgg tgttcggaca 2640

agaaaatttt tgtgaaaagg tccgcatact ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaatccg 2700

ccttgactct tgagtttctg cttcttggaa aaaacatttc ttcttttttt ttttgggttt 2760

tttgaccttt atatattaat taaagacacc actgagacac ttaattaaaa aattgtatat 2820

gggaacgcaa aaagaaaaaa aaacatgtgt tattaatctt atgtcaatgc catcagcaac 2880

tcaggaaaat acggtcgata tactgtgatt tgcttgcgaa aggagcaaag aagaaatctt 2940

ttgataatgt ttgttatgac gatgcactta acctaaaata agttaggggc cgtttggtaa 3000

atgaaataag gataataatc tcggaacaaa gtttaggatt aactttatcc catatttgat 3060

ttggagtatt agttaattgc gggataactt tcaaattaaa atagtaggat tagttatctc 3120

atatataaag taaaatacct aatcccaata atataatagg agacaactct aatttgcgta 3180

gacataatgt ccagtctcac tttgtatatt tgtcatgacg catattaagc atgaatgata 3240

atatttcgac aatcttgtgg catttgatta cactcagcaa attataaata tgtccaataa 3300

ttgcattaat aattacttgt tcctcttatc attatagtgc ctcattcact aaaccgaacc 3360

caaaagaaca ctgcaaaatg gtcatatcat gtagtaacag aaaaaaaaaa cgtactcgat 3420

tttatgataa aatcaaagtg acatatgtgt cgctttgata attgacaaat acctgaaaaa 3480

agaatttgac catctttaca ggattgtcac agacattcca ggcactacag attgctcgtt 3540

tggtatgtat ctttaaccca aagttcaagc tatgaaatag taacagcttt tctttttaat 3600

attttatttg tcttaaatac atattttcct tattataaat ttattcgcct agtggtaacg 3660

ggatcaggta ttgattcgta tttaattttt attgttcaac aaaaaagagt acaaaaagaa 3720

agaattgatt ttctacactt agatttatat gcaatatcta gaaatcagaa gatcagcaat 3780

gagtttacta attcatcgat gtgtatatcg cacaatcaaa tccaattact aataatactg 3840

atctaaaaat ttcgatcagg gagagaaata gttgggtatg aaatgccaag gccaaatatt 3900

ggaatccaca ggtttgtatt tctgctgttc aagcagaaga agaggcaaac attattgagt 3960

gcacctctct ccagggatcg atttaatacg cgcaaattct cagaagaaaa tgagcttggg 4020

tctcctgttg cagcagcttt cttcaattgc cagagggaaa ccgctgccag aaggcgttga 4080

<210> 11

<211> 2080

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 11

atgtctgtta cttataacag cagcaagcat gtctataatg gacatgaact ctttccttcc 60

tcagtcacct ctaaacctag ggttgaagtt catggaggtg atttgagatc tttctttaca 120

ctggtacata ctccttcgat tttcactact tttaatttat taggggcgaa gctagagttc 180

tagctacggg ttcgttgtat taattgtgtt aagaagtcca cttaagctgt cttttttaga 240

atttagaatc cataaactca aaatagtgac tttgcttcta aattaatttt tatgcatttc 300

tcttatatcg tgtatgtgaa tattgacccc ttattttttc ttttttacct taattgacag 360

atcatgatag acccagatgt tcctggtcct agtgatccat atctcaggga acatctacac 420

tggtaaagac atacgttttt taattactaa ctcattcaat tttatcgccc cttcttttcc 480

ttgtttactt ggagggaaaa taatacgatc tcgtcaagaa gatcaaaaat cttcaggctt 540

gttatttagg aacttgttca aaaataccgt tttgaaaaga acatatgagt ttgttattag 600

gtatttgact aaataggaac gatcatatgg tgttcggaca agaaaatttt tgtgaaaagg 660

tccgcatact ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaatccg ccttgactct tgagtttctg 720

cttcttggaa aaaacatttc ttcttttttt ttttgggttt tttgaccttt atatattaat 780

taaagacacc actgagacac ttaattaaaa aattgtatat gggaacgcaa aaagaaaaaa 840

aaacatgtgt tattaatctt atgtcaatgc catcagcaac tcaggaaaat acggtcgata 900

tactgtgatt tgcttgcgaa aggagcaaag aagaaatctt ttgataatgt ttgttatgac 960

gatgcactta acctaaaata agttaggggc cgtttggtaa atgaaataag gataataatc 1020

tcggaacaaa gtttaggatt aactttatcc catatttgat ttggagtatt agttaattgc 1080

gggataactt tcaaattaaa atagtaggat tagttatctc atatataaag taaaatacct 1140

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tttgtatatt tgtcatgacg catattaagc atgaatgata atatttcgac aatcttgtgg 1260

