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CN105916856B - 作为酪蛋白激酶1d/e抑制剂的取代的4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪衍生物 - Google Patents

作为酪蛋白激酶1d/e抑制剂的取代的4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪衍生物 Download PDF

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CN105916856B CN201480073199.9A CN201480073199A CN105916856B CN 105916856 B CN105916856 B CN 105916856B CN 201480073199 A CN201480073199 A CN 201480073199A CN 105916856 B CN105916856 B CN 105916856B
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Abstract

本发明披露了式(I)化合物及其药用盐。所述式(I)化合物抑制蛋白激酶活性，由此适合用作抗癌剂。

Description

作为酪蛋白激酶1D/E抑制剂的取代的4,5,6,7-四氢吡唑并 [1,5-A]吡嗪衍生物
相关申请案的相互参考
本申请案遵循35 U.S.C.§119(e)授权以2013年11月14日申请的美国临时专利申请案第61/904,116号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本申请中。
技术领域
本发明涉及适用作蛋白激酶抑制剂的新颖取代的吡唑。本发明亦涉及使用所述化合物治疗增生性及其他类型疾病的方法及含有所述化合物的药物组合物。
背景技术
本发明涉及抑制蛋白激酶的取代的吡唑化合物、含有蛋白激酶抑制化合物的组合物及使用蛋白激酶抑制剂治疗疾病的方法，所述疾病的特征为蛋白激酶之过度表达或上调。蛋白激酶通过实现由核苷三磷酸至与信号传导路径有关的蛋白质受体的磷酰基转移来调节细胞内信号转导。存在细胞外及其他刺激导致发生于细胞内的多种细胞反应的多种激酶及路径。胞外刺激可影响与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子的活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成的控制及细胞周期的调节相关的一或多个细胞反应。
许多疾病与由蛋白激酶介导的事件触发的异常细胞反应相关。这些疾病包括自体免疫疾病、炎症性疾病、神经疾病和神经退化性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症及哮喘、阿兹海默氏病(Alzheimer's disease)或激素相关疾病。因此，已在药物化学中进行了大量工作以寻找有效作为治疗剂的蛋白激酶抑制剂。
丝胺酸/苏胺酸激酶为一类作为最具前景的小分子抑制剂的药物标靶的蛋白激酶。丝胺酸/苏胺酸激酶的抑制可能与癌症、糖尿病及各种发炎性病症的治疗有关。成功研发作为Bcr/Abl蛋白激酶抑制剂进一步表明蛋白激酶为潜在癌症疗法的有效药物标靶。
酪蛋白激酶1(CK1)属于丝胺酸/苏胺酸激酶家族。在哺乳动物中，酶以七种同工酶形式存在：α、β、γ1、γ2、γ3、δ和ε。通过使不同基质蛋白质磷酸化，这些同工型能够使蛋白质的功能活化、不活化、稳定或不稳定，从而调整多个类型不同有机体的功能。例如，控制异常细胞生长的重要蛋白质的肿瘤抑制因子p53和致癌基因mdm2为酪蛋白激酶1的底物。
哺乳动物酪蛋白激酶1δ和酪蛋白激酶1ε为包括信号传导、DNA修复及昼夜节律的不同细胞生长及存活过程的关键调节剂。其具有与其他同工型类似的激酶域。然而，其N端和C端域不同于其他同工型。C端域具有多个自体磷酸化位点，且其视为与调节自溶酶活性有关。通过酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε使p53磷酸化导致p53与mdm2之间的相互作用随之发生变化。亦已知酪蛋白激酶1ε或酪蛋白激酶1δ与形成细胞分裂期间作为中心体的轴相关的调节蛋白质有关，且酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε与通过TRAIL(肿瘤坏死因子相关的细胞凋亡诱导因子)和Fas介导的细胞凋亡有关。此外报道通过非选择性酪蛋白激酶1抑制性化合物IC261抑制酪蛋白激酶1ε或酪蛋白激酶1δ会降低活体外及活体内胰腺肿瘤细胞生长(Brockschmidt等人,Gut,57(6):799-806(2008))。因此，预期抑制酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε功能的药物将在疾病、尤其癌症的发展中发挥重要表型及治疗性作用。
本发明涉及有效抑制酪蛋白激酶1δ或酪蛋白激酶1ε的新类别的取代的吡唑。这些新颖化合物适用作具有对于其可用药性重要的所需稳定性、生物可用性、治疗指数及毒性值的药物。
发明内容
本发明涉及式(I)至(V)的取代的吡唑化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其抑制蛋白激酶、尤其蛋白激酶CK1用于治疗癌症。
本发明亦提供制造本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂合物或前药的方法及中间物。
本发明亦提供包含药用载体及至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂合物或前药的药物组合物。
本发明亦提供抑制蛋白激酶CK1的活性的方法，其包含向需要该治疗的宿主给药治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂合物或前药。
本发明亦提供治疗癌症的方法，其包含向需要此治疗的主体给药治疗有效量的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药中的至少一个。
本发明亦提供用于治疗的本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂合物或前药。
本发明亦提供本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶剂合物或前药在制备用于治疗人类患者的癌症，尤其易于经由抑制CK1酶来治疗的癌症的药物中的用途。
本发明的这些和其他特征将随本发明继续而得以充分阐述。
实施方式
本发明提供适用作治疗剂的新颖的取代的吡唑化合物、采用所述新颖化合物的药物组合物以及使用所述化合物的方法。
本发明披露，揭示式(I)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，
其中：
X独立地选自O和NH；
R1独立地选自经1-5个R5取代的碳环基，以及包含碳原子和1至3个选自N、NR4、O、S的杂原子且经1-5个R5取代的杂环基；
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e和R3f独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b、或R3c和R3d、或R3e和R3f与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3a和R3c或R3b和R3d一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经1-5个R8取代的杂环；
R4独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R6独立地选自H、-C(＝O)Rb、-CO(＝O)Rb、-S(O)pRc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、-(CRdRd)rCN、NO2、-(CRdRd)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)r-芳基、-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H；任选经F、Cl、Br取代的C1-5烷基；C3-6环烷基；以及苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在另一方面披露了式(II)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，
其中：
R1独立地选自经1-4个R5取代的芳基，以及包含碳原子和1至3个选自N、NR4、O、S的杂原子且经1-4个R5取代的5至12元杂芳基；
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a、R3b、R3c和R3d独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b、或R3c和R3d、或R3e和R3f与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经0-5个Re取代；
或者，R3a和R3c或R3b和R3d一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经0-5个Re取代的杂环；
R4独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R6独立地选自H、-C(＝O)Rb、-CO(＝O)Rb、-S(O)pRc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、-(CRdRd)rCN、NO2、-(CRdRd)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、CO2H、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在另一实施方案披露了式(II)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R1独立地选自芳基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、噁唑基、异噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1,2,4-噻二唑基、异噻唑基、喹啉基、异喹啉基，各自经1-4个R4和R5取代；
R4在每次出现时独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-CN、-ORb、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNHC(＝O)Rb、-(CH2)rNHC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNHC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNHS(O)2NRaRa、-(CH2)rNHS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、CO2H、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4；
且其他变量如以上式(II)中所定义。
在另一实施方案披露了式(II)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R1独立地选自：
R4在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-CN、-ORb、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNHC(＝O)Rb、-(CH2)rNHC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNHC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNHS(O)2NRaRa、-(CH2)rNHS(O)2Rc、(CH2)r-C3-6环烷基、经0-3个Re取代的-(CH2)r-芳基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基和CO2H；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4；
且其他变量如以上式(II)中所定义。
在另一方面披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，
其中：
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a、R3b、R3c和R3d独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3a和R3c或R3b和R3d一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经1-5个R8取代的杂环；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、-S(O)pRc、-CN、-ORb、NRaRa、C3-6环烷基、经0-3个Re取代的芳基和经0-3个Re取代的杂环基；
R6独立地选自H、-C(＝O)Rb、-CO(＝O)Rb、-S(O)pRc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、-(CRdRd)rCN、NO2、-(CRdRd)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在另一实施方案披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R2为
R3a和R3b独立地选自H、CH2CH3、CH3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CH2CH2F、CF3、CH2OCHF2、CH2CN、CH2CH2CN、CH2OC1-4烷基、C(CH3)3、CH(CH3)2、C(CH3)2OH、C(CH3)2F、C(＝O)NH-C3-6环烷基、C(＝O)NH-杂环基和-CH2-杂环基，其中所述杂环基独立地选自：
R3c和R3d独立地选自H、CH3、CH(CH3)2、CF3和C3-6环烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、-S(O)pRc、-CN、-ORb、NRaRa、C3-6环烷基和经0-3个Re取代的芳基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、-(CH2)rCN、NO2、-(CH2)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)Rb、-NHC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)NRaRa、-C(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NHS(O)2NRaRa、-NHS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C3-6环烷基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和-(CH2)r-C3-6环烷基；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4；
且其他变量如以上式(III)中所定义。
在另一实施方案披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R2为
R7在每次出现时独立选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的-OC1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、经0-5个Re取代的C1-4烷基、经0-5个Re取代的C3-6环烷基、经0-5个Re取代的芳基，以及经0-5个Re取代的杂环基；
Ra在每次出现时独立选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、-经0-5个Re取代的(CH2)r-C3-10碳环基，以及经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或者Ra与Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环，所述杂环独立选自 以及
Re在每次出现时独立选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基，以及-(CH2)r-C3-6环烷基；
且其他变量如以上式(III)中所定义。
在另一实施方案披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R2独立地选自：
R3a和R3b独立地选自H、CH2CH3、CH3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CH2CH2F、CF3、CH2OCHF2、CH2CN、CH2CH2CN、CH2OC1-4烷基、C(CH3)3、CH(CH3)2、C(CH3)2OH、C(CH3)2F、C(＝O)NH-C3-6环烷基、C(＝O)NH-杂环基和-CH2-杂环基，其中所述杂环基独立地选自：
R3c和R3d独立地选自H、CH3、CH(CH3)2、CF3和C3-6环烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、-S(O)pRc、-CN、-ORb、NRaRa、C3-6环烷基和经0-3个Re取代的芳基；
R6在每次出现时独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、-(CH2)rCN、NO2、-(CH2)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)Rb、-NHC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)NRaRa、-C(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NHS(O)2NRaRa、-NHS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C3-6环烷基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和-(CH2)r-C3-6环烷基；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4；
且其他变量如以上式(III)中所定义。
在另一实施方案披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶合物，其中R3a和R3b或R3c和R3d与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3c和R3d与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，其经1-5个R8取代；且其他变量如以上式(III)中所定义。
在另一方面披露了式(IV)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶合物，
其中：
环A独立选自C3-6环烷基和杂环基；
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、-S(O)pRc、-CN、-ORb、NRaRa、C3-6环烷基、经0-3个Re取代的芳基和经0-3个Re取代的杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)Rb、-NHC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)NRaRa、-C(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O及CO2H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和-(CH2)r-C3-6环烷基；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在另一实施方案披露了式(III)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶剂合物，其中：
R3a和R3c一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子的碳环或杂环，其中所述碳环或杂环经1-5个R8取代；以及
R3b和R3d独立地选自H和C1-4烷基；
且其他变量如以上式(III)中所定义。
在另一方面披露了式(V)化合物，包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物或溶合物，
其中：
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、-S(O)pRc、-CN、-ORb、NRaRa、C3-6环烷基、经0-3个Re取代的芳基和经0-3个Re取代的杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)Rb、-NHC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NHC(＝O)NRaRa、-C(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的芳基和经0-5个Re取代的杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和-(CH2)r-C3-6环烷基；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
所述化合物的所有方面(包括个别变量定义)可与其他方面组合以形成其它化合物。例如，在式(I)的一个实施方案中，R1为苯基，R2为取代的芳基，以及R3为氢。在另一实施方案中，R1为杂芳基，R2为杂芳基，以及R3为取代的烷基。
在某些实施方案中，本发明包括式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为经1-4个R5取代的苯基；
R2为经1-5个R7取代的芳基；
R3a和R3b独立地选自H、CH2CH3、CH3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CH2CH2F、CF3、CH2OCHF2、CH2CN、CH2CH2CN、CH2OC1-4烷基、C(CH3)3、CH(CH3)2、C(CH3)2OH和C(CH3)2F；
R3c和R3d独立地选自H、CH3、CH(CH3)2、CF3和C3-6环烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为经1-4个R5取代的苯基；
R2为经1-5个R7取代的芳基；
R3a和R3b独立地选自H、CH2CH3、CH3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CH2CH2F、CF3、CH2OCHF2、CH2CN、CH2CH2CN、CH2OC1-4烷基、C(CH3)3、CH(CH3)2、C(CH3)2OH和C(CH3)2F；
R3c和R3d独立地选自H、CH3、CH(CH3)2、CF3和C3-6环烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的-OC1-4烷基、-S(O)2C1-4烷基、-C(＝O)Rb、-NRaRa、-C(＝O)NRaRa、经0-5个Re取代的C1-4烷基、经0-5个Re取代的C3-6环烷基、经0-5个Re取代的芳基，以及经0-5个Re取代的杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；其中所述杂环独立选自 以及
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为经1-4个R5取代的苯基；
R2为经1-5个R7取代的杂芳基；
R3a和R3b独立地选自H、CH2CH3、CH3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OC1-4烷基、CH2F、CHF2、CH2CH2F、CF3、CH2OCHF2、CH2CN、CH2CH2CN、CH2OC1-4烷基、C(CH3)3、CH(CH3)2、C(CH3)2OH和C(CH3)2F；
R3c和R3d独立地选自H、CH3、CH(CH3)2、CF3和C3-6环烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(III)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为经1-4个R5取代的苯基；
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a和R3b、或R3c和Rd与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
R4在每次出现时独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、＝O、(CRdRd)rCN、NO2、-(CRdRd)rORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb，以及-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、CO2H、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为包含碳原子和1至3个选自N、NR4、O、S的杂原子的杂芳基，其中该杂芳基经1-5个R5取代且选自噻唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、异噁唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、喹啉基和异喹啉基；
R2独立地选自经1-8个R7取代的芳基和包含碳原子和1至4个选自N、NR6、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e和R3f独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b、或R3c和R3d、或R3e和R3f与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3a和R3c、或R3b和R3d与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
R4独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为包含碳原子和1至3个选自N、NR4、O、S的杂原子的杂芳基，其中该杂芳基经1-5个R5取代且选自噻唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、异噁唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、喹啉基和异喹啉基；
R2为经1-5个R7取代的芳基；
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e和R3f独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b、或R3c和R3d、或R3e和R3f与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3a和R3c或R3b和R3d一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经1-5个R8取代的杂环；
R4独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基，经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
在某些实施方案中，本发明包括式(II)化合物或其立体异构体、互变异构体、药用盐、溶合物或前药，其中：
R1为包含碳原子和1至3个选自N、NR4、O、S的杂原子的杂芳基，其中该杂芳基经1-5个R5取代且选自噻唑基、噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、异噁唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、喹啉基和异喹啉基；
R2为包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经1-8个R7取代的杂芳基；
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e和R3f独立地选自H、CN、经1-3个R8取代的C1-4烷基、-C(＝O)ORb、-C(＝O)NRaRa、-C(＝O)Rb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、经1-3个R8取代的-(CH2)r-碳环基和经1-3个R8取代的-(CH2)r-杂环基；
或者，R3a和R3b、或R3c和R3d、或R3e和R3f与它们共同连接的碳原子一起形成螺碳环或螺杂环，所述螺杂环包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子，所述螺碳环或螺杂环各经1-5个R8取代；
或者，R3a和R3c或R3b和R3d一起形成包含碳原子和1至4个选自N、O、S的杂原子且经1-5个R8取代的杂环；
R4独立地选自H和经0-3个Re取代的C1-4烷基；
R5在每次出现时独立地选自H、经0-3个Re取代的C1-4烷基、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-(CH2)rCN、-(CH2)rORb、(CH2)rS(O)pRc、-(CH2)rC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaRa、-(CH2)rC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)Rb、-(CH2)rNRaC(＝O)ORb、-(CH2)rOC(＝O)NRaRa、-(CH2)rNRaC(＝O)NRaRa、-(CH2)rC(＝O)ORb、-(CH2)rS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2NRaRa、-(CH2)rNRaS(O)2Rc、经0-3个Re取代的-(CH2)r-碳环基和经0-3个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R6独立地选自H、-C(＝O)Rb、-CO(＝O)Rb、-S(O)pRc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
R7在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、＝O、CN、NO2、-ORb、-S(O)pRc、-C(＝O)Rb、-(CRdRd)rNRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)ORb、-OC(＝O)NRaRa、-NRaC(＝O)NRaRa、-(CRdRd)rC(＝O)ORb、-S(O)2NRaRa、-NRaS(O)2NRaRa、-NRaS(O)2Rc、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-C3-6碳环基和经0-5个Re取代的-(CRdRd)r-杂环基；
R8在每次出现时独立地选自H、F、Cl、Br、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-6环烷基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-芳基，经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基、CO2H、-(CH2)rORb和-(CH2)rNRaRa；
Ra在每次出现时独立地选自H、CN、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；或Ra和Ra与它们共同连接的氮原子一起形成经0-5个Re取代的杂环；
Rb在每次出现时独立地选自H、经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、经0-5个Re取代的-(CH2)r-C3-10碳环基和经0-5个Re取代的-(CH2)r-杂环基；
Rc在每次出现时独立地选自经0-5个Re取代的C1-6烷基、经0-5个Re取代的C2-6烯基、经0-5个Re取代的C2-6炔基、C3-6碳环基和杂环基；
Rd在每次出现时独立地选自H和经0-5个Re取代的C1-4烷基；
Re在每次出现时独立地选自F、Cl、Br、CN、NO2、＝O、CO2H、经0-5个Rf取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)r-C3-6环烷基、-(CH2)rORf、SRf和-(CH2)rNRfRf；
Rf在每次出现时独立地选自H、C1-5烷基、C3-6环烷基和苯基，或Rf和Rf与它们共同连接的氮原子一起形成任选经C1-4烷基取代的杂环；
p在每次出现时独立地选自0、1和2；以及
r在每次出现时独立地选自0、1、2、3和4。
此外，应了解式(I)-(V)化合物的溶剂合物(例如水合物)亦在本发明范围内。溶剂化方法在本领域通常是已知的。本发明化合物可呈游离或水合物形式。
本发明化合物可具有一或多个不对称中心。除非另外指示，否则本发明化合物的所有手性(对映异构及非对映异构)及外消旋形式均包括于本发明中。烯烃、C＝N双键等等的许多几何异构体亦可存在于化合物中，且所有此类稳定异构体均涵盖于本发明中。对本发明化合物的顺式和反式几何异构体加以描述且其可分离为异构体的混合物或分离的异构形式。本发明化合物可以光学活性或外消旋形式分离。本领域中熟知如何制备光学活性形式，诸如通过将外消旋形式拆分或通过自光学活性起始物质合成。除非具体地指示具体立体化学或异构体形式，否则意指某一结构的所有手性(对映异构及非对映异构)及外消旋形式及所有几何异构体形式。当未具体提及化合物(或不对称碳)的组态(顺、反或R或S)时，则异构体中的任一者或一种以上异构体的混合物是期望的。制备方法可使用外消旋体、对映异构体或非对映异构体作为起始物质。认为制备本发明化合物所使用的所有方法及其中所制备的中间物为本发明的一部分。当制备对映异构性或非对映异构性产物时，其可由例如层析或分步结晶的已知方法分离。本发明化合物及其盐可以多种互变异构形式存在，其中氢原子换位至分子的其他部分且介于分子的原子之间的化学键因此而重排。应了解，所有互变异构形式只要其可存在即包括于本发明中。
定义
以下为本说明书及随附申请专利范围中使用的术语的定义。除非另外指示，否则为本申请中的基团或术语提供的初始定义适用于本说明书及申请专利范围通篇中的个别或作为另一基团的一部分的彼基团或术语。
根据本领域使用的惯例，在本申请中的结构式中用以描述作为部分或取代基与核心或主链结构的连接点的键。
非两文字或符号之间的短划线“-”用于表示取代基的连接点。例如，-CONH2是经由碳原子连接的。
如本申请所用，术语“烷基”或“亚烷基”意欲包括具有指定碳原子数的支链与直链饱和脂族烃基。例如，“C1-10烷基”(或亚烷基)意欲包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C10烷基。另外，例如，“C1-C6烷基”表示具有1至6个碳原子的烷基。烷基可是未经取代的或经取代以使一个或多个氢经另一化学基团置换。烷基的实例包括(但不限于)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)等基团。
“卤代烷基”意欲包括具有指定数目的碳原子的经一或多个卤素取代的支链与直链饱和脂族烃基。卤代烷基的实例包括(但不限于)氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的实例亦包括“氟代烷基”，其意欲包括具有指定数目的碳原子的经一或多个氟原子取代的支链与直链饱和脂族烃基。
术语“卤素”或“卤基”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)及碘。
“卤烷氧基”或“卤代烷基氧基”表示具有指示数目的碳原子的经氧桥连接的如上文所定义的卤代烷基。例如，“C1-6卤烷氧基”意欲包括C1、C2、C3、C4、C5和C6卤烷氧基。卤烷氧基的实例包括(但不限于)三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、五氟乙氧基和其类似基团。类似地，“卤代烷硫基”或“硫卤烷氧基”表示具有指示数目的碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的卤代烷基；例如三氟甲基-S-、五氟乙基-S-等基团。
如本申请所用，“碳环“、“碳环基团”或“碳环基”欲意谓任何稳定3、4、5、6或7元单环或二环或7、8、9、10、11、12或13元二环或三环烃环，其中任一者可为饱和、部分不饱和、不饱和或芳族的。此类碳环的实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷、[2.2.2]二环辛烷、茀基、苯基、萘基、二氢茚基、金刚烷基、蒽基和四氢萘基(萘满)。如上所示，桥连环亦包括于碳环定义中(例如[2.2.2]二环辛烷)。除非另有说明，否则优选碳环为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基和二氢茚基。当使用术语“碳环”、“碳环基团”或“碳环基”时，意欲包括“芳基”。当一或多个碳原子连接两个不相邻碳原子时，出现桥连环。优选桥为一或两个碳原子。应注意，桥总是将单环转变成三环。当环经桥连时，对于该环所列举的取代基亦可存在于桥上。
术语“芳基”是指在环部分中具有6至15个碳原子的单环、二环、三环芳族烃基，诸如苯基、萘基、联苯及二苯基，其各自可经取代。二环或三环芳基必须包括至少一个完全芳族环但另外一或多个稠环可为芳族或非芳族环。当芳基经另一杂环取代时，该环可经由碳原子或杂原子与芳基连接且该环转而在价数容许时任选经一至两个取代基取代。
术语“芳氧基”、“芳氨基”、“芳基烷氨基”、“芳基硫基”、“芳基烷酰基氨基”、“芳基磺酰基”、“芳基烷氧基”、“芳基亚磺酰基”、“芳基杂芳基”、“芳基烷硫基”、“芳基羰基”、“芳基烯基”或“芳烷基磺酰基”分别是指键结至下述基团的芳基或经取代芳基：氧；氨基；烷氨基；硫基；烷酰基氨基；磺酰基；烷氧基；亚磺酰基；杂芳基或经取代杂芳基；烷硫基；羰基；烯基；或烷基磺酰基。
术语“烯基”是指具有2至20个碳原子、优选2至15个碳原子且最优选2至8个碳原子且具有一至四个双键的直链或分支链烃基。
术语“炔基”是指具有2至20个碳原子、优选2至15个碳原子且最优选2至8个碳原子且具有一至四个参键的直链或分支链烃基。
术语“环烷基”是指优选含有1至3个环且每环具有3至7个碳的任选取代的饱和环状烃环系统。示例性基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基和金刚烷基。示例性取代基包括一或多个如上所述的烷基，或一或多个以上描述为烷基取代基的基团。因此，在式(I)化合物中，术语“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、二环辛基等，以及以下环系统： 等基团，其任选可在环的任何可用原子处经取代。优选环烷基包括环丙基、环戊基、环己基、
如本申请中所用，术语“杂环”、“杂环基”或“杂环”欲意谓稳定的4、5、6或7元单环或二环或7、8、9、10、11、12、13或14元二环杂环，其为饱和、部分不饱和或完全不饱和或芳族环，且由碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O及S的杂原子组成，且包括以上定义的杂环中的任一者稠合至苯环的任何二环基团。氮及硫杂原子可任选氧化(亦即N→O及S(O)p)。氮原子可经取代或未经取代(亦即N或NR，其中R为H或另一取代基(若经定义))。杂环可在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接。若所得化合物稳定，则本申请所述的杂环可在碳原子或氮原子上经取代。杂环中的氮原子可任选四级铵化。优选地，当杂环中的S及O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。杂环中S及O原子的总数优选不超过1。当使用术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环(heterocyclic ring)”或“杂环基(heterocyclic group)”时，意欲包括杂芳基。
杂环的实例包括(但不限于)吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻喃基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、吲哚醌酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噻唑并吡啶基、异噁唑基、异噁唑并吡啶基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羟吲哚基、嘧啶基、吩啶基、吩啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、向日葵基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啉基、2-吡咯啶酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喏啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基(thienyl)、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基(thio苯基)、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和基。亦包括含有例如上述杂环的稠环及螺化合物。
优选5至10元杂环包括(但不限于)吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、吡嗪基、哌嗪基、哌啶基、咪唑基、咪唑啶基、吲哚基、四唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、噁二唑基、噁唑烷基、四氢呋喃基、噻二嗪基、噻二唑基、噻唑基、三嗪基、三唑基、苯并咪唑基、1H-吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻喃基、苯并四唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、苯并噁唑基、羟吲哚基、苯并咪唑啉基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、吲哚醌酰基、异喹啉基、八氢异喹啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、异噁唑并吡啶基、喹唑啉基、喹啉基、异噻唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、噁唑并吡啶基、咪唑并吡啶基和吡唑并吡啶基。
优选5至6元杂环包括(但不限于)吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、吡嗪基、哌嗪基、哌啶基、咪唑基、咪唑啶基、吲哚基、四唑基、异噁唑基、吗啉基、噁唑基、噁二唑基、噁唑烷基、四氢呋喃基、噻二嗪基、噻二唑基、噻唑基、三嗪基和三唑基。亦包括含有例如上述杂环的稠环和螺化合物。
桥连环亦包括于杂环的定义中。当一或多个原子(亦即C、O、N或S)连接两个不相邻碳或氮原子时，出现桥式环。优选的桥包括(但不限于)一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子及碳-氮基团。应注意，桥总是将单环转变成三环。当环经桥连时，对于该环所列举的取代基亦可存在于桥上。
术语“杂芳基”是指经取代及未取代的芳族5或6元单环基团、9或10元二环基团及11至14元三环基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N)，该含杂原子环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。含杂原子杂芳基的各环可含有一或两个氧或硫原子及/或一至四个氮原子，其限制条件为各环中杂原子的总数为四个或四个以下且各环具有至少一个碳原子。杂芳基可经取代或未经取代。氮原子可经取代或未经取代(亦即N或NR，其中R为H或另一取代基(若经定义))。氮及硫杂原子可任选经氧化(亦即N→O及S(O)p)且氮原子可任选经四级铵化。
二环或三环杂芳基须包括至少一个全芳族环，但其他已稠合环可为芳族或非芳族的。杂芳基可在任何环的任何可用氮或碳原子处连接。杂芳基环系统可含有0、1、2或3个取代基。
示例性单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基和其类似基团。
示例性二环杂芳基包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、二氢异喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并噁嗪基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喏啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基和其类似基团。
示例性三环杂芳基包括咔唑基、苯并吲哚基、吩啉基、吖啶基、吩啶基、基和其类似基团。
术语“杂原子”应包括氧、硫及氮。
如本申请中所提及，术语“经取代”意谓一或多个氢原子经非氢基团置换，其限制条件为保持正常价数且取代作用产生稳定化合物。当取代基为酮基(亦即，＝O)时，则取代了原子上的2个氢。酮基取代基不存在于芳族部分上。当据称环系统(例如碳环或杂环)经羰基或双键取代时，羰基或双键意欲为环的一部分(亦即在环内)。如本申请中所使用，环双键为在两个相邻环原子之间所形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。
当任何变量在化合物的任何组分或式中出现一次以上时，其定义在每次出现时独立于其在所有其他情况下出现时的定义。因此，例如，若展示基团经0-3个Re取代，则该基团可任选经至多三个Re基团取代且Re在每次出现时独立地选自Re的定义。同样，若此类组合产生稳定化合物，则可允许取代基和/或变量的组合。
效用
本发明化合物可用于调节激酶活性。
申请者已发现式(I)-(V)化合物尤其有效用于治疗与调节激酶活性，且尤其抑制丝胺酸/苏胺酸激酶活性相关的增生性病状。本发明化合物可用于治疗与异常激酶活性相关的增生性病症。本申请所用的术语“治疗(treating或treatment)”涵盖反应性及预防性量度两者或两者之一，例如经设计以抑制或推迟疾病或病症发作，获得症状或疾病状态完全或部分缓解，及/或减轻、改善、减弱或治愈疾病或病症及/或其症状的量度。
因此，本发明一方面为式(I)-(V)化合物或其药用盐的用途，其系用于制造用以在温血动物(诸如人类)中产生抗增生作用的药物。
根据本发明另一特征，提供在需要该治疗的温血动物(诸如人类)中产生抗增生作用的方法，其包含向该动物给药有效量的如本申请中先前所定义的式(I)-(V)化合物或其药用盐。
本申请中先前定义的抗增生治疗可作为唯一疗法应用或除本发明化合物之外可涉及一或多种其他物质及/或治疗。此类治疗可以同时、依序或分别给药个别治疗组分的方式达成。本发明化合物亦可适用于与已知抗癌及细胞毒性剂及治疗(包括辐射)组合。当组合配制剂不适当时，式(I)-(V)化合物与已知抗癌或细胞毒素剂及治疗(包括辐射)可依序使用。
术语“抗癌”剂包括适用于治疗癌症的任何已知药物，其包括以下：17α-炔雌醇、二乙基己烯雌酚、睪固酮、泼尼松(prednisone)、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、睾内酯、乙酸甲地孕酮、甲基泼尼龙(m乙基prednisolone)、甲基-睪固酮、泼尼龙(prednisolone)、曲安西龙(triamcinolone)、氯三芳乙烯、羟基孕酮、胺鲁米特(aminoglutethimide)、雌氮芥、乙酸甲羟孕酮、亮丙立德(leuprolide)、氟他胺(flutamide)、托瑞米芬(toremifene)、基质金属蛋白酶抑制剂；VEGF抑制剂，诸如抗VEGF抗体及小分子，诸如ZD6474及SU6668；凡塔蓝尼(Vatalanib)、BAY-43-9006、SU11248、CP-547632及CEP-7055；HER 1及HER 2抑制剂，包括抗HER2抗体EGFR抑制剂，包括吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、ABX-EGF、EMD72000、11F8及西妥昔单抗(cetuximab)；Eg5抑制剂，诸如SB-715992、SB-743921及MKI-833；pan Her抑制剂，诸如卡奈替尼(canertinib)、EKB-569、CI-1033、AEE-788、XL-647、mAb 2C4及GW-572016；Src抑制剂，例如，及达沙替尼(dasatinib)；(比卡鲁胺(bicalutamide)、Astra Zeneca)、他莫昔芬(Tamoxifen)；MEK-1激酶抑制剂、MAPK激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂；PDGF抑制剂，诸如伊马替尼(imatinib)；抗血管生成及抗血管药物，通过中断向实体瘤的血流剥夺其营养而使癌细胞静止；阉割，其使得雄性素依赖性癌瘤不再增生；非受体及受体酪胺酸激酶的抑制剂；整合素信号传导的抑制剂；微管蛋白作用剂，诸如长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞宾(vinorelbine)、长春氟宁(vinflunine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、7-O-甲基硫代甲基太平洋紫杉醇、4-去乙酰基-4-甲基碳酸酯太平洋紫杉醇、3'-叔丁基-3'-N-叔丁氧基羰基-4-去乙酰基-3'-去苯基-3'-N-去苯甲酰基-4-O-甲氧甲酰基-太平洋紫杉醇、C-4甲基碳酸酯太平洋紫杉醇、埃坡霉素A(epothilone A)、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、[1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7-11-二羟基-8,8,10,12,16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂至17氧杂二环[14.1.0]十七烷-5,9-二酮(伊沙匹隆(ixabepilone))、[1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-3-[2-[2-(氨基甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7,11-二羟基-8,8,10,12,16-五甲基-4-17-二氧二环[14.1.0]-十七烷-5,9-二酮及其衍生物；其他CDK抑制剂、抗增生细胞周期抑制剂、表叶毒素(epidophyllotoxin)、依托泊苷(etoposide)、VM-26；抗肿瘤酶，例如，拓扑异构酶I抑制剂、喜树碱、拓朴替康、SN-38；丙卡巴肼(procarbazine)；米托蒽醌(mitoxantrone)；铂配位错合物，诸如顺铂、卡铂及奥沙利铂(oxaliplatin)；生物反应调节剂；生长抑制剂；抗激素治疗剂；甲酰四氢叶酸；喃氟啶(tegafur)；抗代谢物，诸如嘌呤拮抗剂(例如6-硫代鸟嘌呤及6-巯基嘌呤)；麸酰胺酸拮抗剂，例如，DON(AT-125；d-氧代-正白胺酸)；核糖核苷酸还原酶抑制剂；mTOR抑制剂；以及造血生长因子。
其他细胞毒性剂包括环磷酰胺、小红莓(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、米托蒽醌、美法仑(melphalan)、六甲基三聚氰胺、噻替派(thiotepa)、阿糖胞苷(cytarabin)、依达曲沙(idatrexate)、曲美沙特(trimetrexate)、达喀尔巴(dacarbazine)、L-天冬酰胺酶、比卡鲁胺、亮丙立德、吡啶并苯并吲哚衍生物、干扰素及介白素。
在医学肿瘤学领域中，常规实践为使用不同治疗形式的组合来治疗各癌症患者。在内科肿瘤学中，除本申请中定义的抗增生治疗之外，此类治疗的其他组分可为手术、放射线疗法或化学疗法。此类化学疗法可涵盖三类主要治疗剂：
(i)抗血管生成剂，通过来自本申请中的前所定义的不同机制起作用(例如利诺胺(linomide)、整合素αvβ3功能的抑制剂、血管生长抑素、雷佐生(razoxane))；
(ii)细胞生长抑制剂，诸如抗雌激素(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、艾多昔芬(iodoxifene))、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrozole)、硼(borazole)、依西美坦(exemestane))、抗激素、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺、乙酸环丙孕酮)、LHRH促效剂及拮抗剂(例如乙酸戈舍瑞林(gosereline acetate)、亮丙立德)、睪固酮5α-二氢还原酶的抑制剂(例如非那雄安(finasteride))、法呢基转移酶抑制剂(farnesyltransferase inhibitors)、抗侵袭剂(例如金属蛋白酶抑制剂，诸如马立马司他(marimastat)，及尿激酶纤维蛋白溶酶原活化物受体功能的抑制剂)及成长因子功能的抑制剂(此类生长因子包括例如EGF、FGF、血小板衍生生长因子及肝细胞成长因子，此类抑制剂包括成长因子抗体、成长因子受体抗体，(贝伐单抗(bevacizumab)及(西妥昔单抗(cetuximab))；酪胺酸激酶抑制剂及丝胺酸/苏胺酸激酶抑制剂)；以及
(iii)如在内科肿瘤学中使用的抗增生/抗肿瘤药物及其组合，诸如抗代谢物(例如抗叶酸剂(诸如甲胺喋呤)、氟嘧啶(诸如5-氟尿嘧啶、嘌呤及腺苷类似物、胞嘧啶阿拉伯糖)；嵌入抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素，诸如小红莓、柔红霉素(daunomycin)、表柔比星(epirubicin)及伊达比星(idarubicin)、丝裂霉素C、放线菌素D、光神霉素(mithramycin))；铂衍生物(例如顺铂、卡铂)；烷基化剂(例如氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安(busulphan)、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、噻替派)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，如长春新碱、长春瑞宾、长春碱及长春氟宁)及紫杉烷类，诸如(太平洋紫杉醇)、克癌易(Taxotere)(多烯紫杉醇)及较新微管药物，诸如埃坡霉素类似物(伊沙匹隆)、迪斯德莫来(discodermolide)类似物及艾榴塞洛素(eleutherobin)类似物；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，诸如依托泊苷及替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrine)、拓朴替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan))；细胞周期抑制剂(例如夫拉平度(flavopyridol))；生物反应调节剂及蛋白酶体抑制剂，诸如(硼替佐米(bortezomib))。
如上所述，关注本发明的式(I)-(V)化合物的抗增生作用。此类本发明化合物预期适用于多种疾病病况，包括癌症、牛皮癣及类风湿性关节炎。
更具体言之，式(I)-(V)化合物适用于治疗各种癌症，包括(但不限于)以下：
-癌瘤，包括前列腺癌、胰管腺癌、乳癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌及甲状腺癌；
-中枢及周边神经系统肿瘤，包括神经母细胞瘤、神经胶母细胞瘤及神经管胚细胞瘤；以及
-其他肿瘤，包括黑素瘤及多发性骨髓瘤。
由于激酶通常在调节细胞增殖中的关键作用，抑制剂可充当可逆性细胞生长抑制剂，其可适用于治疗以异常细胞增殖为特征的任何疾病过程，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤息肉病、神经纤维瘤、肺纤维化、关节炎、牛皮癣、丝球体肾炎、血管成形术或血管手术后的再狭窄、肥厚性疤形成及发炎性肠病。
式(I)-(V)化合物尤其适用于治疗丝胺酸/苏胺酸激酶活性的发生率高的肿瘤，诸如前列腺肿瘤、结肠肿瘤、肺肿瘤、脑肿瘤、甲状腺肿瘤及胰腺肿瘤。另外，本发明化合物可适用于治疗肉瘤及儿科肉瘤。通过给药本发明化合物的组合物(或组合)，减少哺乳动物主体的肿瘤发生。
式(I)-(V)化合物亦可适用于治疗可能与经由激酶(诸如DYRK1a、CDK及GSK3β)运作的信号转导路径相关的其他癌性疾病(诸如急性骨髓性白血病)。本发明组合物可含有上述其他治疗剂且可根据诸如彼等医药配制剂技术中已知的技术，例如通过采用已知固体或液体媒介物或稀释剂以及适于所要给药方式的类型的药物添加剂(例如赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)进行调配。
因此，本发明进一步包括包含一或多种式(I)-(V)化合物及药用载体的组合物。
“药用载体”是指本领域普遍认可用于将生物活性剂递送给动物(尤其哺乳动物)的介质。药用载体系根据完全处于本领域普通技术人员范围内的多种因素进行调配。这些因素包括(但不限于)：所调配的活性剂的类型及性质、含有该药物的组合物所给药的受试者、组合物的所欲给药途径及所靶向的治疗适应症。药用载体包括水性与非水性液体介质，以及多种固体及半固体剂型。此类载体除活性剂之外可包括许多不同成分及添加剂，此类额外成分出于本领域普通技术人员所熟知的各种原因(例如使活性剂、粘合剂等稳定)而包括于配制剂中。合适药用载体及与其选择有关的因素描述可见于各种易于获得的来源中，诸如Remington's Pharmaceutical Sciences第17版(1985)，该参考文献以全文引用的方式并入本申请中。
含有活性成分的本发明药物组合物可呈适于经口使用的形式，例如锭剂、糖衣锭、口含锭、水性或油性悬浮液、可分散性粉末或颗粒剂、乳液、硬或软胶囊或糖浆剂或酏剂。意欲经口使用的组合物可根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法制备，且此类组合物可含有一或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂及防腐剂组成的试剂以便提供医药学上美观且可口的制剂。
供经口使用的配制剂亦可以硬明胶胶囊的形式存在，其中使活性成分与例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土的惰性固体稀释剂混合；或以软明胶胶囊的形式存在，其中使活性成分与诸如聚乙二醇的水溶性载体或例如花生油、液体石蜡或橄榄油的油介质混合。
药物组合物可以无菌可注射水溶液的形式存在。可采用的可接受媒介物及溶剂中有水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等张氯化钠溶液。无菌可注射制剂亦可为其中活性成分溶解于油相中的无菌可注射水包油型微乳液。例如，可首先将活性成分溶解于大豆油与卵磷脂的混合物中。接着将油性溶液引入水与甘油的混合物中且经处理以形成微乳液。
可注射的溶液或微乳液可通过局部快速注射引入患者血流内。或者，可有利地以此类方式给药溶液或微乳液，以便维持本发明化合物的恒定循环浓度。为了维持此类恒定浓度，可利用连续静脉递送装置。此类装置的实例为Deltec5400型静脉内泵。
药物组合物可以用于肌肉内及皮下给药的无菌可注射水性或油性悬浮液的形式存在。此悬浮液可根据已知技术使用上文已提及的那些合适分散剂或湿润剂及悬浮剂来调配。
式(I)-(V)化合物可通过适合于待治疗病况的任何方法给药，其可视待传递药物的具体部位治疗或用量的需要而定。尽管已涵盖其他递送方式，但表面给药通常对皮肤相关疾病为优选的，且全身性治疗对癌症或癌前病况优选。例如，所述化合物可以诸如锭剂、胶囊、颗粒剂、散剂或包括糖浆的液体配制剂形式经口传递；诸如以溶液、悬浮液、凝胶或油膏形式表面传递；舌下传递；经颊内口腔传递；诸如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或浸润技术(例如无菌可注射水溶液或非水溶液或悬浮液)非经肠传递；诸如由吸入喷雾经鼻传递；诸如以乳膏或油膏形式表面传递；诸如以栓剂形式经肠道传递；或经脂质传递。可给药含有药用无毒媒介物或稀释剂的单位剂量配制剂。所述化合物可以适于即刻释放或延时释放的形式给药。可用合适药物组合物或(尤其在延时释放状况下)诸如皮下植入物或渗透泵的装置来实现获得即刻释放或延时释放。
表面给药的示例性组合物包括表面载体，诸如Plastibase(用聚乙烯凝胶化的矿物油)。
供经口给药的示例性组合物包括悬浮液，其可含有例如用于增加体积的微晶纤维素、作为悬浮剂的海藻酸或海藻酸钠、作为粘度增强剂的甲基纤维素、及甜味剂或调味剂(诸如本领域已知的甜味剂或调味剂)；以及立即释放锭剂，其可含有例如微晶纤维素、磷酸氢二钙、淀粉、硬脂酸镁及/或乳糖及/或其他赋形剂、粘合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂及润滑剂(诸如本领域已知的那些)。本发明化合物亦可通过舌下及/或颊内给药，例如使用模制、压缩或冷冻干燥的锭剂经口递送。示例性组合物可包括诸如甘露糖醇、乳糖、蔗糖及/或环糊精的速溶稀释剂。此类配制剂中亦可包括高分子量赋形剂，诸如纤维素或聚乙二醇(PEG)；辅助粘膜粘附的赋形剂，诸如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)及/或顺丁烯二酸酐共聚物(例如Gantrez)；以及控制释放的药物，诸如聚丙烯酸系共聚物(例如Carbopol 934)。亦可添加润滑剂、助流剂、调味剂、着色剂及稳定剂以易于制造及使用。
供经鼻喷雾或吸入给药用的示例性组合物包括可含有例如苯甲醇或其他合适防腐剂、增加吸收及/或生物可用性的吸收促进剂及/或诸如彼等本领域中已知的其他助溶剂或分散剂的溶液。
供非经肠给药用的示例性组合物包括可含有例如合适非经肠可接受的无毒稀释剂或溶剂(诸如甘露糖醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液(Ringer's solution)、等张氯化钠溶液)或包括合成单-或二甘油酯的其他合适分散剂或润湿剂及悬浮剂，以及包括油酸的脂肪酸的可注射溶液或悬浮液。
供直肠给药用的示例性组合物包括栓剂，其可含有例如合适非刺激性赋形剂，诸如可可油、合成甘油酯或聚乙二醇，其在常温下为固体但在直肠腔内将液化及/或溶解以释放出药物。
当将本发明化合物给药人类个体时，日剂量通常由主治医师确定，且剂量通常根据个别患者的年龄、体重、性别及反应以及患者症状的严重程度而变化。哺乳动物的示例性剂量可包括每日每公斤体重约0.05至1000mg、1-1000mg、1-50mg、5-250mg、250-1000mg的活性化合物，其可以单次剂量给药或以个别分次剂量的形式给药，诸如每日1至4次。应了解任何具体个体的具体剂量及给药频率可变化且将取决于各种因素，包括所采用的具体化合物的活性；该化合物的代谢稳定性及作用时间长度；个体的物种、年龄、体重、一般健康状况、性别及饮食；给药方式及时间；排泄速率；药物组合；以及具体病况的严重性。治疗的优选个体包括动物，最优选为哺乳动物物种，诸如人类，及家畜，诸如狗、猫、马等动物。因此，当本申请中使用术语“患者”时，此术语意欲包括受蛋白激酶含量介导影响的所有个体，最优选为哺乳动物物种。
若调配为固定剂量，则组合产物可例如利用式(I)-(V)化合物在如上所述的剂量范围内的剂量及另一抗癌剂/治疗在此类已知抗癌剂/治疗的核准剂量范围内的剂量。若组合产物不当，则式(I)-(V)化合物及另一抗癌剂/治疗可例如同时或依序给药。若依序给药，则本发明不限于任何具体给药顺序。例如，式(I)-(V)化合物可在给药已知抗癌剂或治疗之前或之后给药。
生物分析
CK1ε及CK1δ激酶分析
在V形底384孔板中进行激酶分析。最终分析体积为30μl，由15μl酶、受质(荧光素化肽FL-AHA-KRRRAL-PSER-VASLPGL-OH和ATP)及测试化合物添加于分析缓冲液(20mMHEPES(pH 7.4)、30mM MgCl2、0.015％Brij35及4mM DTT)来制备。在室温培育反应物22小时且通过向各样品中添加45μl的35mM EDTA来终止。在Caliper3000(Caliper,Hopkinton,MA)上通过电泳分离未磷酸化受质及磷酸化产物对反应混合物进行分析。抑制数据通过比较100％抑制的无酶对照反应与0％抑制的仅媒介物反应来计算。分析中试剂的最终浓度为200pM CK1ε或CK1δ、50μM ATP、1.5μM FL-AHA-KRRRAL-PSER-VASLPGL-OH和1.6％DMSO。生成剂量反应曲线以测定抑制50％激酶活性所需的浓度(IC50)。将化合物以10mM溶解于二甲亚砜(DMSO)中且在11种浓度下评估。通过非线性回归分析获得IC50值。
下述化合物在如上所述的分析中发现具有如表A所示的IC50。对CK1ε和CK1δIC50范围如下：A＝0.01-10nM；B＝10.01-100nM；C＝100.01-2000nM。
表A
制备方法
可通过诸如在以下方案中说明的那些方法来制备本发明化合物。可易于由本领域普通技术人员选择溶剂、温度、压力及其他反应条件。起始物质可购得或易于由本领域普通技术人员制备。这些方案为说明性的且不欲限制熟习此项技术者可用于制造本申请中揭示的化合物的可能技术。熟习此项技术者可知晓不同方法。另外，可以替代顺序或次序执行合成中的各个步骤以得到所需化合物。本申请中引用的所有文献以全文引用的方式并入本申请中。
