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CN107827985A - 能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子 - Google Patents

能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子 Download PDF

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CN107827985A
CN107827985A CN201711009708.3A CN201711009708A CN107827985A CN 107827985 A CN107827985 A CN 107827985A CN 201711009708 A CN201711009708 A CN 201711009708A CN 107827985 A CN107827985 A CN 107827985A
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Macrogenics Inc
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Abstract

展示了能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子，并特别是与非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3交叉反应的此类分子。展示了此类抗体和抗原结合片段在治疗癌症、自身免疫性和/或炎性疾病和其他病症中的用途。

Description

能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子
本申请是PCT申请号为PCT/US2012/038219，发明名称为“能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子”的PCT申请进入中国国家阶段后申请号为201280036088.1的中国国家阶段申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求美国专利申请号61/488,716(2011年5月21日提交；待审)和61/530,353(2011年9月1日提交；待审)的优先权，这两个申请各自都通过引用整体并入本文。
序列表的引用
根据37C.F.R.1.821et seq.，本申请包括一个或多个序列表，其以纸质和计算机可读介质两种形式被公开，并通过引用将该纸质和计算机可读公开内容整体并入本文。
发明背景
发明领域
本发明涉及能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子，并特别涉及与非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3交叉反应的此类分子。本发明还涉及此类抗体和抗原结合片段在治疗癌症、自身免疫性和/或炎性疾病和其他病症中的用途。
相关领域的描述
身体免疫系统用作针对多种病症，包括，例如，受伤、感染和瘤形成的防御，并由以下两个独立而相互关联的系统介导：细胞免疫系统和体液免疫系统。一般而言，体液系统由具有与被系统识别作为身体的外来物质的产物结合并中和该产物的能力的可溶性产物(抗体或免疫球蛋白)介导。相比之下，细胞免疫系统则包括起多种治疗作用的被称为T细胞的某些细胞的动员。T细胞是源自胸腺并在组织、淋巴系统和循环系统之间循环的淋巴细胞。它们针对或响应多种外来结构物(抗原)起作用。在许多情况下，这些外来抗原在宿主细胞上表达作为瘤形成或感染的结果。尽管T细胞自身不会分泌抗体，但它们通常是第二类淋巴细胞B细胞(其源自骨髓)分泌抗体所需的。关键地，T细胞呈现非同寻常的免疫特异性以能够区分不同的抗原。
幼稚T细胞，例如，还未遇到其特异性抗原的T细胞，当其首次遇到抗原呈递细胞上的特异性肽:MHC复合物时被活化。抗原呈递细胞可以是B细胞、巨噬细胞或树突细胞。当幼稚T细胞遇到抗原呈递细胞上的特异性肽:MHC复合物时，信号经由引起T细胞的淋巴细胞功能相关抗原(LFA)分子的构象变化的T细胞受体传递，并增加了它们对存在于抗原呈递细胞表面的细胞间黏附分子(ICAM)的亲和力。由T细胞与抗原呈递细胞的相互作用产生的信号是活化幼稚T细胞必需的，但不是足够的。第二共刺激信号是必需的。幼稚T细胞仅可被表面携带特异性肽MHC复合物和共刺激分子的抗原呈递细胞活化。不存在共刺激时通过幼稚T细胞的抗原识别导致T细胞变成无变应性的。对两种信号的需要以活化T细胞和B细胞如此以致它们实现适应性免疫应答，可提供用于避免对存在于系统中可由T细胞识别的位置处的抗原呈递细胞上的自身抗原的应答的机制。在T细胞与抗原呈递细胞接触导致仅两种所需的信号之一产生的情况下，T细胞不会变为活化的且适应性免疫应答不会发生。
人和其他哺乳动物形成对病原体和外来物质的免疫应答具有的效率依赖于两种特征：对抗原识别的免疫应答的精确特异性，和当由相同的抗原再活化时允许较快和更有力的应答的免疫记忆(Portolés,P.等人(2009)“The TCR/CD3Complex:Opening the Gateto Successful Vaccination,”Current Pharmaceutical Design 15:3290-3300；Guy,C.S.等人(2009)“Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21)。T细胞应答的特异性通过由包含T细胞受体(“TCR”)和细胞表面受体配体CD3的分子复合物对抗原(展示在抗原呈递细胞上(APC))的识别介导。TCR是共价连接的α和β链的异二聚体(“TCRαβ”)。这些链是长度为259(α)和296(β)氨基酸的I类膜多肽。CD3分子是包含缔合为三个二聚体(εγ、εδ、ζζ)的CD3γ链、CD3δ链和两个CD3ε链的复合物(Guy,C.S.等人(2009)“Organization of Proximal Signal Initiation atthe TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21；Call,M.E.等人(2007)“Common ThemesIn The Assembly And Architecture Of Activating Immune Receptors,”Nat.Rev.Immunol.7:841-850；Weiss,A.(1993)“T Cell Antigen Receptor SignalTransduction:A Tale Of Tails And Cytoplasmic Protein-Tyrosine Kinases,”Cell73:209-212)。TCR和CD3复合物，与CD3ζ链ζ链一起(还称为T细胞受体T3ζ链或CD247)构成TCR复合物(van der Merwe,P.A.等人(2010年12月3日电子出版)“Mechanisms For T CellReceptor Triggering,”Nat.Rev.Immunol.11:47-55；Wucherpfennig,K.W.等人(2010)“Structural Biology of the T-cell Receptor:Insights into Receptor Assembly,Ligand Recognition,and Initiation of Signaling,”Cold SpringHarb.Perspect.Biol.2:a005140)。由于其包含大量的(10个)基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)，该复合物特别重要。
在成熟T细胞中，由缔合至自身-MHC分子的外来抗原肽的TCR/CD3活化是用于抗原特异性T细胞的增殖和它们分化为效应或记忆T淋巴细胞所需的第一步。这些过程包括TCR复合物的基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的磷酸化。由于TCR复合物具有如此大量的ITAM(总计10个)，且这些ITAM串联排列(由于组成的链的二聚化)，在TCR连接时的相关酪氨酸残基的磷酸化创建了用于包含Src同源2(SH2)结构域诸如70kDa的ζ链缔合蛋白(ZAP-70)的蛋白的成对的停泊位点，并从而启动导致T细胞活化和分化的放大信号级联(Guy,C.S.等人(2009)“Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21)。
这些过程的结果由抗原刺激的强度和质量，及由通过共受体和共刺激表面分子传递的伴随信号的性质，或由细胞因子受体调节(Portolés,P.等人(2009)“The TCR/CD3Complex:Opening the Gate to Successful Vaccination,”Current PharmaceuticalDesign 15:3290-3300；Riha,P.等人(2010)“CD28Co-Signaling In The Adaptive ImmuneResponse,”Self/Nonself 1(3):231-240)。尽管TCR刺激是用于T细胞活化的先决条件，公认的是共刺激分子诸如CD28的接合(engagement)是完全的T细胞活化和分化所需的(Guy,C.S.等人(2009)“Organization of Proximal Signal Initiation at the TCR:CD3Complex,”Immunol Rev.232(1):7-21)。
由于CD3在启动抗抗原应答中的基本性质，针对该受体的单克隆抗体已被提出作为能够阻断或至少调节免疫过程并因此作为用于治疗炎性疾病和/或自身免疫性疾病的剂。事实上，抗CD3抗体是被批准用于人治疗的第一个抗体(St.Clair E.W.(2009)“NovelTargeted Therapies for Autoimmunity,”Curr.Opin.Immunol.21(6):648-657)。抗CD3抗体(由Janssen-Cilag作为ORTHOCLONETM OKT3TM推向市场)已被施用以减少具有器官移植的患者中的急性排斥反应并作为用于成淋巴细胞性白血病的治疗(Cosimi,A.B.等人(1981)“Use Of Monoclonal Antibodies To T-Cell Subsets For Immunologic MonitoringAnd Treatment In Recipients Of Renal Allografts,”N.Engl.J.Med.305:308-314；Kung,P.等人(1979)Monoclonal antibodies defining distinctive human T cellsurface antigens,”Science206:347-349；Vigeral,P.等人(1986)“Prophylactic Use OfOKT3Monoclonal Antibody In Cadaver Kidney Recipients.Utilization Of OKT3 AsThe Sole Immunosuppressive Agent,”Transplantation 41:730-733；Midtvedt,K.等人(2003)“Individualized T Cell Monitored Administration Of ATG Versus OKT3 InSteroid-Resistant Kidney Graft Rejection,”Clin.Transplant.17(1):69-74；Gramatzki,M.等人(1995)“Therapy With OKT3 Monoclonal Antibody In Refractory TCell Acute Lymphoblastic Leukemia Induces Interleukin-2 Responsiveness,”Leukemia 9(3):382-390；Herold,K.C.等人(2002)“Anti-CD3 Monoclonal Antibody InNew-Onset Type 1Diabetes Mellitus,”N.Engl.J.Med.346:1692-1698；Cole,M.S.等人(1997)“Human IgG2 Variants Of Chimeric Anti-CD3Are Nonmitogenic to T cells,”J.Immunol.159(7):3613-3621；Cole,M.S.等人(1999)“Hum291,A Humanized Anti-CD3Antibody,Is Immunosuppressive To T Cells While Exhibiting ReducedMitogenicity in vitro,”Transplantation 68:563-571；美国专利号6,491,916；5,585,097和6,706,265)。
然而，此抗CD3治疗被证明不是足够特异以避免副作用(Ludvigsson,J.(2009)“The Role of Immunomodulation Therapy in Autoimmune Diabetes,”J.DiabetesSci.Technol.3(2):320-330)。OKT3的重复的日常施用导致极大的免疫抑制并在肾移植之后提供了排斥反应的有效治疗。OKT3的体内施用导致T细胞活化和免疫应答的抑制二者。然而，OKT3的使用已被与最初的T细胞活化事件和在T细胞应答的免疫抑制之前发生的细胞因子的紧接着的释放相关的首次毒性剂量反应综合征妨碍。报道的该小鼠单克隆抗体的首次和有时第二次注射之后的副作用包括由以下组成的“流感-样”综合征：高热、寒战、头痛和胃肠道症状(呕吐和腹泻)且在严重的病例中，已指出了在治疗的数小时内的肺水肿(Thistlethwaite,J.R.Jr.等人(1988)“Complications and Monitoring of OKT3Therapy,”Am.J.Kidney Dis.11:112-119)。该综合征被认为反映了OKT3介导的T细胞表面的TCR/CD3复合物的交联及所导致的细胞因子(例如，肿瘤坏死因子α(TNFα)、干扰素-γ、白介素IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-10和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的释放(Masharani,U.B.等人(2010)“Teplizumab Therapy For Type 1Diabetes,”ExpertOpin.Biol.Ther.10(3):459-465；Abramowicz,D.等人(1989)“Release Of TumorNecrosis Factor,Interleukin-2,And Gamma-Interferon In Serum After InjectionOf OKT3 Monoclonal Antibody In Kidney Transplant Recipients,”Transplantation47:606-608；Ferran,C.等人(1990)“Cytokine-Related Syndrome Following InjectionOf Anti-CD3 Monoclonal Antibody:Further Evidence For Transient In Vivo T CellActivation,”Eur.J.Immunol.20:509-515；Hirsch,R.等人(12989)“Effects Of In VivoAdministration Of Anti-CD3Monoclonal Antibody On T Cell Function InMice.II.In Vivo Activation Of T Cells,”J.Immunol.142:737-743)。在美国专利号7,883,703、7,728,114、7,635,472、7,575,923和7,381,903，及在美国专利公布号2010/0150918、2010/0209437、2010/0183554、2010/0015142、2008/0095766、2007/0077246及在PCT公布WO2008/119567中公开了抗CD3抗体的使用。
在先抗体的特定局限性是它们仅对人CD3特异性。该局限性是对开发此类抗体作为用于治疗人类疾病的治疗剂的重要阻碍。为了获得市场准入，任何新的候选药物必须通过严格的测试。该测试可被再分为临床前和临床阶段。而后者-进一步再分为通常称为临床阶段I、II和III-在人患者中执行，前者则在动物中执行。临床前测试的目的是为了证明该候选药物具有期望的活性并最重要地该候选药物是安全的。只有当在临床前测试中已确立了候选药物在动物中的安全性及可能的效力时，该候选药物才将被相应的管理机构批准用于在人中的临床测试。可以以下面三种方式测试候选药物在动物中的安全性，(i)在相关的物种、即在其中候选药物可识别直系同源抗原的物种中，(ii)在包含人抗原的转基因动物中和(iii)通过使用能够结合存在于动物中的直系同源抗原的候选药物的替代物。转基因动物的局限性为该技术典型限于啮齿动物。然而，啮齿动物和人在生理学方面具有显著差异，该显著差异可使得外推在啮齿动物中获得的安全性数据来预测在人中的安全性复杂化。候选药物的替代物的局限性是与实际候选药物相比，物质的不同组成且通常使用的动物是啮齿动物，具有如以上讨论的局限性。因此，在啮齿动物中产生的临床前数据关于候选药物的预测能力有限。用于安全性测试的精选方法是使用相关物种，优选低等灵长类动物。本领域描述的目前适于在人中治疗干预的CD3结合分子的局限性是相关物种是高等灵长类动物，特别地是食蟹猴。因此，能够与人和灵长类动物二者的CD3结合的抗CD3抗体是高度期望的。在美国专利公布号20100150918及在PCT公布WO2008/119567中已描述此类抗体。
尽管有这样的进展，对能够与非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3交叉反应的抗人CD3抗体和它们的抗原结合片段仍有需求。本发明解决了该需求和用于癌症、自身免疫性和炎性疾病的改善的治疗的需求。
发明概述
本发明涉及能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子，并特别涉及与非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3交叉反应的此类分子。本发明还涉及此类抗体和抗原结合片段在治疗癌症、自身免疫性和/或炎性疾病和其他病症中的用途。
详细地，本发明提供了包含抗体的抗原结合片段的CD3结合分子，其中该抗原结合片段包含抗体CD3特异性VL结构域(antibody CD3-specific VL domain)和抗体CD3特异性VH结构域(antibody CD3-specific VH domain)，其中CD3特异性VL结构域和CD3特异性VH结构域形成能够与人CD3的表位及与非人哺乳动物的CD3的表位二者免疫特异性结合的抗原结合结构域，其中：
(I)CD3-特异性VL结构域选自由以下组成的组：h-mab2 VL-1(SEQ ID NO:16)、h-mab2 VL-2(SEQ ID NO:18)、h-mab2 VL-3(SEQ ID NO:20)、h-mab2 VL-4(SEQ ID NO:22)、h-mab2 VL-5(SEQ ID NO:24)、h-mab2VL-6(SEQ ID NO:26)、h-mab2 VL-7(SEQ ID NO:28)、h-mab2 VL-8(SEQ ID NO:30)、h-mab2 VL-9(SEQ ID NO:32)和h-mab2 VL-10(SEQ ID NO:34)，且所述CD3-特异性VH结构域选自由以下组成的组：h-mab2 VH-1(SEQ ID NO:36)、h-mab2 VH-2(SEQ ID NO:38)、h-mab2 VH-3(SEQ ID NO:40)、h-mab2 VH-4(SEQ ID NO:42)、h-mab2 VH-5(SEQ ID NO:44)、h-mab2 VH-6(SEQ ID NO:46)、h-mab2 VH-6L(SEQ ID NO:54)、h-mab2VH-7(SEQ ID NO:48)、h-mab2 VH-8(SEQ ID NO:50)、h-mab2 VH-8L(SEQ IDNO:55)、h-mab2 VH-8 di-1(SEQ ID NO:56)、h-mab2 VH-8 di-2(SEQ ID NO:57)、h-mab2VH-6M(SEQ ID NO:72)、h-mab2 VH-8M(SEQ ID NO:74)、h-mab2 VH-2k(SEQ ID NO:87)和h-mab2 VH-5k(SEQ ID NO:88)；或
(II)CD3特异性VL结构域选自由以下组成的组：h-mab1VL-1(SEQ ID NO:10)和h-mab1VL-2(SEQ ID NO:12)，且CD3特异性VH结构域是h-mab1VH(SEQ ID NO:14)。
本发明特别涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中CD3特异性VL结构域是h-mab2 VL-6(SEQ ID NO:26)。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中CD3特异性VH结构域是h-mab2 VH-8(SEQ ID NO:50)、h-mab2 VH-6(SEQ ID NO:46)或h-mab2 VH-2k(SEQ ID NO:87)。
本发明特别涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中该分子是抗体，且特别地，其中该抗体缺乏Fc区或包含以下Fc区：
(A)缺乏效应子功能或具有降低的效应子功能；或
(B)损害该抗体的Fc区与Fc受体结合的能力；
其中效应子功能的降低和结合能力的损害是相对于野生型Fc受体的。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中该分子是包含第一多肽链和第二多肽链的CD3结合双抗体(diabody)，链与彼此共价结合，其中：
I.第一多肽链包含氨基末端和羧基末端及从N末端至C末端：
(i)结构域(A)，包含CD3特异性VL结构域；
(ii)结构域(B)，包含第二免疫球蛋白的重链可变结构域(VH2)的结合区；和
(iii)结构域(C)；
其中结构域(A)和结构域(B)不与彼此缔合形成表位结合位点；
和
(II)第二多肽链包含氨基末端和羧基末端及从N末端至C末端：
(i)结构域(D)，包含第二免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL2)的结合区；
(ii)结构域(E)，包含CD3特异性VH结构域；和
(iii)结构域(F)；
其中结构域(D)和结构域(E)不与彼此缔合形成表位结合位点；和
其中：
(1)结构域(A)和结构域(E)缔合以形成能够与人CD3及与非人哺乳动物的CD3二者免疫特异性结合的抗原结合结构域；
(2)结构域(B)和结构域(D)缔合以形成与第二表位免疫特异性结合的结合位点，该第二表位与被由结构域(A)和结构域(E)的缔合形成的抗原结合结构域结合的CD3表位不同；且
(3)结构域(C)和结构域(F)共价缔合在一起。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中第二表位不是CD3的表位。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子的实施方案，其中第二表位是与被由结构域(A)和结构域(E)的缔合形成的抗原结合结构域结合的CD3表位不同的CD3的表位。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或抗体或双抗体的实施方案，其中此分子被人源化。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或抗体或双抗体的实施方案，其中此分子能够与CD3及与荧光素免疫特异性结合。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或双抗体的实施方案，其中此分子能够与以下两项免疫特异性结合：(i)CD3和(ii)(a)肿瘤抗原，或(ii)(b)细胞表面抗原、受体或受体配体。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或双抗体的实施方案，其中该分子或双抗体能够与CD3及与肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原免疫特异性结合，其中该肿瘤细胞是来自选自由以下组成的组的癌症的肿瘤细胞：乳腺癌、前列腺癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、胃癌(stomach cancer)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或双抗体的实施方案，其中该分子或双抗体能够与CD3及与细胞表面抗原、受体或受体配体免疫特异性结合，其中细胞表面抗原、受体或受体配体是HER2/neu、B7-H3、CD20、PSMA、IGF-1R.、Ep-CAM，或是参与导致适应性免疫应答中T细胞或B细胞活化的T细胞-B细胞缔合的分子。
本发明还涉及以上描述的CD3结合分子或双抗体的实施方案，其中该分子或双抗体能够与CD3及与参与T细胞-B细胞缔合的分子免疫特异性结合，且参与T细胞-B细胞缔合的该分子选自由以下组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD32B、CD38、CD40、CD79a、CD79b、CD80、CD86、LFA-I、LFA-3和CFA-I。
本发明还涉及包含以上描述的任何CD3结合分子、抗体或双抗体及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。
本发明还涉及以上描述的药物组合物用于治疗癌症或自身免疫性或炎性疾病。
本发明还涉及以上描述的药物组合物用于治疗选自由以下组成的组的自身免疫性或炎性疾病：I型胰岛素依赖型糖尿病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、多发性硬化、炎性肠病、重症肌无力、乳糜泻、Sjogren综合征、格雷弗氏病、克罗恩病、自身免疫性肝炎、银屑病、银屑病关节炎、哮喘、过敏性鼻炎、来自器官移植的影响、或移植物抗宿主病(GVHD)。本发明特别涉及以上描述的药物组合物用于治疗I型胰岛素依赖型糖尿病。
附图简述
图1A-1B显示了捕获ELISA的结果，其中使用人可溶性CD3(“shCD3”)评价了抗CD3抗体mAB1(图1A)或抗体mAB1的嵌合衍生物(ch-mAb1)(图1B)的能力。
图2A-2B显示了捕获ELISA的结果，其中使用人可溶性CD3(“shCD3”)或可溶性食蟹猴CD3(“scCD3”)评价了抗CD3抗体mAB2(图2A)或抗体mAB2的嵌合衍生物(ch-mAb2)(图2B)的能力。
图3显示了分析以确定mAb2的轻链的Kabat编号的构架残基41-46中的变化的影响的结果。
图4显示了分析以确定mAb2的轻链的Kabat编号的构架残基36、38、44和46中的变化的影响的结果。
图5显示了分析以确定mAb2的轻链的Kabat编号的构架残基36、38和46中的变化的影响的结果。
图6显示了分析以确定mAb2的重链的Kabat编号的构架残基30、49和93中的变化的影响的结果。
图7显示了进行另外的分析以确定mAb2的重链的Kabat编号的构架残基30、49和93中的变化的影响的结果。
图8A-8B显示了进行的分析以评价嵌合和人源化mAb2与非人CD3结合的能力的结果。
图9A-9D显示了进行的BIACORETM分析以确定ch-mAB2或h-mAb2和scCD3或scCD3的结合动力学的传感图追踪。
图10A-10D显示了对具有抗CD3第一表位结合位点和与Her2/neu、CD19、EGFR或B7-H3结合的第二表位结合位点的DARTTM双抗体执行的捕获ELISA的结果。
图11A-11B显示了B7H3 x CD3 DARTTM双抗体介导再定向杀死(redirectedkilling)表达B7H3的肿瘤细胞的能力。
图12A-12E显示了A33 x CD3 DARTTM双抗体介导再定向杀死表达A33的肿瘤细胞的能力。
图13A和13B显示了CD19-h-mAb2 DARTTM和CD19 x CD3 DART双抗体诱导再定向T细胞介导的杀死的能力的比较的结果。CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体呈现了对人以及非人CD3的特异性；CD19 x CD3 DART双抗体则仅呈现对人CD3的特异性。图13A：Raji人B细胞淋巴瘤细胞的再定向杀死；图13B：JeKo-1人套细胞淋巴瘤细胞的再定向杀死。
图14A和14B显示了本发明的CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体能够介导人或非人T细胞效应细胞的存在下的细胞溶解。
图15A和15B显示了当与CD4+或CD8+ T细胞一起孵育时本发明的ERBITUXTM-h-mAb2DARTTM双抗体或ERBITUXTM-T-Cell Receptor DARTTM双抗体介导CD69 MFI的增加的能力；对照ERBITUXTM-FN18 CD3 DARTTM双抗体(能够与EGFR及与食蟹猴CD3结合)未能引起CD69 MFI的增加。
图16A-16D显示了ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体、ERBITUXTM-m-mAb2 DARTTM双抗体或4420-h-mAb2 DARTTM双抗体(阴性对照)或第二对照与A498或A431细胞(分别地图16A和16C)的结合，及介导再定向杀死此类细胞(分别地图16B和16D)的研究的结果。
发明详述
本发明涉及抗人CD3抗体和它们的抗原结合片段，及特别地涉及与非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3交叉反应的此类抗体。本发明还涉及此类抗体和抗原结合片段在治疗癌症、自身免疫性和/或炎性疾病和其他病症中的用途。
I.定义
如本文所用的，术语“CD3结合分子”表示通过位于该分子的可变区中的至少一个抗原识别位点(例如，抗体的抗原结合结构域)能够与人CD3及与非人哺乳动物的CD3二者免疫特异性结合的分子。如本文所用的，与人CD3及与非人哺乳动物的CD3二者免疫特异性结合的此能力不预期表示单个抗原结合结构域与此类CD3分子二者同时结合的能力，而是表示此抗原结合结构域呈现交叉反应性如此以致当在人CD3存在下孵育时其将与人CD3免疫特异性结合并当在此非人哺乳动物CD3存在下孵育时其将与非人哺乳动物的CD3免疫特异性结合。
如本文所用的，术语“CD3结合分子”不仅包含完整的多克隆或单克隆抗体，还包含其片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2Fv)、单链(ScFv)、其突变体、天然存在的变体、包含具有期望的特异性的抗原识别位点的抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、“DARTTM”双抗体分子、和包含期望的特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型。术语“BiTE”(双特异性T细胞接合体(engager))指具有两个抗原结合结构域的单个多肽链分子，这两个抗原结合结构域之一与T细胞抗原结合且其第二个与靶的表面上存在的抗原结合(WO 05/061547；Baeuerle,P等人(2008)“A New Class OfAntibodies That Recruit T Cells,”Drugs of the Future 33:137-147；Bargou,等人(2008)“Tumor Regression in Cancer Patients by Very Low Doses of a T Cell-Engaging Antibody,”Science 321:974-977)。
术语“DARTTM”(Dual Affinity ReTargeting reagent,双亲和再靶向试剂)双抗体指包含缔合(特别地通过共价相互作用)以形成至少两个表位结合位点的至少两条多肽链的免疫球蛋白分子，其可识别相同的或不同的表位。DARTTM双抗体的每个多肽链包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区，但这些区不相互作用形成表位结合位点。而是，DARTTM双抗体多肽链之一(例如，第一条)的免疫球蛋白重链可变区与不同的(例如，第二条)DARTTM多肽链的免疫球蛋白轻链可变区相互作用以形成表位结合位点。相似地，DARTTM双抗体多肽链之一(例如，第一条)的免疫球蛋白轻链可变区与不同的(例如，第二条)DARTTM双抗体多肽链的免疫球蛋白重链可变区相互作用以形成表位结合位点。DARTTM双抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性的，等等，因此能够同时结合一个、两个、三个或多个不同的表位(其可以是相同的或不同的抗原)。DARTTM双抗体可另外是单价、二价、三价、四价、五价、六价的，等等，因此能够同时结合一个、两个、三个、四个、五个、六个或多个分子。DARTTM双抗体的这两个属性(即，特异性程度和化合价)可被组合，例如以制备四价(即，能够结合四组表位)的双特异性抗体(即，能够结合两个表位)，等等。在PCT公布WO 2006/113665、WO2008/157379和WO 2010/080538中公开了DARTTM双抗体分子。
本发明的双特异性(或三特异性或多特异性)分子将能够与人CD3和非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3二者结合，且还将能够与第二(或另外的)及不同的抗原或表位结合。第二抗原或表位优选是肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原。此类肿瘤细胞可来自癌症，例如，乳腺癌、前列腺癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、胃癌(stomach cancer)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤或白血病。另外的抗原或表位优选是细胞表面肿瘤抗原或表位(诸如：17-1A、A33、成人红细胞原内胚层I抗原、甲胎蛋白、RNA肿瘤病毒的包膜抗原、膀胱肿瘤癌胚抗原、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、伯基特淋巴瘤抗原-38.13、CA125、CD18、CD19、人B-淋巴瘤抗原-CD20、CD22、CD33、CD44、CD52、CEA、CO17-1A、CTA-1、CTLA-4、表皮生长因子受体、Ep-CAM、EphA2、胎儿红细胞I抗原、纤维肉瘤抗原、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、神经节苷脂GM2、神经节苷脂GM3、GICA 19-9、gpIIIb/IIIa、gp72、HER1、HER-2/neu、HER3、HER4、高分子量黑色素瘤抗原、HLA-DR抗原、人白血病T细胞抗原-Gp37、人肺癌抗原L20、人肺癌抗原L6、人乳脂肪球抗原、IgE、KS 1/4泛癌抗原、LEA、肺腺癌F3抗原、人恶性淋巴细胞抗原-APO-1、黑色素瘤抗原gp75、黑色素瘤相关抗原p97、拟糖蛋白、nuC242、多形上皮粘蛋白抗原、前列腺特异性抗原、前列腺特异性膜抗原、前列腺酸性磷酸盐、SK-1抗原、TAG-72、T-抗原、肿瘤抗原CA125、肿瘤抗原MUC1、肿瘤特异性移植类型的细胞表面抗原、血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体和αvβ3)。可选地，此类另外的抗原或表位可与病原体(诸如：甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性感冒、水痘、腺病毒、I型单纯疱疹(HSV-I)、II型单纯疱疹(HSV-II)、牛瘟、鼻病毒、艾柯病毒、轮状病毒、呼吸道合胞体病毒、乳头瘤病毒、乳多泡病毒、巨细胞病毒、棘状病毒(echinovirus)、虫媒病毒、汉他病毒(hantavirus)、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花、Epstein-Barr病毒、人免疫缺陷病毒I型(HIV-I)、人免疫缺陷病毒II型(HIV-II)、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、登革热、天花；分枝杆菌立克次氏体(mycobacteriarickettsia)、支原体(mycoplasma)、奈瑟氏菌属(neisseria)、肺炎链球菌(S.pneumonia)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、链球菌属(Streptococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、破伤风、百日咳、霍乱、瘟疫、白喉、衣原体(chlamydia)和军团菌属(legionella)；利什曼原虫、球虫病、锥虫属(trypanosoma)或疟疾；衣原体和立克次氏体)相关。
术语“单克隆抗体”指同质性抗体群体，其中单克隆抗体由参与抗原的选择性结合的氨基酸(天然存在和非天然存在的)组成。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。术语“单克隆抗体”不仅包含完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，还包含其片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2Fv)、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和包含具有期望的特异性的抗原识别位点和与抗原结合的能力的免疫球蛋白分子的任何其他修饰的构型。不预期限制关于抗体的来源或其制备的方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物，等)。该术语包括以上在“抗体”的定义下描述的完整免疫球蛋白及片段，等。
术语“人源化抗体”指通常使用重组技术制备的嵌合抗体，具有源自来自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点和基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的分子的其余免疫球蛋白结构。抗原结合位点可包含与恒定结构域融合的完整的可变结构域或仅包含接枝(graft)到可变结构域中适合的构架区上的互补决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的或通过一个或多个氨基酸取代被修饰的。这消除了在人个体中作为免疫原的恒定区，而保留了对外来可变区的免疫应答的可能性(LoBuglio,A.F.等人(1989)“Mouse/HumanChimeric Monoclonal Antibody In Man:Kinetics And Immune Response,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86:4220-4224)。另一个方法不仅集中在提供源自人的恒定区，而且还集中在修饰该可变区，以改造它们与人中可变区的形式尽可能接近。已知的是重链和轻链二者的可变区包含对所讨论的抗原的应答不同及决定结合能力的三个互补决定区(CDR)，其侧翼为在给定物种中是相对保守的并推定提供用于CDR的支架的四个构架区(FR)。当制备关于特定抗原的非人抗体时，可变区可通过将源自非人抗体的CDR与存在于待被修饰的人抗体中的FR接枝而被“改造”或“人源化”。已由Sato,K.等人(1993)Cancer Res53:851-856；Riechmann,L.等人(1988)“Reshaping Human Antibodies for Therapy,”Nature 332:323-327；Verhoeyen,M.等人(1988)“Reshaping Human Antibodies:GraftingAn Antilysozyme Activity,”Science 239:1534-1536；Kettleborough,C.A.等人(1991)“Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting:The ImportanceOf Framework Residues On Loop Conformation,”Protein Engineering 4:773-3783；Maeda,H.等人(1991)“Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity,”Human Antibodies Hybridoma 2:124-134；Gorman,S.D.等人(1991)“Reshaping A Therapeutic CD4Antibody,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)88:4181-4185；Tempest,P.R.等人(1991)“Reshaping A Human Monoclonal Antibody ToInhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo,”Bio/Technology9:266-271；Co,M.S.等人(1991)“Humanized Antibodies For Antiviral Therapy,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)88:2869-2873；Carter,P.等人(1992)“Humanization OfAn Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)89:4285-4289；和Co,M.S.等人(1992)“Chimeric And Humanized AntibodiesWith Specificity For The CD33Antigen,”J.Immunol.148:1149-1154报道了将该方法应用于多种抗体。
