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CN105492026A - 使用抗cgrp抗体的葡萄糖代谢的调节 - Google Patents

使用抗cgrp抗体的葡萄糖代谢的调节 Download PDF

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CN105492026A CN201480047723.5A CN201480047723A CN105492026A CN 105492026 A CN105492026 A CN 105492026A CN 201480047723 A CN201480047723 A CN 201480047723A CN 105492026 A CN105492026 A CN 105492026A
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Abstract

本公开提供预防或治疗代谢性病症的方法。在例示性实施方案中，提供施用抗CGRP抗体的方法，任选地组合以第二种制剂，其中使周边和/或肝脏的葡萄糖利用增加，从而预防或治疗与胰岛素抗性相关的疾病和病症。还提供包含抗CGRP抗体的组合物，任选地组合以第二种制剂，其适合供用于施用以使周边和/或肝脏的葡萄糖利用增加，以及从而预防或治疗与胰岛素抗性相关的疾病和病症。

Description

使用抗CGRP抗体的葡萄糖代谢的调节
相关申请公开
本申请主张于2014年4月22日提交的美国临时专利申请案号61/982,611(代理人案号43257.3002)以及于2013年7月3日提交的美国临时专利申请案号61/842,745(代理人案号43257.3001)的权益，所述专利各自在此以全文引用方式并入。
发明领域
本发明涉及对抗人类降钙素基因相关肽(“CGRP”)的抗体及其片段(包括Fab片段)的用途，所述抗体特异地结合CGRP且促进周边组织的葡萄糖摄取和利用和/或抑制肝脏葡萄糖的生成。标的方法的例示性实施方案可以保留功能性胰脏β细胞，从而使进展成明显的糖尿病变慢。本发明还涉及筛选与胰岛素抗性相关的疾病和病症(包括葡萄糖、碳水化合物和脂肪代谢的病症)的方法，以及预防或治疗与胰岛素抗性相关的疾病和病症的方法，此通过施用所述抗体或其片段来实现。
本申请包括生物序列表，其已经由EFS-Web以ASCII格式递呈且在此以全文引用方式并入。所述ASCII拷贝是于2014年7月1日创建，命名为“43257o3013.txt”且大小为203,678字节。
发明背景
降钙素基因相关肽(CGRP)是以长度为37个氨基酸的多功能性神经肽形式产生。在人类中存在二种CGRP形式，即CGRP-α与CGRP-β形式，且二者具有相似活性。人类的CGRP-α与CGRP-β相差3个氨基酸，且源自不同的基因。CGRP肽家族还包括淀粉素、肾上腺髓素和降钙素，但各自具有不同的受体与生物活性。Doods,H.，Curr.Op.Invest.Drugs，2(9):1261-68(2001)。在CGRP蛋白家族中，推定的受体结合位点的氨基酸残基是保守的，但整体的同源性是不同的。举例来说，人类的CGRP与淀粉素整体共享46％氨基酸序列同一性，然而人类的降钙素与CGRP共享15％氨基酸序列同一性。Wimalawansa,S.J.,EndocrineRev.17(5):533-585(1996)。
CGRP的生物效应是经由CGRP受体(CGRP-R)介导，CGRP受体是由七个跨膜组分联同受体相关膜蛋白(RAMP)组成。CGRP-R进一步需要受体组分蛋白(RCP)的活性，其为经由G蛋白与腺苷酸环化酶的高效偶合作用和cAMP产生所不可或缺的。Doods,H.，Curr.Op.Invest.Drugs，2(9):1261-68(2001)。
CGRP遍及周边神经和中枢神经系统且会影响心血管、神经和内分泌系统。当CGRP从组织(诸如三叉神经)释出时，其能导致连续的活化且在脑膜内释出神经肽，而介导神经源性发炎，神经源性发炎的特征在于血管舒张、血管渗漏和肥大细胞降解。Durham,P.L.，NewEng.J.Med.，350(11):1073-75(2004)。认为CGRP在偏头痛的发生中发挥显著作用。已显示在偏头痛的头痛期期间颈静脉血液的血浆中的经鉴定CGRP水平升高，而其它神经肽并未升高。Arulmozhi,D.K.等人，Vas.Pharma.,43:176-187(2005)。此外，已显示CGRP拮抗作用对治疗偏头痛是有效的(Olesen等人，NEnglJMed.2004年3月11日；350(11):1104-10)。
除了神经组织以外，已经于心血管组织、肾上腺、脑下腺、肾脏、胰脏和骨骼内发现CGRP受体。Wimalawansa，S.J.，EndocrineRev.17(5):533-585(1996)。于体外研究中，使用经分离的胰脏组织发现，CGRP与淀粉素二者均会抑制胰岛素分泌，以剂量依赖性方式抵消胰岛素刺激的糖原合成速率，以及妨碍胰岛素对经分离的肝细胞的作用(Gomez-Foix等人，Biochem.J.276:607-610,1991)。此外，Leighton和Cooper(Nature,335(6191):632-5,1988)报导大鼠CGRP-1于体外会抑制剥离的大鼠比目鱼肌内的基础和胰岛素刺激的糖原合成速率。
葡萄糖体内恒定是通过使激素胰高血糖素的糖原合成与糖原分解，以及激素胰岛素的组织葡萄糖利用和摄取达到平衡来维持。葡萄糖存在通常会刺激胰岛素产生，胰岛素作用为增加葡萄糖进入骨骼肌、肌细胞、大脑和脂肪细胞的运输率。胰岛素通常也会抑制脂肪细胞内的脂质降解。于糖尿病前期或第2型糖尿病最早的阶段，组织产生胰岛素抗性，但是胰脏β细胞会通过分泌增加水平的胰岛素来补偿。最后随着肌肉和肝胰岛素抗性的增加，耗尽了胰脏β细胞补偿的能力而需要外源性胰岛素。
由于胰岛素合成和葡萄糖利用不良，而无法严格调控葡萄糖体内恒定会有很深的代谢性和有害健康的效应。最常见的就是产生持续的高血糖(高血糖症)，导致胰岛素抗性和第II型糖尿病的诊断结果。于2011年，在美国25,600,000位年纪为20岁或更大的人被诊断为患有糖尿病，其中95％的人为第2型糖尿病。(CentersforDiseaseControlandPrevention.NationalDiabetesFactSheet,2011.Atlanta,GA:CentersforDiseaseControlandPrevention,USDepartmentofHealthandHumanServices；2011。)糖尿患者者的医疗成本高达非糖尿患者者平均的两倍，因为增加的心脏病发作、中风、肾脏并发症和神经病变的风险。Imperatore等人，AmJEpidemiol.160(6):531-539(2004)。在没有显著变化的情况下，CDC预测截至2050年，在美国3个成年人中有1个会患糖尿病。Boyle等人Popul.HealthMetr.8:29(2010)。在世界各地，于2011年诊断为患有糖尿病的人口总数估计为3亿6千6百万人，截至2030年会增加到5亿5千2百万人。(InternationalDiabetesFoundation,IDFDiabetesAtlas,第5版)
文献中还没有清楚界定CGRP在葡萄糖代谢中的作用。对经分离的肝细胞的研究已证实出CGRP与淀粉素会抑制胰岛素刺激的糖原合成速率(Gomez-Foix等人，Biochem.J.276:607-610,1991)。Beaumont等人，BrJPharmacol.7月；115(5):713-5(1995)发现CGRP受体不会介导肌肉葡萄糖代谢的作用。Tanaka等人，Exp.ClinEndocrinolDiabetes121:280-285(2013)说明于大鼠模型中抗CGRP抗体会引起第一相胰岛素分泌稍微延长且使胰岛素分泌有小小的改变，然而，该研究未报导抗体是否会与可能混淆结果的其它降钙素家族的肽进行交叉反应。最后，先前的美国专利已声称证明了CGRP为一种淀粉素激动剂，以及施用CGRP多肽(与CGRP拮抗剂相反)可以治疗糖尿病(参见例如，美国专利第5,641,744号和第5,175,145号)。