catttgatta cactcagcaa attataaata tgtccaataa ttgcattaat aattacttgt 1320

tcctcttatc attatagtgc ctcattcact aaaccgaacc caaaagaaca ctgcaaaatg 1380

gtcatatcat gtagtaacag aaaaaaaaaa cgtactcgat tttatgataa aatcaaagtg 1440

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atattttcct tattataaat ttattcgcct agtggtaacg ggatcaggta ttgattcgta 1680

tttaattttt attgttcaac aaaaaagagt acaaaaagaa agaattgatt ttctacactt 1740

agatttatat gcaatatcta gaaatcagaa gatcagcaat gagtttacta attcatcgat 1800

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atttaatacg cgcaaattct cagaagaaaa tgagcttggg tctcctgttg cagcagcttt 2040

cttcaattgc cagagggaaa ccgctgccag aaggcgttga 2080

<210> 12

<211> 148

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 12

Met Ser Val Thr Tyr Asn Ser Ser Lys His Val Tyr Asn Gly His Glu

1 5 10 15

Leu Phe Pro Ser Ser Val Thr Ser Lys Pro Arg Val Glu Val His Gly

20 25 30

Gly Asp Leu Arg Ser Phe Phe Thr Leu Ile Met Ile Asp Pro Asp Val

35 40 45

Pro Gly Pro Ser Asp Pro Tyr Leu Arg Glu His Leu His Trp Ile Val

50 55 60

Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr Asp Cys Ser Phe Gly Arg Glu Ile Val

65 70 75 80

Gly Tyr Glu Met Pro Arg Pro Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe

85 90 95

Leu Leu Phe Lys Gln Lys Lys Arg Gln Thr Leu Leu Ser Ala Pro Leu

100 105 110

Ser Arg Asp Arg Phe Asn Thr Arg Lys Phe Ser Glu Glu Asn Glu Leu

115 120 125

Gly Ser Pro Val Ala Ala Ala Phe Phe Asn Cys Gln Arg Glu Thr Ala

130 135 140

Ala Arg Arg Arg

145

<210> 13

<211> 5167

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 13

tgaagttgtg tttggacatg cgttgtattt gagaaaaaat tgaagttttg tgagaggaat 60

ttttttgacc ccaaaactac ataatttgaa ttattattta aaaaaaatga tcatattaca 120

tgaacaaaca gtgttttcaa tttatttttg aaaaaaacag ccaaaatcta gccaaatggg 180

agctaagtgt atgatcaaga ttcatgtccc aaatggaaaa gaatattaac aaaaaaaagg 240

gcagtaaaga agaggtggct acaataggat cgcgcaaaag aaagatggaa aaaagaggaa 300

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atggagaaaa gttaacctca ggtttctata aataggaatg tccaactttc atttactagt 420

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gttactgaat ttgtaataaa atatttatac atatttaata aattttctaa tataaataca 660

gaatctaaac aaaaactatt gagttcatcc gtaccgatac ctaatactct agctccaacc 720

ctgattctaa tataatgaaa ataaaaccac atctaggaag ttcatgacct gttcttacct 780

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cttcttacat ttgaatcttt ttccatcagc tagctgtttt gatagtagta aaaatgcgaa 1020

ggctcttctt actaatattt caatgaccaa tgaatttaga tggagaagca agttctatta 1080

aacgttcatg ctagaaaata acaagtataa tatttcattt tcattttata taacgctctt 1140

gtcttttctt gtctatttaa acaagaatca atttaactct cttaatgaca tgctctttag 1200

tcacagaaaa attataacaa attgaagaca ttagttatta atgttctttt cgcactaaaa 1260

gttttttaaa aattttttat cttaaatgtt tgtgactaat caaatatcat catataaaat 1320

taatctggga atatgacatt tttcaatata actaatatgg tgcaaattgc atacactacg 1380

caataaattt gtggttaggg tcatatcatt agcctgtcaa atcatcttta tccctctttc 1440

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tctagctgct aattagctaa acaatgactt taactcgttg tgcccagagg agaataacct 1560

ttatctctct tctcttttct ttgtttccat ctttaattta gacttctttt tttggttttt 1620

tatcccatat tcggtattta ttggagttcg attaaattca aatttataat aggaagtctc 1680

acattgagag tacgatgact ccatactcag gattcgaatt tgagatcttt agttaaagat 1740

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ctatatttta atccatttcc cacttccaat gatttaaaga agctatagga taggtgcatt 1860

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ctaaactata tatttactga gttactacta atagttttca ctcaatctat ttccactctt 1980

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agttttaaaa ttattttata tataaaataa ataaataaat aaataaataa actatcaatt 2400

