[go: up one dir, main page]

CN108135841A - Il-2的药物组合物 - Google Patents

Il-2的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN108135841A
CN108135841A CN201680061595.9A CN201680061595A CN108135841A CN 108135841 A CN108135841 A CN 108135841A CN 201680061595 A CN201680061595 A CN 201680061595A CN 108135841 A CN108135841 A CN 108135841A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
interleukin
liquid pharmaceutical
injection
surfactant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680061595.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108135841B (zh
Inventor
热雷米·马里奥
米歇尔·蒂里
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Altu Pharmaceutical Co
Original Assignee
Altu Pharmaceutical Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Altu Pharmaceutical Co filed Critical Altu Pharmaceutical Co
Publication of CN108135841A publication Critical patent/CN108135841A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108135841B publication Critical patent/CN108135841B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
    • A61J1/05—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes for collecting, storing or administering blood, plasma or medical fluids ; Infusion or perfusion containers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及Il‑2的液体药物组合物及其在治疗自身免疫性和炎性病症中的应用。还描述了所述组合物的制备方法和填充有所述组合物的递送装置。

Description

IL-2的药物组合物
技术领域
本发明涉及包含白细胞介素-2(IL-2)的新药物组合物以及它们在治疗自身免疫相关性病症或炎性病症中的应用。
背景技术
白细胞介素-2是最初被描述为让T淋巴细胞活化和增殖的一种细胞因子。它已被临床用于刺激某些癌症和感染性疾病中的效应子免疫应答。白细胞介素-2在1998年以商品名被批准用于治疗转移性肾细胞癌。的剂量学包括间歇施用高剂量的IL-2，对于70kg的患者通常每8h 42.106UI，通过持续输注或每天皮下注射，为期5天，这可以在停药期之后重复几次。
最近显示，白细胞介素-2对于Treg的存活和激活是必不可少的。在比低10至100倍的剂量下，IL-2不刺激免疫力，但通过特异性激活调节免疫的细胞——调节性T细胞(Treg)来恢复自身耐受性。IL-2因此对Treg/Teff平衡施加选择性生物效应，Treg/Teff平衡是免疫稳态的关键免疫驱动因素。这样的性质为IL2在治疗本质上归因于Treg功能不全的自身免疫性疾病和炎性病症(AID)中的应用铺平了道路(Klatzmann&Abbas，Nature Reviews Immunology，2015，15，283–294)。目前正在研究低剂量的IL-2治疗几种自身免疫性和炎性疾病例如1型糖尿病。
白细胞介素-2在水和氧存在下容易受到降解。根据现有技术，白细胞介素-2在溶液中可经历化学降解和物理不稳定性。因此，开始开发冻干制剂来避免这样的降解反应。在这方面，为了鉴定改善冻干制剂中IL-2的稳定性的稳定剂，进行了若干研究。例如，Hora等人(Develop.Biol.Standard，1991，vol 74，295-306)描述了使用无定形赋形剂如氨基酸、非离子表面活性剂、羟丙基-β-环糊精或血清白蛋白作为用于配制白细胞介素-2的冻干稳定剂。为了产生诸如IL-2等的细胞因子的稳定标准品，世界卫生组织(WHO)推荐在适当的赋形剂和缓冲剂存在下冷冻干燥所述蛋白质，并将所得制剂在干燥条件、低温和惰性气氛下储存(Mire-Sluis等，Journal of immunological methods，1998，216，103-116)。
值得注意的是，用于治疗转移性肾细胞癌的是以包含白细胞介素-2、甘露醇、十二烷基硫酸钠和磷酸二氢钠二水合物的冻干组合物销售的，其在惰性条件下包装在小瓶中并且必须储存在2℃至8℃。甘露醇作为冻干稳定剂存在。要用注射用水复溶。一旦复溶，应立即使用并在任何情况下在复溶后24小时内使用(参见例如在英国的产品特性总结(Summary of Product Characteristicsforin United Kingdom)，2015年1月20日，Novartis Pharmaceuticals UKLtd)。
这样的冻干制剂不适合自我给药和长期治疗，因为所述制剂必须复溶并且一旦复溶只能在短时间内储存。
因此需要白细胞介素-2的替代药物组合物。
发明内容
本发明涉及一种适合于注射给患者的液体药物组合物，其基本上由浓度为0.1至20百万IU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂、表面活性剂和任选的赋形剂在水中组成，所述赋形剂优选地选自抗氧化剂、渗透压调节剂(osmolarity adjusting agent)和防腐剂。白细胞介素-2可以存在的浓度为2至12MIU/mL，优选4至10MUI/mL。在某些实施方式中，所述表面活性剂是阴离子表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)和十二烷基硫酸锂。所述表面活性剂可以存在的浓度为约0.05至0.5mg/mL。表面活性剂与白细胞介素-2的重量比通常为0.04至5，例如0.1至3.0。
本发明的液体药物组合物优选从非冻干的白细胞介素-2获得。
在一些实施方式中，所述液体药物组合物不含甘露醇和/或白蛋白。
白细胞介素-2可以是重组人白细胞介素-2或其变体，例如阿地白介素。
在其它或另外的实施方式中，所述液体药物组合物基本上由下列组成
-剂量为2至12MIU/mL、例如4至10MUI/mL的白细胞介素-2，
-浓度为约0.05至0.5mg/mL的十二烷基硫酸钠(SDS)，
-以5mM至25mM范围内的浓度存在的选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠及其组合的缓冲剂，
-任选的渗透压调节剂例如NaCl，和
-水。
本发明的液体药物组合物优选在5℃下稳定至少6个月的时期。
在一些可替选的或另外的实施方式中，本发明的液体药物组合物可以具有至少一个以下特征：
-所述组合物的pH从7.1至7.8，优选为pH 7.5±0.2，
-所述缓冲剂是磷酸盐缓冲剂，
-白细胞介素-2是阿地白介素，
-所述液体药物组合物适合于包装在用于注射的递送装置例如注射器或笔中，
-所述药物组合物不含任何冻干稳定剂。
本发明还涉及本发明的液体药物组合物在通过皮下途径给药中的应用。通常，本发明的液体药物组合物可用于治疗或预防自身免疫性、免疫相关性或炎性病症。在这样的用途中，所述组合物通常通过皮下途径以等于0.1MIU至3MIU的白细胞介素-2剂量的量给药。
本发明的另一个目的是如上所述的液体药物组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
a.提供纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液，其优选含有大于20mUI/mg的白细胞介素-2；