一般而言，完成反应程序所花费的时间由操作执行者判断，优选借助于通过用诸如HPLC或TLC的方法监测反应所获得的信息。反应无需进行至完成才能适用于本发明。用于本发明的各种杂环的制备方法可见于标准有机参考书中，例如Katritzky,A.R.等人编，Comprehensive Heterocyclic Chemistry,The Structure,Reactions,Synthesis andUses,of Heterocyclic Compounds，第1版，Pergamon Press,New York(1984)及Katritzky,A.R.等人编，Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,A Review of theLiterature 1982-1995:The Structure,Reactions,Synthesis and Uses,ofHeterocyclic Compounds,Pergamon Press,New York(1996)。
除非另有说明，否则化合物的各种取代基系以与本发明的式(I)化合物相同的方式定义。
HPLC方法：报导用于各实例及中间物的分析型HPLC/LC-MS保留时间使用一种以下通用分析型HPLC/LC-MS方法：
方法A：SunFire C18(4.6×150)mm，3.5μ管柱；流动速率1mL/min；；梯度时间15min；10％溶剂B至100％溶剂B；在254nm及220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法B：XBridge Phenyl(4.6×150)mm，3.5μ管柱；流动速率1mL/min；梯度时间15min；10％溶剂B至100％溶剂B；在254nm及220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法C：SunFire C18(4.6×150)mm，3.5μ管柱；流动速率1mL/min；梯度时间23min；100％溶剂A至100％溶剂B且保持100％溶剂B 5min。在254nm及220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法D：XBridge Phenyl(4.6×150)mm，3.5μ管柱；流动速率1mL/min；梯度时间23min；100％移动相A至100％移动相B且保持100％溶剂B 5min。在254nm及220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法E：管柱：Ascentis Express C18(50×2.1)mm，2.7μm；流动速率1.1mL/min；梯度时间3min；温度：50℃，0％溶剂B至100％溶剂B；在220nm下监测(溶剂A：95％水:5％乙腈；10mM NH4OAc；溶剂B：5％水:95％乙腈；10mM NH4OAc)。
方法F：SunFire C 18(4.6×150)mm，3.5μ管柱，流动速率1mL/min；梯度时间23min；10％溶剂B至100％溶剂B；在254nm至220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法G：XBridge Phenyl(4.6×150)mm，3.5μ管柱，流动速率1mL/min；梯度时间23min；10％溶剂B至100％溶剂B；在254nm至220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
方法H：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；移动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；移动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：保持在0％B下0.5min，经4分钟0至100％B，接着保持在100％B下0.5分钟；流速：1mL/min。
方法I：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；移动相A：具有10mM乙酸铵的5:95乙腈:水；移动相B：具有10mM乙酸铵的95:5乙腈:水；温度：40℃；梯度：保持在0％B下0.5min，经4分钟0至100％B，接着保持在100％B下0.5分钟；流速：0.5mL/min。
方法J：管柱：Ascentis Express C18(50×4.6)mm，2.7μm，流动速率4mL/min；梯度：经4min 0至100％溶剂B；温度：50℃。在220nm下监测(溶剂A：具有10mM NH4OAc的95:05水:CH3CN及溶剂B：具有10mM NH4OAc的05:95水:CH3CN)。
方法K：管柱：Ascentis Express C18(50×4.6)mm，2.7μm，流动速率4mL/min；梯度：经4min 0至100％溶剂B；温度：50℃。在220nm下监测(溶剂A：具有0.1％TFA的95:05水:CH3CN及溶剂B：具有0.1％TFA的05:95水:CH3CN)。
方法L：管柱：Ascentis Express C18(50×2.1)mm，2.7μm，流动速率1.1mL/min；梯度：经3min 0至100％溶剂B；温度：50℃。在220nm下监测(溶剂A：具有0.1％TFA的95:05水:CH3CN及溶剂B：具有0.1％TFA的05:95水:CH3CN)。
方法M：SunFire C18(4.6×150)mm，5μ管柱；流动速率1mL/min；梯度时间15min；10％溶剂B至100％溶剂B；在254nm及220nm下监测(溶剂A：5％乙腈、95％水、0.05％TFA；溶剂B：95％乙腈、5％水、0.05％TFA)。
缩写
以下缩写用于以下实例章节及本申请其他地方：
Ac 乙酰基
AcOH 乙酸
Aq. 水溶液
B2Pin2 双(二频哪醇)二硼
BAIB 双(乙酰氧基)碘苯
BMS 甲硼烷二甲基硫醚
BH3.THF 含甲硼烷的四氢呋喃
Bn 苯甲基
Boc2O 一缩二碳酸二叔丁酯
n-BuLi 正丁基锂
t-BuNCO 2-异氰酸酯基-2-甲基丙烷
CAN 硝酸铈铵
CDI 1,1'-羰基二咪唑
DAST 三氟化二乙基氨基硫
dba 二亚苄基丙酮
DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM 二氯甲烷
DCE 1,2-二氯乙烯
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
三氟化双(2-甲氧基乙基)氨基硫
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DIBAD 偶氮二甲酸二叔丁酯
diglyme 1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷
DIPEA或许尼希氏碱 二异丙基乙基胺
(Hunig's base)
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DPPA 二苯基磷酰基叠氮
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
EtI 碘乙烷
HATU (六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基)
HPLC 高效液相层析
IPA 异丙醇
KHDMS 双(三甲基硅烷基)氨基钾
LAH 二异丙氨基锂
LDA 氢化锂铝
LHMDS 双(三甲基硅烷基)氨基锂
MeOH 甲醇
MeI 碘甲烷
Ms 甲烷磺酰基
NBS N-溴代丁二酰亚胺
NIS N-碘代丁二酰亚胺
NMP N-甲基-2-吡咯啶酮
PPh3或TPP 三苯基膦
Pd(PPh3)4 四(三苯基膦)钯(0)
Pd2(dba)3 参(二亚苄基丙酮)二钯(0)
PdCl2(dppf) [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)
PdCl2(PPh3)2 双(三苯基膦)二氯化钯(II)
PTSA 对甲苯磺酸
Py 吡啶
保留时间.Time或rt 保留时间
RT 室温
SFC 超临界流体层析
TBAF 氟化四丁基铵
TLC 薄层层析
TEMPO 2,2,6,6-四甲基哌啶基氧基
TEA或Et3N 三乙胺
TFA 三氟乙酸
Tf2O 三氟甲烷磺酸酐
THF 四氢呋喃
TBSCl或TBDMS-Cl 氯化叔丁基二甲基硅烷
方案1
中间物1A：4-(4-氟苯基)-2，4-二氧代丁酸乙酯
在0℃下在氮气氛围下向乙醇钠的溶液(351mL，21％乙醇溶液，1629mmol)中添加含1-(4-氟苯基)乙酮(150g，1086mmol)的乙醇(100mL)且在室温搅拌所得反应混合物10min。添加含乙二酸二乙酯(156mL，1140mmol)的乙醇(100mL)且在室温使反应物搅拌12h。使反应混合物冷却至0℃且用1.5N HCl酸化，且过滤固体并用水稀释滤液且用DCM(3×750mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到中间物1A(180g，70％)，其未经进一步纯化即进入下一步骤。MS(ES)：m/z＝237[M-H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ ppm15.2(bs,1H),8.00-8.09(m,2H),7.15-7.25(m,2H),7.05(s,1H),4.42(q,J＝7.15Hz,2H),1.43(t,J＝7.15Hz,3H)。
中间物1B：3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
向中间物1A(120g，504mmol)于乙醇(1200mL)中的溶液中缓慢添加单水合肼(25.7mL，529mmol)且使所得反应混合物回流1h。使反应混合物冷却至室温，倾入冰冷水中且真空干燥所得固体，得到中间物1B(80g，67％)。MS(ES)：m/z＝235[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ ppm 7.75(m,2H),7.12(m,2H),7.07(s,1H),4.42(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间物1C：1-(2-溴乙基)-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
向中间物1B(135g，576mmol)及碳酸钾(159g，1153mmol)于乙腈(1400mL)中的溶液中添加1,2-二溴乙烷(59.6mL，692mmol)且使所得反应混合物回流4h。减压移除乙腈且用水稀释残余物。用DCM(2×500mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过ISCO使用880g管柱及含1％甲醇的氯仿作为洗脱液来纯化残余物。浓缩合并的馏分，得到中间物1C(90g，45％)。MS(ES)：m/z＝343[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.91-7.97(m,2H),7.41(s,1H),7.24-7.30(m,2H),4.96(t,J＝6.34Hz,2H),4.36(q,J＝7.11Hz,2H),3.90(t,J＝6.34Hz,2H),1.35(t,J＝7.12Hz,3H)。
中间物1D：5-苯甲基-2-(4-氟苯基)-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物1C(80g，234mmol)及碘化钾(78g，469mmol)于乙腈(800mL)中的溶液中添加苯甲胺(28.2mL，258mmol)且在90℃搅拌反应混合物12h。减压移除乙腈，用水稀释粗物质且用DCM(3×500mL)萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过硅胶层析(120g管柱，用含1-2％甲醇的氯仿洗脱)来纯化残余物。使收集的馏分浓缩在一起，得到中间物1D(35g，46％)。MS(ES)：m/z＝322[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm7.71-7.83(m,2H),7.29-7.42(m,5H),7.14(s,1H),7.06-7.12(m,2H),4.78(s,2H),4.32-4.40(m,2H),3.63-3.75(m,2H)。
中间物1E：5-苯甲基-2-(4-氟苯基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪
在-10℃下在N2下向中间物1D(23.00g，71.6mmol)于THF(230mL)中的溶液中添加LAH(59.6mL，2.4M THF溶液，143mmol)。在室温搅拌反应混合物12h。用冰冷水淬灭反应混合物且经由衬垫过滤且用氯仿(3×150mL)萃取滤液。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。用乙醚(2×150mL)湿磨残余物且过滤所得固体，用乙醚冲洗且干燥，得到中间物1E(17g，77％)。MS(ES)：m/z＝308[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ ppm7.67-7.82(m,2H),7.31-7.47(m,5H),7.01-7.14(m,2H),6.19(s,1H),4.22(t,J＝4.2Hz,2H),3.73(s,2H),3.70(s,2H),2.97(t,J＝5.6Hz,2H)。
中间物1F：2-(4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪
向脱气过的中间物1E(17g，55.3mmol)于甲醇(170mL)中溶液中添加10％钯/碳(2.94g，2.77mmol)且在大气H2压力搅拌3h。经由衬垫过滤反应混合物，用甲醇(500mL)洗涤且浓缩。用乙醚(2×100mL)湿磨残余物且过滤所得固体，用乙醚(200mL)冲洗且真空干燥，得到中间物1F(9g，75％)。MS(ES)：m/z＝218[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.73-7.87(m,2H),7.13-7.28(m,2H),6.43(s,1H),4.02(t,J＝5.57Hz,2H),3.94(s,2H),3.16(t,J＝5.57Hz,2H)。
中间物1G：2-(4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物1F(9.50g，43.7mmol)及三乙胺(18.29mL，131mmol)于DCM(80mL)中的搅拌溶液中添加Boc2O(19.09g，87mmol)及DMAP(0.534g，4.37mmol)且在室温搅拌反应混合物12h。减压移除DCM且通过ISCO使用120g管柱及含1-2％甲醇的氯仿作为洗脱液来纯化残余物。将收集的馏分浓缩在一起，得到中间物1G(11g，79％)。MS(ES)：m/z＝318[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.70-7.75(m,2H),7.02-7.12(m,2H),6.31(s,1H),4.68(s,2H),4.21(t,J＝5.4Hz,2H),3.92(t,J＝5.7Hz,2H),1.50(s,9H)。
中间物1H：2-(3-氟苯基)-3-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物1G(5.0g，15.76mmol)于二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加NIS(5.32g，23.63mmol)且在室温搅拌1h。用DCM稀释反应混合物且用水洗涤。有机层经Na2SO4干燥且浓缩。通过ISCO使用40g二氧化硅管柱使用含1-2％甲醇的氯仿作为溶剂来纯化粗产物。将收集的馏分浓缩在一起，得到呈白色固体状的中间物1H(6g，86％)。MS(ES)：m/z＝444[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.79(m,2H),7.11(m,2H),4.55(s,2H),4.20(t,J＝5.36Hz,2H),3.92(t,J＝5.30Hz,2H),1.52(s,9H)。
中间物1I：3-氰基-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物1H(6.0g，13.54mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加氰化锌(2.066g，17.60mmol)及锌(0.265g，4.06mmol)，得到棕色悬浮液。在氮气下脱气反应混合物15min，添加Pd2(dba)3(0.620g，0.677mmol)、dppf(0.750g，1.354mmol)，且在90℃搅拌18h。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用氨水(2×50mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈棕色胶状固体状的粗中间物1I。通过ISCO使用40g硅胶管柱用含3％MeOH的氯仿洗脱来纯化残余物。将收集的馏分浓缩在一起，得到呈白色固体状的中间物1I(3g，64％)。MS(ES)：m/z＝343[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.84-7.94(m,2H),7.34-7.44(m,2H),4.78(s,2H),4.23(t,J＝5.36Hz,2H),3.87(t,J＝5.45Hz,2H),1.46(s,9H)。
中间物1J：3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物1I(3.0g，8.76mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH(10mL，10％NaOH溶液，25mmol)及H2O2(2.5mL，于H2O中30％w/v，22mmol)。在室温搅拌反应混合物3h。自反应混合物移除甲醇且用10mL水稀释残余物且用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。用水(15mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到灰白色固体状的粗中间物1J(3g，95％)，其未经进一步纯化即进入下一步骤中。MS(ES)：m/z＝361[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.66-7.71(m,2H),7.22-7.30(m,2H),6.94(bs,1H),4.75(s,2H),4.16(t,J＝5.40Hz,2H),3.85(t,J＝5.36Hz,2H),1.46(s,9H)。
中间物1K：2-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃下向中间物1J(3.0g，8.32mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中逐滴添加TFA(10.26mL，133mmol)且在室温搅拌3h。移除挥发物且用10％NaHCO3溶液淬灭残余物。过滤灰白色固体产物1K(2g，92％)且真空干燥，且未经进一步纯化即用于下一步骤中。MS(ES)：m/z＝261[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.66-7.73(m,2H),7.22-7.25(m,2H),7.21(bs,1H),7.20(bs,1H),3.98-4.05(m,4H),3.13(bs,2H),2.63(s,1H)。
化合物1：N5-(叔丁基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在0℃下向中间物1K(30mg，0.115mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加异氰酸叔丁酯(28.6mg，0.288mmol)。在室温搅拌反应混合物3h。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用水(2×5mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈棕色半固体状的粗产物。将残余物溶解于乙腈与甲醇的混合物中且经由制备型HPLC纯化。合并含有所需产物的馏分(0.01g，24％)且真空干燥。MS(ES)：m/z＝360[M+H]+；HPLC保留时间为6.66min及6.14min(HPLC方法A及B)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.69(m,2H),7.25(m,2H),7.25(bs,1H),6.98(bs,1H),6.26(s,1H),4.69(s,2H),4.11(t,J＝5.7Hz,2H),3.80(t,J＝5.7Hz,2H),1.29(s,9H)。
与1类似使用中间物1K及多种异氰酸酯制备表1中所示的化合物。
表1
方案2
中间物4A：4-(3-氟苯基)-2，4-二氧代丁酸乙酯
在0℃下向乙醇钠(123g，362mmol)于乙醇(300mL)中的溶液中添加乙二酸二乙酯(49.4mL，362mmol)于乙醇(25mL)中的溶液且搅拌所得溶液10min。添加含1-(3-氟苯基)乙酮(50g，362mmol)的乙醇(25mL)且在室温搅拌反应混合物16h。减压馏出乙醇且用冰冷水淬灭获得的残余物且过滤棕色产物。通过ISCO使用220g硅胶管柱及含20％乙酸乙酯的己烷作为洗脱液纯化来此粗产物。浓缩合并的馏分得到中间物4A(62.5g，73％)。MS(ES)：m/z＝239[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 15.13(bs,1H),7.77-7.83(m,1H),7.67-7.73(m,1H),7.51(td,J＝8.03,5.48Hz,1H),7.29-7.37(m,1H),7.28(s,1H),4.43(q,J＝7.18Hz,2H),1.40-1.47(m,3H)。
中间物4B：3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
向中间物4A(100g，420mmol)于乙醇(250mL)中的溶液中添加含肼(13.83mL，441mmol)的乙醇(250mL)，得到棕色溶液。在80℃搅拌反应混合物2h。减压移除乙醇且用水稀释残余物且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用水(2×100mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且减压浓缩。通过ISCO使用含20％乙酸乙酯的己烷作为洗脱液纯化由此获得的棕色固体。浓缩合并的馏分得到中间物4B(85g，86％)。MS(ES)：m/z＝233[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 14.06(bs,1H),7.68-7.75(m,2H),7.45-7.55(m,1H),7.36(s,1H),7.20(t,J＝7.53Hz,1H),4.34(q,J＝7.03Hz,2H),1.34(t,J＝7.03Hz,3H)。
中间物4C：1-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯
在0℃下向4B(12g，51.2mmol)及PPh3(20.16g，77mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加含DIAD(14.94mL，77mmol)的THF(10mL)且在相同温度搅拌所得反应混合物30min。接着添加含(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(9.91g，61.5mmol)且在室温搅拌反应混合物2h。自反应混合物减压蒸发挥发物且用冰淬灭所得残余物。用乙酸乙酯(3×1000mL)萃取水性层。用1.5NHCl(2×100mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，其通过ISCO(5:1Hex/EtOAc；120g管柱)纯化。使收集的馏分浓缩在一起。得到浅黄色固体4C(16g，83％)。MS(ES)：m/z＝378[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.54-7.59(m,1H),7.48-7.54(m,1H),7.36(td,J＝8.03,6.02Hz,1H),7.13(s,1H),6.98-7.05(m,1H),6.32(bs,1H),4.98(五重峰,J＝6.27Hz,2H),4.37(q,J＝7.19Hz,2H),3.64(d,J＝5.02Hz,2H),1.39-1.41(m,3H),1.27(s,9H)。
中间物4D：2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
250mL圆底烧瓶中装入4C(14g，37.1mmol)及含HCl的1,4-二噁烷(185mL，185mmol)，得到黄色溶液。在室温搅拌反应混合物2h。减压浓缩反应混合物且向此残余物中缓慢添加10％NaHCO3，直至pH变为8.0。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层且用水(2×100mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈灰白色固体状的所需产物4D，其未经纯化即用于下一步骤中。MS(ES)：m/z＝231[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.26(bs,1H),7.70-7.75(m,1H),7.63-7.69(m,1H),7.47(td,J＝8.03,6.53Hz,1H),7.11-7.20(m,1H),4.32-4.40(m,2H),3.65(tt,J＝4.64,3.14Hz,2H)。
中间物4E：2-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪
在-10℃下向中间物4D(4.5g，19.46mmol)于THF(100mL)中的溶液中逐滴添加LAH(16.22mL，2.4M THF溶液，38.9mmol)。在室温搅拌反应混合物16h，在0℃下用饱和NH4Cl淬灭且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用水(2×50mL)、盐水洗涤合并的有机层，经由过滤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到灰白色固体状的粗化合物4E(4g，90％)，其未经纯化即用于下一步骤中。MS(ES)：m/z＝218[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.53-7.59(m,1H),7.50(ddd,J＝10.29,2.55,1.51Hz,1H),7.35(td,J＝7.93,6.04Hz,1H),6.99(tdd,J＝8.40,8.40,2.64,0.94Hz,1H),6.29(s,1H),4.19(t,J＝5.67Hz,2H),4.12(s,2H),3.33-3.40(m,2H)。
中间物4F：2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物4E(4.0g，20.71mmol)于二氯甲烷(150mL)中的溶液中添加三乙胺(7.70mL，55.2mmol)及DMAP(0.225g，1.841mmol)，得到无色溶液。使反应物冷却至0℃且接着添加Boc2O(4.82g，22.10mmol)，且在室温搅拌反应混合物2h。用二氯甲烷(100mL)稀释反应混合物，用水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈灰白色固体状的粗化合物。通过硅胶层析(24g管柱，用含30％乙酸乙酯的己烷洗脱)来纯化粗产物。使收集的馏分浓缩在一起，得到呈白色固体状的中间物4F(5g，86％)。MS(ES)：m/z＝318[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.53(dt,J＝7.53,1.25Hz,1H),7.47(ddd,J＝10.54,2.51,1.51Hz,1H),7.31-7.38(m,1H),6.95-7.03(m,1H),6.35(s,1H),4.69(s,2H),4.22(t,J＝5.27Hz,2H),3.92(t,J＝5.52Hz,2H),1.51(s,9H)。
中间物4G：2-(3-氟苯基)-3-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物4F(5.0g，15.76mmol)于二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加NIS(5.32g，23.63mmol)且在室温搅拌2h。用DCM稀释反应混合物且用水洗涤。有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈无色半固体状的中间物4G(6g，86％)，其未经任何纯化即用于下一步骤中。MS(ES)：m/z＝444[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.61-7.66(m,1H),7.56(ddd,J＝10.04,2.51,1.51Hz,1H),7.39(td,J＝8.03,6.02Hz,1H),7.04-7.10(m,1H),4.56(bs,2H),4.22(t,J＝5.52Hz,2H),3.92(t,J＝5.52Hz,2H),1.52(s,9H)。
中间物4H：3-氰基-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物4G(5.0g，11.28mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加氰化锌(1.722g，14.66mmol)及锌(0.221g，3.38mmol)，得到棕色悬浮液。在氮气下使反应混合物脱气15min且添加Pd2(dba)3(0.516g，0.564mmol)及dppf(0.625g，1.128mmol)。在90℃搅拌反应混合物18h。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用氨水(2×50mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈棕色半固体状的粗产物。通过硅胶层析(40g管柱，用含50％EtOAc的己烷)洗脱来纯化粗物质。使收集的馏分浓缩在一起，得到呈白色固体状的中间物4H(3g，78％)。MS(ES)：m/z＝343[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.73-7.78(m,1H),7.62-7.68(m,1H),7.43(td,J＝8.03,5.52Hz,1H),7.08-7.15(m,1H),4.82(s,2H),4.24(t,J＝5.52Hz,2H),3.96(t,J＝5.27Hz,2H),1.52(s,9H)。
中间物4I：3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物4H(3.0g，8.76mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH(10mL，10％NaOH溶液，25mmol)及H2O2(2.5mL，于H2O中30％w/v，22mmol)。在室温搅拌反应混合物3h。自反应混合物移除甲醇且用10mL水稀释残余物且用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。用水(15mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到灰白色固体状的粗中间物4I(3g，95％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。MS(ES)：m/z＝361[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.53(d,J＝1.51Hz,1H),7.43-7.50(m,2H),7.32(bs,1H),7.18-7.24(m,1H),7.14(bs,1H),4.75(s,2H),4.17(t,J＝5.27Hz,2H),3.85(t,J＝5.52Hz,2H),1.41-1.49(m,8H)。
中间物4J：2-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃下向中间物4I(3.0g，8.32mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中逐滴添加TFA(10.26mL，133mmol)且在室温搅拌1h。自反应混合物移除TFA且用10％NaHCO3溶液淬灭残余物。过滤固体，获得呈灰白色固体状的中间物4J(2g，92％)，其未经纯化即用于下一步骤中。MS(ES)：m/z＝261[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.52-7.57(m,1H),7.46-7.52(m,1H),7.40-7.46(m,1H),7.14-7.27(m,2H),7.08(bs,1H),4.03(d,J＝5.02Hz,4H),3.13(d,J＝5.02Hz,2H),2.64(d,J＝6.02Hz,1H)。
化合物4：N5-(叔丁基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在0℃下向中间物4J(50mg，0.192mmol)于DMF(2mL)中的溶液中添加异氰酸叔丁酯(38mg，0.384mmol)。在室温搅拌反应混合物12h，用水淬灭且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用水(2×5mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈棕色半固体状的粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化残余物，得到呈白色粉末状的纯产物4(40mg，57％)。MS(ES)：m/z＝360[M+H]+；HPLC保留时间为7.35min及7.33min(HPLC方法A及B)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.51-7.54(m,1H),7.47-7.50(m,1H),7.44-7.46(m,1H),7.18-7.24(m,1H),4.74(s,2H),4.17(t,J＝5.52Hz,2H),3.85(t,J＝5.52Hz,2H),1.45-1.48(s,9H)。
合成脲的一般方法：
方法A：
在0℃下向中间物4J(30mg，0.115mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加对应异氰酸酯(0.288mmol)且在室温搅拌反应混合物3h。用水淬灭反应混合物，且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用水(2×5mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化粗产物。
方法B：
在0℃下向伯胺(0.192mmol)及三乙胺(0.480mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液中添加三光气(0.096mmol)且在相同温度搅拌反应混合物30min。添加含中间物4J(25mg，0.096mmol)的THF且在室温搅拌溶液2h。通过TLC监测反应进程。用水淬灭反应混合物，且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈灰白色固体状的粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化粗产物。
方法C：
向酸(0.192mmol)及TEA(0.288mmol)于甲苯(3mL)中的溶液中添加二苯基磷酰叠氮(0.192mmol)，得到无色溶液。在90℃搅拌反应混合物1.5h且冷却至室温。添加含中间物4J(25mg，0.096mmol)的THF且在60℃搅拌反应混合物4h。通过TLC监测反应进程。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈灰白色固体状的粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化粗产物。
方法D：
在0℃下向伯胺(0.192mmol)及三乙胺(0.480mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液中添加氯甲酸苯酯(0.096mmol)且在室温搅拌反应混合物60min。用水淬灭反应混合物且萃取形成的氨基甲酸苯酯，且将含中间物4J(25mg，0.096mmol)的THF添加至萃取物中且在室温搅拌所得溶液2h。通过TLC监测反应进程。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈灰白色固体状的粗产物。通过制备型HPLC进一步纯化粗产物。
与化合物4类似通过使化合物4J与对应试剂反应合成表2中所述的化合物。
表2
方案3
中间物97A：4-(3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(308mg，1.537mmol)及TEA(0.536mL，3.84mmol)于THF(3mL)中的溶液中添加三光气(228mg，0.768mmol)且在相同温度搅拌30min。添加中间物4J(200mg，0.768mmol)于THF中的溶液且在室温搅拌反应混合物2h。用水淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取水层。用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。使用逆相HPLC方法纯化粗产物，得到呈白色固体状的中间物97A(300mg，80％)。MS(ES)：m/z＝487[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.51-7.55(m,1H),7.42-7.51(m,2H),7.35(bs,1H),7.22(m,1H),7.15(bs,1H),6.70(d,J＝7.53Hz,1H),4.72(s,2H),4.14(t,J＝4.8Hz,2H),3.89(m,2H),3.84(t,J＝4.4Hz,2H),3.65(m,1H),2.85-2.78(m,2H),1.75(m,2H),1.41(s,9H),1.32(m,2H)。
中间物97B：2-(3-氟苯基)-N5-(哌啶-4-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-35(4H)-二甲酰胺
在0℃下向中间物97A(300mg，0.617mmol)于DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.238mL，3.08mmol)且在室温搅拌反应混合物4h。浓缩反应混合物且用10％NaHCO3溶液碱化所得残余物至pH约8.0。用DCM(3×5mL)萃取水层且用水(2×5mL)、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到呈白色固体状的中间物97B(200mg，80％)。MS(ES)：m/z＝387[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.50(bs,1H),7.46(m,3H),7.32(bs,1H),7.21(m,1H),7.11(bs,1H),6.86(d,J＝7.03Hz,1H),4.74(s,2H),4.15(t,J＝5.27Hz,2H),3.86(t,J＝5.27Hz,2H),3.72(m,1H),3.27(s,2H),2.96(m,2H),1.93(m,2H),1.54(m,2H)。
实施例97：
方法A(酰胺)：
向中间物97B(0.025g，0.065mmol)于无水DMF(0.8mL)中的溶液中添加HATU(0.049g，0.129mmol)及DIPEA(0.034mL，0.194mmol)。向此溶液中添加乙酸(7μL，0.129mmol)且在室温搅拌反应物16h。通过TLC监测反应，其展示反应完成。真空移除DMF。用10％碳酸氢钠溶液淬灭反应混合物且用DCM(3×30mL)萃取。用碳酸氢钠溶液、水及盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。通过制备型HPLC纯化进一步纯化粗产物，得到呈白色固体状的纯产物97(9mg，32％)。MS(ES)：m/z＝429[M+H]+；HPLC保留时间为10.76min及10.46min(HPLC方法C及D)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.51-7.56(m,1H),7.42-7.51(m,2H),7.34(br.s.,1H),7.17-7.23(m,1H),7.14(br.s.,1H),6.67-6.75(m,1H),4.73(s,2H),4.30(d,J＝13.05Hz,1H),4.14(t,J＝5.27Hz,2H),3.84(t,J＝5.27Hz,2H),3.79(d,J＝14.56Hz,1H),3.66-3.75(m,1H),3.08(t,J＝11.29Hz,1H),2.57-2.67(m,1H),2.00(s,3H),1.72-1.86(m,2H),1.35-1.44(m,1H),1.27-1.34(m,1H)。
方法B(磺酰胺)：
向中间物97B(0.025g，0.065mmol)及DIPEA(0.034mL，0.194mmol)于无水DCM(0.8mL)中的溶液中添加环丙烷磺酰氯(0.018g，0.129mmol)且在室温搅拌反应物16小时。用10％碳酸氢钠溶液淬灭反应混合物且用DCM(3×30mL)萃取。用碳酸氢钠溶液、水及盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。通过制备型HPLC纯化进一步纯化粗产物。
方法C(还原胺化)：
向中间物97B(0.025g，0.065mmol)于无水DCM(0.5mL)及甲醇(0.5mL)中的溶液中添加3,3,3-三氟丙醛(0.014g，0.129mmol)且在室温搅拌30分钟。向此混合物中添加氰基硼氢化钠(8.13mg，0.129mmol)，在室温搅拌反应混合物3h且减压移除溶剂。使残余物分配于乙酸乙酯与水之间，分离各层且用EtOAc(3×10mL)萃取水层。用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且减压浓缩，得到粗产物，其通过制备型HPLC纯化进一步纯化。
方法D(氨基甲酸酯)：
步骤1：(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)碳酸吡啶-2-酯：向二(吡啶-2-基)碳酸酯(250mg，1.156mmol)于DCM(5ml)中的溶液中依序添加DMAP(706mg，5.78mmol)、DIPEA(0.202mL，1.156mmol)及1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-醇(148mg，1.156mmol)。在室温搅拌反应混合物隔夜，浓缩且粗物质未经进一步纯化即进入下一步骤中。
步骤2：向97B(0.015g，0.039mmol)于DCM(1.500mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.020mL，0.116mmol)及(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)碳酸吡啶-2-酯(9.67mg，0.039mmol)且在25℃搅拌所得混合物隔夜。浓缩反应混合物且通过制备型HPLC纯化来纯化获得的粗物质。
与化合物97类似通过使化合物97B与对应酸、磺酰氯及醛反应来合成表3中所述的化合物。
表3
方案4
中间物104A：2-((二甲基氨基)亚甲基)-3-氧代丁二酸二乙基酯
向草乙酸二乙酯钠盐(100g，476mmol)于乙醇(250.00mL)中的溶液中添加1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(113g，952mmol)且在室温搅拌反应物30min。经3h时间段缓慢添加乙酸(54.5mL，952mmol)且在室温搅拌24h。减压蒸发挥发性组分且通过硅胶层析(750g管柱，用含30％EtOAc的己烷洗脱)纯化油性残余物。合并含有产物的馏分且蒸发，得到中间物104A(43g，30.8％)。MS(ES)：m/z＝244[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm7.84(s,1H),4.31(q,J＝7.2Hz,2H),4.18(q,J＝5.4Hz,2H),3.35(s,3H),3.04(s,3H),1.36(t,J＝7.2Hz,3H),1.26(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间物104B：1H-吡唑-4，5-二甲酸二乙基酯
向104A(45g，185mmol)于乙醇(150mL)中的搅拌溶液中添加N2H4.HCl(12.67g，185mmol)且在室温搅拌反应混合物隔夜。真空蒸发挥发物且将粗残余物溶解于水中且用EtOAc(3×50mL)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且真空蒸发。通过ISCO使用EtOAc及己烷纯化获得的所得粗产物，得到104B(21.00g，97mmol，52.4％)。MS(ES)：m/z＝211[M-H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ ppm 8.22(s,1H)4.48(q,J＝7.11Hz,2H)4.36(q,J＝7.18Hz,2H)1.33-1.49(m,6H)。
中间物104C：3-碘-1H-吡唑-4,5-二甲酸二乙酯
向104B(19g，90mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加NIS(30.2g，134mmol)且在115℃搅拌反应混合物16h。LCMS指示反应完成。蒸发DMF，且将粗物质溶解于EtOAc中，用水、硫代硫酸钠溶液洗涤，干燥，过滤且真空蒸发，得到粗产物，其通过ISCO使用EtOAc及己烷系统纯化。蒸发在含18-20％EtOAc的己烷下收集的馏分，得到104C(12.5g，37.0mmol，产率41.3％)。MS(ES)：m/z＝338[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 14.25(bs,1H),4.27(m,4H),1.26(m,6H)。
中间物104D：1-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二甲酸二乙酯
向在-5℃下冷却的中间物104C(10.000g，29.6mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中逐滴添加三苯基膦(11.64g，44.4mmol)及DIAD(8.63mL，44.4mmol)且在相同温度搅拌30min。在-5℃下添加(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(7.15g，44.4mmol)于THF(10mL)中的溶液且再继续搅拌1.5h。真空蒸发挥发物且通过硅胶层析(120g管柱，用含18％EtOAc的己烷洗脱)来纯化粗物质。合并含有产物的馏分且蒸发，得到中间物104D(8.2g，57％)。MS(ES)：m/z＝482[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.79(bs,1H),4.28-4.48(m,6H),3.58(d,J＝5.02Hz,2H),1.43(s,9H),1.33-1.40(m,6H)。
中间物104E：2-碘-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酸乙酯
将中间物104D(7g，14.54mmol)溶解于HCl的二噁烷溶液(2.210mL，4M溶液中，72.7mmol)且在室温搅拌反应混合物3h。自反应混合物蒸发挥发物且将残余物溶解于冷水中且通过添加固体NaHCO3碱化(pH＝8-9)。用DCM(4×25mL)萃取水层且干燥合并的有机层，过滤且在60℃下真空蒸发2h，得到104E(4.750g，14.17mmol，97％)。MS(ES)：m/z＝336[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.43(bs,1H),4.31-4.37(m,2H),4.24(q,J＝7.11Hz,2H),3.56-3.62(m,2H),1.27(t,J＝7.09Hz,3H)。
中间物104F：2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酸乙酯
在室温向中间物104E(5g，14.92mmol)于THF(200mL)中的搅拌溶液中逐滴添加甲硼烷二甲基硫醚复合物(15mL，158mmol)。在室温搅拌所得混合物18h。用乙醇(100mL)缓慢淬灭反应混合物且在70℃搅拌4h。真空蒸发挥发物且通过ISCO使用含甲醇(2％)的氯仿作为洗脱液纯化粗物质，得到104F(2.9g，60％)。MS(ES)：m/z＝321[M+H]+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm 4.25-4.34(m,2H),4.22(s,2H),4.12(t,J＝5.46Hz,2H),3.20-3.28(m,2H),1.38(td,J＝7.12,1.69Hz,3H)。
中间物104G：5-(叔丁基氨甲酰基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酸乙酯
向中间物104F(2.4g，7.47mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中添加2-异氰酸酯基-2-甲基丙烷(0.741g，7.47mmol)且搅拌反应混合物1.5h。减压蒸发挥发物。通过硅胶层析(120g管柱，用含28％EtOAc的己烷洗脱)纯化粗物质。合并含有产物的馏分且蒸发，得到中间物104G(2.2g，70％)。MS(ES)：m/z＝421[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.25(s,1H),4.72(s,2H),4.25(q,J＝6.8Hz,2H),4.10(t,J＝5.24Hz,2H),3.75(m,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)1.28(s,9H)。
中间物104H：5-(叔丁基氨甲酰基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酸
向中间物104G(2.1g，5.00mmol)于EtOH(10mL)及THF(5ml)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.718g，30.0mmol)于水(1mL)中的溶液且在室温搅拌5h。减压蒸发溶剂且将粗物质溶解于水中且在0℃下用1.5N HCl酸化。过滤所得沉淀且真空干燥，得到中间物104H(1.8g，81％)。MS(ES)：m/z＝393[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.61(s,1H),6.27(s,1H),4.69(s,2H),4.09(t,J＝5.26Hz,2H),3.74(t,J＝5.26,2H),1.28(s,9H)。
中间物104I：N5-(叔丁基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物104H(1.800g，4.59mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加氯化铵(1.473g，27.5mmol)、HATU(3.49g，9.18mmol)及DIPEA(3.21mL，18.36mmol)且在室温搅拌所得反应混合物3h。自反应混合物蒸发DMF，添加水且用EtOAc萃取。用冷水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且真空浓缩，得到粗产物，其通过ISCO使用含70％乙酸乙酯的己烷作为洗脱液来纯化。合并含有所需产物的馏分且蒸发，得到中间物104I(1.5g，85％)。MS(ES)：m/z＝392[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.37(bs,1H),6.86(bs,1H),6.24(s,1H),4.67(s,2H),4.07(t,J＝5.31Hz,2H),3.73(t,J＝5.31Hz,2H),1.20(s,9H)。
化合物104：N5-(叔丁基)-2-(3-氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向104I(200mg，0.511mmol)及(3-氯苯基)硼酸(160mg，1.022mmol)于1,4-二噁烷(2mL)及水(0.20mL)中的搅拌溶液中添加磷酸氢二钾(267mg，1.534mmol)。用氮气使反应混合物脱气5min，添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(29.2mg，0.036mmol)且在80℃搅拌5h。通过LCMS监测反应进程。用水(15mL)稀释反应混合物且用乙酸乙酯(3×15mL)反萃取水层。用盐水(2×25mL)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过反相制备型HPLC来纯化粗产物，得到化合物104(0.125mg，65％)。MS(ES):m/z＝376[M+H]+；HPLC保留时间8.11min.和8.47min.(HPLC方法A和B)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.72(dd,J＝3.45,0.69Hz,1H),7.65(dt,J＝6.71,1.88Hz,1H),7.43(m,2H),7.28(m,2H),6.28(s,1H),4.69(s,2H),4.13(t,J＝5.30Hz,2H),3.81(t,J＝5.33Hz,2H),1.28(s,9H)。
与化合物104类似通过使化合物104I与对应硼酸反应合成表4中所述的化合物。
表4
方案5
中间物156A：2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁酯3-乙酯
向104F(0.7g，2.180mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.912mL，6.54mmol)及Boc2O(0.952g，4.36mmol)。在室温搅拌所得反应混合物隔夜且通过LCMS监测反应进程。用二氯甲烷(20mL)稀释反应混合物，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过ISCO(24g硅胶管柱)使用石油醚及乙酸乙酯(9:1)混合物作为洗脱液纯化获得的粗产物。收集馏分且浓缩，得到中间物156A(800mg，87％)。MS(ES)：m/z＝422[M+H]+；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.86(s,2H),4.32(q,J＝6.8Hz,2H),4.20(m,2H),3.87(t,J＝5.6Hz,2H),1.50(s,9H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间物156B：5-(叔丁氧羰基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酸
向156A(0.80g，1.899mmol)于甲醇(7mL)中的搅拌溶液中添加含氢氧化钠(0.760g，1.899mmol)的水(3mL)。在室温搅拌所得反应混合物6h。减压移除甲醇且用1.5NHCl溶液酸化水层。用二氯甲烷(3×25mL)反萃取水层。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到所需中间物156B(700mg，94％)。MS(ES)：m/z＝394[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 4.89(s,2H),4.22(t,J＝5.2Hz,2H),3.88(t,J＝5.6Hz,2H),1.51(s,9H)。
中间物156C：3-氨甲酰基-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向156B(0.700g，1.780mmol)及氯化铵(0.190g，3.56mmol)于DMF(7mL)中的搅拌溶液中添加HATU(1.354g，3.56mmol)及DIPEA(0.933mL，5.34mmol)。在室温搅拌所得反应混合物隔夜。用水(20mL)稀释反应混合物且用乙酸乙酯(2×30mL)反萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过ISCO(24g硅胶管柱)使用含2％甲醇的氯仿作为洗脱液纯化粗产物，得到纯中间物156C(670mg，96％)。MS(ES)：m/z＝[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.38(bs,1H),6.86(bs,1H),4.72(s,2H),4.12(t,J＝5.2Hz,2H),3.77(t,J＝5.7Hz,2H),1.43(s,9H)。
中间物156D：3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物156C(500mg，1.275mmol)及(3-氯苯基)硼酸(399mg，2.55mmol)于1,4-二噁烷(5mL)及水(1mL)中的搅拌溶液中添加磷酸三钾(666mg，3.82mmol)。用氮气吹扫反应混合物5min。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(52.1mg，0.064mmol)且在80℃搅拌反应混合物12h。用水(20mL)稀释反应混合物且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过ISCO(24g二氧化硅管柱)使用含2％甲醇的氯仿纯化粗物质。收集馏分且浓缩，得到中间物156D(380mg，79％)。MS(ES)：m/z＝377[M+H]+；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ ppm 7.60(s,1H),7.46(m,3H),5.32(bs,2H),4.97(s,2H),4.21(t,J＝5.1Hz,2H),3.94(t,J＝5.7Hz,2H),1.29(s,9H)。
中间物156E：2-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃下向156D(350mg，0.929mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加TFA(2mL)且在室温搅拌反应混合物隔夜。减压移除TFA及DCM，用饱和氢氧化钠溶液碱化粗物质，过滤所得固体，用水洗涤，真空干燥，得到156E(250mg，97％)。MS(ES)：m/z＝277[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.71-7.73(m,1H),7.65(dt,J＝7.04,1.72Hz,1H),7.37-7.45(m,2H),7.20(bs,1H),7.10(bs,1H),4.00-4.05(m,4H),3.12(d,J＝4.83Hz,2H),2.63(s,1H)。
化合物156：2-(3-氯苯基)-N5-(3,4-二氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在氮气下向3,4-二氟苯胺(23.33mg，0.181mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(0.025mL，0.181mmol)且使反应混合物冷却至0℃，添加含三光气(26.8mg，0.090mmol)的DCM(1mL)且在相同温度搅拌10min。逐滴添加156E(25mg，0.090mmol)于DMF(1mL)中的溶液且在室温搅拌所得反应混合物隔夜。用水稀释且用乙酸乙酯(3×10mL)反萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。通过逆相制备型HPLC纯化获得的粗产物，得到呈灰白色固体状的产物156(10mg，25％)。MS(ES)：m/z＝432[M+H]+；HPLC保留时间为9.92min及8.82min(HPLC方法A及B)；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ ppm7.68-7.71(m,1H),7.60(ddd,J＝5.32,3.47,1.63Hz,1H),7.48-7.53(m,1H),7.44-7.48(m,2H),7.16-7.20(m,2H),5.01(s,2H),4.31(t,J＝5.40Hz,2H),4.08(t,J＝5.40Hz,2H)。
合成脲的一般方法：
方法A：
在0℃向中间物156E(30mg，0.115mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加对应异氰酸酯(0.288mmol)。在室温搅拌反应混合物3h。用水淬灭反应混合物，且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机层用水(2×5mL)、盐水溶液洗，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，其通过制备型HPLC纯化。
方法B：
在0℃向伯胺(0.192mmol)及三乙胺(0.480mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液中添加三光气(0.096mmol)且在相同温度搅拌反应混合物30min。添加含中间物156E(25mg，0.096mmol)的DMF且在室温搅拌溶液2h。用水淬灭反应混合物，且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。合并的有机层用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，其通过制备型HPLC进一步纯化。
方法C：
在0℃下向伯胺(0.192mmol)及三乙胺(0.480mmol)于四氢呋喃(3mL)中的溶液中添加氯甲酸苯酯(0.096mmol)且在室温搅拌反应混合物60min。用水淬灭反应混合物且萃取形成的氨基甲酸苯酯，且将含中间物156E(25mg，0.096mmol)的THF添加至萃取物中且在室温搅拌所得溶液2h。用水淬灭反应混合物，且用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。用10％NaHCO3(2×5mL)、水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，其通过制备型HPLC进一步纯化。
与化合物156类似通过使化合物156E与对应试剂反应合成表5中所述的化合物。
方案6
中间物172A：3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物156C(5g，12.7mmol)、(3-氯-4-氟苯基)硼酸(3.33g，19.12mmol)于1,4-二噁烷(75mL)及水(7.5mL)中的搅拌溶液中添加K3PO4(8.12g，38.2mmol)且用氮气吹扫反应混合物5min。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.521g，0.637mmol)且在80℃搅拌反应混合物12h。用水(75mL)稀释反应混合物且用EtOAc(3×75mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩滤液。通过硅胶层析(24g管柱，用含2％MeOH的CHCl3洗脱)来纯化粗反应混合物。收集馏分且浓缩，得到呈白色固体状的172A(4.2g，78％)。MS(ES)：m/z＝395[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm7.81-7.87(m,1H),7.63-7.72(m,1H),7.47(s,1H),7.15-7.37(m,2H),4.74(s,2H),4.16(s,2H),3.80-3.88(m,2H),1.45(s,9H)。
中间物172B：2-(3-氯-4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃下向中间物172A(4.2g，10.64mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中逐滴添加TFA(12.29mL，160mmol)且在室温搅拌反应混合物12h。减压浓缩反应混合物且用饱和NaOH水溶液碱化粗物质且搅拌10min。过滤分离的固体产物，用水洗涤且真空干燥，得到呈白色固体状的172B(2.8g，87％)。MS(ES)：m/z＝295[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.86(dd,J＝7.53,2.01Hz,1H),7.69(ddd,J＝8.66,4.89,2.01Hz,1H),7.44(t,J＝8.78Hz,1H),7.11-7.20(m,2H),3.99-4.04(m,4H),3.12(d,J＝6.02Hz,2H),2.62(s,1H)。
化合物172:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物172B(0.20g,0.679mmol)于THF(5mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.117g,0.814mmol)，将反应混合物在室温搅拌14h。反应混合物用水猝灭，用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层用10％NaHCO3水溶液，盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物172，为灰白色固体(147mg,50％)。HPLC保留时间8.99min.和8.73min.(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝439[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.45(br.s.,1H),7.85(m,1H),7.65-7.76(m,5H),7.44-7.57(m,1H),7.38(br.s.,1H),7.16(br.s.,1H),4.92(s,2H),4.26(t,J＝5.27Hz,2H),4.01(t,J＝5.52Hz,2H).