发明概述
在一个方面，本公开提供一种在有需要的个体中增加周边和/或肝脏的葡萄糖利用的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
在一个方面，本公开提供一种在有需要的个体中减少胰岛素抗性的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
在一个方面，本公开提供一种在有需要的个体中治疗、预防或控制肥胖症的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
在一个方面，本公开提供一种在有需要的个体中达成持续的血糖量正常的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
在一个方面，本公开提供一种在有需要的个体中增加瘦肉组织与体脂肪比率的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
主题方法可有效治疗或延迟第II型糖尿病和/或肥胖症的发病。举例来说，可以延迟施用外源性胰岛素的需求。所述方法可有效预防或减慢胰脏β细胞的丧失。举例来说，不欲受理论限制，认为所述方法可以使胰岛素抗性人类或非人类动物的胰脏β细胞休息，从而预防功能性胰脏β细胞的丧失。
所述个体可能已被诊断为具有糖尿病前期或可能展现出一个或多个发展为第II型糖尿病的风险因素。
所述个体可以为绝经前、围绝经期、绝经期或绝经后的。
所述个体可能展现出一个或多个糖尿病前期的症状，诸如空腹血糖水平介于100mg/dL和125mg/dl之间；摄食75克葡萄糖溶液或摄食每公斤体重1.75克葡萄糖的葡萄糖溶液至最大剂量75克，2小时之后血糖水平介于140mg/dL和199mg/dL之间；和/或糖化血红蛋白介于5.7％和6.4％之间。
所述个体可能展现出一个或多个糖尿病的症状，诸如空腹血糖水平大于125mg/dl；摄食75克葡萄糖溶液或摄食每公斤体重1.75克葡萄糖的葡萄糖溶液至最大剂量75克，2小时之后血糖水平为至少200mg/dL；和/或糖化血红蛋白为至少6.5％。
所述个体可能展现出一个或多个发展为第II型糖尿病的风险因素，诸如第II型糖尿病的家族史；一个或多个双亲或兄弟姐妹先前被诊断为具有第II型糖尿病；血脂异常；总血液三酸甘油酯水平为至少200mg/dL；血液高密度脂蛋白水平小于35mg/dL；肥胖症；身体质量指数大于25kg/m2；妊娠糖尿病的病史；先前产生的婴儿出生重量大于9lbs；高血压；收缩压为至少140mmHg；舒张压为至少90mmHg；先前测量空腹血糖水平为至少99mg/dL；血管疾病；多囊卵巢综合征；或黑棘皮症。
所述个体可已被诊断为具有第II型糖尿病。
所述个体可能对选自由以下组成的组的至少一化合物的治疗无反应：GLP-1、艾塞那肽-1、促胰岛素分泌素(exendin)、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、利拉鲁肽、艾塞那肽LAR、DPP-4拮抗剂、GLP-1受体激动剂和另一种GLP-1激动剂；或者此化合物对所述个体可能是禁忌的。
所述方法可进一步包括向所述个体施用除抗人类CGRP抗体或抗体片段以外的抗糖尿病剂或抗肥胖剂。所述抗糖尿病剂或抗肥胖剂可以包含下列的一种或多种：淀粉素、淀粉素激动剂、磺酰脲类、降钙素、胰高血糖素、PPAR-γ激动剂、GPL-1受体激动剂、二肽基肽酶IV抑制剂、淀粉素类似物、双胍类、多巴胺D2受体激动剂、美格替奈类、α葡萄糖苷酶抑制剂、抗异常血脂症胆酸螯合剂、促胰岛素分泌素、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、胃抑肽(GIP)、肠促胰液素肽、胰岛素、SGLT2抑制剂、葡萄糖再吸收抑制剂、非诺贝特、贝特类、抗胃饥饿素抗体或抗体片段、纤维母细胞生长因子受体(FGFR)-1(IIIb)、FGFR-1(IIIc)、抗体或抗体片段、和/或FGFR-4(IIIc)、抗CD38抗体或抗体片段、抗MIC-1抗体、或MIC-1结合片段、二甲双胍或前述任一种的组合。
在一个例示性实施方案中，所述抗糖尿病剂为二甲双胍。
所述方法可以有效使重量减轻。
所述经施用的抗人类CGRP抗体或抗体片段不会使体内胰岛素分泌显著地增加，例如不会使胰岛素分泌显著地增加高于体内正常的生理水平，或相对于在施用所述抗人类CGRP抗体或抗体片段之前的胰岛素分泌水平，其不会使胰岛素分泌显著地增加。
所述经施用的抗人类CGRP抗体或抗体片段不会导致胰腺炎发生率增加，或与胰脏发炎相关的标记或细胞因子的表达增加。
所述组合物还可包含药学上可接受的载体。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以以介于约0.1和100.0mg/kg接受个体的体重之间的剂量施用给所述个体。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为人类抗体。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为非天然存在的。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为非天然存在的抗体片段。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为人源化抗体或其片段。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为嵌合抗体。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以特异地结合至完整CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，和/或竞争结合至相同或重叠的线性或构象表位，如同选自由以下组成的组的抗人类CGRP抗体：(a)Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；(b)Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；(c)Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；(d)Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；(e)Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；(f)Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(g)Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(h)Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(i)Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(j)Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；(k)Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；(l)Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；(m)Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及(n)Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以包含选自由以下组成的组的抗体中所含的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR：(a)Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；(b)Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；(c)Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；(d)Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；(e)Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；(f)Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(g)Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(h)Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(i)Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(j)Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；(k)Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；(l)Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；(m)Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及(n)Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以包含与选自由以下组成的组的抗体具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列：(a)Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；(b)Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；(c)Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；(d)Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；(e)Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；(f)Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(g)Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(h)Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(i)Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(j)Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；(k)Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；(l)Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；(m)Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及(n)Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的抗体：(a)Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；(b)Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；(c)Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；(d)Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；(e)Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；(f)Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(g)Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(h)Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(i)Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(j)Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；(k)Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；(l)Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；(m)Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及(n)Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以包含人类、嵌合或人源化抗体。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以包含Fab、F(ab’)2、scFv、IgNar或MetMab或另一种单价抗体片段。
在另一个方面，本公开提供一种适合用于例如前面的段落中所引述的本文中所述方法的组合物，所述组合物可以包含有效量的抗人类CGRP抗体或抗体片段、以及除抗人类CGRP抗体或抗体片段以外的抗糖尿病剂或抗肥胖剂。所述抗人类CGRP抗体或抗体片段可以为本文中描述的一者，例如其可以特异地结合至完整CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，可以竞争结合至完整CGRP多肽或其片段上相同或重叠的线性或构象表位，如同选自由以下组成的组的抗人类CGRP抗体一般，可以具有与选自由以下组成的组的抗人类CGRP抗体至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，或者可以包含选自由以下组成的组的抗人类CGRP抗体：(a)Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；(b)Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；(c)Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；(d)Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；(e)Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；(f)Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(g)Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(h)Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；(i)Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；(j)Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；(k)Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；(l)Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；(m)Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及(n)Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
