CN107106658B

CN107106658B - 含有基因重组型卵泡刺激激素的微针装置

Info

Publication number: CN107106658B
Application number: CN201580058084.7A
Authority: CN
Inventors: 西村真平; 德本诚治; 伊藤毅; 浅田一
Original assignee: Hisamitsu Pharmaceutical Co Inc
Current assignee: Hisamitsu Pharmaceutical Co Inc
Priority date: 2014-10-27
Filing date: 2015-10-19
Publication date: 2021-07-09
Anticipated expiration: 2035-10-19
Also published as: TWI655953B; US10632065B2; EP3213764A4; US20170348228A1; KR102124690B1; KR20170073694A; CN107106658A; SG11201702779PA; ES2898700T3; EP3213764B1; TW201625290A; JPWO2016067956A1; JP6621754B2; EP3213764A1; WO2016067956A1

Abstract

本发明提供一种微针装置，其是具备基板、配备于基板上的微针、与形成于微针上的涂层的微针装置，其中涂层含有基因重组型卵泡刺激激素、精氨酸及甘油，涂层中，精氨酸的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.07～0.75倍，甘油的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.1～2.75倍。

Description

含有基因重组型卵泡刺激激素的微针装置

技术领域

本发明关于含有基因重组型卵泡刺激激素的微针装置。

背景技术

微针装置作为经皮施用生理活性物质的手段之一而为人所知。微针装置，其主要的表面上具有多个微针，作为其具体的方案，例如，有在微针上形成含有生理活性物质的涂层的微针装置，或存在内含生理活性物质的自我溶解型微针(例如，专利文献1，2)。

[背景技术文献]

[专利文献]

专利文献1：日本特表2008-528509号公报

专利文献2：日本特表2014-507473号公报

发明内容

[发明所欲解决的课题]

本发明人们发现，使用基因重组型卵泡刺激激素作为生理活性物质，并涂覆微针时，涂层中基因重组型卵泡刺激激素的含量均匀性低，在微针装置保存中基因重组型卵泡刺激激素容易凝集。

涂层中的生理活性物质的含量均匀性低时，则在使用微针装置时基因重组型卵泡刺激激素的吸收不稳定，有时无法得到充分的治疗效果。

因此，本发明的目的为提供一种微针装置，其是具有涂层的微针装置，且是基因重组型卵泡刺激激素不易在涂层中凝集，且被以均匀地分散的方式涂布的微针装置。

[用以解决课题的手段]

本发明提供一种微针装置，其是具备基板、配备于基板上的微针、与形成于微针上的涂层的微针装置，其中涂层含有基因重组型卵泡刺激激素(以下，也简称为“FSH”)、精氨酸及甘油，上述涂层中，精氨酸的质量，相对于FSH的质量而言，为0.07～0.75倍，优选为0.07～0.6倍，甘油的质量，相对于FSH的质量而言，为0.1～2.75倍。

通过上述涂层含有FSH、精氨酸及甘油，能够对使用者持续性地施用有效量的FSH，FSH的含量均匀性及溶解性也优异，也不容易发生涂层之液体滴垂。

上述涂层，优选进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

此外，本发明提供一种微针装置的制造方法，其具备：准备具有基板及微针的微针阵列的工序；混合FSH、精氨酸及甘油而得到涂覆组合物的工序；将涂覆组合物涂布于微针的工序；使涂覆组合物干燥以在微针上形成涂层的工序。

上述制造方法的涂覆组合物中，精氨酸的质量，相对于FSH的质量而言，为0.07～0.75倍，优选为0.07～0.6倍，甘油的质量，相对于FSH的质量而言，优选为1～3倍。

上述涂覆组合物，优选进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

优选的是，进行干燥，直到上述涂层中，精氨酸的质量，相对于FSH的质量而言，成为0.07～0.75倍，优选为0.07～0.6倍，而且甘油的质量，相对于FSH的质量而言，成为0.1～2.75倍。

本发明更进一步提供一种微针用涂覆剂，其含有FSH、精氨酸及甘油，上述涂覆剂中，以FSH的质量为基准，精氨酸的含量为0.07～0.75倍，优选为0.07～0.6倍，而且甘油的含量为1～3倍。

上述涂覆剂，优选进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

[发明的效果]