已与化合物172类似通过使中间物172B与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表6中所示的化合物。
表6
方案7
中间物205A：3-氨甲酰基-2-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
向中间物156C(9g，23mmol)、(3,4-二氯苯基)硼酸(6.57g，34.4mmol)于1,4-二噁烷(150mL)及水(10mL)中的搅拌溶液中添加K3PO4(14.61g，68.8mmol)且用氮气吹扫反应混合物15min。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2(1.124g，1.377mmol)且在80℃搅拌反应混合物12h。用水(300mL)稀释反应混合物，且用EtOAc(3×80mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩滤液。通过硅胶层析(40g管柱，用含65％EtOAc的己烷洗脱)来纯化粗反应混合物。收集馏分且浓缩，得到呈浅黄色固体状的中间物205A(8g，85％)。MS(ES)：m/z＝411.0[M+1]+；1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.92-7.87(m,1H),7.69-7.64(m,2H),7.44-7.18(m,2H),4.74(s,2H),4.17(t,2H),3.84(t,2H),1.45(s,9H)。
中间物205B：2-(3,4-二氯苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃向205A(9g，21.88mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加TFA(15mL，21.88mmol)且在室温搅拌反应混合物12h。减压移除挥发物且用10％NaOH水溶液碱化粗产物且搅拌10min。过滤分离的固体产物，用水洗涤且真空干燥，得到呈灰白色固体状的205B(5.2g，76％)。MS(ES)：m/z＝311.0[M+1]+；1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.92(s,1H),7.67(m,2H),7.32-7.09(m,2H),4.02(s,4H),3.12(br.s.,2H),2.70-2.58(m,1H)。
化合物205:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物205B(0.20g,0.643mmol)于THF(5mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.111g,0.771mmol)。将反应混合物在室温搅拌14h。反应混合物用水猝灭，用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物205，为灰白色固体(135mg,46％)。HPLC保留时间9.44分钟和9.06分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝405[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d ppm 9.50(br.s.,1H),7.91(s,1H),7.65-7.75(m,6H),7.25-7.45(d,2H),4.92(s,2H),4.26(t,J＝5.27Hz,2H),4.01(t,J＝5.52Hz,2H).
已与化合物205类似通过使中间物205B与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表7中所示的化合物。
表7
方案8
中间物215A:2-(3-氯-5-氟苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂戊环
向1-溴-3-氯-5-氟苯(1.5g,7.16mmol)和双(频哪醇)二硼(2.182g,8.59mmol)于二噁烷(5mL)中的溶液加入KOAc(2.109g,21.49mmol)，将反应混合物用氮气脱气15min。加入Pd2(PPh3)2Cl2(0.302g,0.430mmol)，将反应混合物在100℃加热，搅拌12h。将反应混合物经垫过滤，in关切浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(12g柱，用1％乙酸乙酯/己烷洗脱))。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物215A，为无色液体(1.3g,71％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.59(td,J＝2.3,9.0Hz,1H),7.46(dd,J＝1.0,2.0Hz,1H),7.34(ddd,J＝1.0,2.5,8.5Hz,1H),1.31(s,12H).
中间物215B:3-氨甲酰基-2-(3-氯-5-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯
中间物156C(1g,2.55mmol)、中间物215A(981mg,3.82mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中，加入K3PO4(1624mg,7.65mmol)于水(1.0mL)中的溶液，反应混合物用氮气吹扫5min。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(125mg,0.153mmol)，将反应混合物在80℃搅拌12h。反应混合物用水稀释(25mL)，用EtOAc(3x 25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用70％乙酸乙酯/己烷洗脱)。收集馏分并且浓缩，得到中间物215B，为灰白色固体(850mg,84％)。MS(ES):m/z＝575[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.60(t,J＝1.5Hz,1H),7.54-7.47(m,1H),7.47-7.32(m,3H),4.74(s,2H),4.18(t,J＝5.5Hz,2H),3.84(t,J＝5.3Hz,2H),1.45(s,9H).
中间物215C:2-(3-氯-5-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物215B(850mg,2.153mmol)于DCM(7mL)中的溶液中，加入TFA(5mL)，将所生成的溶液温热至室温，搅拌2h。减压除去挥发性物质，残余物用Et2O研磨。将分离的油产物用10％NaOH水溶液在室温处理，激烈搅拌2小时。过滤出分离的固体产物，用水洗涤，与甲苯共沸，得到中间物215C，为灰白色固体(500mg,79％)。MS(ES):m/z＝295.2[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.63(t,J＝1.5Hz,1H),7.56-7.50(m,1H),7.40(td,J＝2.1,8.8Hz,1H),7.27(br.s.,2H),4.07-3.99(m,4H),3.13(q,J＝5.5Hz,2H),2.68-2.60(m,1H).
化合物215:2-(3-氯-5-氟苯基)-N5-(4-氰基-3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物215C(30mg,0.102mmol)于DMSO(1mL)中的溶液中，加入(4-氰基-3-氟苯基)氨基甲酸苯酯(39.1mg,0.153mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌12h。反应混合物用水洗涤，过滤出固体产物，并且干燥。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物215，为灰白色固体。HPLC保留时间9.31分钟和9.25分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝457[M+H]+；1HNMR:(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.62(s,1H),7.75-7.84(m,1H),7.70(dd,J＝12.80,1.76Hz,1H),7.62(t,J＝1.51Hz,1H),7.31-7.56(m,5H),4.92(s,2H),4.27(t,J＝5.27Hz,2H),4.01(t,J＝5.27Hz,2H).
已与化合物215类似通过使中间物215C与相应的苯胺苯基异氰酸酯或与容易获得的异氰酸酯反应来制备表8中所示的化合物。
表8
方案9
中间物223A:3-氨甲酰基-2-(3-氟-5-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(500mg,1.275mmol)和(3-氟-5-甲基苯基)硼酸(294mg,1.912mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，加入K3PO4(812mg,3.82mmol)于水(1mL)中的溶液，反应混合物经氮气脱气15min。加入PdCl2(dppf)CH2Cl2(62.5mg,0.076mmol)，将反应混合物在85℃加热，并且搅拌12h。反应混合物经减压浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用65％乙酸乙酯/己烷洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物223A，为浅黄色固体(0.4g,84％)。MS(ES):m/z＝375.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.34(d,J＝0.8Hz,2H),7.28-7.21(m,1H),7.15-7.07(m,1H),7.07-7.00(m,1H),4.73(s,2H),4.15(t,J＝5.3Hz,2H),3.88-3.80(m,2H),2.35(s,3H),1.45(s,9H).
中间物223B:2-(3-氟-5-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物223A(400mg,1.068mmol)于DCM(4mL)中的溶液中，加入TFA(2.5mL)，使所生成的固体温热至室温，并且搅拌2小时。减压除去挥发性物质，粗产物用Et2O研磨(2x 20mL)。将TFA盐悬浮在10％NaOH水溶液中，在室温激烈搅拌2h。过滤出分离的固体产物，用水洗涤，与甲苯共沸，得到中间物223B，为灰白色固体(0.210g,71％)。MS(ES):m/z＝275.1[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.38(br.s.,1H),7.42(br.s.,1H),7.33(s,1H),7.24(d,J＝9.4Hz,1H),7.08(d,J＝9.4Hz,2H),4.55(s,2H),4.36(t,J＝5.7Hz,2H),3.69(t,J＝5.7Hz,2H),2.36(s,3H).
化合物223:2-(3-氟-5-甲基苯基)-N5-(4-(三氟甲基)苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
在0℃，向4-(三氟甲基)苯胺(29.0mg,0.180mmol)和TEA(0.063mL,0.449mmol)于THF(3mL)中的溶液中，加入三光气(26.7mg,0.090mmol)，将所生成的溶液在相同温度搅拌30min。加入中间物223B(25mg,0.090mmol)于THF(2mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌3h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物223，为白色固体(22mg,51％)。HPLC保留时间1.65分钟。(方法E)。MS(ES):m/z＝462[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.30(s,1H),7.67-7.74(m,2H),7.59-7.66(m,2H),7.36(s,2H),7.28(d,J＝10.04Hz,1H),7.13(br.s.,1H),7.04(d,J＝9.54Hz,1H),4.91(s,2H),4.24(t,J＝5.27Hz,2H),4.01(t,J＝5.27Hz,2H),2.30-2.35(s,3H).
已与化合物223类似通过使中间物223B与相应的苯胺苯基异氰酸酯或与容易获得/就地生成的异氰酸酯反应来制备表9中所示的化合物。
表9
方案10
中间物231A:3-氨甲酰基-2-(3,4-二氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(1.0g,2.55mmol)和(3,4-二氟苯基)硼酸(0.604g,3.82mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，加入K3PO4(1.624g,7.65mmol)于水(2mL)中的溶液，反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.125g,0.153mmol)，将反应混合物加热至80℃，搅拌5h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x 25mL).合并的有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗物质经硅胶色谱纯化(40g柱，用5％MeOH/CHCl3洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物231A，为白色固体(0.6g,62％)。MS(ES):m/z＝379[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.69(ddd,J＝12.30,8.03,1.76Hz,1H),7.42-7.58(m,2H),7.30(br.s.,1H),7.16(br.s.,1H),4.74(s,2H),4.11-4.22(m,2H),3.85(d,J＝5.52Hz,2H),1.46(s,9).
中间物231B:2-(3,4-二氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物231A(0.5g,1.321mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(0.509mL,6.61mmol)。将所生成的溶液在室温搅拌3h。减压除去挥发性物质，将残余物悬浮在10％NaOH水溶液(10mL)中，并且搅拌30分钟。经布氏漏斗过滤固体，用乙醚洗涤，干燥得到中间物231B(0.32g,87％)。MS(ES):m/z＝279[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm7.71(ddd,J＝12.28,7.93,2.08Hz,1H),7.39-7.60(m,1H),6.99-7.31(m,1H),3.94-4.07(m,2H),3.26-3.53(m,4H),3.11(q,J＝5.67Hz,1H).
化合物231:2-(3,4-二氟苯基)-N5-(4-(三氟甲基)苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在0℃，向4-(三氟甲基)苯胺(29.0mg,0.180mmol)和TEA(0.063mL,0.449mmol)于THF(3mL)中的溶液中，加入三光气(26.7mg,0.090mmol)，将所生成的溶液在相同温度搅拌30分钟。加入中间物231B(25mg,0.090mmol)于THF(2mL)中的溶液，将反应混合物在室温搅拌3h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物231，为白色固体(21mg,50％).HPLC保留时间为1.58分钟。(方法E)。MS(ES):m/z＝466[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.31(s,1H),7.66-7.78(m,3H),7.62(s,2H),7.44-7.59(m,2H),7.37(br.s.,1H),7.20(br.s.,1H),4.92(s,2H),4.25(d,J＝10.54Hz,2H),4.01(d,J＝10.54Hz,2H).
已与化合物231类似通过使中间物231B与各种容易得到的异氰酸酯或从相应苯胺就地生成的偶合来制备表10中所示的化合物。
表10
方案11
中间物239A:3-氨甲酰基-2-(4-氟-3-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(500mg,1.275mmol)和(4-氟-3-甲基苯基)硼酸(294mg,1.912mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，加入K3PO4(812mg,3.82mmol)于水(0.4mL)中的溶液，反应混合物用氮气脱气15分钟。加入PdCl2(dppf)CH2Cl2(62.5mg,0.076mmol)，将反应混合物加热至85℃并且搅拌14h。将反应混合物减压浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用65％乙酸乙酯/己烷洗脱)，合并含有产物的馏分，并且蒸发得到中间物239A，为浅黄色固体(0.44g,92％).1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.54(d,J＝7.2Hz,1H),7.47(ddd,J＝2.3,5.4,8.2Hz,1H),7.24(br.s.,1H),7.22-7.13(m,1H),6.88(br.s.,1H),4.73(s,2H),4.14(t,J＝5.5Hz,2H),3.84(t,J＝5.3Hz,2H),2.26(d,J＝1.5Hz,3H),1.45(s,9H).
中间物239B:2-(4-氟-3-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物239A(440mg,1.175mmol)于DCM(5mL)中的溶液中，加入TFA(4mL)。使所生成的固体温热至室温，并且搅拌2小时。压力下除去挥发性物质，残余物用Et2O(2x20mL)研磨。将固体化合物悬浮在10％NaOH水溶液中，在室温激烈搅拌2小时。过滤出固体，用水洗涤，与甲苯共沸，得到中间物239B，为棕色固体(0.250g,77％)。MS(ES):m/z＝275.2[M+H]+.1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.56(d,J＝7.9Hz,1H),7.49(ddd,J＝2.3,5.3,8.3Hz,1H),7.21-7.08(m,2H),6.85(br.s.,1H),4.06-3.95(m,4H),3.11(d,J＝4.9Hz,2H),2.62(br.s.,1H),2.25(d,J＝1.5Hz,3H).
化合物239:N5-(4-氰基-3-甲基苯基)-2-(4-氟-3-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物239B(30mg,0.109mmol)于DMSO(1mL)中的搅拌溶液中，加入(4-氰基-3-甲基苯基)氨基甲酸苯酯(41.4mg,0.164mmol)。将所生成的溶液在室温搅拌12h。反应混合物用水洗涤，分离固体产物，经反相制备型HPLC色谱纯化，得到化合物239，为白色固体(23mg,48％)。HPLC保留时间为8.47分钟和8.96分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝433[M+H]+；1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.32(s,1H),7.65(d,J＝8.53Hz,1H),7.57(s,2H),7.45-7.53(m,2H),7.30(br.s.,1H),7.14-7.23(m,1H),6.91(br.s.,1H),4.90(s,2H),4.22(t,J＝5.27Hz,2H),4.00(t,J＝5.27Hz,2H),2.40-2.47(m,3H),2.27(d,J＝1.51Hz,3H).
已与化合物239类似通过使中间物239B与相应的苯胺苯基异氰酸酯或与容易获得/就地生成的异氰酸酯反应来制备表11中所示的化合物。
表11
方案12
中间物249A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(1g,2.55mmol)于1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的溶液中，加入(3-氯-4-甲基苯基)硼酸(0.652g,3.82mmol)、K3PO4(1.624g,7.65mmol)，反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(0.125g,0.153mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌5h。反应混合物冷却至室温，经垫过滤，真空浓缩滤液。粗产物用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用5％MeOH/CHCl3洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到化合物249A，为浅褐色固体(0.68g,70％)。MS(ES):m/z＝391[M+1]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.69(d,J＝1.5Hz,1H),7.56-7.51(m,1H),7.40(s,1H),7.34-7.26(m,1H),7.16-7.06(m,1H),4.73(s,2H),4.15(s,2H),3.84(s,2H),2.35(s,3H),1.45(s,9H).
中间物249B:2-(3-氯-4-甲基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物249A(680mg,1.740mmol)于DCM(5mL)中的溶液中，逐滴加入TFA(2.011mL,26.1mmol)，将所生成的溶液温热至室温，并且搅拌4h。浓缩反应混合物，在0℃将粗产物悬浮在20％NaOH水溶液中，在室温搅拌2h。过滤分理出的固体，干燥得到中间物249B，为灰色固体(450mg,87％)。MS(ES):m/z＝291[M+1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm7.71(d,J＝1.5Hz,1H),7.55(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.25-6.97(m,2H),4.06-3.91(m,4H),3.12(br.s.,2H),2.69-2.58(m,1H),2.35(s,3H).
化合物249:2-(3-氯-4-甲基苯基)-N5-(4-氰基-3-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物249B(30mg,0.103mmol)于DMSO(3mL)中的搅拌溶液中，加入(4-氰基-3-甲基苯基)氨基甲酸苯酯(31.2mg,0.124mmol)。将所生成的溶液在室温搅拌8h。反应混合物用水洗涤，激烈搅拌5分钟，将粗产物过滤，真空干燥。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物249，为灰白色固体(25.97mg,56％)。HPLC保留时间8.79分钟和9.72分钟。(分别为方法B和A)。MS(ES):m/z＝449[M+1]+；1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.32(s,1H),7.71(d,J＝1.51Hz,1H),7.65(d,J＝8.53Hz,1H),7.45-7.59(m,3H),7.30-7.44(m,2H),7.14(br.s.,1H),4.90(s,2H),4.24(t,J＝5.27Hz,2H),4.00(t,J＝5.27Hz,2H),2.43(s,3H),2.31-2.39(m,3H).
已与化合物249类似通过使中间物249B与相应的苯胺苯基异氰酸酯或与容易获得/就地生成的异氰酸酯反应来制备表12中所示的化合物。
表12
方案13
中间物258A:3-氯-4-环丙基苯胺
向4-溴-3-氯苯胺(3g,14.53mmol)和环丙基硼酸(1.872g,21.80mmol)于1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中，加入Na2CO3(4.62g,43.6mmol)于水(0.4mL)中溶液，将反应混合物用氮气脱气15分钟。加入PdCl2(dppf)CH2Cl2(1.187g,1.453mmol)，将反应混合物加热至85℃并且搅拌16h。将反应混合物减压弄素，粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用70％乙酸乙酯/己烷洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物258A，为无色半固体(1.2g,49％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 6.70(d,J＝8.5Hz,1H),6.62-6.60(m,1H),6.43(dd,J＝2.3,8.3Hz,1H),5.15(s,2H),1.90(tt,J＝5.1,8.4Hz,1H),0.87-0.81(m,2H),0.53-0.48(m,2H).
中间物258B:2-氯-1-环丙基-4-碘苯
在0℃，向258A(1g,5.97mmol)于6N HCl(5mL)中的溶液中，加入NaNO2(0.453g,6.56mmol)于水(1mL)中的溶液，将反应混合物在相同将温度搅拌45分钟。加入KI(1.981g,11.93mmol)，将反应混合物在0℃再搅拌15分钟。将反应混合物温热至室温，用Et2O萃取(3x10mL)。合并的有机层用饱和NaHSO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩滤液，得到中间物258B，为棕色半固体(1.3g,78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.77(d,J＝2.0Hz,1H),7.58(dd,J＝1.5,8.0Hz,1H),6.84-6.79(m,1H),2.09(tt,J＝5.4,8.4Hz,1H),1.04-0.98(m,2H),0.72-0.66(m,2H).
中间物258C:2-(3-氯-4-环丙基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环
向中间物258B(1.3g,4.67mmol)和双(频哪醇)二硼(1.422g,5.60mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中，加入KOAc(1.374g,14.00mmol)，反应混合物用氮气脱气15分钟。加入PdCl2(PPh3)2(0.197g,0.280mmol)，将反应混合物加热至100℃并且搅拌12h。将反应混合物减压浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱剂洗脱8％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物258C，为无色半固体(1.2g,92％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.60-7.58(m,1H),7.53-7.48(m,1H),7.02(d,J＝7.5Hz,1H),2.19(tt,J＝5.1,8.4Hz,1H),1.17(s,12H),1.08-1.02(m,2H),0.76-0.70(m,2H).
中间物258D:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-环丙基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(500mg,1.275mmol)和258C(533mg,1.912mmol)于1,4-二噁烷(3mL)中的溶液中，加入K3PO4(812mg,3.82mmol)于水(0.4mL)中的溶液，反应混合物用氮气脱气15分钟。加入PdCl2(dppf)CH2Cl2加成物(62.5mg,0.076mmol)，将反应混合物加热至85℃并且搅拌12h。将反应混合物减压浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱60％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物258D，为灰白色固体(350mg,66％)。MS(ES):m/z＝417.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.53(dd,J＝2.0,8.0Hz,1H),7.35-7.09(m,2H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),4.73(s,2H),4.15(t,J＝5.5Hz,2H),3.87-3.81(m,2H),2.21-2.12(m,1H),1.45(s,9H),1.06-1.00(m,2H),0.77-0.71(m,2H).
中间物258E:2-(3-氯-4-环丙基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA盐
在0℃，向中间物258D(350mg,0.840mmol)于DCM(7mL)中的溶液中，加入TFA(5mL)，使所生成的固体温热至室温，并且搅拌2小时。减压除去挥发性物质，残余物用Et2O研磨，得到中间物258E的TFA盐，为灰白色固体(300mg,83％)。MS(ES):m/z＝317.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.43(br.s.,1H),7.68(d,J＝1.9Hz,1H),7.52(dd,J＝1.7,8.1Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.15(br.s.,1H),7.08(d,J＝8.3Hz,1H),4.55(s,2H),4.40-4.32(m,2H),3.69(t,J＝5.9Hz,2H),2.22-2.12(m,1H),1.08-1.00(m,2H),0.78-0.70(m,2H).
化合物258:2-(3-氯-4-环丙基苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物258E(80mg,0.186mmol)于THF(5mL)中的溶液中，加入TEA(0.259mL,1.857mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌30分钟。4-异氰酸酯基苯甲腈(26.8mg,0.186mmol)加入将反应混合物在室温搅拌14h。反应混合物用EtOAc稀释，用水，盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物258，为灰白色固体(0.02g,22％)。HPLC保留时间1.571分钟和1.556分钟。(分别为方法J和K)。MS(ES):m/z＝461.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.39(s,1H),7.62-7.80(m,5H),7.52-7.59(m,1H),7.37(br.s.,1H),7.17(br.s.,1H),7.06(d,J＝8.03Hz,1H),4.90(s,2H),4.24(t,J＝5.27Hz,2H),4.00(t,J＝5.27Hz,2H),2.17(ddd,J＝13.55,8.28,5.27Hz,1H),0.93-1.10(m,2H),0.66-0.82(m,2H).
方案14
中间物259A:2-(3,5-二氯-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环
向5-溴-1,3-二氯-2-氟苯(1.5g,6.15mmol)于1,4-二噁烷(3.0mL)中的搅拌溶液中，加入B2Pin2(2.343g,9.23mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.301g,0.369mmol),KOAc(1.509g,15.38mmol)，反应混合物用氮气脱气10分钟。然后将反应混合物加热至100℃并且搅拌4h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，经过滤，滤液用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱3％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物259A，为无色油状物(1.3g,72％).1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.71(d,J＝6.53Hz,2H),1.29-1.32(m,12H).
中间物259B:3-氨甲酰基-2-(3,5-二氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(1.2g,3.06mmol)于1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌悬浮液中，加入中间物259A(1.335g,4.59mmol),K3PO4(1.948g,9.18mmol)，将反应混合物脱气10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.150g,0.184mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌8h。反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱60％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物259B，为白色固体(1.1g,80％)。MS(ES):m/z＝429[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85(d,J＝6.53Hz,2H),7.35(br.s.,2H),4.75(s,2H),4.17(t,J＝5.52Hz,2H),3.84(t,J＝5.52Hz,2H),1.45(s,9H).
中间物259C:2-(3,5-二氯-4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
向中间物259B(1.1g,2.56mmol)于DCM(5.0mL)中的溶液中，加入TFA(10mL,130mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌3h。减压除去挥发性物质。将残余物加至NaHCO3的饱和水溶液中，并且搅拌1h。过滤收集固体，并且真空干燥，得到中间物259C，为灰白色固体(0.75g,89％)。MS(ES):m/z＝329[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.89(d,J＝6.53Hz,2H),7.27(br.s.,2H),3.95-4.13(m,4H),3.13(t,J＝5.52Hz,2H),2.68(br.s.,1H).
化合物259:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,5-二氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物259C(0.1g,0.304mmol)于THF(2mL)中的溶液中，加入TEA(0.085mL,0.608mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌30分钟。加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.053g,0.365mmol)，将反应混合物在室温搅拌2h。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物259，为灰白色固体(0.02g,22％)。HPLC保留时间10.01分钟和9.05分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝473[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.39(s,1H),7.88(d,J＝6.53Hz,2H),7.63-7.76(m,4H),7.26-7.51(m,2H),4.93(s,2H),4.26(t,J＝5.52Hz,2H),4.01(t,J＝5.52Hz,2H).
已与化合物259类似通过使中间物259C与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表13中所示的化合物。
表13
方案15
中间物265A:3-溴-5-氯-N，N-二甲基苯胺
在室温，向3-溴-5-氯苯胺(0.3g,1.453mmol)于乙腈(5.0mL)中的搅拌溶液中，先后加入37％甲醛溶液(1.082mL,14.53mmol)和氰基硼氢化钠(0.274g,4.36mmol)。历时10分钟加入乙酸(0.3mL,5.24mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。向反应混合物中加入10％NaOH水溶液。用乙酸乙酯萃取(2x 15mL)。合并的有机层用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物265A，为浅黄色固体(0.25g,73％).1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ ppm 6.83(t,J＝1.70Hz,1H),6.68-6.72(m,1H),6.56-6.60(m,1H),2.96(s,6H).
中间物265B:3-氯-N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)苯胺
向中间物265A(0.25g,1.066mmol)于1,4-二噁烷(8mL)的搅拌溶液中，加入B2Pin2(0.677g,2.67mmol)、KOAc(0.262g,2.67mmol)、PdCl2(dppf)2-CH2Cl2加成物(0.052g,0.064mmol)，反应混合物用氮气吹洗5分钟。然后将反应混合物加热至90℃，搅拌16h。将反应混合物浓缩，残余物用乙酸乙酯萃取(3x 15mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱2％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物265B，为灰白色固体(0.26g,87％)。MS(ES):m/z＝200[M-82)]；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.11(d,J＝2.01Hz,1H),7.01(d,J＝2.01Hz,1H),6.70-6.78(m,1H),2.96(s,6H),1.31-1.35(m,12H).
中间物265C:3-氨甲酰基-2-(3-氯-5-(二甲基氨基)苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(1.0g,2.55mmol)于1,4-二噁烷(20.0mL)中的搅拌悬浮液中加入中间物265B(1.077g,3.82mmol),K3PO4(1.624g,7.65mmol),PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.125g,0.153mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。然后将反应混合物加热至80℃并且搅拌8h。反应混合物浓缩，然后用乙酸乙酯萃取(3x 20mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱1％MeOH/氯仿)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物265C，为棕色固体(0.55g,51％)。MS(ES):m/z＝420[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.26-7.35(m,1H),6.87-7.01(m,3H),6.71(t,J＝2.01Hz,1H),4.73(s,2H),4.15(t,J＝5.27Hz,2H),3.84(t,J＝5.52Hz,2H),2.93(s,6H),1.46(s,9H).
中间物265D:2-(3-氯-5-(二甲基氨基)苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物265C(0.55g,1.310mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，滴加TFA(2.027mL,26.3mmol)，将生成的溶液温热至室温，搅拌4h。反应混合物浓缩，在0℃向粗产物中加入饱和的NaHCO3水溶液，在室温搅拌1小时。过滤出分离噁固体，干燥得到中间物265D，为棕色固体(0.24g,57％)。MS(ES):m/z＝320[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.20(br.s.,1H),6.86-7.04(m,3H),6.68(t,J＝2.01Hz,1H),3.88-4.04(m,4H),3.12(d,J＝4.02Hz,2H),2.93(s,6H)2.50(br.s,1H).
化合物265:2-(3-氯-5-(二甲基氨基)苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于化合物259的合成顺序，从中间物265D合成化合物265。HPLC保留时间8.19分钟和8.53分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝464[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),7.79-7.62(m,4H),7.37(br.s.,1H),7.07-6.89(m,3H),6.72(t,J＝2.0Hz,1H),4.90(s,2H),4.24(t,J＝5.3Hz,2H),4.06-3.94(m,2H),3.01-2.86(s,6H).
已与化合物265类似通过使中间物265D与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表14中所示的化合物。
表14
方案16
中间物270A:2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在室温向中间物156C(1.500g,3.82mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中，缓慢加入TFA(8mL)，将反应混合物在室温搅拌2h。反应混合物用10％NaOH水溶液稀释，经布氏漏斗过滤出所形成的固体，经真空干燥，得到中间物270A(0.95g,85％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝293[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.23(br.s.,1H),6.78(br.s.,1H),4.02(d,J＝5.5Hz,2H),3.97(t,J＝5.5Hz,2H),3.06(q,J＝5.0Hz,2H),2.59(t,J＝5.5Hz,1H).
中间物270B:N5-(4-氰基苯基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物270A(2.5g,6.16mmol)于THF(100mL)中的溶液中，加入4-氰基苯基异氰酸酯(1.065g,7.39mmol)，将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩，将残余物溶解在DCM(50ml)中，用饱和的NaHCO3水溶液，水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物用乙醚研磨(3x 50mL)。固体经布氏漏斗过滤，用己烷淋洗，得到中间物270B，为白色固体(2.5g,93％)。MS(ES):m/z＝437[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm9.36(s,1H),7.59-7.77(m,4H),7.43(br.s.,1H),6.89(br.s.,1H),4.90(s,2H),4.21(t,J＝5.27Hz,2H),3.95(d,J＝5.52Hz,2H).
化合物270:2-(5-氯吡啶-3-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物270B(40mg,0.092mmol),3-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)吡啶(32.9mg,0.138mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中，加入K3PO4(58.4mg,0.275mmol)于水(0.5ml)中的溶液，所生成的反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(4.49mg,5.50μmol)，反应混合物加热至80℃并且搅拌5h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且滤液浓缩，得到粗化合物，经制备型HPLC纯化，得到化合物270，为灰白色固体(20mg,51％)。HPLC保留时间为7.01分钟和6.85分钟。(方法A和B)。MS(ES):m/z＝422[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.80(d,J＝1.51Hz,1H),8.63(d,J＝2.51Hz,1H),8.15(t,J＝2.01Hz,1H),7.71(q,J＝9.04Hz,4H),7.37(br.s.,2H),4.95(s,2H),4.29(t,J＝5.27Hz,2H),4.02(t,J＝5.27Hz,2H).
已与化合物270类似通过使中间物270B与各种容易获得的硼酸发生Suzuki偶合来制备表15中所示的化合物。
表15
方案17
中间物292A:3-氯-2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)吡啶
向5-溴-3-氯-2-氟吡啶(0.5g,2.376mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的溶液中，加入双(频哪醇)二硼(0.724g,2.85mmol)和KOAc(0.350g,3.56mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(0.097g,0.119mmol)使反应混合物在80℃搅拌3h。减压除去挥发性物质，残余物用EtOAc萃取(3x 20mL)。合并的有机层浓缩，残余物用正己烷研磨，得到中间物292A(0.5g,82％)，为棕色固体。MS(ES):m/z＝176[M-84]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.34-8.39(m,1H),8.17-8.26(m,1H),1.32(s,12H).
中间物292B:3-氨甲酰基-2-(5-氯-6-氟吡啶-3-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(0.2g,0.510mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中，加入中间物292A(0.197g,0.765mmol)和K3PO4(0.325g,1.53mmol)于水(2mL)中的溶液，所生成的反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(0.025g,0.031mmol)然后将反应混合物加热至80℃，搅拌5h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩。粗反应化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0至2％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物292B(0.15g,74％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝396[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.32-8.47(m,2H),7.29(br.s.,2H),4.79(s,2H),4.15-4.27(m,2H),3.86(d,J＝5.52Hz,2H),1.44(s,9H).
中间物292C:2-(5-氯-6-氟吡啶-3-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
在0℃，向中间物292B(0.15g,0.379mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(0.146mL,1.895mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌3h。减压除去挥发性物质，残余物用10％NaOH水溶液处理。过滤固体，用己烷洗涤，真空干燥，得到中间物292C(0.1g,94％)，为浅黄色固体。MS(ES):m/z＝296[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.35-8.51(m,2H),7.05-7.30(br.s,2H),3.96-4.16(m,4H),3.14(d,J＝5.02Hz,2H),2.61-2.74(m,1H).
化合物292:2-(5-氯-6-氟吡啶-3-基)-N5-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
将中间物292C(20mg,0.067)和中间物(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸苯酯(24.86mg,0.081mmol)于DMSO(3mL)中的溶液在室温搅拌6小时。反应混合物用水洗涤，过滤析出的固体，然后干燥。粗物质经硅胶色谱纯化(4g柱，用以下洗脱梯度洗脱0至5％MeOH/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到化合物292(12mg,32％)，为浅黄色固体。MS(ES):m/z＝439[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.60(br s,1H),8.37-8.47(m,2H),8.16(d,J＝2.01Hz,1H),8.05(d,J＝8.53Hz,1H),7.93-7.99(m,1H),7.24-7.43(br s,2H),4.98(s,2H),4.25-4.33(m,2H),4.04(d,J＝5.52Hz,2H).
已与化合物292类似通过使中间物292C与相应的苯胺苯基异氰酸酯或与容易获得/就地生成的异氰酸酯反应来制备表16中所示的化合物。
表16
方案18
中间物297A:2，3-二氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)吡啶
向5-溴-2,3-二氯吡啶(0.25g,1.102mmol)于DMF(3mL)中的溶液中，加入KOAc(0.324g,3.31mmol),双(频哪醇)二硼(0.336g,1.322mmol)，将所生成的反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.048g,0.066mmol)，将反应混合物加热至90℃并且搅拌18h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用EtOAc萃取(2x 50mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-10％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物297A(0.08g,25％)。MS(ES):m/z＝272.4[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.89(d,J＝2.3Hz,1H),8.69(d,J＝2.3Hz,1H),1.17(s,12H).
中间物297B:3-氨甲酰基-2-(5,6-二氯吡啶-3-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(0.1g,0.255mmol)和中间物297A(0.070g,0.255mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中，加入Na2CO3(0.081g,0.765mmol)于水(0.5mL)中的溶液，反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入Pd(PPh3)4(0.015g,0.013mmol)，将反应混合物加热至100℃并且搅拌15h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(2x 50mL)。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-60％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物297B(0.05g,43％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝412.1[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.62(d,J＝1.9Hz,1H),8.33(s,1H),7.66-7.52(m,1H),7.34(br.s.,1H),4.77(s,2H),4.20(t,J＝5.3Hz,2H),3.85(t,J＝5.3Hz,2H),1.43(s,9H).
中间物297C:2-(5,6-二氯吡啶-3-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA
向中间物297B(0.35g,0.849mmol)于DCM(15mL)中的溶液中，加入TFA(0.327mL,4.24mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌1h。减压除去挥发性物质，反应混合物用乙醚研磨，得到中间物297C(0.3g,91％)，为浅黄色固体。MS(ES):m/z＝312.0[M+H]+.