在一些实施方案中，人源化抗体保留了所有CDR序列(例如，包含来自小鼠抗体的所有6个CDR的人源化小鼠抗体)。在其他实施方案中，人源化抗体具有相对于原始抗体被改变的一个或多个CDR(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，其还被称为“源自”来自原始抗体的一个或多个CDR的一个或多个CDR。如下面公开的，本发明优选的抗体具有特异性鉴定的CDR。然而，本发明涵盖具有改变的CDR的等同抗体。
如本文所用的，如果相对于可选的表位，抗体或多肽与另一个分子的区(即，表位)更加频繁、更快速、以更长的持续时间和/或以更高的亲和力反应或缔合，抗体或多肽则被称为与那个表位“免疫特异性”或等同地、“特异性”结合。例如，与CD3表位特异性结合的抗体是以比其与其他CD3表位或非CD3表位结合更高的亲和力、亲合力、更快速和/或以更长的持续时间结合该CD3表位的抗体。通过阅读该定义还被理解的是，例如，与第一靶免疫特异性结合的抗体(或部分或表位)可以或可以不与第二靶特异性或优先结合。如此，“免疫特异性结合”不必然要求(尽管其可包含)“排他的”结合。通常，但不必然地，提及结合指“免疫特异性”结合。
如本文所用的，关于表位的术语“免疫活性”或“剩余免疫活性”指在不同条件在，例如，在表位已经受还原和变性条件之后，抗体(例如，抗CD3抗体)与表位结合的能力。例如，如果抗体不再能够与变性的表位结合，该表位则被称为已呈现免疫无活性的。
不同的生物功能与本发明的抗CD3抗体相关，且此类抗体可呈现任何或所有以下的属性，或可缺少一个、两个、三个或多个此类属性：特异性结合在正常人T细胞的表面内源性表达的人CD3的能力；特异性结合在人白血病T细胞的表面内源性表达的人CD3的能力；特异性结合在正常的非人哺乳动物T细胞的表面内源性表达的非人哺乳动物(例如，食蟹猴)CD3的能力；特异性结合在正常的非人T细胞的表面内源性表达的非人CD3的能力；特异性结合在非人白血病T细胞的表面内源性表达的非人CD3的能力；中和(即，阻断或干扰结合)CD3复合物的形成的能力；中和TCR复合物的形成的能力；调节(拮抗或激动性地)由TCR复合物的信号传导；结合Fc受体的能力；竞争性抑制已知的抗CD3抗体与CD3的优先结合的能力，包括与原始抗体优先结合的相同CD3表位优先结合的能力；在体外或体内与暴露于活细胞的表面的CD3的部分结合的能力；与暴露在活的癌细胞的表面的CD3的部分结合的能力；将化学治疗剂递送进入癌性T细胞的能力；和/或将治疗剂、毒素或可检测的标志物递送进入T细胞的能力。如本文讨论的，本发明的多肽(包括抗体)可具有这些特征的任何一个或多个。
如本文所用的，术语“剂”指生物、药学或化学化合物。非限制性实例包括简单或复杂的有机或无机分子、肽、蛋白、寡核苷酸、抗体、抗体衍生物、抗体片段、维生素衍生物、碳水化合物、毒素、或化学治疗化合物。可合成多种化合物，例如，小分子和低聚物(例如，寡肽和寡核苷酸)和基于多种核心结构的合成的有机化合物。另外，多种天然来源可提供用于筛选的化合物，诸如植物或动物提取物，等等。可随机选择或理性选择或设计本发明方法中采用的剂。如本文所用的，当在没有参与分子与其天然的结合配偶体或已知抗体的缔合的特定氨基酸或其他化学部分的在先考虑或知识的条件下选择剂时，剂被称为是随机选择的。随机选择的剂的实例是通过化学药品库或肽组合文库的使用和筛选鉴定的剂。如本文所用的，当在考虑靶位点的序列和/或其构象与剂的作用的联合的非随机基础下选择剂时，剂被称为是理性选择或设计的。可通过利用组成受体/配体和/或CD3/抗CD3抗体复合物的接触位点的肽序列理性选择或理性设计剂。例如，理性选择的肽的剂可以是其氨基酸序列与呈现在暴露于天然环境中的活细胞的表面的CD3上的表位一致的肽。如期望的，此剂将通过与抗CD3抗体或与天然配体结合减少或阻断抗CD3抗体与CD3的缔合或CD3与其天然配体的缔合。
如本文所用的，关于抗体的术语“标记的”预期包含通过偶合(即，物理连接)可检测的物质，诸如放射性剂或荧光团(例如，藻红蛋白(PE))或异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate)(还称为异硫氰酸荧光素(fluoroisothiocyanate)或FITC)至抗体直接标记抗体，及通过与可检测的物质的反应性间接标记探针或抗体。
如本文所用的，关于抗体的术语“缔合”包括剂(例如，化学治疗剂)与抗体共价和非共价的附着或结合。抗体可通过直接结合或通过附着至共同平台(common platform)的间接结合与剂(例如，化学治疗剂)缔合，如此以致该抗体指导该剂定位至该抗体结合的癌性细胞，且其中该抗体和剂在生理条件下大致上不离解如此以致该剂不靶向该抗体结合的相同的癌性细胞或如此以致该剂的效力不被减弱。
术语“生物样品”包含从个体获得的多种样品类型并可被用于诊断或监测分析。该定义包括唾液、血液和生物来源的其他液体样品、固体组织样品诸如活检标本或组织培养物或源自其的细胞、和其子代，例如，从采集自怀疑患有癌症的个体的组织样品获得的细胞，在优选的实施方案中，从卵巢、肺、前列腺、胰腺、结肠和乳腺组织获得的细胞。该定义还包括在它们的取得之后以任何方式被操作的样品，诸如通过用试剂处理、溶解或特定的成分、诸如蛋白或多核苷酸的富集、或为了切片的目的在半固体或固体基质中包埋。术语“生物样品”包含临床样品，并还包括培养的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物流体和组织样品。
术语“宿主细胞”包括可以是或已经是用于并入多核苷酸插入物的载体的接受者的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单个宿主细胞的子代，及由于天然的、偶然的或有意的突变(在形态学方面或在基因组DNA互补链方面)与原始亲本细胞可以不必然完全一致的子代。宿主细胞包括用本发明的多核苷酸体内转染的细胞。
如本文所用的，在一个实施方案中，药物组合物的“有效量”是足够产生包括但不限于以下的有益的或期望的结果的量：临床结果诸如使肿瘤的大小或生长速率缩小、推迟或减弱炎性反应、增加忍受疾病的个体的生命质量、减少治疗此疾病需要的其他药物的剂量、通过诸如靶向和/或内化增强另一种药物的效果、推迟疾病的进展和/或延长个体存活。可以以一次或多次施用来施用此有效量。为了本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效量是足够改善临床可观察到的病症的量。
在一些实施方案中，药物、化合物或药物组合物的有效量可以与或可以不与另外的药物、化合物或药物组合物联合获得。因此，可在施用一种或多种另外的剂的情况下考虑“有效量”，且如果与一种或多种其他剂联合，可考虑以有效量给予单个剂，则可获得或获得期望的结果。尽管个体的需要不同，每一种成分的有效量的最佳范围的确定在本领域技术之内。施用至患者的典型剂量典型地从患者体重的0.0001mg/kg至100mg/kg。优选地，施用至患者的剂量在患者体重的0.0001mg/kg和20mg/kg之间、0.0001mg/kg和10mg/kg之间、0.0001mg/kg和5mg/kg之间、0.0001mg/kg和2mg/kg之间、0.0001mg/kg和1mg/kg之间、0.0001mg/kg和0.75mg/kg之间、0.0001mg/kg和0.5mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.25mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.15mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.10mg/kg之间、0.001mg/kg至0.5mg/kg之间、0.01mg/kg至0.25mg/kg之间或0.01mg/kg至0.10mg/kg之间。本发明的分子的施用的剂量和频率可通过修饰诸如例如脂化增强本发明的分子的摄入和组织渗入而被减少或改变。
如本文所用的，当从天然存在于其原始来源的污染物核酸分子、抗体、剂、组合物或细胞等基本上分离核酸分子、剂、抗体、组合物或细胞等时，该核酸分子或剂、抗体、组合物或细胞等则被称为是“分离的”。
术语“个体”指脊椎动物，优选哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，人、农场动物、运动动物、宠物、灵长类动物、小鼠和大鼠。在最优选的实施方案中，术语个体指人。
术语“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白”在本文被互换地使用以指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是直链的或支链的，其可包含修饰的氨基酸，且其可被非氨基酸中断。该术语还包含已天然地或通过干涉被修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，诸如与标记成分的缀合。还被包括在该定义内的是，例如，包含氨基酸(包括，例如，非天然的氨基酸，等)的一种或多种类似物、及本领域已知的其他修饰的多肽。被理解的是，由于本发明的多肽基于抗体，该多肽可作为单链或作为缔合的链存在。
如本文所用的，术语“基本上纯的”指至少50％纯的(即，无污染物)、更优选地至少90％纯的、更优选地至少95％纯的、更优选地至少98％纯的、更优选地至少99％纯的、且最优选地大于99％纯的材料(material)。
如本文所用的，术语“毒素”指在细胞内产生不良应答的任何物质。例如，针对癌性细胞的毒素将对癌性细胞具有不良的、有时有毒的作用。毒素的实例包括，但不限于，紫杉烷(taxane)、美登素(maytansinoid)、奥里斯他汀(auristatin)(例如，单甲基奥里斯他汀(monomethyl auristatin)(MMAE)、单甲基奥里斯他汀F(monomethyl auristatin F)(MMAF)、奥里斯他汀E(AE)、等)(诸如在美国专利号5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,340,701、6,372,738、6,436,931、6,441,163、6,596,757、7,276,497、7,585,857或7,851,432中公开的那些)、卡奇霉素、蒽环类药物(例如，阿霉素)、CC-1065类似物、多西他奇；组织蛋白酶B或E；蓖麻毒素、白树毒素、假单胞菌(Pseudomonas)外毒素、白喉毒素和RNase；放射性标记的抗体(例如，缀合tiuxetan的或用有毒的放射性同位素(例如，90Y、131I、177Lu、186Re、188Re、211At、212Bi、213Bi、225Ac等)标记的)。
如本文使用的，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”指用于获得有益的或期望的结果，包括并优选地有益的或期望的临床结果的方法。此类有益的或期望的临床结果包括，但不限于以下的一种或多种：减少炎性或自身免疫应答、减少(或破坏)癌性细胞或其他患病的细胞的增殖、减少见于癌症的癌性细胞的转移、缩小肿瘤的大小、减少由疾病引起的症状、增加忍受疾病的个体的生命质量、减小治疗疾病需要的其他药剂的剂量、推迟疾病的进展、和/或延长个体的存活。
II.制备本发明的抗体和多肽的方法
制备单克隆抗体的方法是本领域已知的。可采用的一种方法是Kohler,G.等人，(1975)“Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of PredefinedSpecificity,”Nature 256:495-497的方法或其修改形式。典型地，单克隆抗体在非人物种，诸如小鼠中形成。通常，小鼠或大鼠被用于免疫，但其他动物也可被使用。通过用免疫原性量的包含人CD3的细胞、细胞提取物或蛋白制剂免疫小鼠来制备抗体。免疫原可以是但不限于，原代细胞、培养的细胞系、癌性细胞、核酸或组织。
在一个实施方案中，通过使用过量表达CD3作为免疫原的宿主细胞获得与CD3结合的单克隆抗体。此类细胞包括，例如且不限于，人T细胞。
为了监测抗体应答，可从动物获得小的生物样品(例如，血液)并测试针对免疫原的抗体滴度。可移除脾和/或一些大的淋巴结并离解为单细胞。如需要，(在非特异性粘附细胞去除之后)可通过将细胞悬液施加至抗原涂覆的平板或孔筛选脾细胞。表达膜结合的抗原特异性的免疫球蛋白的B细胞，将与平板结合，并不会被剩余的悬液冲洗掉。随后，可将所得B细胞或所有离解的脾细胞与骨髓瘤细胞(例如，X63-Ag8.653和来自SaIk Institute,Cell Distribution Center,San Diego,CA的细胞)融合。聚乙二醇(PEG)可被用于融合脾或淋巴细胞与骨髓瘤细胞以形成杂交瘤。随后在选择性培养基(例如，次黄嘌呤、氨喋呤、胸苷培养基，另外称为“HAT培养基”)中培养杂交瘤。随后，通过有限稀释将所得杂交瘤铺板，并使用例如FACS(荧光激活细胞分选术)或免疫组织化学(IHC)筛选分析与免疫原特异性结合的抗体的产生。随后，体外(例如，在组织培养瓶或中空纤维反应器)或体内(例如，在小鼠中作为腹水)培养选择的单克隆抗体-分泌杂交瘤。
作为细胞融合技术的另一个替代方式，可使用Epstein-Barr病毒(EBV)永生化的B细胞以制备本发明的单克隆抗体。如需要，增殖并亚克隆杂交瘤，并通过传统的分析方法(例如，FACS、IHC、放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析，等)分析上清液的抗免疫原活性。
在另一个替代方式中，可通过本领域已知的任何方法(例如，人源化、使用转基因小鼠制备全人抗体、噬菌体展示技术，等)测序和重组制备抗CD3单克隆抗体和任何其他等同抗体。在一个实施方案中，抗CD3单克隆抗体被测序且随后多核苷酸序列被克隆进入载体用于表达或增殖。编码目的抗体的序列可被保持在宿主细胞中的载体中且随后该宿主细胞可被增殖并冷冻用于以后使用。
抗CD3单克隆抗体和任何其他等同抗体的多核苷酸序列可被用于遗传操作以产生“人源化”抗体，以改进抗体的亲和力或其他特征。人源化抗体的一般原理包括保留抗体的抗原结合部分的基本序列，同时将该抗体的非人剩余部分置换为人抗体序列。存在人源化单克隆抗体的四个一般步骤。这些步骤为：(1)确定起始抗体轻链和重链可变结构域的核苷酸和预测的氨基酸序列，(2)设计人源化抗体，即，决定在人源化过程中使用哪一个抗体构架区，(3)实际的人源化方法/技术和，(4)人源化抗体的转染和表达。见，例如，美国专利号4,816,567、5,807,715、5,866,692和6,331,415。
已描述了包含源自非人免疫球蛋白的抗原结合位点的一些“人源化”抗体分子，包括具有啮齿动物或修饰的啮齿动物V区和它们缔合的与人恒定结构域融合的互补决定区(CDR)的嵌合抗体(见，例如，Winter等人(1991)“Man-made Antibodies,”Nature 349:293-299；Lobuglio等人(1989)“Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man:Kinetics And Immune Response,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)86:4220-4224(1989)，Shaw等人(1987)“Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody(17-1A)To A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen,”J.Immunol.138:4534-4538，和Brown等人(1987)“Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human ChimericMonoclonal Antibody,”Cancer Res.47:3577-3583)。其他参考文献描述了在与适合的人抗体恒定结构域融合之前被接枝入人支撑构架区(FR)的啮齿动物CDR(见，例如，Riechmann,L.等人(1988)“Reshaping Human Antibodies for Therapy,”Nature 332:323-327；Verhoeyen,M.等人(1988)“Reshaping Human Antibodies:Grafting AnAntilysozyme Activity,”Science 239:1534-1536；和Jones等人(1986)“Replacing TheComplementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From AMouse,”Nature 321:522-525)。另一个参考文献描述了由重组镶饰的(veneered)啮齿动物构架区支撑的啮齿动物CDR。见，例如，欧洲专利公布号519,596。这些“人源化”分子被设计以使针对啮齿动物抗人抗体分子的不想要的免疫应答最小化，所述免疫应答限制了那些部分在人接受者中的治疗应用的持续时间和效力。Daugherty等人(1991)“Polymerase ChainReaction Facilitates The Cloning,CDR-Grafting,And Rapid Expression Of AMurine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18Component Of LeukocyteIntegrins,”Nucl.Acids Res.19:2471-2476及在美国专利号6,180,377、6,054,297、5,997,867和5,866,692公开了还可被使用的人源化抗体的其他方法。
本发明还包括本发明的抗体，诸如mu-抗-CD3的单链可变区片段(“scFv”)。通过使用短的连接肽连接轻链和/或重链可变区制备单链可变区片段。Bird等人(1988)(“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,”Science 242:423-426)描述了桥接一个可变区的羧基末端和其他可变区的氨基末端之间约3.5nm的连接肽的实例。已设计并使用了其他序列的连接体(Bird等人(1988)“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,”Science 242:423-426)。反过来，连接体可被修饰用于另外的功能，诸如药物的附着或与固相支持体的附着。可重组或合成制备单链变体。关于scFv的合成制备，可使用自动合成仪。对于scFv的重组制备，包含编码scFv的多核苷酸的适合的质粒可被引入适合的宿主细胞，真核细胞，诸如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞，或原核细胞，诸如大肠杆菌(E.coli)。可通过常规的操作，诸如多核苷酸的连接制备编码目的scFv的多核苷酸。可使用本领域已知的标准蛋白纯化技术分析所得scFv。
本发明包括对抗CD3抗体和它们的结合片段的修饰。多肽的修饰是本领域常规操作且本文不需要详细描述。修饰的多肽的实例包括具有不会显著有害地改变功能活性的氨基酸残基的保守取代、氨基酸的一个或多个缺失或添加，或化学类似物的使用的多肽。可被保守地彼此取代的氨基酸残基包括但不限于：甘氨酸/丙氨酸；缬氨酸/异亮氨酸/亮氨酸；天冬酰胺/谷氨酰胺；天冬氨酸/谷氨酸；丝氨酸/苏氨酸；赖氨酸/精氨酸；和苯丙氨酸/酪氨酸。这些多肽还包括糖基化的和非糖基化的多肽，及具有其他翻译后修饰、诸如例如不同糖的糖基化、乙酰化及磷酸化的多肽。优选地，氨基酸取代将是保守的，即，取代的氨基酸将具有与原始氨基酸的化学性质相似的化学性质。此类保守的取代是本领域已知的，且以上已提供了实例。氨基酸修饰可从改变或修饰一个或多个氨基酸至完全重新设计区，诸如可变区的范围。可变区中的变化可改变结合亲和力和/或特异性。修饰的其他方法包括使用本领域已知的偶合技术，包括但不限于，酶的方法、氧化取代及螯合作用。修饰可被用于，例如，免疫分析的标记物的附着，诸如用于放射性免疫分析的放射性部分的附着。使用本领域建立的方法制备修饰的多肽并可使用本领域已知的标准分析进行筛选。
CDR残基的单个氨基酸改变可导致功能结合的丢失的事实(Rudikoff,S.等(1982)“Single Amino Acid Substitution Altering Antigen-Binding Specificity,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)79(6):1979-1983)提供了用于系统鉴定替代功能CDR序列的方法。在用于获得此变体CDR的一个优选的方法中，(例如，通过随机诱变或通过定点方法(例如，用编码突变的基因座的引物的聚合酶介导的链扩增))诱变处理编码CDR的多核苷酸以制备具有取代的氨基酸残基的CDR。通过比较原始(功能)CDR序列中相关残基的同一性与取代的(无功能的)变体CDR序列的同一性，可鉴定关于该取代的BLOSUM62.iij取代分数。BLOSUM系统提供了通过分析可信的比对的序列的数据库创建的氨基酸取代的矩阵(matrix)(Eddy,S.R.(2004)“Where Did The BLOSUM62Alignment Score Matrix ComeFrom？,”Nature Biotech.22(8):1035-1036；Henikoff,J.G.(1992)“Amino acidsubstitution matrices from protein blocks,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)89:10915-10919；Karlin,S.等人(1990)“Methods For Assessing The Statistical SignificanceOf Molecular Sequence Features By Using General Scoring Schemes,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)87:2264-2268；Altschul,S.F.(1991)“Amino AcidSubstitution Matrices From An Information Theoretic Perspective,”J.Mol.Biol.219,555-565)。目前，最高级的BLOSUM数据库是BLOSUM62数据库(BLOSUM62.iij)。表1展示了BLOSUM62.iij取代分数(分数越高取代越保守并因此该取代将较不可能影响功能)。如果包含所得CDR的抗原结合片段未能够与CD3结合，那么BLOSUM62.iij取代分数则被视为不够保守，进而选择并产生具有较高取代分数的新的候选取代。因此，例如，如果原始残基是谷氨酸(E)，且无功能的取代残基是组氨酸(H)，那么BLOSUM62.iij取代分数将为0，且更保守的改变(诸如改变为天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、或赖氨酸)是优选的。
本发明因此涉及使用随机诱变以鉴定改进的CDR。噬菌体展示技术可以可选地被用于增加(或减弱)CDR亲和力。称为亲和力成熟的该技术采用了诱变或“CDR步移(CDRwalking)”和重新选择，使用靶抗原或其抗原片段以鉴定当与初始或亲本抗体相比时具有以较高(或较低)亲和力与抗原结合的CDR的抗体(见，例如，Glaser等人(1992)J.Immunology 149:3903)。诱变处理整个密码子而不是单个核苷酸导致半随机化的整套氨基酸突变。可构建由变体克隆的池组成的文库，每一个变体克隆根据单个CDR中的单个氨基酸改变而不同且变体克隆包含代表每一个CDR残基的每一种可能的氨基酸取代的变体。可通过将固定的突变体与标记的抗原接触来筛选具有对抗原的增加的(或减弱的)结合亲和力的突变体。可将本领域已知的任何筛选方法用于鉴定具有对抗原增加的或减弱的亲和力的突变抗体(例如，ELISA)(见，Wu等人1998,Proc Natl.Acad Sci.USA95:6037；Yelton等人,1995,J.Immunology 155:1994)。如果可能，可使用随机化轻链的CDR步移(见，Schier等人,1996,J.Mol.Bio.263:551)。
在例如：Krause,J.C.等人(2011)“An Insertion Mutation That DistortsAntibody Binding Site Architecture Enhances Function Of A Human Antibody,”MBio.2(1)pii:e00345-10.doi:10.1128/mBio.00345-10；Kuan,C.T.等人(2010)“Affinity-Matured Anti-Glycoprotein NMB Recombinant Immunotoxins TargetingMalignant Gliomas And Melanomas,”Int.J.Cancer 10.1002/ijc.25645；Hackel,B.J.等人(2010)“Stability And CDR Composition Biases Enrich Binder FunctionalityLandscapes,”J.Mol.Biol.401(1):84-96；Montgomery,D.L.等人(2009)“AffinityMaturation And Characterization Of A Human Monoclonal Antibody Against HIV-1gp41,”MAbs 1(5):462-474；Gustchina,E.等人(2009)“Affinity Maturation ByTargeted Diversification Of The CDR-H2Loop Of A Monoclonal Fab Derived From ASynthetic Human Antibody Library And Directed Against The InternalTrimeric Coiled-Coil Of Gp41Yields A Set Of Fabs With Improved HIV-1Neutralization Potency And Breadth,”Virology 393(1):112-119；Finlay,W.J.等人(2009)“Affinity Maturation Of A Humanized Rat Antibody For Anti-RAGE Therapy:Comprehensive Mutagenesis Reveals A High Level Of Mutational Plasticity BothInside And Outside The Complementarity-Determining Regions,”J.Mol.Biol.388(3):541-558；Bostrom,J.等人(2009)“Improving Antibody Binding Affinity AndSpecificity For Therapeutic Development,”Methods Mol.Biol.525:353-376；Steidl,S.等人(2008)“In Vitro Affinity Maturation Of Human GM-CSF Antibodies ByTargeted CDR-Diversification,”Mol.Immunol.46(1):135-144；和Barderas,R.等人(2008)“Affinity maturation of antibodies assisted by in silico modeling,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)105(26):9029-9034中描述了用于实现此亲和力成熟的方法。在优选的实施方案中，可用选择的CD3抗体涂覆多孔平板(例如，碳酸盐缓冲液中100ng/孔，于室温下持续2小时)并随后与以1/10稀释添加的并在室温下持续16小时孵育的或在PBS-T-BSA中被稀释为50ng/ml的浓度的可溶性CD3一起孵育(添加0.05ml至每个孔并在室温下持续至少2h孵育)。随后洗涤平板且随后添加PBS-T-BSA中0.5μg/ml的起始重组抗体的稀释液并于室温下持续1小时孵育。随后使用，例如，抗人IgG-HRP缀合物和TMB底物测量重组抗体与捕获的抗原的结合。在停止使用稀硫酸的显色之后，在450nM下读取平板并鉴定较高亲和力的抗体(见，例如，美国专利号7,351,803)。
本发明包括包含本发明抗体的氨基酸序列的多肽。可通过本领域已知的方法制备本发明的多肽。可通过抗体的蛋白水解或其他降解、通过如以上描述的重组方法(即，单个或融合多肽)或通过化学合成制备多肽。通过化学合成方便地制备抗体的多肽，特别是直至约50个氨基酸的较短的多肽。化学合成的方法是本领域已知的并是市售可得的。例如，可通过采用固相法的自动多肽合成仪制备抗CD3多肽。
本发明还包括包含来自本发明的多肽和抗体的一个或多个片段或区的融合蛋白。在一个实施方案中，提供了包含可变轻链区的至少10个连续的氨基酸和可变重链区的至少10个氨基酸的融合多肽。在另一个实施方案中，融合多肽包含异源免疫球蛋白恒定区。在另一个实施方案中，融合多肽包含从公共保藏(publicly-deposited)的杂交瘤制备的抗体的轻链可变区和重链可变区。为了本发明的目的，抗体融合蛋白包含与CD3特异性结合的一个或多个多肽结构域和在天然分子中未被附着的另外的氨基酸序列，例如，异源序列或来自另一个区的同源序列。
可通过本领域已知的方法，例如，合成或重组创建抗CD3多肽和其他CD3激动剂、拮抗物和调节物。制备此类分子的一个方法包括多肽的化学合成，随后在适于获得天然构象即，正确的二硫键连键的氧化条件下处理。这可通过使用本领域技术人员众所周知的方法实现(见，例如，Kelley,R.F.等人(1990)In:GENETIC ENGINEERING PRINCIPLES ANDMETHODS,Setlow,J.K.Ed.,Plenum Press,N.Y.,第12卷,第1-19页；Stewart,J.M等人(1984)SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS,Pierce Chemical Co.,Rockford,IL；还见美国专利号4,105,603、3,972,859、3,842,067和3,862,925)。
还可使用固相肽合成方便地制备本发明的多肽(Merrifield,B.(1986)“SolidPhase Synthesis,”Science 232(4748):341-347；Houghten,R.A.(1985)“General MethodFor The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large Numbers Of Peptides:SpecificityOf Antigen-Antibody Interaction At The Level Of Individual Amino Acids,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)82(15):5131-5135；Ganesan,A.(2006)“Solid-PhaseSynthesis In The Twenty-First Century,”Mini Rev.Med.Chem.6(1):3-10)。
在又另一个替代方式中，可通过使用已被改造以表达特定人免疫球蛋白蛋白的市售可得的小鼠获得全人抗体。被设计以制备更合期望的(例如，全人抗体)或更有力的免疫应答的转基因动物也可被用于人源化或人抗体的产生。此技术的实例为XENOMOUSETM(Abgenix,Inc.,Fremont,CA)和HUMAB-和TC MOUSETM(二者都来自Medarex,Inc.,Princeton,NJ)。
在一个替代方式中，可使用本领域已知的任何方法重组制备并表达抗体。通过首先分离从宿主动物中制备的抗体、获得基因序列并使用基因序列在宿主细胞(例如，CHO细胞)中重组表达抗体来重组制备抗体。可被采用的另一个方法是在植物(例如，烟草)或转基因牛奶中表达抗体序列。用于在植物或牛奶中重组表达抗体的适合的方法已被公开(见，例如，Peeters等人(2001)“Production Of Antibodies And Antibody Fragments InPlants,”Vaccine 19:2756；Lonberg,N.等人(1995)“Human Antibodies From TransgenicMice,”Int.Rev.Immunol 13:65-93；和Pollock等人(1999)“Transgenic Milk As AMethod For The Production Of Recombinant Antibodies,”J.Immunol Methods 231:147-157)。用于制备抗体的衍生物，例如人源化的衍生物、单链等适合的方法是本领域已知的。在另一个替代方式中，可通过噬菌体展示技术重组制备抗体(见，例如，美国专利号5,565,332、5,580,717、5,733,743、6,265,150，和Winter,G.等人(1994)“Making AntibodiesBy Phage Display Technology,”Annu.Rev.Immunol.12.433-455)。
目的抗体或蛋白可通过本领域技术人员众所周知的埃德曼降解经受测序。从质谱或埃德曼降解产生的肽信息可被用于设计用于克隆目的蛋白的探针或引物。
克隆目的蛋白的一个替代方法是通过使用纯化的CD3或其部分“淘选”表达目的抗体或蛋白的细胞。可通过获得来自表达CD3的组织或细胞的cDNA文库、在第二细胞类型中过量表达cDNA及筛选第二细胞类型与CD3特异性结合的经转染的细胞进行“淘选”过程。用于通过“淘选”克隆编码细胞表面蛋白的哺乳动物基因的方法的详细描述可见于本领域(见，例如，Aruffo,A.等人(1987)“Molecular Cloning Of A CD28 cDNA By A High-Efficiency COS Cell Expression System,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84:8573-8577和Stephan,J.等人(1999)“Selective Cloning Of Cell Surface ProteinsInvolved In Organ Development:Epithelial Glycoprotein Is Involved In NormalEpithelial Differentiation,”Endocrinol.140:5841-5854)。
根据本领域的标准方法，可通过逆转录来自特定细胞类型的mRNA获得编码抗CD3抗体和其他CD3肽激动剂、拮抗物和调节物的cDNA。具体地，根据在，例如，MOLECULARCLONING:A LABORATORY MANUAL,第三版(Sambrook等人编,2001)Cold Spring HarborPress,Cold Spring Harbor,NY)中陈述的方法，可使用多种分解酶或化学溶液分离mRNA，或根据制造商(例如，Qiagen,Invitrogen,Promega)提供的附带说明书使用市售可得的核酸结合树脂提取mRNA。随后，可将合成的cDNA引入表达载体以在第二类型的细胞中制备目的抗体或蛋白。这暗示了表达载体在宿主细胞中作为游离体(episome)或作为染色体DNA的整合部分必须是可复制的。适合的表达载体包括但不限于，质粒、包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录酶病毒的病毒载体和粘粒。
可通过包括以下的一些适合的方法中的任一个将包含目的多核苷酸的载体引入宿主细胞：电穿孔、采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质的转染、微粒轰击、脂质体转染(lipofection)和感染(其中载体是感染性剂诸如牛痘病毒)。引入载体或多核苷酸的选择通常将取决于宿主细胞的特征。
能够过量表达异源DNA的任何宿主细胞都可被用于分离编码目的抗体、多肽或蛋白的基因的目的。适合的哺乳动物宿主细胞的非限制性实例包括但不限于COS、HeLa和CHO细胞。优选地，宿主细胞以比宿主细胞内，如果存在的话，相应的内源目的抗体或蛋白的水平高约5倍、更优选地高约10倍、甚至更优选地高约20倍的水平表达cDNA。通过免疫分析或FACS实现与CD3特异性结合的宿主细胞的筛选。可鉴定过量表达目的抗体或蛋白的细胞。
III.用于筛选多肽和单克隆抗体的方法
一些方法可被用于筛选与CD3结合的多肽和单克隆抗体。被理解的是“结合”指生物或免疫相关的特异性结合，并非指例如，当针对非特异性靶以非常高的浓度使用免疫球蛋白时可能发生的非特异性结合。在一个实施方案中，使用标准筛选技术筛选与CD3结合的单克隆抗体。以这种方式，获得抗CD3单克隆抗体。本发明优选的杂交瘤是产生抗体mAb1和mAb2、或其嵌合的或人源化衍生物的杂交瘤。然而，可鉴定与CD3结合的另外的单克隆抗体。为了该目的，筛选单克隆抗体以确认它们与人CD3及灵长类动物CD3结合的差别能力。
一些不同的检测系统的任一种可被用于检测抗体与组织切片的结合。典型地，免疫组织化学包括第一抗体与组织以及随后与针对产生第一抗体的物种反应的并与可检测的标志物(例如，辣根过氧化物酶(HRP)或二氨基联苯胺(DAB))缀合的第二抗体的结合。可使用的一个替代方法是多克隆镜像互补抗体或polyMICATM(多克隆镜像互补抗体；TheBinding Site Limited,Birmingham,UK；Mangham,D.C.等人(1999)“A NovelImmunohistochemical Detection System Using Mirror Image ComplementaryAntibodies(MICA),”Histopathology 35(2):129-33)。PolyMICATM技术可被用于测试第一抗体(例如，抗CD3抗体)与正常的和癌性组织的结合。好几种polyMICATM检测试剂盒是市售可得的：产品编号HK004.D是使用DAB发色团的polyMICATM检测试剂盒；产品编号HK004.A是使用AEC发色团的polyMICATM检测试剂盒。可选地，可用可检测的标志物直接标记第一抗体。
IV.表征抗CD3抗体的方法
一些方法的任一种可被用于表征抗CD3抗体。一种方法是鉴定其结合的表位。表位作图是从多种来源例如Pepscan Systems(Lelystad,The Netherlands)市售可得的。表位作图可被用于确定抗CD3抗体结合的序列。表位可以是线性表位，即，被包含在氨基酸的单个拉伸段(stretch)中，或由氨基酸的三维相互作用形成的可不必被包含在单个拉伸段中的构象表位。
不同长度(例如，优选至少4-6个氨基酸长)的肽可被分离或合成(例如，重组)并被用于用抗CD3抗体的结合分析。可通过使用源自细胞外序列的重叠的肽并确定由抗CD3抗体的结合以系统筛选方式确定抗CD3抗体结合的表位。
可被用于表征抗CD3抗体的又另一个方法是使用与已知与相同抗原即CD3结合的其他抗体的竞争性分析以确定抗CD3抗体是否与如其他抗体结合的相同的抗原结合。市售可得的针对CD3的抗体的实例可以是可得的并可使用本文教导的结合分析被鉴定。竞争性分析是本领域技术人员众所周知的，且此类方法和说明性数据在实施例中进一步详细阐述。抗CD3抗体可通过它们结合的组织、癌症的类型或肿瘤的类型被进一步表征。
V.本发明优选的组合物
本发明涵盖组合物，包括包含如本文描述的抗CD3抗体、源自抗CD3抗体的多肽、包含编码抗CD3抗体的序列的多核苷酸和其他剂的药物组合物。本发明还提供了任何CD3肽激动剂、拮抗物或调节物的缀合物，和支撑特定CD3肽激动剂、拮抗物或调节物的预期的一个或多个功能的另外的化学结构。这些缀合物包括与大分子诸如用于本文讨论的诊断、筛选或纯化过程的任何不可溶、固体支持体基质共价结合的CD3肽激动剂、拮抗物或调节物。适合的基质物质包括是化学惰性的、具有高孔隙率并具有能够与肽配体形成共价连键的大量的官能团的任何物质。用于制备基质配体缀合物的基质材料和方法的实例在Dean等人(编者)AFFINITY CHROMATOGRAPHY:A PRACTICAL APPROACH,IRL Press(1985)；Lowe,“AnIntroduction to Affinity Chromatography”,在Work等人(编者)LABORATORYTECHNIQUES IN BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY中，第7卷，第II部分,North-Holland(1979)；Porath等人，“Biospecific Affinity Chromatography”,在Neurath,H.等人(编者)，THE PROTEINS，第3版，第1卷，第95-178页(1975)；和Schott,H.AFFINITYCHROMATOGRAPHY,Macel Dekker,Inc.NY(1984)中描述。
本文还提供了CD3肽激动剂、拮抗物或调节物和用于本文讨论的诊断方法的任何报告物部分的缀合物。通过任何(一个或多个)以下标准进一步鉴定并表征了本发明的CD3肽激动剂、拮抗物或调节物剂、多肽和蛋白，包括抗CD3抗体：
(1)与正常人T细胞的表面上内源表达的人CD3特异性结合的能力；
(2)与人白血病T细胞的表面上内源表达的人CD3特异性结合的能力；
(3)与正常非人T细胞的表面上内源表达的非人CD3(例如，食蟹猴的CD3)特异性结合的能力；