借助本发明的微针装置，通过涂层含有FSH、精氨酸及甘油，能够对使用者持续性地施用有效量的FSH，FSH的含量均匀性及溶解性也优异，也不容易发生涂层的液体滴垂。

附图简单说明

[图1]是显示微针装置的一个实施方案的斜视图。

[图2]是沿着图1的II-II线的侧面剖面图。

[图3](a)、(b)及(c)为，显示微针装置制造方法的一个实施方案的示意图。

[图4]是显示一个实施方案的微针装置的涂层中FSH凝集体含有率的图。

用于实施发明的方式

以下，一边参考附图，一边说明适当的实施方案。再者，附图的说明中相同要素采用相同符号，省略重复的说明。而且，为了容易理解，将附图的一部分夸大描绘，尺寸比例未必与说明内容一致。

本发明的一个实施方案为一种微针装置，其是具备基板、配置于基板上的微针、和形成于微针上的涂层的微针装置，其中涂层含有FSH、精氨酸与甘油。

图1为显示微针装置的一个实施方案的斜视图。图1中所示的微针装置1，具备基板2、在基板2上以二维方式配置的多个微针3、与形成于微针3上的涂层5。涂层5含有FSH、精氨酸及甘油。

基板2为用来支持微针3的基座。基板2的面积，优选为0.5～10cm²，更优选为1～5cm²，进一步优选为1～3cm²。也可经由连接多个这种基板2来构成所期望大小的基板。

微针3为微小构造，其高度(长度)，优选为50～600μm。在这里，经由将微针3的长度设在50μm以上，可以确实施用涂层中所包含的FSH。而且，经由将微针3的长度设在600μm以下，可以实现避免微针接触神经，减少疼痛发生的可能性，同时避免出血的可能性。而且，经由将微针3的长度设在500μm以下，可以有效率地将应输入皮内的份量的FSH施用，也可以以不刺穿基底膜的方式施用。微针3的长度，特别优选为300～500μm。

在这里，所谓的微针3，为凸状构造物，广义地来说意指针状，或包含针状的构造物。当然，微针，并不限于具有尖锐前端的针状物，也可为前端不尖的形状。在微针3为圆锥状构造的情况，其基底直径优选为50～200μm左右。本实施方式中微针3为圆锥状，但也可为四角锥状等多角锥状，或其他形状的微针。

微针3，典型地来说，是以在针的横列内每1毫米(mm)达约1～10根的密度的方式空出间隔来设置。一般来说，相邻的横列是以相对于横列内针的间隔来说实质上相等的距离相隔，具有每1cm² 100～10000根的针密度。具有100根以上的针密度时，即可以有效率地刺穿皮肤。另一方面，在超过10000根的针密度的情况，则难以保持微针3的强度。微针3的密度，优选为200～5000根，更优选为300～2000根，进一步优选为400～850根。

作为基板2或微针3的材质，可举出硅，二氧化硅，陶瓷，金属(不锈钢、钛、镍、钼、铬、钴等)及合成或天然的树脂材料等，但是考虑到微针的抗原性及材质的单价，特别优选为聚乳酸、聚乙交酯(polyglycolide)、聚乳酸-co-聚乙交酯、出芽短梗孢糖、己内酯(caprolactone)、聚氨基甲酸酯(聚氨基甲酸乙酯)、聚酸酐等生物分解性聚合物、和作为非分解性聚合物的聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸、乙烯醋酸乙烯酯、聚四氟乙烯、聚甲醛等合成或天然的树脂材料。此外，作为多糖类的透明质酸、透明质酸钠、出芽短梗孢糖、葡聚糖、糊精或硫酸软骨素等也适合。

作为基板2或微针3的制造方法，可举出使用硅基板的湿蚀刻加工或干蚀刻加工、使用金属或树脂的精密机械加工(放电加工、激光加工、切粒加工、热压花(embossment)加工、射出成型加工等)、机械切削加工等。通过这些加工方法，基板2与微针3一体成型。作为使微针3中空的方法，可举出在微针3制作后，以激光等进行2次加工的方法。

微针装置1，在微针3上具备涂层5，而涂层5，优选为通过涂布涂覆组合物来形成。作为涂布的方法，可举出喷雾涂覆及浸渍涂覆等，优选为浸渍涂覆。再者，在图1中，涂层5在所有的微针3上均形成，但涂层5也可以仅形成于存在多个的微针3的一部分。而且在图1中，虽然涂层5仅形成于微针3的前端部分，但是也可以以覆盖微针3全体的方式形成。更进一步来说，涂层5也可以形成于基板2上。

图2，为沿着图1的II-II线的侧面剖面图。如图2所示，微针装置1，具备基板2，设置于基板2上的微针3，与形成于微针3上的涂层5。形成于微针3上的涂层5，含有FSH、精氨酸及甘油。