中间物297:N5-(4-氰基苯基)-2-(5,6-二氯吡啶-3-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物297C(0.05g,0.082mmol)和4-异氰酸酯基苯甲腈(0.012g,0.082mmol)于THF(1mL)中的搅拌溶液中，加入TEA(0.034mL,0.246mmol)和将所生成的反应混合物在室温搅拌18h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物297(0.006g,16％)，为灰白色固体。HPLC保留时间为1.357分钟和1.365分钟。(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝456.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.40(s,1H),8.64(d,J＝2.5Hz,1H),8.34(d,J＝2.0Hz,1H),7.77-7.63(m,4H),7.43(br.s.,1H),7.33(br.s.,1H),4.94(s,2H),4.28(t,J＝5.3Hz,2H),4.01(t,J＝5.3Hz,2H).
已与化合物297类似通过使中间物297C与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表17中所示的化合物。
表17
方案19
中间物299A:N5-(3,4-二氯苯基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物270A(350mg,1.198mmol)于THF(20mL)中的溶液中，加入TEA(0.501mL,3.59mmol),1,2-二氯-4-异氰酸酯基苯(270mg,1.438mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物减压浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯(50mL)，用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物用乙酸乙酯研磨(3x 50mL)，固体经布氏漏斗过滤，用己烷淋洗，得到中间物299A，为白色固体(350mg 59％)。MS(ES):m/z＝477.8[M-H]-；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.17(s,1H),7.81(d,J＝2.5Hz,1H),7.53-7.41(m,3H),6.90(br.s.,1H),4.89(s,2H),4.24-4.15(m,2H),3.92(t,J＝5.3Hz,2H).
化合物299:2-(5-氯吡啶-3-基)-N5-(3,4-二氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物299A(40mg,0.083mmol),(5-氯吡啶-3-基)硼酸(19.67mg,0.125mmol)于1,4-二噁烷(1.5mL)中的溶液中，加入K3PO4(53.1mg,0.250mmol)于水(0.5mL)中的溶液，将所生成的反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(3.4mg,4.17μmol),将反应混合物加热至80℃并且搅拌5h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x5mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗化合物，经制备型HPLC纯化，得到化合物299，为灰白色固体(18mg,46％).HPLC保留时间为1.357分钟和1.365分钟。(分别为方法J和K)。MS(ES):m/z＝464.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ ppm8.80(d,J＝2.01Hz,1H),8.58(d,J＝2.51Hz,1H),8.19(t,J＝2.26Hz,1H),7.74(d,J＝2.51Hz,1H),7.27-7.48(m,2H),5.02(s,2H),4.29-4.40(m,2H),4.09(t,J＝5.27Hz,2H).
已与化合物299类似通过使中间物299A与各种容易获得的硼酸偶合来制备表18中所示的化合物。
表18
方案20
中间物304A:5-溴-4-氯-2-肼基吡啶
向2,5-二溴-3-氯吡啶(0.5g,1.843mmol)于吡啶(2.5mL)中的搅拌溶液中，加入水合肼(0.099mL,2.027mmol)，将反应混合物加热至80℃，保持16h。反应混合物浓缩，与甲苯共沸，得到中间物304A(0.4g,87％)，为黄色固体，其用于下一步骤而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝224[M+2]+.
中间物304B:6-溴-8-氯-3-甲基-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶
将中间物304A(0.9g,4.05mmol)于乙酸(10mL,175mmol)中的溶液加热至110℃并且搅拌16h。将反应混合物减压浓缩，粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱3-8％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物304B(0.3g,27％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝248[M+2]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.79(d,J＝1.5Hz,1H),7.80(d,J＝1.5Hz,1H),2.70-2.68(m,3H).
中间物304C:8-氯-3-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
向中间物304B(0.5g,2.028mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中，加入双(频哪醇)二硼(1.030g,4.06mmol),KOAc(0.597g,6.09mmol)，所生成的反应混合物用氮气脱气5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(0.083g,0.101mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌4h。将反应混合物减压浓缩，残余物用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物304C(0.5g,70％)，为棕色油状物，其用于Suzuki偶合而没有进一步纯化。
中间物304D:3-氨甲酰基-2-(8-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(0.5g,1.275mmol)和中间物304C(1.123g,3.82mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液中，加入K3PO4(0.812g,3.82mmol)于水(0.5mL)中的溶液，反应混合物用氮气脱气10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.078g,0.096mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，经过滤。滤液用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱60-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物304D(0.160g,23％)，为棕色油状物。MS(ES):m/z＝430[M-H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.70(d,J＝1.1Hz,1H),7.72(d,J＝1.5Hz,1H),7.55(d,J＝8.3Hz,2H),4.80(s,2H),4.20(t,J＝5.5Hz,2H),3.86(t,J＝5.5Hz,2H),2.74-2.67(m,3H),1.45(s,9H).
中间物304E:2-(8-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺HCl盐
将中间物304D(0.34g,0.787mmol)于4M HCl/二噁烷(3mL,0.787mmol)的溶液在室温搅拌3小时。减压除去挥发性物质，残余物用乙醚研磨，得到中间物304E(0.14g,48％)，为棕色固体MS(ES):m/z＝332[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 10.00(br.s.,2H),8.73(d,J＝1.1Hz,1H),7.73(d,J＝1.5Hz,1H),4.60(br.s.,2H),4.44(t,J＝5.5Hz,2H),3.75-3.63(t,J＝5.5Hz,2H),2.77-2.67(m,3H).
化合物304:2-(8-氯-3-甲基-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物304E(0.05g,0.151mmol)于THF(1mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.22g,0.151mmol)，接着加入TEA(0.063mL,0.452mmol)，所生成的溶液在室温搅拌12h。反应混合物用水猝灭(2mL)，用真空浓缩。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物304(2mg,3％)，为白色固体。HPLC保留时间1.03分钟和1.02分钟。(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝476[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.42(s,1H),8.72(d,J＝1.0Hz,1H),7.75-7.65(m,5H),7.46-7.15(m,2H),4.97(s,2H),4.28(t,J＝5.3Hz,2H),4.02(t,J＝5.3Hz,2H),2.72(s,3H).
类似于化合物304，通过偶合中间物304E和从相应苯胺原位生成的异氰酸酯来制备表19中的化合物。
表19
方案21
中间物306A:6-溴-8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
将中间物304A(4g,17.98mmol)于乙酸二乙氧基甲酯(20mL,17.98mmol)中的溶液在室温搅拌16h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x100mL)。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液真空浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-7％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物306A(1.4g,30％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝232[M＝H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.28(s,1H),8.93(d,J＝1.51Hz,1H),7.86(d,J＝1.00Hz,1H).
中间物306B:8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
向中间物306A(0.5g,2.151mmol)于二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中，加入双(频哪醇)二硼(1.092g,4.30mmol),KOAc(0.633g,6.45mmol)，反应混合物用氮气脱气5分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.088g,0.108mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌4h。反应混合物冷却至室温，经过滤，垫用乙酸乙酯洗涤(100mL)。滤液用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗中间物306B(200mg,40％)，其用于Suzuki偶合而没有进一步纯化。
中间物306C:3-氨甲酰基-2-(8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物304D的合成顺序，由中间物306B合成中间物306C。MS(ES):m/z＝418[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.46(s,1H),8.93(d,J＝1.1Hz,1H),7.77(d,J＝1.5Hz,1H),7.38-7.18(m,2H),4.79(s,2H),4.19(t,J＝4.9Hz,2H),3.86(t,J＝1.0Hz,2H)1.43(s,9H).
中间物306D:2-(8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA盐
使用类似于制备中间物304E的合成顺序，中间物306D由间物306C合成。MS(ES):m/z＝318[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 10.07(br.s.,2H),9.47(s,1H),8.96(d,J＝1.5Hz,1H),7.77(d,J＝1.1Hz,1H),7.50-7.22(m,2H),4.58(br.s.,2H),4.44(t,J＝5.5Hz,2H),3.68(t,J＝5.5Hz,2H).
化合物306:2-(8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-6-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物304的合成顺序，化合物306由中间物306D合成。HPLC保留时间0.98分钟和1.01分钟。(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝462[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.46(s,1H),9.42(s,1H),8.95(d,J＝1.5Hz,1H),7.78(d,J＝1.5Hz,1H),7.74-7.65(m,4H),7.41-7.21(m,2H),4.95(s,2H),4.28(t,J＝5.3Hz,2H),4.02(t,J＝5.5Hz,2H).
表20中的化合物以类似于化合物306，通过偶合中间物30异氰酸酯D与从相应的苯胺原位生成的物质。
表20
方案22
中间物308A:(5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲醇
将2，5-二溴-3-氯吡啶(3.0g,11.06mmol)于甲苯(5mL)中的溶液在氮气气氛下冷却至-78℃。向该溶液中，逐滴加入n-BuLi(8.29mL,13.27mmol)，在-78℃搅拌2h，然后加入DMF(1.712mL,22.11mmol)。将反应混合物温热至室温。向该反应混合物中，加入MeOH(3mL)和NaBH4(0.418g,11.06mmol)，在室温搅拌30分钟。反应混合物用饱和氯化铵溶液猝灭，用乙酸乙酯萃取(2x 50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-10％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物308A(2.6g,53％)，为浅黄色晶体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.66(d,J＝2.01Hz,1H),8.31(s,1H),5.33(d,J＝12.05Hz,1H),4.61(s,2H).
中间物308B:甲磺酸(5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲基酯
在5℃，向中间物308A(150mg,0.674mmol)于DCM(3mL)中的溶液中，加入TEA(94μL,0.674mmol)，然后缓慢加入甲磺酰氯(54.4μL,0.674mmol)。将所生成的混合物在相同的温度搅拌2小时。反应混合物用DCM(20mL)稀释，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，真空蒸发。粗中间物308B(2.7g,100％)用于下一步转换而没有纯化。MS(ES):m/z＝302.4[M+H]+.
中间物308C:(5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲胺
中间物308B(2.7g,5.84mmol)于IPA(50mL)中的溶液用NH3气饱和，所生成的溶液在室温搅拌12h。真空除去挥发性物质，粗产物用正己烷研磨，得到中间物308C(1.0g,77％)，为浅黄色固体。MS(ES):m/z＝223.4.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.80(d,J＝2.01Hz,1H),8.08-8.65(m,1H),6.82(br.s.,2H),4.27(s,2H).
中间物308D:N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)甲基)甲酰胺
中间物308C(600mg,1.896mmol)于甲酸(10mL,9.48mmol)中的溶液加热至100℃并且搅拌12h。反应混合物冷却至0℃，通过添加25％氢氧化铵水溶液，将pH小心调节至8。反应混合物用水洗涤，水层用二氯甲烷萃取(3x 10mL)。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液真空浓缩，得到中间物308D(300mg,63％).粗产物用于下一步骤，而没有纯化。MS(ES):m/z＝251.3[M+H]+.
中间物308E:6-溴-8-氯咪唑并[1,5-a]吡啶
向中间物308D(300mg,1.202mmol)于甲苯(5mL)中的溶液中，缓慢加入三氯氧膦(1073mg,7mmol)，将反应混合物加热至100℃并且搅拌4h。将反应混合物冷却至0℃，用冰冷却的水小心猝灭。使用25％氢氧化铵水溶液将反应混合物的pH值调节至9，用二氯甲烷萃取(3x 10mL)。合并的有机层经Na2SO4干燥，浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-6％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物308E(110mg,40％)，为棕色油状物。MS(ES):m/z＝233.3[M+H]+.
中间物308F:8-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)咪唑并[1，5-a]吡啶
向中间物308E(50mg,0.216mmol)于DMF(2mL)中的溶液中，加入KOAc(63.6mg,0.648mmol),双(频哪醇)二硼(65.8mg,0.259mmol)和反应混合物用氮气吹洗5分钟。加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(9.48mg,0.013mmol)，将反应混合物加热至90℃并且搅拌18h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(2x 25mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到粗中间物308F(50mg,70％)其用于Suzuki偶合而没有进一步纯化。
中间物308G:3-氨甲酰基-2-(8-氯咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(20mg,0.051mmol)和中间物308F(78mg,0.056mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入Na2CO3(16.21mg,0.153mmol)于水(1mL)中的溶液，将所生成的溶液用氮气吹洗5分钟。加入Pd(PPh3)4(2.95mg,2.55mmol)，将反应混合物加热至100℃，搅拌18h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(2x 25mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-6％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物308G(20mg,7％)。MS(ES):m/z＝417.5[M+H]+.
化合物308:2-(8-氯咪唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物308G(30mg,5.04mmol)于DCM(2mL)中的溶液中，缓慢加入TFA(0.776μL,10.08mmol)，并且搅拌2小时。真空蒸发除去挥发性物质，将残余物溶于THF(2mL)中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.726mg,5.04μmol)和TEA(1.404μl,10.08μmol)，将反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(3x 5mL)。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液蒸发。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物308(21mg,41％)，为浅黄色固体.HPLC保留时间为2.063分钟和1.801分钟。(分别为方法E和L)；MS(ES):m/z＝461.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.39(s,1H),8.76(s,1H),7.62-7.77(m,5H),7.18-7.25(m,2H),7.08(s,1H),6.95(s,1H),4.94(s,2H),4.26(t,J＝5.05Hz,2H),4.01(t,J＝5.21Hz,2H).
方案23
中间物309A:4-溴-2-氯-6-硝基苯酚
向4-溴-2-氯苯酚(15.0g,72.3mmol)于乙酸(60mL)中的搅拌溶液中，缓慢加入HNO3(9.23mL,145mmol)，历时15分钟。将反应混合物在室温搅拌1h。反应用冰冷却的水猝灭，过滤出浅黄色的固体，干燥。粗化合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下梯度洗脱0-20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物309A(16.2g,89％)，为浅黄色固体。MS(ES):m/z＝250[M-1]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 11.43(br.s.,1H),8.05-8.12(m,2H).
中间物309B:2-氨基-4-溴-6-氯苯酚
向中间物309A(10g,21.79mmol)于EtOH(80.0mL)中的搅拌溶液中，加入饱和NH4Cl水溶液(80mL,218mmol)，接着加入铁粉(9.73g,174mmol)。将所生成的悬浮液加热至80℃，搅拌2h。反应混合物冷却至室温，经过滤，滤液浓缩。反应混合物用EtOAc稀释(100mL)，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱0 to 5％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物309B(3.02g,62％)，为棕色固体。MS(ES):m/z＝221[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.00(br.s.,1H),6.50-6.76(m,2H),5.21(br.s.,2H).
中间物309C:5-溴-7-氯苯并[d]噁唑
将中间物309B(0.7g,3.15mmol)于原甲酸三乙酯(14.0ml,84mmol)中的悬浮液在140℃搅拌3h。反应混合物冷却至室温，用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-5％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物309C，为灰白色固体(0.55g,75％)。MS(ES):m/z＝233[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.93(s,1H),8.10(d,J＝1.51Hz,1H),7.86(d,J＝1.51Hz,1H).
中间物309D:7-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)苯并[d]噁唑
中间物309C(0.7g,3.01mmol)于1,4-二噁烷(8.0mL)的搅拌溶液中，加入双(频哪醇)二硼(1.147g,4.52mmol)和KOAc(0.739g,7.53mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.148g,0.181mmol)，将反应混合物加热至90℃并且搅拌16h。反应混合物浓缩，然后用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0to 5％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物309D(0.71g,84％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝279[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.92(s,1H),7.94-8.00(m,1H),7.71(s,1H),1.33(s,12H).
中间物309E:3-氨甲酰基-2-(7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物309D(0.7g,1.785mmol)于1,4-二噁烷(2.0mL)中的搅拌悬浮液中加入中间物156C(1.247g,4.46mmol),K3PO4(2.68mL,5.35mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.087g,0.107mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌8h。反应混合物浓缩，然后用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩。粗物质经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0 to 1％MeOH/氯仿)，得到中间物309E(0.31g,97％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝418[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.90(s,1H),8.01(d,J＝1.51Hz,1H),7.81(s,1H),7.11-7.35(m,2H),4.73(s,2H),4.14(t,J＝5.29Hz,2H),3.84-3.86(t,2H),1.45(s,9H).
中间物309F:2-(7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
向中间物309E(0.3g,0.718mmol)于DCM(3.0mL)中的搅拌的溶液中，加入TFA(3.0mL,38.9mmol)，然后在室温搅拌16h。反应混合物浓缩，缓慢加入饱和NaHCO3水溶液，用氯仿萃取。有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到中间物309F(0.08g,35％)，为棕色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.89(s,1H),8.05(d,J＝1.51Hz,1H),7.85(d,J＝1.00Hz,1H),7.01-7.32(m,2H),3.93-4.10(m,4H),3.14(d,J＝5.02Hz,2H),2.64(br.s.,1H).
化合物309:2-(7-氯苯并[d]噁唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物309F(0.035g,0.110mmol)于THF(3.0mL)中的搅拌的溶液中，加入TEA(0.015mL,0.110mmol)，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.019g,0.132mmol)，所生成的溶液在室温搅拌2h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物309(4.5mg,8％)，为浅黄色固体。HPLC保留时间1.14分钟和1.12分钟。(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝462[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.92(s,1H),8.04(d,J＝1.51Hz,1H),7.84(d,J＝1.51Hz,1H),7.61-7.76(m,4H),7.11-7.45(m,2H),4.94(s,2H),4.28(t,J＝5.27Hz,2H),4.02(t,J＝5.27Hz,2H).
类似于化合物309，通过偶合中间物309F与由相应苯胺原位生成的异氰酸酯，制备表21中的化合物。
表21
方案24
中间物311A:5-溴-7-氯-2-甲基苯并[d]噁唑
向2-氨基-4-溴-6-氯phenol(1.0g,4.50mmol)于原乙酸三乙酯(0.829mL,4.50mmol)中的搅拌溶液中，加热至140℃并且搅拌3h。反应混合物用乙酸乙酯稀释(25mL)，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-5％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物311A(0.85g,77％)，为棕色固体。MS(ES):m/z＝246[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.93(d,J＝1.89Hz,1H),7.74(s,1H),2.67(s,3H).
中间物311B:7-氯-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)苯并[d]噁唑
使用类似于制备中间物309D的合成顺序，中间物311B由中间物311A合成。MS(ES):m/z＝212[M-82)]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.72(d,J＝7.03Hz,2H),2.04(s,3H),1.31-1.38(m,12H).
中间物311C:3-氨甲酰基-2-(7-氯-2-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物309E的合成顺序，中间物311C由中间物311B和156C合成。MS(ES):m/z＝432[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.87(d,J＝1.51Hz,1H),7.72(d,J＝1.00Hz,1H),7.04-7.40(m,2H),4.76(s,2H),4.18(t,J＝5.27Hz,2H),3.85(t,J5.52Hz,2H),2.68(s,3H),1.46(s,9H).
中间物311D:2-(7-氯-2-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
使用类似于制备中间物309F的合成顺序，中间物311D由中间物311C合成。MS(ES):m/z＝332[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.89(d,J＝1.13Hz,1H)7.74(s,1H),6.95-7.30(m,2H),3.95-4.09(m,4H),3.13(t,J＝5.10Hz,2H),2.62(s,3H).
化合物311:2-(7-氯-2-甲基苯并[d]噁唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物311D(0.03g,0.090mmol)于DMSO(1.0mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.016g,0.109mmol)和所生成的溶液加热至80℃，并且搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释(10mL),用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经制备型HPLC纯化，得到化合物311(9.2mg,21％)，为灰白色固体。HPLC保留时间8.08分钟和7.98分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝476[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm9.41(s,1H),7.90(s,1H),7.66-7.77(m,5H),7.09-7.45(m,2H),4.93(s,2H),4.27(t,J＝5.27Hz,2H),4.02(t,J＝5.27Hz,2H)2.5(s,3H).
已与化合物311类似通过使中间物311D与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表22中所示的化合物。
表22
方案25
中间物315A:5-溴-3-氯-2-氟苯甲醛
在-78℃，向4-溴-2-氯-1-氟苯(5.000g,23.87mmol)于THF(50mL)中溶液中，逐滴加入LDA(17.90mL,35.8mmol,1M于THF)，将反应混合物在相同的温度搅拌45分钟。加入DMF(2.218mL,28.6mmol)，使反应混合物温热至RT并且搅拌3h。反应混合物用饱和氯化铵溶液猝灭，用乙酸乙酯萃取(3x 75mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-20％EtOAc/石油醚)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物315A(3.5g,70％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 10.10(d,J＝0.8Hz,1H),8.26(dd,J＝6.4,2.6Hz,1H),7.94(dd,J＝5.5,2.5Hz,1H).
中间物315B:5-溴-7-氯-1H-吲唑
向中间物315A(3.00g,12.63mmol)于DMSO(30mL)中的溶液中，加入水合肼(1.2mL,25.5mmol)，所生成的溶液加热至110℃并且搅拌12h。反应混合物冷却至0℃，用冰冷却的水洗涤，过滤出所形成的固体，真空干燥，得到中间物315B(1.5g,55％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝231[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.80(br.s.,1H),8.19(s,1H),8.02(d,J＝1.5Hz,1H),7.65(d,J＝1.5Hz,1H).
中间物315C:7-氯-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑
向中间物315B(0.8g,3.46mmol)和双(频哪醇)二硼(1.053g,4.15mmol)于DMF(8mL)中的溶液中，加入KOAc(1.018g,10.37mmol)和反应混合物用氮气脱气10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.169g,0.207mmol)，将所生成的反应混合物加热至110℃并且搅拌12h。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物315C(0.7g,65％)，为棕色液体。粗产物用于Sukuzi偶合而没有纯化。MS(ES):m/z＝279[M+H]+.
中间物315D:3-氨甲酰基-2-(7-氯-1H-吲唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物156C(500mg,1.275mmol)和中间物315C(462mg,1.657mmol)于DMF(5mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中，加入Na2CO3(405mg,3.82mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入Pd(PPh3)4(73.7mg,0.064mmol)将所生成的反应混合物加热至100℃并且搅拌12h。反应混合物用水洗涤，(50mL)，用EtOAc萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-5％MeOH/氯仿)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物315D(0.3g,55％)，为黄色固体。MS(ES):m/z＝417[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.66(s,1H),8.26(d,J＝1.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.71(d,J＝1.0Hz,1H),7.26(br.s.,1H),7.02(br.s.,1H),4.76(s,2H),4.17(t,J＝5.3Hz,2H),3.86(t,J＝5.3Hz,2H),1.42(s,9H).
中间物315E:2-(7-氯-1H-吲唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
使用类似于制备中间物309F的合成顺序，中间物315E由中间物315D合成。MS(ES):m/z＝317[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.6(s,1H),8.28(d,J＝1.5Hz,1H),8.29-8.20(s,1H),7.82(d,J＝1.5Hz,1H),7.17(br.s.,1H),6.96(br.s.,1H),4.65(s,2H),4.02(t,J＝5.5Hz,2H),3.73(t,J＝5.5Hz,1H),2.26(br.s.,1H).
化合物315:2-(7-氯-1H-吲唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺.
使用类似于制备化合物309的合成顺序，化合物315由中间物315E合成。HPLC保留时间7.266分钟和6.71分钟(分别为方法A和B)。MS(ES):m/z＝461.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.28(s,1H),8.05(d,J＝1.00Hz,1H),7.65-7.76(m,5H),7.33(br.s.,1H),7.06(br.s.,1H),4.93(s,2H),4.26(t,J＝5.27Hz,2H),4.02(t,J＝5.27Hz,2H).
已与化合物315类似通过使中间物315E与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表23中所示的化合物。
表23
方案26
中间物318A:5-溴-7-氯-1-甲基-1H-吲唑
在室温，向中间物315B(1.500g,6.48mmol)和K2CO3(4.48g,32.4mmol)于DMSO(15mL)中的溶液中，加入MeI(0.486mL,7.78mmol)，将所生成的反应混合物在室温搅拌2h。反应混合物用冰冷却的水稀释，所形成的固体经布氏漏斗购率，真空干燥。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-5％EtOAc/石油醚)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物318A(0.85g,50％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm8.12(s,1H),8.01(d,J＝1.5Hz,1H),7.64(d,J＝1.5Hz,1H),4.31(s,3H).
中间物318B:7-氯-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑
向中间物318A(0.85g,3.46mmol)和双(频哪醇)二硼(1.055g,4.15mmol)于DMF(8mL)中的溶液中，加入KOAc(1.018g,10.37mmol)和反应混合物用氮气脱气10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.113g,0.138mmol)，将所生成的反应混合物加热至110℃并且搅拌12h。反应混合物diluted EtOAc，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物318B(0.75g 75％)，为棕色液体。粗产物用于Sukuzi偶合而没有纯化。MS(ES):m/z＝293[M+H]+.
中间物318C:3-氨甲酰基-2-(7-氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯.
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物318C由中间物318B合成。MS(ES):m/z＝431.6[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.21(s,1H),8.04(d,J＝1.5Hz,1H),7.73(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(s,1H),7.10(s,1H),4.76(s,2H),4.34(s,3H),4.18(t,J＝5.5Hz,2H),3.86(t,J＝5.5Hz,2H),1.46(s,9H).
中间物318D:2-(7-氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺.
使用类似于制备中间物309F.的合成顺序，中间物318D由中间物318C合成。MS(ES):m/z＝331[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.19(s,1H),8.06(d,J＝1.0Hz,1H),7.76(d,J＝1.0Hz,1H),7.21(br.s.,1H),7.04(br.s.,1H),4.33(s,3H),4.07-3.99(m,4H),3.16-3.12(m,2H),2.65(t,J＝5.8Hz,1H).
化合物318:2-(7-氯-1-甲基-1H-吲唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物309的合成顺序，化合物318由中间物318D合成HPLC保留时间15.26分钟和15.76分钟。(分别为方法C和D)。MS(ES):m/z＝475[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm。9.40(s,1H),8.21(s,1H),8.06(s,1H),7.64-7.77(m,5H),7.34(br.s.,1H),7.10(br.s.,1H),4.93(s,2H),4.34(s,3H),4.26(t,J＝5.27Hz,2H),3.80(t,J＝5.27Hz,2H).
类似于混合物318，偶合中间物318D与由相应苯胺原位生成的物质，制备表24中的化合物。
表24
方案27
中间物320A:5-溴-7-氯-3-甲基-1H-吲唑
向1-(5-溴-3-氯-2-氟苯基)乙酮(4.0g,15.91mmol)于DMSO(40mL)中的溶液中，加入一水合肼(0.998mL,31.8mmol)，反应混合物在80℃搅拌12小时。反应混合物冷却至0℃，用冰冷却的水稀释，经布氏漏斗过滤，真空干燥，得到中间物320A(3.1g,75％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,氯仿-d)ppm δ 10.19(br.s.,1H),7.75(d,J＝1.5Hz,1H),7.52-7.44(m,1H),2.58(s,3H).
中间物320B:7-氯-3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑
向中间物320A(1.0g,4.07mmol),双(频哪醇)二硼(1.345g,5.30mmol)于DMF(10mL)中的溶液中，加入KOAc(1.199g,12.22mmol)和反应混合物用氮气吹洗10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.200g,0.244mmol)，将反应混合物加热至100℃并且搅拌12h。反应混合物用水洗涤，(50mL)用乙酸乙酯萃取(2x 50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物320B(0.8g,67％)，为棕色粘性液体。粗产物用于Sukuzi偶合而没有纯化。MS(ES):m/z＝293[M+H]+.
中间物320C:3-氨甲酰基-2-(7-氯-3-甲基-1H-吲唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物320C由中间物320B合成。MS(ES):m/z＝431[M+H]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ ppm 10.25(br.s.,1H),7.83(d,J＝1.1Hz,1H),7.61(d,J＝1.5Hz,1H),7.29(br.s.,1H),6.97(br.s.,1H),5.01(s,2H),4.25(t,J＝5.3Hz,2H),3.98(t,J＝5.3Hz,2H),1.54(s,9H).
中间物320D:2-(7-氯-3-甲基-1H-吲唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
使用类似于制备中间物309F的合成顺序，中间物320D由中间物320C合成。MS(ES):m/z＝331[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm 13.22(br.s.,1H),7.98(d,J＝1.0Hz,1H),7.70(d,J＝1.0Hz,1H),7.20(br.s.,1H),6.95(br.s.,1H),4.08-3.94(m,4H),3.13(d,J＝4.5Hz,2H),2.69-2.59(m,1H),2.4(s,3H).
化合物320:2-(7-氯-3-甲基-1H-吲唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备中间物292的合成顺序，化合物320由中间物320D合成。HPLC保留时间1.21分钟和1.27分钟(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝475.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.24(s,1H),9.41(s,1H),7.98(d,J＝1.0Hz,1H),7.77-7.63(m,5H),7.36(br.s.,1H),7.03(br.s.,1H),4.92(s,2H),4.25(t,J＝5.0Hz,2H),4.01(t,J＝5.3Hz,2H),2.4(s,3H).
类似于化合物320，通过使中间物320D与相应苯胺的苯基氨基甲酸酯反应，制备表25中的化合物。
表25
方案28
中间物322A:5-溴-7-氯-1,3-二甲基-1H-吲唑
在0℃，向中间物320A(2.00g,8.15mmol)和K2CO3(3.38g,24.44mmol)于DMSO(20mL)中的溶液中，加入碘甲烷(1.528mL,24.44mmol)，将反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物用冰冷却的水稀释，经布氏漏斗过滤出所形成的固体，真空干燥。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱25％乙酸乙酯/己烷，以分离主要异构体)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物322A(1.1g,47％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ ppm 7.67(d,J＝1.5Hz,1H),7.44(d,J＝1.9Hz,1H),4.31(s,3H),2.51(s,3H).
中间物322B:7-氯-1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑.
向中间物322A(1.2g,4.62mmol),双(频哪醇)二硼(1.53g,6.01mmol)于DMF(12mL)中的溶液中，加入KOAc(1.361g,13.87mmol)和反应混合物用氮气吹洗0分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.227g,0.277mmol)，将反应混合物加热至110℃并且搅拌12h。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，经过滤，滤液用用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到中间物322B(1.0g,70％)，为棕色液体。MS(ES):m/z＝307[M+H]+.
中间物322C:3-氨甲酰基-2-(7-氯-1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物322C由中间物322B合成。MS(ES):m/z＝445[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.32(s,1H),7.70(d,J＝1.1Hz,1H),7.02(br.s.,1H),6.89(br.s.,1H),4.25(s,3H),4.16(t,J＝6Hz,2H),3.85(t,J＝6Hz,2H),2.47(s,3H).
中间物322D:2-(7-氯-1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,HCl
使用类似于制备中间物304E的合成顺序，中间物322D由中间物322C合成。MS(ES):m/z＝335[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.97(d,J＝1.5Hz,1H),7.68(d,J＝1.5Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.06(br.s.,1H),4.55(s.,2H),4.42(t,J＝5.5Hz,2H),4.25(s,3H),3.67(m,3H),2.46(s,3H).
化合物322:2-(7-氯-1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物292的合成顺序，化合物322由中间物322D合成。MS(ES):m/z＝489.3[M+H]+；HPLC保留时间1.37分钟和1.42分钟(分别为方法E和L).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.42(s,1H),7.99(d,J＝1.0Hz,1H),7.77-7.64(m,5H),7.39(br.s.,1H),7.08(br.s.,1H),4.93(s,2H),4.28-4.26(t,J＝5.3Hz,2H),4.24(s,3H),4.02(t,J＝5.3Hz,2H),2.48(s,3H).
方案29
中间物323A:6-溴-4-氟-1H-吲唑
向4-溴-2,6-二氟苯甲醛(0.1g,0.452mmol)于DMSO(0.5mL)中的溶液中，加入水合肼(0.023g,0.452mmol)，所形成溶液加热至100℃并且搅拌18h。将反应混合物冷却至室温，用水洗涤。过滤分离出的固体，用水洗涤，真空干燥，得到中间物323A(0.065g,60％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝214.9[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.53(br.s.,1H),8.22(s,1H),7.65(s,1H),7.17(d,J＝9.4Hz,1H).
中间物323B:4-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑
使用类似于制备中间物297A的合成顺序，中间物323B由中间物323A合成。MS(ES):m/z＝181.0[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm13.53(br.s.,1H),8.22(s,1H),7.69(s,1H),6.99(d,J＝10.6Hz,1H),1.32(s,12H).
中间物323C:3-氨甲酰基-2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物323C由中间物323B合成MS(ES):m/z＝401.2[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.86(br.s.,1H),8.19(s,1H),7.73(s,1H),7.36(br.s.,1H),7.20-7.16(m,2H),4.75(s,2H),4.18(t,J＝5.1Hz,2H),3.90-3.77(m,2H),1.54(s,9H).
中间物323D:2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA
使用类似于制备中间物297C的合成顺序，中间物323D由中间物323C合成。MS(ES):m/z＝301.0[M+H]+.
化合物323:N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(4-氟-1H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物323D(0.05g,0.121mmol)于DMSO(1mL)中的搅拌的溶液中，加入(3-氯-4-氰基苯基)氨基甲酸苯酯(0.033g,0.121mmol)、TEA(0.050mL,0.362mmol)，将所生成的反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物用水洗涤，过滤分离出的固体，干燥。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物323(2mg,4％)。保留时间为1.271分钟和1.265分钟。(分别为方法E和L):MS(ES):m/z＝478.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.49(s,1H),9.59(s,1H),8.20(s,1H),7.92(d,J＝2.0Hz,1H),7.86(d,J＝8.5Hz,2H),7.75(s,1H),7.64-7.60(m,1H),7.21(d,J＝11.5Hz,2H),4.93(s,2H),4.28(s,2H),4.02(s,2H).
类似于化合物323，通过使中间物323D于相应苯胺的苯基氨基甲酸酯反应，制备表26中的化合物。
表26
方案30
中间物326A和326B:6-溴-4-氟-1-甲基-1H-吲唑(326A)、6-溴-4-氟-2-甲基-2H-吲唑(326B)
向中间物323A(0.25g,1.163mmol)于DMSO(3mL)中的溶液中，加入K2CO3(0.321g,2.325mmol)，接着加入MeI(0.087mL,1.395mmol)，将所生成的反应混合物在室温搅拌3h。反应混合物用水猝灭用乙酸乙酯萃取(2x50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-10％乙酸乙酯/己烷)。合并含有不同产物的馏分，蒸发得到中间物326A(0.15g,54％)和中间物326B(0.075g,27％).1H NMR(300MHz,DMSO-d6,326A)δ ppm 8.19(s,1H),7.89(s,1H),7.19(dd,J＝9.6,0.9Hz,1H),4.05(s,3H).1H NMR(400MHz,DMSO-d6,326B)δ ppm 8.61(s,1H),7.74(d,J＝1.0Hz,1H),7.05(dd,J＝1.3,9.8Hz,1H),4.18(s,3H).
中间物326C:4-氟-1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-1H-吲唑
使用类似于制备中间物297A的合成顺序，中间物326C由中间物326A合成。MS(ES):m/z＝277.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.20(s,1H),7.80(s,1H),7.04(d,J＝10.5Hz,1H),4.13(s,3H),1.34(s,12H).
中间物326D:3-氨甲酰基-2-(4-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物326D由中间物326C合成。MS(ES):m/z＝415.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 8.09(s,1H),7.43(s,1H),7.04(d,J＝10.5Hz,1H),4.99(s,2H),4.28-4.19(m,2H),4.10(s,3H),4.01-3.90(m,2H),1.52(s,9H).
中间物326E:2-(4-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA
使用类似于制备中间物297C的合成顺序，中间物326E由中间物326D合成。MS(ES):m/z＝315.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.46(br.s.,1H),8.21(s,1H),7.79(s,1H),7.34(br.s.,1H),7.21-7.14(m,1H),7.05(br.s.,1H),4.60(s,2H),4.41(t,J＝5.8Hz,2H),4.10(s,3H),3.73(t,J＝5.8Hz,2H).
化合物326:N5-(4-氰基苯基)-2-(4-氟-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物326E(0.04g,0.093mmol)和4-异氰酸酯基苯甲腈(0.013g,0.093mmol)于THF(1mL)中的搅拌的溶液中，加入TEA(0.039mL,0.280mmol)，将所生成的溶液加热至70℃并且搅拌3h。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经制备型HPLC纯化，得到化合物326(0.011g,26％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝459.2[M+H]+；HPLC保留时间are 1.768分钟和1.777分钟。(分别为方法E和L).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.19(s,1H),7.81(s,1H),7.75-7.66(m,4H),7.39(br.s.,1H),7.21(dd,J＝1.0,11.5Hz,1H),7.11(br.s.,1H),4.95(s,2H),4.28(t,J＝5.5Hz,2H),4.09(s,3H),4.04-3.98(m,2H).
类似于化合物326，通过偶合中间物326E与由相应的苯胺原位生成的异氰酸酯，制备表27中的化合物。
表27
方案31
中间物328A:4-氟-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂戊环-2-基)-2H-吲唑
使用类似于制备中间物297A的合成顺序，中间物328A由中间物326B合成。MS(ES):m/z＝277.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.56(s,1H),7.79(s,1H),6.88(d,J＝10.5Hz,1H),4.22(s,3H),1.32(s,12H).
中间物328B:3-氨甲酰基-2-(4-氟-2-甲基-2H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物315D的合成顺序，中间物328B由中间物328A合成。MS(ES):m/z＝415.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 8.06(s,1H),7.72(s,1H),6.88(d,J＝10.5Hz,1H),5.02-4.97(m,2H),4.27(s,2H),4.25-4.20(m,3H),4.00-3.89(m,2H),1.52(s,9H).
中间物328C:2-(4-氟-2-甲基-2H-吲唑-6-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA
使用类似于制备中间物297C的合成顺序，中间物328C由中间物328B合成。MS(ES):m/z＝315.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.52-9.32(m,1H),8.58(s,1H),7.74(s,1H),7.45(s,1H),7.15-6.97(m,2H),4.58(s,2H),4.40(s,2H),4.21(s,3H),3.72(s,2H).
中间物328:N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(4-氟-2-甲基-2H-吲唑-6-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物326的合成顺序，化合物328由中间物328C合成。HPLC保留时间为1.653分钟和1.653分钟。(分别为方法H和I)。MS(ES):m/z＝459.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.55(s,1H),7.78-7.66(m,5H),7.38(br.s.,1H),7.10(dd,J＝1.0,11.5Hz,2H),4.92(s,2H),4.27(t,J＝5.3Hz,2H),4.20(s,3H),4.02(t,J＝5.3Hz,2H).
方案32
中间物329A:1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二羧酸二乙酯
在-10℃，向PPh3(12.41g,47.3mmol)于THF(100mL)中的搅拌悬浮液中加入DIAD(9.20mL,47.3mmol)，在0℃搅拌0.5h。在0℃加入中间物104C(8.0g,23.66mmol)，以于THF(10mL)中的溶液形式，在室温搅拌45分钟。反应混合物再次冷却至0℃。加入(1-羟基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5.39g,30.8mmol)，以于THF(10mL)中的溶液形式，将混合物在室温搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释(100mL),用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱剂洗脱15％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物329A，为棕色液体(7.0g)，含有来自偶合剂的杂质。MS(ES):m/z＝496[M+H]+。将粗中间物用于下一步骤而没有纯化。
中间物329B:2-碘-6-甲基-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物329A(7.0g,14.13mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌的溶液中，加入4MHCl的二噁烷(25mL,100mmol)溶液，将溶液在室温搅拌2h。反应混合物浓缩，残余物用乙酸乙酯稀释(20mL)。EtOAc溶液连续用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩。所得的残余物在60℃加热5h。用乙醚洗涤固体产物得到中间物329B(4.0g,87％)。MS(ES):m/z＝350[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm8.49(s,1H),4.27-4.49(m,1H),4.11-4.26(m,2H),4.03(d,J＝11.71Hz,2H),1.06-1.39(m,6H).
中间物329C:2-碘-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物329B(4.0g,11.46mmol)于THF(40mL)中的溶液中，加入BH3 .THF(40.1mL,80mmol,1M于THF)，将反应混合物在70℃搅拌16h。加入乙醇(10mL)，将反应混合物加热回流1h。反应混合物浓缩，得到中间物329C(1.9g,40％产率)，为浅褐色液体。MS(ES):m/z＝336[M+H]+.粗化合物用于下一步骤而没有纯化。
中间物329D:2-碘-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物329C(0.81g,2.417mmol)于DCM(10mL)中的搅拌的溶液中，加入TEA(0.404mL,2.90mmol)，接着加入Boc2O(0.617mL,2.66mmol)。将所生成的溶液在室温搅拌16h.。然后用DCM(10mL)稀释，用水和盐水洗涤。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱1％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物329D，为无色半固体(0.7g,67％)。MS(ES):m/z＝435[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 5.07(d,J＝18.57Hz,1H),4.69(br.s.,1H),4.39(d,J＝18.57Hz,1H),4.06-4.28(m,4H),1.45(s,9H),1.23-1.34(m,3H),1.08(d,J＝7.03Hz,3H).
中间物329E:5-(叔丁氧基羰基)-2-碘-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物329D(0.85g,1.953mmol)于EtOH(2.0mL)中的搅拌的溶液中，加入NaOH(0.391g,9.76mmol)于水(1.0mL)中的溶液。将所生成的溶液在室温搅拌16h。反应混合物浓缩，残余物通过添加1N HCl水溶液(5mL)酸化，将其搅拌10分钟。过滤出所生成的沉淀，干燥得到中间物329E，为白色固体(0.65g,82％)。MS(ES):m/z＝408[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 5.05(d,J＝18.89Hz,1H),4.67(br.s.,1H),4.36(d,J＝18.13Hz,1H),4.13-4.25(m,1H),3.93-4.13(m,2H),1.44(s,9H),1.08(t,J＝6.99Hz,3H).
中间物329F:3-氨甲酰基-2-碘-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物329E(0.65g,1.596mmol)于DMF(3.0mL)中的搅拌的溶液中，加入NH4Cl(0.427g,7.98mmol),HATU(1.214g,3.19mmol)和DIPEA(0.836mL,4.79mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌3h.然后用用乙酸乙酯稀释(10mL)，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱2％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物329F，为无色液体(0.38g,59％)。MS(ES):m/z＝407[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 6.79-7.56(m,2H),5.01(d,J＝18.51Hz,1H),4.66(br.s.,1H),4.39(d,J＝18.13Hz,1H),3.96-4.20(m,2H),1.44(s,9H),1.07(d,J＝6.80Hz,3H).