所述抗糖尿病剂或抗肥胖剂包含下列的一种或多种：淀粉素、淀粉素激动剂、磺酰脲类、降钙素、胰高血糖素、PPAR-γ激动剂、GPL-1受体激动剂、二肽基肽酶IV抑制剂、淀粉素类似物、双胍类、多巴胺D2受体激动剂、美格替奈类、α葡萄糖苷酶抑制剂、抗异常血脂症胆酸螯合剂、促胰岛素分泌素、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、胃抑肽(GIP)、肠促胰液素肽、胰岛素、SGLT2抑制剂、葡萄糖再吸收抑制剂、非诺贝特、贝特类、二甲双胍、抗胃饥饿素抗体或抗体片段、纤维母细胞生长因子受体(FGFR)-1(IIIb)、FGFR-1(IIIc)、抗体或抗体片段、和/或FGFR-4(IIIc)、抗CD38抗体或抗体片段、抗MIC-1抗体或MIC-1结合片段、或前述任一种的组合。举例来说，所述抗糖尿病剂或抗肥胖剂可包含二甲双胍。
附图简述
图1A-D.治疗前和治疗后的血糖和血浆胰岛素水平。结果以平均值±SEM来表示。在ANOVA单因素+邓尼特事后检定(Dunnett’sposttest)情况下，##p<0.01，相对于媒介物。A：测量在进食条件下治疗前、用媒介物、Ab14和二甲双胍治疗后18h以及用媒介物和Ab14治疗后42h的血糖。B：测量在进食条件下治疗前、用二甲双胍治疗后18h以及用媒介物和Ab14治疗后42h的血浆胰岛素。C：计算治疗前、用二甲双胍治疗后18h以及用媒介物和Ab14治疗后42h的HOMA-IR(胰岛素抗性指数＝葡萄糖(mM)×胰岛素(μU/mL)/22.5)D：刚好在钳制术前于空腹条件下所测量的血糖(用二甲双胍治疗后24h以及用媒介物和Ab14治疗后48h)。图例：各组中的最左侧条柱，媒介物；各组中的中间条柱，Ab14治疗；各组中的最右侧条柱，二甲双胍治疗。
图2A-C.在钳制术程序期间的葡萄糖输注率发展(A)，稳态期间的血糖平均值(B)以及在钳制术结束时的血浆胰岛素水平(C)。结果以平均值±SEM来表示。A：在ANOVA二因素加上庞费洛尼事后检定(Bonferroni’sposttest)情况下，*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001，相对于媒介物。图2A的图例：上面的线，二甲双胍治疗；中间的线，Ab14治疗；下面的线，媒介物治疗(于时间点180min)。图2B-2C的图例：各组中的最左侧条柱，媒介物；各组中的中间条柱，Ab14治疗；各组中的最右侧条柱，二甲双胍治疗。
图3.测得的葡萄糖通量。结果以平均值±SEM来表示。在ANOVA单因素加上邓尼特事后检定情况下，#p<0.05，相对于媒介物。在6小时空腹条件下执行钳制术程序。0.3U/Kg/h胰岛素和3H-葡萄糖灌流180分钟。计算对应于稳态在140分钟和180分钟之间的葡萄糖输注率、全身转换、肝脏葡萄糖的生成(HGP)、糖酵解作用和糖原合成的平均值。图例：各组中的最左侧条柱，媒介物；各组中的中间条柱，Ab14治疗；各组中的最右侧条柱，二甲双胍治疗。
图4A-C.体内组织特异性葡萄糖利用。结果以平均值±SEM来表示。在ANOVA单因素加上邓尼特事后检定情况下，#p<0.05、##p<0.01，相对于媒介物。A：附睾白色脂肪组织(EWAT)、腹股沟白色脂肪组织(IWAT)和皮肤(作为负对照)的葡萄糖利用。B：混合外股肌(VL)和糖酵解伸趾长肌(EDL)的葡萄糖利用。C：氧化比目鱼肌和心尖内的葡萄糖利用。图例：各组中的最左侧条柱，媒介物；各组中的中间条柱，Ab14治疗；各组中的最右侧条柱，二甲双胍治疗。
图5.进食高脂高果糖饮食的动物或进食正常食物的对照动物随时间的平均体重。图例：上面的线，高脂高果糖饮食；下面的线，对照食物。
图6.图5中所示的动物组随时间的体重增重。上面的线：高脂高果糖饮食；下面的线：对照食物。图例：上面的线，高脂高果糖饮食；下面的线，对照食物。
图7.在用Ab14(10、30或100mg/kg)或二甲双胍治疗后进食高脂肪饮食的动物以及媒介物治疗的动物和进食对照食物的对照动物随时间的体重增重。在第0天施用治疗。图上的线于第7天从最低至最高按顺序为：正常食物(NC)加上媒介物；高脂肪饮食(HFD)加上二甲双胍；HFD加上Ab1430mg/kg；HFD加上Ab1410mg/kg；HFD加上媒介物；HFD加上Ab14100mg/kg。
图8A.图7中所示的动物组的摄食量。图上的线于第7天从最低至最高按顺序为：高脂肪饮食(HFD)加上二甲双胍；HFD加上Ab1430mg/kg；HFD加上Ab1410mg/kg；HFD加上Ab14100mg/kg；HFD加上媒介物；正常食物(NC)加上媒介物。
图8B.图7中所示的动物组的累积摄食量。图例：由左至右的条柱为：正常食物(NC)加上媒介物；高脂肪饮食(HFD)加上媒介物；HFD加上Ab1410mg/kg；HFD加上Ab1430mg/kg；HFD加上Ab14100mg/kg；HFD加上二甲双胍。
图9.在用Ab14(10、30或100mg/kg)或二甲双胍治疗后进食高脂肪饮食的动物以及媒介物治疗的动物和进食对照食物的对照动物的空腹血糖。在第0天施用治疗。图例：由左至右的条柱的顺序如同图8B中的一样。
图10.在用Ab14(10、30或100mg/kg)或二甲双胍治疗后进食高脂肪饮食的动物以及媒介物治疗的动物和进食对照食物的对照动物的空腹血浆胰岛素。在第0天施用治疗。图例：各组中由左至右的条柱的顺序如同图8B中的一样。
图11.在用Ab14或二甲双胍治疗15天之后，执行钳制术之前和钳制术期间的血浆胰岛素(上图)和C肽水平(左下图和右下图)。在治疗之前动物进食高脂肪饮食达6周。图例：由左至右的条柱的顺序如同图8B中的一样。
图12.在用Ab14(10、30或100mg/kg)或二甲双胍治疗后进食高脂肪饮食的动物以及媒介物治疗的动物和进食对照食物的对照动物的HOMA-IR。在第0天施用治疗。图例：由左至右的条柱的顺序如同图8B中的一样。
图13.用Ab14或二甲双胍治疗15天之后以及媒介物治疗的动物和进食对照食物对照动物执行的葡萄糖钳制术的葡萄糖输注率。在治疗之前动物进食高脂肪饮食达6周。以两个不同的胰岛素输注率来执行葡萄糖钳制术(5mU/kg/min，在大约70-100min达到稳态，以及15mU/kg/min，在大约170-210min达到稳态)图例：圆形标记，正常食物；中等的正方形标记，高脂肪饮食(HFD)加上媒介物；指向上方的三角形，HFD加上Ab1410mg/kg；指向下方的三角形，HFD加上Ab1430mg/kg；菱形，HFD加上Ab14100mg/kg；大的正方形，HFD加上二甲双胍。所示误差条柱是平均值加上或减去SEM。
图14.图13中所示的葡萄糖钳制术实验的稳态期间的平均葡萄糖输注率。葡萄糖输注率显示低和高胰岛素输注率(5mU/kg/min，在大约70-100min达到稳态，以及15mU/kg/min，在大约170-210min达到稳态)。各组中条柱的顺序如同图8B中的一样。
