CN107056800A - 一种长苞铁杉中新成分及其分离方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从长苞铁杉中分离纯化新化合物的方法以及该新化合物的应用。本发明的特点是采用传统提取分离方法结合现代分离技术从长苞铁杉中分离纯化新化合物：包括溶剂浸泡提取，萃取分离，正相柱色谱分离，半制备高效液相色谱分离等方法。分离纯化得到的新化合物命名为tsugadiflavonol A。本发明提供的新成分的提取分离方法成功从长苞铁杉中提取分离得到一个新的二聚体黄酮类成分，为长苞铁杉的进一步药理药效研究提供了物质基础。经初步活性研究表明，tsugadiflavonol A具有较好的抗氧化作用，具有很好的开发应用前景。

Description

一种长苞铁杉中新成分及其分离方法和应用

技术领域

本发明涉及化学领域分离提取技术，具体地，涉及长苞铁杉中一个新的二聚体黄烷醇化合物，及其分离制备方法和应用。

背景技术

长苞铁杉(Tsuga longibracteata)属于裸子植物松科铁杉属下的一个残遗种类，分布于广东，江西，广西，福建，湖南，贵州等地，为我国特有的植物。这种树的树干挺拔，硬度较大，材质优良，用途广泛，经济价值高，树皮可提取拷胶，可接骨。

铁杉属植物中主要成分有木脂素类、三萜类和黄酮类化合物。黄酮类化合物是一类存在于多种植物中的多酚类化合物，具有不同的生物活性和药理作用。目前为止还没有相关长苞铁杉树皮中化学成分提取分离技术的报道。本专利公开了一种从长苞铁杉树皮中分离提取一个新的二聚体黄烷醇化合物的方法，为长苞铁杉质量评价和药效研究提供了物质基础。

发明内容

本发明提供了一种从长苞铁杉中分离得到新的二聚体黄烷醇类化合物并提供了制备该类化合物的方法，该提取方法可控性和重现性好，操作方便，适合微量物质的提取分离。

其中，本发明提供了一种长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分，所述新化学成分的名称为：tsugadiflavonol A，其化学结构式如下：

本发明还提供了一种长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分提取分离方法，包括以下步骤。

1)取长苞铁杉树皮部分，经干燥、粉碎后，用体积分数70～95％乙醇回流提取1～4次，减压浓缩得到乙醇浸膏；

2)将步骤1)中所得乙醇浸膏分散于热水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取1～4次，减压浓缩得到各部位浸膏；

3)将步骤2)中乙酸乙酯部位浸膏通过硅胶柱色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯以不同体积比梯度洗脱，结合TLC检测方法，根据极性不同分为若干个组分；

4)将步骤3)中某个组分过制备HPLC，用甲醇-水等度洗脱，分为若干个亚组分；

5)将步骤4)中得到的某个亚组分过制备HPLC，用甲醇-水等度洗脱，得到此新化合物。

上述步骤4)和步骤5)用乙腈-水代替甲醇-水等度洗脱，也可以得到基本类似结果。

本发明从长苞铁杉中提取黄烷醇类化合物的优点在于，首先通过硅胶柱色谱，用TLC方法结合紫外跟踪进行粗分，再利用制备HPLC色谱分离得到单体，整个过程只使用一次硅胶柱色谱，减少样品损失，分离方法使用制备HPLC可控性和重现性好，微量成分不易流失，操作也较简单。

附图说明

图1为本发明二聚体黄酮类化合物的HR-ESI-MS；

图2为本发明二聚体黄酮类化合物的¹H-NMR光谱图；

图3为本发明二聚体黄酮类化合物的¹³C-NMR光谱图；

图4为本发明二聚体黄酮类化合物的核磁共振HSQC光谱图；

图5为本发明二聚体黄酮类化合物的核磁共振HMBC光谱图。

具体实施方式

现结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明所述的二聚体黄酮类化合物的制备方法包括以下步骤：

1)取长苞铁杉干燥树皮3.7kg，经粉碎后，用体积分数95％乙醇常温提取3次，每次7天，减压浓缩得到乙醇浸膏610g；

2)将步骤1)中乙醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，减压浓缩得到各部位浸膏；

3)将步骤2)中乙酸乙酯部位浸膏点388g，上硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以体积比3:1、1:1、1:2、10:1梯度洗脱，结合TLC检测方法，根据极性不同分为5个组分，Fr.1～Fr.5，以下每个组分都结合TLC分析；