b.通过添加一种或几种赋形剂来配制所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液，以获得白细胞介素-2的所述液体药物组合物；
c.任选将所述液体药物组合物包装在小瓶、药筒(cartridge)或用于注射的递送装置例如注射器或笔中。
本发明还涉及一种药物试剂盒，其包含填充有所述液体组合物的小瓶或药筒，和用于皮下注射的工具例如注射器、针头和/或自动注射器装置。本发明的另一个目的是一种用于注射、优选用于皮下注射的递送系统，其填充有如上限定的液体组合物。
具体实施方式
本发明人证明了有可能制备一种白细胞介素-2液体水性制剂，其是注射即用型的并且其可以在2℃和8℃之间的温度下储存数月而没有任何显著的降解或生物活性损失。发明人由此通过开发高度稳定的白细胞介素-2水性药物组合物而克服了偏见，而现有技术教导了白细胞介素-2在水中的稳定性差并且明确地导致了冻干制剂的发展。
本发明人开发的该药物组合物非常简单并且不依赖于使用复杂且昂贵的赋形剂。所述制剂含有很少的赋形剂，通常为表面活性剂、缓冲剂和任选的赋形剂。所述任选的赋形剂可以是，例如，抗氧化剂、防腐剂或渗透压调节剂。所述制备方法不需要任何冻干白细胞介素-2的步骤。事实上，所述蛋白质的冻干是不需要的，并且应该避免，因为它可能有损于白细胞介素-2在复溶溶液中的生物学活性和稳定性。
本发明的液体药物组合物包含低浓度的白细胞介素-2，例如1.106至5.106IU/mL。本发明人令人惊讶地表明，即使在这些低浓度下，Il-2在本发明的液体组合物中也可以是稳定的。本发明的液体药物组合物因此特别适用于长期治疗。所述组合物适合于频繁给药，并可用于治疗AID，例如1型糖尿病、多发性硬化症和类风湿性关节炎。因为本发明的药物组合物是注射即用型的，所以所述药物组合物可以装在笔装置或注射器中，因此特别适于自我给药。
此外，与相比，本发明的液体药物组合物预期在注射部位产生更少的局部副作用，例如局部皮肤反应(发红和/或肿胀)。
最后，本发明的液体药物组合物的制备方法比现有技术中描述的方法更简单和更快速，因为白细胞介素-2在提纯步骤后立即配制而没有任何冻干。
■根据本发明的药物组合物
本发明的第一个目的是适合于注射给患者的水性液体药物组合物，其包含0.1.106至20.106IU/mL的白细胞介素-2。
在本文中使用时，术语“适合于注射”意指所述液体药物组合物可以通过注射、优选通过静脉内、肌内、皮内或皮下途径向患者给药。
在优选的实施方式中，本发明的液体药物组合物适合于皮内或皮下注射。
优选地，本发明的水性液体药物组合物是即用型的，特别是注射即用型的。在本文中使用时，“注射即用型”意指所述液体药物组合物可以直向患者给药而不经过任何进一步的配制步骤。
在本文中使用时，“配制步骤”是指向组合物添加一种或几种赋形剂。
优选地，存在于本发明液体药物组合物中的白细胞介素-2未经过冷冻干燥(或冻干过程)。在本文中使用时，术语“冷冻干燥”或“冻干”是指脱水过程，其包括冷冻含水材料并减压以允许通过升华来去除材料中的冻结水。
例如，是通过冻干获得的白细胞介素-2的固体药物组合物。
因此，本发明的液体药物组合物优选从非冻干的白细胞介素-2、即从未经任何冻干过程的白细胞介素-2制备。在更一般性的方面，本发明的液体药物组合物可通过即使在冻干稳定剂存在下也没有白细胞介素-2的冷冻干燥或冻干步骤的制造方法来制备。下面进一步描述用于制备本发明的液体药物组合物的合适方法。
在本文中使用时，白细胞介素-2(IL-2)包括哺乳动物野生型白细胞介素-2及其变体。优选地，IL-2是人IL-2或其变体。
IL-2的活性变体已在文献中公开。天然IL-2的变体可以是其片段、类似物和衍生物。“片段”意指仅包含完整多肽序列的一部分的多肽。“类似物”指示包含具有一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的天然多肽序列的多肽。突变蛋白和假肽是类似物的具体实例。“衍生物”包括任何修饰的天然IL-2多肽或者其片段或类似物，例如糖基化、磷酸化、与另一种多肽或分子融合、聚合等，或通过化学或酶促修饰或加成来改善IL-2的性质(例如，稳定性、特异性等)。参比IL-2多肽的活性变体一般与所述参比IL-2多肽、例如成熟野生型人IL-2的氨基酸序列具有至少75％、优选至少85％、更优选至少90％的氨基酸序列同一性。
用于确定变体IL-2多肽是否有活性的方法在本领域中是现成的并且在本发明中具体描述。活性变体最优选是刺激Treg的变体。
IL-2变体的实例公开在例如，EP109748、EP136489、US4,752,585；EP200280或EP118,617中。
IL-2可通过DNA重组技术产生。用于表达编码IL-2的重组DNA的宿主生物可以是原核生物(细菌例如大肠杆菌)或真核生物(例如酵母、真菌、植物或哺乳动物细胞)。产生IL-2的方法已经描述在例如US4,656,132；US4,748,234；US4,530,787；或US4,748,234中，它们通过引用并入本文。
或者，IL-2可通过化学肽合成来产生。例如，可通过以下来产生IL-2：平行合成较短的肽，所述较短的肽随后被组装以产生具有正确的二硫键的完整IL-2序列。白细胞介素-2的全合成在例如Asahina等人，Angewandte Chemie International Edition，2015，54卷，28期，8226-8230中说明，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方式中，IL-2是与成熟野生型人IL-2具有至少80％、优选至少90％、95％、98％、99％序列同一性的变体。所述变体可以是糖基化的或非糖基化的。人IL-2的核苷酸序列和氨基酸序列分别公开在例如，Genbank参考号3558或P60568中。
IL-2是可商购的，包括用于药物用途，并且它被授权用于人类患者。合适的商业形式包括，例如，
-(阿地白介素)是一种重组的未糖基化的去丙氨酰-1，丝氨酸-125人白细胞介素-2，在大肠杆菌(E.coli)中产生。
-是在酵母中产生的重组人IL-2。
在一种优选实施方式中，IL-2是阿地白介素。阿地白介素是的活性成分。阿地白介素是成熟人IL-2的未糖基化变体，与成熟人IL-2的序列相比包含两个氨基酸修饰：第一个氨基酸(丙氨酸)缺失和第125位的半胱氨酸被丝氨酸取代。
用于本发明中的IL-2优选为基本上纯的形式，例如纯度为95％或更高，进一步优选96、97、98或99％纯。
用于本发明中的IL-2通常具有1.2至24百万国际单位(MIU)/mg蛋白质、优选8至18MIU/mg蛋白质的比活度。例如，本发明组合物中存在的IL-2可具有12±3MIU/mg蛋白质的比活度。
例如，如果IL-2具有约12MIU/mg蛋白质的比活度，则本发明的液体组合物可以包含每mL约0.008至约1.67mg的所述IL-2。
IL-2的生物活性优选通过在依赖IL-2生长的HT-2细胞系(克隆A5E，CRL-1841TM)上进行的基于细胞的测定来确定。将在一定范围的试验白细胞介素-2产品存在下的细胞生长与用IL-2国际标准品(WHO关于白细胞介素2的第二国际标准品(WHO 2ndInternational Standard for INTERLEUKIN 2)(人，rDNA来源的)NIBSC编码：86/500)记录的生长进行比较。在添加[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(内盐，MTS)并通过活性的活细胞转化成甲臜(formazan)后测量细胞生长。然后通过分光光度法在490nm处测量甲臜浓度。
在一些实施方式中，白介素-2以单体、聚集体及其组合的形式存在于本发明的液体组合物中。
本发明的液体组合物优选地基本上由浓度为0.1至20百万IU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂、表面活性剂和任选的赋形剂在水中组成，所述赋形剂选自抗氧化剂、渗透压调节剂和防腐剂。
在本文中使用时，“基本上由...组成”是指所列举的组分占所述液体组合物的大于95重量％。换句话说，白细胞介素-2、缓冲剂、表面活性剂、任选的赋形剂和水优选占所述液体组合物总重量的大于95重量％，例如大于96、97、98、99、99.5或99.9重量％。
水是所述溶液的载体。通常所述水是药用级的。