涂层中所含有的精氨酸的质量为，相对于FSH的质量而言，优选为0.07～0.75倍，更优选为0.07～0.6倍，进一步优选为0.07～0.3倍，特别优选为0.08～0.15倍。

涂层中所含有的甘油的质量的下限值为，相对于FSH的质量而言，优选为0.1倍，更优选为0.25倍，进一步优选为0.5倍。而且，涂层中所含有的甘油的质量的上限值为，相对于FSH的质量而言，优选为2.75倍，更优选为1.6倍，进一步优选为1倍。

此外，从不易发生液体滴垂的观点来看，以涂层全体的质量为基准，甘油含量优选为40质量％以下。

涂层，例如，也可使用含有FSH、精氨酸及甘油的涂覆组合物来形成。通过涂层含有FSH、精氨酸及甘油，可以更进一步抑制涂覆组合物涂布时或微针装置保存时涂层的经时劣化。

本案发明的基因重组型卵泡刺激激素，为脑下垂体前叶的促性腺素分泌细胞(gonadotroph)所制造的糖蛋白，为作为一种促性腺素(gonadotropin)的卵泡刺激激素的基因重组型。在男性中，FSH促进睾丸的生精小管(seminiferous tubule)成长，维持精子的形成。在女性中，FSH促进卵巢的卵泡发育。

FSH的构造和天然型的卵泡刺激激素一样，为由以非共价键结合的α链与β链组成的异二聚体糖蛋白质，其中α链与β链皆被糖化即被糖基化(glycosylation)。α-亚单位由92个氨基酸残基组成，β-亚单位由111个氨基酸残基组成，其各具有2个潜在的被天门冬酰胺结合的糖基化部位。

FSH，例如，可通过以下而得：将重组了人类FSHα链cDNA的表达载体及重组了人类FSHβ链cDNA的表达载体转染至哺乳动物细胞中而作成的重组体人类FSH产生细胞培养在无血清培养基中，使其在培养液中分泌FSH，从该培养液进行纯化。

FSH的纯化，在将重组体人体FSH产生细胞从该培养液中除去后，可以通过组合使用阳离子交换柱色谱法、色素亲合柱色谱法、逆相柱色谱法、苯基琼脂糖(PhenylSepharose)柱色谱法或凝胶过滤柱色谱法，将FSH活性级份回收来进行，以得到纯度极高的FSH(例如，日本特许第2523843号公报、日本特开2001-323000号公报及日本特开2009-273427号公报等)。所得到的FSH，因为是利用无血清培养基培养重组体人类FSH产生细胞，可以防止病毒的混入，所以具有很高的有用性。

纯化过的FSH在非还原/非加热条件下进行SDS-PAGE电泳后，通过将胶体用考马斯亮蓝染色观察到在分子量约45kDa有一条色带，这条色带以使用抗人类FSH抗体的蛋白质印迹法(Western blotting)染色。

此外，纯化过后的FSH通过以等电点电泳分析，观察到在pI(等电点)3.5～5.5有多条色带。

通过施用FSH，会在伴随视丘下部-脑下垂体功能障碍或多囊胞性卵巢综合征的无排卵或排卵稀发(希発排卵)中表现出诱发排卵作用。因此，经由使用本实施方式的微针装置，对于伴随视丘下部-脑下垂体功能障碍或多囊胞性卵巢综合征的无排卵或排卵稀发、或者不孕症的治疗是有效的。

在涂覆组合物中，FSH的含量，以涂覆组合物全体的质量为基准，优选为21～39质量％，更优选为29～37质量％，进一步优选为30～35质量％。FSH的含量为21质量％以上时，则FSH的药理作用充分发挥，并且容易达到所期望的治疗效果。

此外，通过在涂覆组合物中进一步掺合精氨酸，于涂布后的涂覆组合物中，FSH凝集体不容易生成。一旦生成FSH凝集体，能够贡献于治疗的FSH量下降，变成难以得到所期望的治疗效果。

涂覆组合物中，精氨酸的含量，以被包含于涂覆组合物中的FSH的质量为基准，优选为0.07～0.75倍，更优选为0.07～0.6倍，进一步优选为0.07～0.3倍，特别优选为0.08～0.15倍。精氨酸的含量，以FSH的质量为基准在0.07倍以上时，则在涂覆组合物中或涂层中FSH凝集体不易生成。此外，精氨酸的含量在0.75倍以下，尤其是0.6倍以下时，则对FSH涂覆组合物的溶解性会进一步提升。