(4)与非人白血病T细胞的表面上内源表达的非人CD3特异性结合的能力；
(5)中和(即，阻断或干扰结合)CD3复合物形成的能力；中和TCR复合物形成的能力；
(6)调节(拮抗地或激动地)通过TCR复合物的信号传导的能力；
(7)结合Fc受体的能力；
(8)竞争性抑制已知抗CD3抗体与CD3优先结合的能力，包括与原始抗体优先结合的相同CD3表位优先结合的能力；
(9)在体外或体内与暴露在活细胞的表面的CD3的部分结合的能力；与暴露在活的癌细胞的表面的CD3的部分结合的能力；
(10)将化学治疗剂递送进入癌性T细胞内的能力；
和/或
(11)递送治疗剂、毒素或可检测标志物进入T细胞的能力。
本发明优选的抗体将相对于正常、非癌性组织呈现肿瘤组织的差别IHC染色，并将更加能够在灵长类动物(且特别地食蟹猴)模型中测试抗体功效。本发明优选的抗体将另外呈现期望水平的亲和力和抗原特异性。本发明优选的抗体将另外呈现期望水平的免疫调节活性和细胞内化。
在一些实施方案中，本发明的抗体是由分别表达鼠抗体mAb1和鼠抗体mAb2的杂交瘤mAb1或杂交瘤mAb2，或其子代产生的抗体。本发明还涵盖由这些杂交瘤产生的抗体和其等同抗体或多肽片段(例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、Fc，等)、嵌合抗体、单链(scFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体和包含抗原(CD3)、所需的特异性的识别位点的任何这些或等同抗体的任何其他修饰的构型的多种制品。本发明还提供了展示抗CD3家族成员的一个或多个生物特征的人抗体。通过任何(一个或多个)以上描述的标准鉴定并表征抗CD3家族的等同抗体(包括人源化抗体和人抗体)、多肽片段和包含任何这些片段的多肽。
因此，本发明提供了以下的任一项(或组合物，包括含有以下任一项的药物组合物)：(a)由宿主细胞或其子代产生的抗体；(b)此抗体的人源化形式；(c)包含此抗体的一个或多个轻链和/或重链可变区的抗体；(d)包含与此抗体的重链和轻链的可变区同源或源自其的可变区和与人抗体的重链和轻链的恒定区同源或源自其的恒定区的嵌合抗体；(e)包含此抗体的一个或多个(至少一个、两个、三个、四个、五个或六个)轻链和/或重链CDR的抗体；(f)包含此抗体的重链和/或轻链的抗体；(g)等同于此抗体的人抗体。抗体的人源化形式可以或可以不具有与该原始抗体或由以上鉴定的宿主细胞产生的抗体相同的CDR。CDR区的确定充分在本领域的技术之内。其他实施方案包括具有与如本文鉴定保藏的杂交瘤制备的抗体的至少两个、三个、四个、五个或六个CDR基本上同源、或源自此抗体的至少两个、三个、四个、五个或六个CDR的抗体。被理解的是，为了本发明的目的，通常保留结合特异性和/或总体活性，尽管与通过保藏的杂交瘤制备的抗体相比，活性的程度可能不同(可以更高或更低)。本发明还提供了制备任何这些抗体的方法。制备抗体的方法是本领域已知的并在本文被描述。
本发明还提供了包含本发明抗体的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，多肽包括抗体的一个或多个轻链和/或重链可变区。在一些实施方案中，多肽包括抗体的一个或多个轻链和/或重链CDR。在一些实施方案中，多肽包括抗体的轻链和/或重链的三个CDR。在一些实施方案中，多肽包含具有以下任一项的抗体的氨基酸序列：原始抗体的序列的至少5个连续的氨基酸、至少8个连续的氨基酸、至少约10个连续的氨基酸、至少约15个连续的氨基酸、至少约20个连续的氨基酸、至少约25个连续的氨基酸、至少约30个连续的氨基酸，其中至少3个氨基酸来自抗体的可变区。在一个实施方案中，可变区来自原始抗体的轻链。在另一个实施方案中，可变区来自抗体的重链。在另一个实施方案中，5个(或多个)连续的氨基酸来自抗体的互补决定区(CDR)。
在本发明的一些实施方案中，将表达本发明的CD3、CD3的部分、抗CD3抗体或其他CD3结合多肽的本发明的细胞直接施用至个体以体内调节CD3生物活性。
本发明优选的抗CD3抗体是mAb1和mAb2、和其与人和食蟹猴CD3分子反应的人源化的或嵌合的衍生物和抗原结合片段。鼠抗体mAb1和mAb2的可变轻链和可变重链的氨基酸和编码多核苷酸序列在以下显示。示例性抗体(mAb1和mAb2)的CDR的序列以粗体和下划线显示。
A.鼠单克隆抗体mAb1的可变区的序列
鼠单克隆抗体mAb1可变轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)：
编码鼠单克隆抗体mAb1可变轻链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:2)：
鼠单克隆抗体mAb1可变重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)：
编码mAb1鼠单克隆抗体可变重链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:4)：
B.鼠单克隆抗体mAb2的可变区的序列
鼠单克隆抗体mAb2可变轻链的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)：
编码鼠单克隆抗体mAb2可变轻链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:6)：
mAb2鼠单克隆抗体可变重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:7)：
编码鼠单克隆抗体mAb2可变重链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:8)：
重链的位置40是高亲和力的MHC II类结合肽锚定残基。重链的位置44、48、54、94、99和108是中等亲和力的MHC II类结合肽锚定残基。轻链的位置69是高亲和力的MHC II类结合肽锚定残基。轻链的位置59是中等亲和力的MHC II类结合肽锚定残基。使用标准分子生物学技术可将这些残基取代为减少或去除MHC II类识别位点的残基。
C.Fc-改造的CD3抗体
在传统的免疫功能中，抗体抗原复合物与免疫系统的细胞相互作用导致一系列广泛的应答，范围从效应子功能诸如抗体依赖的细胞毒性、肥大细胞脱颗粒和吞噬作用至免疫调节信号诸如调节淋巴细胞增殖和抗体分泌。所有的这些相互作用都通过抗体或免疫复合物的Fc结构域与造血细胞上的特化的细胞表面受体的结合被启动。由抗体和免疫复合物触发的细胞应答的多样性是由三种Fc受体的结构异质性(heterogeneity)引起的：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32A)和FcγRIII(CD16)是活化性(即，免疫系统增强的)受体；FcγRIIB(CD32B)是抑制性(即，免疫系统抑制的)受体。IgG1Fc区的氨基酸序列在以下显示(如SEQ ID NO:9，根据Kabat等人，SEQUENCEOF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST,第5版,Public Health Service,NIH,MD(1991)，明确地通过引用并入本文且下文称为“Kabat EU”)。残基230-341是Fc CH2区。残基342-447是Fc CH3区：
SEQ ID NO:9
由于Fc受体(FcR)非结合CD3特异性抗体是被最小消耗的，已提出了它们以可能引起免疫耐受的方式改变TCR信号(St.Clair E.W.(2009)“Novel Targeted Therapies forAutoimmunity,”Curr.Opin.Immunol.21(6):648-657)。因此，此治疗在自身免疫性疾病和宿主对移植组织的排斥反应的治疗中具有潜在应用。FcR非结合CD3特异性抗体还被假定引起1型糖尿病耐受性的缓解(St.Clair E.W.(2009)“Novel Targeted Therapies forAutoimmunity,”Curr.Opin.Immunol.21(6):648-657；Masharani,U.B.等人(2010)“Teplizumab Therapy For Type 1Diabetes,”Expert Opin.Biol.Ther.10(3):459-465)。
本发明因此包括与包含具有被修饰(例如，一个或多个部分的取代、缺失、插入)以便不能够或较少能够与Fc受体结合(相对于具有相同CDR而具有野生型Fc区的抗体)的Fc区的变体Fc区的CD3特异性结合的抗体。
在一个实施方案中，此类抗体将不能够与任何Fc受体结合。可选地，抗体的Fc区将被修饰以允许其与抑制性Fc受体诸如FcγRIIB结合，但不与促进免疫系统的活化的Fc受体诸如FcγRIIA、FcγRIIIA或FcγRIIIB结合。
优选地，通过用于确定一种或多种FcγR介导物效应细胞功能的体外功能分析表征本发明的分子的结合特征。可使用本领域已知的用于确定抗体抗原或Fc-FcγR相互作用，即，分别地，抗原与抗体的特异性结合或Fc区与FcγR的特异性结合的体外分析(基于生物化学或免疫的分析)，包括但不限于ELISA分析、表面等离子体共振分析、免疫沉淀分析确定本发明的分子，例如，抗体对FcγR的亲和力和结合特征。在最优选的实施方案中，本发明的分子在体内模型(诸如本文描述的和公开的模型)中具有与在基于体外分析中的结合特征相似的结合特征。然而，本发明不排除在基于体外分析中未呈现期望的表型但在体内确实呈现期望的表型的本发明的分子。
在一些实施方案中，包含变体Fc区的本发明的分子包含Fc区的CH3结构域中的至少一个氨基酸修饰(例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或多个氨基酸修饰)，Fc区的CH3结构域被定义为从氨基酸342-447的延伸。在其他实施方案中，包含变体Fc区的本发明的分子包含Fc区的CH2结构域中的至少一个氨基酸修饰(例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或多个氨基酸修饰)，Fc区的CH2结构域被定义为从氨基酸231-341的延伸。在一些实施方案中，本发明的分子包含至少两个氨基酸修饰(例如，具有2、3、4、5、6、7、8、9或多个氨基酸修饰)，其中至少一个此修饰位于CH3结构域且至少一个此修饰位于CH2结构域。本发明还包含铰链区中的氨基酸修饰。在特定实施方案中，本发明包括Fc区的CH1结构域中的氨基酸修饰，Fc区的CH1结构域被定义为从氨基酸216-230的延伸。
在特别优选的实施方案中，本发明涵盖含有变体Fc区的分子，其中所述变体给予或具有减弱的ADCC活性和/或与FcγRIIA(CD32A)减弱的结合，如使用本领域技术人员已知的和本文示例的方法测量的。根据本发明的方法使用的ADCC分析可以是NK依赖的或巨噬细胞依赖的。
在特别优选的实施方案中，本发明涵盖含有变体Fc区的分子，其中所述变体给予或具有减弱的ADCC活性和/或与FcγRIIIA(CD16A)减弱的结合，如使用本领域技术人员已知和本文示例的方法测量的。根据本发明的方法使用的ADCC分析可以是NK依赖的或巨噬细胞依赖的。
本发明的Fc变体可与其他Fc修饰，诸如在美国专利号7,632,497、7,521,542、7,425,619、7,416,727、7,371,826、7,355,008、7,335,742、7,332,581、7,183,387、7,122,637和6,737,056，在PCT公布号WO 2008/105886、WO 2008/002933、WO 2007/021841、WO 2007/106707、WO 06/088494、WO 05/115452、WO 05/110474、WO 04/1032269及在WO 04/063351，和在Presta,L.G.等人(2002)“Engineering therapeutic antibodies for improvedfunction,”Biochem.Soc.Trans.30(4):487-490；Shields,R.L.等人(2002)“Lack offucose on human IgG1 N-linked oligosaccharide improves binding to humanFcgamma RIII and antibody-dependent cellular toxicity,”J.Biol.Chem.26；277(30):26733-26740和Shields,R.L.等人(2001)“High resolution mapping of thebinding site on human IgG1 for Fc gamma RI,Fc gamma RII,Fc gamma RIII,andFcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the Fc gamma R,”J.Biol.Chem.276(9):6591-6604)中公开的Fc修饰组合。本发明包含本发明的Fc变体与其他Fc修饰的组合以对修饰的抗体提供附加的、协同的或新的性质。
在其他实施方案中，本发明包括本领域已知的任何Fc变体的用途，诸如在Jefferis,B.J.等人(2002)“Interaction Sites On Human IgG-Fc For FcgammaR:Current Models,”Immunol.Lett.82:57-65；Presta,L.G.等人(2002)“EngineeringTherapeutic Antibodies For Improved Function,”Biochem.Soc.Trans.30:487-90；Idusogie,E.E.等人(2001)“Engineered Antibodies With Increased Activity ToRecruit Complement,”J.Immunol.166:2571-75；Shields,R.L.等人(2001)“HighResolution Mapping Of The Binding Site On Human IgG1For Fc Gamma RI,Fc GammaRII,Fc Gamma RIII,And FcRn And Design Of IgG1 Variants With Improved BindingTo The Fc gamma R,”J.Biol.Chem.276:6591-6604；Idusogie,E.E.等人(2000)“MappingOf The C1q Binding Site On Rituxan,A Chimeric Antibody With A Human IgG Fc,”J.Immunol.164:4178-84；Reddy,M.P.等人(2000)“Elimination Of Fc Receptor-Dependent Effector Functions Of A Modified IgG4 Monoclonal Antibody To HumanCD4,”J.Immunol.164:1925-1933；Xu,D.等人(2000)“In Vitro Characterization ofFive Humanized OKT3 Effector Function Variant Antibodies,”Cell.Immunol.200:16-26；Armour,K.L.等人(1999)“Recombinant human IgG Molecules Lacking FcgammaReceptor I Binding And Monocyte Triggering Activities,”Eur.J.Immunol.29:2613-24；Jefferis,R.等人(1996)“Modulation Of Fc(Gamma)R And Human ComplementActivation By IgG3-Core Oligosaccharide Interactions,”Immunol.Lett.54:101-04；Lund,J.等人(1996)“Multiple Interactions Of IgG With Its Core OligosaccharideCan Modulate Recognition By Complement And Human Fc Gamma Receptor I AndInfluence The Synthesis Of Its Oligosaccharide Chains,”J.Immunol.157:4963-4969；Hutchins等人(1995)“Improved Biodistribution,Tumor Targeting,And ReducedImmunogenicity In Mice With A Gamma 4 Variant Of Campath-1H,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)92:11980-84；Jefferis,R.等人(1995)“RecognitionSites On Human IgG For Fc Gamma Receptors:The Role Of Glycosylation,”Immunol.Lett.44:111-17；Lund,J.等人(1995)“Oligosaccharide-Protein InteractionsIn IgG Can Modulate Recognition By Fc Gamma Receptors,”FASEB J.9:115-19；Alegre,M.L.等人(1994)“A Non-Activating"Humanized"Anti-CD3 Monoclonal AntibodyRetains Immunosuppressive Properties In Vivo,”Transplantation 57:1537-1543；Lund等人(1992)“Multiple Binding Sites On The CH2 Domain Of IgG For Mouse FcGamma R11,”Mol.Immunol.29:53-59；Lund等人(1991)“Human Fc Gamma RI And Fc GammaRII Interact With Distinct But Overlapping Sites On Human IgG,”J.Immunol.147:2657-2662；Duncan,A.R.等人(1988)“Localization Of The Binding Site For TheHuman High-Affinity Fc Receptor On IgG,”Nature 332:563-564；美国专利号5,624,821、5,885,573、6,194,551、7,276,586、和7,317,091和PCT公布WO 00/42072和PCT WO 99/58572中公开的用途。
在某些实施方案中，本发明的抗体包含变体Fc区(包括源自任何人免疫球蛋白类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)或类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的Fc)，其中相对于野生型Fc区，所述变体Fc区包含至少一个氨基酸修饰，相对于包含野生型Fc区的可比的分子，该变体Fc区呈现与一个或多个效应子配体减弱的或消除的结合，如通过本领域已知的及本文公开的标准分析确定的。在某些实施方案中，本发明的抗体的变体Fc结构域包含在一个或多个残基233、234、235、236、237、238、265、270、297、298、299处的氨基酸修饰(即，插入、取代、缺失)。在特定实施方案中，减弱或消除与一个或多个效应子配体的结合的一个或多个氨基酸修饰是在位置233处用苯丙氨酸或脯氨酸的取代；在位置234处用丙氨酸的取代；在位置235处用丙氨酸或谷氨酸的取代；在位置236处用丙氨酸的取代；在位置237处用丙氨酸的取代；在位置238处用精氨酸的取代；在位置265处用丙氨酸或谷氨酸的取代；在位置270处用丙氨酸或天冬酰胺的取代；在位置297处用丙氨酸或谷氨酰胺的取代；在位置298处用苯丙氨酸、天冬酰胺或脯氨酸的取代；在位置299处用除了丝氨酸或苏氨酸之外的任何氨基酸的取代；或两个或多个以上列出的取代的组合。在某些实施方案中，本发明的抗体包含具有在位置265和在位置297处用丙氨酸的取代、在位置265处用丙氨酸及在位置297处用谷氨酰胺的取代、在位置265处用谷氨酸及在位置297处用丙氨酸的取代、或在位置265处用谷氨酸及在位置297处用谷氨酰胺的取代的Fc结构域。在优选的实施方案中，本发明的抗体包含具有在Fc结构域的位置234和位置235的修饰(例如，取代、插入、缺失)的Fc结构域。在根据本实施方案的特定的实例中，本发明的抗体包含具有在位置234处用丙氨酸的取代和在位置235处用谷氨酸的取代的Fc结构域。在又更优选的实施方案中，本发明的抗体包含具有在位置234处用丙氨酸的取代和在位置235处用丙氨酸的取代的Fc。
在其他实施方案中，本发明的抗体包含Fc区，其中相对于可比的对照分子，变体Fc区呈现与一个或多个效应子配体的减弱的或消除的结合，如通过本领域已知的及本文公开的标准分析确定的。在某些实施方案中，本发明的抗体具有呈现与一个或多个效应子配体减弱或消除的结合的Fc区，其中Fc区包含在位置233处的苯丙氨酸或脯氨酸；在位置234处的丙氨酸；在位置235处的丙氨酸或谷氨酸；在位置236处的丙氨酸；在位置237处的丙氨酸；在位置238处的精氨酸；在位置265处的丙氨酸或谷氨酸；在位置270处的丙氨酸或天冬酰胺；在位置297处的丙氨酸或谷氨酰胺；在位置298处的苯丙氨酸、天冬酰胺或脯氨酸；在位置299处的除了丝氨酸或苏氨酸之外的任何氨基酸；或两个或多个以上列出的取代的组合。在某些实施方案中，本发明的抗体包含具有在位置265和在位置297处的丙氨酸、在位置265处的丙氨酸及在位置297处的谷氨酰胺、在位置265处的谷氨酸及在位置297处的丙氨酸、或在位置265处的谷氨酸及在位置297处的谷氨酰胺的Fc结构域。在某些实施方案中，本发明的抗体包含具有在位置234处的丙氨酸和在位置235处的谷氨酸的Fc结构域。在优选的实施方案中，本发明的抗体包含具有在位置234处的丙氨酸和在位置235处的丙氨酸的Fc。
包含在对应于根据Kabat的编号方案的234和235位置处具有丙氨酸的Fc结构域的本发明的抗体被称为“ala-ala”抗体。在某些实施方案中，使用本文描述的“ala-ala”Fc结构域和/或氨基酸组合的其他组合(包括含有“ala-ala”Fc结构域的组合)可消除Fc结构域与所有FcγR的结合。可通过本文描述的和/或本领域已知的任何方法确定Fc结构域与一个或多个FcγR的结合。
在某些实施方案中，消除与所有FcγR的结合或减弱或废除与一个或多个效应子配体的结合的一个或多个氨基酸修饰包含本文列出的修饰的组合或本文列出的修饰与任何可给予与任何FcR(例如，FcγRIIIA、FcγRIIIB、FcγRIIA)的无效的结合的组合，如通过本文公开的或本领域技术人员已知的方法确定的。如本领域技术人员容易理解的，本发明的此类抗体可在自身免疫性疾病的治疗中发现特别的用途，其中抗CD3抗体和抗原结合片段用于调节免疫功能，而不具有常见于抗免疫细胞抗体的相关首次剂量应答。
在某些实施方案中，本发明的抗CD3抗体和抗原结合片段、或其抗原结合片段，具有通过其Fc结构域与一个或多个任何FcγR(例如，FcγRI、FcγRII或FcγRIII)减弱的(诸如，但不限于，与由包含对照Fc结构域的蛋白的结合相比小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％)或更优选地不可检测的结合，如通过本领域常规分析确定的。另外或可选地，本发明的抗CD3抗体和抗原结合片段、或其抗原结合片段，可具有与任何互补受体，诸如C1q减弱的(诸如，但不限于，与由包含对照Fc结构域的对照蛋白的结合相比小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％)或更优选地不可检测的结合，如在常规使用的分析中确定的。在特定实施方案中，抗体被去糖基化。在其他实施方案中，抗体缺少Fc结构域(例如，是Fab片段、F(ab’)2或单链抗体)。
本发明的抗体因此是特别有用的，因为它们具有减少的或没有由淋巴因子产生或细胞因子释放引起的体内毒性。测量淋巴因子产生或细胞因子释放的方法是已知的且是本领域常规的并被本文包含。例如，可通过测量包含但不限于以下的细胞因子的分泌来测量细胞因子释放：白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、白介素-16(IL-16)、PDGF、TGF-α、TGF-β、TNF-α、TNF-β、GCSF、GM-CSF、MCSF、IFN-α、IFN-β、TFN-γ、IGF-I、IGF-II。例如，见，Isaacs等人，2001,Rheumatology,40:724-738；Soubrane等人，1993,Blood,81(1):15-19；这些参考文献各自都通过引用整体并入本文。
D.CD3 DARTTM双抗体
如以上讨论的，本发明另外包含双特异性、三特异性和多特异性抗体。此类抗体的特别优选的实例包括包含形成至少两个表位结合位点、至少其中之一与CD3特异性结合的至少两条多肽链的“DARTTM”双抗体分子。US20100174053、US20090060910、US20070004909、EP2158221、EP1868650、WO2010080538、WO2008157379和WO2006113665中公开了示例性“DARTTM”双抗体分子。
在优选的实施方案中，DARTTM双抗体的第一条多肽链包含：
(i)结构域(A)，包含表位(1)特异性的第一免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL1)的结合区；
(ii)结构域(B)，包含表位(2)特异性的第二免疫球蛋白的重链可变结构域(VH2)的结合区；和
(iii)结构域(C)。
此DARTTM双抗体的第二条多肽链包含：
(i)结构域(D)，包含表位(2)特异性的第二免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL2)的结合区；
(ii)结构域(E)，包含表位(1)特异性的第一免疫球蛋白的重链可变结构域(VH1)的结合区；和
(iii)结构域(F)。
DARTTM双抗体结构域(A)和(B)不与彼此缔合形成表位结合位点。类似地，DARTTM双抗体结构域(D)和(E)不与彼此缔合形成表位结合位点。而是，DARTTM双抗体结构域(A)和(E)缔合以形成结合表位(1)的结合位点；所述DARTTM双抗体结构域(B)和(D)缔合以形成结合所述表位(2)的结合位点。结构域(C)和(F)共价地缔合在一起。
DARTTM双抗体分子的每一条多肽链都包含VL结构域和VH结构域，其共价连接如此以致这两个结构域受自身组装的限制。两条多肽链的相互作用将产生两组VL-VH配对，形成两个表位结合位点，即，二价分子。VH或VL结构域都不被限制于多肽链内的任何位置，即，不被局限于氨基(N)或羧基(C)末端，结构域也不被局限它们与彼此的相对位置，即，VL结构域可以在VH结构域的N末端且反之亦然。仅有的限制是互补的多肽链是可用的以形成功能DARTTM双抗体。在VL和VH结构域源自相同的抗体的情况下，两条互补多肽链可以是相同的。例如，在结合结构域源自表位A特异性的抗体(即，结合结构域由VLA-VHA相互作用形成)的情况下，每一条多肽将包含VHA和VLA。抗体的两条多肽链的同源二聚化将导致两个VLA-VHA结合位点的形成，导致二价单特异性抗体。在VL和VH结构域源自对不同抗原特异性的抗体的情况下，功能双特异性DARTTM双抗体的形成需要两个不同的多肽链的相互作用，即，异二聚体的形成。例如，关于双特异性DARTTM双抗体，一条多肽链将包含VLA和VLB；所述链的同源二聚化将导致两个VLA-VHB结合位点的形成，不具有结合或具有不可预知的结合。相比之下，在两条不同的多肽链自由相互作用的情况下，例如，在重组表达系统中，一条包含VLA和VHB且另一条包含VLB和VHA，两个不同的结合位点将形成：VLA-VHA和VLB-VHB。关于所有DARTTM双抗体多肽链对，两条链的可能错配或错结合，即，VL-VL或VH-VH结构域的相互作用是可能的；然而，基于适当二聚结合位点的免疫特异性，使用本领域已知的或本文示例的任何基于亲和力的方法，例如，亲和层析，容易进行功能双抗体的纯化。
DARTTM双抗体的一条或多条多肽链任选可包含Fc结构域域或其部分(例如，CH2结构域、或CH3结构域)。Fc结构域或其部分可源自任何免疫球蛋白同种型或同种异型，包括但不限于，IgA、IgD、IgG、IgE和IgM。在优选的实施方案中，Fc结构域(或其部分)源自IgG。在特定实施方案中，IgG同种型是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其同种异型。在一个实施方案中，双抗体分子包含Fc结构域，其中Fc结构域包含独立地选自任何免疫球蛋白同种型的CH2结构域和CH3结构域(即，Fc结构域包含源自IgG的CH2结构域和源自IgE的CH3结构域，或源自IgG1的CH2结构域和源自IgG2的CH3结构域，等)。Fc结构域可以在相对于所述多肽链的其他结构域或部分的任何位置被改造为包含本发明的双抗体分子的多肽链(例如，Fc结构域或其部分可以在多肽链的VL和VH结构域二者的c末端；可以在VL和VH结构域二者的n末端；或可以在一个结构域的N末端及另一个结构域的c末端(即，在多肽链的两个结构域之间))。
DARTTM双抗体分子的多肽链中的Fc结构域优先二聚化，导致呈现免疫球蛋白-样特征例如Fc-FcγR相互作用的DARTTM分子的形成。包含双抗体的Fc可以是二聚体，例如，包含两条多肽链，各自都包含VH结构域、VL结构域和Fc结构域。所述多肽链的二聚化导致包含Fc结构域的二价DARTTM双抗体，虽然结构与未修饰的二价双抗体的结构不同。相对于野生型免疫球蛋白，此类DARTTM双抗体分子将呈现改变的表型，例如，改变的血清半衰期、结合特征，等。在其他实施方案中，包含Fc结构域的DARTTM双抗体分子可以是四聚体。此类四聚体包含两条“较重”的多肽链，即，包含VL、VH和Fc结构域的多肽链，和两条“较轻”的多肽链，即，包含VL和VH的多肽链。较轻的和较重的链相互作用以形成单体，且所述单体通过它们未配对的Fc结构域相互作用以形成Ig-样分子。此Ig-样DARTTM双抗体是四价的且可以是单特异性、双特异性或四特异性的。
VI.使用本发明的抗CD3抗体的治疗方法
本发明的抗CD3抗体和它们的抗原结合片段在治疗与CD3表达相关的癌症及治疗自身免疫性疾病和其他炎性疾患中具有特定效用。
这些用途可包括CD3和与CD3特异性结合的抗体之间复合物的形成。此类抗体的实例包括但不限于抗CD3单克隆抗体mAb1和mAb2，或，更优选地，它们的人源化衍生物。此复合物的形成可以是体外或体内的。不被理论限制，抗CD3抗体可通过CD3的胞外结构域与CD3结合并随后可被内化到活的正常细胞或癌细胞内。
A.癌症的治疗
本发明的抗体和抗原结合片段与存在于T细胞表面的CD3结合。本发明的抗原结合片段可在双特异性(或三特异性或多特异性)分子，诸如DART或BiTE分子的情况下被用于将T细胞再定向至肿瘤细胞。随后T细胞可杀死肿瘤细胞。本发明的双特异性(或三特异性或多特异性)分子能够与人CD3和非人哺乳动物(例如，食蟹猴)的CD3二者结合，并还能够与第二(或另外的)及不同的抗原或表位结合。第二抗原或表位优选是肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原。此类肿瘤细胞可以来自癌症，例如，乳腺癌、前列腺癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、胃癌(stomach cancer)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。此另外的抗原或表位优选是细胞表面肿瘤抗原或表位(诸如：17-1A、A33、成人红细胞原内胚层I抗原、甲胎蛋白、RNA肿瘤病毒的包膜抗原、膀胱肿瘤癌胚抗原、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6、伯基特淋巴瘤抗原-38.13、CA125、CD18、CD19、人B-淋巴瘤抗原-CD20、CD22、CD33、CD44、CD52、CEA、CO17-1A、CTA-1、CTLA-4、表皮生长因子受体、Ep-CAM、EphA2、胎儿红细胞I抗原、纤维肉瘤抗原、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、神经节苷脂GM2、神经节苷脂GM3、GICA 19-9、gp IIIb/IIIa、gp72、HER1、HER-2/neu、HER3、HER4、高分子量黑色素瘤抗原、HLA-DR抗原、人白血病T细胞抗原-Gp37、人肺癌抗原L20、人肺癌抗原L6、人乳脂肪球抗原、IgE、KS 1/4泛癌抗原、LEA、肺腺癌F3抗原、人恶性淋巴细胞抗原-APO-1、黑色素瘤抗原gp75、黑色素瘤相关抗原p97、拟糖蛋白、nuC242、多形上皮粘蛋白抗原、前列腺特异性抗原、前列腺特异性膜抗原、前列腺酸性磷酸盐、SK-1抗原、TAG-72、T-抗原、肿瘤抗原CA125、肿瘤抗原MUC1、肿瘤特异性移植类型的细胞表面抗原、血管内皮生长因子、血管内皮生长因子受体和αvβ3)。可选地，此类另外的抗原或表位可与病原体(诸如：甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、流行性感冒、水痘、腺病毒、I型单纯疱疹(HSV-I)、II型单纯疱疹(HSV-II)、牛瘟、鼻病毒、艾柯病毒、轮状病毒、呼吸道合胞体病毒、乳头瘤病毒、乳多泡病毒、巨细胞病毒、棘状病毒、虫媒病毒、汉他病毒、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花、Epstein-Barr病毒、人免疫缺陷病毒I型(HIV-I)、人免疫缺陷病毒II型(HIV-II)、病毒性脑膜炎、病毒性脑炎、登革热、天花；分枝杆菌立克次氏体、支原体、奈瑟氏菌属、肺炎链球菌、伯氏疏螺旋体、炭疽杆菌、链球菌属、葡萄球菌属、分枝杆菌属、破伤风、百日咳、霍乱、瘟疫、白喉、衣原体和军团菌属；利什曼原虫、球虫病、锥虫(trypanosoma)或疟疾；衣原体和立克次氏体)相关。
本发明的抗体和抗原结合片段与存在于T细胞表面的CD3结合。使用传统的方法，可用荧光素标记此类抗体，如以上描述的。当此类标记的分子在双特异性分子(诸如例如，具有与T细胞受体结合的表位结合结构域和与荧光素结合的表位结合结构域的UDARTTM双抗体(“TCR-UDARTTM”))的存在下被孵育时，它们能够与荧光素标记物结合并从而将它们自身定位在表达CD3的细胞的表面并引起再定向杀死此类细胞。
在可选的实施方案中，CD19可被用作“第二”表位，如此以致采用识别CD3和CD19的双特异性抗体，或更优选地，DARTTM双抗体以通过B细胞特异性抗原(CD19)和效应T细胞上的T细胞受体/CD3复合物的共接合消除B细胞淋巴瘤。如由Moore,P.A.等人(2011)“Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve OptimalRedirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma,”Blood 2011 blood-2010-09-306449公开的，CD3/CD19 DARTTM双抗体被用于通过B细胞特异性抗原CD19和效应T细胞上的T细胞受体/CD3复合物的共接合消除B细胞淋巴瘤。与具有相同的CD19和CD3抗体Fv序列的单链双特异性抗体一起比较显示了DART在指导B细胞溶解方面更有效。使用静息和预刺激的人PMBC或纯化的效应T细胞群体的评价，在所有表达CD19的B细胞靶细胞上观察到CD19xCD3DART增强的活性。CD19xTCR双特异性DART的表征显示了与CD19xCD3 DART同等效力，表明DART结构支撑T细胞/B细胞缔合用于再定向T细胞杀死的应用的灵活性。重要地，由DART分子介导的杀死的增强的水平未伴随非特异性T细胞活化或CD19阴性细胞的溶解的任何增加。细胞缔合研究显示DART结构良好地适用于保持明显有助于靶细胞杀死的高水平的细胞:细胞接触。最终，当与人PBMC共施用时，CD19xTCR DART抑制NOD/SCID小鼠中B细胞淋巴瘤的能力进一步显示了DART分子用于治疗B细胞恶性肿瘤的价值。本发明的交叉反应性抗CD3抗体可以以与Moore,P.A.等人的CD3抗体相同的方式被采用。因此，本发明提供了用于包括表达CD3癌细胞的癌症(特别地淋巴瘤和白血病)的治疗。
优选以典型地患者体重的0.0001mg/kg至100mg/kg的一个或多个单位剂量将本发明的双特异性(或三特异性或多特异性)分子施用至患者。优选地，施用至患者的剂量在患者体重的0.0001mg/kg和20mg/kg之间、0.0001mg/kg和10mg/kg之间、0.0001mg/kg和5mg/kg之间、0.0001mg/kg和2mg/kg之间、0.0001mg/kg和1mg/kg之间、0.0001mg/kg和0.75mg/kg之间、0.0001mg/kg和0.5mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.25mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.15mg/kg之间、0.0001mg/kg至0.10mg/kg之间、0.001mg/kg至0.5mg/kg之间、0.01mg/kg至0.25mg/kg之间或0.01mg/kg至0.10mg/kg之间。
B.自身免疫性疾病和炎症的治疗
本发明还提供了治疗、预防T细胞介导的包括以下的疾病或疾患的症状、减缓T细胞介导的包括以下的疾病或疾患的症状的进展和/或改善T细胞介导的包括以下的疾病或疾患的症状的方法：移植物排斥、移植物抗宿主病、不想要的迟发型超敏反应(诸如迟发型过敏反应)、T细胞介导的肺部疾病和自身免疫性疾病。T细胞介导的肺部疾病包括结节病、过敏性肺炎、急性间质性肺炎、肺泡炎、肺纤维化、特发性肺纤维化和特征为炎性肺损伤的其他疾病。T细胞自身免疫性疾病包括多发性硬化、神经炎、多肌炎、银屑病、白癜风、Sjogren综合征、类风湿性关节炎、1型糖尿病、自身免疫性胰腺炎、炎性肠疾病(例如，克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、乳糜泻、肾小球肾炎、硬皮病、结节病、自身免疫性甲状腺疾病(例如，桥本甲状腺炎和格雷夫斯病)、重症肌无力、爱迪生氏病、自身免疫性葡萄膜炎、寻常型天疱疮、原发性胆汁性肝硬化、恶性贫血和全身性红斑狼疮、狼疮(特别地，皮肤狼疮)，来自器官移植的影响、移植物抗宿主疾病(GVHD)，等。特别地，本发明的方法在患有早期阶段疾病的受试者中减缓或减少来自自身免疫的损害及保持高水平的功能和/或减少对其他治疗的需求是有利的(例如，在I型糖尿病的治疗或预防中，本发明的方法可减少对受试者中施用的外源胰岛素的需求)。另外，本发明的方法可有利地减少与先前治疗抗体，且特别地，抗T细胞(例如，抗CD3抗体或抗原结合片段)的施用相关的细胞因子释放综合征的发生率或导致不其发生。
在某些实施方案中，以2个月、4个月、6个月、8个月、9个月、10个月、12个月、15个月、18个月、24个月、30个月或36个月的间隔重复用根据本发明方法的抗CD3抗体或抗原结合片段的治疗的疗程。在特定实施方案中，如本文描述的或如本领域已知的，在继前一次治疗之后的2个月、4个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、24个月、30个月或36个月确定用本发明的抗CD3抗体或抗原结合片段的治疗的疗效。
在另一个实施方案中，向受试者施用约0.5-50μg/kg、约0.5-40μg/kg、约0.5-30μg/kg、约0.5-20μg/kg、约0.5-15μg/kg、约0.5-10μg/kg、约0.5-5μg/kg、约1-5μg/kg、约1-10μg/kg、约20-40μg/kg、约20-30μg/kg、约22-28μg/kg或约25-26μg/kg的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个单位剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。在另一个实施方案中，向受试者施用200μg/kg、178μg/kg、180μg/kg、128μg/kg、100μg/kg、95μg/kg、90μg/kg、85μg/kg、80μg/kg、75μg/kg、70μg/kg、65μg/kg、60μg/kg、55μg/kg、50μg/kg、45μg/kg、40μg/kg、35μg/kg、30μg/kg、26μg/kg、25μg/kg、20μg/kg、15μg/kg、13μg/kg、10μg/kg、6.5μg/kg、5μg/kg、3.2μg/kg、3μg/kg、2.5μg/kg、2μg/kg、1.6μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.25μg/kg、0.1μg/kg或0.05μg/kg的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个单位剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。
在一个实施方案中，向受试者施用200μg/kg或更少、175μg/kg或更少、150μg/kg或更少、128μg/kg或更少、100μg/kg或更少、95μg/kg或更少、90μg/kg或更少、85μg/kg或更少、80μg/kg或更少、75μg/kg或更少、70μg/kg或更少、65μg/kg或更少、60μg/kg或更少、55μg/kg或更少、50μg/kg或更少、45μg/kg或更少、40μg/kg或更少、35μg/kg或更少、30μg/kg或更少、25μg/kg或更少、20μg/kg或更少、15μg/kg或更少、10μg/kg或更少、5μg/kg或更少、2.5μg/kg或更少、2μg/kg或更少、1.5μg/kg或更少、1μg/kg或更少、0.5μg/kg或更少、0.25μg/kg或更少、0.1μg/kg或更少、或0.05μg/kg或更少的本发明的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。