表面活性剂的存在使得促进白细胞介素-2在溶液中的溶解性和稳定性。合适的表面活性剂包括但不限于，C8-C20烷基硫酸盐、某些磷脂例如磷脂酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸盐、月桂酰肌氨酸盐(例如被称为sarkosyl的钠盐)、CHAPS、CHAPSO、Triton X100、TritonX114、NP40、辛基葡糖苷、聚乙二醇十二烷基醚例如以商品名Brijtm35销售的该物质、聚乙二醇十六烷基醚例如以商品名Brijtm58销售的该物质、脱水山梨糖醇单月桂酸酯的聚氧乙烯衍生物例如吐温(Tween)20和吐温80、脱水山梨糖醇酯例如脱水山梨糖醇单硬脂酸酯或脱水山梨糖醇单月桂酸酯、及其组合。
在一些实施方式中，所述表面活性剂是阴离子表面活性剂。因此，所述表面活性剂可选自C8-C20烷基硫酸盐、月桂酰肌氨酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸盐及其组合。
本发明优选的阴离子表面活性剂是十二烷基硫酸盐，例如十二烷基硫酸钠(SDS)或十二烷基硫酸锂。例如，所述表面活性剂可以选自碱金属和碱土金属十二烷基硫酸盐。优选的表面活性剂是SDS。
不受任何理论的束缚，本发明人认为所述溶液中表面活性剂的浓度以及表面活性剂与IL-2的重量比可随时间对白细胞介素-2的稳定性有一些影响。在一些实施方式中，所述表面活性剂，特别是十二烷基硫酸盐例如SDS，以0.01至0.5mg/mL的浓度存在。不受任何理论的约束，申请人认为表面活性剂、特别是十二烷基硫酸盐例如SDS的浓度高于0.05mg/ml可以通过形成胶束增进IL2在溶液中的稳定性。在优选实施方式中，所述表面活性剂，优选SDS，以0.05-5.0mg/ml、例如0.06、0.07、或0.08至5.0mg/ml的浓度存在。所述表面活性剂可以在本发明的液体组合物中以0.08至0.4mg/ml的浓度存在。
在另外的或可替选的实施方式中，表面活性剂、优选SDS与白细胞介素-2的重量比为0.01至5，优选0.04至5，例如0.1至3。例如，表面活性剂与白细胞介素-2的重量比可以是0.1至0.4，例如0.15至0.30，或1.0至3.0，例如1.5至2.5。
所述缓冲剂可以是任何类型的，条件是它适合配制白细胞介素-2并适合注射，特别是皮下注射。缓冲剂是指酸、酸的盐形式及其组合。缓冲剂包括磷酸、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(TRIS.HCl)、4-吗啉丙磺酸(MOPS)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)、PIPES、2,2-双(羟甲基)-2,2',2"-硝基三乙醇(BIS-TRIS)、TRIS-甘氨酸、Bicine、Tricine、TAPS、TAPSO、MES、柠檬酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐/磷酸盐、碳酸氢盐、戊二酸、琥珀酸、其盐及其组合。
本发明的液体制剂中的缓冲剂浓度通常为1mM至100mM，优选5mM至25mM，例如5mM至15mM。
本发明的液体组合物的pH优选为7.0至8.0，例如pH 7.5±0.2。在一些实施方式中，所述缓冲剂的pKa为约6.5至约8.5，优选7.0至8.0。优选地，所述缓冲剂是磷酸的盐，例如酸式磷酸的钠、钙或钾盐。例如，所述缓冲剂选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠及其组合。换句话说，优选的缓冲剂是磷酸盐缓冲剂。
在优选实施方式中，本发明的液体药物组合物具有适合于皮下注射的摩尔渗透压浓度。通常，本发明组合物的摩尔渗透压浓度是至少250mOsm，优选至少330mOsm，并且特别是至少360mOsm。
所述任选的赋形剂可以选自防腐剂、抗氧化剂及其组合。防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、苯甲酸、山梨酸及其盐。抗氧化剂包括抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、生育酚及其组合。通常，所述任选的赋形剂占组合物总重量的小于5重量％，优选小于3、2、1、和甚至0.1重量％。
所述任选的赋形剂也可以选自渗透压调节剂。渗透压调节剂包含药学上可接受的无机盐例如氯化钠和氯化钾以及有机盐例如钠或钾有机盐如柠檬酸钾或柠檬酸钠、天冬氨酸盐或乙酸盐。所述渗透压调节剂通常在本发明组合物中的添加量使得能够将所述组合物的摩尔渗透压浓度调节到至少330mOsm或至少360mOsm的值。所述摩尔渗透压浓度通常为330mOsm至600mOsm。NaCl是本发明的优选渗透压调节剂。
在一些实施方式中，所述液体药物组合物不含任何任选的赋形剂。在一些具体实施方式中，本发明的液体药物组合物含有渗透压调节剂，但不含任何防腐剂或抗氧化剂。
在一些实施方式中，本发明的液体药物组合物基本上由浓度为0.1至20百万IU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂和表面活性剂在水中组成。在其他实施方式中，本发明的液体药物组合物基本上由浓度为0.1至20百万IU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂、渗透压调节剂和表面活性剂在水中组成。
如上所述，用于制备本发明组合物的白细胞介素-2优选是非冻干的白细胞介素-2。因此，本发明的液体药物组合物中不需要存在冻干稳定剂。在使用时，“冻干稳定剂”或“冷冻干燥稳定剂”是指能够在冻干期间保护蛋白质、特别是白细胞介素-2免于变性的赋形剂。冻干稳定剂通常包括糖例如甘露醇、蔗糖、右旋糖和海藻糖、氨基酸、羟丙基-β-环糊精和血清白蛋白。
在一些实施方式中，所述液体组合物不含任何冻干稳定剂。
在一些其他实施方式中，本发明的液体组合物不含甘露醇和/或白蛋白。
本发明人证明了本发明的液体药物组合物是随时间稳定的。所述液体药物组合物可以在2℃-8℃、优选5℃的温度下在惰性气氛下储存，在至少6个月期间没有任何显著的生物活性损失，即生物活性降低至多25％，优选至多20％、15％、10％或5％。特别是，在5℃下储存6个月时期后，所述溶液中白细胞介素-2的生物学活性的降低低于储存前生物活性的30％，优选低于25％或20％，特别是低于15％、10％或5％。在本文中使用时，“液体药物组合物是稳定的”是指当在5℃的温度下、在惰性气氛下、在至少6个月、甚至至少12个月的时期内储存时，本发明的液体药物组合物是稳定的。在一些实施方式中，当在2℃至8℃的温度下和惰性气氛下储存一至三年的时期时，所述液体药物组合物可以是稳定的。
值得注意的是，即使白细胞介素-2以低浓度存在，例如低于12MIU/mL，例如2-12MIU/mL，所述液体药物组合物也是稳定的。包含少量白细胞介素-2的稳定的液体药物组合物对在自身免疫性和炎性病症的长期治疗中的应用具有高度的利益，因为它们便于包装在适于自我给药的递送装置例如注射器和笔中。
在一些实施方式中，本发明的液体药物组合物包含的白细胞介素-2的量为0.1至12MIU/mL组合物，例如0.1至10MIU/mL或2至12MIU/mL组合物。0.1至12MIU/mL的量包括以下的量：0.1至1MIU/mL，1MIU至2MIU/mL，2MIU至3MIU/mL，3MIU至4MIU/mL，4MIU至5MIU/mL，5MIU至6MIU/mL，6MIU至7MIU/mL，7MIU至8MIU/mL，8MIU至9MIU/mL，9MIU至10MIU/mL，10MIU至11MIU/mL，11MIU至12MIU/mL。在优选的实施方式中，本发明的液体药物组合物包含的白细胞介素-2的量为4MIU至10MIU/mL，例如4MIU至6MIU/mL。
在一些具体实施方式中，本发明的液体药物组合物包含的白细胞介素-2的量为0.1至6MIU/mL组合物，优选0.5至5MIU/mL。例如，本发明组合物中的白细胞介素-2的量可以是0.5MIU/mL、1.0MIU/mL、1.5MIU/mL、2.0MIU/mL、2.5MIU/mL、3.0MIU/mL；3.5MIU/mL、4.0MIU/mL、4.5MIU/mL、或5.0MIU/mL。
在一些具体实施方式中，本发明的液体药物组合物包含1.0至3.0MIU白细胞介素-2/mL。
例如，在所述实施方式中，如果IL-2的比活度为约12MIU/mg蛋白质的话，则1.0至3.0MIU白细胞介素-2/mL相当于约0.08mgIL-2/mL至约0.24mg IL-2/mL。
在本发明的一些其它实施方式中，所述液体药物组合物基本上由下列组成：
-白细胞介素-2，其量为1.0至3.0MIU/mL，或2MIU至12MUI/mL，例如4MUI至10MUI/mL或例如4MUI至6MUI/mL
-表面活性剂，优选十二烷基硫酸钠(SDS)，