中间物329G:3-氨甲酰基-2-碘-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物329F(0.32g,0.788mmol)于1,4-二噁烷(8.0mL)中的搅拌悬浮液中，加入(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.179g,1.024mmol)、K3PO4(1.292g,2.58mmol)，将烧瓶的内含物用氮气吹洗10分钟。然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.042g,0.052mmol)，将反应混合物在80℃搅拌6h。反应混合物冷却至RT；用乙酸乙酯稀释(10mL)，用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱2％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物329G，为浅黄色固体(0.27g,84％)。MS(ES):m/z＝408[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85-7.92(m,1H),7.71(ddd,J＝8.69,4.91,2.27Hz,1H),7.46(d,J＝17.75Hz,1H),7.24-7.38(m,2H),4.99(d,J＝17.75Hz,1H),4.72(br.s.,1H),4.44(d,J＝17.75Hz,1H),4.08-4.28(m,2H),1.46(s,9H),1.15(s,3H).
中间物329H:2-(3-氯-4-氟苯基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA
向中间物329G(0.09g,0.220mmol)于DCM(3.0mL)中的搅拌的溶液中，加入TFA(0.017mL,0.220mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌2h，然后浓缩，残余物用己烷研磨，得到中间物329H，为白色固体(0.1g)。MS(ES):m/z＝308(M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm7.80-7.85(m,1H),7.64-7.71(m,1H),7.40-7.55(m,2H),7.13-7.27(m,1H),4.71(d,J＝16.06Hz,1H)4.53(dd,J＝13.55,4.02Hz,2H),3.90-4.11(m,2H),1.40(d,J＝6.53Hz,3H).
化合物329和330:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物297的合成顺序，化合物329和330由中间物329H合成。单独的异构体通过手性SFC纯化分离(柱:OD-H(4.6x 250)mm,5μ,流速4ml/min；等度洗脱:40％,流动相B.温度:环境温度，在264nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/甲醇),背压:98巴，,稀释剂:甲醇).
化合物329:(消耗时间2.52min)；MS(ES):m/z＝453[M+H]+。HPLC保留时间9.24分钟和8.72分钟(分别为方法A和B).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.33(s,1H),7.84-7.98(m,1H),7.63-7.76(m,5H),7.25-7.50(m,3H),5.27(s,1H),4.86-5.00(m,1H),4.60(s,1H),4.08-4.32(m,2H),1.23(s,3H).
化合物330:(消耗时间3.42min)；MS(ES):m/z＝453[M+H]+。HPLC保留时间9.25分钟和8.74分钟(分别为方法A和B).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.33(s,1H),7.84-7.98(m,1H),7.63-7.76(m,5H),7.25-7.50(m,3H),5.27(s,1H),4.86-5.00(m,1H),4.60(s,1H),4.08-4.32(m,2H),1.23(s,3H).
化合物331和332:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物330的合成顺序，化合物331和332由中间物329F如下合成：使用与3,4-二氯硼酸的Suzuki偶合，然后对N-Boc基团脱保护，与4-异氰酸酯基苯甲腈形成脲。单独的异构体通过手性SFC纯化分离(柱:IC(250x 4.6)mm,5μ,流速3ml/min；等度洗脱:40％流动相B.温度:环境温度，在264nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/IPA),背压:100巴，,稀释剂:异丙醇).
化合物331:(消耗时间3.94min)；MS(ES):m/z＝435[M+H]+。HPLC保留时间8.66分钟和9.26min(分别为方法B和M).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.33(s,1H),7.66-7.79(m,6H),7.41-7.49(m,3H),7.33(br.s.,1H),5.25(d,J＝17.57Hz,1H),4.91-4.99(m,1H),4.57(d,J＝17.57Hz,1H),4.18-4.33(m,2H),1.19-1.27(m,3H).
化合物332:(消耗时间11.35min)；MS(ES):m/z＝435[M+H]+。HPLC保留时间8.66分钟和9.26min(分别为方法B和M).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.33(s,1H),7.66-7.79(m,6H),7.41-7.49(m,3H),7.33(br.s.,1H),5.25(d,J＝17.57Hz,1H),4.91-4.99(m,1H),4.57(d,J＝17.57Hz,1H),4.18-4.33(m,2H),1.19-1.27(m,3H).
化合物333和334:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,4-二氯苯基)-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物330的合成顺序，化合物333和334由中间物329F如下合成合成：使用与3,4-二氯硼酸的Sukuzi偶合，接着对N-Boc基团脱保护，与4-异氰酸酯基苯甲腈形成脲。单独的异构体使用手性SFC分离(柱:OJH(250x 4.6)mm,5μ,流速3ml/min；等度洗脱:30％流动相B.温度:环境温度，在263nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/甲醇),背压:100巴，稀释剂:甲醇).
化合物333:(消耗时间3.53min)；MS(ES):m/z＝469[M+H]+。HPLC保留时间9.27分钟和10.05min(分别为方法B和A).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.32(s,1H),7.95(d,J＝2.01Hz,1H),7.64-7.76(m,6H),7.42(br.s.,2H),5.24(d,J＝17.57Hz,1H),4.88-5.00(m,1H),4.57(d,J＝17.57Hz,1H),4.12-4.32(m,2H),1.18-1.24(m,3H).
化合物334:(消耗时间4.15min)；MS(ES):m/z＝469[M+H]+。HPLC保留时间9.27分钟和10.05min(分别为方法B和A).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.32(s,1H),7.95(d,J＝2.01Hz,1H),7.64-7.76(m,6H),7.42(br.s.,2H),5.24(d,J＝17.57Hz,1H),4.88-5.00(m,1H),4.57(d,J＝17.57Hz,1H),4.12-4.32(m,2H),1.18-1.24(m,3H).
方案33
中间物335A:1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3,3-三氟丙基)-3-碘-1H-吡唑-4，5-二羧酸二乙酯
在0℃，向PPh3(3.10g,11.83mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中，加入DIAD(2.300mL,11.83mmol)，将混合物搅拌15分钟，然后加入中间物104C(2g,5.92mmol)于THF(10mL)，搅拌15分钟。然后加入(1,1,1-三氟-3-羟基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.763g,7.69mmol)于THF(10mL)，将溶液在室温搅拌16h。将反应混合物倾倒至水中，用乙酸乙酯萃取(2x 100mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱10％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物335A(3g,88％)，为油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm7.94-7.84(m,1H),4.87-4.80(m,1H),4.79-4.67(m,1H),4.40-4.31(m,3H),4.30-4.21(m,2H),1.33(s,9H),1.30-1.25(m,6H).
中间物335B:2-碘-4-氧代-6-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
将中间物335A(3g,5.46mmol)溶于4M HCl/1,4-二噁烷(50mL)中，在室温搅拌2h。减压除去挥发性物质，将粗残余物溶于EtOAc(250mL)中，用NaHCO3水溶液洗涤，经Na2SO4干燥，减压浓缩。将粗物质溶于EtOH(25mL)中，在60℃搅拌16h。减压除去乙醇，将所生成的残余物用己烷搅拌15分钟。研磨，过滤出固体，干燥得到中间物335B(0.96g,41.4％)，为灰白色固体。MS(ES):-m/z＝404.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm9.34(d,J＝4.5Hz,1H),4.84-4.73(m,2H),4.71-4.60(m,1H),4.34-4.20(m,2H),1.32-1.23(m,3H).
中间物335C:2-碘-6-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
在氮气气氛下，向中间物335B(0.1g,0.248mmol)于THF(1mL)中的搅拌的溶液中，加入BH3.DMS络合物(0.236mL,2.481mmol)，将反应混合物在室温搅拌16h。然后将反应混合物冷却至0℃，用甲醇(1mL)猝灭，在室温搅拌15min。减压除去挥发性物质，粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱25％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物335C，为白色固体(0.025g,25％)。MS(ES):-m/z＝390.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 4.37-4.27(m,2H),4.22(q,J＝7.4Hz,3H),4.12-4.00(m,3H),1.33-1.26(m,3H).
中间物335D:2-碘-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物335C(0.025g,0.064mmol)于DCM(5mL)中的搅拌的溶液中，加入TEA(0.027mL,0.193mmol)和DMAP(0.785mg,6.42μmol)，接着加入Boc2O(0.018mL,0.077mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌12h。然后反应混合物用DCM(20mL)稀释，用水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物335D，为白色固体(0.025g,76％)。MS(ES):m/z＝490.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 5.55-5.38(m,1H),5.18-5.08(m,1H),4.54(br.s.,3H),4.24(d,J＝7.0Hz,2H),1.48(s,9H),1.31(t,J＝7.3Hz,3H).
中间物335E:5-(叔丁氧基羰基)-2-碘-6-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物335D(0.22g,0.450mmol)于乙醇(2mL)和水(2mL)中的溶液中，加入NaOH(0.036g,0.899mmol)，将溶液在室温搅拌16h。将反应混合物减压浓缩，使用1.5N盐酸水溶液将粗产物的pH调节至2，用乙酸乙酯萃取(2x 20mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到中间物335E，为白色固体(0.12g,55％)。MS(ES):m/z＝462.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.4(br,s.,1H),5.55-5.38(m,1H),5.18-5.08(m,1H),4.54(m,3H),1.48(s,9H).
中间物335F:3-氨甲酰基-2-碘-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在氮气气氛下，向中间物335E(0.12g,0.260mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入NH4Cl(0.028g,0.520mmol),HATU(0.099g,0.260mmol)和DIPEA(0.136mL,0.781mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌16h。将反应混合物倾倒至水中，水层用EtOAc萃取(2x 25mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱3％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物335F，为白色固体(0.07g,50％)。MS(ES):m/z＝460.9[M+H]+.
中间物335G:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物335F(0.35g,0.761mmol)和(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.215g,0.837mmol)于DMF(2mL)中的溶液中，加入Na2CO3(0.242g,2.282mmol)于水(1mL)中的溶液，反应混合物用氮气吹洗5分钟。然后加入Pd(PPh3)4(0.044g,0.038mmol)，将反应混合物在100℃搅拌18h。反应混合物冷却至室温用乙酸乙酯萃取(2x 50mL)。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱5％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物335G，为白色固体(0.25g,68％)。MS(ES):m/z＝464.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.92-7.82(m,1H),7.73-7.67(m,1H),7.65-7.52(m,1H),7.51-7.44(m,1H),7.41-7.21(m,2H),5.17-5.05(m,1H),4.65-4.48(m,3H),1.50(s,9H).
中间物335H:2-(3-氯-4-氟苯基)-6-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺.TFA
在氮气气氛下，向中间物335G(0.3g,0.648mmol)于DCM(5mL)中的溶液中，加入TFA(0.499mL,6.48mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌2h.减压除去挥发性物质，粗产物用乙醚研磨，得到中间物335H，为白色固体(0.21g,54％)。MS(ES):m/z＝363.4[M+H]+；
化合物335和336:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物297的合成顺序，化合物335和336由中间物335H合成。单独的异构体使用制备型手性SFC分离(柱:IC(250x 4.6)mm,5μ,流速3ml/min；等度洗脱:30％流动相B.温度:环境温度，在267nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/甲醇),背压:100巴，,稀释剂:甲醇).
化合物335(19mg,24％)；(消耗时间2.65min)；MS(ES):m/z＝507.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.85-7.90(m,1H),7.76(br.s.,2H),7.64-7.73(m,3H),7.41-7.52(m,2H),7.31(br.s.,1H),5.80(br.s.,1H),5.35(d,J＝17.07Hz,1H),4.78(d,J＝18.57Hz,1H),4.62(br.s.,2H).
化合物336(23mg,29％)；(消耗时间5.43min)；MS(ES):m/z＝507.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.85-7.90(m,1H),7.76(br.s.,2H),7.64-7.73(m,3H),7.41-7.52(m,2H),7.31(br.s.,1H),5.80(br.s.,1H),5.35(d,J＝17.07Hz,1H),4.78(d,J＝18.57Hz,1H),4.62(br.s.,2H).
化合物337和338:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物335的合成顺序，化合物337和338由中间物335F如下合成：使用与3-氯硼酸的Sukuzi偶合反应，接着对N-Boc基团脱保护，与4-异氰酸酯基苯甲腈形成脲.单独的异构体使用制备型手性SFC分离(柱:IC(250x 4.6)mm,5μ,流速3ml/min；等度洗脱:40％流动相B.温度:环境温度，在267nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/甲醇),背压:100巴，,稀释剂:甲醇.
化合物337:(消耗时间1.65min)；MS(ES):m/z＝489.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.82-7.64(m,6H),7.49-7.43(m,3H),7.30(br.s.,1H),5.80(d,J＝9.0Hz,1H),5.33(d,J＝17.1Hz,1H),4.79(d,J＝17.1Hz,1H),4.63(br.s.,2H).
化合物338:(消耗时间5.11min):MS(ES):m/z＝489.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.82-7.64(m,6H),7.49-7.43(m,3H),7.30(br.s.,1H),5.80(d,J＝9.0Hz,1H),5.33(d,J＝17.1Hz,1H),4.79(d,J＝17.1Hz,1H),4.63(br.s.,2H).
化合物339和340:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,4-二氯苯基)-6-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物335的合成顺序，化合物339和340由中间物335F如下合成：使用与3,4-二氯硼酸的Suzuki偶合，接着对N-Boc基团脱保护，与4-异氰酸酯基苯甲腈形成脲。单独的异构体通过制备型手性SFC(柱:IC(250x 4.6)mm,5μ,流速3ml/min；等度洗脱:40％；流动相B.温度:环境温度，在267nm(流动相A:CO2,流动相B:0.3％二乙胺/甲醇),背压:100巴，,稀释剂:甲醇.
化合物339:(消耗时间1.79min)；MS(ES):m/z＝523.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.93(s,1H),7.83-7.75(m,2H),7.73-7.66(m,4H),7.48(br.s.,1H),7.38(br.s.,1H),5.82(br.s.,1H),5.34(d,J＝17.1Hz,1H),4.79(d,J＝17.1Hz,1H),4.64(br.s.,2H).
化合物340:(消耗时间3.38min)；MS(ES):m/z＝523.5[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.93(s,1H),7.83-7.75(m,2H),7.73-7.66(m,4H),7.48(br.s.,1H),7.38(br.s.,1H),5.82(br.s.,1H),5.34(d,J＝17.1Hz,1H),4.79(d,J＝17.1Hz,1H),4.64(br.s.,2H).
方案34
中间物341A:(1-环丙基-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯
向(1-环丙基-2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(6.5g,64.3mmol)于DCM(10.0mL)中的搅拌溶液中，加入TEA(10.75mL,77mmol)，接着加入Boc2O(16.41mL,70.7mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌16h。反应混合物浓缩，残余物用DCM萃取(50mL)。有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱剂洗脱20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物341A，为无色液体(6.2g,48％).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 6.47(d,J＝7.03Hz,1H),4.45-4.58(m,1H),3.38-3.45(m,2H),2.98(br.s.,1H),1.31-1.47(m,9H),0.76-0.89(m,1H),0.34-0.45(m,1H),0.18-0.32(m,2H),0.07-0.15(m,1H).
中间物341B:1-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-环丙基乙基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二羧酸二乙酯
向PPh3(15.52g,59.2mmol)于THF(40.0mL)冷却至-10℃中的搅拌溶液中，加入DIAD(11.50mL,59.2mmol)，将所生成的溶液在0℃搅拌0.5h。在0℃加入中间物104C(10g,29.6mmol)，以于THF(10mL)中的溶液形式，在RT搅拌45分钟。在0℃加入中间物341A(7.74g,38.5mmol)于THF(10mL)中的溶液，使反应混合物在RT搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释(50mL)用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱剂洗脱15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物341B(8.01g,84％)，带有来自偶合剂的杂质；粗物质用于下一步骤而没有纯化。MS(ES):m/z＝522[M+H]+.
中间物341C:6-环丙基-2-碘-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物341B(8.0g,15.34mmol)于1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌的溶液中，加入4M HCl/二噁烷(40.0mL,160mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌2h。反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释(50mL)。有机层连续用水，饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。将所获得的残余物在中于60℃加热5h。固体产物用乙醚研磨，得到中间物341C，为灰白色固体(1.6g,28％)。MS(ES):m/z＝376[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.67(d,J＝2.27Hz,1H),4.47(dd,J＝13.22,4.53Hz,1H),4.17-4.33(m,3H),3.15(d,J＝9.07Hz,1H),1.28(s,3H),0.90(d,J＝8.69Hz,1H),0.40-0.54(m,2H),0.20-0.37(m,2H).
中间物341D:6-环丙基-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物341C(1.3g,3.47mmol)于THF(10mL)中的溶液中，加入BH3.THF(6.06mL,12.13mmol,1M于THF)，将所生成的溶液在60℃搅拌16h。反应混合物用乙醇(10mL)猝灭，加热回流1小时。将反应混合物减压浓缩，得到粗中间物341D(1.2g)，其用于下一步骤而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝362[M+H]+.
中间物341E:6-环丙基-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物341D(1.2g,3.32mmol)于DCM(10.0mL)中的溶液中，加入TEA(0.556mL,3.99mmol)，然后加入Boc2O(0.849mL,3.65mmol)，将溶液在室温搅拌16h。反应混合物用DCM(15mL)稀释，有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱25％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物341E，为无色半固体(0.85g,55％)。MS(ES):m/z＝462[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 5.13(d,J＝18.89Hz,1H),4.48(d,J＝18.89Hz,1H),4.13-4.31(m,4H),3.84(br.s.,1H),1.38-1.47(m,9H),1.31(s,3H),0.84-0.96(m,1H),0.46(d,J＝8.31Hz,2H),0.38(d,J＝4.91Hz,2H).
中间物341F:5-(叔丁氧基羰基)-6-环丙基-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物341E(0.85g,1.843mmol)于乙醇(2mL)和水(1mL)中的搅拌的溶液中，加入NaOH(0.369g,9.21mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌10h。反应混合物用DCM(10mL)稀释，连续用1N HCl水溶液、水和盐水洗涤。有机层然后经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到中间物341F，为灰白色固体(0.75g,94％)。MS(ES):m/z＝434[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.6(br.s.,1H),5.11(d,J＝18.89Hz,1H),4.45(d,J＝18.51Hz,1H),4.16-4.25(m,2H),3.82(br.s.,1H),1.43(s,9H),0.82-0.96(m,1H),0.47(d,J＝7.93Hz,2H),0.35(dd,J＝6.80,4.91Hz,2H).
中间物341G:3-氨甲酰基-6-环丙基-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物341F(0.75g,1.731mmol)于DMF(4.0mL)中的搅拌的溶液中，加入NH4Cl(0.463g,8.66mmol),HATU(1.316g,3.46mmol)和DIPEA(1.512mL,8.66mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释(10mL),用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱65％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物341G，为无色液体(0.51g,68％)。MS(ES):m/z＝433[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 6.83-7.50(m,2H),5.07(d,J＝18.13Hz,1H),4.50(d,J＝18.51Hz,1H),4.20(d,J＝2.27Hz,2H),3.84(br.s.,1H),1.43(s,9H),0.89(d,J＝9.82Hz,1H),0.47(d,J＝7.93Hz,2H),0.27-0.40(m,2H).
中间物341H:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-6-环丙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物341G(0.47g,1.087mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌悬浮液中加入，K3PO4(1.631mL,3.26mmol),(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.246g,1.414mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.053g,0.065mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌6h。反应混合物经过滤，滤液用乙酸乙酯稀释(10mL)，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱2％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物341H，为灰白色固体(0.4g,85％)。MS(ES):m/z＝435[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85-7.95(m,1H),7.66-7.77(m,1H),7.47(t,J＝9.07Hz,1H),7.20-7.39(m,2H),5.05(d,J＝17.37Hz,1H),4.55(d,J＝17.37Hz,1H),4.24(br.s.,2H),3.89(br.s.,1H),1.45(s,9H),0.87-1.05(m,1H),0.31-0.55(m,4H).
中间物341I:2-(3-氯-4-氟苯基)-6-环丙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,
向中间物341H(0.43g,0.989mmol)于DCM(8.0mL)中的搅拌的溶液中，加入TFA(4.0mL,51.9mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌2h。反应混合物浓缩，残余物用DCM(10mL)萃取，连续用NaHCO3饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到中间物341I，为灰白色固体(0.3g,67％)。MS(ES):m/z＝335[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.80-7.91(m,1H),7.64-7.70(m,1H),7.35-7.50(m,1H),7.02-7.29(m,2H),4.12-4.25(m,2H),3.93(d,J＝16.56Hz,1H),3.68-3.81(m,2H),2.40(br.s.,1H),0.82-0.98(m,1H),0.48(d,J＝8.03Hz,2H),0.37(d,J＝5.02Hz,2H).
化合物341和342:2-(3-氯-4-氟苯基)-6-环丙基-N5-(3,3-二氟-1-甲基环丁基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物297的合成顺序，化合物341和342由中间物341I合成。单独的异构体使用制备型手性SFC纯化分离(柱:IC(4.6x 250)mm,5μ,流速:4ml/min；等度洗脱:35％；流动相B.温度:环境温度，在267nm(流动相A:CO2,流动相B:0.2％二乙胺/甲醇).
化合物341:消耗时间5.26min；HPLC保留时间10.33分钟和9.39分钟。(方法M和B)。MS(ES):m/z＝479[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.31(s,1H),7.91(dd,J＝7.28,2.26Hz,1H),7.69-7.76(m,3H),7.61-7.67(m,2H),7.33-7.51(m,3H),5.26(d,J＝17.57Hz,1H),4.73(d,J＝17.57Hz,1H),4.31(d,J＝2.51Hz,2H),4.11(d,J＝9.54Hz,1H),1.04-1.15(m,1H),0.35-0.61(m,4H).
化合物342:消耗时间9.02min；HPLC保留时间10.33分钟和9.39分钟。(方法M和B)。MS(ES):m/z＝479[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.31(s,1H),7.91(dd,J＝7.28,2.26Hz,1H),7.69-7.76(m,3H),7.61-7.67(m,2H),7.33-7.51(m,3H),5.26(d,J＝17.57Hz,1H),4.73(d,J＝17.57Hz,1H),4.31(d,J＝2.51Hz,2H),4.11(d,J＝9.54Hz,1H),1.04-1.15(m,1H),0.35-0.61(m,4H).
方案35
中间物343A:1-((1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙基)甲基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二羧酸二乙酯
向PPh3(15.52g,59.2mmol)于THF(80.0mL)冷却至0℃中的搅拌溶液中，加入DIAD(11.50mL,59.2mmol)，所生成的溶液在0℃搅拌0.5h。在0℃，加入中间物104C(8.00g,23.66mmol)，以于THF(20mL)中的溶液形式，历时45分钟。在0℃，加入(1-(羟基甲基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(5.32g,28.4mmol)于THF(10mL)中的溶液，使反应混合物在RT搅拌16h。反应混合物用水(250mL)洗涤，用EtOAc萃取(2x 200mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱剂洗脱20％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物343A，为浅黄色液体(10g,85％)。MS(ES):m/z＝508[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 4.45(s,2H),4.41-4.25(m,4H),1.46(s,9H),1.40-1.30(m,4H),1.24(s,3H),1.03-0.94(m,2H),0.90-0.78(m,2H).
中间物343B:2′-碘-4′-氧代-5′,7′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′-羧酸乙酯
向中间物343A(2.1g,4.14mmol)于1,4-二噁烷(10.0mL)中的搅拌的溶液中，加入4M HCl/二噁烷(10mL,41mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌1h。反应混合物浓缩，用乙酸乙酯稀释(50mL)。有机层连续用水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩。将所获得的残余物在中于60℃加热5h.固体产物用乙醚研磨，得到中间物343B，为浅黄色固体(1.1g,60％)。MS(ES):m/z＝362[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 6.93(s,1H),4.41(q,J＝7.0Hz,2H),4.26(s,2H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H),1.11-0.85(m,4H).
中间物343C:2′-碘-5′,7′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-3′-羧酸乙酯
向中间物343B(1.1g,3.05mmol)于THF(10mL)中的溶液中，加入BH3.DMS(0.578mL,6.09mmol,2M)，所生成的溶液在40℃搅拌18h。反应混合物冷却至室温，用乙醇(10mL)猝灭，加热回流1h。将反应混合物减压浓缩.粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱2％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物343C(0.7g,66％)，为粘性固体。MS(ES):m/z＝348[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm4.41(q,J＝7.0Hz,2H),3.92(s,1H),1.38(m,4H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H),0.90(m,2H),0.68(m,2H).
中间物343D:2′-碘-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-3′,5′(7′H)-二羧酸5′-叔丁酯3′-乙酯
向中间物343C(0.70g,2.016mmol)于DCM(10.0mL)中的溶液中，加入TEA(0.281mL,2.016mmol)，接着加入Boc2O(0.702mL,3.02mmol)，将溶液在室温搅拌16h。反应混合物用DCM(25mL)稀释，有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱30％EtOAc/石油醚)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物343D，为灰白色固体(0.6g,67％)。MS(ES):m/z＝448[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 4.88(br.s.,2H),4.33(q,J＝7.0Hz,2H),4.03(br.s.,2H),1.48(m,9H),1.41(t,J＝7.0Hz,3H),1.17(m,2H),0.97-0.85(m,2H).
中间物343E:5′-(叔丁氧基羰基)-2′-碘-5′,7′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′-羧酸
向中间物343D(0.500g,1.118mmol)于乙醇(10mL)和水(1mL)中的搅拌的溶液中，加入NaOH(0.369g,9.21mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌12h。减压除去挥发性物质，残余物用1.5N HCl水溶液酸化。过滤出分离的固体产物经布氏漏斗过滤，真空干燥，得到中间物343E，为白色固体(0.43g,90％)。MS(ES):m/z＝420[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm6.19(br.s.,1H),4.92(br.s.,2H),4.06(br.s.,2H),1.48(s,9H),1.19(br.s.,2H),1.01-0.83(m,2H).
中间物343F:3′-氨甲酰基-2′-碘-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-5′(7′H)-羧酸叔丁酯
向中间物343E(0.43g,1.026mmol)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中，加入NH4Cl(0.274g,5.13mmol),HATU(0.780g,2.051mmol)和DIPEA(0.537mL,3.08mmol)，将所生成的溶液在室温搅拌16h。反应混合物用水(50mL)洗涤，用EtOAc萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。残余物用而乙醚研磨，过滤，干燥得到中间物343F，为灰白色固体(0.4g,89％)。MS(ES):m/z＝419[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 6.56(br.s.,1H),5.54(br.s.,1H),4.96(br.s.,2H),4.04(br.s.,2H),1.44(s,9H),1.18(m,2H),0.97-0.84(m,2H).
中间物343G:3′-氨甲酰基-2′-(3-氯-4-氟苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(7′H)-羧酸叔丁酯
向中间物343F(0.400g,0.956mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌悬浮液中，加入K3PO4(0.500g,2.80mmol)、(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.250g,1.435mmol)，反应混合物用氮气吹洗10分钟。然后加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.047g,0.057mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌12h。反应混合物用水(25mL)洗涤，用EtOAc萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱3％MeOH/CHCl3)合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物343G，为浅黄色固体(0.29g,70％)。MS(ES):m/z＝421[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.69(dd,J＝7.0,2.3Hz,1H),7.50(ddd,J＝8.5,4.6,2.1Hz,1H),7.33-7.15(m,1H),5.34(br.s.,2H),4.97(br.s.,2H),4.05(br.s.,2H),1.44(s,9H),1.22-1.24(m,2H),1.02-0.79(m,2H).
中间物343H:2′-(3-氯-4-氟苯基)-5′,7′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1，5-a]吡啶]-3′-甲酰胺
向中间物343G(0.29g,0.689mmol)于DCM(5mL)中的溶液中，加入TFA(3mL)将所生成的溶液在室温搅拌2h。减压除去挥发性物质。残余物用10％NaHCO3水溶液酸化，用乙酸乙酯萃取(3x 20mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物343H，为黄色固体(0.2g,85％)。MS(ES):m/z＝321[M+H]+；1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ ppm7.71(dd,J＝7.2,2.3Hz,1H),7.51(ddd,J＝8.3,4.5,2.3Hz,1H),7.33-7.11(m,1H),5.33(br.s.,2H),4.40(s,2H),4.03(s,2H),1.02-0.88(m,2H),0.80-0.59(m,2H).
化合物343:2′-(3-氯-4-氟苯基)-N5′-(4-氰基苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,6′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(7′H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物297的合成顺序，化合物343由中间物343H合成。HPLC保留时间9.16分钟和8.83分钟。(方法A和B)。MS(ES):m/z＝465[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.11(s,1H),7.86(dd,J＝7.31,2.16Hz,1H),7.66-7.73(m,5H),7.45(t,J＝9Hz,1H),7.35(br.s,1H),7.23(br.s,1H),4.92(br.s,2H),4.25(br.s,2H),1.16(s,4H).
已与化合物343类似通过使中间物343H与各种容易获得的异氰酸酯或由相应的苯胺就地产生的异氰酸酯偶合来制备表28中所示的化合物。
表28
方案36
中间物346A:1-((3-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基噁唑烷-4-基)甲基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二羧酸二乙酯
在0℃，向三苯基膦(5.84g,22.25mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中，逐滴加入DIAD(4.50g 22.25mmol)，所生成的溶液搅拌15分钟。在0℃，缓慢加入中间物104C(3.0g,8.90mmol)于THF(20mL)中的溶液，在室温搅拌45分钟。在0℃，加入中间物4-(羟基甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(2.470g,10.68mmol)于THF(20mL)中的溶液，将所生成的溶液在室温搅拌过夜。减压除去挥发性物质，粗化合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱剂洗脱10-13％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物346A(3.5g,58.5％)，为浅黄色油状物。MS(ES):m/z＝552[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm4.53-4.18(m,6H),3.96-3.82(m,2H),1.50-1.21(m,21H).
中间物346B:6-(羟基甲基)-2-碘-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物346A(3.3g,5.99mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中，加入4M HCl/二噁烷(5mL,5.99mmol)，所生成的反应混合物在室温搅拌3h。反应混合物浓缩，粗产物用10％碳酸氢钠水溶液酸化，用乙酸乙酯萃取(3x 100mL)。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，使用旋转蒸发器在60℃，缓慢浓缩(2-3h)，获得中间物346B(1.6g,67.4％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝366[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.43(d,J＝3.0Hz,1H),5.14(t,J＝5.5Hz,1H),4.46-4.41(m,1H),4.37-4.30(m,1H),4.25(q,J＝7.0Hz,2H),3.84-3.75(m,1H),3.54-3.47(m,1H),3.36(s,1H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H).
中间物346C:6-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-碘-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3羧酸乙酯
向中间物346B(1.2g,3.29mmol)于DCM(12mL)中的溶液中，加入咪唑(0.336g,4.93mmol),TBDMS-Cl(0.644g,4.27mmol),DMAP(0.028g,0.23mmol)，将反应混合物在室温搅拌3h。反应混合物用水洗涤，用DCM萃取(3x 40mL)。合并的有机层用水洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩。所获得的粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱剂洗脱50％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物346C(1.1g,69％),MS(ES):m/z＝480.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.43(d,J＝4.0Hz,1H),4.52-4.45(m,1H),4.35(dd,J＝4.0,13.6Hz,1H),4.27-4.18(m,2H),3.86-3.79(m,1H),3.71(dd,J＝4.0,10.5Hz,1H),3.55(dd,J＝6.0,10.5Hz,1H),1.27(t,J＝7.0Hz,3H),0.81-0.75(m,9H),-0.02(d,J＝1.0Hz,6H).
中间物346D:6-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物346C(1.2g,2.503mmol)于THF(120ml)中的溶液中，逐滴加入洁净的硼烷二甲基硫络合物(0.713mL,7.51mmol)，将所生成的溶液在40℃加热36h。反应混合物冷却至室温，滴加乙醇(10mL)。将反应混合物在70℃搅拌1h，然后浓缩，得到中间物346D，为白色半固体(1.23g,95％)，其用于下一步骤而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝466[M+H]+.
中间物346E:6-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-5-((4-氰基苯基)氨甲酰基)-2-碘-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物346D(1.2g,2.58mmol)于THF(12ml)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.446g,3.09mmol)，将溶液在室温过夜。反应混合物浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱剂洗脱16％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物346E(0.6g,38％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝610[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.32(s,1H),7.75-7.63(m,4H),5.24(d,J＝18.6Hz,1H),4.85-4.77(m,1H),4.47(d,J＝18.6Hz,1H),4.35(d,J＝2.5Hz,2H),4.30-4.22(m,2H),3.73-3.64(m,2H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H),0.76-0.71(m,9H),-0.04(m,6H).
中间物346F:5-((4-氰基苯基)氨甲酰基)-6-(羟基甲基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物346E(0.7g,1.148mmol)于THF(10mL)和水(5ml)中的溶液中，加入LiOH(0.083g,3.45mmol)，将反应物质在室温搅拌24h。蒸发掉挥发性物质；残余物用水(10mL)洗涤，用1.0N HC水溶液中和。过滤出分离的固体产物干燥得到中间物346F(0.4g,74％)，为灰白色固体其用于下一步骤而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝468[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.35-12.80(br,1H),9.33(s,1H),7.69-7.74(m,2H),7.62-7.68(m,2H),5.20-5.30(m,1H),5.10-5.19(m,1H),4.72(d,J＝4.53Hz,1H),4.46(d,J＝18.51Hz,1H),4.27-4.38(m,2H),3.40-3.48(m,2H).
中间物346G:N5-(4-氰基苯基)-6-(羟基甲基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
向中间物346F(0.12g,0.257mmol)于dry DMF(3mL)中的溶液中，加入HATU(0.195g,0.512mmol),二异丙基乙胺(224μL,1.128mmol)和氯化铵(0.0687g,1.128mmol)，反应混合物在室温搅拌4h。反应混合物浓缩彻底干燥，粗物质在乙酸乙酯和水之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗产物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱3-5％甲醇/氯仿)。合并含有产物的馏分，得到中间物346G(0.08g,67％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝467[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.29(s,1H),7.69-7.74(m,2H),7.63-7.69(m,2H),7.37-7.48(m,1H),6.93(br.s.,1H),5.22(d,J＝18.07Hz,1H),5.13(t,J＝5.27Hz,1H),4.72(d,J＝4.52Hz,1H),4.51(d,J＝18.57Hz,1H),4.31-4.38(m,1H),4.20-4.28(m,1H),3.43(t,J＝6.02Hz,2H).
化合物346:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
将中间物346G(0.07g,0.15mmol),(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.0393g,0.225mmol)和K3PO4(0.096,0.45mmol)于1,4-二噁烷(3mL)和水(0.5mL)中的溶液用氮气脱气10分钟。加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(7.36mg,9.01μmol)，将反应混合物在80℃搅拌12h。反应混合物浓缩，将粗物质分配在乙酸乙酯和水之间。分离有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩滤液。粗物质经制备型HPLC纯化，得到346，为灰白色固体(20mg,30％)。HPLC保留时间8.10分钟和7.95分钟。(方法A和B)；MS(ES):m/z＝469[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.35(br.s.,1H),7.90(dd,J＝7.28,2.26Hz,1H),7.66-7.76(m,5H),7.45-7.51(m,1H),7.30-7.43(m,2H),5.20(d,J＝17.57Hz,2H),4.80(d,J＝5.02Hz,1H),4.54(d,J＝17.57Hz,1H),4.36-4.42(m,1H),4.24-4.31(m,1H),3.50(d,J＝6.02Hz,2H).
方案37
中间物347A:1-((3R,4S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)四氢呋喃-3-基)-3-碘-1H-吡唑-4，5-二羧酸二乙酯
在0℃，向PPh3(2.72g,10.35mmol)于THF(10mL)中的溶液中，逐滴加入DIAD(2.013mL,10.35mmol)，并且搅拌15分钟。将中间物104C(1.4g,4.14mmol)于THF(10mL)中的溶液加至上述反应混合物中，在0℃搅拌45分钟。在0℃，滴加((3S,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.683g,8.28mmol)于THF(10mL)中的溶液，将反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物然后浓缩，粗化合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物347A(1.7g,81％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝522[M-H]+；粗产物用于下一步骤而没有纯化.
中间物347B:(5aS,8aR)-2-碘-4-氧代-4,5,5a,6,8,8a-六氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯
向中间物347A(6.0g,11.5mmol)于二噁烷(20mL)的冰冷却溶液中，加入4M HCl于二噁烷中的溶液(100mL,11.47mmol)，将反应混合物在室温搅拌4h。反应混合物浓缩；残余物的pH用10％NaHCO3水溶液调节至8，将混合物在室温搅拌30分钟。然后用EtOAc萃取(3x100mL)。合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，在60℃的真空保存6小时，获得中间物347B，为灰白色固体(2.1g,48％)。MS(ES):-m/z＝378[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.67(d,J＝3.5Hz,1H),5.11-5.04(m,1H),4.45(dq,J＝4.0,6.5Hz,1H),4.31-4.12(m,4H),4.04-3.94(m,1H),3.57(dd,J＝6.0,9.0Hz,1H),1.32-1.22(m,3H).
中间物347C:(5aS,8aR)-2-碘-4,5,5a,6,8,8a-六氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物347B(0.5g,1.33mmol)于THF(1mL)中的搅拌的溶液中，加入硼烷二甲基硫络合物(0.378mL,3.98mmol)，将反应混合物在40℃搅拌16h。加入额外量的硼烷二甲基硫络合物(0.126mL,1.326mmol)，再将反应搅拌16h。反应通过添加乙醇(3mL)猝灭，将溶液加热回流2h。反应混合物浓缩，得到粗中间物347C，为灰白色半固体，其按原样用于下一步骤而没有纯化。
中间物347D:(5aS,8aR)-2-碘-5a,6,8,8a-四氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物347C(1.0g,2.75mmol)于DCM(10mL)中的搅拌的溶液中，加入TEA(1.151mL,8.26mmol)，搅拌10min.，接着加入Boc2O(0.767mL,3.30mmol)。反应混合物在室温搅拌16h.，此时用水(50mL)洗涤，用DCM(3x 50mL)萃取，合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥并且浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱50％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物347D(0.56,44％产率)，为灰白色固体。MS(ES):-m/z＝464[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 5.30(d,J＝18.5Hz,1H),4.88(dd,J＝3.0,7.2Hz,1H),4.51-4.36(m,1H),4.33-4.14(m,2H),4.13-4.00(m,1H),3.98-3.86(m,1H),3.82-3.71(m,1H),1.49-1.39(m,9H),1.35-1.25(m,3H).
中间物347E:(5aS,8aR)-5-(叔丁氧基羰基)-2-碘-4,5,5a,6,8,8a-六氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸
向中间物347D(0.85g,1.835mmol)于THF(5mL)中的搅拌的溶液中，加入NaOH(0.220g,5.50mmol)于水(4mL)中的溶液，将反应混合物加热至70℃ 16h。反应混合物浓缩，残余物的pH使用柠檬酸水溶液调节至4-5。过滤出所形成的沉淀，用己烷洗涤，干燥得到中间物347E(0.48g,51％)，为灰白色固体。MS(ES):-m/z＝434[M-H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm12.80-12.67(m,1H),5.30(d,J＝18.5Hz,2H),4.87(dd,J＝3.4,6.8Hz,1H),4.46-4.32(m,1H),4.12-4.04(m,1H),3.98-3.90(m,1H),3.89-3.82(m,1H),3.80-3.69(m,1H),1.43(s,9H).
中间物347F:(5aS,8aR)-3-氨甲酰基-2-碘-5a,6,8,8a-四氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯
爱室温，347E(0.480g,1.103mmol)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中，加入DIPEA(0.963mL,5.51mmol),HATU(0.839g,2.206mmol)和NH4Cl(0.295g,5.51mmol)。在搅拌12小时后，反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x 50mL)。合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，得到中间物347F(0.39g,74％)，为浅黄色油状物。MS(ES):m/z＝435[M+H]+；1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.95(s,2H),5.30-5.13(m,2H),4.86(dd,J＝3.4,7.6Hz,1H),4.38(d,J＝15.9Hz,1H),4.14-4.03(m,1H),3.98-3.82(m,2H),3.75(dd,J＝6.6,9.3Hz,1H),1.43(s,9H).
中间物347G:(5aS,8aR)-3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-5a,6,8,8a-四氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物347F(0.370g,0.852mmol)和(3-氯-4-氟苯基)硼酸(0.297g,1.704mmol)于二噁烷(2mL)中的搅拌的溶液中，加入K3PO4(0.543g,2.56mmol)于水(0.5mL)中的溶液，将反应混合物用氮气吹洗10分钟。然后加入PdCl2(dppf)CH2Cl2(0.052g,0.064mmol)，将反应混合物加热至80℃并且搅拌16h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x 30mL).合并的有机层用水洗涤，经Na2SO4干燥，并且浓缩。粗化合物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱4％MeOH/CHCl3)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物347G(0.270g,54％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝437[M+H]+.
中间物347H:(5aS,8aR)-2-(3-氯-4-氟苯基)-4,5,5a,6,8,8a-六氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酰胺HCl
向中间物347G(0.2g,0.458mmol)于二噁烷(1mL)中的搅拌的溶液中，加入HCl于二噁烷中的溶液(2mL,8.0mmol,4M)。在室温搅拌2h,反应混合物浓缩，粗产物用己烷研磨，得到中间物347H(0.17g,71％)，为灰白色固体。MS(ES):-m/z＝337[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.90(ddd,J＝1.8,7.5,14.3Hz,1H),7.80-7.68(m,2H),7.54-7.47(m,1H),7.38(dd,J＝8.3,9.8Hz,1H),5.10(br.s.,1H),4.63(br.s.,1H),4.56(s,2H),4.20-3.98(m,4H),3.57(s,1H).
化合物347:(5aS,8aR)-2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-5a,6,8,8a-四氢呋喃并[3,4-e]吡唑并[1,5-a]吡啶-3,5(4H)-二甲酰胺
使用类似于制备化合物297的合成顺序，化合物347由中间物347H合成。HPLC保留时间1.51分钟和1.51分钟。(分别为方法E和L)。MS(ES):m/z＝481[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.52(s,1H),7.90(dd,J＝2.0,7.5Hz,1H),7.76-7.69(m,3H),7.67-7.61(m,2H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.44-7.33(m,2H),5.50(q,J＝7.4Hz,1H),5.36(d,J＝17.1Hz,1H),4.93(dd,J＝3.0,7.0Hz,1H),4.54(d,J＝17.1Hz,1H),4.22(d,J＝10.0Hz,1H),4.04-3.96(m,2H),3.89(dd,J＝6.5,9.0Hz,1H).
类似于化合物347，使用347F与不同的硼酸，然后通过脱除N-Boc基团，以及与4-异氰酸酯基苯甲腈偶合，合成表29中的化合物。
表29
方案38
中间物A1A:(2,3-二羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯
上述中间物使用美国专利申请公开文本No.2006/69156 A1(2006)中报道的专利文献操作合成。
向3-氨基丙-1,2-二醇(10.0g,110mmol)于MeOH(407mL)中的溶液中，加入Boc2O(35.9g,165mmol)和TEA(55mL,395mmol)，将反应混合物在50℃加热20min.然后在室温搅拌12小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱剂洗脱5％MeOH/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1A(20.14g,96％)，为无色油状物.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 6.61(br.s.,1H),4.63(d,J＝4.9Hz,1H),4.47(t,J＝5.6Hz,1H),3.45(d,J＝5.6Hz,1H),3.31-3.23(m,2H),3.09-2.98(m,1H),2.85(d,J＝6.6Hz,1H),1.38(s,9H).