通过涂覆组合物含有甘油，会改善将涂覆组合物涂布于微针时的FSH的含量均匀性。通过改善FSH的含量均匀性，在使用该微针装置时，可以从涂层稳定地释放出FSH，持续性地发挥所期望的治疗效果。此外，甘油的FSH溶解性高，适合作为涂覆组合物的成分。

涂覆组合物中，甘油的含量，以被包含于涂覆组合物中的FSH的质量为基准，优选为1～3倍，更优选为1～2.75倍，进一步优选为1～1.8倍，特别优选为1～1.2倍。甘油的含量，以FSH的质量为基准在1倍以上时，则涂层中FSH的含量均匀性及溶解性会更优异，而且从涂布于微针时不容易发生液体滴垂的观点来看为更优选。

进一步地，涂覆组合物中，优选更进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。尤其是，涂覆组合物，更优选含有柠檬酸。通过在涂覆组合物中含有特定的酸，有FSH凝集体的生成被进一步抑制的倾向。

含有柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸或乳酸的涂覆组合物，与含有盐酸、硫酸或醋酸的涂覆组合物相比，有FSH凝集体的生成被进一步抑制的倾向。

酸的含量，以涂覆组合物全体的质量为基准，优选为1～6质量％，更优选为1～3.5质量％，进一步优选为1～2质量％。

此外，酸的含量，相对于被包含于涂覆组合物中的精氨酸的质量而言，优选为0.2～0.6倍，更优选为0.3～0.6倍，进一步优选为0.3～0.4倍。

涂覆组合物中，也可以视需要，进一步含有溶剂、高分子载体(黏度赋予剂)、溶解辅助剂、吸收促进剂、稳定剂、抗氧化剂、乳化剂、表面活性剂、盐类等其他成分。作为溶剂，例如可举出纯水，蒸馏水等水，甲醇、乙醇等醇类。通过涂覆组合物含有溶剂，可以提升涂布于微针时的操作性，而且可以通过干燥工序容易地去除。

在涂覆组合物含有溶剂的情况，由于溶剂在干燥工序中被去除，涂覆组合物中的成分组成比不会反映到涂层。

也就是说，在制造微针装置时，是借助干燥被涂布于微针上的涂覆组合物，来形成涂层。干燥工序中，在涂覆组合物中所含的溶剂被去除的同时，甘油蒸发，甘油的含量可能下降。甘油本身，例如，在常温下的减压干燥中不会变成固体。

作为高分子载体，可举出聚环氧乙烷、聚羟基甲基纤维素、羟基丙基纤维素、聚羟基丙基甲基纤维素、聚甲基纤维素、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、出芽短梗孢糖、羧甲基纤维素钠、硫酸软骨素、透明质酸、葡聚糖、阿拉伯胶等。再者，被用作高分子载体的聚乙二醇的重量平均分子量，优选为超过600、500000以下。作为高分子载体，优选为与生理活性物质的相溶性(均匀混合的性质)高的载体，特别优选为羟基丙基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、出芽短梗孢糖。

涂覆组合物10的高分子载体的含量，以涂覆组合物10的全质量为基准，为0.005～30质量％，优选为0.01～20质量％，更优选为0.05～10质量％。而且，这种高分子载体，有时必需达到不会发生液体滴垂的某种程度的黏度，作为黏度，在室温(25℃)下，优选为100～100000mPa·s。更优选为500～60000mPa·s的黏度。

上述的成分以外，涂覆组合物10中，还可以视需要添加碳酸丙烯酯、克罗米通(Crotamiton)、L-薄荷醇、薄荷油、柠檬烯、己二酸二异丙酯(diisopropyl adipate)等作为溶解辅助剂或吸收促进剂、或水杨酸甲酯、水杨酸乙二醇酯、L-薄荷醇、瑞香草酚、薄荷油、壬酸香草酰胺、辣椒提取物等作为药效辅助剂。

作为表面活性剂，非离子表面活性剂，离子表面活性剂(阳离子、阴离子、两性)的任何一种皆可，但从安全性的观点来看最好为普通药品基剂所使用的非离子表面活性剂。作为这些化合物，例如可举出蔗糖脂肪酸酯等糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油等。

微针装置的制造方法具备以下工序：准备具有基板及微针的微针阵列的工序，混合FSH、精氨酸及甘油而得到涂覆组合物的工序，将涂覆组合物涂布于微针的工序，与使涂覆组合物干燥以在微针上形成涂层的工序。