-缓冲剂，优选地选自磷酸盐如磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，
-任选的赋形剂，优选地选自防腐剂、抗氧化剂和渗透压调节剂，和
-水。
如上所述，表面活性剂，特别是SDS，可以存在的量为0.01至0.50mg/mL。优选SDS以0.05至0.5mg/mL的浓度存在。在可替选或另外的实施方式中，所述表面活性剂、优选SDS与白细胞介素-2的重量比为0.04至5，更优选0.1至3.0，例如2.0至2.5，如2.2，或0.10至0.30，如0.22。
在一些实施方式中，所述液体药物组合物基本上由下列组成：
-白细胞介素-2，其量为1.0至3.0MIU/mL，或2MIU至12MUI/mL，例如4MUI至10MUI/mL
-以约0.05至0.5mg/mL的浓度存在的十二烷基硫酸钠(SDS)
-磷酸盐缓冲剂，
-水，和
-任选的渗透压调节剂，优选NaCl。
在一些可替选或另外的实施方式中，本发明的液体药物组合物的特征在于一个或多个以下特征：
-所述液体组合物适合于注射给患者；
-所述液体组合物基本上由量为2.0至12MIU/mL的白细胞介素-2、表面活性剂、缓冲剂、渗透压调节剂和水组成；
-所述表面活性剂是以0.1至0.4mg/mL的浓度存在的SDS；
-所述缓冲剂是以1mM至100mM、优选地5mM至25mM的总浓度存在的磷酸盐；
-所述组合物的pH为7.0-8.0，优选pH7.5±0.2；
-所述表面活性剂与白细胞介素-2的重量比为0.1至3.0；
-白细胞介素-2是非冻干的白细胞介素-2；
-白细胞介素-2具有12±3MIU/mg蛋白质的比活度；
-所述白细胞介素-2是阿地白介素；
-所述药物组合物不含冻干稳定剂，所述冻干稳定剂包括甘露醇；
-所述渗透压调节剂是NaCl；
-所述液体组合物的摩尔渗透压浓度是至少330mOsm，优选至少360mOsm；
-当在5℃的温度下和在惰性气氛下储存至少6个月的时期时，所述药物组合物是稳定的；
-所述液体药物组合物包装在注射递送装置如注射器或笔中；
-所述液体药物组合物适合于皮下给药。
在一些实施方式中，所述液体组合物的特征在于所有以上列出的特征。
■本发明的液体药物组合物的制备方法
本发明还涉及如上所述适合于注射给患者的白细胞介素-2的液体药物组合物的制备方法，所述方法包括：
-提供纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液，以及
-通过添加一种或几种赋形剂来配制所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液以获得白细胞介素-2的所述液体药物组合物。
通常，步骤a)的纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液包含作为载体的水、和缓冲剂。白细胞介素-2以大于20MIU/mL的浓度，优选以至少25MIU、例如25MIU至50MIU/mL的浓度，存在于所述浓缩溶液中。所述浓缩溶液一般在7.0至8.0的pH下。纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液通过生产IL-2的标准方法获得。所述标准方法可以包括在宿主培养物中重组生产IL-2以及从所述宿主培养物中回收和提纯白细胞介素-2以获得所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液。用于制备所述白细胞介素-2浓缩溶液的方法优选不含冻干步骤。在一些实施方式中，所述方法也不含其中将液体载体添加至IL-2的固体组合物、例如白细胞介素-2的冻干组合物的复溶步骤。
在一些实施方式中，所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液可通过包括以下步骤的方法获得：
-在重组大肠杆菌培养物中生产白细胞介素-2，
-从重组大肠杆菌培养物中回收白细胞介素-2，并提纯白细胞介素-2以获得所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液。
白细胞介素-2在大肠杆菌中的生产可以通过标准方法进行。从大肠杆菌培养物回收和提纯白细胞介素-2也可以通过标准方法进行，并且可以包括例如以下步骤：大肠杆菌培养物的匀化和离心，包涵体的回收和溶解，蛋白质的重折叠，一个或几个色谱步骤例如尺寸排阻色谱、离子交换色谱、亲和色谱、混合模式色谱、反相色谱、HPLC或羟基磷灰石色谱，一个或几个过滤步骤如深度过滤、超滤、切向超滤、纳滤和反渗透。所述纯化的白细胞介素-2的溶液可通过超滤浓缩以获得所需浓度的Il-2(例如至少15MIU/mL的浓度)。在提纯之前，从细胞培养物回收的IL-2可进行重折叠步骤。
或者，所述纯化的IL-2的浓缩溶液可通过化学合成获得。例如，所述浓缩溶液的制备方法可包括通过肽合成生产IL-2以及提纯所述化学生产的IL-2以获得所述浓缩溶液。例如，IL-2可通过在固相或液相中平行合成较短的肽来制备，优选通过固相法来制备。随后将所得的肽连接在一起以产生完整的IL-2序列。所得的IL-2然后通过标准方法例如制备型色谱步骤提纯，以及如果需要的话重折叠。
在配制之前，所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液可以进行灭菌和/或病毒灭活步骤。通常，所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液可以进行无菌过滤。所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液也可以包含表面活性剂或其他赋形剂，例如抗氧化剂和防腐剂。
优选地，所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液基本上由浓度为至少15MIU/mL、优选至少20MIU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂、水和任选的表面活性剂组成。优选的缓冲剂是磷酸盐缓冲剂，并且优选的表面活性剂是SDS。
进行所述纯化的白细胞介素的浓缩溶液的配制以获得所需的液体药物组合物白细胞介素-2。取决于纯化白细胞介素-2的起始浓缩溶液和所需的最终药物的特征，步骤b)可以包括：
-稀释所述溶液以调节白细胞介素-2的浓度在0.1MIU至20MIU/mL范围内，例如2MIU至12MIU/mL、4MIU至10MIU/mL、0.1MIU至10MIU/mL、或0.1MIU至6MIU，和/或
-添加表面活性剂和/或调节所述表面活性剂的浓度
-加入一种或几种缓冲剂以调节pH在7.0和8.0之间和/或以将所述溶液中缓冲剂的摩尔浓度调节到1mM至100mM之间的值，例如5mM至25mM，和/或
-添加选自抗氧化剂、防腐剂、渗透压调节剂及其组合的任选的赋形剂。
本发明的方法可以进一步包括包装步骤c)。通常，本发明的液体药物组合物可在惰性气氛或改变的气氛下，例如在氩气或氮气下，包装在用于注射的装置中，例如注射器或注射用笔中。或者，所述液体药物可以在惰性气氛下装在小瓶中或药筒中。填充有本发明液体药物组合物的所述小瓶或药筒可与注射工具例如注射器、针头和自动注射器系统一起包装。所述注射用药物组合物的包装过程优选在无菌条件下进行。
本发明的方法也可以包括灭菌或病毒灭活步骤，例如通过电子束照射。取决于所使用的技术，所述步骤可在包装之前或之后进行。例如，所述液体药物组合物可以经受在包装之前的无菌过滤和/或在包装之后的电子束照射。
在一些实施方式中，如上所述适合于注射给患者的白细胞介素-2的液体药物组合物的制备方法包括以下步骤：
i.-在重组宿主培养物、优选地大肠杆菌中生产白细胞介素-2，
ii.-从所述重组宿主培养物中回收白细胞介素-2，并提纯白细胞介素-2以获得纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液，
iii.配制所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液以获得所述白细胞介素-2的液体药物组合物，以及
iv.-任选地将所述白细胞介素-2的液体药物组合物包装在用于注射的装置、例如注射器或笔中。
如上所述，本发明的方法不含其中冷冻干燥白细胞介素-2的步骤。
步骤iv优选在无菌条件下进行。
不用说，本发明还涉及可通过这样的方法获得的液体药物组合物以及填充有所述液体药物组合物的注射装置。
■本发明的用途、治疗方法、试剂盒和装置
本发明还涉及本发明的液体药物组合物在治疗或预防对象的自身免疫性、免疫相关性或炎性病症中的应用。对象的优选的自身免疫性、免疫相关性或炎性病症涉及与Treg功能不全有关的病症。