在特定实施方案中，向受试者施用约5μg/m2-1200μg/m2，优选地，51μg/m2-826μg/m2的一个或多个剂量。在另一个实施方案中，向受试者施用1200μg/m2、1150μg/m2、1100μg/m2、1050μg/m2、1000μg/m2、950μg/m2、900μg/m2、850μg/m2、800μg/m2、750μg/m2、700μg/m2、650μg/m2、600μg/m2、550μg/m2、500μg/m2、450μg/m2、400μg/m2、350μg/m2、300μg/m2、250μg/m2、200μg/m2、150μg/m2、100μg/m2、50μg/m2、40μg/m2、30μg/m2、20μg/m2、15μg/m2、10μg/m2或5μg/m2的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个单位剂量以预防、治疗自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状、减缓其的进展、推迟其的发作或改善其。
在另一个实施方案中，向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量的治疗方案，其中经过2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天施用治疗疗程。在一个实施方案中，治疗方案包括每天、每2天、每3天或每4天施用预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的剂量。在某些实施方案中，治疗方案包含在给定周的星期一、星期二、星期三、星期四施用预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的剂量且在相同周的星期五、星期六、星期日不施用预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的剂量，直至已施用14次剂量、13次剂量、13次剂量、12次剂量、11次剂量、10次剂量、9次剂量、或8次剂量。在某些实施方案中，施用的剂量在方案的每一天是相同的。在某些实施方案中，向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量的治疗方案，其中该预防或治疗有效量为200μg/kg/天、175μg/kg/天、150μg/kg/天、125μg/kg/天、100μg/kg/天、95μg/kg/天、90μg/kg/天、85μg/kg/天、80μg/kg/天、75μg/kg/天、70μg/kg/天、65μg/kg/天、60μg/kg/天、55μg/kg/天、50μg/kg/天、45μg/kg/天、40μg/kg/天、35μg/kg/天、30μg/kg/天、26μg/kg/天、25μg/kg/天、20μg/kg/天、15μg/kg/天、13μg/kg/天、10μg/kg/天、6.5μg/kg/天、5μg/kg/天、3.2μg/kg/天、3μg/kg/天、2.5μg/kg/天、2μg/kg/天、1.6μg/kg/天、1.5μg/kg/天、1μg/kg/天、0.5μg/kg/天、0.25μg/kg/天、0.1μg/kg/天或0.05μg/kg/天；和/或其中预防或治疗有效量为1200μg/m2/天、1150μg/m2/天、1100μg/m2/天、1050μg/m2/天、1000μg/m2/天、950μg/m2/天、900μg/m2/天、850μg/m2/天、800μg/m2/天、750μg/m2/天、700μg/m2/天、650μg/m2/天、600μg/m2/天、550μg/m2/天、500μg/m2/天、450μg/m2/天、400μg/m2/天、350μg/m2/天、300μg/m2/天、250μg/m2/天、200μg/m2/天、150μg/m2/天、100μg/m2/天、50μg/m2/天、40μg/m2/天、30μg/m2/天、20μg/m2/天、15μg/m2/天、10μg/m2/天或5μg/m2/天。在另一个实施方案中，经过约24小时、约22小时、约20小时、约18小时、约16小时、约14小时、约12小时、约10小时、约8小时、约6小时、约4小时、约2小时、约1.5小时、约1小时、约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟、约5分钟、约2分钟、约1分钟、约30秒或约10秒施用1200μg/m2或更少、1150μg/m2或更少、1100μg/m2或更少、1050μg/m2或更少、1000μg/m2或更少、950μg/m2或更少、900μg/m2或更少、850μg/m2或更少、800μg/m2或更少、750μg/m2或更少、700μg/m2或更少、650μg/m2或更少、600μg/m2或更少、550μg/m2或更少、500μg/m2或更少、450μg/m2或更少、400μg/m2或更少、350μg/m2或更少、300μg/m2或更少、250μg/m2或更少、200μg/m2或更少、150μg/m2或更少、100μg/m2或更少、50μg/m2或更少、40μg/m2或更少、30μg/m2或更少、20μg/m2或更少、15μg/m2或更少、10μg/m2或更少或5μg/m2或更少的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的静脉剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾病或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。经过该方案的持续期间的总的剂量优选为总数小于9000μg/m2、8000μg/m2、7000μg/m2、6000μg/m2且可以小于5000μg/m2、4000μg/m2、3000μg/m2、2000μg/m2或1000μg/m2。在特定实施方案中，在方案中施用的总剂量为100μg/m2至200μg/m2、100μg/m2至500μg/m2、100μg/m2至1000μg/m2、或500μg/m2至1000μg/m2。
在优选的实施方案中，剂量随治疗方案的剂量的前四分之一、前二分之一或前2/3(例如，经过每天一次剂量的10、12、14、16、18或20天的方案的前2、3、4、5或6天)逐步增加直至达到日常预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段。在某些实施方案中，向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量的治疗方案，其中随着治疗进展，预防或治疗有效量增加了例如，每天0.01μg/kg、0.02μg/kg、0.04μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.08μg/kg、0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.25μg/kg、0.5μg/kg、0.75μg/kg、1μg/kg、1.5μg/kg、2μg/kg、4μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg、25μg/kg、30μg/kg、35μg/kg、40μg/kg、45μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、60μg/kg、65μg/kg、70μg/kg、75μg/kg、80μg/kg、85μg/kg、90μg/kg、95μg/kg、100μg/kg或125μg/kg；或增加了例如，每天1μg/m2、5μg/m2、10μg/m2、15μg/m2、20μg/m2、30μg/m2、40μg/m2、50μg/m2、60μg/m2、70μg/m2、80μg/m2、90μg/m2、100μg/m2、150μg/m2、200μg/m2、250μg/m2、300μg/m2、350μg/m2、400μg/m2、450μg/m2、500μg/m2、550μg/m2、600μg/m2、或650μg/m2。在某些实施方案中，向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量的治疗方案，其中预防或治疗有效量增加了1.25倍、1.5倍、2倍、2.25倍、2.5倍、或5倍，直至达到日常预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段。
在特定实施方案中，向受试者肌内施用200μg/kg或更少、优选地175μg/kg或更少、150μg/kg或更少、125μg/kg或更少、100μg/kg或更少、95μg/kg或更少、90μg/kg或更少、85μg/kg或更少、80μg/kg或更少、75μg/kg或更少、70μg/kg或更少、65μg/kg或更少、60μg/kg或更少、55μg/kg或更少、50μg/kg或更少、45μg/kg或更少、40μg/kg或更少、35μg/kg或更少、30μg/kg或更少、25μg/kg或更少、20μg/kg或更少、15μg/kg或更少、10μg/kg或更少、5μg/kg或更少、2.5μg/kg或更少、2μg/kg或更少、1.5μg/kg或更少、1μg/kg或更少、0.5μg/kg或更少、或0.5μg/kg或更少的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。
在另一个实施方案中，向受试者皮下施用200μg/kg或更少、优选地175μg/kg或更少、150μg/kg或更少、125μg/kg或更少、100μg/kg或更少、95μg/kg或更少、90μg/kg或更少、85μg/kg或更少、80μg/kg或更少、75μg/kg或更少、70μg/kg或更少、65μg/kg或更少、60μg/kg或更少、55μg/kg或更少、50μg/kg或更少、45μg/kg或更少、40μg/kg或更少、35μg/kg或更少、30μg/kg或更少、25μg/kg或更少、20μg/kg或更少、15μg/kg或更少、10μg/kg或更少、5μg/kg或更少、2.5μg/kg或更少、2μg/kg或更少、1.5μg/kg或更少、1μg/kg或更少、0.5μg/kg或更少、或0.5μg/kg或更少的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患的一种或多种症状。
在另一个实施方案中，向受试者静脉施用100μg/kg或更少、优选95μg/kg或更少、90μg/kg或更少、85μg/kg或更少、80μg/kg或更少、75μg/kg或更少、70μg/kg或更少、65μg/kg或更少、60μg/kg或更少、55μg/kg或更少、50μg/kg或更少、45μg/kg或更少、40μg/kg或更少、35μg/kg或更少、30μg/kg或更少、25μg/kg或更少、20μg/kg或更少、15μg/kg或更少、10μg/kg或更少、5μg/kg或更少、2.5μg/kg或更少、2μg/kg或更少、1.5μg/kg或更少、1μg/kg或更少、0.5μg/kg或更少、或0.5μg/kg或更少的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。在另一个实施方案中，经过约6小时、约4小时、约2小时、约1.5小时、约1小时、约50分钟、约40分钟、约30分钟、约20分钟、约10分钟、约5分钟、约2分钟、约1分钟、约30秒或约10秒施用100μg/kg或更少、优选95μg/kg或更少、90μg/kg或更少、85μg/kg或更少、80μg/kg或更少、75μg/kg或更少、70μg/kg或更少、65μg/kg或更少、60μg/kg或更少、55μg/kg或更少、50μg/kg或更少、45μg/kg或更少、40μg/kg或更少、35μg/kg或更少、30μg/kg或更少、25μg/kg或更少、20μg/kg或更少、15μg/kg或更少、10μg/kg或更少、5μg/kg或更少、2.5μg/kg或更少、2μg/kg或更少、1.5μg/kg或更少、1μg/kg或更少、0.5μg/kg或更少、或0.5μg/kg或更少的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的静脉剂量以预防、治疗或改善自身免疫性疾患或T细胞恶性肿瘤的一种或多种症状。
在特定实施方案中，其中在给药方案的前几天施用逐步增加的剂量，在方案的第1天的剂量为5μg/m2/天-100μg/m2/天，且到第3、4、5、6或7天时逐步增加至如以上直接列举的日常剂量。例如，第1天，向受试者施用约51μg/m2/天的剂量，第2天向受试者施用约103μg/m2/天、第3天向受试者施用约207μg/m2/天、第4天向受试者施用约413μg/m2/天及在方案的随后几天(例如，第5-14天)向受试者施用826μg/m2/天。
在其他实施方案中，初始剂量是等于方案结束时的日常剂量的1/4至1/2，但以6、8、10或12小时的间隔分次(in portions)施用。例如，以6小时间隔的3μg/kg-4μg/kg的四次剂量施用13μg/kg/天剂量以降低由抗体的施用引起的细胞因子释放的水平。
在特定实施方案中，为了减少细胞因子释放及其他副作用的可能性，通过静脉施用更缓慢地施用方案中的前1、2、3或4次剂量或全部剂量。例如，可经过约5分钟、约15分钟、约30分钟、约45分钟、约1小时、约2小时、约4小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时及约22小时施用51μg/m2/天的剂量。在某些实施方案中，经过例如20至24小时的时间段，通过缓慢输注施用剂量。在特定实施方案中，以泵输注剂量，优选随输注的进展逐渐增加施用的抗体的浓度。
在其他实施方案中，可以以逐步增加的剂量施用方案的一组分数。例如，关于以上描述的51μg/m2/天至826μg/m2/天方案，分数可以是日常剂量的1/10、1/4、1/3、1/2、2/3或3/4。因此，当分数是1/10时，日常剂量将是第1天的5.1μg/m2、第2天的10.3μg/m2、第3天的20.7μg/m2、第4天的41.3μg/m2和第5至14天的82.6μg/m2。当分数是1/4时，剂量将是第1天的12.75μg/m2、第2天的25.5μg/m2、第3天的51μg/m2、第4天的103μg/m2和第5至14天的207μg/m2。当分数是1/3时，剂量将是第1天的17μg/m2、第2天的34.3μg/m2、第3天的69μg/m2、第4天的137.6μg/m2和第5至14天的275.3μg/m2。当分数是1/2时，剂量将是第1天的25.5μg/m2、第2天的51μg/m2、第3天的103μg/m2、第4天的207μg/m2和第5至14天的413μg/m2。当分数是2/3时，剂量将是第1天的34μg/m2、第2天的69μg/m2、第3天的137.6μg/m2、第4天的275.3μg/m2和第5至14天的550.1μg/m2。当分数是3/4时，剂量将是第1天的38.3μg/m2、第2天的77.3μg/m2、第3天的155.3μg/m2、第4天的309.8μg/m2和第5至14天的620μg/m2。
在特定实施方案中，不是经过一些天通过日常剂量施用抗CD3抗体或抗原结合片段，而是经过4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时、24小时、30时或36小时以不间断的方式通过输注施用抗CD3抗体或抗原结合片段。输注可以是恒定的或可以在输注的例如前1、2、3、4、5、6或8小时以较低的剂量开始进行并随后增加至其后的较高剂量。经过输注的过程，患者接受了等于以上展示的示例性方案中施用的量的剂量。例如，约150μg/m2、200μg/m2、250μg/m2、500μg/m2、750μg/m2、1000μg/m2、1500μg/m2、2000μg/m2、3000μg/m2、4000μg/m2、5000μg/m2、6000μg/m2、7000μg/m2、8000μg/m2或9000μg/m2的剂量。特别地，设计输注的速度和持续时间以使施用之后受试者中游离抗CD3抗体或抗原结合片段的水平最小化。在某些实施方案中，游离抗CD3抗体或抗原结合片段的水平应不超过200ng/ml游离抗体。另外，设计输注以实现至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％的组合的T细胞受体涂覆和调节。
在某些实施方案中，施用抗CD3抗体或抗原结合片段以实现T细胞上T细胞受体复合物的组合的涂覆和调节的特定水平，如通过本领域众所周知的方法确定的，见，例如，美国专利申请公布US 2003/0108548的实施例11，在此通过引用整体被并入。在特定实施方案中，剂量方案实现了至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％的组合的T细胞受体涂覆和调节，在特定实施方案中，检测到极少的至未检测到游离抗CD3抗体或抗原结合片段(例如，在患者的血液中检测到少于200ng/mL的药物)。
在优选的实施方案中，肠胃外地，例如，静脉、肌内或皮下施用抗CD3抗体或抗原结合片段，或可选地，口服施用抗CD3抗体或抗原结合片段。还可施用抗CD3抗体或抗原结合片段作为缓释制剂。
在特定实施方案中，相对于其他免疫抑制剂，预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量或剂量方案的施用不会引起或减少一种或多种以下不想要的或有害的作用：生命体征异常(发热、心动过速、心动过缓、高血压、低血压)、血液学事件(贫血、淋巴细胞减少、白细胞减少、血小板减少)、头痛、寒战、眩晕、恶心、衰弱、背痛、胸痛(胸部压力)、腹泻、肌痛、病痛、瘙痒、银屑病、鼻炎、显汗、注射部位反应、血管扩张、机会性感染的增加的风险、Epstein Barr病毒的活化、T细胞凋亡和形成某些类型的癌症的增加的风险。在另一个特定实施方案中，相对于其他免疫抑制剂，预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的一个或多个剂量的施用不会引起或减少一种或多种以下不想要的或有害的作用：生命体征异常(发热、心动过速、心动过缓、高血压、低血压)、血液学事件(贫血、淋巴细胞减少、白细胞减少、血小板减少)、头痛、寒战、眩晕、恶心、衰弱、背痛、胸痛(胸部压力)、腹泻、肌痛、病痛、瘙痒、银屑病、鼻炎、显汗、注射部位反应、血管扩张、机会性感染的增加的风险、Epstein Barr病毒活化、T细胞凋亡和形成某些类型的癌症的增加的风险。
根据本发明，可在包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的初始或在先剂量或剂量方案之后的1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、12个月、15个月、18个月或24个月或更长时间，重复包含用于治疗自身免疫性疾患的预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的剂量或剂量方案。当在初始或在先剂量或剂量方案之后的改善之后，与所述自身免疫性疾患相关的症状复发时，或当在根据本发明方法的抗CD3抗体或抗原结合片段的初始剂量或剂量方案之后，与所述自身免疫性疾患相关的症状并未改善时，可理所当然地施用重复剂量或剂量方案。例如，关于糖尿病，当例如与治疗前的水平相比，在用抗CD3抗体或抗原结合片段的初始或在先治疗之后的1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、12个月、15个月、18个月或24个月或更长时间，受试者的平均日常胰岛素使用未减少至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％时，可向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的重复剂量或剂量方案。可选地，关于糖尿病，当例如与治疗前的水平相比，在用抗CD3抗体或抗原结合片段的初始或在先治疗之后的1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、12个月、15个月、18个月或24个月或更长时间，受试者的HA1或HA 1C水平未减少至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％时，可向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的重复剂量或剂量方案。在另一个实施方案中，关于糖尿病，当例如与治疗前的水平相比，在用抗CD3抗体或抗原结合片段的初始或在先治疗之后的1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、12个月、15个月、18个月或24个月或更长时间，受试者的C肽响应减少了超过5％、超过10％、超过20％、超过30％、超过40％、超过50％、超过60％、超过70％、超过80％或超过90％时，可向受试者施用包含预防或治疗有效量的一种或多种抗CD3抗体或抗原结合片段的重复剂量或剂量方案。
自身免疫性疾病是由针对人细胞、组织和器官的正常组分的免疫应答造成的非感染性免疫疾病。自身免疫性疾病通常是逐步侵蚀靶组织和器官的慢性疾病。目前，由于不适当的自身免疫应答的存在分类为自身免疫性疾病的常见疾病包括I型胰岛素依赖型糖尿病、类风湿性关节炎(RA)、全身性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)、炎性肠病(IBD)；重症肌无力、乳糜泻、Sjogren综合征、格雷弗氏病、克罗恩病、自身免疫性肝炎、银屑病、银屑病关节炎、哮喘、过敏性鼻炎、来自器官移植的影响、或移植物抗宿主病(GVHD)和包括炎性免疫应答的多种其他疾病。
由于自身免疫性疾病典型是慢性疾病，它们通常需要终身治疗和监测。用于自身免疫性疾病的传统治疗因此主要针对处理由疾病引起的炎症的结果，且仅少数自身免疫性疾病可被治愈或此治疗仅使得少数自身免疫性疾病消失。对于一些自身免疫性疾病，施用有限数量的免疫抑制药剂之一可导致活动性疾病的缓解期或活动性疾病的消失。用于辅助治疗的免疫抑制剂包括抑制细胞因子的产生、下调或抑制自身抗原表达或掩蔽(mask)主要组织相容性(MHC)抗原的物质。免疫抑制药剂包括抗炎药物(例如，非甾体类抗炎药物(“NSAID”))、环磷酰胺、溴隐亭环孢霉素A(bromocryptine cyclosporine A)、氨甲喋呤、类固醇诸如糖皮质类固醇和细胞因子或细胞因子受体拮抗物。患者很少能够停止这些免疫抑制药剂，因为当药剂被停止时他们的自身免疫性疾病通常会再次出现。当长期持续免疫抑制药剂时自身免疫性疾病可变成对治疗耐受性的，且可能需要免疫抑制剂的不断增加的剂量。
针对CD3的治疗抗体被认为比目前可用于自身免疫性疾病的许多免疫抑制化学治疗剂产生更少的长期副作用(WO 2007/117600)。然而，已发现基于在先抗体的治疗是有问题的，特别是在采用重复的施用的情况下。抗淋巴细胞治疗，诸如，抗淋巴细胞球蛋白(ALG)，和针对B细胞的单克隆抗体诸如利妥昔单抗和阿仑单抗减少了治疗的受试者中的循环和组织B细胞群体。然而，这些治疗还引起严重的免疫抑制，其是对于慢性自身免疫性疾病的长期治疗不可取的。严重的免疫抑制治疗的主要并发症是感染。全身性免疫抑制还可伴随非期望的毒性作用和造血干细胞的水平的降低。另外，接受抗体治疗的患者通常形成显著水平的人抗小鼠抗体(HAMA)、人抗嵌合抗体(HACA)和抗个体基因型的应答，当缓解结束时其可限制重复的治疗。
如以上讨论的，针对T细胞的抗原的抗体，诸如T细胞受体复合物(TCR)，已被建议作为用于自身免疫性疾病的免疫抑制的可能的治疗。抗CD3抗体被认为通过减少病原T细胞并诱导调节性T细胞而诱导此免疫抑制(WO 2007/117600；St.Clair E.W.(2009)“NovelTargeted Therapies for Autoimmunity,”Curr.Opin.Immunol.21(6):648-657；Ludvigsson,J.(2009)“The Role of Immunomodulation Therapy in AutoimmuneDiabetes,”J.Diabetes Sci.Technol.3(2):320-330)。抗T细胞抗体，包括抗CD3，因此被用于通过抑制、增强或再定向T细胞对抗原的应答来影响受试者中的免疫状态。特别地，Teplizumab，还被称为hOKT3γ1(Ala-Ala)(包含位置234和235处的丙氨酸)(MacroGenics,Inc.)是抗CD3抗体，已被改造以改变介导胰腺的胰岛的产生胰岛素的β细胞的破坏的T淋巴细胞的功能。Teplizumab与成熟T细胞上表达的CD3ε链的表位结合并这样一来。
部分由于它们与非人CD3的交叉反应性(其允许更准确的及响应的给药)，本发明的抗CD3抗体被认为在自身免疫性疾病的治疗中具有特定效用，尽管现有技术的明显失败。
此类抗体和它们的抗原结合片段可被单独使用或与其他药剂联合使用。特别地，本发明涉及包括此类抗体或抗原结合片段与抗B细胞抗体(或其抗原结合片段)的联合的施用的治疗。抗B细胞抗体是本领域已知的(见，WO 2007/117600、WO 2005/000901、WO 2004/035607；美国专利号5,500,362和5,736,137；美国专利公布号2003/0219433、2005/0271658、2005/0271658、2005/0281817、2006/024295、2006/024300和2006/034835；Clark,E.A.等人(1985)“Role Of The Bp35Cell Surface Polypeptide In Human B-CellActivation,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)82(6):1766-1770；Press,O.W.等人(1987)“Monoclonal Antibody 1F5(Anti-CD20)Serotherapy of Human B Cell Lymphomas,”Blood 69:584-591)。可使用不同的抗体或其抗原结合片段的联合施用，或通过形成具有与CD3和B细胞抗原二者结合的能力的双特异性抗体或更优选地通过形成如以上描述的DARTTM双抗体实现此联合施用。
优选地，采用的抗B细胞抗体或抗原结合片段将针对B细胞表面标志物，诸如选自以下的标志物：CD19、CD20、CD22、CD23、CD32B、CD40、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD79a、CD79b、CD38、CD27、淋巴细胞功能相关抗原(LFA)诸如LFA-I或LFA-3、CFA-I、或参与导致适应性免疫应答中T细胞和B细胞活化的T细胞、B细胞缔合的另外的辅助分子。在另外优选的实施方案中，抗B细胞抗体可以是B细胞耗竭抗体，诸如针对选自以下的标志物的抗体：CD19、CD20、CD22、CD23、CD32B、CD40、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、淋巴细胞功能相关抗原(LFA)诸如LFA-I或LFA-3、CFA-I、或参与T细胞、B细胞缔合的辅助分子。
可选地，此组合治疗可包括抗CD3抗体或其抗原结合片段与识别存在于抗原呈递细胞上的抗原(例如，B7-H3)的抗体(或其抗原结合片段)组合的施用。在仍然另外优选的实施方案中，组合治疗包括抗CD3抗体(或其抗原结合片段)与(直接或间接)识别参与B细胞活化的多肽的抗体(或其抗原结合片段)或免疫调节剂诸如TNF细胞因子家族的成员或干扰素(例如，α、β或γ干扰素)组合的施用。如本领域技术人员所理解的，此类干扰素参与与抗原加工和呈递一起发挥作用的蛋白的调节。这些细胞因子刺激细胞以增加它们的HLA I类重链的表达。在一个优选的实施方案中，组合治疗包括向患有活跃的自身免疫性疾病的受试者施用针对T细胞抗原的抗体与针对β-干扰素的抗体的组合。在另外优选的实施方案中，组合治疗包括向受试者施用靶向T细胞抗原的抗体与选自以下的抗体的组合：β-干扰素抗体和在另外的实施方案中，组合治疗包括向受试者施用靶向T细胞抗原的抗体与靶向β-干扰素的抗体的组合用于治疗患有多发性硬化的患者。
在另外的实施方案中，抗CD3抗体可以是当T细胞与在抗原呈递细胞、特别地抗原呈递B细胞上的其特异性抗原接触时，抑制或阻止T细胞活化的非促有丝分裂抗体或减少促有丝分裂抗体。如本文所用的，术语“非促有丝分裂T细胞抗体”指通过改变该抗体的Fc受体被改造的抗体，如此以致其不会触发初始活化事件及确保当T细胞被活化时观察到的细胞因子的释放。“减少促有丝分裂T细胞抗体”是减少初始活化事件和当T细胞被活化时发生的细胞因子的释放的T细胞抗原特异性的抗体。非促有丝分裂或减少促有丝分裂抗体可用于预防当向患者施用抗淋巴细胞抗体时观察到的初始“首次剂量副作用”。非促有丝分裂或减少促有丝分裂抗体可以是具有阻止或抑制被效应细胞结合的修饰的Fc片段的改造的抗体。
C.施用方法
在一个方面，本发明的实施方案提供了治疗的人受试者以实现并保持比用传统治疗治疗的受试者实现的缓解持续更长时间段的临床缓解。例如，在其中传统的治疗实现了自身免疫性疾病的症状持续3个月的缓解的情况下，本发明的组合物可提供直至6个月、直至12个月及在某些情况下直至1至2年或更长的症状的完全缓解。预期的是，关于某些自身免疫性疾病，提供不会复发、特别地在其中治疗始于自身免疫性疾病被诊断之后不久的情况下可以是可能的。
用组合治疗实现的临床缓解可以是完全缓解，或其可以是其中持续延长时间段保持疾病症状的显著减少的部分缓解。例如，接受本发明的治疗的受试者可具有减少的自身免疫性应答，如通过体液和组织，例如在脑脊液(CSF)、血清、尿中或在身体组织中的可检测的自身抗体的降低的水平确定的。当与用传统治疗治疗的受试者相比时，接受组合治疗的受试者还可具有对自身抗原减弱的T细胞应答，如通过使用外周血单核细胞(PBMC)或纯化的T细胞通过增殖或细胞因子产生分析体外检测的。
可以以包括以下的任何适合的方式施用本发明的组合物：肠胃外、局部、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和/或病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。另外，抗体可通过脉冲输注(pulse infusion)被适合地施用，例如，递增剂量的抗体。优选地，静脉内或皮下给予剂量，且更优选地通过静脉输注给予剂量。使用相同或不同的施用方式可提供每一次暴露(exposure)。在一个实施方案中，每一次暴露都通过静脉施用给予。在另一个实施方案中，每一次暴露都通过皮下施用给予。在又另一个实施方案中，通过静脉和皮下施用二者给予暴露。
在一个实施方案中，施用治疗抗体作为缓慢静脉输注，其可以小时速率(a ratehour)开始以在约15分钟至4小时内递送本发明的分子。然而，如果受试者经历输注相关的反应，优选降低输注速率至例如，现有速率的一半。受治疗的受试者可在开始输注之前约30至60分钟经口服接受对乙酰氨基酚/扑热息痛(例如，约1g)和盐酸苯海拉明(例如，约50mg或类似的剂的当量剂量)的预防治疗。
可使用小于当作为单一抗体治疗施用时用于自身免疫性疾病的治疗中实现临床应答所需的此抗体的量的第一抗体的初始剂量向受试者施用通过组合本发明的组合物(包括DARTTM双抗体)提供的治疗。小于实现能够识别并对提供单一抗体的治疗中的自身抗原的应答的T细胞的耗竭所需的剂量的治疗性抗T细胞抗体的剂量，可以足够提供期望的临床应答。确定实现临床应答所需的治疗抗体的剂量的方法是本领域技术人员已知的。例如，可测量受试者中的临床应答作为疾病进展的时间、临床症状的减少、实验标志物的水平的降低、对再次治疗的需要的减少，或可通过被认为是自身免疫性疾病的状态中的改善的有用的指示的任何其他临床手段测量受试者中的临床应答。
还可以以小于当单独施用该抗体时实现临床应答的有效剂量的初始剂量向需要治疗的受试者施用组合治疗的第二抗体。例如，可与第一抗T细胞抗体一起施用实现小于100％B细胞耗竭、小于50％B细胞耗竭、小于30％耗竭或甚至无B细胞耗竭的耗竭抗B细胞抗体的剂量，以实现提供对自身抗原的免疫应答的抑制的临床应答，该临床应答等于或优于通过施用当单独施用时提供患者中的B细胞100％耗竭的B细胞耗竭抗体的量实现的临床应答。
在某些情况下，临床应答可以不是当单独施用时的第一或第二抗体实现的应答。在其他情况下，临床应答可以是相当于由单一抗体治疗的施用实现的临床应答，其中组合治疗提供受治疗的受试者的免疫系统比单一抗体治疗更少的免疫抑制。在一个优选的实施方案中，通过组合治疗提供的协同应答减少或消除了受试者对自身抗原的应答同时提供较低水平的免疫抑制。总体的免疫抑制是先前可用的抗体治疗的显著问题。
D.药物制剂
通过将具有期望纯度的本发明的组合物与制药领域公认的任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂一起混合，将用于本发明实施方案的抗体的治疗制剂制备为冻干的制剂或水溶液的形式用于储存、运输(shipment)和施用。
术语“药学上可接受”指由联邦或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其他一般公认药典中列出的用于在动物且更特别地在人中使用。术语“载体”指用其施用治疗剂的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或媒介物。此类药学载体可以是无菌液体，诸如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油，等。当静脉施用药物组合物时，水是优选的载体。还可采用盐水溶液和含水右旋糖和甘油溶液作为液态载体，特别地用于可注射的溶液。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇，等等。如果有需要，该组合物还可包含少量的湿润或乳化剂或pH缓冲剂。这些组合物可采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂等等的形式。
本发明的组合物包含可用于制备药物组合物的原料药物组合物(例如，不纯的或非无菌的组合物)和可被用于单位剂型的制备的药物组合物(即，适于施用至受试者或患者的组合物)。此类组合物包含本文公开的预防或治疗有效量的预防和/或治疗剂或那些剂的组合和药学上可接受的载体。优选地，本发明的组合物包含本发明的预防或治疗有效量的人源化抗体和药学上可接受的载体。
通常，本发明的组合物的成分单独地或混合在一起以单位剂型提供，例如，作为指示活性剂的量的熔封容器诸如安瓿或小囊(sachette)中干燥冻干的粉末或无水浓缩物。在将通过输注施用组合物的情况下，可用包含无菌药物级水或盐水的输液瓶调制组合物。在通过注射施用组合物的情况下，可提供用于注射的一个安瓿的无菌水或盐水以便可在施用之前混合成分。适于注射的药物组合物包括无菌水溶液，其中活性剂是水溶性的或是用于无菌可注射溶液的临时制备的分散体或无菌散剂。可对需要量的活性拮抗物或抗体掺入适合的载体，例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)和其适当的混合物来制备用于组合治疗的组合物。组合物中可包含等渗剂诸如糖、多元醇诸如甘露醇、山梨醇或氯化钠。
本发明的组合物可被配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括，但不限于，与阴离子诸如源自盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子形成的盐，和与阳离子诸如源自钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子形成的盐。
E.药盒
本发明提供了包含用本发明的人源化抗体填充的一种或多种容器的药物包装或药盒。另外，可用于治疗疾病的一种或多种其他预防或治疗剂也可被包含在药物包装或药盒中。本发明还提供了包含用本发明的药物组合物的一种或多种成分填充的一种或多种容器的药物包装或药盒。任选地，此类容器可附带以由监管药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的通告，该通告反映由机构批准用于人施用的制造、使用或销售。
本发明提供了可在以上方法中使用的药盒。在一个实施方案中，药盒包含本发明的一种或多种人源化的抗体。在另一个实施方案中，药盒还包含一种或多种容器中的可用于治疗癌症的一种或多种其他预防或治疗剂。在另一个实施方案中，药盒还包含结合与癌症相关的一种或多种癌抗原的一种或多种细胞毒性抗体。在特定实施方案中，其他预防或治疗剂是化学治疗剂。在其他实施方案中，预防或治疗剂是生物或激素治疗剂。
在一个实施方案中，本发明提供了包含待被用于治疗自身免疫性疾病的组合疗法的抗体的制品。该制品包括在容器内含有结合呈递在T细胞上的抗原的第一抗体及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的容器。该制品还包括含有针对B细胞表面标志物的第二抗体和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂和用于向需要治疗自身免疫性疾病的受试者施用组合物的说明书的第二容器。当第一和第二抗体被确定是互补的并不会负面影响彼此时，可在包含用于施用的合适浓度的第一和第二抗体与用于施用的包装插页(packageinsert)和说明书的单个容器中提供第一和第二抗体。
该制品的容器可以是将不会与制剂相互作用或另外影响制剂的任何适合的材料。该制品还可包括含有药学上可接受的稀释剂缓冲液、诸如抑菌性注射用水、磷酸盐缓冲的盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液的第二或第三容器。该制品还可包括从市售和用户角度可能是需要的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、注射针和注射器。
VII.使用本发明的抗CD3抗体的诊断方法
通过本文公开的方法制备的CD3的抗体还可被用于鉴定癌性细胞的存在与不存在、或其水平，其从细胞表面释放之后在血液中循环(例如，可溶性CD3)。此循环的抗原可以是完整的CD3抗原，或保持根据本文教导方法被检测到的能力的其片段。此检测可以例如使用本领域常用的标准方法通过FACS分析实现。
在本发明诊断方法的优选的实施方案中，抗体具有可检测的标记物。可被使用的标记物的实例包括放射性剂(例如，钪-47、锝-99m、铟-111、碘-131、铼-186、铼-188、钐-153、钬-166、镥-177、铜-64、钪-47、钇-900)、酶或荧光团，诸如藻红蛋白或异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate)(还称为异硫氰酸荧光素(fluoroisothiocyanate)或FITC)。
使用抗体用于诊断的一个方法是通过以下步骤的体内肿瘤成像：将抗体与放射性或射线不透性剂连接、向个体施用抗体及使用x-射线或其他成像设备以可视化标记的抗体在表达抗原的癌细胞的表面的定位。以促进在生理条件下的结合的浓度施用抗体。
用于CD3的检测的体外技术是本领域常规的，并包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫沉淀、免疫荧光、酶免疫分析(EIA)、放射免疫分析(RIA)和蛋白印迹分析。
本发明还提供了使用与CD3结合的任何抗体辅助诊断个体中由表达CD3的癌细胞表征的癌症的方法和可被用于确定CD3表达水平的任何其他方法。如本文所用的，用于“辅助诊断”的方法指这些方法辅助作出关于癌症的分类或属性的临床判断，并可以或可以不是关于最终诊断的决定性的。因此，癌症的辅助诊断的方法可包括检测来自个体的生物样品中CD3的水平和/或确定样品中CD3表达的水平的步骤。识别抗原的抗体或其部分还可被用于创建用于检测从体液，包括但不限于血液、唾液、尿、肺液或腹水液中的活的或死的癌细胞释放的或分泌的抗原的诊断免疫分析。通过本文公开的方法制备的抗CD3抗体可被用于确定被诊断患有癌症的个体是否可以被视为是用于使用针对CD3的抗体的免疫治疗的候选者。在一个实施方案中，可使用针对CD3的抗体测试活组织检查样品的CD3的表达。具有表达CD3的癌细胞的个体是使用针对CD3抗体的免疫治疗的适合的候选者。用抗CD3抗体的染色还可被用于区别癌性组织和正常组织。
使用抗CD3抗体用于诊断目的的方法可用于在任何形式的抗癌治疗，例如，化学治疗或放射治疗之前和之后，确定哪些肿瘤最有可能响应给定的治疗、患有癌症的个体的预后、肿瘤的亚型或转移性疾病的来源、及疾病的进展或对治疗的响应。
使用以上总体描述的方法用于其他患病的(非癌性)细胞，本发明的组合物特别适用于除了癌症之外的疾病状态的诊断。适于在本发明的方法中使用的疾病状态，包括但不限于，与个体中炎性或自身免疫性应答相关的疾病或疾患。以上描述的方法可被用于调节个体中炎性或自身免疫性应答。由炎症和自身免疫性疾患引起的、可经受使用本发明的组合物和方法的诊断和/或治疗的疾病和病症包括，以实例说明且不限于，多发性硬化、脑膜炎、脑炎、中风、其他脑创伤、炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病、重症肌无力、狼疮、类风湿性关节炎、哮喘、急性幼发型糖尿病、AIDS痴呆症、动脉粥样硬化、肾炎、视网膜炎、特应性皮炎、银屑病、心肌缺血和白细胞介导的急性肺损伤。
用于本发明的抗体和其他治疗剂的诊断和/或治疗用途的又其他适应症包括向处于器官或移植物排斥风险的个体的施用。经过最近几年，用于移植组织和器官诸如皮肤、肾、肝、心、肺、胰腺和骨髓的手术技术的效率已有相当大的改善。也许，主要突出的问题是缺少用于引起接受者中对移植的同种异体移植物或器官的免疫耐受的满意的剂。当同种异体细胞或器官被移植进入宿主(即，供体和受体是来自相同物种的不同的个体)，宿主免疫系统可能发动对移植物中的外来抗原的免疫应答(宿主抗移植物病)，导致移植的组织的破坏。