4)将步骤3)中第四个组分Fr.3过制备HPLC，用体积分数55％的甲醇-水，色谱柱用C₁₈，20×250mm，流速20mL/min洗脱,检测波长230nm，收集5～15min之间馏分分为5个部分Fr.4.1～Fr.4.5；

5)步骤4)中Fr.4.3过制备HPLC，用体积分数45％甲醇-水，色谱柱用C₁₈，10×250mm，流速4mL/min洗脱,收集8～12min之间色谱峰，检测波长254nm，得到新化合物。

上述步骤1)中回流提取用的含水乙醇体积分数85％，90％，100％，回流提取1次，2次，4次；步骤2)中萃取1次，2次，4次；步骤4)中用体积分数45％，50％，55％的乙腈-水；步骤5)中用体积分数40％，45％，50％的乙腈-水。步骤同实施例1，也可以取得本发明所述的有益效果。

本发明进行TLC检识的条件：展开剂为石油醚-乙酸乙酯系统及氯仿-甲醇系统，显色剂a：紫外灯(254nm)下观察荧光；显色剂b：10％硫酸乙醇喷洒，105℃烘烤至显色。

结构鉴定：利用的光谱技术，主要包括核磁共振谱(¹H-NMR、¹³C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC)和质谱分析(HR-ESI-MS)鉴定化合物的结构。

该化合物为黄色胶状物，遇三氯化铁试剂显蓝色。HR-ESI-MS[M+H]⁺:559.12244(计算值559.12349),结合NMR谱确定化合物的分子式为C₃₀H₂₂O₁₁,通过光谱技术，确定该化合物为tsugadiflavonol A。其核磁数据见表1。

表1新骨架化合物的核磁数据(400/100MHz，CD₃OD)：

为进一步说明本发明在医药领域中的作用，下面通过部分体外抗氧化活性试验来说明。

本试验采用DPPH分光光度法用以评价本发明制备的单体化合物的抗氧化能力。

取4只试管，其中1管为空白组，取2ml不同浓度待测试样液加入2ml 0.16mmol/LDPPH乙醇溶液，再加入2ml 0.05mol/L Tris-HC1(pH＝7.4)缓冲液，25℃反应20min，在517nm处测定吸光度值为Ai，空白对照组以同体积的蒸馏水代替试样液。每个试样组均做6个重复，计算其平均值。DPPH自由基的清除率计算公式:

Ai为试样的平均吸光度；Ao为空白的平均吸光度。

计算结果供试样品对DPPH清除率的IC₅₀值为21-68μg/mg。实验结果表明，供试样品对DPPH自由基具有一定的清除率，且清除率随供试样品溶液浓度的增大而提高。表明tsugadiflavonol A具有一定的的抗氧化活性。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.一种长苞铁杉中的新成分，其特征在于：所述新成分的化学名称为tsugadiflavonolA，化学结构式为：

2.一种长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取长苞铁杉树皮，经干燥、粉碎后，用体积分数70～95％乙醇常温浸泡提取1～4次，每次提取1～10天，合并提取液减压浓缩得到乙醇浸膏；

2)将步骤1)中所得乙醇浸膏分散于水后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取1～4次，减压浓缩得到各部位浸膏；

3)将步骤2)中乙酸乙酯部位浸膏合并后上硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯以不同体积比进行梯度洗脱，结合TLC检测方法，根据极性不同分为若干个组分；

4)将步骤3)中某个组分过制备HPLC，用甲醇-水40％～100％等度洗脱，分为若干个亚组分；

5)将步骤4)中得到的某个亚组分过制备HPLC，用甲醇-水40％～100％等度洗脱，得到新化合物tsugadiflavonol A。

3.如权利要求2所述长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于步骤1)中所用体积分数75～95％乙醇回流提取1～4次，每次提取5～10天，优选体积分数85～95％乙醇回流提取2～4次，每次提取6～9天。

4.如权利要求2所述长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于步骤2)中萃取1～4次。

5.如权利要求2所述长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于步骤3)中用石油醚-乙酸乙酯以体积比3:1、1:1、1:2、10:1进行梯度洗脱，根据黄烷醇极性不同分为5～10个组分，优选6～9个组分。

6.如权利要求2所述长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于步骤4)用甲醇-水40％～100％等度洗脱，优选45％～95％，分为2～6亚组分，优选3～6亚组分。

7.如权利要求2所述长苞铁杉中新二聚体黄酮类成分的提取分离方法，其特征在于步骤5)中所用甲醇-水40％～100％等度洗脱，优选45％～85％。

8.如权利要求1所述新成分在防氧化方面的应用。