自身免疫性、免疫相关性或炎性病症包括但不限于，HCV相关性血管炎、葡萄膜炎、肌炎、I型糖尿病、系统性红斑狼疮、系统性血管炎、银屑病、过敏、哮喘、克罗恩氏病(Crohn's disease)、多发性硬化症、类风湿性(Rheumathoid)关节炎、动脉粥样硬化、自身免疫性甲状腺病、神经退行性疾病、阿尔茨海默病(Alzheimer disease)、移植物抗宿主病、自发性流产和同种异体移植物排斥。优选的自身免疫性疾病和炎性病症(AID)是1型糖尿病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎。
本发明的液体药物组合物优选通过注射向患者给药，例如通过静脉内、肌内、皮内或皮下途径。优选的给药途径是皮下途径和皮内途径。在一种优选实施方式中，本发明的液体药物组合物用于皮下注射。
本发明的液体药物组合物优选适合于递送在0.1MIU至3MIU白细胞介素-2范围内的IL-2剂量，例如0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、或3.0MIU的剂量。
因此，本发明的液体药物组合物可以用于在治疗或预防自身免疫性、免疫相关性或炎性病症中的使用，其中所述液体药物组合物通过皮下途径给药以提供给患者0.1MIU至3MIU的Il-2剂量。
本发明的液体药物组合物适合于频繁给药。通常，取决于待治疗的疾病和要获得的治疗效果，本发明的液体药物组合物可以每月一次、每两周一次、一周一次、一周两次或每天一次给药。治疗可持续数天、数周、数月和甚至数年。治疗可包含起始过程，其中本发明的液体药物组合物在几天期间每天给药，和维持期，其中本发明的液体药物组合物以较低频率给药，例如每月一次或每两月一次。
在一些实施方式中，本发明的液体药物组合物用于在治疗或预防自身免疫性、免疫相关性或炎性病症中的使用，其中所述组合物至少每月给药一次。
在一些另外的或可替选的实施方式中，本发明的液体药物组合物用于在长期治疗自身免疫性、免疫相关性或炎性病症中的应用。
在本文中使用时，“长期治疗”是指持续至少3个月的治疗，其中本发明的液体药物组合物至少每月给药一次。
给药剂量、给药频率、给药方案和治疗期限将取决于待治疗或预防的病症、病症的严重程度、患者的特征特别是患者的年龄、体重、体表面积(BSA)、总体医疗状况、病史...而变化。
本发明还涉及在患者中治疗或预防自身免疫性、免疫相关性或炎性病症的方法，所述方法包括用本发明的液体药物组合物给药于患者。如上所述，所述液体药物组合物优选通过注射、特别是通过皮下途径以相当于在0.1MIU至3.0MIU范围内的Il-2剂量的量给药。
本发明的另一个目的是一种用于注射、优选用于皮下注射的装置，其填充有本发明的液体药物组合物。所述装置可以是例如注射器或笔。优选地，所述装置适合于提供本发明的液体药物组合物的皮下给药。所述装置可以适于提供单剂量或多剂量的本发明液体药物组合物。每剂本发明的液体药物组合物优选相当于在0.1MIU至3.0MIU范围内的IL-2的量。通常，本发明的装置适合于递送在50μl至2mL、优选100μl至1mL范围内的量。
在一些实施方式中，本发明的装置仅供单次使用。所述装置优选是一次性的。
在一些其他实施方式中，本发明的装置适于递送多剂量，例如多剂量笔。
在一些实施方式中，所述装置含有能够调节待给药的所述液体药物组合物的量的工具。在可替选的实施方式中，所述装置适合于施用固定量的所述液体药物组合物。
优选地，所述装置适合于自我给药。
在一些实施方式中，本发明的装置可以是预填充式注射器或可以与自动注射器一起使用的预填充式药筒。所述自动注射器可以是电子或机械的。
适合于皮下给药和/或自我给药的装置在现有技术中是公知的。几种激素产品以预填充式笔或预填充式注射器出售。例如可以参照用于胰岛素给药的装置，例如胰岛素笔(例如由NovoNordisk以商品名销售的那些)或胰岛素皮下注射器。
不用说，可以在所述注射器或笔上适配皮下注射针用于进行注射。
作为进一步的实例，可以参考市售用于(INF-1a)给药的皮下递送系统，例如Rebidose，它是单次使用的预填充式笔，它是被设计用于自我给药的具有多剂量药筒的电子自动注射装置，和它是被设计用于自我给药的具有预填充式注射器的自动注射器。
如果本发明的装置是注射器，则这样的注射器优选是预组装注射器，这意味着针头已经安装在注射器上。例如，可以参考的预组装注射器。
在一些可替选或另外的实施方式中，该注射器(syringe)适于与自动注射器(autoinjector)一起使用。
优选所述装置是多剂量笔或玻璃注射器，例如0.5至1.5ml注射器。所述注射器可以配备帽或被帽重新盖上的针头。
可以使用其它自我注射装置。例如，可以使用适于皮下给药的无针递送装置，例如由Crossject销售的这种系统基于切割射流水的原理：被封闭在玻璃容器内的液体射流通过直径很小的注射喷嘴以150米/秒的速度被迫出，该速度足以穿透组织。
另一方面，本发明涉及一种试剂盒，其含有：
-包含本发明液体药物组合物的小瓶或药筒，和
-用于给药的工具，例如注射器、针头和/或自动注射器装置。
以下实施例仅以说明性方式提供，而不是以限制性方式提供。
实施例
稳定性研究
本研究旨在评估IL2活性物质(阿地白介素)的几种药物组合物经过5℃下36个月和30℃/75％RH下12个月的稳定性。
1.本发明的液体药物组合物的制备
室温下在流式层析罩下的无菌条件中，由无菌IL2活性物质制备溶液(包含25MIU/ml、相当于2mg/ml的IL2的浓缩溶液)。根据下文的配制表将IL2活性物质稀释并配制。将每种组合物(1ml)在氮气气氛下装入用Flurotec溴化丁基塞封闭的1型硅化玻璃小瓶中。
2.稳定性研究
所制备的组合物在监测舱中在5℃或30℃/75％RH下储存36个月。在第6个月评估每种组合物(1-10)的稳定性。进一步的稳定性分析将进行直至储存36个月。
通过已验证的分析方法来评估稳定性，特别是通过反相HPLC(RP-HPLC)来确定IL-2物质的纯度和潜在的降解产物的形成，以及通过生物活性测定。RP-HPLC在以下条件下进行：
-固定相：C4柱，Jupiter C4 5μm，4.6x250mm，来自Phenomenex。
-梯度：以如下所述的缓冲液B(含0.1％甲酸的乙腈)在缓冲液A(含0.1％甲酸的超纯水)中的梯度进行30分钟洗脱：
时间(min) 流量(ml/min) ％流动相A ％流动相B
0 1 60 40
5.00 1 45 55
15.00 1 30 70
20.00 1 0 100
23.10 1 0 100
24.00 1 60 40
30.00 1 60 40
-IL-2的保留时间为14.0-14.6分钟。
注射1MIU/ml的起始IL2活性物质作为质控。
IL-2的生物活性优选通过在依赖IL-2生长的HT-2细胞系(克隆A5E，CRL-1841TM)上进行的基于细胞的测定来确定。将在一定范围的试验白细胞介素-2产品存在下的细胞生长与用IL-2国际标准品(WHO关于白细胞介素2的第二国际标准品(WHO 2ndInternational Standard for INTERLEUKIN 2)(人，rDNA来源的)NIBSC编码：86/500)记录的生长进行比较。在添加[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(内盐，MTS)并由活性的活细胞转化成甲臜后测量细胞生长。然后通过分光光度法在490nm处测量甲臜浓度。该浓度与培养物中存在的活细胞数量成正比。
结果
在第6个月，评估每种制剂中和每种储存条件下IL-2物质的纯度和生物活性。
结果显示在下表中：
除了制剂3和6外，所有测试的制剂在5℃下储存6个月后都显示出良好的稳定性。在5℃和30℃储存3个月后，制剂3和6已表现出IL-2的大量降解。在30℃储存3个月后，制剂3和6的残余生物活性百分比分别为约12％和46％。这种低稳定性可能是由于溶液中SDS浓度低造成的。看起来可能需要至少0.05mg/ml的SDS浓度来促进IL2在溶液中的稳定性。在这方面，含有0.088mg/ml SDS的制剂7在5℃和30℃下显示出良好的稳定性。
值得注意的是，包含5至10MUI/ml的IL2的制剂7、8和10显示出良好的稳定性状况。在5℃和30℃下储存6个月后纯度和生物活性方面的最佳结果是由制剂8得到的。制剂8含有10MUI/ml的IL2以及0.176mg/ml的SDS，SDS/IL2重量比为0.22。
制剂1和4是含有甘露醇的比较制剂。制剂1和4在纯度和生物活性方面表现出与不含甘露醇的制剂2和制剂5相似的稳定性。因此，不需要甘露醇的存在来促进IL2在储存期间的稳定性。