中间物A1B:(3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯
上述中间物使用美国专利申请公开文本No.2003/187026 A1(2003)中报道的专利文献操作合成。
向中间物A1A(20.14g,105mmol)于DCM(168mL)中的溶液中，加入TEA(17.62mL,126mmol),TBSCl(18.00g,116mmol)和DMAP(0.515g,4.21mmol)，反应混合物在室温搅拌16h。然后混合物用DCM(100mL)稀释，有机层用水洗涤(3x 100mL)、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗残余物。经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱梯度洗脱0 to 30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1B(24.46g,76％)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm6.58(br.s.,1H),4.69(d,J＝4.4Hz,1H),3.55-3.42(m,3H),1.37(s,9H),0.92-0.82(m,9H).
中间物A1C:4-(3-氯苯基)-2，4-二氧杂丁烷乙酯
向1-(3-氯苯基)乙酮(16.79mL,129mmol)和草酸二乙酯(18.05mL,136mmol)于DMF(78.0mL)中的冰冷却溶液中，历时30分钟逐滴加入NaH(6.09g,155mmol,矿物油中的60％分散体)，所生成的混合物在该温度搅拌20分钟，然后在室温16h。反应混合物用水洗涤，用1Naq.HCl酸化至pH～4-5。混合物进一步用大量水稀释。水层用EtOAc萃取(4x100mL)，合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗残余物。经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱剂洗脱0-15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1C(27.1g,84％)，为固体。MS(ES):m/z＝277.10[M+Na]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.99(t,J＝1.8Hz,1H),7.95-7.86(m,1H),7.60(ddd,J＝8.0,2.1,1.0Hz,1H),7.48(t,J＝7.9Hz,1H),7.06(s,1H),4.43(q,J＝7.3Hz,2H),1.44(t,J＝7.2Hz,3H).
中间物A1D:3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向中间物A1C(14.57g,57.2mmol)于EtOH(191mL)中的悬浮液中，加入水合肼(5.57mL,57.2mmol,64％solution)，反应混合物在室温搅拌16h。反应随着时间变成均相，然后固体析出。过滤出稠厚的固体。滤饼用少量EtOH洗涤，得到产物，为白色固体。将滤液旋转蒸发干燥，得到粗产物，为黄色固体。将其悬浮于最少量EtOH或MeCN中，过滤得到更多产物。将滤液旋转蒸发干燥，将随后的固体悬浮于EtOH或MeCN中，再重复2-3次，在每次过滤循环中得到更多的白色固体。合并的固体真空干燥3h，得到中间物A1D(10.9g,76％)。MS(ES):m/z＝273[M+Na]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.91(br.s.,1H),7.97(t,J＝1.8Hz,1H),7.86(dt,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.55-7.33(m,4H),4.34(q,J＝7.2Hz,2H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H).
中间物A1E:3-(3-氯苯基)-1-(2,2,3,3,11,11-六甲基-9-氧代-4,10-二氧杂-8-氮杂-3-硅杂十二碳烷-6-基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向中间物A1D(7.0g,27.9mmol)和PPh3(10.99g,41.9mmol)于THF(112mL)中冰冷却的悬浮液中加入DIAD(8.57mL,41.9mmol)于THF(15mL)中的溶液。反应混合物迅速变成均相。在该温度搅拌30分钟，接着加入中间物A1B(10.24g,33.5mmol)于THF(15mL)中的溶液。将所生成的反应混合物在室温搅拌2h，然后用乙酸乙酯稀释(150mL)。有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱剂洗脱0 to 15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1E(12.5g,83％)，为粘稠糖浆。MS(ES):m/z＝438.1[M-Boc]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.97(s,1H),7.91-7.83(m,1H),7.53-7.37(m,3H),7.01(s,1H),5.54(br.s.,1H),4.32(q,J＝7.0Hz,2H),3.94(d,J＝6.0Hz,2H),3.48(s,1H),3.39(d,J＝7.5Hz,1H),1.41-1.29(m,12H),0.74(s,9H).
中间物A1F:1-(1-氨基-3-羟基丙-2-基)-3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯，2HCl
向中间物A1E(21.0g,39mmol)于1,4-二噁烷(156mL)中的溶液中，加入HCl溶液(166mL,663mmol,4M的1,4-二噁烷)，反应混合物在室温搅拌12h。生成白色沉淀，过滤出白色沉淀，滤饼用少量二噁烷洗涤。固体真空干燥4h，得到中间物A1F，为双HCl盐(11.9g,77％)。MS(ES):m/z＝324.0[M+H]+.
中间物A1G:2-(3-氯苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A1F(5.23g,13.18mmol)于EtOH(132mL)的悬浮液中，加入NH4OH(171mL,1318mmol)，将反应混合物在室温搅拌16h。混合物迅速变成均相，隔夜白色沉淀形成。过滤出固体，滤液减压浓缩，得到更多的产物。合并的白色固体干燥过夜，得到中间物A1G(3.5g,96％)。MS(ES):m/z＝278.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.22(br.s.,1H),7.94(t,J＝1.6Hz,1H),7.86(dt,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.52-7.38(m,2H),7.34(s,1H),7.07(br.s.,1H),5.29(t,J＝5.8Hz,1H),4.54-4.42(m,1H),3.86-3.71(m,3H),3.65(dt,J＝13.4,4.1Hz,1H).
中间物A1H:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A1G(4.365g,15.72mmol)于DMF(157mL)中的溶液中，加入咪唑(1.380g,20.28mmol)和TBSCl(2.84g,18.86mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。减压浓缩大多数DMF，残余物用水洗涤，生成白色沉淀。过滤出固体，滤饼真空干燥4h，得到中间物A1H(5.1g,83％)。MS(ES):m/z＝392.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.21(br.s.,1H),7.94(t,J＝1.6Hz,1H),7.86(dt,J＝7.5,1.3Hz,1H),7.52-7.37(m,2H),7.35(s,1H),4.58(br.s.,1H),4.09-3.92(m,2H),3.63(s,1H),0.91-0.79(m,9H).
中间物A1I:(2-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-基)甲醇
在-15℃，向中间物A1H(4.945g,12.61mmol)于THF(126mL)中的溶液中，逐滴加入1M LAH于THF中的溶液(31.5mL,31.5mmol)，将反应混合物在该温度搅拌3小时。LC-MS显示主要是未反应的初始物质。因此，在-15℃逐滴加入更多的1M LAH于THF中的溶液(6.31mL,6.31mmol,0.5当量)，将反应混合物逐渐温热至室温，再搅拌16小时。反应混合物小心地在-15℃连续加入H2O(31.5mL)、NaOH(15％水溶液,31.5mL)和H2O(92mL)猝灭。然后将浆液在室温搅拌约～30min.，接着加入无水MgSO4。混合物再搅拌15分钟，然后过滤出无机物质。滤饼用THF(150mL)洗涤。两相的滤液减压浓缩，除去THF。残余的水层用DCM(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到TBS断裂的中间物A1I(3.1g,93％)，为略微不纯的黄色粘稠固体。MS(ES):m/z＝264.0[M+H]+.
中间物A1J:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪
向中间物A1I(2.37g,8.97mmol)于DCM(90mL)中的溶液中，加入TBSCl(2.57g,17.05mmol),DMAP(0.164g,1.346mmol)和TEA(3.75mL,26.9mmol)，反应混合物在室温搅拌6h。然后用饱和NaHCO3水溶液洗涤，分离两层。水层用DCM(2x50mL)反萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱40-65％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1J(3.194g,94％)，为无色油状物。MS(ES):m/z＝378.1[M+H]+.
中间物A1K:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1J(3.194g,8.45mmol)于DCM(85mL)中的溶液中，加入Boc2O(2.213g,10.14mmol),DMAP(0.103g,0.845mmol)和TEA(3.53mL,25.4mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。然后用NaHCO3饱和水溶液猝灭，分离两层。水层用DCM(2x50mL)反萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到固体。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱剂洗脱20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1K(3.392g,84％)，为油状物。MS(ES):m/z＝478.08[M+H]+.
中间物A1L:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯苯基)-3-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1K(3.392g,7.09mmol)于DCM(37.8mL)和MeOH(9.46mL)中的溶液中，加入NIS(7.66g,34.1mmol)将反应混合物在室温搅拌2h。然后将溶液减压浓缩，生成固体。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱10 to 15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1L(4.28g,>99％)，为半固体。MS(ES):m/z＝604.08[M+H]+.
中间物A1M:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氯苯基)-3-氰基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1L(1.0g,1.656mmol)于DMF(16.56mL)中的溶液中，加入CuCN(0.371g,4.14mmol)，将反应混合物在密封管中于油浴在120℃加热16小时。过滤出无机物质，滤饼用EtOAc洗涤。合并的滤液减压浓缩，得到粗残余物。经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱10 to 15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1M(0.425g,51％)，为油状物。MS(ES):m/z＝504.08[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm7.90-7.78(m,2H),7.69-7.50(m,2H),4.88(d,J＝17.6Hz,1H),4.71(d,J＝17.6Hz,1H),4.48(br.s.,1H),4.13(br.s.,1H),4.00-3.91(m,2H),3.81(br.s.,1H),1.53-1.43(m,9H),0.88-0.77(m,9H).
中间物A1N:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1M(1.4g,2.78mmol)于DMSO(27mL)中的溶液中，加入5M KOH(2.78mL,13.91mmol)的水溶液和H2O2(5.68mL,55.7mmol,30％w/v，于H2O中)，反应混合物在室温搅拌3小时，用大量水稀释，水相用EtOAc萃取(3x50mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到粗固体。经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱剂洗脱100％EtOAc)。合并含有产物的馏分，蒸发得到TBS cleaved中间物A1N(0.95g,84％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝407[M+H]+.
中间物A1O:2-(3-氯苯基)-7-(羟基甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
向中间物A1N(0.17g,0.418mmol)于DCM(4.18mL)中的溶液中，加入TFA(0.644mL,8.36mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。然后减压蒸发掉挥发性物质，残余物用饱和NaHCO3水溶液碱化。分离两层，水层用DCM(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到粗固体。经硅胶色谱纯化(25g柱，用以下洗脱剂洗脱35％MeOH/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A1O(0.073g,57％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝307[M+H]+.
化合物A1:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A1O(0.027g,0.088mmol)于DMF(1.76mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.019g,0.132mmol)和TEA(0.037mL,0.264mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。然后对混合物进行过滤，滤液经制备型LC/MS纯化。合并含有期望产物的馏分，蒸发得到化合物A1(0.029g,70％)。MS(ES):m/z＝451[M+H]+；HPLC保留时间1.41分钟和2.16分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.77-7.69(m,3H),7.69-7.60(m,3H),7.50-7.40(m,2H),7.38(br.s.,1H),7.23(br.s.,1H),4.99-4.84(m,2H),4.38-4.28(m,1H),4.12-4.01(m,2H),3.96-3.87(m,1H),3.81(dd,J＝11.0,7.3Hz,1H),1.91(s,1H).
使中间物A1O与相应的苯胺反应，合成表30中的化合物。
方案39
g
中间物A5A:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-(氟甲基)-6，7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1N(0.15g,0.369mmol)于DCM(4.92mL)中的冷却至-78℃的悬浮液中，加入DAST(0.073mL,0.553mmol)。反应混合物迅速变成均相。将反应混合物在室温搅拌2h。用饱和NaHCO3水溶液猝灭，有机层分离，水层用DCM(3x 10mL)猝灭。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(25g柱，用以下洗脱剂洗脱55％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A5A(0.054g,35.8％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝409[M+H]+.
中间物A5B:2-(3-氯苯基)-7-(氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,2TFA
向中间物A5A(0.054g,0.132mmol)于DCM(1.321mL)中的溶液中，加入TFA(0.102mL,1.321mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。然后减压浓缩，得到残余物。残余物真空干燥，得到中间物A5B，为双TFA盐(0.071g,>99％).MS(ES):m/z＝309.0[M+H]+.
化合物A5:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A5B(0.035g,0.065mmol)于DMF(0.65mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.019g,0.130mmol)和DIPEA(0.057mL,0.326mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。然后对混合物进行过滤，滤液经制备型LC/MS纯化。合并含有期望产物的馏分，蒸发得到化合物A5(0.017g,59％)。MS(ES):m/z＝453.30[M+H]+；HPLC保留时间1.44分钟和2.31分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.73(d,J＝7.6Hz,3H),7.67(d,J＝8.5Hz,3H),7.51-7.38(m,3H),7.31(br.s.,1H),5.08(d,J＝5.8Hz,1H),5.04-4.86(m,3H),4.81(d,J＝7.9Hz,1H),4.70(br.s.,1H),4.65(br.s.,1H),4.18(d,J＝10.1Hz,1H),4.04(dd,J＝14.0,6.4Hz,1H).
使中间物A5B与相应试剂反应，合成表31中的化合物。
方案40
中间物A12A:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-甲酰基-6，7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1N(0.2g,0.492mmol)于DCM(4.92mL)中的悬浮液中，加入戴斯-马丁高碘烷(0.271g,0.639mmol)，将反应混合物在室温搅拌16h。然后混合物用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离两层，水层用DCM萃取(2x 10mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱75％乙酸乙酯/己烷至100％EtOAc)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A12A(0.054g,35.8％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝409[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm9.75(s,1H),7.65-7.54(m,1H),7.54-7.33(m,4H),5.50(br.s.,1H),4.96(d,J＝16.8Hz,2H),4.77(br.s.,1H),4.59(d,J＝16.1Hz,1H),3.65(d,J＝12.3Hz,1H),1.58-1.37(m,9H).
中间物A12B:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-(二氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在0℃，向中间物A12A(0.105g,0.259mmol)于DCM(2.59mL)中的溶液中，加入DAST(0.103mL,0.778mmol)，反应混合物在室温搅拌16h。然后反应用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离两层，水层用DCM(2x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(25g柱，用以下洗脱梯度洗脱55至65％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A12B，为黄色固体。MS(ES):m/z＝427[M+H]+.
中间物A12C:2-(3-氯苯基)-7-(二氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺，2TFA
类似于中间物A5B(方案39)，通过使中间物A12B与TFA反应，合成中间物A12C。对中间物A12C(0.029g,20％)进行类似处理，得到双TFA盐。MS(ES):m/z＝327[M+H]+.
化合物A12:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(二氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A5，通过使中间物A12C和4-异氰酸酯基苯甲腈反应，合成化合物A12。MS(ES):m/z＝471.08[M+H]+；HPLC保留时间1.48分钟和2.35分钟。(HPLC分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.96(s,1H),7.78-7.70(m,3H),7.67(d,J＝8.5Hz,3H),7.54-7.42(m,3H),7.35(br.s.,1H),6.55(br.s.,1H),5.16(d,J＝17.1Hz,1H),4.93(br.s.,1H),4.82(d,J＝17.4Hz,1H),4.50(dd,J＝14.3,3.1Hz,1H),3.93-3.79(m,1H).
方案41
中间物A13A:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-(((甲磺酰基)氧基)甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A1N(0.3g,0.737mmol)于DCM(7.37mL)中的冰冷却悬浮液中，加入TEA(0.123mL,0.885mmol)，然后滴加甲磺酰氯(0.063mL,0.811mmol)。所生成的均质反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。.分离两层，水层用DCM(2x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱75％to 85％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A13A(0.208g,58.2％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝485[M+H]+.
中间物A13B:3-氨甲酰基-2-(3-氯苯基)-7-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A13A(0.08g,0.165mmol)于THF(3.30mL)中的溶液中，在室温滴加1MLiEt3BH于THF中的溶液(1.650mL,1.650mmol)，将反应混合物搅拌2h。然后小心地用水猝灭，用DCM萃取(3x10mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(25g柱，用以下洗脱剂洗脱a50％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A13B(0.053g,81％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝391.1[M+H]+.
中间物A13C:2-(3-氯苯基)-7-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,2TFA
中间物A13C类似于中间物A5B通过使中间物A13B与TFA反应来合成。中间物A13C(0.07g,>99％)类似的处理，得到双TFA盐。MS(ES):m/z＝291[M+H]+.
化合物A13:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
化合物A13类似于化合物A5通过使中间物A13C与4-异氰酸酯基苯甲腈反应来合成。MS(ES):m/z＝435.0[M+H]+；HPLC保留时间1.48分钟和2.41分钟。(分别为方法H和I)；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.38(s,1H),7.77-7.59(m,6H),7.49-7.41(m,2H),7.38(br.s.,1H),7.22(br.s.,1H),4.97(d,J＝17.1Hz,1H),4.86(d,J＝17.1Hz,1H),4.53-4.38(m,1H),4.11(dd,J＝13.7,3.7Hz,1H),3.72(dd,J＝14.2,6.9Hz,1H),2.89(s,1H),2.73(s,1H),1.49(d,J＝6.4Hz,3H).
方案42
中间物A14A:1-(2,2,3,3,11,11-六甲基-9-氧代-4,10-二氧杂-8-氮杂-3-硅杂十二碳烷-6-基)-3-碘-1H-吡唑-4,5-二羧酸二乙酯
将中间物104C(1.0g,2.96mmol)、中间物A1B(1.13g,3.70mmol)、三苯基膦(0.78g,2.96mmol)和TEA(0.41mL,2.96mmol)于THF(14.79mL)中的溶液冷却至0℃，加入DTBAD(0.7g,2.96mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌16h，接着用水和EtOAc洗涤。分离两层，水层用EtOAc(2x 20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0 to 15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14A(1.2g,65％)，为固体。MS(ES):m/z＝648.1[M+Na]+.
中间物A14B:7-(羟基甲基)-2-碘-4-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物A14A(21.5g,34.4mmol)于DCM(344mL)中的溶液中，加入TFA(47.7mL,619mmol)，将反应混合物在室温搅拌48h。然后减压浓缩挥发性物质。由此获得的残余物直接吸收在EtOH(75mL)中，加入氢氧化铵(581mL,447mmol,30％aq.)。迅速生成沉淀。在室温继续搅拌1小时。过滤出所生成的固体。滤饼用少量EtOH淋洗，合并的滤液在减压下部分蒸发，得到更多的沉淀。将该固体与初始滤饼合并，空气干燥，得到中间物A14B(18g,71.6％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝365.8[M+H]+.
中间物A14C:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-碘-4-氧代-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3-羧酸乙酯
向中间物A14B(16.79g,46.0mmol)于DMF(230mL)中的溶液中，加入TBSCl(8.32g,55.2mmol)，接着加入咪唑(4.70g,69.0mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。然后将混合物浓缩干燥，残余物用水洗涤，用DCM萃取(2x 200mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(330g,用10至55％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14C(16g,72.6％)，为固体。MS(ES):m/z＝479.9[M+H]+.
中间物A14D:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-碘-4-氧代-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物A14C(11.74g,24.49mmol)于甲苯(188mL)中的溶液中，加入DMAP(4.49g,36.7mmol)，接着加入Boc2O(6.41g,29.4mmol)，将反应混合物在油浴中在60℃加热1小时，然后在室温16小时。接着浓缩干燥，得到固体残余物，经硅胶色谱纯化(220g,用5至25％乙酸乙酯/己烷的梯度洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14D(13.7g,96％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝580.1[M+H]+.
中间物A14E:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二羧酸5-叔丁酯3-乙酯
向中间物A14D(1.0g,1.726mmol)于THF(4.31mL)中的-10℃溶液中，逐滴加入(2.07mL,2.071mmol,1M于THF)，历时30分钟，将反应混合物在0℃搅拌2小时。然后用水猝灭，用乙酸乙酯萃取(2x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到部分还原的中间物，为泡沫。MS(ES):m/z＝604.15[M+Na]+。其用于下一步骤而没有进一步纯化。
向上述中间物于DCM(～8mL)中的-78℃溶液中，先后加入三乙基硅烷(0.85mL,5.18mmol)和BF3.OEt2(0.65mL,5.18mmol)，将反应混合物在该温度搅拌1小时。其后，加入更多的三乙基硅烷(0.852mL,5.18mmol)和BF3.OEt2(0.656mL,5.18mmol)，继续在-78℃继续搅拌3小时。用饱和NaHCO3水溶液猝灭，分离两层，水层用DCM(2x 15mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱5 to 15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14E(0.42g,43％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝566.15[M+H]+.
中间物A14F:5-(叔丁氧基羰基)-7-(羟基甲基)-2-碘-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物A14E(10.0g,17.68mmol)于乙醇(26.8mL)和THF(53.6mL)中的溶液中，加入LiOH(6.05g,248mmol)于水(17.86mL)中的悬浮液，反应混合物在室温搅拌48h。减压浓缩挥发性物质，水相残余物用Et2O萃取。弃去Et2O层，水层用1N HCl水溶液酸化至pH＝2。然后用DCM(4x 50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到中间物A14F(6.87g,92％)，为白色固体，同时失去了TBS基团。MS(ES):m/z＝446.1[M+Na]+.
中间物A14G:3-氨甲酰基-7-(羟基甲基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A14F(6.87g,16.23mmol)于DMF(27.1mL)中的溶液中，加入DIPEA(11.34mL,64.9mmol)和HATU(12.34g,32.5mmol)，将混合物在室温搅拌30min.，然后加入NH4Cl(3.47g,64.9mmol)。将所生成的混合物继续在室温搅拌16小时。用水洗涤，(250mL)，用DCM(3x 70mL)萃取。合并的有机层用大量水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱剂洗脱5％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A9G(6.75g,98％)，为固体。MS(ES):m/z＝423.1[M+H]+.
中间物A14H:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A14G(5.1g,12.08mmol)和(3-氯-4-氟苯基)硼酸(3.16g,18.12mmol)于2M K3PO4水溶液(18.12mL,36.2mmol)和1,4-二噁烷(121mL)中的脱气的溶液中，加入PdCl2(dppf)(0.884g,1.208mmol)。将反应混合物再次脱气5分钟，然后在密封管中于85℃的油浴中加热16h。混合物减压浓缩，接近干燥，将残余物分配在DCM和水之间，分离两层，水层用DCM(2x 40mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱65至90％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14H(5.08g,>99％)为浅褐色固体。MS(ES):m/z＝425.2[M+H]+.
中间物A14I:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A14H(1.84g,4.33mmol)于DCM(43.3mL)中的-78℃溶液中，逐滴加入DAST(0.57mL,4.33mmol)，然后将反应混合物在室温搅拌2h。用饱和NaHCO3水溶液猝灭，分离有机层，水层用DCM(2x 20mL)猝灭。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到固体。经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱10至55％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A14I(0.56g,30.2％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝427.2[M+H]+.
中间物A14J:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
向中间物A14I(0.2g,0.466mmol)于DCM(4.66mL)中的溶液中，加入TFA(0.72mL,9.32mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。蒸发挥发性物质，残余物用NaHCO3饱和水溶液猝灭，用5％MeOH/DCM(3x 10mL)溶液萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到中间物A14J(0.15g,100％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝327.2[M+H]+.
化合物A14和A15:N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
将4-氨基-2-氯苯甲腈(0.047g,0.306mmol)和TEA(0.085mL,0.612mmol)于THF(3.4mL)中的溶液逐滴加至三光气(0.034g,0.115mmol)于THF(3.4mL)中的冰冷却溶液中。将该混合物在该温度继续搅拌30分钟，然后加入中间物A14J(0.05g,0.153mmol)于DMF(1.7mL)中的溶液。将所生成的反应混合物在室温搅拌16h。减压蒸发挥发性物质，残余物经制备型HPLC纯化，得到化合物A14和A15的外消旋混合物。单独的异构体A14和A15通过手性SFC纯化分离，使用IA制备型柱(30x 250)mm,5μm柱，流动相40％MeOH/CO2,背压150巴，温度35℃,流速70.0mL/min，11分钟。UV检测于265nm。化合物A14(S)-异构体在7.24分钟洗脱。(12.2mg,100％ee,产率＝15.78％)和化合物A15(R)-异构体在8.61分钟洗脱。(13.4mg,100％ee,产率＝17.33％)。MS:m/z＝505.3[M+H]+；HPLC保留时间1.73分钟和2.69分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.92-7.80(m,3H),7.75-7.66(m,1H),7.59(d,J＝9.2Hz,1H),7.49(t,J＝9.0Hz,1H),7.43(br.s.,1H),7.31(br.s.,1H),5.02-4.92(m,2H),4.90(d,J＝13.9Hz,1H),4.80(d,J＝9.9Hz,1H),4.69(br.s.,1H),4.65(br.s.,1H),4.17(dd,J＝14.3,4.4Hz,1H),4.05(dd,J＝14.1,6.8Hz,1H).
表32中的化合物通过使中间物A14J与相应的苯胺反应来合成。
方案43
中间物A18C:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(二氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3-甲酰胺
中间物A18C由中间物A14H通过方案40中的合成中间物A12C的合成顺序来合成。MS(ES):m/z＝345.0[M+H]+.
化合物A18和A19:(S)-N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(二氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
化合物A18和A19的外消旋混合物，以类似于化合物A14和A15(方案42)，通过使中间物A18C与4-氨基-2-氯苯甲腈反应来合成。单独的异构体A18和A19使用手性SFC纯化来分离，使用AS制备型柱(21x 250)mm,10μm柱,溶剂A:0.1％二乙胺/庚烷,溶剂B:100％EtOH,开始％B:30,等度洗脱,流速15.0mL/min，32分钟。UV在254nm检测。化合物A18(S)-异构体在21.012分钟洗脱。(10.4mg,100％ee,产率＝12.65％)和A19(R)-异构体在11.008分钟洗脱。(10.6mg,100％ee,产率＝12.76％)。MS(ES):m/z＝523.3[M-H]+；HPLC保留时间1.77分钟和2.70分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.93-7.80(m,3H),7.69(d,J＝4.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.55-7.44(m,2H),7.40(br.s.,1H),5.18(d,J＝17.2Hz,1H),4.93(br.s.,1H),4.82(d,J＝16.9Hz,1H),4.51(d,J＝11.7Hz,1H),3.88(d,J＝13.6Hz,1H),3.39(br.s.,1H).
表33中的化合物，以类似于化合物A18和A19，通过使中间物A18C与相应的试剂反应来合成。
方案44
中间物A24A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(吗啉代甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A18A(0.17g,0.402mmol)于DCM(5.36mL)和MeOH(2.68mL)中的溶液中，加入吗啉(0.088mL,1.005mmol)，接着加入氰基硼氢化钠(0.076g,1.21mmol)和冰醋酸(0.023mL,0.402mmol)。将反应混合物在室温搅拌8h。用饱和NaHCO3水溶液猝灭，分离两层，水层用DCM萃取(2x 10mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱40至60％EtOAc/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A24A(0.086g,43.3％)，为灰白色泡沫。MS(ES):m/z＝494.1[M+H]+.
中间物A24B:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(吗啉代甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,2TFA
向中间物A24A(0.086g,0.174mmol)于DCM(1.74mL)中的溶液中，加入TFA(0.134mL,1.741mmol)，反应混合物在室温搅拌1h，然后减压浓缩干燥，得到粗中间物A24B(0.105g,>99％)，为双TFA盐。MS(ES):m/z＝394.0.
化合物A24和A25:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(吗啉代甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A24B(0.054g,0.087mmol)于DMF(0.87mL)中的溶液中，加入DIPEA(0.091mL,0.521mmol)，接着加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.038g,0.260mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。经制备型HPLC纯化，得到化合物A24和A25外消旋混合物。单独的异构体A24和A25通过手性SFC纯化分离，使用OD制备型柱(21x 250)mm,10μm柱,溶剂A:0.1％二乙胺/庚烷,溶剂B:100％EtOH,起始％B:25,等度洗脱,流速15.0mL/min，35分钟。UV在254nm检测。化合物A24(S)-异构体在25.022分钟洗脱。(9.7mg,100％ee,产率＝20.56％)和化合物A25(R)-异构体在18.054分钟洗脱。(7.6mg,100％ee,产率＝15.94％)。MS:m/z＝538.2[M+H]+；HPLC保留时间1.57分钟和2.46分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85(dd,J＝7.3,1.8Hz,1H),7.78-7.64(m,5H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.41(br.s.,1H),7.25(br.s.,1H),5.20(d,J＝17.2Hz,1H),4.71(d,J＝16.9Hz,1H),4.61-4.50(m,1H),4.45(d,J＝14.7Hz,1H),3.85-3.71(m,1H),3.55(br.s.,4H),2.83-2.74(m,2H),2.64-2.52(m,3H),2.38-2.25(m,2H).
方案45
中间物A26A:5-(叔丁氧基羰基)-3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-羧酸
向中间物A14H(2.0g,4.71mmol)于DMF(47.1mL)中的溶液中，加入重铬酸吡啶(12.40g,33.0mmol)，反应混合物在室温搅拌48h。用水洗涤，(250mL)，用EtOAc萃取(3x50mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗中间物A26A(1.47g,71.2％)，为棕色固体。MS(ES):m/z＝439.3[M+H]+.
中间物A26B:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5,7(4H)-二羧酸5-叔丁酯7-甲酯
向粗中间物A26A(1.47g,3.35mmol)于DCM(16.75mL)和MeOH(16.75mL)中的溶液中，加入TMS-重氮甲烷(5.02mL,10.05mmol,2M溶液，于THF中)，反应混合物在室温搅拌2h。然后将混合物减压浓缩干燥，。残余物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱45至55％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A26B(0.9g,59.4％)，为白色无定性固体。MS(ES):m/z＝451.3[M-H]+.
中间物A26C:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-羟基丙-2-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A26B(0.9g,1.990mmol)于THF(19.90mL)中的-78℃溶液中，逐滴加入甲基溴化镁(3.32mL,9.95mmol,3M己烷溶液)溶液。反应混合物逐渐温热，到达室温，并且搅拌16h。用饱和氯化铵水溶液猝灭，分离两层，水层用EtOAc猝灭(2x 60mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到油状物。经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱60至70％EtOAc/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A26C(0.84g,93％)，为黄色固体.(ES):m/z＝453.08[M+H]+.
中间物A26D:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-羟基丙-2-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
向中间物A226C(0.45g,0.994mmol)于DCM(10.0mL)中的溶液中，加入TFA(1.53mL,19.87mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。减压浓缩挥发性物质，残余物用饱和NaHCO3水溶液中和，用5％MeOH/DCM(3x 20mL)溶液洗涤。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到中间物A26D(0.34g,96％)，为固体.(ES):m/z＝375.02[M+Na]+.
化合物A26和A27:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(2-羟基丙-2-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
将中间物A26D(0.05g,0.142mmol)、4-异氰酸酯基苯甲腈(0.051g,0.354mmol)和DIPEA(0.087mL,0.496mmol)于DMF(1.42mL)中的溶液在室温搅拌1h。反应混合物经制备型HPLC纯化，得到化合物A26和A27的外消旋混合物。单独的异构体A26和A27经手性SFC分离，使用IA制备型柱(30x 250)mm,5μm柱,流动相:40％MeOH/CO2,背压150巴，温度35℃,流速70.0mL/min,16分钟。UV在265nm检测。化合物A26(S)-异构体在5.71分钟洗脱。(13.5mg,100％ee,产率＝18.59％)，以及化合物A27(R)-异构体在11.43分钟洗脱。(13.6mg,100％ee,产率＝19.12％)。MS(ES):m/z＝497.4[M+H]+；HPLC保留时间1.50分钟和2.41分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.87(d,J＝7.3Hz,1H),7.78-7.62(m,5H),7.49(t,J＝9.0Hz,1H),7.43(br.s.,1H),7.28(br.s.,1H),5.02(d,J＝16.9Hz,1H),4.83(d,J＝16.9Hz,1H),4.43(dd,J＝13.9,3.7Hz,1H),4.26(t,J＝3.9Hz,1H),3.71(dd,J＝14.1,4.2Hz,1H),3.37(d,J＝5.1Hz,1H),1.32(s,3H),1.08(s,3H).
方案46
中间物A28B:2-(3-氯-4-氟苯基)-N7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,7-二甲酰胺,2TFA
将中间物A26A(0.103g,0.235mmol)、四氢-2H-吡喃-4-胺HCl(0.13g,0.939mmol)、HATU(0.18g,0.469mmol)和DIPEA(0.164mL,0.939mmol)于DMF(2.35mL)中的溶液在室温搅拌16h。反应混合物用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(3x 10mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到中间物酰胺A28A。MS(ES):m/z＝544.1[M+Na]+。对粗产物脱除Boc基团，而没有纯化。
向中间物A28A于DCM(2mL)中的溶液中，加入TFA(0.27mL,3.52mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。然后将混合物浓缩干燥，得到粗中间物A28B(0.15g,>99％)，为双TFA盐。MS(ES):m/z＝422.0[M+H]+.
化合物A28和A29:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-N7-(四氢-2H-吡喃-4-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5,7(4H)-三甲酰胺
向中间物A28B(0.065g,0.100mmol)于DMF(1.0mL)中的溶液中，加入DIPEA(0.087mL,0.500mmol)，接着加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.036g,0.250mmol)，反应混合物在室温搅拌1h。经制备型HPLC纯化，得到化合物A28和A29的外消旋混合物。单独的异构体A28和A29通过手性SFC分离，使用IA制备型柱(30x 250)mm,5μm柱,流动相:45％MeOH/CO2,温度35℃,流速70.0mL/min，23分钟。UV在266nm检测。化合物A28(S)-异构体在5.43分钟洗脱。(5.1mg,100％ee,产率＝8.92％)和化合物A29(R)-异构体在17.43分钟洗脱。(5.0mg,100％ee,产率＝8.3％)。MS(ES):m/z＝566.3[M+H]+；HPLC保留时间1.60分钟和2.17分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.52(d,J＝7.7Hz,1H),7.82(dd,J＝7.3,1.8Hz,1H),7.74-7.57(m,5H),7.47(t,J＝9.0Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.27(br.s.,1H),5.19(d,J＝17.2Hz,1H),4.97(br.s.,1H),4.76(d,J＝17.2Hz,1H),4.52-4.38(m,1H),3.97(d,J＝10.3Hz,1H),3.84-3.77(m,1H),3.75-3.60(m,2H),3.41(br.s.,1H),3.37-3.27(m,1H),3.27-3.14(m,1H),1.70(d,J＝12.5Hz,1H),1.58(d,J＝12.5Hz,1H),1.50-1.28(m,2H).
方案47
中间物A30C:2-(3,4-二氯苯基)-7-(氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
中间物A30C类似于中间物A14J，通过首先使中间物A14G与3,4-二氯苯基硼酸偶合，接着进行如方案42所述的合成顺序来合成。MS(ES):m/z＝343.1[M+H]+.
化合物A30和A31:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-(氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
将中间物A30C(0.05g,0.146mmol)、4-异氰酸酯基苯甲腈(0.052g,0.364mmol)和DIPEA(0.076mL,0.437mmol)于DMF(1.46mL)中的溶液在室温搅拌1h。反应混合物经制备型HPLC纯化，得到化合物A30和A31的外消旋混合物。单独的异构体A30和A31经手性SFC纯化分离，使用IA制备型柱(30x 250)mm,5μm柱,流速70.0mL/min，16min.；流动相:40％MeOH/CO2.温度:35℃,背压150巴，UV在265nm检测,背压:150巴。化合物A30(S)-异构体在9.23分钟洗脱。(14.4mg,100％ee,产率＝20.28％)，以及化合物A31(R)-异构体在12.89分钟洗脱。(14.0mg,100％ee,产率＝19.72％)。MS(ES):m/z＝487.3[M+H]+；HPLC保留时间1.62分钟和2.49分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.89(s,1H),7.77-7.59(m,6H),7.42(br.s.,1H),7.38(br.s.,1H),5.06(d,J＝5.9Hz,1H),5.02-4.91(m,3H),4.88(d,J＝12.1Hz,1H),4.78(d,J＝10.3Hz,1H),4.68(br.s.,1H),4.63(br.s.,1H),4.20-4.11(m,1H),4.11-4.01(m,1H).
方案48
中间物A32C:2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
使用类似于制备中间物A13C(方案41)的合成顺序，中间物A32C由中间物A30A合成。MS(ES):m/z＝325.1[M+H]+.
化合物A32和A33:N5-(叔丁基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
将中间物A32C(0.05g,0.154mmol)、4-异氰酸酯基苯甲腈(0.057g,0.384mmol)和DIPEA(0.08mL,0.461mmol)于DMF(1.54mL)中的溶液在室温搅拌1h。反应混合物经制备型HPLC纯化，得到化合物A32和A33的嗪外消旋混合物。单独的异构体A32和A33用手性SFC纯化分离，使用AD制备型柱(21x 250)mm,10μm柱,溶剂A:0.1％二乙胺/庚烷,溶剂B:100％EtOH,起始％B:5.0,等度洗脱,流速15.0mL/min，70分钟。UV在254nm检测。化合物A32(S)-异构体在38.833分钟洗脱。(18.7mg,100％ee,产率＝25.9％)，以及化合物A33(R)-异构体在48.49分钟洗脱。(18.3mg,100％ee,产率＝25.4％)。MS(ES):m/z＝469.3；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.79-7.62(m,6H),7.43(br.s.,1H),7.33(br.s.,1H),4.99(d,J＝17.2Hz,1H),4.86(d,J＝16.9Hz,1H),4.54-4.40(m,1H),4.12(dd,J＝13.9,3.7Hz,1H),3.72(dd,J＝14.1,6.8Hz,1H),3.38(d,J＝4.8Hz,1H),1.50(d,J＝6.2Hz,3H).
方案49
中间物A34D:2-(3,4-二氯苯基)-7-(2-羟基丙-2-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺
使用类似于制备中间物A26D(方案45)的合成顺序，中间物A34D由中间物A30A合成。S(ES):m/z＝369.1[M+H]+.
化合物A34和A35:N5-(4-氰基苯基)-2-(3,4-二氯苯基)-7-(2-羟基丙-2-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
化合物A34和A35的外消旋混合物，以类似于化合物A26和A27(方案45)来合成：使中间物A34D于4-异氰酸酯基苯甲腈反应。反应混合物经制备型HPLC纯化，得到化合物A34和A35的外消旋混合物。单独的异构体A34和A35经手性SFC分离，使用IA制备型柱(30x 250)mm,5μm柱,流动相:40％MeOH/CO2,温度35℃,背压150巴，流速70.0mL/min，25分钟。UV在265nm检测。化合物A34(S)-异构体在7.45分钟洗脱。(13.4mg,100％ee,产率＝19.28％)，以及化合物A35(R)-异构体在18.57分钟洗脱。(12.8mg,100％ee,产率＝18.41％)。MS(ES):m/z＝513.3[M+H]+；HPLC保留时间1.64分钟和2.54分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.90(s,1H),7.77-7.59(m,7H),7.43(br.s.,1H),7.36(br.s.,1H),5.01(d,J＝16.9Hz,1H),4.81(d,J＝17.2Hz,1H),4.43(d,J＝14.3Hz,1H),4.27(br.s.,1H),3.69(d,J＝9.5Hz,1H),1.32(s,3H),1.13-1.04(m,3H).
方案50
中间物A36A:(Z)-1-(3-氯-4-氟苯基)-4,4-二乙氧基-3-羟基丁-2-烯-1-酮
向1-(3-氯-4-氟苯基)乙酮(16.25g,94mmol)和2,2-二乙氧基乙酸乙酯(20.73mL,113mmol)于THF(392mL)中的-78℃溶液中，逐滴加入LDA(51.8mL,104mmol,2M于THF)的溶液。将所生成的反应混合物逐渐温热至室温，继续搅拌16h。反应小心地用水猝灭，用EtOAc稀释。分离两层，水层用EtOAc萃取(2x 150mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(1500g Commodity柱，用10％乙酸乙酯/己烷洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36A(9.97g,35％)，为固体。MS(ES):m/z＝257[M-OEt]+.
中间物A36B:3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑
向中间物A36A(1937g，640mmol)于EtOH(128mL)中的溶液中，加入水合肼(4.9mL,64.0mmol,64％溶液)，将反应混合物在室温继续搅拌2h。乙醇减压浓缩，将残余物分配在水和EtOAc之间。分离两层，水层用EtOAc萃取(2x 200mL)。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱梯度洗脱0至20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36B(17.08g,89％)，为亮黄色糖浆，其稍后固化。MS(ES):m/z＝253[M-OEt]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.87(dd,J＝7.0,2.3Hz,1H),7.68(ddd,J＝8.5,4.6,2.1Hz,1H),7.19(t,J＝8.7Hz,1H),6.57(s,1H),5.75(s,1H),3.76-3.57(m,4H),1.35-1.24(m,7H).
中间物A36C:2-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑-1-基)乙腈
向中间物A36B(1.21g,4.04mmol)于DMF(10.22mL)的0℃溶液，加入NHMDS(4.24mL,4.24mmol,1M于THF)的溶液，将反应混合物继续在该温度搅拌30min.，然后加入2-氯乙腈(0.283mL,4.44mmol)。将所生成的混合物在室温搅拌16h。添加饱和氯化铵水溶液猝灭，水层用EtOAc(3x 25mL)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，并且滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(120g柱，20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36C(1.0g,73.3％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝338.2[M+H]+.
中间物A36D:1-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑-1-基)-3-羟基环丁烷甲腈
向中间物A36C(0.5g,1.480mmol)于THF(7.40mL)中的-78℃溶液中，逐滴加入甲基锂(0.925mL,1.48mmol,1.6M，于乙醚中)的溶液，将反应在该温度搅拌1小时。随后，逐滴引入2-(溴甲基)环氧乙烷(0.125mL,1.48mmol)于THF(2mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌小时。然后，在-78℃加入甲基溴化镁(0.493mL,1.48mmol,3M，于乙醚中)，使所生成的反应混合物温热至室温。在16h，反应通过添加饱和氯化铵水溶液猝灭，分离两层，水层用EtOAc(2x 20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0至20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36D(0.197g,33.8％)，为固体。MS(ES):m/z＝394.1[M+H]+.
中间物A36E:1-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑-1-基)-3-氧代环丁烷甲腈
向中间物A36D(4.6g,11.68mmol)于DCM(58.4mL)中的溶液中，加入戴斯-马丁高碘烷(7.43g,17.52mmol)，反应混合物在室温搅拌2h。然后通过添加饱和NaHCO3水溶液和饱和亚硫酸钠水溶液猝灭。分离两层，水层用DCM(2x 70mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱梯度洗脱0至15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36E(3.98g,87％)，为无色糖浆。MS(ES):m/z＝392.1[M+H]+.