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aatatgaatg aattttaaat gaagttctaa cttcttaaaa ataaacccta atataggtta 2580

ctatttttag taatgattga aattattatt aaaatatttt gttgaaaaca acatagagat 2640

aaaatttgat tattaaattt atgtattaca acaataataa ttattgaaaa tattgctaaa 2700

attttcatga aaggattcac ccataattat tagtataata gaaaactaaa aaattattaa 2760

gtctaaagtt ctagatctct atatttataa acgtataaac tgttatttta ttttctgaaa 2820

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aaataataaa gtgaacaaat gatgtagtag tatactgaat aagatatgtt tttttgtcat 2940

aaaataagta tatgcataac tcatctcaat aatttgctga ctccatctga gtcaaaatat 3000

cttctaaatt caagcgaaga taattatcta tcgcattatt tttttatcat taatataagg 3060

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ggatttattt aattataata tatttttatt cattttaaat taatttatat tttcaaatta 3240

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gtcgtttgat ttaattattg aactattact acaggggaca taagatgata attataattt 3360

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tattctttaa taatttttgc gcatcgggcg ggtactaata ctagttctta aaaaaagggt 3480

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cagtctaccc taatgcaaac attagcgact actttcacgg ctcgaactcg tcacttatag 3600

atcatacaga gacaaattta ctgttgctcc aagttccctt tcttatttta ttattcttat 3660

aatttctatt cttatattgt tataaattat ttttttcttt ttgatagatc atgactgacc 3720

ctgatgttcc tggtcctagc gatccatatc ttagggagca cttacattgg tatgtatcat 3780

actatcatca actttgaaag cttaaaacac tgtaaagttg atgattcaca ccaaagattt 3840

taatcgtcgt cgtgttactt ccatataaat cagtatcgag aagtatgtgg ccatcactcc 3900

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aacatgaagt tgactttaaa ttggataaat tgtttccact actaagctta gcgtataaat 4020

tagtcctttg actttcaatt ttgtataata atgcgaagct ttttttcttg taaatgcaat 4080

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gacactaaaa ccaagagtta gcttaatact tcatggacac acgttagcat aaaacatata 4200

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agtaagccaa attactacta acatagtgga cttaaagggt attaattttt tgttatttta 4320

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cctcgtttgg tatggaataa tattgtattc cttttttact tttctgccta gcatttctaa 4500

atagagtagt ccgatacacg aaatatttca ctttacgcag gatccagaaa taaaggacca 4560

taccccaatt gggtgtaata taagtagtca tgggcgcatg cagtatttta gtgacgggtt 4620

taattgcact cataattttg gacgcttagc ataaagtagt agatatgtat ccataacttc 4680

aaaaatataa taggttcaat gttaaaaatt tcaaaagaga tgaactcata gagtttaaat 4740

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tcaaaaccgt aacctatgaa tcacataaag ccaactttac catcgctcca agactcgcct 4860

tcttctgcct aacattacta ctgctaataa agagaatttt aataaaacta ctaatgctaa 4920

ttattattct ttgctaaaat cttcatcagg aaaagaagtg gtgggctatg aaatgccaat 4980

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agtgagcgca ccattatcca gggaccgatt caatacgcgg aaatacgcag aagaaaatga 5100

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<210> 14

<211> 3167

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 14

atggctcaaa tgacagatcc ccttgtgatt agtagggtgg ttggagatgt tgttgattat 60

ttctctccaa gtgttaagat gtgtgttatt tataacccca gtaagcatgt ctataatggg 120

catgaactct ttccatccct tgttacctct aaacctaagg ttgaagttca tggaggtgac 180

atgagatcct tctttacact ggtaattaat tcacactact tcaatagttt tcttgttctt 240

atattttatt atctatctat atatatataa taaaggagcg gcaaagccac catataaatg 300

acaaatgtaa acttttagga caaaactcca aaaaagttgg agttttaaaa ttattttata 360

tataaaataa ataaataaat aaataaataa actatcaatt caaattgggg agtagtttct 420

tactaatatg atagctatat ctatatctat atctatctat atatgtaaaa catttatatg 480

atgccaagtg gcataaccac tgataagatt tttaaatttg aatatgaatg aattttaaat 540

gaagttctaa cttcttaaaa ataaacccta atataggtta ctatttttag taatgattga 600

aattattatt aaaatatttt gttgaaaaca acatagagat aaaatttgat tattaaattt 660

atgtattaca acaataataa ttattgaaaa tattgctaaa attttcatga aaggattcac 720

ccataattat tagtataata gaaaactaaa aaattattaa gtctaaagtt ctagatctct 780

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tcatctcaat aatttgctga ctccatctga gtcaaaatat cttctaaatt caagcgaaga 1020

taattatcta tcgcattatt tttttatcat taatataagg caagacgaat ctatatctca 1080

tatgggactt tttaaataga tacatcttta taaatgaacc actttatgag ttttatcacg 1140

aattacaagt aagaataact tgaagattga aagaattttt ggatttattt aattataata 1200

tatttttatt cattttaaat taatttatat tttcaaatta tttgtagcaa cctatataat 1260

tatgatattt gagtattatc ttataagtta tttgatgatt gtcgtttgat ttaattattg 1320

aactattact acaggggaca taagatgata attataattt tgtagaaaca tatgatctaa 1380

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attagcgact actttcacgg ctcgaactcg tcacttatag atcatacaga gacaaattta 1620