Claims (15)

1.一种适合于注射给患者的液体药物组合物，其基本上由浓度为0.1至20百万IU/mL的白细胞介素-2、缓冲剂、表面活性剂和任选的赋形剂在水中组成，所述赋形剂优选地选自抗氧化剂、渗透压调节剂和防腐剂。
2.权利要求1的液体药物组合物，其中白细胞介素-2以2至12MIU/ml的浓度存在。
3.权利要求1或2的液体药物组合物，其中所述表面活性剂是阴离子表面活性剂，优选为十二烷基硫酸钠(SDS)和十二烷基硫酸锂。
4.权利要求1-3任一项的液体药物组合物，其中所述表面活性剂以约0.05至0.5mg/mL的浓度存在。
5.权利要求1-4任一项的液体药物组合物，其中所述表面活性剂与白细胞介素-2的重量比为0.04至5.0，优选为0.1至3.0。
6.权利要求1-5任一项的液体药物组合物，其中所述液体药物组合物从非冻干的白细胞介素-2获得。
7.权利要求1-6任一项的液体药物组合物，其中白细胞介素-2是重组人白细胞介素-2或其变体。
8.权利要求1-7任一项的液体药物组合物，其不含甘露醇和/或白蛋白。
9.权利要求1-8任一项的液体药物组合物，其基本上由下列组成：
-剂量为2至12MIU/mL、优选为4至10MUI/mL的白细胞介素-2，
-浓度为约0.05至0.5mg/mL的十二烷基硫酸钠(SDS)，
-以5mM至25mM范围内的浓度存在的选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠及其组合的缓冲剂，
-水，和
-任选的渗透压调节剂例如氯化钠。
10.权利要求1-9任一项的液体药物组合物，其特征在于至少一个以下特征：
-所述组合物的pH是7.1至7.8，优选为pH 7.5±0.2，
-所述缓冲剂是磷酸盐缓冲剂，
-白细胞介素-2是阿地白介素，
-所述表面活性剂与Il-2的重量比为0.1至3，
-所述液体药物组合物适合于包装在用于注射的递送装置例如注射器或自动注射器中，
-所述药物组合物不含任何冻干稳定剂，和/或，
-所述液体药物组合物在5℃下稳定至少6个月。
11.权利要求1-10任一项的液体药物组合物，其通过皮下注射应用。
12.权利要求1-10任一项的液体药物组合物，其用于治疗或预防自身免疫性、免疫相关性或炎性病症，其中所述组合物通过皮下途径以等于0.1MIU至3MIU的白细胞介素-2剂量的量给药。
13.权利要求1-10任一项中限定的液体药物组合物的制备方法，所述方法包含以下步骤：
a.提供纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液；
b.通过添加一种或几种赋形剂来配制所述纯化的白细胞介素-2的浓缩溶液，以获得白细胞介素-2的所述液体药物组合物。
c.任选地将所述液体药物组合物包装在小瓶、药筒或用于注射的递送装置例如注射器或笔中。
14.一种药物试剂盒，其包括含有权利要求1-10任一项中限定的液体组合物的小瓶或药筒，和用于皮下注射的工具例如注射器、针头和/或自动注射器装置。
15.一种用于注射、优选用于皮下注射的递送系统，其填充有权利要求1-10任一项中限定的液体组合物。
CN201680061595.9A 2015-10-22 2016-10-20 Il-2的药物组合物 Active CN108135841B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15306696 2015-10-22
EP15306696.4 2015-10-22
PCT/EP2016/075204 WO2017068031A1 (en) 2015-10-22 2016-10-20 Pharmaceutical compositions of il-2