中间物A36F:1-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑-1-基)-3,3-二氟环丁烷甲腈
向中间物A36E(3.98g,10.16mmol)于DCM(67.7mL)中的0℃溶液中，加入DAST(4.03mL,30.5mmol)，反应混合物在室温搅拌18h。用饱和NaHCO3水溶液猝灭，分离两层，水层用DCM(2x 60mL)洗涤。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗油状物。经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱梯度洗脱10至15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36F(3.075g,73.2％)，为黄色油状物。MS(ES):m/z＝414.17[M+H]+.
中间物A36G:(1-(3-(3-氯-4-氟苯基)-5-(二乙氧基甲基)-1H-吡唑-1-基)-3，3-二氟环丁基)甲胺
向中间物A36F(3.075g,7.43mmol)和氯化钴(II)(2.96g,22.29mmol)于MeOH(74.3mL)中的0℃悬浮液中，缓慢加入NaBH4(2.81g,74.3mmol)。见反应混合物立即变成黑色，观察到激烈的气体逸出。反应混合物在油浴中于50℃加热4小时，然后在室温搅拌16小时。反应混合物然后经垫过滤，滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物悬浮在DCM中，过滤。滤液浓缩，经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱65to75％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36G(1.1g,35.4％)，为无色油状物.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.86(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),7.65(ddd,J＝8.6,4.6,2.1Hz,1H),7.17(t,J＝8.7Hz,1H),6.70(s,1H),5.61(s,1H),3.75-3.45(m,7H),3.21(s,2H),3.01(ddd,J＝15.4,13.1,4.9Hz,2H),1.27(t,J＝7.0Hz,6H).
中间物A36H:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-6′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]
向中间物A36G(1.017g,2.434mmol)于THF(24.34mL)中的溶液中，加入浓HCl水溶液(0.61mL,7.30mmol)。形成沉淀，将反应混合物继续在室温搅拌2h。蒸发溶剂，含水残余物用NaHCO3的饱和水溶液碱化，用乙酸乙酯萃取(3x 25mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗中间物A36H(0.79g,100％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝326.0[M+H]+.
中间物A36I:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]
在室温，向中间物A36H(0.79g,2.425mmol)于EtOH(24.25mL)和THF(24.25mL)中的溶液中，加入NaBH4(0.459g,12.13mmol)，将反应混合物搅拌16h。用水洗涤，用DCM(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩.经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱55至100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36I(0.139g,17.49％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝328.1[M+H]+.
中间物A36J:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A36I(0.137g,0.418mmol)于DCM(4.18mL)中的溶液中，加入TEA(0.175mL,1.254mmol),DMAP(5.11mg,0.042mmol)和Boc2O(0.109g,0.502mmol)，将反应混合物搅拌16h。添加饱和NaHCO3水溶液猝灭，分离两层，水层用DCM(2x 10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩.经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱21％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36J(0.14g,78％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝428.1[M+H]+.
中间物A36K:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-3′-碘-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A36J(0.14g,0.327mmol)于DCM(2.62mL)和MeOH(0.654mL)中的溶液中，加入NIS(0.221g,0.982mmol)，将反应混合物继续在室温搅拌3h。然后减压浓缩，残余物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱18％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36K(0.179g,100％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝554.0[M+H]+.
中间物A36L:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3′-氰基-3,3-二氟-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A36K(0.148g,0.267mmol)于DMF(5.35mL)中的脱气溶液海总，加入氰化亚铜(I)(0.061g,0.668mmol)，将反应混合物再用氮气脱气5分钟，然后在密封管中于120℃油浴中加热20h。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，得到粗残余物，经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36L(0.095g,52.59％)，为灰白色固体。MS(ES):m/z＝478.3[M+Na]+.
中间物A36M:3′-氨甲酰基-2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A36L(0.095g,0.210mmol)于DMSO(2.1mL)中的冰冷却溶液中，加入5MKOH水溶液(0.21mL,1.049mmol)，接着滴加30％H2O2水溶液(0.429mL,4.20mmol)。反应混合物在室温搅拌1h。然后用水洗涤，用乙酸乙酯萃取(2x 10mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到黄色油状物。经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱剂洗脱30％EtOAc/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A36M(0.073g,73.9％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝471.1[M+H]+.
中间物A36N:2′-(3-氯-4-氟苯基)-3,3-二氟-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′-甲酰胺,TFA
向中间物A36M(0.073g,0.155mmol)于DCM(1.55mL)中的溶液中，加入TFA(0.24mL,3.10mmol)，将反应混合物在室温搅拌2h。然后浓缩干燥，将残余物真空干燥20分钟，得到粗中间物A36N(0.073g,>99％)，为单TFA盐。
化合物A36:2′-(3-氯-4-氟苯基)-N5′-(4-氰基苯基)-3,3-二氟-4′H-螺[环丁烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(6′H)-二甲酰胺
向中间物A36N(0.037g,0.076mmol)和DIPEA(0.067mL,0.382mmol)于DMF(1.0mL)中的溶液中，加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.022g,0.153mmol)，将将反应混合物继续在室温搅拌2h。然后经制备型HPLC纯化，得到化合物A36(16.9mg,42.6％)。MS(ES):m/z＝515.3[M+H]+；HPLC保留时间1.89分钟和2.77分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm7.89(d,J＝5.9Hz,1H),7.77-7.68(m,3H),7.65(d,J＝8.8Hz,2H),7.54-7.39(m,2H),7.32(br.s.,1H),5.01(s,2H),4.24-4.16(m,1H),4.14(s,2H),3.40(d,J＝14.7Hz,2H),3.12-2.99(m,2H).
方案51
中间物A37A:(3-溴-4-氰基苯基)氨基甲酸二叔丁酯
向4-氨基-2-溴苯甲腈(4.68g,23.75mmol)于THF(60mL)中的溶液中，加入TEA(6.62mL,47.5mmol)、DMAP(0.290g,2.375mmol)和BOC-酸酐(5.63mL,24.23mmol)。将反应混合物在室温继续搅拌过夜。然后浓缩，残余物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A37A(3.8g,40.3％)。MS(ES):m/z＝420.8[M+Na]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.71-7.53(m,2H),7.50(d,J＝1.5Hz,1H),1.48(s,18H).
中间物A37B:4-氨基-2-吗啉代苯甲腈
向小瓶中加入中间物A37A(300mg,0.755mmol)、吗啉(132mg,1.510mmol)、叔丁醇钠(109mg,1.133mmol)、Pd2(dba)3(69.2mg,0.076mmol)、XantPhos(87mg,0.151mmol)和二噁烷(8mL)。将反应混合物用氮气吹洗5分钟，然后封盖。将其在105℃加热5h。反应混合物冷却至室温，用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩。粗物质溶于DCM(15mL)中，用TFA(3mL)处理。将反应混合物在室温搅拌过夜，并且浓缩。残余物用20％MeOH/CHCl3稀释，小心地用饱和NaHCO3水溶液猝灭。分离有机层，水层用CHCl3再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱30-80％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A37B(62mg,40.5％)。MS(ES):m/z＝204.1[M+H]+.
中间物A37D:4-氨基-2-环丙基苯甲腈
向微波小瓶中，加入环丙基硼酸(441mg,5.14mmol)、中间物A37A(510mg,1.284mmol)、THF(8mL)、2M氢氧化钾水溶液(2.57mL,5.14mmol)和Pd(Ph3P)4(148mg,0.128mmol)。反应混合物用氮气吹洗3分钟，在100℃微波加热2h。反应混合物冷却至室温，用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，得到粗中间物A37C，将其原样使用，而没有进一步纯化。
向粗中间物A37C于DCM(15mL)中的溶液中，加入TFA(6mL)。将反应混合物在室温搅拌过夜，并且浓缩。残余物经制备型HPLC纯化。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A37D(84mg,41.4％)。MS(ES):m/z＝159.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,甲醇-d4))δ ppm 7.22(d,J＝8.3Hz,1H),6.54(d,J＝1.5Hz,1H),6.39(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),1.91-1.74(m,1H),1.06-0.94(m,2H),0.80-0.63(m,2H).
化合物A37:2-(3-氯苯基)-N5-(4-氰基-3-吗啉代苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向三光气(25mg,0.084mmol)于THF(2mL)中的冷却至0℃溶液中，加入中间物A37B(35mg,0.172mmol)和TEA(0.096mL,0.689mmol)于THF(2mL)中的溶液。将所生成的悬浮液在0℃搅拌30分钟，然后加入中间物156E(42.9mg,0.155mmol)于DMF(1mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，得到粗物质，将其经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，真空干燥，得到化合物A37(8.2mg,9.4％)。MS(ES):m/z＝506.3[M+H+；HPLC保留时间1.57分钟和2.17分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.09(s,1H),7.73(s,1H),7.66(d,J＝7.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.8Hz,1H),7.50-7.42(m,2H),7.39(br.s.,1H),7.20(br.s.,1H),6.90(s,1H),6.84(d,J＝8.8Hz,1H),4.91(s,2H),4.25(br.s.,2H),4.01(br.s.,2H),3.73(br.s.,4H),3.28(m.,3H),3.34(br.s.,1H).
类似于化合物A37，通过使中间物156E与相应的胺反应，合成表34的化合物。
表34
类似于混合物A37，通过使中间物172B与相应的胺反应，合成表35中的化合物。
表35
类似于化合物A37，通过使中间物185A与相应的胺反应，合成表36中的化合物。
表36
方案52
中间物A60A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-5-乙氧基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向小瓶中，加入(3-氯-5-乙氧基苯基)硼酸(61mg,0.304mmol)、中间物156C(119mg,0.304mmol)、2M K3PO4水溶液(0.46mL,0.913mmol)、二噁烷(6mL)和PdCl2(dppf)(22.27mg,0.030mmol)。反应混合物用氮气吹洗1分钟，然后在80℃加热过夜。反应混合物用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱20-80％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A60A(62mg,40.5％)。MS(ES):m/z＝421.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d))δ ppm 7.16(t,J＝1.6Hz,1H),7.00(d,J＝1.8Hz,2H),4.99(s,2H),4.23(t,J＝5.3Hz,2H),4.07(q,J＝7.0Hz,2H),3.96(t,J＝5.3Hz,2H),1.53(s,9H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H).
化合物A60:2-(3-氯-5-乙氧基苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
向中间物A60A(60mg,0.143mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(1mL,12.98mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，然后除去挥发性物质，得到粗中间物A60B，为TFA盐。然后将所述TFA盐溶于DMF(1mL)中，用DIPEA(0.018mL,0.115mmol)处理。所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(8.29mg,0.057mmol)。将反应混合物搅拌1h，其后过滤，经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，真空干燥，得到化合物A60(5.8mg,21.7％)。MS(ES):m/z＝463.3[M-H]+；HPLC保留时间1.71分钟和2.53分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6))δ ppm 7.78-7.64(m,4H),7.29(s,2H),7.22(s,2H),7.01(s,1H),4.90(s,2H),4.25(br.s.,2H),4.07(q,J＝7.0Hz,2H),4.00(br.s.,2H),3.37(d,J＝8.8Hz,2H),3.18(d,J＝4.4Hz,1H),1.34(t,J＝6.8Hz,3H).
化合物A61:N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(3-氯-5-乙氧基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在0℃，向三光气(23.13mg,0.078mmol)于THF(4mL)中的溶液中，加入4-氨基-2-氯苯甲腈(11.89mg,0.078mmol)和TEA(0.043mL,0.312mmol)于THF(1mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后添加中间物A60B(25mg,0.078mmol)于DMF(1ML)中的溶液。将反应混合物搅拌1小时，其后过滤，经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，真空干燥，得到化合物A61(26.5mg,68.1％)。MS(ES):m/z＝497.3[M-H]+；HPLC保留时间1.72分钟和2.62分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.57(s,1H),7.91(d,J＝1.8Hz,1H),7.85(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(dd,J＝8.8,1.8Hz,1H),7.29(s,1H),7.27-7.15(m,2H),7.08-6.95(m,1H),4.91(s,2H),4.44-4.21(m,2H),4.15-3.92(m,4H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H).
化合物A62:2-(3-氯-5-甲基苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A60，化合物A62通过使脱保护的A62A与4-异氰酸酯基苯甲腈反应来合成。化合物经制备型HPLC纯化。MS(ES):m/z＝433.3[M-H]+；HPLC保留时间1.65分钟和2.51分钟。(HPLC方法H和I).1H NMR(500MHz,DMSO-d6))δ ppm 7.78-7.59(m,4H),7.51(s,1H),7.46(s,1H),7.38(br.s.,1H),7.27(s,1H),7.21(br.s.,1H),4.90(s,2H),4.24(br.s.,2H),4.01(br.s.,2H),2.34(s,3H).
化合物A63:N5-(3-氯-4-氰基苯基)-2-(3-氯-5-甲基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A61，化合物A63通过使脱保护的A62A与4-氨基-2-氯苯甲腈反应来合成。化合物经制备型HPLC纯化。MS(ES):m/z＝467.2[M-H]+；HPLC保留时间2.07分钟和2.71分钟。(HPLC方法H和I).1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58(s,1H),7.91(s,1H),7.85(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(s,1H),7.47(s,1H),7.40(br.s.,1H),7.28(s,1H),7.18(br.s.,1H),4.91(s,2H),4.25(t,J＝5.0Hz,2H),4.07-3.93(m,2H),2.35(s,3H).
方案53
中间物A64A:2-(3-氯-4-氟苯基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3-羧酸
将中间物172A(700mg,2.375mmol)于浓HCl水溶液(6mL)中的悬浮液在100℃加热2小时，变成溶液。将反应混合物冷却至室温，用1N NaOH处理，pH变成7。过滤收集所生成的沉淀，用水洗涤，真空干燥，得到中间物A64A(250mg,35.6％)，为白色粉末。MS(ES):m/z＝296.0[M+H]+.
中间物A64B:2-(3-氯-4-氟苯基)-5-((4-氰基苯基)氨甲酰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-羧酸
向中间物A64A(80mg,0.195mmol)于DMF(3mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.068mL,0.391mmol)。将生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(28.1mg,0.195mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后过滤，经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，真空干燥，得到中间物28B(50mg,58％)。MS(ES):m/z＝440.1[M+H]+.
化合物A64:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-N3-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A64B(25mg,0.045mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入甲胺HCl盐(6.10mg,0.090mmol)、许尼希碱(0.032mL,0.181mmol)和HATU(34.3mg,0.090mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h，其后过滤，经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，真空干燥，得到化合物A64(10mg,48.9％)。MS(ES):m/z＝451.4[M-H]+；HPLC保留时间1.55分钟和2.43分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.87-7.77(m,2H),7.77-7.59(m,6H),7.47(t,J＝9.0Hz,1H),4.88(s,2H),4.25(br.s.,2H),4.01(br.s.,2H),3.35(s,3H).
化合物A65:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-N3-环丙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A64，化合物A65通过使中间物A64B与环丙基胺反应来合成。化合物经制备型HPLC纯化。MS(ES):m/z＝477.4[M-H]+；HPLC保留时间1.64分钟和2.51分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.41(s,1H),8.02(d,J＝3.7Hz,1H),7.78(d,J＝7.3Hz,1H),7.75-7.59(m,5H),7.47(t,J＝9.0Hz,1H),4.84(s,2H),4.24(br.s.,2H),4.00(br.s.,2H),2.79(d,J＝3.3Hz,1H),0.68(d,J＝5.5Hz,2H),0.46(br.s.,2H).
方案54
中间物A66B:4-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯
在0℃，向4-氨基-3-羟基丁酸(17.8g,149mmol)于MeOH(150mL)和DMF(2mL)中的悬浮液中，经滴液漏斗逐滴加入SOCl2(23.99mL,329mmol)。反应混合物逐渐变成透明溶液。在室温搅拌30分钟，然后在60℃加热2小时。反应混合物冷却至室温并且浓缩。将残余物悬浮在二噁烷(150mL)中，加入饱和的碳酸氢钠水溶液(74.7mL,149mmol)。加入BOC-酸酐(41.6mL,179mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，其后用等份水和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱梯度洗脱30-70％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66B(25g,71.7％，两步)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm4.22-4.04(m,1H),3.74(s,3H),3.51(d,J＝7.5Hz,1H),3.20-3.08(m,1H),2.57-2.48(m,2H),1.52-1.40(m,9H).
中间物A66C:(2,4-二羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃，向中间物A66B(25g,107mmol)于乙醚(200mL)和MeOH(7.59mL,188mmol)中的溶液中，分批小心地加入LiBH4(3.50g,161mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，在60℃加热1小时。反应小心地用MeOH猝灭并且浓缩。残余物用等份的NH4Cl水溶液和EtOAc稀释。分离有机层，水层再用EtOAc萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，得到中间物A66C(19g,86％)，为灰白色固体。原样使用而没有进一步纯化。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 4.03-3.77(m,3H),3.30(ddd,J＝14.1,6.1,3.1Hz,1H),3.22-3.03(m,1H),1.78-1.65(m,2H),1.46(s,9H).
中间物A66D:(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-羟基丁基)氨基甲酸叔丁酯
向中间物A66C(10g,48.7mmol)和TEA(2.55mL,18.30mmol)于DCM(80mL)中的溶液中，加入TBS-Cl(8.08g,53.6mmol)和DMAP(0.060g,0.487mmol)，在室温搅拌4h。反应混合物用等份的水和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩.残余物经硅胶色谱纯化(240g柱，用以下洗脱梯度洗脱10-50％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66D(12g,77％).1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 3.99-3.72(m,3H),3.41-3.22(m,1H),3.22-3.03(m,1H),1.78-1.60(m,2H),1.46(s,9H),0.96-0.84(m,9H),0.19-0.06(m,6H).
中间物A66E:4-(3-氯-4-氟苯基)-2,4-二氧代丁酸乙酯
类似于中间物A1C，中间物A66E通过使1-(3-氯-4-氟苯基)乙酮与草酸二乙酯反应来合成。MS(ES):m/z＝273.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 8.10(dd,J＝6.9,2.1Hz,1H),7.93(ddd,J＝8.8,4.5,2.3Hz,1H),7.36-7.20(m,1H),7.13-6.95(m,1H),4.44(q,J＝7.3Hz,2H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H).
中间物A66F:3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
类似于中间物A1D，中间物A66F通过使中间物A66E与水合肼反应来合成。MS(ES):m/z＝269.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.91(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.70(ddd,J＝8.5,4.5,2.3Hz,1H),7.22(t,J＝8.7Hz,1H),7.11(s,1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H),1.44(t,J＝7.2Hz,3H).
中间物A66G:3-(3-氯-4-氟苯基)-1-(2,2,3,3,12,12-六甲基-10-氧代-4,11-二氧杂-9-氮杂-3-硅杂十三碳烷-7-基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
在0℃，向中间物A66F(10.7g,40mmol)于THF(100mL)中的溶液中加入中间物A66D(15.25g,48mmol)、TEA(5.6mL,40mmol)、三苯基膦(10.5g,40mmol)和DTBAD(9.17g,40mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，浓缩。残余物用等份的水和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次.合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩.粗产物经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱梯度洗脱10-40％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66G(16.5g,73％)。MS(ES):m/z＝592.3[M+Na]+.
中间物A66H:1-(1-氨基-4-羟基丁-2-基)-3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯双HCl盐
向中间物A66G(6.1g,10.70mmol)于DMC(120mL)中的溶液中，加入4M HCl溶液/二噁烷(10.70mL,42.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。过滤收集析出的中间物A66H。按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝356.1[M+H]+.
中间物A66I:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-羟基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A66H(4.20g,10.7mmol)于乙醇(80mL)中的悬浮液中该，加入30％氨水溶液(80mL,3697mmol)。在室温搅拌2h，并且浓缩。过滤收集固体，用水洗涤，干燥。粗中间物A66I按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝310.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.27(br.s.,1H),8.07(dd,J＝7.3,2.3Hz,1H),7.89(ddd,J＝8.7,4.8,2.1Hz,1H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.34(s,1H),4.74(t,J＝5.0Hz,1H),4.67-4.47(m,1H),3.79(ddd,J＝13.3,4.4,2.4Hz,1H),3.66-3.55(m,2H),3.50(ddd,J＝13.4,5.6,3.4Hz,1H),2.17(dd,J＝13.8,6.0Hz,1H),2.03-1.81(m,1H).
中间物A66J:7-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A66I于DCM(300mL)和DMF(15mL)中的悬浮液中，加入TEA(10.80mL,77mmol)、TBS-Cl(9.34g,62.0mmol)和DMAP(0.316g,2.58mmol)。将悬浮液搅拌过夜。反应混合物用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩.粗产物经硅胶色谱纯化(330g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％EtOAc/DMC)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66J(17.8g,81％)。MS(ES):m/z＝446.2[M+Na]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.91(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),7.66(ddd,J＝8.6,4.6,2.1Hz,1H),7.27-7.10(m,2H),6.25(br.s.,1H),4.78-4.51(m,1H),4.02-3.79(m,3H),3.72(ddd,J＝13.1,5.5,3.5Hz,1H),2.47-2.23(m,1H),2.23-1.96(m,1H),1.00-0.88(m,9H),0.18-0.05(m,6H).
中间物A66K:7-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-4-氧代-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A66J(13.64g,32.2mmol)于甲苯(120mL)中的悬浮液中，加入DMAP(5.90g,48.3mmol)和BOC-酸酐(8.96mL,38.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌1H，5分钟后变成透明溶液。反应混合物浓缩，残余物经硅胶色谱纯化(240g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％EtOAc/DCM)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66K(17.8g,81％)。MS(ES):m/z＝524.4[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.90(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.66(ddd,J＝8.5,4.6,2.1Hz,1H),7.29(s,1H),7.25-7.03(m,2H),4.84-4.63(m,1H),4.38-4.18(m,2H),4.05-3.79(m,2H),2.51-2.24(m,1H),2.03(dtd,J＝14.4,7.2,2.3Hz,1H),1.61(s,9H),0.95(s,9H),0.14(s,3H),0.12(s,3H).
中间物A66L:7-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在室温向中间物A66K(1.5g,2.86mmol)于THF(15mL)中的溶液中，逐滴加入2MBH3.Me2S于THF(4.29mL,8.59mmol)中的溶液。将反应混合物加热回流4h，冷却至0℃。用MeOH小心地猝灭。反应混合物浓缩，残余物用等份的饱和NH4Cl水溶液和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，得到中间物A66L(1.2g,82％)，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝510.3[M+H]+.
中间物A66M:7-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-3-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A66L(3.53g,6.92mmol)于DMC(25mL)和MeOH(10mL)中的溶液中，加入NIS(1.868g,8.30mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，并且浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-25％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A66M(3g,76％)。MS(ES):m/z＝636.2[M+H]+.
中间物A66N:7-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-3-氰基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A66M(3g,4.72mmol)于DMF(12mL)中的溶液中，加入氰化亚铜(I)(1.056g,11.79mmol)。反应混合物用氮气吹洗2分钟，在120℃加热过夜，冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，经垫过滤。滤饼用EtOAc洗涤，滤液浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-35％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物66N(1.2g,48％)。MS(ES):m/z＝557.2[M+Na]+.
中间物A66O:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-羟基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A66N(1.2g,2.242mmol)于乙醇(10mL)和THF(10mL)中的溶液中，加入5M氢氧化钾水溶液(2.242mL,11.21mmol)和H2O2(4.58mL,44.8mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，浓缩。残余物用等份的水和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗中间物A66O(820mg,83％)，为灰白色固体，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝439.1[M+H]+.
中间物A66P:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-羟基乙基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA盐
向中间物A66O(95mg,0.216mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌6小时，然后浓缩，得到中间物A66P的TFA盐，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝339.1[M+H]+.
化合物A66和A67:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(2-羟基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A66P(35mg,0.093mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.033mL,0.187mmol)。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(22.34mg,0.155mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，其后过滤并且经制备型HPLC纯化，得到化合物A66和A67的外消旋混合物。对外消旋混合物进行手性分离(使用制备型SFC)，得到对映异构体A66(保留时间11.42min,11.9mg,23.9％)和对映异构体A67(保留时间13.16min,12.8mg,25.7％)。手性HPLC方法:IA制备型柱30x 250mm,5μm；流动相:30％MeOH/CO2,130巴；流速:70mL/min，16min.；MS(ES):m/z＝481.5[M-H]+；HPLC保留时间1.32分钟和MS(ES):m/z＝483.5[M+H]+保留时间2.22分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.85(d,J＝6.6Hz,1H),7.79-7.57(m,5H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),5.04(m,1H),4.80(d,J＝17.2Hz,1H),4.48(d,J＝3.7Hz,1H),4.21-4.05(m,1H),3.90(d,J＝10.3Hz,1H),3.69(d,J＝4.8Hz,2H),2.15-2.19(m,1H),1.91-1.78(m,1H).
方案55
中间物A68A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在0℃，在氮气气氛中向中间物A68O(500mg,1.139mmol)于DCM(12mL)中的溶液中，加入TEA(0.206mL,1.481mmol)和MsCl(0.107mL,1.367mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩，粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A68A(380mg,65％)。MS(ES):m/z＝517.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.68(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.49(ddd,J＝8.5,4.5,2.3Hz,1H),7.32-7.19(m,1H),5.19(d,J＝16.8Hz,1H),4.73(d,J＝18.8Hz,1H),4.52(t,J＝6.0Hz,3H),4.31-4.16(m,1H),3.76-3.59(m,1H),3.09(s,3H),2.50-2.32(m,1H),2.32-2.14(m,1H),1.56-1.47(m,9H).
中间物A68B:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-乙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在0℃在氮气气氛中向中间物A68A(200mg,0.387mmol)于THF(6mL)中的溶液中，加入1M的的THF溶液(1.934mL,1.934mmol)。反应混合物在室温搅拌1h，然后用水猝灭。所生成的混合物用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A68B(128mg,78％)。MS(ES):m/z＝423.1[M+H]+.
中间物A68C:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-乙基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA盐
向中间物A68B(160mg,0.378mmol)于DCM(20mL)中的溶液中，加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌6小时，然后浓缩，得到中间物68C的TFA盐，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝323.1[M+H]+.
化合物A68和A69:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-乙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A68C(40mg,0.092mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.064mL,0.366mmol)。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(13.20mg,0.092mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，其后过滤，经制备型HPLC纯化，得到化合物A68和A69的外消旋混合物。对外消旋混合物进行手性分离(使用制备型SFC)，得到对映异构体A68(保留时间18.9min,9.7mg,22.7％)和对映异构体A69(保留时间23.9min,10.1mg,23.6％).手性HPLC方法:柱:OD 21x 250mm,10μm；流动相A:0.1％二乙胺/庚烷；流动相B:乙醇；梯度:保持在20％-100％B，历时38分钟；流速:15mL/min；MS(ES):m/z＝465.5[M-H]+；HPLC保留时间1.69分钟和MS(ES):m/z＝467.5[M+H]+保留时间2.58分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85(d,J＝7.0Hz,1H),7.79-7.58(m,5H),7.47(t,J＝9.2Hz,1H),7.39(br.s.,1H),7.25(br.s.,1H),5.01(d,J＝16.9Hz,1H),4.88(d,J＝16.9Hz,1H),4.28(br.s.,1H),4.04(dd,J＝13.8,5.0Hz,1H),3.97-3.85(m,1H),3.43-3.29(m,2H),2.12-1.96(m,1H),1.80-1.67(m,1H).
中间物A70A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-甲氧基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A68A(170mg,0.329mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中，加入25％的甲醇钠于甲醇中的溶液(426mg,1.973mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜并且浓缩。残余物用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩.粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A70A(120mg81％)。MS(ES):m/z＝453.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.77-7.64(m,1H),7.55-7.44(m,1H),7.34-7.16(m,1H),5.44-5.27(m,1H),4.79(d,J＝17.8Hz,1H),4.56-4.39(m,1H),4.14-4.04(m,1H),3.74(dd,J＝13.8,3.8Hz,1H),3.62(t,J＝6.1Hz,2H),3.39(s,3H),2.45-2.25(m,1H),1.98(ddt,J＝14.3,8.5,5.8Hz,1H),1.59-1.48(m,9H).
中间物A70B:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-甲氧基乙基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA盐
向中间物A70A(120mg,0.265mmol)于DCM(15mL)中的溶液中，加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌6h，然后浓缩，得到中间物A70B的TFA盐，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝353.0[M+H]+.
化合物A70和A71:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(2-甲氧基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A70B(35mg，0.075mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.026mL,0.150mmol)。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(16.21mg,0.112mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，其后过滤，经制备型HPLC纯化，得到化合物A70和A71的外消旋混合物。对外消旋混合物进行手性分离(使用制备型SFC)，得到对映异构体A70(保留时间35.0min,7.2mg,19.3％)和对映异构体A71(保留时间39.5min,7.5mg,20.1％).手性HPLC方法:柱:IC-H 30x 250mm,5μm；流动相:20％MeOH/CO2,150巴；流速:70mL/min，42min.；MS(ES):m/z＝495.5[M-H]+；HPLC保留时间1.60分钟和MS(ES):m/z＝497.5[M+H]+保留时间2.48分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6))δ ppm 7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.86-7.66(m,5H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),5.02(d,J＝17.2Hz,1H),4.85(d,J＝16.9Hz,1H),4.44(d,J＝3.7Hz,1H),4.06(dd,J＝14.1,4.6Hz,1H),3.91(d,J＝11.0Hz,1H),3.56(t,J＝5.9Hz,2H),3.28(s,3H),2.23(dd,J＝13.8,5.7Hz,1H),2.00-1.82(m,1H).
方案56
中间物A72A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-(对甲苯磺酰基)乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A66O(0.76g,1.732mmol)于DCM(30mL)中的溶液中，加入TEA(0.483mL,3.46mmol)、TsCl(0.220mL,2.078mmol)和DMAP(10.58mg,0.087mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜并且浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A72A(0.76g,76％)。MS(ES):m/z＝593.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.85-7.78(m,2H),7.64(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.46(ddd,J＝8.5,4.5,2.3Hz,1H),7.39-7.18(m,3H),5.12(br.s.,1H),4.73(d,J＝18.6Hz,1H),4.43(br.s.,1H),4.32(t,J＝6.3Hz,2H),4.06(dd,J＝14.1,3.5Hz,1H),3.67(d,J＝12.0Hz,1H),2.45(s,3H),2.41-2.29(m,1H),2.19-2.08(m,1H),1.59-1.44(m,9H).
中间物A72B:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-氟乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在0℃，在氮气气氛中，向中间物A72A(260mg,0.438mmol)于THF(15mL)中的溶液中，加入1M的四丁基氟化铵的THF溶液(0.526mL,0.526mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜并且浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A72B(140mg,72％)。MS(ES):m/z＝441.1[M+H]+.
中间物A72C:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-氟乙基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺TFA盐
向中间物A72B(140mg,0.318mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌6h，然后浓缩，得到中间物A72C的TFA盐，其按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝341.1[M+H]+.
化合物A72和A73:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(2-氟乙基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-3，5(4H)-二甲酰胺
向中间物A72C(40mg,0.088mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.030mL,0.173mmol)。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(19.02mg,0.132mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，其后过滤，经制备型HPLC纯化，得到化合物A72和A73的外消旋混合物。对外消旋混合物进行手性分离(使用制备型SFC)，得到对映异构体A72(保留时间14.6min,12.3mg,28.8％)和对映异构体A73(保留时间18.4min,11.1mg,26％).手性HPLC方法:柱:IC-H,30x 250mm,5μm；流动相:30％MeOH/CO2,150巴；流速:70mL/min，22min.；MS(ES):m/z＝483.5[M-H]+；HPLC保留时间1.61分钟和MS(ES):m/z＝485.5[M+H]+保留时间2.46分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.79-7.58(m,5H),7.48(t,J＝9.0Hz,1H),7.41(br.s.,1H),7.26(br.s.,1H),5.00(d,J＝17.2Hz,1H),4.91(d,J＝17.2Hz,1H),4.78(dd,J＝12.5,5.9Hz,1H),4.67(dd,J＝12.5,5.5Hz,1H),4.52(br.s.,1H),4.07-3.93(m,2H),2.45-2.28(m,1H),2.14(d,J＝6.6Hz,1H).
中间物A74A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-氰基乙基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A72A(180mg,0.304mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中，加入四丁基碘化铵(11.21mg,0.030mmol)和氰化钠(74.4mg,1.518mmol)。反应混合物在85℃加热16h，然后冷却至RT。用等份的水和DCM稀释。分离有机层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液浓缩.粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱35-80％EtOAc/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A74A(80mg,59％).MS(ES):m/z＝448.1[M+H]+.
中间物A74B:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-氰基乙基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA盐
向中间物A74A(80mg,0.179mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(1mL,12.98mmol)。将反应混合物在室温搅拌6h，然后浓缩，得到中间物A74B的TFA盐，将其原样使用，而没有进一步纯化MS(ES):m/z＝348.1[M+H]+.
化合物A74和A75:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(2-氰基乙基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A74B(40mg,0.087mmol)于DMF(1mL)中的溶液中，加入许尼希碱(0.030mL,0.173mmol)。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(18.73mg,0.130mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，其后过滤，经制备型HPLC纯化，得到化合物A74和A75的外消旋混合物。对外消旋混合物进行手性分离(使用制备型SFC)，得到对映异构体A74(保留时间48.0min,5mg,11.7％)和对映异构体A75(保留时间50.9min,5.5mg,12.9％).手性HPLC方法:柱:IC-H,30x 250mm,5μm；流动相:20％MeOH/CO2,150巴；流速:70mL/min，60min.；MS(ES):m/z＝490.5[M-H]+；HPLC保留时间1.47分钟和MS(ES):m/z＝492.5[M+H]+保留时间2.27分钟。(HPLC方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.87(d,J＝7.3Hz,1H),7.80-7.58(m,5H),7.48(t,J＝9.2Hz,1H),7.42(br.s.,1H),7.24(br.s.,1H),5.03(d,J＝17.2Hz,1H),4.87(d,J＝17.2Hz,1H),4.44(br.s.,1H),4.07(dd,J＝13.4,4.6Hz,1H),3.91(d,J＝11.4Hz,1H),2.79(br.s.,2H),2.22(dd,J＝13.8,7.2Hz,1H),2.11(dd,J＝13.8,6.8Hz,1H).
方案57
中间物A76A:3-(3-氟苯基)-1-(2,2,3,3,11,11-六甲基-9-氧代-4,10-二氧杂-8-氮杂-3-硅杂十二碳烷-6-基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向隔膜密封的和用干燥氮气气氛吹洗的、填装有三苯基膦(2.93g,11.16mmol)的烧瓶中，经注射器加入THF(20mL)，反应混合物冷却至0℃。接着，经注射器加入DIAD(2.170mL,11.16mmol),生成了粘稠牛奶状的黄色溶液。将中间物A1B(3.28g,10.73mmol)于THF(5.0mL)中的溶液加至该冰冷却的溶液中。15分钟后，加入吡唑4B(2.01g,8.58mmol)，以THF溶液的形式(5.0mL)。然后将溶液温热至室温。18小时后，反应混合物用乙酸乙酯稀释(150mL)。有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到粗油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(220g柱，用以下洗脱剂洗脱0-15％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76A(4.5g,80％)，为粘稠的糖浆。MS(ES):m/z＝522.09[M+H]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.49-7.60(2H,m),7.32-7.41(1H,m),7.12(1H,s),6.99-7.07(1H,m),5.52-5.64(1H,m),4.92-5.07(1H,m),4.37(2H,q,J＝7.28Hz),3.97(2H,d,J＝6.53Hz),3.67-3.83(2H,m),1.37-1.50(9H,m),0.75-0.86(9H,m),0.04-0.11(2H,m),-0.12-0.00(6H,m).
中间物A76B:1-(1-氨基-3-羟基丙-2-基)-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向中间物A76A(4.35g,8.34mmol)于DCM(50mL)中的冰冷却的溶液中，加入HCl的1,4-二噁烷溶液(12.5mL,50.0mmol)。反应混合物在室温搅拌2h。过滤出生成的白色沉淀，滤饼用乙醚洗涤。固体真空干燥16h，得到中间物A76B，为HCl盐(2.56g,>98％)。MS(ES):m/z＝308.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.04(1H,br.s.),7.72-7.80(1H,m),7.44-7.54(1H,m),7.13-7.23(1H,m),5.46-5.58(1H,m),5.24(1H,br.s.),4.35(2H,q,J＝7.11Hz),3.58-3.80(3H,m),3.40(1H,d,J＝11.29Hz),1.31-1.40(2H,m).
中间物A76C:2-(3-氟苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A76B(2.56g,8.34mmol)于EtOH(50mL)中的悬浮液中，加入NH4OH(32.5mL,334mmol,40wt％)。片刻之后，反应混合物变成均质，将溶液在室温搅拌16h。粗反应混合物真空浓缩，用EtOAc稀释。水溶液用1.0MHCl水溶液中和至pH＝7。分离有机层，水层用EtOAc萃取。合并的有机层然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到中间物A76C(2.1g,96％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝261.97[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.49-7.61(2H,m),7.36-7.45(1H,m),7.16-7.21(1H,s),7.06(1H,tdd,J＝8.41,8.41,2.51,1.00Hz),6.28(1H,br.s.),4.56-4.67(1H,m),4.07-4.23(2H,m),3.72-3.85(2H,m),3.14-3.37(1H,m).
中间物A76D:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A76C(11.5g,44.1mmol)于DMF(120mL)中的溶液中，加入咪唑(3.66g,53.8mmol)和TBSCl(7.64g,50.7mmol)。将反应混合物在室温搅拌14h。溶液浓缩，粗物质用等份的水和DCM(各250mL)稀释。分离有机层，用水多洗几次，然后经硫酸钠干燥和浓缩，得到中间物A76D(13.57g,82％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝375.95[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.52-7.63(1H,m),7.35-7.46(1H,m),7.13-7.20(1H,m),6.99-7.11(1H,m),6.01-6.25(1H,m),4.48-4.62(1H,m),4.10(1H,dd,J＝10.04,4.27Hz),3.84-4.03(3H,m),0.90-0.93(9H,m),0.07-0.12(6H,m).
中间物A76E:(2-(3-氟苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-7-基)甲醇
向中间物A76D(5.162g,13.75mmol)于THF(125mL)中的冷却至-15℃的溶液中，逐滴加入1M的LAH于THF中的溶液(38.5mL,38.5mmol)。反应混合物逐渐达到室温，再搅拌18小时。反应混合物小心地在-15℃，连续添加H2O(38.5mL),NaOH(15％水溶液,38.5mL)和H2O(114mL)猝灭。浆液然后在室温搅拌30分钟，接着加入无水MgSO4。混合物搅拌15分钟，然后过滤出无机物质。滤饼用DCM(150mL)洗涤。两相滤液减压浓缩，除去THF。水层然后用DCM萃取(3x50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到中间物A76E(3.41g,>98％)，为白色粘稠固体。MS(ES):m/z＝247.94[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.55(1H,dt,J＝7.84,1.10Hz),7.48(1H,ddd,J＝10.16,2.51,1.63Hz),7.31-7.40(1H,m),6.96-7.04(1H,m),6.32(1H,s),4.26-4.35(1H,m),4.07-4.15(2H,m),4.01-4.07(1H,m),3.91-3.98(1H,m),3.41(1H,dd,J＝13.30,4.77Hz),3.12(1H,dd,J＝13.18,7.15Hz).
中间物A76F:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氟苯基)-4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡嗪
向填充有中间物A76E(3.41g,13.79mmol)的烧瓶中，加入DMAP(0.084g,0.690mmol)和三乙胺(2.307mL,16.55mmol)。将反应混合物溶于DCM(125mL)中，最后加入TBSCl(2.286g,15.17mmol)。然后将反应混合物在22℃搅拌16h，其后混合物用饱和的NaHCO3水溶液稀释，分离两层。水相用DCM萃取(2x 50mL).合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，得到浅黄色油状物。粗中间物A76F(5.12g,92％)经检测是90％纯的，用Boc酸酐进行胺保护，而没有进一步纯化。MS(ES):m/z＝361.94[M+H]+.
中间物A76G:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A76F(4.33g,11.98mmol)于DCM(100mL)中的溶液中，加入三乙胺(6.68mL,47.9mmol)和DMAP(0.073g,0.599mmol)。然后向无色溶液中，加入一缩二碳酸二叔丁酯(3.92g,17.97mmol)，然后气体逸出。反应混合物在22℃搅拌24h，然后用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离各层，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层先后用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱剂洗脱20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76G(4.87g,88％)，为无色油状物。MS(ES):m/z＝461.77[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.45-7.58(1H,m),7.35(1H,td,J＝8.03,6.02Hz),6.95-7.05(1H,m),6.29-6.39(1H,m),4.55-4.79(2H,m),4.33(1H,br.s.),4.06-4.22(2H,m),3.74-4.03(2H,m),1.49-1.54(9H,m),0.83-0.95(9H,m),-0.01-0.14(6H,m).
中间物A76H:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氟苯基)-3-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A76G(4.87g,10.6mmol)于DCM(56mL)和MeOH(14mL)中的溶液中，加入NIS(7.12g,31.6mmol)和反应混合物在室温搅拌90分钟。然后溶液减压浓缩，生成红色油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76H(5.70g,92％)，为粘稠固体。MS(ES):m/z＝587.95[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.65(1H,dq,J＝7.78,0.84Hz),7.54-7.60(1H,m),7.36-7.44(1H,m),7.08(1H,tdd,J＝8.44,8.44,2.57,0.88Hz),4.50-4.71(1H,m),4.41-4.49(1H,m),4.02-4.40(3H,m),3.83-3.99(1H,m),3.75-3.82(1H,m),1.53(8H,s),0.84-0.93(10H,m),-0.01-0.15(6H,m).
中间物A76I:7-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-2-(3-氟苯基)-3-氰基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向配备有回流冷凝器和填充有中间物A76H(3.84g,6.54mmol)的烧瓶中，加入DMF(43.6mL)和氰化亚铜(I)(1.463g,16.34mmol)。将均质的反应混合物加热至100℃，18h。将反应混合物冷却至室温，溶液经垫过滤。滤饼用EtOAc洗涤。滤液减压浓缩，得到粗反应混合物，为墨绿色油状物。产物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱5-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76I(1.441g,45％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝431.0[M+H2O-OtBu]+；1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm7.62-7.83(2H,m),7.39-7.51(1H,m),7.08-7.19(1H,m),4.67-4.96(2H,m),4.34(1H,br.s.),3.84-4.19(4H,m),1.47-1.54(9H,m),0.79-0.91(9H,m),-0.02-0.10(6H,m).
中间物A76J:3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-7-(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A76I(1.44g,2.96mmol)于DMSO(20mL)中的冰冷却的溶液中，加入5M KOH(2.96mL,14.8mmol)的水溶液和H2O2(6.05mL,59.2mmol,30％w/v的H2O溶液)，将反应混合物在22℃搅拌3h。然后将反应混合物分配在等份的水和EtOAc之间，分离各层。水相用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用水、盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到白色固体。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱75-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76J(0.997g,52％)，为白色固体，被二甲砜污染。MS(ES):m/z＝412.96[M+Na]+.