通过本文公开的方法制备的CD3的单克隆抗体可被用于鉴定多种组织中人癌症干细胞的存在或不存在。已假定癌症干细胞(CSC)在肿瘤生长和转移中发挥作用(Ghotra,V.P.等人(2009)“The Cancer Stem Cell Microenvironment And Anti-CancerTherapy,”Int.J.Radiat.Biol.85(11):955-962；Gupta,P.B.等人(2009)“Cancer StemCells:Mirage Or Reality？”Nat.Med.15(9):1010-1012；Lawson,J.C.等人(2009)“CancerStem Cells In Breast Cancer And Metastasis,”Breast Cancer Res.Treat.118(2):241-254；Hermann,P.C.等人(2009)“Pancreatic Cancer Stem Cells--Insights AndPerspectives,”Expert Opin.Biol.Ther.9(10):1271-1278；Schatton,T.等人(2009)“Identification And Targeting Of Cancer Stem Cells,”Bioessays 31(10):1038-1049；Mittal,S.等人(2009)“Cancer Stem Cells:The Other Face Of Janus,”Amer.J.Med.Sci.338(2):107-112；Alison,M.R.等人(2009)“Stem Cells And LungCancer:Future Therapeutic Targets？”Expert Opin.Biol.Ther.9(9):1127-1141；Charafe-Jauffret,E.等人(2009)“Breast Cancer Stem Cells:Tools And Models ToRely On,”BMC Cancer 9:202；Scopelliti,A.等人(2009)“Therapeutic Implications OfCancer Initiating Cells,”Expert Opin.Biol.Ther.9(8):1005-1016；PCT公布WO 2008/091908)。根据该假定，CSC在每一个肿瘤内提供能够无限自我更新并能够发展为复制能力相对有限的更成熟肿瘤细胞的小的、不同亚群的细胞。已假定这些癌症干细胞可以对化学治疗剂、放射物或其他有毒条件更具耐受性，并因此，在临床治疗之后存留下来并随后生长为继发性肿瘤、转移或引起复发。已表明CSC可从“正常”组织干细胞或从更为分化的组织祖细胞产生。
在本申请中描述的列举它们关于抗CD3抗体的用途的用途，还包括使用本文描述的其他CD3激动剂、拮抗物和调节物用于癌症干细胞的鉴定和治疗的用途。在此类实施方案中，使用描述的类似的方法将抗CD3抗体和其他CD3激动剂、拮抗物和调节物用于癌症干细胞的鉴定、诊断或治疗处理，且，作出一般有技能的从业者的范围内的变化以调整该方法以鉴定/诊断或治疗癌症干细胞。
现在已一般地描述了本发明，通过参考下面的实施例，相同的内容将更容易地被理解，其通过阐述的方式被提供且不预期限制本发明，除非另有指明。
实施例1
mAb1与人和食蟹猴二者的CD3结合
为了评价mAb1与人CD3结合的能力，执行了捕获ELISA。用1μg/ml的可溶的食蟹猴CD3(“sCD3”)涂覆平板并在不同浓度的mAb1抗体的嵌合变体(ch-mAb1)(包含mAb1的可变序列和人抗体的恒定区)、人源化变体(h-mAb1)和主要由嵌合mAb1抗体的轻链和mAb1的人源化变体的重链组成(composed of)的抗体的存在下孵育。该实验的结果在图1A中显示。该实验显示了mAb1与非人哺乳动物物种的CD3结合的能力。另外，将嵌合mAb1抗体的结合与主要由人源化变体mAb1LC-2和mAb1的重链组成的抗体的结合比较。该实验的结果在图1B中显示。该实验显示了mAb1与人CD3结合的能力。图1A和1B因此显示了人源化mAb1能够与人CD3和非人哺乳动物的CD3二者结合。人源化mAb显示了与sCD3和hCD3的结合，该结合与嵌合mAb1与sCD3和hCD3的结合相似。
实施例2
mAb1的人源化
制备了mAb1的人源化衍生物。这些人源化衍生物的氨基酸序列和编码多核苷酸序列在以下显示。CDR呈粗体和下划线显示。
人源化mAb1可变轻链变体1的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)：
编码人源化mAb1可变轻链变体1的多核苷酸序列(SEQ ID NO:11)：
人源化mAb1可变轻链变体2(mAb1LC-2)的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)：
编码人源化mAb1可变轻链变体2的多核苷酸序列(SEQ ID NO:13)：
人源化mAb1可变重链的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)：
编码人源化mAb1可变重链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:15)：
实施例3
mAb2的人源化
制备了mAb2的人源化衍生物。这些人源化衍生物的氨基酸序列和编码多核苷酸序列在以下显示。CDR呈粗体和下划线显示。
人源化mAb2可变轻链变体1(h-mAb2 VL-1)的氨基酸序列(SEQ ID NO:16)：
编码人源化mAb2可变轻链变体1(h-mAb2 VL-1)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:17)：
人源化mAb2可变轻链变体2(h-mAb2 VL-2)的氨基酸序列(SEQ ID NO:18)：
编码人源化mAb2可变轻链变体2(h-mAb2 VL-2)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:19)：
人源化mAb2可变轻链变体3(h-mAb2 VL-3)的氨基酸序列(SEQ ID NO:20)：
编码人源化mAb2可变轻链变体3(h-mAb2 VL-3)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:21)：
人源化mAb2可变轻链变体4(h-mAb2 VL-4)的氨基酸序列(SEQ ID NO:22)：
编码人源化mAb2可变轻链变体4(h-mAb2 VL-4)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:23)：
人源化mAb2可变轻链变体5(h-mAb2 VL-5)的氨基酸序列(SEQ ID NO:24)：
编码人源化mAb2可变轻链变体5(h-mAb2 VL-5)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:25)：
人源化mAb2可变轻链变体6(h-mAb2 VL-6)的氨基酸序列(SEQ ID NO:26)：
编码人源化mAb2可变轻链变体6(h-mAb2 VL-6)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:27)：
人源化mAb2可变轻链变体7(h-mAb2 VL-7)的氨基酸序列(SEQ ID NO:28)：
编码人源化mAb2可变轻链变体7(h-mAb2 VL-7)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:29)：
人源化mAb2可变轻链变体8(h-mAb2 VL-8)的氨基酸序列(SEQ ID NO:30)：
编码人源化mAb2可变轻链变体8(h-mAb2 VL-8)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:31)：
人源化mAb2可变轻链变体9(h-mAb2 VL-9)的氨基酸序列(SEQ ID NO:32)：
编码人源化mAb2可变轻链变体9(h-mAb2 VL-9)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:33)：
人源化mAb2可变轻链变体10(h-mAb2 VL-10)的氨基酸序列(SEQ ID NO:34)：
编码人源化mAb2可变轻链变体10(h-mAb2 VL-10)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:35)：
人源化mAb2重链变体1(h-mAb2 VH-1)的氨基酸序列(SEQ ID NO:36)：
编码人源化mAb2可变重链变体1(h-mAb2 VH-1)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:37)：
人源化mAb2重链变体2(h-mAb2 VH-2)的氨基酸序列(SEQ ID NO:38)：
编码人源化mAb2可变重链变体2(h-mAb2 VH-2)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:39)：
人源化mAb2重链变体3(h-mAb2 VH-3)的氨基酸序列(SEQ ID NO:40)：
编码人源化mAb2可变重链变体3(h-mAb2 VH-3)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:41)：
人源化mAb2重链变体4(h-mAb2 VH-4)的氨基酸序列(SEQ ID NO:42)：
编码人源化mAb2可变重链变体4(h-mAb2 VH-4)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:43)：
人源化mAb2重链变体5(h-mAb2 VH-5)的氨基酸序列(SEQ ID NO:44)：
编码人源化mAb2可变重链变体5(h-mAb2 VH-5)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:45)：
人源化mAb2重链变体6(h-mAb2 VH-6)的氨基酸序列(SEQ ID NO:46)：
编码人源化mAb2可变重链变体6(h-mAb2 VH-6)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:47)：
人源化mAb2重链变体7(h-mAb2 VH-7)的氨基酸序列(SEQ ID NO:48)：
编码人源化mAb2可变重链变体7(h-mAb2 VH-7)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:49)：
人源化mAb2重链变体8(h-mAb2 VH-8)的氨基酸序列(SEQ ID NO:50)：
编码人源化mAb2可变重链变体8(h-mAb2 VH-8)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:51)：
人源化mAb2可变重链变体QV(h-mAb2 VL-QV)的氨基酸序列(SEQ ID NO:52)：
编码人源化mAb2可变重链变体QV(h-mAb2 VH-QV)的多核苷酸序列(SEQ ID NO:53)：
实施例4
mAb2与人和食蟹猴二者的CD3结合
如以上讨论的，mAb2抗体最初基于其结合人CD3的能力被分离。为了评价mAb2与非人CD3结合的能力，执行了捕获ELISA。用1μg/ml的CD3(人或食蟹猴的)涂覆平板并在不同浓度的mAb2抗体的嵌合变体(ch-mAb2)(包含mAb2的可变序列和人抗体的恒定区)的存在下孵育。作为对照，还将平板与主要由人源化mAb2抗体的轻链和嵌合抗体的重链组成的抗体一起孵育。该实验的结果在图2A和2B中显示，并显示了嵌合mAb2变体呈现与人CD3及与食蟹猴CD3等同的结合。
实施例5
h-mAb2轻链和重链的变体的结合特征的分析
进行分析以确定mAb2的轻链的构架残基中的变异的影响。表2显示了研究的取代。
形成具有为SEQ ID NO:11，但包含D41G、H42Q、L43A、F44P、T45R或G46T的取代(Kabat编号)的mAb2轻链和嵌合mAb2的重链(mAb2的CDR与hFR1-mFR2-hFR3-4)的抗体，并使用捕获ELISA评价它们的结合。用1μg/ml的人CD3的胞外结构域(可溶的hCD3或“shCD3”)涂覆平板并在不同浓度的抗体的存在下孵育。结果(图3)显示了Kabat位置46处的T的取代消除了该抗体与shCD3结合的能力。
进行了另外的研究以评价Kabat轻链位置36、38、44和46处的变化的影响。形成了具有h-mAb2 VL-8、h-mAb2 VL-9或h-mAb2 VL-10轻链和mAb2嵌合抗体的重链的抗体，并使用以上描述的捕获ELISA评价。该实验的结果在图4中显示，并显示了具有hVL-8轻链的抗体与shCD3的结合与具有嵌合mAb2轻链的抗体与shCD3的结合类似。
还形成了具有h-mAb2 VL-6、h-mAb2 VL-7或h-mAb2 VL-8轻链和mAb2嵌合抗体的重链的抗体并使用以上描述的捕获ELISA(除了用0.5μg/ml的磷酸盐缓冲的盐水中的shCD3涂覆平板)评价以确定位置36、38和46处的另外的取代的影响。该实验的结果在图5中显示，并显示了Kabat取代F36V和T46G足够产生其与shCD3的结合与具有嵌合mAb2轻链的抗体与shCD3的结合类似的抗体。
通过形成具有嵌合mAb2抗体的轻链和重链h-mAb2 VH-5、h-mAb2 VH-6或h-mAb2VH-7的抗体，并使用以上描述的捕获ELISA评价结合(使用1μg/ml的shCD3涂覆)，评价了mAb2的重链的序列中的取代的影响。这些实验的结果在图6中显示。另外形成了具有嵌合mAb2抗体的轻链和重链的人源化变体h-mAb2 VH-4、h-mAb2 VH-7或h-mAb2 VH-9的抗体。使用以上描述的捕获ELISA评价了此类抗体的结合。这些研究的结果在图7中显示。
重链hVH-6L(和其变体，hVH-6M)和hVH-8L(和其变体VH-8M)用于制备对CD3的亲和力比主要由表2的hVH-1、hVH-2、hVH-3、hVH-4、hVH-5、hVH-6、hVH-7或hVH-8组成的抗体低的抗体是特别优选的。此类降低的亲和力的抗体将优选地主要由重链hVH-6L或重链VH-8L与以下任何轻链的组合组成：h-mAb2 VL-1、h-mAb2 VL-2、h-mAb2 VL-3、h-mAb2 VL-4、h-mAb2VL-5、h-mAb2 VL-6、h-mAb2 VL-7、h-mAb2 VL-8、h-mAb2 VL-9或h-mAb2 VL-10。特别优选的去免疫(deimmunized)抗体将主要由重链hVH-6L(或其变体，hVH-6M)和轻链h-mAb2 VL-6，或重链hVH-8L(或其变体，hVH-8M)和轻链h-mAb2 VL-6组成。此类多肽的序列在以下展示：
hVH-6L的氨基酸序列(SEQ ID NO:54)：
hVH-8L的氨基酸序列(SEQ ID NO:55)：
重链hVH-6L和hVH-8L进一步被修饰以制备具有在位置52a(S52aN)的天冬酰胺修饰的变体。这些修饰的重链的氨基酸序列和对应的多核苷酸编码序列如下：
hVH-6M的氨基酸序列(SEQ ID NO:72)：
编码hVH-6M可变重链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:73)：
hVH-8M的氨基酸序列(SEQ ID NO:74)：
编码hVH-8M可变重链的多核苷酸序列(SEQ ID NO:75)：
重链hVH-8 di-1和hVH-8 di-2用于制备具有比主要由表2的hVH-1、hVH-2、hVH-3、hVH-4、hVH-5、hVH-6、hVH7或hVH-8组成的抗体低的免疫原性的抗体是特别优选的。此类去免疫抗体将优选地主要由重链hVH-8 di-1或重链hVH-8 di-2与以下任何轻链的组合组成：h-mAb2 VL-1、h-mAb2 VL-2、h-mAb2 VL-3、h-mAb2 VL-4、h-mAb2 VL-5、h-mAb2 VL-6、h-mAb2 VL-7、h-mAb2 VL-8、h-mAb2 VL-9或h-mAb2 VL-10。特别优选的去免疫抗体将主要由重链hVH-8 di-1和轻链h-mAb2 VL-6，或重链hVH-8 di-2和轻链h-mAb2 VL-6组成。
hXR32VH-8 di-1的氨基酸序列(SEQ ID NO:56)：
hXR32VH-8 di-2的氨基酸序列(SEQ ID NO:57)：
此类去免疫抗体将优选地主要由重链hVH-8L di-1或重链VH-8L di-2与以下任何轻链的组合组成：h-mAb2 VL-1、h-mAb2 VL-2、h-mAb2 VL-3、h-mAb2 VL-4、h-mAb2 VL-5、h-mAb2 VL-6、h-mAb2 VL-7、h-mAb2 VL-8、h-mAb2 VL-9或h-mAb2 VL-10。特别优选的去免疫抗体将主要由重链hVH-9M di-1和轻链h-mAb2 VL-6，或重链hVH-8L di-2和轻链h-mAb2VL-6组成。
还制备了mAb2鼠单克隆抗体可变重链(SEQ ID NO:7)的另外的人源化变体。此类变体的氨基酸序列在以下展示，从SEQ ID NO:7的变化以粗体和下划线显示：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“a”(I51T Y52cA)的氨基酸序列(SEQID NO:76)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“b”(I51T N54S)的氨基酸序列(SEQ IDNO:77)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“c”(I51T A56T)的氨基酸序列(SEQ IDNO:78)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“d”(I51T Y52cA N54S)的氨基酸序列(SEQ ID NO:79)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“e”(I51T N54S A56T)的氨基酸序列(SEQ ID NO:80)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“f”(I51T Y52cA N54S A56T)的氨基酸序列(SEQ ID NO:81)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“g”(I51T D61A)的氨基酸序列(SEQ IDNO:82)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“h”(I51T D65G)的氨基酸序列(SEQ IDNO:83)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“i”(I51T Y52cA N54S D61A)的氨基酸序列(SEQ ID NO:84)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“j”(I51T Y52cA N54S D65G)的氨基酸序列(SEQ ID NO:85)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“k”(I51T Y52cA N54S D61A D65G)的氨基酸序列(SEQ ID NO:86)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“2k”(I51T Y52cA N54S D61A D65G(VH8-A49G V93A))的氨基酸序列(SEQ ID NO:87)：
人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体“5k”(I51T Y52cA N54S D61A D65G(VH8-V93A))的氨基酸序列(SEQ ID NO:88)：
可采用mAb2鼠单克隆抗体可变重链的所有此类另外的人源化变体以形成本发明的去免疫抗体。此类另外的去免疫和人源化抗体将优选主要由任何以下的重链：a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、2k或5k和任何以下的轻链：h-mAb2 VL-1、h-mAb2 VL-2、h-mAb2 VL-3、h-mAb2 VL-4、h-mAb2 VL-5、h-mAb2 VL-6、h-mAb2 VL-7、h-mAb2 VL-8、h-mAb2 VL-9或h-mAb2VL-10的组合组成。特别优选的去免疫抗体将主要由重链2k或5k和轻链h-mAb2 VL-6，或重链hVH-8M8L di-2和轻链h-mAb2 VL-6组成。变体2k和5k与蛋白A的可变区结合，因此促进可能缺少可被用于隔开(sequester)此类分子与其他分子的Fc区或其他结构域的分子(诸如双抗体)的纯化。相对于它们各自的亲本多肽，变体hVH-8M、hVH-8L、hVH-6M和hVH-6L呈现降低的免疫原性。
本发明特别涉及主要由重链hVH-8和轻链VL-6组成的去免疫和人源化抗体。本发明另外特别涉及主要由重链hVH-4和轻链VL-6组成的去免疫和人源化抗体。本发明另外特别涉及主要由重链hVH-2k和轻链VL-6组成的去免疫和人源化抗体。
实施例6
嵌合和人源化mAb2轻链和重链的变体的结合特征的分析
为了评价嵌合和人源化mAb2与非人CD3结合的能力，执行了捕获ELISA。用1μg/ml的CD3的胞外结构域(可溶的CD3)(人的或食蟹猴的)涂覆平板并在不同浓度的抗体的存在下孵育。该实验的结果在图8A和8B中显示，并显示了mAb2和其人源化变体呈现与可溶的人CD3及与可溶的食蟹猴CD3等同的结合。
实施例7
mAb2与人和食蟹猴CD3的结合的定量
为了定量mAb2与人或食蟹猴CD3之间的结合的程度，进行了BIACORETM分析。BIACORETM分析测量解离的解离速率，kd。根据KD＝kd/ka，抗体和其靶之间的结合亲和力(KD)是关于缔合(结合速率，ka)和解离(解离速率，kd)的动力学常数的函数。BIACORETM分析使用表面等离子体共振分析直接测量这些动力学参数。使用抗EK抗体将抗CD3抗体mAb2(6.3-100nM)固定至支持体，并在可溶的人CD3(shCD3)或可溶的食蟹猴CD3(scCD3)的存在下孵育。测量解离的时间进程并进行数据的二价拟合。BIACORETM分析的结果在图9A-9D中显示。将动力学数据总结在表3中。
实施例8
包含h-mAb2的CDR的DARTTM双抗体的双特异性结合数据
人源化mAb2(h-mAb2)的CDR被用于制备具有抗CD3第一表位结合位点和能够与Her2/neu(DARTTM双抗体“Her2-h-mAb2”)、或与CD19(DARTTM双抗体“CD19-h-mAb2”)或与表皮生长因子受体(EGFR)(DARTTM双抗体“ERBITUXTM-h-mAb2”)结合的第二表位结合位点的一系列DARTTM双抗体。
Her2/neu-h-mAb2 DARTTM双抗体
Her2-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-Her-2VH E卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和Her2VH序列之间及Her2VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:58)：
Her2-h-mAb2 DARTTM双抗体的Her2VL-hXR32VH-K卷曲的氨基酸序列(Her2VL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:59)：
CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体
CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体的CD19VL-hXR32VH-E卷曲的氨基酸序列(CD19VL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:60)：
CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-CD19VH-K卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和CD19VH序列之间及CD19VH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:61)：
ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体
ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-EGFRVH-E卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和EGFRVH序列之间及EGFRVH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:62)：
ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体的EGFRVL-hXR32VH-K卷曲的氨基酸序列(EGFRVL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ IDNO:63)：
发现此类DARTTM双抗体能够与食蟹猴CD3结合(图10A-10C)。
人源化mAb2(h-mAb2)的CDR被用于制备具有抗CD3第一表位结合位点和能够与B7-H3结合的第二表位结合位点的另外的一系列DARTTM双抗体(DARTTM双抗体“B7-H3-1-h-mAb2”和“B7-H3-2-h-mAb2”)。
B7-H3-1-h-mAb2 DARTTM双抗体
B7-H3-1-h-mAb2 DARTTM双抗体的hBRCA69DVL-hXR32VH-E卷曲的氨基酸序列(hBRCA69DVL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:64)：
B7-H3-1-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-hBRCA69DVH-K卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和hBRCA69DVH序列之间及hBRCA69DVH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:65)：
B7-H3-2-h-mAb2 DARTTM双抗体
B7-H3-2-h-mAb2 DARTTM双抗体的hBRCA84DVL-hXR32VH-E卷曲的氨基酸序列(hBRCA84DVL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:66)：
B7-H3-2-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-hBRCA84DVH-K卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和hBRCA84DVH序列之间及hBRCA84DVH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:67)：
发现此类DARTTM双抗体能够与可溶的食蟹猴CD3结合(图10D)。
实施例9
HER2/neu和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体介导有效的再定向T细胞杀死
制备了HER2/neu和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体。此类DARTTM双抗体具有将T细胞(通过此T细胞与CD3结合DARTTM双抗体的CD3结合部分的结合)定位至肿瘤细胞的位置(通过此癌细胞与DARTTM双抗体的HER2/neu结合部分的结合)的能力。随后，在本文称为“再定向”杀死的过程中，定位的T细胞可介导杀死肿瘤细胞。
构建了具有曲妥珠单抗的抗HER2/neu可变结构域和h-mab2 VH-8和h-mab2 VL-6的抗CD3可变结构域的对HER2/neu和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体(SEQID NO:58-59)。
为了证明DARTTM双抗体介导此再定向杀死癌细胞的能力，将不同浓度的以上描述的HER2/neu x CD3 DARTTM双抗体与靶肿瘤细胞(SKOV-3肿瘤细胞、SKBR-3肿瘤细胞、A549肿瘤细胞和MCF-7肿瘤细胞)和效应静息PBMC(E:T比＝30:1)一起孵育并确定了细胞毒性(LDH分析)。这些研究的结果显示了HER2/neu x CD3 DARTTM双抗体介导再定向杀死肿瘤细胞的能力。
实施例10
用于患有自身免疫性糖尿病的患者的抗TCR单克隆抗体治疗
患者：根据以下标准招募了患有1型糖尿病的40名患者参与研究：7和20岁之间、根据美国糖尿病协会标准诊断的6周内，及抗GAD65、抗ICA512和/或抗胰岛素自身抗体的存在的确认。在研究的过程期间，患者保持在他们的私人医师的看护下。
将合格的患者随机分配至对照组和人源化抗CD3抗体(N297Q)(包含h-mab2 VH-8和h-mab2 VL-6)治疗组。随机化之后，抽取血液样品以确立基线HA1c水平，确立了对MMTT的治疗前C肽应答，并执行IGTT的治疗前FPIR。两组中的患者住院接受人源化抗CD3单克隆抗体(N297Q)或安慰剂的6天疗程的治疗。以以下剂量静脉施用抗体：第1天的17μg/m2、第2天的34.3μg/m2、第3天的69μg/m2、第4天的137.6μg/m2和第5和6天的275.3μg/m2。可选地，可以以下剂量静脉施用抗体：第1天的1.6μg/kg/天、第2天的3.2μg/kg/天、第3天的6.5μg/kg/天、第4天的13μg/kg/天、和第5至14天的26μg/kg/天。在剂量渐增研究中，治疗可以是，例如，第1天的1.42μg/kg/天、第2天的5.7μg/kg/天、第3天的11μg/kg/天、第4天的26μg/kg/天、和第5至14天的45.4μg/kg/天。在随后的研究中，改变治疗以增加剂量和/或减少治疗的时间进程。例如，在随后的研究中，可以向患者施用4天的治疗：第1天的6.4μg/kg/天、第2天的13μg/kg/天、和第3和第4天的26μg/kg/天；在另外的剂量逐步增加的研究中，治疗可以是第1天的8μg/kg/天、第2天的16μg/kg/天、和第3和第4天的32μg/kg/天。
在初步研究期间，在治疗的前3天，通过缓慢IV输注经过20小时施用抗体剂量以监测不良反应。随后的研究将减少施用的时间和/或将剂量分为2至4个等份作为弹丸式注射(bolus injection)施用，经12小时的疗程均匀分布。对照组中的患者经受代谢和免疫测试但不接受单克隆抗体。整个研究期间，监测患者的抗CD3单克隆抗体(N297Q)的免疫抑制效果。
治疗之后的18个月监测患者。在损害的葡萄糖耐受性的情况下每6个月确定β-细胞功能，且在正常葡萄糖耐受性的情况下每12个月确定β-细胞功能。在整个研究持续期间，允许患者进行正常的饮食，并保持在他们的私人医师的看护下。以6个月的间隔重复免疫分析。将根据他们的私人医师的指导给予患者胰岛素治疗。
将根据通过放射免疫分析测量的C肽水平的变化分析β-细胞的功能。抽取用于基线C肽和葡萄糖的样品之后，给予患者混合餐。在15、30、60、90、120、150、180、210和240min之后，测量抽取的样品中的C肽水平。将对混合餐耐受性测试(MMTT)的C肽应答表示为总的应答曲线下面积(AUC)。如果应答与研究起始时的应答相差超过7.5％，那么应答的变化被认为已发生。治疗后的6个月、9个月、12个月、15个月及18个月连续监测患者的对MMTT的C肽应答。可选地，通过IGTT的FPIR评价β-细胞功能。使用单碘化(monoiodinated)的酪氨酸A14标记的胰岛素(Amersham Pharmacia)通过修改的双抗体放射免疫分析法测量血清胰岛素水平。将FPIR计算为葡萄糖负荷(glucose load)(0.5g/kg)之后1分钟和3分钟的胰岛素水平的和。通过胶乳凝集抑制测试测量糖基化的血红蛋白水平。
免疫监测：用本领域已知的放射结合分析测量针对GAD65、IA2/ICA512和胰岛素的自身抗体的水平(例如,Woo等人，2000,J.Immunol Methods 244:91-103)。在PCR扩增之后通过外显子2多态性的直接测序执行HLA-DQA和HLA-DQB的基因分型。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测量单克隆抗体的施用之后血清中细胞因子的水平。通过使用结合抗CD3(N297Q)的平板(plate bound anti-CD3(N297Q))的ELISA分析或通过测量抗CD3-FITC与TCR的CD3链的结合的阻断的流式细胞术监测抗个体基因型抗体的产生。
统计分析：将对残存的β细胞功能、自身抗体水平、细胞因子水平和糖基化的血红蛋白水平进行数据分析。在药物施用之前和之后，将执行χ2分析以测试药物治疗的效果。将用Mann-Whitney U测试作出对照组和治疗组之间的比较。
实施例11
B7H3和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体介导有效的再定向T细胞杀死
制备了B7H3抗原和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体。在肿瘤细胞系中，B7H3已被免疫组织学检测出(Chapoval,A.等人(2001)“B7-H3:A CostimulatoryMolecule For T Cell Activation and IFN-γProduction,”Nature Immunol.2:269–274；Saatian,B.等人(2004)“Expression Of Genes For B7-H3 And Other T CellLigands By Nasal Epithelial Cells During Differentiation And Activation,”Amer.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.287:L217–L225；Castriconi等人(2004)“Identification Of 4Ig-B7-H3 As A Neuroblastoma-Associated Molecule ThatExerts A Protective Role From An NK Cell-Mediated Lysis,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)101(34):12640-12645)；Sun,M.等人(2002)“Characterization of Mouse andHuman B7-H3 Genes,”J.Immunol.168:6294-6297)。一些独立的研究已显示人恶性肿瘤细胞呈现B7-H3蛋白的表达的显著增加及该增加的表达与增加的疾病严重程度相关(Zang,X.等人(2007)“The B7 Family And Cancer Therapy:Costimulation And Coinhibition,”Clin.Cancer Res.13:5271-5279)，表明B7-H3被肿瘤利用作为免疫逃避的途径(Hofmeyer,K.等人(2008)“The Contrasting Role Of B7-H3,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)105(30):10277-10278)。
此类DARTTM双抗体的CD3结合部分主要由以上描述的人源化抗CD3 mAb2的轻链和重链可变区(h-mAb2 VH-8和h-mAb2 VL-6)组成。此类DARTTM双抗体的B7H3部分主要由hBRCA84D-2轻链和hBRCA84D-2重链(SEQ ID NO.64-65)组成。
此类DARTTM双抗体具有将T细胞(通过此T细胞与CD3结合DARTTM双抗体的CD3结合部分的结合)定位至肿瘤细胞的位置(通过此癌细胞与DARTTM双抗体的B7H3结合部分的结合)的能力。随后，通过“再定向”杀死的过程，定位的T细胞可介导杀死肿瘤细胞。
为了证明此类DARTTM双抗体介导此再定向杀死癌细胞的能力，将不同浓度的DARTTM双抗体与靶肿瘤细胞(A498肿瘤细胞、RECA905021E肿瘤细胞)和效应静息PBMC(E:T比＝30:1)一起孵育并确定了细胞毒性(LDH分析)。具有CD3(h-mAb2)和荧光素(抗体4420)双特异性的DARTTM双抗体(4420-h-mAb2)被用作对照。
4420-h-mAb2 DARTTM双抗体
4420-h-mAb2 DARTTM双抗体的4420VL-hXR32VH-E卷曲的氨基酸序列(4420VL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:68)：
4420-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-4420VH-K卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和4420VH序列之间及4420VH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ ID NO:69)：
这些研究的结果(图11A-11B)显示了B7H3 x CD3 DARTTM双抗体介导再定向杀死表达B7H3的肿瘤细胞的能力。
实施例12
A33和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体介导有效的再定向T细胞杀死
制备了A33抗原和CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体(“A33-h-mAb2”DARTTM双抗体)。A33是在正常人结肠和小肠上皮及>95％的人结肠癌中表达的膜抗原(Heath,J.K.等人(1997)“The Human A33 Antigen Is A Transmembrane GlycoproteinAnd A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily,”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)94:469-474)。
此类DARTTM双抗体具有将T细胞(通过此T细胞与CD3结合DARTTM双抗体的CD3结合部分的结合)定位至肿瘤细胞的位置(通过此癌细胞与DARTTM双抗体的A33结合部分的结合)的能力。随后，通过“再定向”杀死的过程，定位的T细胞可介导杀死肿瘤细胞。
此类DARTTM双抗体的CD3结合部分主要由以上描述的人源化mAb2的轻链和重链可变区(h-mAb2 VH-8和h-mAb2 VL-6)组成。此类DARTTM双抗体的A33部分主要由抗体RECA47组成。
A33-h-mAb2 DARTTM双抗体
A33-h-mAb2 DARTTM双抗体的RECA47VL-hXR32VH-K卷曲的氨基酸序列(RECA47VL序列和hXR32VH序列之间及hXR32VH序列和K卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ IDNO:70)：
A33-h-mAb2 DARTTM双抗体的hXR32VL-RECA47VH-E卷曲的氨基酸序列(hXR32VL序列和RECA47VH序列之间及RECA47VH序列和E卷曲序列之间的连接体用下划线标出)(SEQ IDNO:71)：
为了证明此类DARTTM双抗体介导此再定向杀死癌细胞的能力，将不同浓度的DARTTM双抗体与靶肿瘤细胞(Colo205肿瘤细胞、RECA905021E肿瘤细胞)和效应静息PBMC(E:T比＝30:1)一起孵育并确定了细胞毒性(LDH分析)。这些研究的结果(图12A-12E)显示了A33 x CD3 DARTTM双抗体介导再定向杀死表达A33的肿瘤细胞的能力。
实施例13
CD3特异性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体引起等同于其他人特异性CD3双抗体引起的再定向T细胞介导的杀死
为了进一步评价本发明的CD3特异性双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体，将以上描述的CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体引起再定向T细胞介导的杀死的能力与Moore,P.A.等人(2011)(“Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve OptimalRedirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma,”Blood 117(17):4542-4551)的CD19x CD3 DART双抗体引起再定向T细胞介导的杀死的能力比较。CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体呈现了对人及非人CD3的特异性；Moore,P.A.等人(2011)的CD19 x CD3 DART双抗体仅呈现对人CD3的特异性。
因此，在DARTTM双抗体和静息外周血单核细胞(PBMC)(E:T＝30:1)的存在下孵育Raji人B细胞淋巴瘤细胞(见，Drexler,H.G.等人(1998)“History And Classification OfHuman Leukemia-Lymphoma Cell Lines,”Leuk.Lymphoma 31(3-4):305-316；Arndt,R.(1984)“Demonstration Of C3-Binding Circulating Immune Complexes Using Raji,Conglutinin And Anti-C3 Assays--A Critical Review,”Immun.Infekt.12(1):3-11)或JeKo-1人套细胞淋巴瘤细胞(Salaverria,I.等人(2006)“Mantle Cell Lymphoma:FromPathology And Molecular Pathogenesis To New Therapeutic Perspectives,”Haematologica91:11-16；Jeon,H.J.等人(1998)“Establishment And CharacterizationOf A Mantle Cell Lymphoma Cell Line,”Br.J.Haematol.102(5):1323-1326)。该实验的结果(图13A和13B)显示了本发明的CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体引起与使用人CD3特异性的CD19 x CD3 DART双抗体观察到的等同的再定向T细胞介导的杀死。因此，对非人CD3同系物特异性的扩展未损害DARTTM双抗体介导再定向杀死的能力。