作为形成涂层时的干燥条件，优选的是，进行干燥，直到在上述涂层中，精氨酸的质量，相对于FSH的质量而言成为0.07～0.75倍，优选成为0.07～0.6倍，而且甘油的质量，相对于FSH的质量而言成为0.1～2.75倍。再者，涂层中甘油的质量的下限值，相对于FSH的质量而言，优选为0.1倍，更优选为0.25倍，进一步优选为0.5倍。而且，涂层中甘油的质量的上限值，相对于FSH的质量而言，优选为2.75倍，更优选为1.6倍，进一步优选为1倍。

如此的干燥条件，可以适当调整减压度、温度、时间，优选以精氨酸及甘油的质量成为上述范围的方式进行。作为干燥条件，例如可以在减压度1～100Pa、0～40℃、1～100小时的条件下进行，优选为在减压度5～20Pa、室温、10～50小时的条件下干燥。更具体地来说，例如，干燥条件为，室温、10Pa的条件。

接下来，利用图3，说明微针装置的制造方法。再者，在本说明书中，也将图3所示制造方法称为“使用遮板的浸渍法”。

图3(a)、(b)及(c)，为显示微针装置1的制造方法的一个实施方式的示意图。在这个方法中，首先，如图3(a)所示，用刮刀12将涂覆组合物10在遮板11上向箭头A的方向涂刷。通过此，涂覆组合物10被填充于开口部13。接着，如图3(b)所示，将微针3插入遮板11的开口部13。其后，如图3(c)所示，将微针3从遮板11的开口部13拉出。通过此，使涂覆组合物10附着于微针3上。再者，也可以使涂覆组合物10附着于基板2上。其后，通过风干、真空干燥、或这些的组合方法等方法，去除微针3上的涂覆组合物10的挥发成分。通过此，涂层5坚固地附着于微针3上，典型地来说成为玻璃质或固体状态，制成微针装置1。涂层5的水分含量，以涂层5的全量基准来说通常为55质量％以下，优选为30质量％以下，更优选为10质量％以下。经由上述方法，来防止所涂布的涂覆组合物10的液体滴垂，而所谓的液体滴垂，是指涂覆组合物从针尖滴下来，意味着图3(c)中H部分变长。

在微针3上所形成的涂层5的高度H，以图3(b)中所示空隙(间隔)C调整。此空隙C，以从微针3的基底开始到遮板11表面为止的距离(与基板2的厚度无关)定义，依照遮板11的张力与微针3的长度设定。空隙C的距离的范围，优选为0～500μm。也就是说，在空隙C的距离为0的情况，意味着涂覆组合物10对微针3全体进行涂布。微针3上所形成的涂覆组合物10的高度H可依照微针3的高度变动，但通常为10～500μm，优选为30～300μm，更优选为40～250μm。为了将涂覆组合物10中的FSH有效地施用至皮内，优选使之集中存在于微针的一部分，即针的前端部分。而且，从对皮肤的刺激及FSH往皮肤转移效率的观点来看，也优选为从使之平均地存在于微针3的前端至200μm的部分，更优选为使之存在至150μm，进一步优选为使之存在至120μm。涂覆组合物10，若具有高黏度，则容易在微针的一部分形成涂层5。经由这样的方法附着在微针3上的涂覆组合物10，去除挥发成分后，在微针3的前端部分，可形成优选为略为球状或泪滴状的涂层5，在微针3刺穿皮肤的同时插入皮内。

涂层5的干燥后厚度优选为未达50μm，更优选为未达40μm，进一步优选为1～30μm。一般来说，涂层5的厚度，为在干燥后整个微针3表面所测量的平均厚度。涂层5的厚度，可以通过应用多个涂覆组合物10的被膜而增大，也就是说，可借助重复涂布涂覆组合物10的工序任意地增大。

将涂覆组合物10涂布于微针3时，设备的设置环境的温湿度，优选控制为一定。此外，在涂覆组合物10含有水的情况，也可以视需要，使水充满。通过此，可极力防止涂覆组合物10中的水的蒸散。

经由本实施方式的涂覆组合物，可抑制凝集体的生成。凝集体(凝集体)含有率的评价，可利用色谱法将涂覆组合物分离，从峰面积算出凝集体含有率。作为凝集体含有率的评价方法，例如，使用含0.01％聚山梨醇酯(polysorbate)80的磷酸缓冲液，从被涂布于微针的涂覆组合物进行提取后，利用尺寸排阻色谱法，将所得到的提取液分离，将滞留时间比FSH短的级分中所含的蛋白质作为凝集体来评价。