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tataaattat ttttttcttt ttgatagatc atgactgacc ctgatgttcc tggtcctagc 1740

gatccatatc ttagggagca cttacattgg tatgtatcat actatcatca actttgaaag 1800

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ccatataaat cagtatcgag aagtatgtgg ccatcactcc atcaacgaca ccaaaatgaa 1920

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ttggataaat tgtttccact actaagctta gcgtataaat tagtcctttg actttcaatt 2040

ttgtataata atgcgaagct ttttttcttg taaatgcaat ttttgtcctt gagggtttgc 2100

aacttctttt ttaaggaaaa aaaaaagact aaagttgtgt gacactaaaa ccaagagtta 2160

gcttaatact tcatggacac acgttagcat aaaacatata accgatattc aaaattacaa 2220

aaatgataga atcataattt ttgtttctat ttaaaaagga agtaagccaa attactacta 2280

acatagtgga cttaaagggt attaattttt tgttatttta atgatatctg ttcatgactt 2340

cttgactact tctactcctt tatatcaatc aaattataat ttacttcgtt tgactatcta 2400

atttacaggg taattacaga cattccaggc actacagatt cctcgtttgg tatggaataa 2460

tattgtattc cttttttact tttctgccta gcatttctaa atagagtagt ccgatacacg 2520

aaatatttca ctttacgcag gatccagaaa taaaggacca taccccaatt gggtgtaata 2580

taagtagtca tgggcgcatg cagtatttta gtgacgggtt taattgcact cataattttg 2640

gacgcttagc ataaagtagt agatatgtat ccataacttc aaaaatataa taggttcaat 2700

gttaaaaatt tcaaaagaga tgaactcata gagtttaaat catgatccgc ctctgtaggc 2760

agtctaccct aatgaaagaa tcagtggctg atttcacagt tcaaaaccgt aacctatgaa 2820

tcacataaag ccaactttac catcgctcca agactcgcct tcttctgcct aacattacta 2880

ctgctaataa agagaatttt aataaaacta ctaatgctaa ttattattct ttgctaaaat 2940

cttcatcagg aaaagaagtg gtgggctatg aaatgccaat gcctaacatt ggaatccata 3000

ggtttgtgtt tctgctcttc aagcagaaga agaggcaaac agtgagcgca ccattatcca 3060

gggaccgatt caatacgcgg aaatacgcag aagaaaatga gcttggctct ccagttgctg 3120

ctgttttctt caactgccaa agggaaaccg cggccagaaa gcgttga 3167

<210> 15

<211> 173

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 15

Met Ala Gln Met Thr Asp Pro Leu Val Ile Ser Arg Val Val Gly Asp

1 5 10 15

Val Val Asp Tyr Phe Ser Pro Ser Val Lys Met Cys Val Ile Tyr Asn

20 25 30

Pro Ser Lys His Val Tyr Asn Gly His Glu Leu Phe Pro Ser Leu Val

35 40 45

Thr Ser Lys Pro Lys Val Glu Val His Gly Gly Asp Met Arg Ser Phe

50 55 60

Phe Thr Leu Ile Met Thr Asp Pro Asp Val Pro Gly Pro Ser Asp Pro

65 70 75 80

Tyr Leu Arg Glu His Leu His Trp Val Ile Thr Asp Ile Pro Gly Thr

85 90 95

Thr Asp Ser Ser Phe Gly Lys Glu Val Val Gly Tyr Glu Met Pro Met

100 105 110

Pro Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Leu Leu Phe Lys Gln Lys

115 120 125

Lys Arg Gln Thr Val Ser Ala Pro Leu Ser Arg Asp Arg Phe Asn Thr

130 135 140

Arg Lys Tyr Ala Glu Glu Asn Glu Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val

145 150 155 160

Phe Phe Asn Cys Gln Arg Glu Thr Ala Ala Arg Lys Arg

165 170

<210> 16

<211> 4569

<212> DNA

<213> 普通烟草

<220>

<221> misc_feature

<222> (1896)..(1896)