图15.图13中所示的葡萄糖钳制术实验期间的平均葡萄糖通量。显示较低的(5mU/kg/min)胰岛素输注率结果，在大约70-100min达到稳态。图例：各组中由左至右的条柱的顺序为：高脂肪饮食(HFD)加上媒介物；HFD加上Ab1410mg/kg；HFD加上Ab1430mg/kg；HFD加上Ab14100mg/kg；HFD加上二甲双胍。
图16.图13中所示的葡萄糖钳制术实验期间的平均葡萄糖通量。显示较高的(15mU/kg/min)胰岛素输注率结果，在大约170-210min达到稳态。图例：各组中条柱的顺序如同图15中的一样。
图17.静脉内推注注射至雄性史-道二氏(Sprague-Dawley)大鼠内之后，抗CGRP抗体(具体地，Ab6)的平均毒物动力学概况。显示168小时(7天)的随时间的血浆浓度，支持下文实施例中执行的每周给药。图例：正方形标记，Ab1410mg/kg/周；指向上方的三角形标记，Ab1430mg/kg/周；菱形标记，Ab14100mg/kg/周。
图18A-D.8周龄的ZDF大鼠的6小时空腹HOMA-IR(A)、血糖(B)、血浆胰岛素(C)和体重(D)。结果以平均值±SEM来表示。
#p<0.05；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼(MannWhitney))。图18A-D中(由左至右)条柱的顺序为：(1)媒介物1和媒介物2治疗的ZDF瘦大鼠；(2)媒介物1和媒介物2治疗的ZDF大鼠；(3)Ab1420mg/kg/周和媒介物2治疗的ZDF大鼠；(4)Ab1460mg/kg/周和媒介物2治疗的ZDF大鼠；(5)媒介物1和二甲双胍(“met”)200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠；(6)媒介物1和吡格列酮10mg/kg/天治疗的ZDF大鼠；(7)Ab1420mg/kg/周和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠；以及(8)Ab1460mg/kg/周和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠。
图19A-B.体重(A)和体重增重(B)的追踪。结果以平均值±SEM来表示。
$p<0.05(图19A：于第8天吡格列酮治疗的大鼠；于第28天Ab1460mg/kg/周+二甲双胍治疗的大鼠；图19B：于第22天和第25天Ab1460mg/kg/周+二甲双胍治疗的大鼠)；$$p<0.01(图19B：于第28天Ab1460mg/kg/周+二甲双胍治疗的大鼠)；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(图19A：在第11-28天之间的所有时间点吡格列酮治疗的大鼠；在所有时间点的媒介物治疗的ZDF瘦大鼠)(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)。
图20A-B.摄食量的追踪(A)和累积摄食量(B)。结果以平均值±SEM来表示。图20B中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
$p<0.05(图20A：于第20天和第22天吡格列酮治疗的大鼠；$$p<0.01(图20A：于第15天吡格列酮治疗的大鼠)；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(图20a：在所有时间点的媒介物治疗的ZDF瘦大鼠)(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
##p<0.01，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
图21A-D.6小时(第0天)或隔夜(第12天、第19天、第26天)空腹条件的血糖(A)、血浆胰岛素(B)、HOMA-IR(C)和C肽(D)。结果以平均值±SEM来表示。图21A-D内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
#p<0.05；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定(Kruskal-Wallis)+邓恩事后检定(Dunn’sposttest))
++p<0.01；相对于二甲双胍组以及AB1420mg/kg+二甲双胍组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定(Newman-Keulsposttest))
$p<0.05；$$p<0.01，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图22.果糖胺水平。结果以平均值±SEM来表示。图22内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
**p<0.01，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定)
$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图23.HbA1c水平。结果以平均值±SEM来表示。图23内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
***p<0.001，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定)
+p<0.05；相对于AB1460mg/kg组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
$p<0.05；$$p<0.01；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图24A-B.于6小时(第0天)或隔夜(第12天、第19天和第26天)空腹条件下的血浆三酸甘油酯(A)和游离脂肪酸(B)水平。结果以平均值±SEM来表示。图24A-D内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定)
+p<0.05；++p<0.01；+++p<0.001，相对于二甲双胍组或Ab1460mg/kg+二甲双胍组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
$p<0.05；$$p<0.01；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图25A-C.血浆总胆固醇(A)、HDL-胆固醇(B)和非HDL-胆固醇(C)水平。结果以平均值±SEM来表示。图25A-C内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
#p<0.05；##p<0.01；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001，相对于媒介物ZDF(单因素ANOVA+邓尼特事后检定)
+p<0.05；++p<0.01，相对于二甲双胍组或Ab14+二甲双胍组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
$$p<0.01，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图26A-C.相对于第0天的血浆总胆固醇(A)，HDL-胆固醇(B)和非HDL-胆固醇(C)水平。结果以平均值±SEM来表示。图26A-C内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
#p<0.05；##p<0.01；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(非配对t检定)