为了治疗，施用本发明的微针装置的方法，例如，可举出使用记载于WO2014/097837的设备，将微针装置撞击或压接于被施用者皮肤表面的方法。具体地来说，微针的前端部的至少一部分穿入该皮肤，成为基因重组型FSH可以从微针穿入部分的涂层，被吸收到被施用者体内的状态。其后，保持基因重组型FSH可以被吸收到被施用者体内的状态后，从皮肤表面拿走微针装置。保持微针穿入皮肤的状态的时间(穿刺时间)，可以为10分钟以内、1分钟以内、30秒以内或10秒以内，可以为0.5秒以上。

从减轻被施用者的负担的观点来看，穿刺时间优选为较短。穿刺时间越长，微针损伤真皮组织、或皮肤产生极微量出血的疑虑就越高。

此外，例如，提供一种基因重组型FSH的施用方法，其包含：把具备将含有基因重组型FSH(30～600IU)的组合物涂布于微针的前端部所形成的涂层的微针装置，以上述方法(例如，穿刺时间0.5秒～1分钟)应用于被施用者的皮肤。从应用微针装置时开始，到血浆中FSH的浓度成为最高为止的时间(Tmax)，例如，为约3～8小时。鉴于内因性激素在生理上是被脉冲状地释出，可知Tmax在上述范围内时，则微针装置容易发挥期待的药效，而且，也不易发生副作用。

实施例

以下，利用实施例，对本发明做更详细的说明。

(1)含量均匀性试验1

将依照表1的记载调配而成的参考例1～3的涂覆剂，涂布于微针。再者，表1中的数字，代表相对于涂覆剂全体而言的质量％。

接下来，参考例1，2是在约40％RH的条件下涂布10根，参考例3在90％RH的条件下涂布20根。一一回收涂布于微针的涂覆剂，测量各涂覆剂中遗传重组型卵泡刺激激素(以下，也简称为“FSH”。)的含量。算出所得到的FSH含量的平均值、标准偏差SD、变动系数CV。再者，所谓变动系数CV，为标准偏差除以平均值的值。

[表1]

结果示于表2。在包含甘油的参考例1中，变动系数为7.2，与包含丙二醇的参考例2及包含出芽短梗孢糖的参考例3相比，含量的波动较小。

[表2]

	参考例1	参考例2	参考例3
				涂布环境湿度	40％RH	40％RH	90％RH
平均值[μg]	58.2	78.1	21.9
				标准偏差SD[μg]	4.2	23.1	4.5
变动系数CV[％]	7.2	29.6	20.5

(2)凝集试验1

依照表3的记载，调配参考例4～7及实施例1的涂覆剂。将所得到的涂覆组合物，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，将微针阵列进行减压干燥。接下来，包装所得到的微针装置，在40℃下保存2周后，对凝集体含有率以如下方式进行评价。再者，滞留时间比FSH长的级份中，不含蛋白质。

<凝集体含有率的评价方法>

利用含0.01％聚山梨醇酯80的磷酸缓冲液，从被涂布于微针的涂覆组合物进行提取。接下来，利用尺寸排阻色谱法，将所得到的提取液分离，将滞留时间比FSH短的级份中所含的蛋白质作为凝集体来评价。

[表3]

	参考例4	参考例5	参考例6	参考例[7	实施例1
						FSH	33.3	31	31	31	31
甘油	53.3	49.7	49.7	49.7	49.7
						海藻糖	-	5.5	-	-	-
葡萄糖	-	-	5.5	-	-
						麦芽糖	-	-	-	5.5	-
精氨酸/柠檬酸	-	-	-	-	5.5
						纯水	13.3	13.8	13.8	13.8	13.8
合计	99.9	100	100	100	100

结果示于图4。如图4所示，使用精氨酸+柠檬酸的实施例1，从抑制FSH凝集体生成的观点来看是优异的。

(3)凝集试验2

依照表4的记载将FSH、甘油、精氨酸、酸及纯水混合，一一调配pH8的涂覆组合物。使用5N盐酸、磷酸、5N硫酸、硼酸、柠檬酸、酒石酸、醋酸、乳酸作为酸。将所得到的涂覆组合物，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，将微针阵列进行减压干燥。接下来，包装所得到的微针装置，在40℃下保存2周后，评价凝集体含有率。再者，凝集体含有率的评价，以和凝集试验1同样的方式进行。

结果示于表5。在实施例2～9中，在含有5N盐酸、5N硫酸或醋酸的实施例2、4或8中，FSH凝集体少量生成，但是在实施例3、5～7或9中，FSH凝集体完全没有生成。

[表5]