实施例14
由CD3特异性的食蟹猴交叉反应性的双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体的再定向细胞溶解
研究了以上描述的CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体在人或食蟹猴存在下引起再定向T细胞介导的杀死的能力。
在人和食蟹猴T细胞(E:T比＝30:1)和以上描述的CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体或其CD3序列源自抗体FN-18的CD19 x CD3 DART双抗体的存在下孵育HT-29人结肠癌细胞(Marchis-Mouren,G.等人(1988)“HT 29,A Model Cell Line:Stimulation By TheVasoactive Intestinal Peptide(VIP)；VIP Receptor Structure And Metabolism,”Biochimie 70(5):663-671)；Fogh,J.等人(1975)In:J.Fogh(编者),HUMAN TUMOR CELLSIN VITRO,New York:Plenum Press.1975)。抗体FN-18仅呈现对食蟹猴CD3的特异性(Nooij,F.J.等人(1986)“Differentiation Antigens On Rhesus MonkeyLymphocytes.I.Identification Of T Cells Bearing CD3 And CD8,And Of A SubsetOf CD8-Bearing Cells,”Eur.J.Immunol.16(8):975-979；Meng,G.等人(1998)“TheEffect Of Anti-CD3-Immunotoxin On T Lymphocyte Function in vitro,”Transpl.Immunol.6(1):53-59)。测量了所得细胞毒性百分数作为双抗体浓度的函数。结果(图14A和14B)显示了CD19-h-mAb2 DARTTM双抗体能够在人或非人T细胞效应细胞的存在下介导细胞溶解。相比之下，FN-18双抗体仅在食蟹猴T细胞的存在下才能够介导细胞溶解。
实施例15
双亲和再靶向试剂(DARTTM)双抗体要求靶细胞接合
为了证明观察到的由本发明CD3 DARTTM双抗体介导的再定向杀死是特异性的，确定了在靶细胞的存在和不存在下的杀死的程度。
在以上描述的ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体、ERBITUXTM-T-细胞受体DARTTM双抗体(能够与EGFR(表皮生长因子受体)和T细胞受体结合)或ERBITUXTM-FN18 CD3 DARTTM双抗体(能够与EGFR及与食蟹猴CD3结合)的存在下孵育人PMBC。在A498肾癌靶细胞的存在和不存在下进行孵育(Giard,D.J.等人(1973)“in vitro Cultivation Of Human Tumors:Establishment Of Cell Lines Derived From A Series Of Solid Tumors,”J.Natl.Cancer Inst.51:1417-1423；Fogh,J.(1978)“Cultivation,Characterization,And Identification Of Human Tumor Cells With Emphasis On Kidney,Testis AndBladder Tumors,”Natl.Cancer Inst.Monogr.49:5-9)。
CD69糖蛋白是刺激之后在大多数造血谱系的细胞，包括嗜中性粒细胞上表达的T和B淋巴细胞的早期活化抗原(Atzenia,F.等人(2002)“Induction Of CD69ActivationMolecule On Human Neutrophils by GM-CSF,IFN-γ,and IFN-α,”CellularImmunol.220(1):20-29)。因此测量了CD69平均荧光强度(MFI)(作为双抗体浓度的函数)作为用于评价免疫系统活化的方法(见，例如，Ampel,N.M.等人(2002)“In Vitro Whole-Blood Analysis of Cellular Immunity in Patients with ActiveCoccidioidomycosis by Using the Antigen Preparation T27K,”Clinical DiagnosticLaboratory Immunology 9(5):1039-1043)。
结果(图15A和15B)显示了免疫系统活化(如通过CD69的MFI测量的)仅在CD4+或CD8+ T细胞与本发明的ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体或ERBITUXTM-T-细胞受体DARTTM双抗体(能够与EGFR和T细胞受体结合)一起孵育时才增加。ERBITUXTM-FN18 CD3 DARTTM双抗体(能够与EGFR及与食蟹猴CD3结合)未能够引起CD69 MFI的增加。
实施例16
由人源化食蟹猴/人交叉反应的DARTTM双抗体再定向的杀死
为了进一步证明本发明的DARTTM双抗体介导再定向杀死的能力，A498肾癌靶细胞或A431表皮样癌细胞(Lee,C.M.等人(2010)“The Distribution Of The TherapeuticMonoclonal Antibodies Cetuximab And Trastuzumab Within Solid Tumors,”BMCCancer 10:255；第1-11页；Bryant,J.A.等人(2004)“EGF Activates Intracellular AndIntercellular Calcium Signaling By Distinct Pathways In Tumor Cells,”CancerBiol.Ther.3(12):1243-1249)并确定在PMBC效应细胞(E:T＝30:1)的存在下由不同的DARTTM双抗体介导的再定向杀死的程度。
在ERBITUXTM-h-mAb2 DARTTM双抗体、ERBITUXTM-m-mAb2 DARTTM双抗体或4420-h-mAb2 DARTTM双抗体(阴性对照)或对照第二抗体的存在下孵育细胞。通过测量MFI确定了与靶细胞的结合。通过测量％细胞毒性评价再定向杀死。
该研究的结果在图16A-16D中显示。发现具有对CD3和EGFR特异性的双抗体能够与A498或A431细胞结合(分别地，图16A和16C)，并能够介导再定向杀死这些细胞(分别地，图16B和16D)。
本说明书中提及的所有出版物和专利在本文通过引用被并入，其程度如同每一个单独的出版物或专利申请明确地并单独地指出通过引用被整体并入的相同的程度。尽管已联合其特定实施方案描述了本发明，将被理解的是其能够具有另外的修改，且本申请预期覆盖总体根据本发明的原理并包括诸如落入本发明所属的领域内已知的或惯例内的和诸如可被应用至上文中阐述的基本特征的从本公开内容的此类偏离的本发明的任何变化形式、用途或改编。
序列表
<110> 宏观基因有限公司
菱·黄
莱斯利·S·约翰逊
<120> 能够与人和非人CD3结合的CD3结合分子
<130> 1301.0075I
<150> US 61/488,716
<151> 2011-05-21
<150> US 61/530,353
<151> 2011-09-01
<160> 88
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 1
Gln Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Phe Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Thr Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Arg
100 105
<210> 2
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 2
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atgacctgct ccgcctcctc ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagtccggc 120
acctccccca agcggtggat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gcccgccaga 180
ttctctggct ccggctccgg caccagctac tccctgacca tctcctccat ggaaaccgag 240
gacgccgcca cctactactg ccagcagtgg tcccggaacc cccctacctt cggcggaggc 300
accaagctgc agatcaccag a 321
<210> 3
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 3
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Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser
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Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
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Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Ser Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
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<213> 小鼠
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Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
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Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
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gaggtgaagc tgctggaaag cggcggagga ctggtgcagc caaagggatc actgaaactg 60
tcctgcgccg cctccggctt cacctttaac acatacgcta tgaattgggt gcgacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtggcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actctgtgaa ggatagattc acaatcagtc gcgacgattc ccagagcatt 240
ctgtatctgc agatgaacaa tctgaaaact gaagacaccg ccatgtacta ttgtgtgcgg 300
cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg 360
gtgactgtgt cttcc 375
<210> 9
<211> 218
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 9
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
35 40 45
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
100 105 110
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
130 135 140
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
145 150 155 160
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
165 170 175
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
180 185 190
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
195 200 205
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 10
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb1可变轻链变体1的氨基酸序列
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体1的多核苷酸序列
<400> 11
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgaca 60
atcacctgtt ccgccagctc ctccgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagcccggc 120
aaggccccca agcggctgat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gccctccaga 180
ttctccggct ctggctccgg caccgagttc accctgacca tctccagcct gcagcccgag 240
gacttcgcca cctactactg ccagcagtgg tcccggaacc cccctacctt cggcggaggc 300
accaaggtgg aaatcaag 318
<210> 12
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb1可变轻链变体2(mAb1 LC-2)的氨基酸序列
<400> 12
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Phe Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Ser Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体1的多核苷酸序列
<400> 13
gacgtggtga tgacccagtc tcctgccatc atgagtgctt tcccaggcga gaaagtgacc 60
attacatgct ctgcttccag ctctgtgtcc tacatgaact ggtatcagca gaagccaggg 120
aaagcaccca agaggtggat ctacgactcc tccaagctgg cctccggcgt gccaagccgg 180
ttctctggta gtggctcagg aaccgagttt actctgacca tttccagcct gcagcctgaa 240
gatttcgcaa catactattg tcagcagtgg tccagaaatc cccctacatt tggcggaggg 300
actaaagtgg aaatcaag 318
<210> 14
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb1可变重链的氨基酸序列
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Ser
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ala Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Pro Gln Val His Tyr Asp Tyr Asn Gly Phe Pro Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 15
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链链的多核苷酸序列
<400> 15
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc cggtccacca tgcactgggt gcgacaggcc 120
ccaggccagg gactggaatg gatcggctac atcaacccct ccagcgccta caccaactac 180
aaccagaaat tcaaggaccg cgtgaccatc accgccgaca agtccaccag caccgcctac 240
atggaactgt ctagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ctccccccag 300
gtgcactacg actacaacgg cttcccctac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360
tcc 363
<210> 16
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体1(h-mAb2 VL-1)的氨基酸序列
<400> 16
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 17
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体1(h-mAb2 VL-1)的多核苷酸序列
<400> 17
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 18
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体2(h-mAb2 VL-2)的氨基酸序列
<400> 18
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 19
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体2(h-mAb2 VL-2)的多核苷酸序列
<400> 19
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 20
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体3(h-mAb2 VL-3)的氨基酸序列
<400> 20
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Phe Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 21
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体3(h-mAb2 VL-3)的多核苷酸序列
<400> 21
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccaggag 120
aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 22
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体4(h-mAb2 VL-4)的氨基酸序列
<400> 22
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 23
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体4(h-mAb2 VL-4)的多核苷酸序列
<400> 23
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 24
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体5(h-mAb2 VL-5)的氨基酸序列
<400> 24
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 25
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体5(h-mAb2 VL-2)的多核苷酸序列
<400> 25
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag 120
aagccaggac aggcaccaag gaccctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 26
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体6(h-mAb2 VL-6)的氨基酸序列
<400> 26
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 27
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体6(h-mAb2 VL-6)的多核苷酸序列
<400> 27
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体7(h-mAb2 VL-7)的氨基酸序列
<400> 28
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Phe Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 29
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体7(h-mAb2 VL-7)的多核苷酸序列
<400> 29
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg gttccaggag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 30
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体8(h-mAb2 VL-8)的氨基酸序列
<400> 30
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 31
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体8(h-mAb2 VL-8)的多核苷酸序列
<400> 31
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag 120
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 32
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体9(h-mAb2 VL-9)的氨基酸序列
<400> 32
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 33
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2可变轻链变体9(h-mAb2 VL-9)的多核苷酸序列
<400> 33
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcaggag 120
aagccaggac aggcattcag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 34
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变链变体10 (h-mAb2 VL-10)的氨基酸序列
<400> 34
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 35
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变轻链变体10 (h-mAb2 VL-10)的多核苷酸序列
<400> 35
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60
acatgcagat ccagcactgg agcagtgact acctctaact acgctaattg gttccagcag 120
aagcccgacc acctgttcac tgggctgatc ggcggaacca acaaaagggc tccctggacc 180
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga 330
<210> 36
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体1(h-mAb2 VH-1)的氨基酸序列
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 37
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体1 (h-mAb2 VH-1)的多核苷酸序列
<400> 37
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 38
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体2 (h-mAb2 VH-2)的氨基酸序列
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 39
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体2 (h-mAb2 VH-2)的多核苷酸序列
<400> 39
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 40
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体3 (h-mAb2 VH-3)的氨基酸序列
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 41
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体3 (h-mAb2 VH-3)的多核苷酸序列
<400> 41
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 42
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体4 (h-mAb2 VH-4)的氨基酸序列
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 43
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体4 (h-mAb2 VH-4)的多核苷酸序列
<400> 43
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 44
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体5 (h-mAb2 VH-5)的氨基酸序列
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 45
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体5 (h-mAb2 VH-5)的多核苷酸序列
<400> 45
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgcaaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 46
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体6 (h-mAb2 VH-6)的氨基酸序列
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 47
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体6 (h-mAb2 VH-6)的多核苷酸序列
<400> 47
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt cacctttaac acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtgggcagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 48
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体7 (h-mAb2 VH-7)的氨基酸序列
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 49
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体7 (h-mAb2 VH-7)的多核苷酸序列
<400> 49
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caggtggcag cctgcgactg 60
tcttgcgccg ctagtggctt caccttttct acatacgcca tgaactgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg ggctggagtg ggtggccagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actcagtgaa ggatagattc acaatttccc gcgacgattc taaaaacagt 240
ctgtatctgc agatgaactc cctgaagact gaagacaccg ccgtgtacta ttgtgtgaga 300
cacggaaact tcggcaactc ctacgtgtcc tggtttgcat attggggtca gggcacactg 360
gtgaccgtgt ccagc 375
<210> 50
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2重链变体8 (h-mAb2 VH-8)的氨基酸序列
<400> 50
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 51
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体8 (h-mAb2 VH-8)的多核苷酸序列
<400> 51
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttgcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga 300
cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg 360
gtgactgtgt cttcc 375
<210> 52
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2可变重链变体QV (h-mAb2 VL-QV)的氨基酸序列
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 53
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码人源化mAb2 可变重链变体QV (h-mAb2 VL-QV)的多核苷酸序列
<400> 53
gaggtgcagc tggtggaaag cggcggagga ctggtgcagc caaagggatc actgaaactg 60
tcctgcgccg cctccggctt cacctttaac acatacgcta tgaattgggt gcgacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtggcaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
tactatgccg actctgtgaa ggatagattc acaatcagtc gcgacgattc ccagagcatt 240
ctgtatctgc agatgaacaa tctgaaaact gaagacaccg ccatgtacta ttgtgtgcgg 300
cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg 360
gtgactgtgt cttcc 375
<210> 54
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hVH-6L 的氨基酸序列
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Asn Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Glu Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 55
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hVH-8L 的氨基酸序列
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Asn Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Glu Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 56
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VH-8 di-1 的氨基酸序列
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 57
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VH-8 di-2 的氨基酸序列
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 58
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-Her-2VH E 卷曲的氨基酸序列
<400> 58
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr
165 170 175
Arg Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr
180 185 190
Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Val Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala
210 215 220
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
225 230 235 240
Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
245 250 255
Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 59
<211> 276
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Her2VL-hXR32VH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 59
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Asn Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Ala Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Gly Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
115 120 125
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
130 135 140
Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
145 150 155 160
Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala
165 170 175
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
180 185 190
Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu
195 200 205
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser
210 215 220
Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu
245 250 255
Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala
260 265 270
Ala Leu Glu Lys
275
<210> 60
<211> 278
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD19VL-hXR32VH-E 卷曲的氨基酸序列
<400> 60
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
130 135 140
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
165 170 175
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
180 185 190
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
195 200 205
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
210 215 220
Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu
260 265 270
Val Ala Ala Leu Glu Lys
275
<210> 61
<211> 276
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-CD19VH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 61
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu
180 185 190
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp
195 200 205
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg
210 215 220
Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys
245 250 255
Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala
260 265 270
Ala Leu Lys Glu
275
<210> 62
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-EGFRVH-E 卷曲的氨基酸序列