*p<0.05；**p<0.01，相对于媒介物ZDF(单因素ANOVA+邓尼特事后检定)
+p<0.05；相对于二甲双胍组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
$p<0.05；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图27A-C.于第26天在隔夜空腹条件下的口服耐糖试验(A)，从于T0(B)测得的血糖所计算出的曲线下面积(AUC)和相对于T0从相对值所计算出的曲线下面积(C)。结果以平均值±SEM来表示。图27B-C内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)(图27A：在所有时间点的媒介物治疗的ZDF瘦大鼠和吡格列酮治疗的大鼠)。
###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
***p<0.001，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定)
图28A-B.于第26天在口服耐糖试验期间的血浆胰岛素(A)和C肽(B)水平。结果以平均值±SEM来表示。图28A-B内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05，相对于媒介物ZDF(克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定)
$$p<0.01；$$$p<0.001，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图29A-B.于第26天在口服耐糖试验期间的T-60血浆胰岛素(A)和C肽(B)水平的相对表达。结果以平均值±SEM来表示。图29A-B内各组中条柱的顺序如同图18A-D中的一样。
#p<0.05；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05，相对于媒介物ZDF(单因素ANOVA+邓尼特事后检定)
+p<0.05；相对于二甲双胍组(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
$p<0.05；$$p<0.01，相对于媒介物ZDF(二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定)
图30A-C.胰脏含量：胰岛素原(A)、胰岛素(B)和胰岛素原/胰岛素比率(C)。结果以平均值±SEM来表示。图30A-C中(由左至右)条柱的顺序为：媒介物1和媒介物2治疗的ZDF瘦大鼠；媒介物1和媒介物2治疗的ZDF大鼠；Ab1460mg/kg/周和媒介物2治疗的ZDF大鼠；媒介物1和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠；和Ab1460mg/kg/周和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠。
#p<0.05；###p<0.001，相对于媒介物ZDF(曼-怀特尼)
*p<0.05，相对于媒介物ZDF(单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定)
图31.胰脏免疫组织化学分析：胰岛素标示定量。图31中(由左至右)条柱的顺序为：媒介物1和媒介物2治疗的ZDF瘦大鼠；媒介物1和媒介物2治疗的ZDF大鼠；Ab1460mg/kg/周和媒介物2治疗的ZDF大鼠；媒介物1和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠；和Ab1460mg/kg/周和二甲双胍200mg/kg/天治疗的ZDF大鼠。
发明详述
本发明人发现抗CGRP抗体当与二甲双胍相比时显著地使周边肌内的葡萄糖利用增加，而不会明显增加白色脂肪组织内的葡萄糖利用率。此外，本文中描述的抗人类CGRP抗体可以使心脏内的葡萄糖利用增加，而二甲双胍使心脏内的葡萄糖利用降低。此外，本文中描述的抗人类CGRP抗体抑制肝脏葡萄糖的生成，与施用二甲双胍获得的效应相似。
在正常和改变的葡萄糖代谢的临床前动物模型中评估抗人类CGRP抗体Ab14(一种强效功能性拮抗剂)以判定其在下列大鼠中对胰岛素敏感性和血糖控制的效应：在正常大鼠中(实施例1)、在已进食高脂/高果糖饮食达6周以诱发代谢综合征的高胰岛素血性但血糖量正常的饮食诱发的肥胖(DIO)大鼠中(实施例2)、以及在从糖尿病前(高胰岛素血性，血糖量正常)状态进展至明显糖尿病(低胰岛素血性，高血糖)状态的祖克(Zucker)糖尿病肥胖(ZDF)大鼠中(实施例3)。
在实施例1中，用Ab14来执行高胰岛素血性-正常血糖钳制术研究以判定其在血糖量正常、正常胰岛素血性且具有正常全身和组织特异性胰岛素敏感性的正常大鼠中对全身胰岛素敏感性以及对特定组织的胰岛素敏感性的效应。在高胰岛素血性-正常血糖钳制术程序之前48小时，对正常大鼠按单一100mg/kg施用经静脉给予Ab14。评估刚好在钳制术程序之前所测得的血浆葡萄糖和胰岛素水平发展得到的结果表明，相对于媒介物治疗的对照，Ab14使血浆胰岛素水平降低，而不会改变血浆葡萄糖水平。产生的HOMA-IR降低表明全身胰岛素敏感性的改善。
高胰岛素血性-正常血糖钳制术程序确认了此由CGRP拮抗作用所致的全身胰岛素敏感性的改善，其中在稳态时，相对于媒介物治疗的对照，葡萄糖输注率和全身葡萄糖转换(利用)率二者都是提高的。增加的葡萄糖输注率和全身葡萄糖转换加上不变的胰岛素输注表明全身胰岛素敏感性增加。
与葡萄糖输注率和全身葡萄糖转换的增加一致，相对于媒介物治疗的对照，Ab14使关于糖酵解作用和糖原合成的肝脏葡萄糖利用增加，并且使肝脏葡萄糖的生成减少。这些观察结果指示CGRP拮抗作用使肝脏胰岛素敏感性增加，从而导致增加的肝脏利用，供应更多的内化葡萄糖以供能量产生和储存，而同时抑制重新肝脏葡萄糖的生成。
CGRP拮抗作用也会增加糖酵解以及氧化的骨骼肌(外股肌，指示混合的糖酵解加上氧化；伸趾长肌，指示糖酵解，以及比目鱼肌，指示氧化)的葡萄糖利用。葡萄糖利用最大的增加发生在混合新陈代谢外股肌。这些观察结果表明增加的骨骼肌胰岛素敏感性是由CGRP拮抗作用所造成的。CGRP拮抗作用还增加心脏的葡萄糖利用。相比之下，内脏或皮下蓄积脂肪的葡萄糖利用率不受影响，表明CGRP拮抗作用不会实质增加白色脂肪组织内的胰岛素敏感性。
如上所提及，本研究中使用的动物为血糖量正常大鼠且具有正常全身和肝脏组织特异性胰岛素敏感性，使得改善这些动物的胰岛素敏感性更不容易证明。因而，虽然此研究中所评估的一些个别终点的改善没有达到统计显著性，但是观察到其倾向相同方向，如同所述确实表明增加的研究动力会使额外测得的参数得以达到统计显著性。此外，因为通常实验动物中执行的高胰岛素血性-正常血糖钳制术研究的结果会高度转变成临床背景中执行的高胰岛素血性-正常血糖钳制术研究，这些观察结果表明CGRP拮抗作用改善人类全身和组织特异性胰岛素敏感性的潜力。
在实施例2中，通过慢性施用Ab14所致的CGRP拮抗作用对于胰岛素抗性动物的肝脏和周边的胰岛素敏感性的效应是于长期进食高脂/高果糖饮食所致的高胰岛素血性和胰岛素抗性但非高血糖性的大鼠内进行评估。在开始化合物施用之前，喂食大鼠含69％脂肪和14％果糖的饮食7周来诱发代谢综合征。在7周饮食治疗期间结束时，大鼠继续接受高脂/高果糖饮食，并且按每周一次通过静脉给予剂量为0mg/kg(媒介物)、10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg的Ab14，持续2周。
当与进食高脂肪饮食的媒介物治疗对照组相比时，CGRP拮抗作用对于摄食量或体重没有效应，表明CGRP拮抗作用对于以下所评估额外的参数的效应不是由于卡路里限制或者重量减轻。