	凝集体含有率[％]
		实施例2	11.5
实施例3	0
		实施例4	2
实施例5	0
		实施例6	0
实施例7	0
		实施例8	0.3
实施例9	0

(4)性状试验1

依照表6的记载，调配含有FSH、甘油、精氨酸、柠檬酸及纯水的实施例10～13及参考例10～12的涂覆组合物。将所得到的涂覆组合物，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，将微针阵列进行减压干燥。接下来，包装所得到的微针装置，在40℃下保存2周后，评价涂层中FSH的溶解性、及FSH的凝集体含有率。再者，凝集体含有率的评价，以和凝集试验1同样的方式进行。

[表6]

	FSH	甘油	精氨酸	柠檬酸	纯水
						实施例10	100	120	7.5	2.5	30
实施例11	100	120	15	5	30
						实施例12	100	120	30	10	30
实施例13	100	120	60	20	30
						参考例10	100	120	3	1	30
参考例11	100	120	90	30	30
						参考例12	100	120	120	40	30

结果示于表7。在使用实施例10～13的涂覆组合物的微针装置中，涂层中FSH的溶解性优异，FSH的凝集体生成也受到抑制。另一方面，在使用参考例10的涂覆组合物的情况下，含有FSH的凝集体，在使用参考例11及12的涂覆组合物的情况下，FSH的溶解性低。

[表7]

(5)液体滴垂抑制试验

依照表8的记载，混合FSH、甘油、精氨酸、柠檬酸及纯水，调配实施例14～16及参考例13的涂覆组合物。针对所得到的涂覆组合物，目视观察不溶物的有无。将不存在不溶物的情况评价为“o”，将存在不溶物的情况评价为“×”。

此外，将所得到的涂覆组合物，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，对微针阵列进行减压干燥，得到微针装置。接下来，使用数字显微镜(Keyence公司制)，观察所得到的微针装置的涂层的性状(液体滴垂的有无)。将没有观察到液体滴垂的情况评价为“A”，将观察到液体滴垂的情况评价为“B”。

[表8]

	FSH	甘油	精氨酸	柠檬酸	纯水
						实施例14	100	275	13.4	4.5	69
实施例15	100	177	13.4	4.5	44
						实施例16	100	118	13.4	4.5	29
参考例13	100	471	13.4	4.5	118

结果示于表9。在使用实施例14～16的涂覆组合物的微针装置中，FSH被充分溶解。另一方面，在使用参考例13的涂覆组合物的微针装置中，观察到液体滴垂。

[表9]

	溶解性	性状
			实施例14	○	A
实施例15	○	A
			实施例16	○	A
参考例13	○	B

(6)干燥的影响

将实施例17的涂覆组合物涂布于微针后，以气相色谱法测量减压干燥前的涂覆组合物中FSH、精氨酸、甘油及柠檬酸的含量。接下来，在室温、10Pa的条件下进行减压干燥后，同样地，以气相色谱法测量涂层中FSH、精氨酸、甘油及柠檬酸的含量。再者，实施例17的涂覆组合物，为以表10中的减压干燥前的比例混合FSH、甘油、精氨酸、柠檬酸及水而得的组合物。

结果示于表10。减压干燥前的涂覆组合物中各成分的含有率，和调配涂覆组合物时的各成分的掺合比例几乎相同。另一方面，减压干燥后的涂层中，不仅水的含有率，甘油的含有率也下降。也就是说，可以说经由甘油和水一起蒸发，FSH的含量均匀性优异，液体滴垂更加受到抑制。此外，经由延长减压干燥时间，甘油的含有率进一步下降。

[表10]

(7)含量均匀性试验2

将依照表11的记载调配而成的实施例18及19的涂覆剂，涂布于微针。再者，表11中的数字，意味着相对于涂覆剂全体而言的质量％。

接下来，实施例18及19在约40％RH的条件下涂布20根。一一回收涂布于微针的涂覆剂，测量各涂覆剂中遗传重组型卵泡刺激激素(以下，也简称为“FSH”)的含量。算出所得到的FSH含量的平均值、标准偏差SD、变动系数CV。再者，所谓变动系数CV，为标准偏差除以平均值的值。

[表11]

	实施例18	实施例19
			FSH	35.0	21.6
甘油	40.0	59.5
			精氨酸	5.0	2.9
柠檬酸	-	1.0
			纯水	20.0	15.0
合计	100	100

结果示于表12。实施例18及19的涂覆剂，两者的含量的波动皆小。

[表12]

	实施例18	实施例19
			涂布环境温度	40％RH	40％RH
平均值[μg]	17.4	4.6
			标准偏差SD[μg]	0.7	0.3
变动系数CV[％]	3.8	6.3