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108135841A true CN108135841A (zh) 2018-06-08
CN108135841B CN108135841B (zh) 2024-03-05

Family

ID=54360399

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680061595.9A Active CN108135841B (zh) 2015-10-22 2016-10-20 Il-2的药物组合物

Country Status (14)

Country Link
US (2) US10722460B2 (zh)
EP (1) EP3364944B1 (zh)
JP (2) JP7038655B2 (zh)
KR (1) KR102740102B1 (zh)
CN (1) CN108135841B (zh)
AU (1) AU2016341241B9 (zh)
BR (1) BR112018008017B1 (zh)
CA (1) CA3001429C (zh)
ES (1) ES2982752T3 (zh)
IL (1) IL258366B (zh)
MX (1) MX383759B (zh)
PL (1) PL3364944T3 (zh)
WO (1) WO2017068031A1 (zh)
ZA (1) ZA201802199B (zh)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110520436A (zh) 2017-03-15 2019-11-29 潘迪恩治疗公司 靶向免疫耐受性
EP3630163A4 (en) 2017-05-24 2021-06-09 Pandion Operations, Inc. Targeted immunotolerance
KR102777151B1 (ko) 2017-11-21 2025-03-05 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 인터루킨-2의 부분 효능제
USRE50550E1 (en) 2017-12-06 2025-08-26 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174091B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
EP3807305A4 (en) * 2018-06-13 2022-04-20 Akron Biotechnology, LLC PROCESS FOR PRODUCTION OF THERAPEUTICally ACTIVE ALDESLEUKINE, WHICH IS HIGHLY STABLE IN LIQUID PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
WO2020035482A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Iltoo Pharma Combination of interleukin-2 with an interleukin 1 inhibitor, conjugates and therapeutic uses thereof
MX2021014178A (es) 2019-05-20 2022-01-04 Pandion Operations Inc Inmunotolerancia dirigida a la molecula de adhesion celular de adresina vascular de mucosas (madcam).
EP4073094A1 (en) 2019-12-12 2022-10-19 Iltoo Pharma Interleukin 2 chimeric constructs
MX2022008771A (es) 2020-01-14 2022-10-07 Synthekine Inc Metodos y composiciones de muteinas de il2 sesgadas.
EP4107187A4 (en) 2020-02-21 2024-07-03 Pandion Operations, Inc. TISSUE-TARGETED IMMUNOTOLERANCE WITH A CD39 EFFECTOR
US20230149438A1 (en) * 2020-03-13 2023-05-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating and preventing prekallikrein-associated conditions
EP4412631A1 (en) 2021-10-06 2024-08-14 Iltoo Pharma Interleukin 2 chimeric constructs with targeting specificy to inflamed tissues
KR20250113390A (ko) 2022-09-12 2025-07-25 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 자폐 스펙트럼 장애 치료에 사용되는 인터루킨-2
AU2024221181A1 (en) * 2023-02-14 2025-07-31 Akron Bioproducts Llc Interleukin formulations for ex vivo use
CN119405595A (zh) * 2024-03-14 2025-02-11 程度胜 含重组人白细胞介素-2的药物组合物、药物制剂及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4530787A (en) * 1984-03-28 1985-07-23 Cetus Corporation Controlled oxidation of microbially produced cysteine-containing proteins
WO1985004328A1 (en) * 1984-03-28 1985-10-10 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2
EP1688146A1 (en) * 2005-02-07 2006-08-09 Chiron Corporation Preparing aldesleukin for pharmaceutical use
CN103301064A (zh) * 2013-06-04 2013-09-18 北京四环生物制药有限公司 一种白介素-2或其衍生物鼻喷剂及其制备方法
CN103565757A (zh) * 2012-08-02 2014-02-12 江苏金丝利药业有限公司 注射用重组人白细胞介素-2冻干制剂及其制备方法