在治疗期结束时，相对于媒介物治疗的对照，Ab14的所有剂量均使HOMA-IR降低，表明全身胰岛素敏感性的改善。HOMA-IR的此种下降主要是由于Ab14的所有剂量均出现的血浆胰岛素水平的降低所致。血浆胰岛素的降低是胰岛素产生减少的结果，而不是增加的胰岛素降解所致，因为胰脏胰岛素合成的副产物血浆C肽和血浆胰岛素同样为减少的。两个较低剂量的Ab14只减少血浆葡萄糖水平，但是相对于媒介物治疗的对照，100mg/kg剂量的Ab14却会使血浆葡萄糖水平大幅度减少。
在最后一天治疗后，立即执行两步高胰岛素血性-正常血糖钳制术程序，其首先使用生理量的葡萄糖输注且其次超生理的胰岛素浓度输注。相对于媒介物治疗的对照，在生理和超生理胰岛素输注浓度之后，Ab14的全部三个剂量均使稳态葡萄糖输注率增加。此与全身胰岛素敏感性的改善为一致的。相对于媒介物治疗的对照，在生理胰岛素输注浓度之后，Ab14的全部三个剂量也都会增加全身葡萄糖转换(利用)率，增加糖酵解作用和糖原合成的肝脏的葡萄糖利用，以及抑制肝脏葡萄糖的生成，此与全身和肝脏胰岛素敏感性二者的改善一致。在超生理胰岛素输注浓度之后还完全预防肝脏葡萄糖的生成。
CGRP拮抗作用于正常大鼠体内的急性效应(实施例1)以及于血糖量正常、高胰岛素血性、胰岛素抗性大鼠体内的慢性效应(实施例2)的相似性表明CGRP拮抗作用长期作用来治疗已确立的胰岛素抗性的能力。此外，如上所提及，因为通常实验动物中执行的高胰岛素血性-正常血糖钳制术研究的结果会高度转变成临床背景中执行的高胰岛素血性-正常血糖钳制术研究，这些观察结果表明CGRP拮抗作用改善糖尿病前期或代谢综合征的胰岛素抗性人类的全身和组织特异性胰岛素敏感性的潜力。最后，CGRP拮抗作用使这些血糖量正常动物体内的血浆葡萄糖水平减少的能力(尽管仅在所评估的最高剂量出现)表明CGRP拮抗作用还能使高血糖性患者的血浆葡萄糖水平减少的潜力。
在实施例3中，在从糖尿病前(高胰岛素血性，血糖量正常)状态进展至明显糖尿病(低胰岛素血性，高血糖)状态的ZDF大鼠内评估慢性施用Ab14对于血糖控制的效应。这些动物在7周龄之前产生糖尿病前期，其特征在于有显著的高胰岛素血症来补偿其发展的胰岛素抗性，但是具有轻微的高血糖症或没有高血糖症。此在10-12周龄之前会由于胰脏β细胞衰竭，而快速地进展至明显糖尿病，其特征在于低胰岛素血症以及显著的高血糖症。
ZDF大鼠在8周龄时根据其HOMA-IR进行筛选并用20或60mg/kg的Ab14予以治疗每周一次，持续28天。除了在此动物模型内评估CGRP拮抗剂Ab14对血糖控制的作用以外，还评估了CGRP拮抗作用与市售药物二甲双胍(200mg/kg/天)组合的效应。二甲双胍单独会部分预防空腹血糖的上升，部分预防血浆胰岛素和C肽水平的减少，完全预防胰脏的胰岛素原水平的下降，部分预防胰脏胰岛素水平的下降，以及减少胰岛空泡形成、增生和纤维化，这些为与上文针对高剂量Ab14所描述的程度相似。然而，Ab14与二甲双胍的组合在预防空腹血糖上升、血浆胰岛素和C肽水平减少、胰脏的胰岛素原和胰岛素水平下降以及胰岛纤维化减少方面会产生比任一单独化合物实质上更大的作用。此表明CGRP拮抗剂诸如Ab14可以提高二甲双胍的效应。
此外，在治疗28天后，相对于媒介物治疗的对照，Ab14与二甲双胍的组合导致HbA1c(血红蛋白糖化的标记)水平大幅度下降以及果糖胺水平较小程度的降低。此与Ab14加上二甲双胍的组合比任一单独制剂产生更大的血浆葡萄糖水平降低一致。这些结果表明CGRP拮抗剂与二甲双胍的组合将有利地影响高血糖症介导的糖尿病并发症。
同样地，在研究的第26天执行的口服耐糖试验(oGTT)期间，在葡萄糖推注施用之后，相对于媒介物治疗的动物，高剂量的Ab14与二甲双胍的组合显示出葡萄糖波动和葡萄糖AUC的改善。此外，因为在研究的第26天之前这些动物的β细胞毁坏已经进展至超过其应付葡萄糖激发来使胰岛素分泌增加的能力，所以预期假如早2周或者在β细胞完全的破坏之前的另一时间点执行oGTT，Ab14加上二甲双胍的组合于葡萄糖波动和葡萄糖AUC方面会观察到有更大幅度的改善。
实施例3中使用的ZDF大鼠是非常严重的糖尿病进展模型，此模型经仅数周时程发生从胰岛素抗性的糖尿病前状态快速地进展至β细胞完全破坏的明显糖尿病。此限制了评估疾病进展调节的机会，使得疾病进展和β细胞保护的化合物相关改善难以在这些动物中被证实。因而，如上概述的CGRP拮抗剂Ab14适度延迟疾病进展的任何证明均表明临床上也可能影响疾病进展。此外，经由组合CGRP拮抗作用与二甲双胍以改善整体治疗功效的能力也证明了组合疗法在临床上的功效。
本申请中实施例的结果表明CGRP拮抗作用有改善全身胰岛素敏感性、肝脏胰岛素敏感性和骨骼肌胰岛素敏感性的能力。在正常胰岛素血性和血糖量正常且具有正常胰岛素敏感性的正常的动物体内以及在高胰岛素血性尚未高血糖性的胰岛素抗性动物体内可以敏锐或长期地观察到这些改善。这些结果表明CGRP拮抗作用应会使具有代谢综合征、糖尿病前期或其它糖尿病前病状的患者中存在的胰岛素抗性降低，而且CGRP拮抗作用可以能够减缓这些疾病进展至明显糖尿病。
此外，CGRP拮抗剂Ab14通过使胰岛素分泌减少而使胰岛素抗性动物体内高胰岛素血症降低的能力表明Ab14可能通过使胰岛素抗性动物的胰脏休息而对胰脏β细胞具有防护效应。此在临床上可进一步延迟代谢综合征、糖尿病前期和其它糖尿病前病状进展至明显糖尿病。
此外，Ab14使胰岛素抗性、高胰岛素血性但是血糖量正常的大鼠的血浆葡萄糖水平降低的能力和使ZDF大鼠的糖尿病前期进展至明显糖尿病变缓慢的能力以及在几乎没有或没有任何增加胰岛素产生的残余能力的明显糖尿病动物中维持降低的血浆葡萄糖水平的能力表明CGRP的拮抗作用可能不仅有能力影响如上概述的糖尿病前状态的疾病进展，而且还有能力影响明显糖尿病疾病进展。
因而，这些研究的结果合起来清楚地表明，CGRP拮抗剂诸如Ab14可以在临床背景下有利地影响具有糖尿病前病状的患者以及具有发展中或明显糖尿病的患者的胰岛素抗性和异常血糖控制。
最后，CGRP拮抗剂Ab14提高二甲双胍于ZDF大鼠体内效应的能力表明，相对于单独Ab14或二甲双胍，Ab14-二甲双胍的组合疗法有成为优秀的临床功效的潜力，用于治疗具有糖尿病前病状的患者、具有发展中显糖尿病的患者以及有明显糖尿病的患者。
定义
应了解，本发明不限于所描述的特定方法学、方案、细胞系、动物物种或属，以及试剂，因这些可以变化。还应了解，本文中所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，以及不欲限制本发明的范畴，本发明仅受附随权利要求书限定。除非上下文明确另外规定，否则如本文中所用的单数形式"一个/种"、"和"，以及"所述"包括复数的所指对象。因此，举例来说，提及"一个细胞"时，包括多个此类细胞，以及提及"所述蛋白质"时，包括提及一种或多种蛋白质和本领域技术人员已知的其等效物，依此类推。除非明确另外规定，否则本文中所使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员通常了解的含义相同。
降钙素基因相关肽(CGRP)：如本文中所用，CGRP不仅包含可从AmericanPeptides(SunnyvaleCA)与Bachem(Torrance，CA)获得的下列智人(Homosapiens)CGRP-α与智人CGRP-β氨基酸序列：
CGRP-α：ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(SEQIDNO:281)，其中N端苯丙氨酸经酰胺化。除非另外指明，否则一般来说提及“CGRP”通常是指CGRP-α。CGRP-α以可互换方式称为αCGRP或α-CGRP。
CGRP-β：ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2(SEQIDNO:282)，其中N端苯丙氨酸经酰胺化；而且还包含这些CGRP氨基酸序列的任何膜结合形式，以及突变体(突变蛋白)、剪接变体、异构体、直向同源物、同源物和此序列的变体。CGRP-β以可互换方式称为βCGRP或β-CGRP。