<223> n是a、c、g或t

<400> 16

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aatgttggcc ggaaagatgc ctgtgggtgc tgtttggggg aaaaaaacaa aagctcgggt 120

aaattatcaa tacccgagtt ggttcctttc gtttgccact ggaccaactc ctgattttgc 180

ttatatatgg gttccaaact aaaaatactt atatatttaa taaatttatc aatacaaata 240

caaggctcgg gtaaaagtta ttaggttctc ggaaacccat acccgatact atggatccgc 300

ccctgcttat ccctaccttg tgtgaggtag aaacgctttt gataaggtta tttaaaagta 360

aaagaataag tttaatgtga caatttgaat ggttgagaca acatgccaaa agctaattta 420

agggatttta tttgacattt atatatggga gagaagaaaa agtattgccc agtatattat 480

tttaagctct acaaccaatc aagaatcaat tcctagaatc cattcaggtg tcaaagaata 540

ctgacatgat ataataaaat acaatttata tcacatcagt atttgctttt tcttgggaga 600

ttagataaaa agagatcaga aatggagttt tatggtacta ggagaattca aggatttact 660

acttttgtgg cacaacataa gctcccaatt tttttaagga atttataaaa gttggttttc 720

taagtactta caattgtcaa atttacaagt catttagtac ataaaaagaa acccaatgat 780

gaggttcagg aaaaaaaaaa atcctatact gtgatttcct agttggcgtt cggacataaa 840

aattatgaaa ttccgaaaaa aaaaattgtt ttaagttgaa aatggtatgt gaaaattaaa 900

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gaaaaattaa aattttcatg atcaaatgtt gattccgaaa aaagtgaaaa aattcgaaaa 1080

aaagattttt ttttttatgg ccaaacagac ctaactagtt tcattttagt cattaagggt 1140

agaattgaaa gaattttaaa ttaaagtatt tttagatata taaaaataat gtacttttta 1200

aaacacacaa aaaaaggagt gccatatatt aatttaatat aaggatatat agtggatgca 1260

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aacaagcgaa ttacaactct gtcggataat cgtctgaaac cctaaaaagc tactgaaatg 1620

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gagggttggg gagtaggacc tcaaaaacaa agaattttaa tactttggag tttccttagg 1800

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tatatatata tatatatata tatatatata tatatnatat aaggtgtcca tctgatcaag 1920

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taggagatgt tcttgattca tttagtccta taatgaaaat gacaatatca tataacaaca 2100

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agacgctaa 4569

<210> 17

<211> 2569

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 17

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<210> 18

<211> 172

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 18

Met Ala Arg Ser Leu Glu Pro Leu Ile Val Gly Arg Val Val Gly Asp

1 5 10 15

Val Leu Asp Ser Phe Ser Pro Ile Met Lys Met Thr Ile Ser Tyr Asn

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Asn Lys Leu Val Cys Asn Gly His Glu Leu Leu Pro Ser Val Val Thr

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Ala Arg Pro Lys Val Glu Val Gln Gly Gly Asp Leu Arg Thr Phe Phe

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<210> 19

<211> 4652

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 19

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<211> 2653

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agaactttct tcacactggt aatttttctt gattttttcc ttaattccaa gatcatcaag 240

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ctgttataac atatgttact tgttacaatt attagttttc cggtcaatag tatattatgt 540

aattttcttt gaagtgactt gattgttatt ttttcacatt atcagtgcat aaaacttata 600

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atattttctt ggagtttttt aatcttatta gaaatttact taccaaaaat ttagagaact 2160

tgctagaaca atataattga taattcttca tatatattgt cttcgagctg tagaaacagc 2220

cactaatgtt tgcattagga tatgttgtct acatcacact tattgtgtgt tgccctcacc 2280

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tccaaggcca aatattggaa tccataggtt tgtatttgta cttttcaagc aaagacgaag 2520

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<210> 21

<211> 172

<212> PRT

<213> 普通烟草

<400> 21

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1 5 10 15

Val Leu Asp Ser Phe Ser Pro Ile Val Lys Met Thr Ile Thr Tyr Asn

20 25 30

Asn Lys Leu Val Cys Asn Gly His Glu Phe Phe Pro Ser Ile Val Thr

35 40 45

Ser Arg Pro Lys Val Glu Val Gln Gly Gly Asp Leu Arg Thr Phe Phe

50 55 60

Thr Leu Val Met Thr Asp Pro Asp Val Pro Gly Pro Ser Asp Pro Tyr

65 70 75 80

Leu Arg Glu His Leu His Trp Ile Val Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr