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4752A (en) * 1846-09-10 Augustus hamann
CA1341562C (en) 1982-03-31 2007-11-27 Tadatsugu Taniguchi Gene coded for interleukin-2 polypeptide, recombinant dna carrying the said gene, a living cell line possessing the recombinant dna, and method for producing interleukin-2 using the said cell
FI82266C (fi) 1982-10-19 1991-02-11 Cetus Corp Foerfarande foer framstaellning av il-2 -mutein.
WO1985000817A1 (en) 1983-08-10 1985-02-28 Amgen Microbial expression of interleukin ii
US4656132A (en) 1984-03-28 1987-04-07 Cetus Corporation Method of improving the yield of heterologous protein produced by cultivating recombinant bacteria
JPS60243021A (ja) * 1984-03-28 1985-12-03 シタス　コ−ポレイシヨン システイン含有蛋白質の制御された酸化方法
US4752585A (en) * 1985-12-17 1988-06-21 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins
CA1340265C (en) 1985-01-18 1998-12-15 Kirston E. Koths Oxidation resistant muteins
US4748234A (en) 1985-06-26 1988-05-31 Cetus Corporation Process for recovering refractile bodies containing heterologous proteins from microbial hosts
KR100693263B1 (ko) * 1999-07-22 2007-03-13 아벤티스 파마슈티칼스 인크. 다중 투여형 에리트로포이에틴 제형
CN100333790C (zh) * 1999-12-30 2007-08-29 希龙公司 含白细胞介素－2的药物组合物在制药中的应用
AU2006200923A1 (en) * 1999-12-30 2006-03-30 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Methods for pulmonary delivery of interleukin-2

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4530787A (en) * 1984-03-28 1985-07-23 Cetus Corporation Controlled oxidation of microbially produced cysteine-containing proteins
WO1985004328A1 (en) * 1984-03-28 1985-10-10 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2
US4530787B1 (zh) * 1984-03-28 1993-07-20 Cetus Corp
EP1688146A1 (en) * 2005-02-07 2006-08-09 Chiron Corporation Preparing aldesleukin for pharmaceutical use
CN103565757A (zh) * 2012-08-02 2014-02-12 江苏金丝利药业有限公司 注射用重组人白细胞介素-2冻干制剂及其制备方法
CN103301064A (zh) * 2013-06-04 2013-09-18 北京四环生物制药有限公司 一种白介素-2或其衍生物鼻喷剂及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
庞战军等: "《自由基医学研究方法》", 30 June 2000, 北京：人民卫生出版社 *
秦继宝: "《消化系统疾病的检验诊断与临床》", 31 December 2014, 合肥：安徽大学出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2982752T3 (es) 2024-10-17
EP3364944A1 (en) 2018-08-29
US10722460B2 (en) 2020-07-28
AU2016341241B9 (en) 2021-11-18
AU2016341241B2 (en) 2021-10-28
BR112018008017A2 (pt) 2018-10-23
KR20180064536A (ko) 2018-06-14
JP2022008792A (ja) 2022-01-14
IL258366B (en) 2021-10-31
AU2016341241A1 (en) 2018-05-10
ZA201802199B (en) 2019-01-30
KR102740102B1 (ko) 2024-12-06
EP3364944B1 (en) 2024-06-12
JP7329571B2 (ja) 2023-08-18
CA3001429A1 (en) 2017-04-27
EP3364944C0 (en) 2024-06-12
IL258366A (en) 2018-06-28
JP7038655B2 (ja) 2022-03-18
US20180303754A1 (en) 2018-10-25
MX383759B (es) 2025-03-14
PL3364944T3 (pl) 2025-02-24
CA3001429C (en) 2023-07-11
RU2018118215A (ru) 2019-11-25
US20210128465A1 (en) 2021-05-06
BR112018008017B1 (pt) 2023-10-10
WO2017068031A1 (en) 2017-04-27
MX2018004883A (es) 2018-08-01
CN108135841B (zh) 2024-03-05
JP2018537423A (ja) 2018-12-20
HK1259454A1 (zh) 2019-11-29
US11883531B2 (en) 2024-01-30
RU2018118215A3 (zh) 2020-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7329571B2 (ja) Ｉｌ－２医薬組成物
US20230159628A1 (en) Anti-CGRP Antibody Formulation
EP2676677A9 (en) Highly concentrated anti-cd40 antibody pharmaceutical preparation
EP2052736A1 (en) Parathyroid hormone formulations und uses thereof
EP3233108A1 (en) Rapid-acting insulin compositions
EP4169505A1 (en) Rapid-acting insulin compositions
US20100021419A1 (en) Stable Pharmaceutical Composition Comprising Granulocyte-Colony Stimulating Factor
JP2015038111A (ja) Ｇ−ｃｓｆの液体製剤
JP3479082B2 (ja) トロンボポイエチン組成物
RU2783864C2 (ru) Фармацевтические композиции с il-2
HK1259454B (zh) Il-2的药物组合物
HK1130198A (zh) 甲状旁腺激素的配方以及其使用
OA17126A (en) Pharmaceutical formulations of TNF-alpha antibodies
HK1249040B (zh) 速效胰島素組合物
HK1249040A1 (zh) 速效胰島素組合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TG01 Patent term adjustment
TG01 Patent term adjustment
CI03 Correction of invention patent
CI03 Correction of invention patent

Correction item: Compensation term of patent right

Correct: The current patent right expires on October 20, 2036

False: The current patent right expires on August 20th, 2037.08

Number: 39-02

Volume: 40

TG01 Patent term adjustment
TG01 Patent term adjustment