<400> 62
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Ser Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly
130 135 140
Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp
165 170 175
Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser
180 185 190
Lys Ser Gln Val Phe Phe Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr
195 200 205
Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe
210 215 220
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
260 265 270
<210> 63
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EGFRVL-hXR32VH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 63
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
115 120 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
130 135 140
Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145 150 155 160
Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
180 185 190
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val
210 215 220
Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala
245 250 255
Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
260 265 270
Lys Glu
<210> 64
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hBRCA69DVL-hXR32VH-E 卷曲的氨基酸序列
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
115 120 125
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
130 135 140
Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
145 150 155 160
Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
180 185 190
Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
210 215 220
Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val
245 250 255
Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
260 265 270
Leu Glu Lys
275
<210> 65
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-hBRCA69DVH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 65
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
115 120 125
Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr
165 170 175
Arg Tyr Thr Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Ile Pro Arg Leu Trp Tyr
210 215 220
Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
225 230 235 240
Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
245 250 255
Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 66
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hBRCA84DVL-hXR32VH-E 卷曲的氨基酸序列
<400> 66
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
115 120 125
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
130 135 140
Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
145 150 155 160
Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
180 185 190
Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
210 215 220
Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val
245 250 255
Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala
260 265 270
Leu Glu Lys
275
<210> 67
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-hBRCA84DVH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 67
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile
165 170 175
Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
180 185 190
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp
195 200 205
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Gly Arg Glu Asn Ile Tyr Tyr Gly
210 215 220
Ser Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala
245 250 255
Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
260 265 270
Lys Glu
<210> 68
<211> 279
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4420VL-hXR32VH-E 卷曲的氨基酸序列
<400> 68
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
130 135 140
Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala
145 150 155 160
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn
165 170 175
Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe
210 215 220
Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu
245 250 255
Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
260 265 270
Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
275
<210> 69
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-4420VH-K 卷曲的氨基酸序列
<400> 69
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly
115 120 125
Leu Val Gln Pro Gly Arg Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly
130 135 140
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu
145 150 155 160
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr
165 170 175
Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
180 185 190
Asp Asp Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val
195 200 205
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp
210 215 220
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly
225 230 235 240
Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
245 250 255
Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu
260 265 270
<210> 70
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> RECA47VL-hXR32VH-K卷曲的氨基酸序列
<400> 70
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Gly Gly Gly Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
115 120 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
130 135 140
Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145 150 155 160
Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
180 185 190
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val
210 215 220
Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Gly Gly Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala
245 250 255
Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu
260 265 270
Lys Glu
<210> 71
<211> 271
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hXR32VL-RECA47VH-E卷曲的氨基酸序列
<400> 71
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu
115 120 125
Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
130 135 140
Tyr Thr Phe Ser Gly Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly
145 150 155 160
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr
165 170 175
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys
180 185 190
Ser Ser Thr Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp
195 200 205
Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe
210 215 220
Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu
245 250 255
Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys
260 265 270
<210> 72
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hVH-6M 的氨基酸序列
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 73
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码hVH-6M可变重链的多核苷酸序列
<400> 73
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggaagg atcaggtcca agtacaacaa ttatgcaacc 180
gagtatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga 300
cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg 360
gtgactgtgt cttcc 375
<210> 74
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hVH-8M 的氨基酸序列
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Asn Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 75
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码hVH-8M可变重链的多核苷酸序列
<400> 75
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaac acatacgcta tgaattgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttgcaagg atcaggaaca agtacaacaa ttatgcaacc 180
gagtatgccg actctgtgaa ggatagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga 300
cacggtaact tcggcaattc ttacgtgtct tggtttgctt attggggaca ggggacactg 360
gtgactgtgt cttcc 375
<210> 76
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"a" (I51T Y52cA)的氨基酸序列
<400> 76
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Ala Ser Lys Ala Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 77
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"b" (I51T N54S)的氨基酸序列
<400> 77
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 78
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"c" (I51T A56T)的氨基酸序列
<400> 78
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 79
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化 mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"d" (I51T Y52cA N54S)的氨基酸序列
<400> 79
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 80
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"e" (I51T N54S A56T)的氨基酸序列
<400> 80
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 81
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2 鼠单克隆抗体可变重链的变体"f" (I51T Y52cA N54S A56T)的氨基酸序
列
<400> 81
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 82
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化 mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"g" (I51T D61A)的氨基酸序列
<400> 82
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 83
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"h" (I51T D65G)的氨基酸序列
<400> 83
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 84
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2 鼠单克隆抗体可变重链的变体"i" (I51T Y52cA N54S D61A)的氨基酸序
列
<400> 84
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 85
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化 mAb2 鼠单克隆抗体可变重链的变体"j" (I51T Y52cA N54S D65G)的氨基酸序
列
<400> 85
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 86
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2鼠单克隆抗体可变重链的变体"k" (I51T Y52cA N54S D61A D65G)的氨基酸序列
<400> 86
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 87
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2 鼠单克隆抗体可变重链的变体"2k" (I51T Y52cA N54S D61AD65G
(VH8-A49G V93A))的氨基酸序列
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 88
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化mAb2 鼠单克隆抗体可变重链的变体"5k" (I51T Y52cA N54S D61AD65G
(VH8-V93A))的氨基酸序列
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Thr Arg Ser Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125

Claims (41)

1.一种CD3结合分子，其包含抗体的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段包含抗体CD3特异性VL结构域和抗体CD3特异性VH结构域，其中所述CD3特异性VL结构域和所述CD3特异性VH结构域形成能够与人CD3的表位以及与非人哺乳动物的CD3的表位免疫特异性结合的抗原结合结构域，其中：
(I)所述CD3特异性VL结构域包含SEQ ID NO:5的三个互补决定区(CDR)；和
(II)所述CD3特异性VH结构域包含SEQ ID NO:7的三个互补决定区(CDR)，所述互补决定区被修饰以包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸取代：
(i)I51T；
(ii)S52aN；
(iii)Y52cA；
(iv)N54S；
(v)A56T；
(vi)Y58E；
(vii)D61A；和
(viii)D65G；
其中所述编号是根据Kabat编号方案。
2.权利要求1所述的CD3结合分子，其中所述CD3特异性VL结构域选自由以下组成的组：h-mab2VL-4(SEQ ID NO:22)、h-mab2VL-6(SEQ ID NO:26)、h-mab2VL-7(SEQ ID NO:28)、h-mab2VL-8(SEQ ID NO:30)、h-mab2VL-9(SEQ ID NO:32)和h-mab2VL-10(SEQ ID NO:34)。
3.权利要求1所述的CD3结合分子，其中所述CD3特异性VH结构域选自由以下组成的组：h-mab2VH-6L(SEQ ID NO:54)、h-mab2VH-8L(SEQ ID NO:55)、h-mab2VH-8di-1(SEQ ID NO:56)、h-mab2VH-8di-2(SEQ ID NO:57)、h-mab2VH-6M(SEQ ID NO:72)、h-mab2VH-8M(SEQ IDNO:74)、h-mab2VH-2k(SEQ ID NO:87)或h-mab2VH-5k(SEQ ID NO:88)。
4.权利要求1所述的CD3结合分子，其中所述CD3特异性VH结构域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列由于包含所述氨基酸取代而不同于h-mab2VH-1(SEQ ID NO:36)、h-mab2VH-2(SEQ ID NO:38)、h-mab2VH-3(SEQ ID NO:40)、h-mab2VH-4(SEQ ID NO:42)、h-mab2VH-5(SEQ ID NO:44)、h-mab2VH-6(SEQ ID NO:46)、h-mab2VH-7(SEQ ID NO:48)和h-mab2VH-8(SEQ ID NO:50)的氨基酸序列。
5.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子是抗体。
6.权利要求5所述的CD3结合分子，其中所述抗体：
(A)缺少Fc区；或
(B)包含Fc区，所述Fc区：
(i)缺乏效应子功能；或
(ii)具有减弱的效应子功能；或
(iii)损害所述抗体的所述Fc区与Fc受体结合的能力；
其中效应子功能的所述缺乏、效应子功能的所述减弱和结合能力的所述损害是相对于野生型Fc受体的。
7.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子是包含第一多肽链和第二多肽链的CD3结合双抗体，所述链与彼此共价结合，其中：
(I)所述第一多肽链包含氨基(N)末端和羧基(C)末端，并且从N末端至C末端包含：
(i)结构域(A)，其包含所述CD3特异性VL结构域；
(ii)结构域(B)，其包含第二免疫球蛋白的重链可变结构域(VH2)的结合区；和
(iii)结构域(C)；
其中所述结构域(A)和所述结构域(B)不与彼此缔合形成表位结合位点；
和
(II)所述第二多肽链包含氨基(N)末端和羧基(C)末端，并且从N末端至C末端包含：
(i)结构域(D)，其包含所述第二免疫球蛋白的轻链可变结构域(VL2)的结合区；
(ii)结构域(E)，其包含所述CD3特异性VH结构域；和
(iii)结构域(F)；
其中所述结构域(D)和所述结构域(E)不与彼此缔合形成表位结合位点；和
其中：
(1)所述结构域(A)和所述结构域(E)缔合以形成能够与人CD3及与非人哺乳动物的CD3二者免疫特异性结合的所述抗原结合结构域；
(2)所述结构域(B)和所述结构域(D)缔合以形成与第二表位免疫特异性结合的结合位点，所述第二表位不同于由所述结构域(A)和所述结构域(E)的所述缔合形成的所述抗原结合结构域结合的所述CD3表位；和
(3)所述结构域(C)和所述结构域(F)共价缔合在一起。
8.权利要求7所述的CD3结合分子，其中所述第二表位不是CD3的表位。
9.权利要求7所述的CD3结合分子，其中所述第二表位是CD3的表位，其不同于由所述结构域(A)和所述结构域(E)的所述缔合形成的所述抗原结合结构域结合的所述CD3表位。
10.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其被人源化。
11.权利要求5所述的CD3结合分子，其被人源化。
12.权利要求7所述的CD3结合分子，其被人源化。
13.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其能够与CD3及与荧光素免疫特异性结合。
14.权利要求7所述的CD3结合分子，其能够与CD3及与荧光素免疫特异性结合。
15.权利要求10所述的CD3结合分子，其能够与CD3及与荧光素免疫特异性结合。
16.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其能够与以下两项免疫特异性结合：(i)CD3和(ii)(a)肿瘤抗原、或(ii)(b)细胞表面抗原、受体或受体配体。
17.权利要求7所述的CD3结合分子，其能够与以下两项免疫特异性结合：(i)CD3和(ii)(a)肿瘤抗原、或(ii)(b)细胞表面抗原、受体或受体配体。
18.权利要求10所述的CD3结合分子，其能够与以下两项免疫特异性结合：(i)CD3和(ii)(a)肿瘤抗原、或(ii)(b)细胞表面抗原、受体或受体配体。
19.权利要求16所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原免疫特异性结合，其中所述肿瘤细胞是来自选自由以下组成的组的癌症的肿瘤细胞：乳腺癌、前列腺癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、胃癌(stomach cancer)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。
20.权利要求17所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原免疫特异性结合，其中所述肿瘤细胞是来自选自由以下组成的组的癌症的肿瘤细胞：乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。
21.权利要求18所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与肿瘤细胞上表达的肿瘤抗原免疫特异性结合，其中所述肿瘤细胞是来自选自由以下组成的组的癌症的肿瘤细胞：乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、口腔癌、鼻咽癌、食道癌、喉癌、骨癌、皮肤癌、黑色素瘤、子宫癌、睾丸癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、胶质母细胞瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。
22.权利要求16所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与细胞表面抗原、受体或受体配体免疫特异性结合，其中所述细胞表面抗原、受体或受体配体是HER2/neu、B7-H3、CD20、PSMA、IGF-1R.、Ep-CAM，或是参与在适应性免疫应答中导致T细胞或B细胞活化的T细胞-B细胞缔合的分子。
23.权利要求17所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与细胞表面抗原、受体或受体配体免疫特异性结合，其中所述细胞表面抗原、受体或受体配体是HER2/neu、B7-H3、CD20、PSMA、IGF-1R.、Ep-CAM，或是参与在适应性免疫应答中导致T细胞或B细胞活化的T细胞-B细胞缔合的分子。
24.权利要求18所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与细胞表面抗原、受体或受体配体免疫特异性结合，其中所述细胞表面抗原、受体或受体配体是HER2/neu、B7-H3、CD20、PSMA、IGF-1R.、Ep-CAM，或是参与在适应性免疫应答中导致T细胞或B细胞活化的T细胞-B细胞缔合的分子。
25.权利要求22所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与参与所述T细胞-B细胞缔合的分子免疫特异性结合，并且参与所述T细胞-B细胞缔合的所述分子选自由以下组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD32B、CD38、CD40、CD79a、CD79b、CD80、CD86、LFA-I、LFA-3和CFA-I。
26.权利要求23所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与参与所述T细胞-B细胞缔合的分子免疫特异性结合，并且参与所述T细胞-B细胞缔合的所述分子选自由以下组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD32B、CD38、CD40、CD79a、CD79b、CD80、CD86、LFA-I、LFA-3和CFA-I。
27.权利要求24所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合分子能够与CD3及与参与所述T细胞-B细胞缔合的分子免疫特异性结合，并且参与所述T细胞-B细胞缔合的所述分子选自由以下组成的组：CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD32B、CD38、CD40、CD79a、CD79b、CD80、CD86、LFA-I、LFA-3和CFA-I。
28.权利要求7所述的CD3结合分子，其中：
(A)所述结构域(B)包含SEQ ID NO:65的氨基酸残基119-238；和
(B)所述结构域(D)包含SEQ ID NO:64的氨基酸残基1-107。
29.权利要求28所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合双抗体包含Fc结构域或其部分。
30.权利要求28所述的CD3结合分子，其中：
(A)所述第一多肽链另外包含E卷曲序列和所述第二多肽链另外包含K卷曲序列；或
(B)所述第一多肽链另外包含K卷曲序列和所述第二多肽链另外包含E卷曲序列；
其中所述E卷曲序列是SEQ ID NO:62的氨基酸残基244-271和所述K卷曲序列是SEQ IDNO:63的残基247-274。
31.权利要求7所述的CD3结合分子，其中：
(A)所述结构域(B)包含SEQ ID NO:67的氨基酸残基119-240；和
(B)所述结构域(D)包含SEQ ID NO:66的氨基酸残基1-107。
32.权利要求31所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合双抗体包含Fc结构域或其部分。
33.权利要求31所述的CD3结合分子，其中：
(A)所述第一多肽链另外包含E卷曲序列和所述第二多肽链另外包含K卷曲序列；或
(B)所述第一多肽链另外包含K卷曲序列和所述第二多肽链另外包含E卷曲序列；
其中所述E卷曲序列是SEQ ID NO:62的氨基酸残基244-271和所述K卷曲序列是SEQ IDNO:63的残基247-274。
34.权利要求7所述的CD3结合分子，其中所述CD3特异性VL结构域是h-mab2VL-6(SEQID NO:26)。
35.权利要求1-4任一项所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合双抗体包含Fc结构域或其部分。
36.权利要求7所述的CD3结合分子，其中所述CD3结合双抗体包含Fc结构域或其部分。
37.权利要求7所述的CD3结合分子，其中：
(A)所述第一多肽链另外包含E卷曲序列和所述第二多肽链另外包含K卷曲序列；或
(B)所述第一多肽链另外包含K卷曲序列和所述第二多肽链另外包含E卷曲序列；
其中所述E卷曲序列是SEQ ID NO:62的氨基酸残基244-271和所述K卷曲序列是SEQ IDNO:63的残基247-274。
38.一种药物组合物，其包含权利要求1-37任一项所述的CD3结合分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
39.权利要求38所述的药物组合物，其用于治疗癌症或自身免疫性疾病或炎性疾病。
40.权利要求39所述的药物组合物，其用于治疗选自由以下组成的组的自身免疫性疾病或炎性疾病：I型胰岛素依赖型糖尿病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、多发性硬化、炎性肠病、重症肌无力、乳糜泻、Sjogren综合征、格雷弗氏病、克罗恩病、自身免疫性肝炎、银屑病、银屑病关节炎、哮喘、过敏性鼻炎、来自器官移植的影响、或移植物抗宿主病(GVHD)。
41.权利要求40所述的药物组合物，其用于治疗I型胰岛素依赖型糖尿病。
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ZA (1) ZA201308602B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2024501653A (ja) * 2020-12-23 2024-01-15 ベイジン マブワークス バイオテック カンパニー リミテッド ヒト及びサルｃｄ３と結合する抗体及びその使用

Families Citing this family (222)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
DK2006381T3 (en) 2006-03-31 2016-02-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROCEDURE FOR REGULATING ANTIBODIES BLOOD PHARMACOKINETICS
DK2202245T3 (en) 2007-09-26 2016-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A method of modifying an antibody isoelectric point VIA amino acid substitution in CDR
UA121453C2 (uk) 2008-04-11 2020-06-10 Чугей Сейяку Кабусікі Кайся Спосіб одержання фармацевтичної композиції, яка містить антитіло
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
AU2011283694B2 (en) 2010-07-29 2017-04-13 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
KR102385507B1 (ko) 2010-11-30 2022-04-12 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복해서 결합하는 항원 결합 분자
AU2012245260B2 (en) 2011-04-22 2016-09-08 Aptevo Research And Development Llc Prostate-specific membrane antigen binding proteins and related compositions and methods
ES2732213T3 (es) * 2011-05-21 2019-11-21 Macrogenics Inc Moléculas que se unen a CD3 capaces de unirse a CD3 humano y no humano
CA2844540C (en) 2011-08-23 2018-10-16 Roche Glycart Ag Bispecific antibodies specific for t-cell activating antigens and a tumor antigen and methods of use
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
WO2013169691A1 (en) * 2012-05-07 2013-11-14 Trustees Of Dartmouth College Anti-b7-h6 antibody, fusion proteins, and methods of using the same
US11142563B2 (en) 2012-06-14 2021-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing modified Fc region
BR112015000167B1 (pt) 2012-07-06 2021-11-23 Genmab B.V. Proteína dimérica, proteína, composição, kit de partes e seus usos, bem como método para aumentar a oligomerização em solução de uma proteína dimérica compreendendo um primeiro e segundo polipeptídeo, cada um compreendendo pelo menos as regiões ch2 e ch3 de uma cadeia pesada de igg1 humana e proteína dimérica variante
EP2904016B1 (en) 2012-10-08 2018-11-14 Roche Glycart AG Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10738132B2 (en) 2013-01-14 2020-08-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9738722B2 (en) 2013-01-15 2017-08-22 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
CN104968682A (zh) 2013-02-05 2015-10-07 英格玛布股份公司 针对CD3ε和BCMA的双特异性抗体
GB201302447D0 (en) 2013-02-12 2013-03-27 Oxford Biotherapeutics Ltd Therapeutic and diagnostic target
EP2961771B1 (en) 2013-02-26 2020-01-01 Roche Glycart AG Bispecific t cell activating antigen binding molecules specific to cd3 and cea
MX2015010350A (es) 2013-02-26 2015-10-29 Roche Glycart Ag Moleculas de union a antigeno biespecificas que activan la celula t.