85 90 95

Asp Ala Thr Phe Gly Arg Glu Leu Val Ser Tyr Glu Ile Pro Arg Pro

100 105 110

Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Lys Gln Arg Arg

115 120 125

Arg Gln Ser Val Ser Pro Pro Thr Ser Arg Glu Asn Phe Asn Thr Arg

130 135 140

Asn Phe Ala Glu Glu Asn Asp Leu Ser Gln Pro Val Ala Ala Val Phe

145 150 155 160

Phe Asn Ala Gln Arg Glu Thr Ala Ala Arg Arg Arg

165 170

<210> 22

<211> 58

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 22

agttaaaatg acagtcactt acaacaataa acaagtttgc aatggccaag agctcttc 58

<210> 23

<211> 58

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 23

gaagagctct tggccattgc aaacttgttt attgttgtaa gtgactgtca ttttaact 58

<210> 24

<211> 482

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 24

ggtaccacaa gtttgtacaa aaaagcaggc taagcttgtc gaccatggag ttaaaatgac 60

agtcacttac aacaataaac aagtttgcaa tggccaagag ctcttctggt aacctttaat 120

gtttaaccgt tcacatttct aatatttact tatttgtaac atgtcgtcac gtgttagttt 180

cattcttttt atgaaccaaa catgcatgca aagatatttt tagatatttg gacggcgagt 240

gagatttgaa actaggaccg tttgcctgat acaatattaa aatatgtaac cattttatgt 300

acaagtttaa actgttgata gtagcatatt ttttactttt atttaagtat actatattcc 360

aacaggtaag ttaacgaaga gctcttggcc attgcaaact tgtttattgt tgtaagtgac 420

tgtcatttta actggcgcgc ccgggcaatt gacccagctt tcttgtacaa agtggtgagc 480

tc 482

<210> 25

<211> 88

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 25

tgcagtcact attagaccta gggttgaagt tcaaggtggt gatatgagaa ctttcttcac 60

attggtcatc acagatcctg atgtacct 88

<210> 26

<211> 88

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 26

aggtacatca ggatctgtga tgaccaatgt gaagaaagtt ctcatatcac caccttgaac 60

ttcaacccta ggtctaatag tgactgca 88

<210> 27

<211> 88

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 27

tgcggtcacc attagaccta gggttgaggt tcaaggtggt gatatgagaa ctttcttcac 60

attggtcatg acagaccctg atgttcct 88

<210> 28

<211> 88

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 28

aggaacatca gggtctgtca tgaccaatgt gaagaaagtt ctcatatcac caccttgaac 60

ctcaacccta ggtctaatgg tgaccgca 88

<210> 29

<211> 78

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 29

catgaactct ttccttcctc agtcacctct aaacctaggg ttgaagttca tggaggtgat 60

ttgagatctt tctttaca 78

<210> 30

<211> 78

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 30

tgtaaagaaa gatctcaaat cacctccatg aacttcaacc ctaggtttag aggtgactga 60

ggaaggaaag agttcatg 78

<210> 31

<211> 522

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 31

ggtaccacaa gtttgtacaa aaaagcaggc taagcttgtc gaccatggca tgaactcttt 60

ccttcctcag tcacctctaa acctagggtt gaagttcatg gaggtgattt gagatctttc 120

tttacatggt aacctttaat gtttaaccgt tcacatttct aatatttact tatttgtaac 180

atgtcgtcac gtgttagttt cattcttttt atgaaccaaa catgcatgca aagatatttt 240

tagatatttg gacggcgagt gagatttgaa actaggaccg tttgcctgat acaatattaa 300

aatatgtaac cattttatgt acaagtttaa actgttgata gtagcatatt ttttactttt 360

atttaagtat actatattcc aacaggtaag ttaactgtaa agaaagatct caaatcacct 420

ccatgaactt caaccctagg tttagaggtg actgaggaag gaaagagttc atgggcgcgc 480

ccgggcaatt gacccagctt tcttgtacaa agtggtgagc tc 522

<210> 32

<211> 121

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 32

gaaagaaata gttggctatg aaatgccaag gccaaatatt ggaattcaca ggtttgtatt 60

tctgctgttc aagcagaaga agaggcaaac agtattgact gcacctctct ccagggatcg 120

a 121

<210> 33

<211> 121

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 33

tcgatccctg gagagaggtg cagtcaatac tgtttgcctc ttcttctgct tgaacagcag 60

aaatacaaac ctgtgaattc caatatttgg ccttggcatt tcatagccaa ctatttcttt 120

c 121

<210> 34

<211> 110

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 34

gagagaaata gttgggtatg aaatgccaag gccaaatatt ggaatccaca gcagctttct 60

tcaattgcca gagggaaacc gctgccagaa ggcgttgaag aagatgttta 110

<210> 35

<211> 110

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 35

taaacatctt cttcaacgcc ttctggcagc ggtttccctc tggcaattga agaaagctgc 60

tgtggattcc aatatttggc cttggcattt catacccaac tatttctctc 110

<210> 36

<211> 138

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 36

atggctcaaa tgacagatcc ccttgtgatt agtagggtgg ttggagatgt tgttgattat 60

ttctctccaa gtgttaagat gtgtgttatt tataacccca gtaagcatgt ctataatggg 120

catgaactct ttccatcc 138

<210> 37