中间物A76K:3-氨甲酰基-7-(氟甲基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
将中间物A76J(131.5mg,0.337mmol)于DCM(5.5mL)中的悬浮液冷却至-78℃。将DAST(0.067mL,0.505mmol)滴加至该溶液中，然后温热至室温。在室温搅拌1小时后，在0℃添加饱和的NaHCO3水溶液猝灭反应。分离两层，水层用DCM(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到橙色油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱剂洗脱75％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A76K(52.8mg,40％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝393.0[M+H]+.
化合物A76和A77:N5-(4-氰基苯基)-7-(氟甲基)-2-(3-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A76K(0.053g,0.135mmol)于DCM(3.0mL)中的溶液中，加入三氟乙酸(0.103mL,1.346mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌3h，接着除去挥发性物质，得到粗制的双TFA盐.
然后将TFA盐溶于DMF(1.3mL)中，用DIPEA(0.117mL,0.673mmol)处理。将所生成的混合物搅拌5分钟，然后加入4-异氰酸酯基苯甲腈(0.039g,0.269mmol)。将溶液搅拌2小时，其后过滤，经制备型HPLC分离。合并含有期望产物的馏分，蒸发得到期望的化合物，经手性分离进一步纯化(使用制备型SFC):IA-H,30x 250mm,5μm，用20％MeOH:80％CO2洗脱，150巴，35℃，70mL/min。第一洗脱的对映异构体，rt＝23min:化合物(S)-A76(0.0166g,28％)，第二洗脱的对映异构体，rt＝35min:化合物(R)-A77(0.0207g,34％)由此分离。MS(ES),m/z＝437.4[M+H]+；HPLC保留时间1.44分钟和2.18分钟。(分别为方法H和I).1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.62-7.74(4H,m),7.35-7.57(4H,m),7.17-7.33(2H,m),4.77-5.11(4H,m),4.59-4.72(1H,m),4.18(1H,d,J＝13.94Hz),4.04(1H,dd,J＝14.12,6.42Hz).
方案58
中间物A78A:3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-7-(((甲磺酰基)氧基)甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A76J(148.2mg,0.380mmol)于DCM(3.8mL)中的冰冷却的悬浮中，加入三乙胺(0.063mL,0.456mmol)，接着滴加甲磺酰氯(0.032mL,0.418mmol)。将生成的均质反应混合物温热至RT，继续搅拌2小时。然后反应用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离两层，水层用DCM萃取(2x10mL)。合并的有机层，用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，滤液减压浓缩，得到无色油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱60-85％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A78A(0.0948g,33％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝468.9[M+H]+.
中间物A78B:3-氨甲酰基-2-(3-氟苯基)-7-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在室温，向中间物A78A(0.0948g,0.202mmol)于THF(2.0mL)中的溶液中，逐滴加入1M的LiEt3BH于THF中的溶液(2.02mL,2.02mmol)，将反应混合物搅拌2小时。然后反应小心地用饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离有机相，水层用DCM再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到浅黄色油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-90％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A78B(0.029g,81％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝375.08[M+H]+.
化合物A78和A79:N5-(4-氰基苯基)-2-(3-氟苯基)-7-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A76和A77，化合物A78和A79通过使脱保护的A78B与4-异氰酸酯基苯甲腈反应来合成。化合物经制备型HPLC纯化，进一步经手性分离来纯化，使用制备型HPLC:OJ,21x 250mm,10μm用65％0.1％二乙胺/庚烷:35％EtOH洗脱，15mL/min。第一洗脱的对映异构体rt＝12.3min:化合物(S)-A78(0.009g,32％)和第二洗脱的对映异构体rt＝22.2min:化合物(R)-A79(0.009g,32％)由此分离。MS(ES):m/z＝419.1[M+H]+；HPLC保留时间1.40分钟和2.26分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm7.66-7.75(4H,m),7.34-7.55(4H,m),7.16-7.25(2H,m),4.82-5.02(2H,m),4.40-4.49(1H,m),4.09-4.17(1H,m),3.67-3.74(1H,m),1.49(3H,d,J＝6.60Hz).
方案59
中间物A80A:1-氨基-3，3-二甲基丁-2-醇
在密封压力管中，在室温加入2-(叔丁基)环氧乙烷(1.0g,9.98mmol)和氨甲醇溶液(7N)(4.28mL,30.0mmol)。将反应容器密封，然后在70℃加热4小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩。粗中间物A80A(0.968,83％产率)按原样使用而没有进一步纯化.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 3.15-2.88(m,1H),2.66-2.46(m,1H),2.42-2.21(m,1H),0.88-0.73(m,9H).
中间物A80B:(2-羟基-3,3-二甲基丁基)氨基甲酸叔丁酯
向中间物A80A(0.812g,6.93mmol)于DCM(20mL)中的溶液中，加入TEA(2.414mL,17.32mmol)、DMAP(0.042g,0.346mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(2.268g,10.39mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释(500mL)和用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A80B(1.2g,80％产率).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 4.07-3.93(m,1H),3.92-3.80(m,1H),3.62(dd,J＝10.3,7.8Hz,1H),1.46(s,9H),0.87(s,9H).
方案60
中间物A80C:7-(叔丁基)-3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
使用类似于制备中间物A1N(方案41所概述)的合成策略，制备中间物A80C。在初始的Mitsunobu偶合反应中，以中间物A80B代替中间物A1B。MS(ES)m/z＝451[M+H]+.
化合物A80和A81:7-(叔丁基)-2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
向中间物A80C(0.305g,0.676mmol)于DCM(20mL)中的溶液中，加入TFA(0.313mL,4.06mmol)，所生成的溶液在室温搅拌18h。然后将反应减压浓缩，得到粗制的双TFA盐中间物A80D(0.314g,>98％产率)，其用于随后反应而没有纯化。在室温和氮气气氛中，向中间物A80D(0.05g,0.143mmol)于DMF(2mL)中的溶液中，加入DIPEA(0.124mL,0.713mmol)和2,4-异氰酸酯基苯甲腈(0.041g,0.285mmol)。将反应混合物搅拌1小时。反应混合物过滤，并且浓缩。残余物经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，经离心蒸发干燥，得到外消旋产物。化合物经手性分离进一步纯化，使用制备型HPLC:AS,21x 250mm,10μm柱，用80％庚烷+0.1％二乙胺洗脱:20％EtOH，15mL/min，检测UV 254nm。第一洗脱的对映异构体rt＝10.9min:(S)-A80，第二洗脱的对映异构体rt＝17.1min:(R)-A81由此分离。MS(ES)m/z＝495[M+H]+；保留时间＝1.98和2.86分钟。(分别为方法H和I).1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.81-7.88(1H,m),7.61-7.77(6H,m),7.47(1H,t,J＝8.99Hz),7.20-7.45(2H,m),5.07-5.18(1H,m),4.71-4.84(1H,m),4.53-4.64(1H,m),4.17(1H,br.s.),0.94-1.07(9H,m).
方案61
中间物A82A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-异丙基-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
类似于使用制备中间物A80C的合成策略，制备中间物A82A。由2-(异丙基)环氧乙烷开始制备类似于中间物A80B的氨基醇，其代替中间物A1B，用于初始的Mitsunobu偶合反应中。MS(ES)m/z＝437[M+H]+.
化合物A82和A83:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-异丙基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
类似于化合物A80和A81，使用中间物A82B，制备化合物A82和A83，经制备型HPLC获得外消旋化合物，其进一步经手性分离纯化，使用制备型HPLC:AD,21x250mm,10μm柱，用80％庚烷+0.1％二乙胺:20％EtOH洗脱，15mL/min，第一洗脱的对映异构体rt＝18.4min:(S)-A82，第二洗脱的对映异构体rt＝25.1min:(R)-A83由此分离。MS(ES)m/z＝481[M+H]+；保留时间＝1.74和2.82分钟。(分别为方法H和I).1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.78-7.90(1H,m),7.61-7.76(5H,m),7.47(1H,t,J＝8.99Hz),7.14-7.43(2H,m),4.82-5.03(2H,m),4.16-4.24(1H,m),4.12(1H,dd,J＝14.12,4.95Hz),3.72-3.84(1H,m),2.40(1H,dq,J＝13.11,6.51Hz),1.01(3H,d,J＝6.97Hz),0.80-0.92(3H,m).
方案62
中间物A84A:1,1,1-三氟-3-((4-甲氧基苄基)氨基)丙-2-醇
向于压力管中的2-(三氟甲基)环氧乙烷(2.00g,17.8mmol)于异丙醇(20mL)中的溶液中，加入(4-甲氧基苯基)甲胺(7.35g,53.5mmol)。将反应容器加盖，在80℃加热3小时。反应混合物浓缩，经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-60％乙酸乙酯/己烷)。所需要的馏分浓缩，得到中间物A84A(3.1g,71％产率)，为白色固体。MS(ES)m/z＝287[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29-7.17(m,2H),6.87(d,J＝8.5Hz,2H),6.25(br.s.,1H),4.04(td,J＝7.8,3.3Hz,1H),3.72(s,3H),3.66(d,J＝1.8Hz,2H),2.74-2.55(m,2H),2.08(br.s.,1H).
中间物A84B:3-(3-氯-4-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸
在室温，向中间物A66F(5.0g,18.6mmol)于EtOH(10mL)和THF(20mL)中的溶液中，加入LiOH(5.35g,223mmol)于水(6.67mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物浓缩，将所生成的残余物溶于水(200mL)中，用乙醚萃取。分离有机层，水层用浓盐酸水溶液酸化至pH为2。水层用EtOAc(3x 200mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，经浓缩，得到中间物A84B(3.02g,67.4％产率)。产物按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES)m/z＝241[M+H]+.
中间物A84C:3-(3-氯-4-氟苯基)-N-(4-甲氧基苄基)-N-(3,3,3-三氟-2-羟基丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
向中间物A84B(0.8g,3.32mmol)于1,4-二噁烷中的加热至50℃溶液中，加入CDI(0.593g,3.66mmol)。将反应混合物加热30分钟，加入中间物A84A(0.911g,3.66mmol)。将反应混合物在50℃再搅拌30分钟。反应混合物用水洗涤，冷却至室温，用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并且浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84C(1.015g,64.7％产率)。MS(ES)m/z＝472[M+H]+.
中间物A84D:2-(3-氯-4-氟苯基)-5-(4-甲氧基苄基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向三苯基膦(0.733g,2.80mmol)于THF(30mL)中的冰冷却的搅拌溶液中，加入DIAD(0.544mL,2.80mmol)，生成粘稠牛奶状的黄色溶液。10分钟后，加入中间物A84C(1.015g,2.151mmol)于THF(5.0mL)的溶液。将反应温热至RT，搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释(200mL)和用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。粗制的黄色油状物经色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84D(0.614g,62.8％产率)。MS(ES)m/z＝454[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.88(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H),7.66(ddd,J＝8.6,4.6,2.1Hz,1H),7.31-7.14(m,4H),6.94-6.85(m,2H),5.01-4.89(m,1H),4.72(s,2H),4.06-3.96(m,1H),3.85-3.74(m,4H).
中间物A84E:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-4(5H)-酮
向中间物A84D(0.405g,0.892mmol)于乙腈(5mL)和水(0.556mL)中的室温溶液中，加入ACN(1.957g,3.57mmol)。反应混合物在室温搅拌24h。反应混合物浓缩，将残余物溶于甲醇中，经反相制备型HPLC纯化，使用30x100mm柱，用30-100％B洗脱20分钟。(溶剂A:90％水,10％甲醇,0.1％TFA:溶剂B:10％水,90％甲醇,0.1％TFA)。合并所需要的馏分，浓缩得到中间物A84E(0.1g,34％产率)。MS(ES)m/z＝334[M+H]+.
中间物A84F:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪
在0℃在氮气气氛中，向中间物A84E(0.1g,0.300mmol)于无水THF(10mL)中的溶液中，加入LAH(0.180mL,0.360mmol,2M于THF)的溶液。反应混合物温热至室温，并且搅拌4h。反应混合物冷却至0℃，再加入等当量的LAH，将溶液温热至RT并且搅拌5h。将反应混合物冷却至0℃，缓慢添加饱和的Rochelle's盐水溶液来猝灭。然后溶液用EtOAc(3x)萃取，和合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。将粗残余物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-80％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84F(0.06g,63％产率，被15％脱-氯副产物污染)。MS(ES)m/z＝320[M+H]+.
中间物A84G:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A84F(0.06g,0.188mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TEA(0.065mL,0.469mmol)、DMAP(1.146mg,9.38μmol)和Boc2O(0.061g,0.282mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释(300mL)和用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化，使用24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84G(0.055g,70％产率)。MS(ES)m/z＝420[M+H]+.
中间物A84H:2-(3-氯-4-氟苯基)-3-碘-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A84G(0.055g,0.131mmol)于CH2Cl2(10mL)和MeOH(2.5mL)的4:1混合物中的溶液中，加入NIS(0.088g,0.393mmol)。将反应混合物在室温搅拌。90min后，再加入等当量的NIS，所生成的溶液在室温搅拌过夜。反应混合物真空浓缩，得到粗产物，为红色油状物。产物经硅胶色谱纯化，使用(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84H(0.059g,83％产率).MS(ES)m/z＝546[M+H]+.
中间物A84I:2-(3-氯-4-氟苯基)-3-氰基-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A84H(0.115g,0.245mmol)于DMF(20mL)中的溶液中，加入CuCN(0.055g,0.613mmol)。将反应混合物在密封管中在120℃加热16h。反应混合物经垫过滤，滤饼用EtOAc洗涤，滤液减压浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A84I(0.075g,83％产率)。MS(ES)m/z＝369[M+H]+.
中间物A84J:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在室温，向中间物A84I(0.061g,0.137mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中，加入5M的KOH水溶液(0.137mL,0.686mmol)。反应混合物冷却至0℃，逐滴加入过氧化氢(0.280mL,2.74mmol,30％w/v于H2O中)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜。反应混合物浓缩，将所生成的残余物用EtOAc稀释。溶液用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，浓缩。粗产物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-20％MeOH/DCM)。浓缩所需要的馏分，得到中间物A84J(0.046g,72％产率)，为白色固体。MS(ES)m/z＝463[M+H]+.
中间物A84K:2-(3-氯-4-氟苯基)-7-(三氟甲基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-甲酰胺,TFA
向中间物A84J(0.141g,0.305mmol)于DCM(10mL)中的溶液中，加入TFA(0.141mL,1.828mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应混合物浓缩，得到粗中间物A84K(0.145g,0.304mmol,100％产率)。假定产率为定量的，产物按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES)m/z＝363[M+H]+.
化合物A84和A85:2-(3-氯-4-氟苯基)-N5-(4-氰基苯基)-7-(三氟甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3,5(4H)-二甲酰胺
在室温和氮气气氛中，向中间物A84K(0.036g,0.099mmol)于DMF(2mL)中的溶液中，加入DIPEA(0.087mL,0.496mmol)和2-异氰酸酯基-2-甲基丙烷(0.029g,0.199mmol。将反应混合物搅拌1小时。反应混合物过滤，并且浓缩。将粗物质经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，经离心蒸发干燥，得到外消旋产物。化合物经手性分离进一步纯化，使用制备型HPLC:OD 21x 250mm,10μm柱，用85％庚烷+0.1％二乙胺洗脱:15％EtOH，15mL/min，检测UV 254nm。第一洗脱的对映异构体rt＝29.3min:(S)-A84，第二洗脱的对映异构体rt＝38.5min:(R)-A85由此分离。MS(ES)m/z＝507[M+H]+；保留时间＝1.74和2.98分钟。(分别为方法H和I).1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.79-7.86(1H,m),7.70-7.75(2H,m),7.68(1H,td,J＝5.41,2.38Hz),7.64(2H,d,J＝8.80Hz),7.36-7.57(3H,m),7.35-7.37(1H,m),5.50(1H,br.s.),5.39(1H,d,J＝17.2Hz),4.86(1H,d,J＝14.3Hz),4.63-4.75(1H,m),3.76(1H,d,J＝14.7Hz).
方案63
中间物A86A:4-(3-氯苯基)-2,4-二氧代丁酸叔丁酯
在氮气气氛下，将3′-氯乙酰苯(1.015mL,7.82mmol)于无水乙醚(50mL)中的溶液冷却至-78℃，保持15分钟，然后缓慢地加入1.0M的LHMDS(8.60mL,8.60mmol)于THF中的溶液。将所形成的醇物质在-78℃搅拌45分钟，然后一次性加入草酸二叔丁酯(1.898g,9.38mmol)。使浅黄色反应混合物温热至RT并且搅拌18h。然后用50mL的1.0M HCl水溶液猝灭墨绿色的溶液。分离两层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到成色油状物，其经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-20％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86A(2.17g,98％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.94-7.99(1H,m),7.86(1H,dt,J＝7.78,1.38Hz),7.58(1H,ddd,J＝7.97,2.20,1.13Hz),7.43-7.49(1H,m),6.94-6.99(1H,m),1.58-1.63(9H,m).
中间物A86B:3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸叔丁酯
向中间物A86A(2.17g,7.68mmol)于乙醇(80mL)中的溶液中，加入水合肼(0.471mL,7.68mmol,80％wt)。将溶液在室温搅拌18小时。少量转换成期望的吡唑，此时加入乙酸(5mL)，将反应混合物加热至60℃，保持24h。反应混合物用乙酸乙酯稀释(100mL)，通过饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离有机层，用盐水洗涤(2x100mL)。有机层经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-60％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86B(1.82g,83％)，为黄色晶体固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 13.70-14.15(1H,m),7.93(1H,t,J＝1.76Hz),7.83(1H,d,J＝7.28Hz),7.22-7.53(3H,m),1.51-1.59(9H,m).
中间物A86C:3-(3-氯苯基)-1-(氰基甲基)-1H-吡唑-5-羧酸叔丁酯
向填充有中间物A86B(1.82g,6.53mmol)于DMF(15mL)中的冰冷却溶液的烧瓶中，逐滴加入2.0M NaHMDS于THF中的溶液(3.43mL,6.86mmol)。将反应混合物搅拌5分钟，随后移除冰浴，将氯乙腈(0.456mL,7.19mmol)(其已经经过柱)和NaHCO3加至反应混合物中。将反应混合物温热至室温，再搅拌18h。反应通过添加1mL的饱和NH4Cl水溶液来猝灭。反应混合物用等份的水和EtOAc稀释，将所生成的混合物激烈搅拌15分钟。有机层分离，经硫酸钠干燥，真空干燥，得到橙色固体，其经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-50％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86C(1.87g,90％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝261.91[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm7.78-7.83(1H,m),7.66-7.73(1H,m),7.31-7.40(2H,m),7.08-7.15(1H,m),5.50-5.60(2H,m),1.59-1.69(9H,m).
中间物A86D:3-(3-氯苯基)-1-(1-氰基环丙基)-1H-吡唑-5-羧酸叔丁酯
向中间物A86C(1.87g,5.88mmol)和1-溴-2-氯乙烷(0.844mL,7.36mmol)于DMF(20mL)中的冰冷却溶液中，分批加入NaH(0.588g,14.71mmol)(60％于矿物油中的分散体)。将浑浊的溶液缓慢温热至室温，并且搅拌16h，然后用10mL饱和的NH4Cl水溶液猝灭。然后通过激烈搅拌15分钟，将混合物分配在等份的水和EtOAc(各250mL)之间。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到橙色油状物，其经硅胶色谱纯化(80g柱，使用梯度0-50％乙酸乙酯/己烷洗脱)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86D(1.02g,50％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝287.96[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm7.78-7.82(1H,m),7.64-7.68(1H,m),7.33-7.37(2H,m),7.11(1H,s),1.67(9H,s),1.64(2H,s),1.54-1.58(2H,m).
中间物A86E:1-(1-(氨基甲基)环丙基)-3-(3-氯苯基)-1H-吡唑-5-羧酸叔丁酯
向中间物A86D(0.211g,0.613mmol)于MeOH(15mL)中的溶液中，加入氯化钴(II)(0.239g,1.838mmol)。将亮紫色的溶液冷却至0℃，然后缓慢和小心地加入硼氢化钠(0.232g,6.13mmol)。在0℃搅拌10分钟之后，将反应混合物温热至50℃。在搅拌2小时之后，将反应混合物冷却至室温，然后使非均质的混合物经过短垫。滤液用乙酸乙酯和100mL 1M HCl水溶液稀释。酸性水溶液溶解了所有的钴盐(颜色由暗棕色变成浅粉色。水层的pH值由1.0M NaOH水溶液调节7。然后有机层分离，水相用EtOAc(3x)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到粗中间物A86E(0.213g,100％)，为油状物。MS(ES):m/z＝273.9[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.74-7.85(1H,m),7.59-7.69(1H,m),7.21-7.34(1H,m),6.98-7.06(1H,m),3.06(2H,s),1.54-1.63(9H,m),1.29-1.42(4H,m),1.08-1.16(2H,m).
中间物A86F:2′-(3-氯苯基)-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-4′-酮
向中间物A86E(0.213g,0.612mmol)于EtOH(5.0mL)中的溶液中，加入氢氧化铵(0.954mL,24.5mmol,40wt％)。将溶液在室温搅拌18h。粗反应混合物减压浓缩，用EtOAc稀释。水溶液用1M HCl水溶液中和至pH值为7。分离有机层，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到中间物A86F(0.118g,69％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝273.9[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.80-7.84(1H,m),7.65(1H,dt,J＝7.34,1.47Hz),7.28-7.37(2H,m),7.15-7.19(1H,m),6.59(1H,br.s.),3.68-3.74(2H,m),1.71-1.77(2H,m),1.08-1.15(2H,m).
中间物A86G:2′-(3-氯苯基)-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]
将置于氮气气氛中的中间物A86F(0.166g,0.606mmol)于无水THF(6.1mL)中的溶液冷却至-5℃。滴加1.0M LAH(1.456mL,1.456mmol)于THF中的溶液。移除冰浴，鼓泡停止。然后将反应混合物温热至RT并且再搅拌18h。反应混合物冷却至0℃，小心地连续地添加1.5mL H2O、1.5mL15％NaOH水溶液和4.5mL H2O猝灭反应。移除冷却浴，将两相混合物在室温搅拌30分钟。将无水MgSO4加至混合物，搅拌15分钟。反应混合物经垫过滤。滤饼用DCM(2x20mL)洗涤。分离滤液的有机层，水相用2x 50mL DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到浅绿色的油状物。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86G(0.115g,73％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝260.0[M+H]+.
中间物A86H:2′-(3-氯苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向填充有中间物A86G(0.175g,0.674mmol)于DCM(4mL)中的溶液的小瓶中，加入三乙胺(0.376mL,2.70mmol)和DMAP(4.12mg,0.034mmol)。向所生成的溶液加入一缩二碳酸二叔丁酯(221mg,1.011mmol)。在室温搅拌16小时后，反应通过添加饱和的NaHCO3水溶液猝灭。分离各层，水层用DCM再洗涤两次。合并的有机层用水、盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0 to40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86H(0.240g,99％)，为无色油状物。MS(ES):m/z＝360.08[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.75(1H,t,J＝1.76Hz),7.61(1H,d,J＝7.53Hz),7.21-7.34(2H,m),6.35(1H,s),4.80(2H,br.s.),3.81(2H,s),1.63-1.69(2H,m),1.50-1.54(9H,m),0.95-1.08(2H,m).
中间物A86I:2′-(3-氯苯基)-3′-碘-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
在室温，向中间物A86H(241mg,0.670mmol)于DCM(5.4mL)和MeOH(1.4mL)中的搅拌溶液中，加入NIS(452mg,2.009mmol)。在1小时后，减压除去挥发性物质，红色油状物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-25％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86I(0.270g,83％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝485.8[M+H]+.1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.78-7.82(1H,m),7.73(1H,dt,J＝6.59,1.98Hz),7.32-7.37(2H,m),4.59-4.76(2H,m),3.82(2H,br.s.),1.65(2H,s),1.52(9H,s),1.04(2H,br.s.).
中间物A86J:7′-(3-氯苯基)-8′-氰基-1′H-螺[环丙烷-1,4′-吡唑并[1,2-a]吡嗪]-2′(3′H)-羧酸叔丁酯
向填充有中间物A86I(267.4mg,0.550mmol)的烧瓶中，加入Pd(Ph3P)4(63.6mg,0.055mmol),二氰基锌(71.1mg,0.606mmol)和锌(7.20mg,0.110mmol)。烧瓶用隔膜密封，内容物用氮气脱气5分钟。加入DMF(2.4mL)，将黄色溶液再脱气5分钟。然后将反应混合物加热至80℃。2小时后反应混合物用等份的水和EtOAc稀释。分离有机层，水层用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱25-60％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86J(0.186g,86％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝385.0[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.89(1H,d,J＝1.00Hz),7.81-7.86(1H,m),7.29-7.40(2H,m),4.92(2H,br.s.),3.84(2H,s),1.66-1.71(2H,m),1.52(9H,s),1.10(2H,d,J＝2.51Hz).
中间物A86K:8′-氨甲酰基-7′-(3-氯苯基)-1′H-螺[环丙烷-1,4′-吡唑并[1,2-a]吡嗪]-2′(3′H)-羧酸叔丁酯
在室温，向中间物A86J(0.145g,0.377mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中，逐滴加入5MKOH的水溶液(0.38mL,1.884mmol)，然后加入30wt％H2O2溶液(0.77mL,0.754mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，其后将混合物分配在等份的EtOAc和水之间。分离有机相，水层用EtOAc再萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到白色固体。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱75-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A86K(0.117g,42％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝403.08[M+H]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 8.67(2H,br.s.),7.35-7.58(4H,m),5.31-6.03(2H,m),4.96-5.15(2H,m),3.82(2H,s),1.59-1.69(2H,m),1.42-1.57(9H,m),0.94-1.17(2H,m).
化合物A86:2′-(3-氯苯基)-N5′-(4-氰基苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(6′H)-二甲酰胺
类似于化合物A76，化合物A86通过使脱保护的A86K与4-异氰酸酯基苯甲腈反应来合成。产物经制备型HPLC纯化(0.0224g,54％):MS(ES):m/z＝447.2[M+H]+；HPLC保留时间1.80分钟和2.60分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.35(1H,s),7.56-7.77(6H,m),7.35-7.46(2H,m),7.23(1H,br.s.),5.03(2H,s),3.95-4.06(2H,m),1.42-1.53(2H,m),1.10-1.19(2H,m).
方案64
中间物A87A:1-(氰基甲基)-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向中间物4B(7.0g,29.9mmol)于DMF(45mL)中的冰冷却的溶液中，逐滴加入LiHMDS(31.4mL,31.4mmol,1M于THF)的溶液。将反应混合物搅拌5分钟，然后移除冰浴。向反应混合物中加入2-氯乙腈(2.482g,32.9mmol)。将反应温热至室温，并且搅拌18h。反应通过添加1mL饱和氯化铵水溶液猝灭。反应混合物用等份的水和EtOAc洗涤，所生成的混合物激烈搅拌15分钟。分离有机层，经硫酸钠干燥，真空浓缩，粗反应混合物经硅胶色谱纯化(120g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A87A(6.15g,75％)，为白色固体。MS(ES)m/z＝274[M+H]+.
中间物A87B:1-(1-氰基环丙基)-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯
向中间物A87A(3.75g,13.72mmol)和1-溴-2-氯乙烷(2.362g,16.47mmol)于DMF(40mL)中的冰冷却的溶液中，分批加入NaH(1.372g,34.3mmol)(60％矿物油分散体)。将浑浊的溶液缓慢地温热至室温，并且搅拌16h。反应混合物通过添加10mL饱和的NH4Cl水溶液猝灭。混合物分配在水和EtOAc之间。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩。残余的橙色油状物经硅胶色谱纯化(80g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A87B(0.51g,12％)，为黄色固体。MS(ES)m/z＝300[M+H]+.
中间物A87C:2′-(3-氟苯基)-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-4′-酮
向中间物A87B(0.4g,1.336mmol)和氯化钴(II)(0.521g,4.01mmol)于MeOH(50mL)中的冰冷却的溶液中，缓慢地加入硼氢化钠(0.506g,13.36mmol)。溶液立刻变成黑色，伴随着激烈气体逸出。将反应混合物加热至50℃，保持2h。反应混合物经过滤，滤液浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A87C(0.16g,47％)。MS(ES)m/z＝258[M+H]+.
中间物A87D:2′-(3-氟苯基)-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]
在-10℃和氮气气氛中，向中间物A87C(0.16g,0.622mmol)于THF(10mL)中的搅拌的溶液中，逐滴加入1.0M LAH(1.87mL,1.87mmol)于THF中的溶液。使反应混合物缓慢地温热至室温，搅拌过夜，然后在50℃加热4小时。反应通过在0℃缓慢地添加饱和Rochelle's盐水溶液猝灭。反应混合物用DCM稀释，分离有机层，水层用DCM(2x100mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩得到中间物A87D(0.14g,93％产率)，为灰白色固体。产物按原样使用而没有进一步纯化。MS(ES)m/z＝244[M+H]+.
中间物A87E:2′-(3-氟苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A87D(0.14g,0.575mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中，加入TEA(0.289mL,2.072mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(0.188g,0.863mmol)。将溶液在室温搅拌过夜。浓缩，经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A87E(0.156g,79％产率)。MS(ES)m/z＝344[M+H]+.
中间物A87F:2′-(3-氟苯基)-3′-碘-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A87E(0.156g,0.454mmol)于DCM(5mL)和MeOH(1.25mL)中的溶液中，加入NIS(0.307g,1.363mmol)，将反应混合物在室温搅拌。在搅拌90分钟之后，真空浓缩溶液，得到红色油状物，其经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A87F(0.14g,66％产率)。MS(ES)m/z＝470[M+H]+.
中间物A87G:3′-氰基-2′-(3-氟苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A87F(0.14g,0.298mmol)于DMF(10mL)中的溶液中，加入氰化亚铜(I)(0.067g,0.746mmol)。将反应混合物于120℃密封管中加热16小时。反应混合物冷却至室温，过滤。滤饼用EtOAc洗涤，合并的滤液浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-40％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，浓缩，得到中间物A87G(0.091g,83％产率)。MS(ES)m/z＝369[M+H]+.
中间物A87H:3′-氨甲酰基-2′-(3-氟苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
在室温，A87G(0.091g,0.247mmol)于EtOH(20mL)中的溶液中，加入KOH(0.247mL,1.235mmol)。将反应混合物冷却至0℃，然后逐滴加入过氧化氢(0.505mL,4.94mmol,30wt％)。将反应混合物温热至室温并且搅拌过夜，然后浓缩，残余物溶于EtOAc中。有机相用水、盐水洗涤，，然后干燥(MgSO4)，浓缩。残余物经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-20％MeOH/DCM)。所需要的馏分浓缩，获得中间物A87H(0.075g,79％产率)。MS(ES)m/z＝387[M+H]+.
中间物A87I:2′-(3-氟苯基)-5′,6′-二氢-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′-甲酰胺,TFA
在室温，向中间物A87H(0.085g,0.220mmol)于DCM(5mL)中的溶液中，加入TFA(0.085mL,1.100mmol)，将混合物搅拌过夜。反应混合物浓缩，获得中间物A87I的TFA盐(0.063g,0.220mmol,>98％产率)。假定产率为定量的，粗产物按原样使用而没有纯化。MS(ES)m/z＝287[M+H]+.
化合物A87:N5′-(4-氰基苯基)-2′-(3-氟苯基)-4′H-螺[环丙烷-1,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(6′H)-二甲酰胺
在室温和氮气气氛中，向中间物A87I(0.055g,0.192mmol)于DMF(2mL)中的溶液中，加入DIPEA(0.168mL,0.961mmol)和2-异氰酸酯基-2-甲基丙烷(0.055g,0.384mmol)。将反应混合物搅拌1小时。粗物质经制备型HPLC纯化。合并含有期望产物的馏分，蒸发，得到化合物A87(8.4mg,10％产率)。MS(ES)m/z＝431.2[M+H]+；保留时间＝1.70和2.51分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.36(s,1H),7.78-7.64(m,4H),7.54-7.34(m,4H),7.20(t,J＝7.0Hz,2H),5.04(s,2H),4.02(s,2H),1.53-1.43(m,2H),1.21-1.10(m,2H),1.21-1.10(m,2H).
方案65
中间物A88A:3-氨甲酰基-7-甲酰基-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
将中间物A14G(0.421g,0.997mmol)和NaHCO3(84mg,0.997mmol)于无水DCM(5.0mL)中的悬浮液冷却至-30℃，几分钟后立马添加戴斯-马丁高碘烷(0.508g,1.197mmol)。将反应保持在-30℃ 2h，然后使该温度逐渐达到22℃。在搅拌18小时后，反应混合物用DCM和饱和的NaHCO3水溶液稀释。分离有机层，水相用DCM(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水MgSO4干燥,过滤，滤液减压浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A88A(0.200g,47％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝364.9[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 9.62-9.78(1H,m),5.81-6.83(2H,m),4.49-5.55(4H,m),3.58(1H,d,J＝11.80Hz),1.39-1.50(9H,m).
中间物A88B:3-氨甲酰基-7,7-双(羟基甲基)-2-碘-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A88A(0.200g,0.476mmol)于MeOH(4.0mL)中的溶液中，在室温逐滴加入85％KOH水溶液(2.380mL,4.76mmol)和37％w/w甲醛水溶液(0.886mL,11.90mmol)于MeOH(1mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌18h，其后将混合物分配在等份的EtOAc和水之间。分离有机相，水层再萃取两次。合并有机层，经硫酸钠干燥，浓缩，得到粗制的β-羟基醛中间物。将粗物质溶于MeOH(2.0mL)中，用NaBH4(0.036g,0.952mmol)处理。在室温搅拌1h后，反应混合物分配在等份的水和EtOAc之间。分离有机层，水相用EtOAc再萃取两次。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗制的无色油状物。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A88B(0.096g,45％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝397.0[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 6.29-6.87(1H,m),5.84-6.34(1H,m),4.85-5.03(2H,m),3.72-3.97(5H,m),3.58(2H,br.s.),1.42-1.52(9H,m).
中间物A88C:3-氨甲酰基-7-(羟基甲基)-2-碘-7-((对甲苯磺酰基)甲基)-6，7-二氢吡唑并[1，5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A88B(0.095g,0.210mmol)和二丁基氧化锡(0.0261g,0.105mmol)于DCM(1.0mL)中的搅拌溶液中，在室温加入三乙胺(0.029mL,0.210mmol)，接着加入对甲苯磺酰氯(0.040g,0.210mmol)。24h后，过滤出反应物质，并且浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A88C(0.033g,26％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝550.9[M+H2O-OtBu]+.
中间物A88D:3′-氨甲酰基-2′-碘-4′H-螺[环氧丙烷-3,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A88C(0.033g,0.054mmol)于THF(1.0mL)中的冰冷却的溶液中，加入NaH(0.005g,0.136mmol,60％矿物油分散体)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后将混合物加热至50℃，保持1小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，用饱和的氯化铵水溶液猝灭。分离有机层，水相用EtOAc萃取两次。合并的有机相经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到油状物，其经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱50-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A88D(0.018g,76％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝379.0[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 6.43-6.90(1H,m),5.38-5.70(1H,m),5.19-5.29(2H,m),4.87-4.99(2H,m),4.61(2H,d,J＝6.78Hz),4.07-4.23(2H,m),1.41-1.55(9H,m).
中间物A88E:3′-氨甲酰基-2′-(3-氯-4-氟苯基)-4′H-螺[环氧丙烷-3,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向配备有搅拌棒和填充有中间物A88D(0.018g,0.041mmol)的压力小瓶中，加入(3-氯-4-氟苯基)硼酸(10.8mg,0.062mmol)和PdCl2(dppf)(3.03mg,4.15μmol)。对反应小瓶加盖，用干燥的氮气吹洗5分钟。加入无水1,4-二噁烷(1.0mL)和2M K3PO4水溶液(0.062mL,0.124mmol)。在氮气气氛下将所生成的红色浆液加热至80℃，保持18小时。反应冷却至室温，通过添加50mL水猝灭，然后用DCM稀释。分离有机相，水相再用DCM萃取两次。合并的有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，真空浓缩，得到无色油状物，其经硅胶色谱纯化(12g柱，用以下洗脱梯度洗脱30-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A88E(0.017g,84％)，为白色泡沫。MS(ES):m/z＝437.0[M+H]+.
化合物A88:2′-(3-氯-4-氟苯基)-N5′-(4-氰基苯基)-4′H-螺[环氧丙烷-3,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(6′H)-二甲酰胺
类似于化合物A76，化合物A88通过使脱保护的A88E与4-异氰酸酯基苯甲腈反应来合成。产物经制备型HPLC纯化。MS(ES):m/z＝480.9[M+H]+；HPLC保留时间1.58分钟和2.82分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.92(1H,d,J＝7.34Hz),7.63-7.79(5H,m),7.51(1H,t,J＝8.99Hz),7.23-7.47(2H,m),5.04-5.14(2H,m),4.86-4.99(2H,m),4.64-4.73(2H,m),4.26-4.44(2H,m).
方案66
中间物A89A:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7,7-双(羟基甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
在室温向中间物A14H(0.425g,1.005mmol)于MeOH(5.0mL)中的溶液中，逐滴加入85％KOH水溶液(5.03mL,10.05mmol)和37％w/w甲醛水溶液(1.871mL,25.1mmol)于MeOH(1mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌18h，其后将混合物分配在等份的EtOAc和水之间。分离有机相，水层在萃取两次。合并的有机层经硫酸钠干燥，干燥得到粗β-羟基醛中间物。将该粗物质溶于MeOH(2.0mL)，用NaBH4(0.076g,2.010mmol)处理。在RT搅拌1小时之后，将反应混合物分配在水和EtOAc之间。分离有机层，水相用EtOAc萃取两次。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗制的无色油状物。粗产物经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱60-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A89A(0.210g,46％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝399.0[M+H2O-OtBu]+.1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ ppm 7.64(1H,ddd,J＝7.84,7.09,2.13Hz),7.40-7.52(1H,m),7.23-7.32(2H,m),5.33-5.61(1H,m),4.97(2H,s),4.70-4.82(1H,m),3.70-4.06(6H,m),3.26-3.52(2H,m),1.50-1.56(9H,m).
中间物A89B:3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7,7-双((对甲苯磺酰基)甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A89A(0.210g,0.462mmol)于THF(5.0mL)中的冰冷却的溶液中，分批加入NaH(0.0739g,0.210mmol,60％矿物油分散体)。10分钟之后，在0℃逐滴加入对甲苯磺酰氯(0.264g,1.385mmol)于THF中的溶液。然后将反应温热至22℃。18h之后，反应在0℃用饱和的氯化铵水溶液猝灭，用EtOAc稀释。分离有机层，水相用EtOAc再萃取两次。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到无色油状物，其经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱40-100％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A89B(0.183g,52％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝707.2[M+H2O-OtBu]+.
中间物A89C:7-(叠氮基甲基)-3-氨甲酰基-2-(3-氯-4-氟苯基)-7-((对甲苯磺酰基)甲基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-羧酸叔丁酯
向中间物A89B(0.092g,0.121mmol)于DMF(2.0mL)中的溶液中，加入叠氮化钠(9.40mg,0.145mmol)。将反应混合物在80℃加热18小时，然后在100℃加热20小时。将混合物冷却至室温，分配在等份的EtOAc和水之间。水层用EtOAc再萃取两次，合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗物质，为无色油状物，其经硅胶色谱纯化(40g柱，用以下洗脱梯度洗脱0-30％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A89C(0.029g,38％)，为白色固体。MS(ES):m/z＝578.1[M+H2O-OtBu]+.
中间物A89D:1-乙酰基-3′-氨甲酰基-2′-(3-氯-4-氟苯基)-4′H-螺[氮杂环丁烷-3,7′-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5′(6′H)-羧酸叔丁酯
向中间物A89C(29mg,0.046mmol)于THF中的溶液中，加入三苯基膦(13.20mg,0.050mmol)和水(0.824μL,0.046mmol)。在室温搅拌18h，充分转化成亚胺正磷烷。通过在室温用NH4OH(0.030mL,0.229mmol,40wt％)处理粗反应物质，实现亚胺正磷烷的水解。在搅拌2小时之后，将反应混合物加热到40℃，保持2小时，其后减压除去挥发性物质。然后对中间物即粗氮杂环丁烷进行乙酰化，而没有纯化。粗油状物溶于DCM(0.50mL)中，用TEA(0.024mL,0.174mmol)和1.0M乙酰氯(0.065mL,0.065mmol)于DCM中的溶液处理。反应在室温搅拌1h，其后反应混合物用等份的EtOAc和谁稀释，水相用EtOAc再萃取两次。合并的有机层经硫酸钠干燥减压浓缩。粗反应混合物经硅胶色谱纯化(24g柱，用以下洗脱梯度洗脱20-90％乙酸乙酯/己烷)。合并含有产物的馏分，蒸发得到中间物A89D(0.0125g,48％，三步)，为白色固体。MS(ES):m/z＝422.1[M+H2O-OtBu]+.
化合物A89:1-乙酰基-2′-(3-氯-4-氟苯基)-N5′-(4-氰基苯基)-4′H-螺[氮杂环丁烷-3,7′-吡唑并[1,5-a]吡啶]-3′,5′(6′H)-二甲酰胺
类似于化合物A76，化合物A89通过使脱保护的A89D与2-异氰酸酯基-2-甲基丙烷反应来合成。产物经制备型HPLC纯化。MS(ES):m/z＝522.5[M+H]+；HPLC保留时间1.31分钟和2.22分钟。(分别为方法H和I)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.85-7.93(1H,m),7.63-7.78(5H,m),7.39-7.56(2H,m),7.21-7.38(1H,m),4.89-5.03(2H,m),4.55-4.64(1H,m),4.39(1H,d,J＝8.80Hz),4.20-4.34(3H,m),4.09-4.18(1H,m),1.88(3H,s)。

Claims (4)

1.一种化合物或其药用盐，所述化合物选自：
。
2.药物组合物，其包含一或多种如权利要求1的化合物和药用载体。
3.一或多种如权利要求1的化合物在制备用于抑制酪蛋白激酶Iδ/ε活性的药物中的用途。
4.一或多种如权利要求1的化合物在制备用于治疗病理状态与酪蛋白激酶Iδ/ε激活相关的疾病的药物中的用途，其中所述疾病选自昼夜节律病症、神经退化性疾病和癌症。
CN201480073199.9A 2013-11-14 2014-11-14 作为酪蛋白激酶1d/e抑制剂的取代的4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪衍生物 Expired - Fee Related CN105916856B (zh)

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