US9487587B2 (en) * 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
SG10201705245TA (en) 2013-03-14 2017-07-28 Macrogenics Inc Bispecific Molecules That Are Immunoreactive With Immune Effector Cells That Express An Activating Receptor And An Antigen Expressed By A Cell Infected By A Virus And Uses Thereof
WO2014153002A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 The California Institute For Biomedical Research Bispecific antibodies and uses thereof
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
DK3016681T5 (da) 2013-07-05 2020-05-04 Genmab As Humaniserede eller kimære CD3-antistoffer
KR102216088B1 (ko) 2013-07-25 2021-02-15 싸이톰스 테라퓨틱스, 인크. 다중특이성 항체, 다중특이성 활성화 가능한 항체 및 그의 사용 방법
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
US11384149B2 (en) 2013-08-09 2022-07-12 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent Fc diabodies that are capable of binding CD32B and CD79b and uses thereof
EP2840091A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
KR102551410B1 (ko) 2013-11-11 2023-07-04 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 개변된 항체 가변영역을 포함하는 항원 결합 분자
EP3192812B1 (en) * 2013-12-17 2020-05-27 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
LT3122781T (lt) 2014-03-28 2020-03-25 Xencor, Inc. Bispecifiniai antikūnai, kurie jungiasi prie cd38 ir cd3
EP3149041A1 (en) * 2014-05-28 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to human and cynomolgus cd3 epsilon
AP2016009586A0 (en) * 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
PE20170286A1 (es) 2014-07-01 2017-03-30 Pfizer Diacuerpos heterodimericos biespecificos y sus usos
US9212225B1 (en) 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
US10669337B2 (en) 2014-07-25 2020-06-02 Cytomx Therapeutics, Inc. Bispecific anti-CD3 antibodies, bispecific activatable anti-CD3 antibodies, and methods of using the same
PE20170263A1 (es) 2014-08-04 2017-03-30 Hoffmann La Roche Moleculas biespecificas de union a antigeno activadoras de celulas t
EP2982693A1 (en) 2014-08-07 2016-02-10 Affimed Therapeutics AG CD3 binding domain
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
BR112017004802A2 (pt) 2014-09-12 2017-12-12 Genentech Inc anticorpos anti-cll-1 e imunoconjugados
WO2016048938A1 (en) * 2014-09-26 2016-03-31 Macrogenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd19 and cd3, and uses thereof
CN107108721B (zh) * 2014-09-29 2021-09-07 杜克大学 包含hiv-1包膜靶向臂的双特异性分子
TWI880146B (zh) 2014-11-11 2025-04-11 日商中外製藥股份有限公司 包含經改變之抗體可變區之抗原結合分子的資料庫
CA2968162A1 (en) 2014-11-20 2016-05-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Common light chains and methods of use
DK3221356T3 (da) 2014-11-20 2020-11-02 Hoffmann La Roche T-celleaktiverende, bispecifikke, antigenbindende molekyler mod folr1 og cd3
LT3789402T (lt) 2014-11-20 2022-09-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Kompleksinė terapija, naudojant t ląsteles aktyvinančias bispecifines antigeną surišančias molekules ir pd-1 ašį surišančius antagonistus
TN2017000223A1 (en) 2014-11-26 2018-10-19 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
IL252467B (en) 2014-11-26 2022-06-01 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
PT3227336T (pt) 2014-12-05 2019-09-09 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-cd79b e métodos de utilização
WO2016089610A1 (en) 2014-12-06 2016-06-09 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Bispecific antibody for cancer immunotherapy
US9765135B2 (en) 2014-12-19 2017-09-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-C5 antibodies
US10428155B2 (en) 2014-12-22 2019-10-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
KR102663073B1 (ko) * 2015-01-08 2024-05-07 젠맵 에이/에스 Cd3 및 cd20에 대항한 이중특이적 항체
CN114230667A (zh) 2015-01-23 2022-03-25 赛诺菲 抗cd3抗体、抗cd123抗体和与cd3和/或cd123特异性结合的双特异性抗体
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
AU2016232693B2 (en) 2015-03-19 2021-08-12 Duke University HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof
WO2016149695A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Duke University HIV-1 NEUTRALIZING ANTIBODIES AND USES THEREOF (CD4bs ANTIBODIES)
WO2016149698A2 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Duke University Hiv-1 neutralizing antibodies and uses thereof (v3 antibodies)
US11071783B2 (en) 2015-03-19 2021-07-27 Duke University HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof
HK1252158A1 (zh) * 2015-05-01 2019-05-17 Genentech, Inc. 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
BR112017023829A2 (pt) * 2015-05-06 2018-07-31 Janssen Biotech Inc agentes de ligação biespecíficos de antígeno de membrana específico da próstata (psma) e usos dos mesmos
BR112017025479A2 (pt) 2015-05-29 2018-08-07 Amphivena Therapeutics Inc métodos para utilizar proteínas de ligação cd33 e cd3 biespecíficas
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
HUE063270T2 (hu) 2015-06-16 2024-01-28 Hoffmann La Roche Az FcRH5 elleni humanizált és affinitásérett antitestek és alkalmazási eljárások
EP3310811B1 (en) 2015-06-16 2021-06-16 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
CN114989302B (zh) 2015-07-15 2025-08-05 根马布股份公司 人源化或嵌合cd3抗体
SG10201906059VA (en) 2015-07-30 2019-08-27 Macrogenics Inc Pd-1-binding molecules and methods of use thereof
CA2995709A1 (en) * 2015-08-17 2017-02-23 Macrogenics,Inc. Bispecific monovalent diabodies that are capable of binding b7-h3 and cd3, and uses thereof
UA126278C2 (uk) * 2015-09-21 2022-09-14 Аптево Рісьорч Енд Девелопмент Ллс Поліпептиди, які зв'язують cd3
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
CN107849137B (zh) 2015-10-02 2021-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗ceaxcd3 t细胞活化性抗原结合分子
SG10201913746RA (en) * 2015-11-03 2020-03-30 Ambrx Inc Anti-cd3-folate conjugates and their uses
TW201720458A (zh) * 2015-12-04 2017-06-16 宏觀基因股份有限公司 能夠結合cd19 和cd3 的雙特異性單價雙抗體以及其用途
KR20180085800A (ko) 2015-12-07 2018-07-27 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 psma에 결합하는 이종이합체성 항체
IL313608A (en) 2015-12-09 2024-08-01 Hoffmann La Roche Antibody against CD20 type II to reduce the formation of antibodies against drugs
CR20180318A (es) 2015-12-14 2018-09-19 Macrogenics Inc Moléculas biespecíficas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y métodos de uso de las mismas
EP3400246B1 (en) 2016-01-08 2020-10-21 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies
BR112018014760A2 (pt) 2016-01-22 2018-12-26 Janssen Biotech Inc anticorpos anti-ror1, anticorpos biespecíficos para ror1 x cd3 e métodos de uso dos mesmos
ES2992761T3 (en) * 2016-02-04 2024-12-17 Scripps Research Inst Humanized anti-cd3 antibodies, conjugates and uses thereof
WO2017142928A1 (en) 2016-02-17 2017-08-24 Macrogenics, Inc. Ror1-binding molecules, and methods of use thereof
US12128102B2 (en) 2016-03-08 2024-10-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
WO2017156178A1 (en) * 2016-03-08 2017-09-14 Maverick Therapeutics, Inc. Inducible binding proteins and methods of use
PL3433280T3 (pl) 2016-03-22 2023-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Dwuswoiste cząsteczki limfocytów T aktywowane przez proteazy
CR20180484A (es) 2016-04-15 2019-03-05 Macrogenics Inc Moléculas de unón b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpos-fármaco de los mismos y métodos de uso de los mismos
US20170349660A1 (en) * 2016-06-01 2017-12-07 Xencor. Inc. Bispecific antibodies that bind cd123 and cd3
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
JP2019517539A (ja) * 2016-06-07 2019-06-24 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 併用療法
MA45255A (fr) 2016-06-14 2019-04-17 Xencor Inc Anticorps inhibiteurs de points de contrôle bispécifiques
SG11201810509PA (en) 2016-06-20 2018-12-28 Kymab Ltd Anti-pd-l1 antibodies
MX2018016404A (es) * 2016-06-21 2019-10-15 Teneobio Inc Anticuerpos de union a cd3.
CA3029328A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
PL3519437T3 (pl) 2016-09-30 2022-01-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała dwuswoiste przeciwko p95HER2
JP7142630B2 (ja) 2016-10-14 2022-09-27 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ１５／ＩＬ１５Ｒαヘテロ二量体ＦＣ－融合タンパク質
CA3042435A1 (en) 2016-11-15 2018-05-24 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4252629A3 (en) 2016-12-07 2023-12-27 Biora Therapeutics, Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
KR20250004936A (ko) 2016-12-21 2025-01-08 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
CN110431231B (zh) * 2016-12-22 2024-01-02 第一三共株式会社 抗-cd3抗体和包含所述抗体的分子
KR102630036B1 (ko) 2016-12-23 2024-01-29 마크로제닉스, 인크. Adam9-결합 분자, 및 이것의 사용 방법
EP4389226A3 (en) 2017-02-24 2024-12-18 MacroGenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
EP3600416B1 (en) 2017-03-30 2023-06-07 Biora Therapeutics, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device
TW202515920A (zh) 2017-04-11 2025-04-16 美商因荷布瑞克斯生物科學公司 具有經受限cd3結合的多重特異性多肽構築體及使用其之方法
JP7297672B2 (ja) 2017-04-13 2023-06-26 アジェナス インコーポレイテッド 抗ｃｄ１３７抗体およびその使用方法
WO2018204363A1 (en) 2017-05-01 2018-11-08 Agenus Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use thereof
CA3063905A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 The Johns Hopkins University Manabodies and methods of using
EP3409322A1 (en) 2017-06-01 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Treatment method
EP3630829A1 (en) 2017-06-02 2020-04-08 H. Hoffnabb-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
EP3668898B1 (en) 2017-08-14 2023-07-05 MorphoSys AG Humanized antibodies for cd3
US11535667B2 (en) * 2017-08-28 2022-12-27 Systimmune, Inc. Anti-CD3 antibodies and methods of making and using thereof
PE20212205A1 (es) 2017-09-08 2021-11-18 Maverick Therapeutics Inc Proteinas de union condicionalmente activadas restringidas
US11472889B2 (en) * 2017-10-14 2022-10-18 Cytomx Therapeutics, Inc. Antibodies, activatable antibodies, bispecific antibodies, and bispecific activatable antibodies and methods of use thereof
KR101973060B1 (ko) * 2017-10-20 2019-04-26 주식회사 녹십자 항-cd3 항체 및 이를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물
US11312770B2 (en) 2017-11-08 2022-04-26 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US11952422B2 (en) 2017-12-05 2024-04-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule comprising altered antibody variable region binding CD3 and CD137
US11795226B2 (en) 2017-12-12 2023-10-24 Macrogenics, Inc. Bispecific CD16-binding molecules and their use in the treatment of disease
JP7765181B2 (ja) 2017-12-19 2025-11-06 ゼンコア インコーポレイテッド 改変されたｉｌ－２ ｆｃ融合タンパク質
CN109939232A (zh) * 2017-12-21 2019-06-28 张曼 关于cd3×b7h3双特异性抗体定向杀伤膀胱癌细胞pumc-91的应用
CR20200391A (es) 2018-02-08 2020-10-19 Genentech Inc Moléculas biespecíficas de unión al antígeno y métodos de uso
CN111787949A (zh) * 2018-02-15 2020-10-16 宏观基因有限公司 变体cd3-结合结构域及其在用于治疗疾病的组合疗法中的用途
CN110305217B (zh) 2018-03-27 2022-03-29 广州爱思迈生物医药科技有限公司 双特异性抗体及其应用
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CA3096123A1 (en) 2018-04-11 2019-10-17 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and related methods and uses
CN112867734A (zh) 2018-04-18 2021-05-28 Xencor股份有限公司 包含IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白和PD-1抗原结合结构域的靶向PD-1的异源二聚体融合蛋白及其用途
CA3097741A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
JP7530299B2 (ja) 2018-05-24 2024-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３抗体及びその使用
SG11202012405WA (en) * 2018-06-14 2021-01-28 Bioatla Inc Multi-specific antibody constructs
WO2019246317A1 (en) 2018-06-20 2019-12-26 Progenity, Inc. Treatment of a disease or condition in a tissue originating from the endoderm
US20230041197A1 (en) 2018-06-20 2023-02-09 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immunomodulator
CA3105891A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs containing a constrained cd3 binding domain and a receptor binding region and methods of using the same
MX2021000827A (es) 2018-08-03 2021-03-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno que contiene dos dominios de union a antigeno que estan enlazados entre si.
HRP20250234T1 (hr) 2018-08-31 2025-04-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Strategija doziranja koja ublažava sindrom oslobađanja citokina za cd3/cd20 bispecifična antitijela
JP2022501325A (ja) 2018-09-28 2022-01-06 中外製薬株式会社 改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子
AU2019355971B2 (en) 2018-10-03 2025-05-08 Xencor, Inc. IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins
JP2022512684A (ja) * 2018-10-11 2022-02-07 インヒブルクス インコーポレイテッド Ｂ７ｈ３シングルドメイン抗体およびその治療用組成物
CA3112868A1 (en) * 2018-10-31 2020-05-07 Tiziana Life Sciences Plc Composition and methods of treating inflammatory and autoimmune diseases
US20220249814A1 (en) 2018-11-19 2022-08-11 Progenity, Inc. Methods and devices for treating a disease with biotherapeutics
US20220098329A1 (en) * 2018-11-30 2022-03-31 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Heterodimeric tetravalency and specificity antibody compositions and uses thereof
KR20210099614A (ko) * 2018-12-04 2021-08-12 노파르티스 아게 Cd3에 대한 결합 분자 및 이의 용도
WO2020168555A1 (zh) * 2019-02-22 2020-08-27 武汉友芝友生物制药有限公司 Cd3抗原结合片段及其应用
BR112021016955A2 (pt) 2019-03-01 2021-11-23 Xencor Inc Composição, composição de ácido nucleico, composição de vetor de expressão, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produção de um domínio de ligação de membro de família 3 de pirofosfatase/fosfodiesterase de ectonucleotídeo e de tratamento de um câncer, anticorpo anti-enpp3, e, anticorpo heterodimérico
EP3934762A1 (en) 2019-03-05 2022-01-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
KR102239781B1 (ko) 2019-04-08 2021-04-13 주식회사 녹십자 Gpnmb 및 cd3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 및 이의 용도
BR112021022682A2 (pt) 2019-05-14 2022-02-22 Provention Bio Inc Métodos e composições para prevenir diabetes do tipo 1
KR20250156861A (ko) 2019-05-21 2025-11-03 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
KR20220035369A (ko) * 2019-06-07 2022-03-22 아디맵 엘엘씨 고 친화도 항-cd3 항체, 및 이의 생성 및 사용 방법
CN111454357B (zh) * 2019-08-14 2022-03-15 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用
MX2022002315A (es) 2019-08-30 2022-03-25 Agenus Inc Anticuerpos anti-cd96 y sus metodos de uso.
TWI878355B (zh) * 2019-10-02 2025-04-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 用於癌症治療之多重專一性結合蛋白
EP4309722A3 (en) 2019-12-13 2024-08-07 Biora Therapeutics, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
EP4072584B1 (en) 2019-12-13 2026-01-28 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
WO2021146328A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Aptevo Research And Development Llc Formulations for protein therapeutics
US20230151102A1 (en) 2020-01-13 2023-05-18 Aptevo Research And Development Llc Methods and compositions for preventing adsorption of therapeutic proteins to drug delivery system components
EP4097129A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 Inhibrx, Inc. Cd28 single domain antibodies and multivalent and multispecific constructs thereof
CA3170330A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Macrogenics, Inc. Cd137 binding molecules and uses thereof
PE20230077A1 (es) 2020-03-31 2023-01-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moleculas de union al antigeno multiespecificas dirigidas a ligando de tipo delta 3 (dll3) y sus usos
AU2021267953A1 (en) 2020-05-04 2022-11-17 Immunorizon Ltd. Precursor tri-specific antibody constructs and methods of use thereof
US12435154B2 (en) 2020-05-08 2025-10-07 Genmab A/S Bispecific antibodies against CD3 and CD20
US11919956B2 (en) 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
US12460001B2 (en) 2020-05-27 2025-11-04 Janssen Biotech, Inc. Proteins comprising CD3 antigen binding domains and uses thereof
CA3182445A1 (en) 2020-06-11 2021-12-16 Francisco Leon Methods and compositions for preventing type 1 diabetes
IL298402A (en) 2020-06-19 2023-01-01 Hoffmann La Roche Antibodies that bind to CD3 and CD19
KR20230166150A (ko) 2020-08-19 2023-12-06 젠코어 인코포레이티드 항-cd28 조성물
IL300256A (en) 2020-08-25 2023-03-01 Gilead Sciences Inc Multispecific Antigen Binding Molecules Targeting HIV and Methods of Use
US20240034812A1 (en) 2020-09-10 2024-02-01 Genmab A/S Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating diffuse large b-cell lymphoma
CA3189883A1 (en) 2020-09-10 2022-03-17 Brian Elliott Bispecific antibody against cd3 and cd20 in combination therapy for treating follicular lymphoma
JP2023542289A (ja) 2020-09-10 2023-10-06 ジェンマブ エー／エス 濾胞性リンパ腫を治療するための併用療法におけるｃｄ３及びｃｄ２０に対する二重特異性抗体
BR112023004296A2 (pt) 2020-09-10 2023-04-04 Genmab As Método para tratar linfoma de célula b grande difusa em um indivíduo humano
CN116437956A (zh) 2020-09-10 2023-07-14 健玛保 用于治疗慢性淋巴细胞白血病的针对cd3和cd20的双特异性抗体
CN119792512A (zh) 2020-10-14 2025-04-11 维里迪安治疗公司 用于治疗甲状腺眼病的组合物和方法
JP7716473B2 (ja) 2020-11-04 2025-07-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の皮下投薬
US12516118B2 (en) 2020-11-04 2026-01-06 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies and anti-CD79b antibody drug conjugates
CA3196539A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
CN114573703A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
US11739144B2 (en) 2021-03-09 2023-08-29 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CLDN6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
TW202304988A (zh) * 2021-03-24 2023-02-01 美商健生生物科技公司 靶向ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２０、及ＣＤ３之三特異性抗體
CA3213632A1 (en) 2021-04-30 2022-11-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
EP4329800A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
BR112023023775A2 (pt) 2021-05-14 2024-02-20 Genentech Inc Métodos para tratar um indivíduo com um distúrbio proliferativo de células positivas para cd20 e para tratar uma população de indivíduos com um distúrbio proliferativo de células positivas para cd20
JP2024519964A (ja) 2021-05-21 2024-05-21 アプティーボ リサーチ アンド デベロップメント エルエルシー タンパク質治療薬のための投薬レジメン
WO2023019171A1 (en) 2021-08-10 2023-02-16 Viridian Therapeutics, Inc. Compositions, doses, and methods for treatment of thyroid eye disease
WO2023132325A1 (ja) 2022-01-07 2023-07-13 株式会社デンソー 端末、基地局及び通信方法
US20250082777A1 (en) 2022-01-10 2025-03-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
US20230414750A1 (en) 2022-03-23 2023-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
CN119013300A (zh) 2022-04-13 2024-11-22 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cd20/抗cd3双特异性抗体的药物组合物和使用方法
IL316049A (en) 2022-04-13 2024-11-01 Genentech Inc Musuntuzumab pharmaceutical preparations and methods of use
WO2023219120A1 (ja) 2022-05-12 2023-11-16 アステラス製薬株式会社 抗ｃｄ３７－抗ｃｄ３二重特異性抗体
WO2023230476A1 (en) * 2022-05-24 2023-11-30 Provention Bio, Inc. Methods and compositions for preventing or delaying type 1 diabetes
CN117603351A (zh) 2022-08-22 2024-02-27 英脉德医疗科技(广东)有限公司 肿瘤微环境特异激活的Her2-CD3双特异性抗体
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
WO2024047114A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Universität Zürich Adenoviral-based in situ delivery of bispecific t cell engagers
WO2024088987A1 (en) 2022-10-26 2024-05-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy for the treatment of cancer
WO2024102948A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 Celgene Corporation Fc receptor-homolog 5 (fcrh5) specific binding molecules and bispecific t-cell engaging antibodies including same and related methods
EP4627096A1 (en) 2022-12-02 2025-10-08 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same
CN116239700B (zh) * 2022-12-20 2024-06-21 浙江大学 一种肿瘤双靶向的三特异性t细胞衔接器及其应用
CN116063526B (zh) * 2022-12-31 2025-03-25 合肥天港免疫药物有限公司 抗pdl1的抗体及其用途
CN116284448B (zh) * 2023-02-14 2024-06-21 浙江大学 一种超抗原参与的三功能t细胞衔接器及其应用
WO2024220597A2 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Sana Biotechnology, Inc. Digital droplet based assay for detecting replication competent lentiviral vector
KR20240161865A (ko) * 2023-05-03 2024-11-13 아주대학교산학협력단 IL-5Rα×CD3ε T 세포 관여 이중 특이 항체 및 이의 용도
CN121443743A (zh) 2023-05-23 2026-01-30 赛纳生物技术公司 串联融合剂和相关脂质颗粒
WO2025184529A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles with fusogen display and related compositions and methods
WO2026006495A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-wt1/hla-a2 antibody and uses thereof
WO2026006492A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Ypsilon Therapeutics, Inc. Anti-prame/hla-a2 antibodies and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090252683A1 (en) * 2005-10-11 2009-10-08 Micromet Ag Composition Comprising Cross-Species-Sepecific Antibodies and uses Thereof
CN101687915A (zh) * 2007-04-03 2010-03-31 米克罗麦特股份公司 跨物种特异性CD3-ε结合结构域

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (zh) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
DE3853515T3 (de) 1987-05-21 2005-08-25 Micromet Ag Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung.
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US7381803B1 (en) 1992-03-27 2008-06-03 Pdl Biopharma, Inc. Humanized antibodies against CD3
US6129914A (en) * 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
DK0656789T3 (da) 1992-08-21 1998-08-24 Genentech Inc Fremgangsmåde til behandling af en LFA-1-medieretforstyrrelse.
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US20030108548A1 (en) 1993-06-01 2003-06-12 Bluestone Jeffrey A. Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
ATE204300T1 (de) 1994-05-13 2001-09-15 Biovation Ltd Zielzellen-bindende chimäre peptide
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US5834597A (en) * 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
CA2326389C (en) 1998-04-21 2007-01-23 Micromet Gesellschaft Fur Biomedizinische Forschung Mbh Novel cd19xcd3 specific polypeptides and uses thereof
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20030187196A1 (en) 1998-12-30 2003-10-02 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HK1049997B (zh) 1999-11-24 2007-02-23 Immunogen, Inc. 含有紫杉烷类的细胞毒性剂及其在治疗上的应用
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP1450857B1 (en) 2001-10-16 2010-09-15 The Government of the United States of America, represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Broadly cross-reactive neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus selected by env-cd4-co-receptor complexes
AU2003208415B2 (en) 2002-02-14 2009-05-28 Immunomedics, Inc. Anti-CD20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
DE60334453D1 (de) 2002-05-30 2010-11-18 Macrogenics Inc Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten
ES2381617T5 (es) 2002-08-14 2016-02-24 Macrogenics, Inc. Anticuerpos específicos frente a FcgammaRIIB y sus procedimientos de uso
NZ568769A (en) 2002-10-17 2010-04-30 Genmab As Human monoclonal antibodies against CD20
AU2003304145A1 (en) 2002-10-18 2004-12-13 Macrogenics, Inc. Methods and compositions for vaccination comprising nucleic acid and/or polypeptide sequences of the genus borrelia
DK2289936T3 (en) 2002-12-16 2017-07-31 Genentech Inc IMMUNGLOBULIN VARIATIONS AND APPLICATIONS THEREOF
AU2004204494B2 (en) 2003-01-09 2011-09-29 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
JP5416338B2 (ja) 2003-05-09 2014-02-12 デューク ユニバーシティ Ｃｄ２０特異的抗体およびその使用方法
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
JP5010281B2 (ja) * 2003-05-31 2012-08-29 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｅｐｃａｍに対する二重特異性抗体を含む薬学的組成物
CA2522586C (en) * 2003-05-31 2017-02-21 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
US20050176028A1 (en) * 2003-10-16 2005-08-11 Robert Hofmeister Deimmunized binding molecules to CD3
EP2397189B1 (en) 2003-11-14 2015-03-18 Brigham and Women's Hospital, Inc. Methods of modulating immunity
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
MXPA06011796A (es) 2004-04-16 2007-05-07 Macrogenics Inc Anticuerpos especificos de fc(riib y metodos para el uso de los mismos.
EP1773393A2 (en) 2004-05-05 2007-04-18 Genentech, Inc. Preventing autoimmune disease by using an anti-cd20 antibody
MXPA06012601A (es) 2004-05-10 2007-05-10 Macrogenics Inc Anticuerpos especificos de fcy riib humanizados y metodos de uso de los mismos.
EA010350B1 (ru) 2004-06-03 2008-08-29 Новиммун С.А. Антитела против cd3 и способы их применения
US20060024295A1 (en) 2004-06-04 2006-02-02 Genentech, Inc. Method for treating lupus
JP4463645B2 (ja) 2004-08-27 2010-05-19 日本メクトロン株式会社 プリント基板およびその検査方法
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2008157379A2 (en) 2007-06-21 2008-12-24 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2006113665A2 (en) 2005-04-15 2006-10-26 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
SG177944A1 (en) 2005-07-11 2012-02-28 Macrogenics Inc Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
DK2573114T3 (en) 2005-08-10 2016-07-04 Macrogenics Inc The identification and production of antibodies with variant Fc regions, and methods of using same
US20100209437A1 (en) 2005-09-12 2010-08-19 Greg Elson Anti-CD3 Antibody Fromulations
SG170110A1 (en) 2006-03-10 2011-04-29 Macrogenics Inc Identification and engineering of antibodies with variant heavy chains and methods of using same
WO2007117600A2 (en) 2006-04-07 2007-10-18 Macrogenics, Inc. Combination therapy for treating autoimmune diseases
EP2021029B1 (en) 2006-05-26 2014-06-11 MacroGenics, Inc. Humanized fc gamma riib-specific antibodies and methods of use thereof
MX2008015771A (es) 2006-06-14 2009-01-27 Macrogenics Inc Metodos para el tratamiento de padecimientos autoinmunes usando anticuerpos monoclonales con toxicidad reducida.
EP2032159B1 (en) 2006-06-26 2015-01-07 MacroGenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
US20100015142A1 (en) 2006-12-21 2010-01-21 Macrogenics Inc. Methods for the treatment of lada and other adult- onset autoimmune using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
EP2109668A4 (en) 2007-01-22 2011-10-05 Macrogenics West Inc HUMAN CANCER STEM CELLS
PT2155788E (pt) * 2007-04-03 2012-09-25 Micromet Ag Aglutinantes duplamente específicos, específicos interespécies
PT2520590T (pt) 2007-04-03 2018-11-14 Amgen Res Munich Gmbh Domínio de ligação específico de espécies cruzadas
KR101626988B1 (ko) 2007-04-03 2016-06-02 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 종간 특이적 이중특이적인 결합제들
US20100260668A1 (en) 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
CA2735193A1 (en) 2008-08-26 2010-03-11 Macrogenics, Inc. T-cell receptor antibodies and methods of use thereof
WO2010042904A2 (en) 2008-10-10 2010-04-15 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Tcr complex immunotherapeutics
KR20110104032A (ko) 2008-12-19 2011-09-21 마크로제닉스, 인크. 공유결합형 디아바디 및 이의 용도
TWI653333B (zh) * 2010-04-01 2019-03-11 安進研究（慕尼黑）有限責任公司 跨物種專一性之ＰＳＭＡｘＣＤ３雙專一性單鏈抗體
ES2732213T3 (es) * 2011-05-21 2019-11-21 Macrogenics Inc Moléculas que se unen a CD3 capaces de unirse a CD3 humano y no humano
JP6926834B2 (ja) * 2017-08-30 2021-08-25 いすゞ自動車株式会社 ステアリング装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090252683A1 (en) * 2005-10-11 2009-10-08 Micromet Ag Composition Comprising Cross-Species-Sepecific Antibodies and uses Thereof
CN101687915A (zh) * 2007-04-03 2010-03-31 米克罗麦特股份公司 跨物种特异性CD3-ε结合结构域

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2024501653A (ja) * 2020-12-23 2024-01-15 ベイジン マブワークス バイオテック カンパニー リミテッド ヒト及びサルｃｄ３と結合する抗体及びその使用
JP7753601B2 (ja) 2020-12-23 2025-10-15 ベイジン マブワークス バイオテック カンパニー リミテッド ヒト及びサルｃｄ３と結合する抗体及びその使用

Also Published As

Publication number Publication date
MY173899A (en) 2020-02-26
UA115402C2 (uk) 2017-10-25
CA2836857C (en) 2019-12-03
NZ618021A (en) 2015-02-27
EA033677B1 (ru) 2019-11-15
WO2012162067A2 (en) 2012-11-29
MX391107B (es) 2025-03-21
CL2016001254A1 (es) 2016-12-02
WO2012162067A3 (en) 2013-01-31
LT2714733T (lt) 2019-06-10
SG10201509588TA (en) 2015-12-30
ECSP13013101A (es) 2014-01-31
JP2017206505A (ja) 2017-11-24
SI2714733T1 (sl) 2019-06-28
EP2714733A2 (en) 2014-04-09
JP2022001580A (ja) 2022-01-06
KR20190105112A (ko) 2019-09-11
US20220056131A1 (en) 2022-02-24
CO6970560A2 (es) 2014-06-13
MA35174B1 (fr) 2014-06-02
US12049501B2 (en) 2024-07-30
CN107722124A (zh) 2018-02-23
US20140099318A1 (en) 2014-04-10
NZ703939A (en) 2016-01-29
EP3492494A1 (en) 2019-06-05
IL264293B (en) 2020-09-30
US11111299B2 (en) 2021-09-07
KR20140033107A (ko) 2014-03-17
CL2013003329A1 (es) 2014-07-04
AU2019200159A1 (en) 2019-01-31
IL229575A0 (en) 2014-01-30
BR112013029893A2 (pt) 2017-05-30
JP7302990B2 (ja) 2023-07-04
PT2714733T (pt) 2019-05-23
US10150812B2 (en) 2018-12-11
AU2019200159B2 (en) 2020-03-12
CN103703024B (zh) 2017-11-14
EP2714733A4 (en) 2015-10-14
ME03440B (me) 2020-01-20
JP2014517844A (ja) 2014-07-24
IL259187B (en) 2019-02-28
US9587021B2 (en) 2017-03-07
RS58765B1 (sr) 2019-06-28
UA115122C2 (uk) 2017-09-25
JP6141831B2 (ja) 2017-06-07
PL2714733T4 (pl) 2019-08-30
JP2019142866A (ja) 2019-08-29
ZA201308602B (en) 2014-07-30
US20190040135A1 (en) 2019-02-07
IL229575B (en) 2018-05-31
CN103703024A (zh) 2014-04-02
US20170137519A1 (en) 2017-05-18
CL2020000830A1 (es) 2020-08-07
SG10201703425RA (en) 2017-05-30
IL259187A (en) 2018-07-31
US20250122284A1 (en) 2025-04-17
CY1122020T1 (el) 2020-10-14
EP2714733B1 (en) 2019-01-23
HRP20190756T1 (hr) 2019-06-14
AU2017204545A1 (en) 2017-07-20
UA117072C2 (uk) 2018-06-11
IL264293A (en) 2019-02-28
AU2012259161B2 (en) 2017-04-06
BR122016016837A2 (pt) 2019-08-27
ES2732213T3 (es) 2019-11-21
MX369220B (es) 2019-10-31
CA2836857A1 (en) 2012-11-29
PL2714733T3 (pl) 2019-08-30
AU2017204545B2 (en) 2018-11-15
MX2013013584A (es) 2014-09-22
KR102060389B1 (ko) 2019-12-31
HUE044209T2 (hu) 2019-10-28
JP6496349B2 (ja) 2019-04-03
SG195072A1 (en) 2013-12-30
SMT201900239T1 (it) 2019-05-10
AU2012259161A1 (en) 2013-12-12
EA201391735A1 (ru) 2014-03-31
DK2714733T3 (da) 2019-05-06

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Publication Publication Date Title
US12049501B2 (en) CD3-binding molecules capable of binding to human and non-human CD3
DK2699590T3 (en) ENDOGLIN POLYPEPTIDES AND APPLICATIONS THEREOF
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