<211> 138

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 37

ggatggaaag agttcatgcc cattatagac atgcttactg gggttataaa taacacacat 60

cttaacactt ggagagaaat aatcaacaac atctccaacc accctactaa tcacaagggg 120

atctgtcatt tgagccat 138

<210> 38

<211> 642

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 38

ggtaccacaa gtttgtacaa aaaagcaggc taagcttgtc gaccatggat ggctcaaatg 60

acagatcccc ttgtgattag tagggtggtt ggagatgttg ttgattattt ctctccaagt 120

gttaagatgt gtgttattta taaccccagt aagcatgtct ataatgggca tgaactcttt 180

ccatcctggt aacctttaat gtttaaccgt tcacatttct aatatttact tatttgtaac 240

atgtcgtcac gtgttagttt cattcttttt atgaaccaaa catgcatgca aagatatttt 300

tagatatttg gacggcgagt gagatttgaa actaggaccg tttgcctgat acaatattaa 360

aatatgtaac cattttatgt acaagtttaa actgttgata gtagcatatt ttttactttt 420

atttaagtat actatattcc aacaggtaag ttaacggatg gaaagagttc atgcccatta 480

tagacatgct tactggggtt ataaataaca cacatcttaa cacttggaga gaaataatca 540

acaacatctc caaccaccct actaatcaca aggggatctg tcatttgagc catggcgcgc 600

ccgggcaatt gacccagctt tcttgtacaa agtggtgagc tc 642

<210> 39

<211> 93

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 39

tagtcctata gtgaaaatga caattactta taacaacaaa ttagtgtgca atggtcatga 60

attctttcct tctattgtca cttctagacc taa 93

<210> 40

<211> 93

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 40

ttaggtctag aagtgacaat agaaggaaag aattcatgac cattgcacac taatttgttg 60

ttataagtaa ttgtcatttt cactatagga cta 93

<210> 41

<211> 552

<212> DNA

<213> 普通烟草

<400> 41

ggtaccacaa gtttgtacaa aaaagcaggc taagcttgtc gaccatggta gtcctatagt 60

gaaaatgaca attacttata acaacaaatt agtgtgcaat ggtcatgaat tctttccttc 120

tattgtcact tctagaccta atggtaacct ttaatgttta accgttcaca tttctaatat 180

ttacttattt gtaacatgtc gtcacgtgtt agtttcattc tttttatgaa ccaaacatgc 240

atgcaaagat atttttagat atttggacgg cgagtgagat ttgaaactag gaccgtttgc 300

ctgatacaat attaaaatat gtaaccattt tatgtacaag tttaaactgt tgatagtagc 360

atatttttta cttttattta agtatactat attccaacag gtaagttaac ttaggtctag 420

aagtgacaat agaaggaaag aattcatgac cattgcacac taatttgttg ttataagtaa 480

ttgtcatttt cactatagga ctaggcgcgc ccgggcaatt gacccagctt tcttgtacaa 540

agtggtgagc tc 552

Claims

1.一种突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其具有降低的编码顶生花1(TFL1)的基因的表达或降低的由TFL1编码的蛋白质的活性，所述TFL1包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：

(i)包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或

(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或

(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；

其中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性与对照植物相比降低，在所述对照植物中(i)、(ii)或(iii)中所示的所述多核苷酸或所述多肽的表达或活性不降低。

2.根据权利要求1所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其中所述多核苷酸的所述降低表达或所述多肽的所述降低活性与所述对照植物相比合适地缩短了到开花时间，其中所述到开花时间缩短至少8％或至少20％；和/或

其中所述植物在编码TFL1的多核苷酸序列中包括至少一个基因改变。

3.根据权利要求1或2所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其中所述植物在所述编码TFL1的多核苷酸序列中包括至少一个突变；合适地，

其中所述至少一个突变选自由以下组成的群组：在SEQ ID NO:9中的位置T143或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120或G129或P131处的突变；或在SEQ ID NO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合；合适地，其中所述突变是SEQ IDNO:9中的T143I或G129R或G129E或H84STOP；或其中所述突变是SEQ ID NO:12中的R120C或G129E或P131S；或其中所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L或H86STOP，或其两个或更多个的组合。

4.根据权利要求1或2所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其中所述植物在SEQ ID NO:12中的位置P131处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P131S。

5.根据权利要求1或2或4所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其中所述植物在SEQ ID NO:21中的位置P110处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P110L。

6.根据前述权利要求中任一项所述的突变型、非天然存在的或转基因植物或其部分，其中所述植物是或源自烟草(Nicotiana)属，合适地，其中所述植物是普通烟草(Nicotianatabacum)。

7.一种源自或可源自根据权利要求1至6中任一项所述的植物的植物材料；或一种包括根据权利要求1至6中任一项所述的植物的至少一部分或所述植物材料的植物产品。

8.一种缩短植物的到开花时间的方法，其包括通过降低所述植物中的至少一种TFL1基因的表达或至少一种由其编码的蛋白质的活性来修饰所述植物；合适地，其中所述方法包括

(a)提供植物或其部分，其包括：

(ii)由(i)中所示的所述多核苷酸编码的多肽；或

(iii)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；和

(b)降低所述植物中的所述TFL1基因的所述表达或所述TFL1蛋白的所述活性；和

(c)获得与对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物，在所述对照植物中所述TFL1基因的表达或所述TFL1蛋白的活性不降低。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述TFL1表达或所述TFL1活性通过选自由以下组成的群组的方法来降低：a)突变所述植物中的所述TFL1基因；b)表达所述植物中的外源多核苷酸或多肽；和c)消除所述植物中的所述TFL1基因，或其一个或多个的组合；合适地，