(8)凝集试验3

依照表13的记载，调配实施例20的涂覆剂。将所得到的涂覆剂，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，将微针阵列进行减压干燥。接下来，包装所得到的微针装置，在40℃下保存2周后，评价凝集体含有率。再者，凝集体含有率的评价，以和凝集试验1同样的方式进行，滞留时间比FSH长的级份中，不含蛋白质。

[表13]

	实施例20
		FSH	35.0
甘油	40.0
		精氨酸	5.0
柠檬酸	-
		纯水	20.0
合计	100

实施例20的涂覆剂，即使是40℃下保存2周后，凝集体含有率也为3.8％。

(9)性状试验2

依照表14的记载，调配含有FSH、甘油、精氨酸、柠檬酸及纯水的实施例21及22的涂覆剂。将所得到的涂覆剂，以使用遮板的浸渍法，涂布于微针阵列的微针的前端部，将微针阵列进行减压干燥。接下来，包装所得到的微针装置，在40℃下保存2周后，评价涂层中FSH的溶解性、及FSH的凝集体含有率。再者，凝集体含有率的评价，以和凝集试验1同样的方式进行。

[表14]

	实施例21	实施例22
			FSH	100	100
甘油	120	120
			精氨酸	6	75
柠檬酸	2	25
			纯水	30	30

结果示于表15。在使用实施例21及22的涂覆剂的微针装置中，涂层中FSH的溶解性优异，FSH的凝集体的生成也受到抑制。

[表15]

	溶解性	凝集体含有率[％]
			实施例21	○	0.2
实施例22	○	0

(10)微针装置的应用

将相对于FSH 100质量份，混合甘油100质量份、精氨酸10质量份及其他成分100质量份调制而成的涂覆剂，涂布于微针的前端部后，使之干燥，得到微针装置。利用施用装置，将所得到的微针装置应用于被施用者的皮肤上。此时，穿刺时间设定为10秒。经时性地采取被施用者的血液，测量血浆中FSH的浓度。

到血浆中FSH的浓度成为最大为止所需要的时间(Tmax)，为约8小时。

【符号说明】

1...微针装置、2...基板、3...微针、5...涂层、10...涂覆组合物、11...遮板、12...刮刀、13...开口部。

Claims

1.一种微针装置，其是具备基板、配置于基板上的微针、和形成于微针上的涂层的微针装置，

其中所述涂层含有基因重组型卵泡刺激激素、精氨酸及甘油，

在所述涂层中，

精氨酸的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.07～0.75倍，

甘油的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.1～2.75倍，

其中所述涂层进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

2.权利要求1所述的微针装置，其中在所述涂层中，精氨酸的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.07～0.6倍。

3.一种微针装置的制造方法，其具备：

准备具有基板及微针的微针阵列的工序；

混合基因重组型卵泡刺激激素、精氨酸及甘油而得到涂覆组合物的工序；

将涂覆组合物涂布于微针的工序；和

使涂覆组合物干燥以在微针上形成涂层的工序，且

进行干燥，直到所述涂层中

精氨酸的质量成为基因重组型卵泡刺激激素的质量的0.07～0.75倍，且

甘油的质量成为基因重组型卵泡刺激激素的质量的0.1～2.75倍，

其中所述涂覆组合物进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

4.权利要求3所述的微针装置的制造方法，其中进行干燥，直到所述涂层中

精氨酸的质量成为基因重组型卵泡刺激激素的质量的0.07～0.6倍，且

甘油的质量成为基因重组型卵泡刺激激素的质量的0.1～2.75倍。

5.权利要求3或4所述的方法，其中在所述涂覆组合物中，

甘油的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为1～3倍。

6.权利要求3或4所述的方法，其中在所述涂覆组合物中，精氨酸的质量相对于基因重组型卵泡刺激激素的质量为0.07～0.6倍。

7.一种微针装置，其是通过权利要求3～6中任一项所述的方法制造。

8.一种微针用涂覆剂，其含有基因重组型卵泡刺激激素、精氨酸及甘油，

其中以基因重组型卵泡刺激激素的质量为基准，

精氨酸的质量为0.07～0.75倍，且

甘油的质量为1～3倍，

其中所述微针用涂覆剂进一步含有选自由柠檬酸、磷酸、硼酸、酒石酸及乳酸组成的组的酸。

9.权利要求8所述的微针用涂覆剂，其含有基因重组型卵泡刺激激素、精氨酸及甘油，

其中以基因重组型卵泡刺激激素的质量为基准，精氨酸的质量为0.07～0.6倍。