其中所述植物在选自由以下组成的群组的位置处突变：在SEQ ID NO:9中的位置T143或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120或G129或P131处的突变；或在SEQ IDNO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合；合适地，其中所述突变是SEQ ID NO:9中的T143I或G129R或G129E或H84STOP；或其中所述突变是SEQ ID NO:12中的R120C或G129E或P131S；或其中所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L或H86STOP，或其两个或更多个的组合。

10.一种产生与对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物材料的方法，所述方法包括：

(a)提供根据权利要求1至6中任一项所述的植物或根据权利要求7所述的植物材料；

(b)从所述植物收获植物材料；

(c)任选地烘烤或干燥所述植物材料一段时间；和

(d)获得与所述对照植物相比具有缩短的到开花时间的植物材料。

11.一种通过根据权利要求8至10中任一项所述的方法获得或可获得的植物材料。

12.一种分离的多核苷酸序列，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列。

13.一种由根据权利要求12所述的多核苷酸编码的分离的多肽或与SEQ ID NO:9或SEQID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；合适地，其中所述分离的多肽包括至少一个选自由以下组成的群组的突变：在SEQ ID NO:9中的位置T143或G129处的突变；或在SEQ ID NO:12中的位置R120或G129或P131处的突变；或在SEQ ID NO:21中的位置P110或H86处的突变，或其两个或更多个的组合；合适地，其中所述突变是SEQ ID NO:9中的T143I或G129R或G129E或H84STOP；或其中所述突变是SEQ ID NO:12中的R120C或G129E或P131S；或其中所述突变是SEQ ID NO:21中的P110L或H86STOP，或其两个或更多个的组合。

14.根据权利要求13所述的分离的多肽，其中其中分离的多肽在SEQ ID NO:12中的位置P131处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P131S。

15.根据权利要求13或14所述的分离的多肽，其中所述植物在SEQ ID NO:21中的位置P110处包括至少一个突变，合适地，其中所述突变是P110L。

16.一种用于抑制TFL-1的表达的RNAi构建体，其包括与所述TFL-1基因的mRNA上的靶序列杂交并且通过RNA干扰机制抑制所述TFL-1基因的所述表达的序列，其中所述靶序列选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:7、8、10、11、19和/或20。

17.一种双链RNA，其包括彼此至少部分互补的至少两个序列，并且其中有义链包括第一序列并且反义链包括第二序列，并且其中所述序列中的至少一个包括TFL1 RNA的至少10个邻接核苷酸，合适地，其中所述序列中的至少一个包括TFL1 RNA的21至23个邻接核苷酸；合适地，其中所述双链RNA包括

具有TFL1的至少10个邻接核苷酸，合适地TFL-1的21至23个邻接核苷酸的第一序列；

第二序列；和

置于与所述第一序列相同的定向、具有所述第一序列的反向互补序列的第三序列，

其中所述第二序列置于所述第一序列与所述第三序列之间，并且所述第二序列可操作地连接于所述第一序列和所述第三序列；合适地，

其中所述第一序列选自由以下组成的群组：SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20，和/或其中所述第三序列是SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20的对应序列的反向互补序列；合适地，

其中所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:22并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:23；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:25并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:26；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:27并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:28；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:29并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:30；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:32并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:33；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:34并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:35；或所述第一序列包括或其组成为SEQ IDNO:36并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:37；或所述第一序列包括或其组成为SEQ ID NO:39并且所述第三序列包括或其组成为SEQ ID NO:40；合适地，

其中所述双链RNA包括或其组成为选自由以下组成的群组的序列：SEQ ID NO:24、SEQID NO:35、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:41。

18.一种分离的多核苷酸序列，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的至少21个邻接核苷酸的序列，合适地，其中所述序列包括、其组成为或其组成基本上为至少21至23个邻接核苷酸。

19.一种鉴定调节TFL1多核苷酸的表达或TFL1多肽的活性的分子的方法，所述方法包括：

(a)使所述分子与植物接触，所述植物包含包括以下、由以下组成或基本上由以下组成的多核苷酸序列：与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ IDNO:19或SEQ ID NO:20具有至少72％序列一致性的序列；或由所述多核苷酸编码的多肽；或与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:21具有至少72％序列一致性的多肽；

(b)监测以下中的一个或多个：(i)所述植物中的所述TFL1多核苷酸的表达水平；(ii)所述植物中的所述TFL1多肽的表达水平；(iii)所述植物中的所述TFL1多肽的活性的调节；或(iv)所述植物中的所述TFL1多核苷酸的活性的调节；和

(c)鉴定调节所述TFL1多核苷酸的所述表达或所述TFL1多肽的所述活性的所述分子。