血糖量正常：在本公开中，术语血糖量正常或血糖正常是指具有正常血糖浓度的状态。人体内例示性正常血糖浓度在空腹成年人中介于70mg/dl和99mg/dl之间，以及在餐后的成年人中介于70mg/dl和140mg/dl之间。持续的血糖量正常是指血糖量正常维持延长期限，例如至少一天、至少二天、至少一周、至少2周、至少一个月或更久。
配对胜任酵母物种：在本发明中，此是意欲广泛地包含任何能于培养物内生长的二倍体或四倍体酵母。这些酵母的物种可以以单倍体、二倍体或其它多倍体形式存在。于适当条件下，给定多倍体的细胞可以以所述形式增殖无限数目的世代。二倍体细胞也能形成孢子以形成单倍体细胞。连续配对能经由进一步二倍体菌株的配对或融合而产生四倍体菌株。本发明设想单倍体酵母的用途，以及例如通过配对或原生质球融合所产生的二倍体或其它多倍体酵母细胞的用途。
在本发明的一个实施方案中，配对胜任酵母是酵母科(Saccharomycetaceae)家族的成员，其包括：阿席欧酵母(Arxiozyma)属；粪盘菌(Ascobotryozyma)属；固囊酵母(Citeromyces)属；得巴利酵母(Debaryomyces)属；德克酵母(Dekkera)属；假囊酵母(Eremothecium)属；伊萨酵母(Issatchenkia)属；哈萨克斯坦酵母(Kazachstania)属；克鲁维酵母(Kluyveromyces)属；柯达菌(Kodamaea)属；路德酵母(Lodderomyces)属；管囊酵母(Pachysolen)属；毕赤酵母(Pichia)属；酵母(Saccharomyces)属；木霉菌属(Saturnispora)；四重孢酵母属(Tetrapisispora)；有孢圆酵母(Torulaspora)属；拟威尔酵母(Williopsis)属；以及接合酵母(Zygosaccharomyces)属。本发明中可能有用的其它类酵母包括：耶罗威亚(Yarrowia)；红冬孢酵母(Rhodosporidium)；念珠菌(Candida)；汉逊酵母(Hansenula)；线黑粉菌(Filobasidium)；锁掷酵母(Sporidiobolus)；布勒掷孢酵母(Bullera)；白冬孢酵母(Leucosporidium)以及拟线黑粉菌(Filobasidiella)。
在本发明的一个实施方案中，配对胜任酵母是毕赤酵母属成员。在本发明的另一实施方案中，毕赤酵母属的配对胜任酵母是下列物种之一：巴斯德毕赤酵母、甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)以及多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)(安格斯毕赤酵母(Pichiaangusta))。在本发明的一个例示性实施方案中，毕赤酵母属的配对胜任酵母是巴斯德毕赤酵母物种。
单倍体酵母细胞：其正常基因组(染色体)组的各基因具有单一拷贝的细胞。
多倍体酵母细胞：其正常基因组(染色体)组具有多于一个拷贝的细胞。
二倍体酵母细胞：其正常的基因组互补物的基本上每个基因具有2个拷贝(等位基因)，通常地是通过2个单倍体细胞的融合的过程(配对)而形成的细胞。
四倍体酵母细胞：其正常基因组互补物的基本上每个基因具有4个拷贝(等位基因)，通常地是通过2个单倍体细胞的融合的过程(配对)而形成的细胞。四倍体可以带有2、3、4个或更多个不同的表达卡匣。这些四倍体可以通过以下方式获得：于啤酒酵母内选择性配对同型接合的异宗配合的a/a和α/α二倍体，以及于毕赤酵母内通过连续单倍体配对以获得营养缺陷型的二倍体。举例来说，一个[methis]单倍体可以配对以[adehis]单倍体以获得二倍体[his]；以及一个[metarg]单倍体可以配对以[adearg]单倍体以获得二倍体[arg]；接而所述二倍体[his]x二倍体[arg]以获得一个四倍体原养型微生物。本领域技术人员将了解所提及的二倍体细胞的优势与用途也可以应用至四倍体细胞。
酵母配对：两个单倍体酵母细胞天然融合以形成一个二倍体酵母细胞的过程。
减数分裂：一个二倍体酵母细胞经历减少性分裂以形成四个单倍体孢子产物的过程。各孢子接而可以生长且形成一个单倍体有生长力的成长细胞系。
可选标记：可选标记是基因或基因片段，其举例来说经由转化事件，会赋予接受那个基因的细胞一种生长表型(生理生长特征)。可选标记允许那个细胞在未接受那个可选标记基因的细胞无法生长的条件下，可于选择性生长培养基中存活和生长。可选标记基因通常属于若干类型，包括：正向可选标记基因，诸如赋予细胞对抗生素或其它药物的抗性的基因，或当杂交2个温度敏感(“ts”)突变体或转化1个ts突变体时，赋予细胞对于温度抗性的基因；负向可选标记基因，诸如生物合成的基因，其赋予细胞在缺乏特定营养素的培养基内生长的能力，所述营养素是不具有那个生物合成的基因的所有细胞所需者，或诱变的生物合成的基因，其赋予细胞因没有所述野生型基因的细胞而无法生长；和类似物。合适的标记包括但不限于：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3；和类似物。
表达载体：这些DNA载体含有帮助操作外来蛋白质于目标宿主细胞内表达的元件。方便地，首先于细菌宿主，例如大肠杆菌内执行序列的操作和供转化的DNA的产生，且载体通常会包括促进这些操作的序列，包括复制的细菌来源和适当的细菌筛选标记。筛选标记是编码经转化的宿主细胞于选择性培养基中存活或生长必须的蛋白质。宿主细胞如果未经含有筛选基因的载体转化，则无法在所述培养基中存活。通常的筛选基因所编码的蛋白质是(a)赋予对于抗生素或其它毒素的抗性，(b)补充营养缺陷型缺陷，或(c)供应无法从复合培养基获得的关键性营养素。例示性载体以及用于转化酵母的方法描述于例如Burke,D.,Dawson,D.,&Stearns,T.(2000)。“MethodsinYeastGenetics:AColdSpringHarborLaboratoryCourseManual.”Plainview,N.Y.:ColdSpringHarborLaboratoryPress中。
供用在本发明的方法的表达载体会还包括酵母的特异性序列，包括用于鉴定经转化的酵母菌株的可选营养缺陷型或药物标记。药物标记可以还用来选择扩增酵母宿主细胞内的载体拷贝的数目。
编码目标序列的多肽是操作地连接至转录和翻译调控序列，所述转录和翻译调控序列提供用于酵母细胞内的多肽的表达。这些载体组份可以包括但不限于下列的一种或多种：增强子元件、启动子以及转录终止序列。还可以包括关于所述多肽的分泌的序列，例如信号序列和类似物。酵母的复制的原点是任选的，因表达载体往往被并入至酵母的基因组内。在本发明的一个实施方案中，目标多肽是被操作地连接，或被融合至来自酵母二倍体细胞的序列以提供优化的多肽分泌。
当核酸与另一个核酸序列置于功能关系时，则所述核酸是"操作地连接"。举例来说，如果信号序列的DNA是表达为参与多肽的分泌之前蛋白，则所述信号序列的DNA是操作地连接至所述多肽的DNA；如果启动子或增强子影响序列的转录，则所述启动子或增强子是操作地连接至所述编码序列。一般来说，“操作地连接”是指连接的DNA序列是相邻的，和在分泌前导序列的情况是相邻和位于同一读框中。然而，增强子不一定要相邻。连接是在合宜的限制位点通过接合作用而完成，或可选地通过本领域技术人员所熟悉的PCR/重组方法(Technology；Invitrogen,CarlsbadCalifornia)来实现。如果这些位点不存在，合成的寡核苷酸接合体或接头是依照惯用的惯例使用。
启动子是位于结构基因的起始密码子的上游(5')(通常在约100至1000bp的范围内)的未翻译的序列，其控制其操作地连接的特定核酸序列的转录和翻译。这些启动子属于若干种类：可诱导性、组成性的以及可抑制的启动子(其对缺乏抑制子反应而增加转录的水平)。可诱导性启动子可以对培养条件的一些变化作出反应，例如，存在或缺少营养素或温度的变化，而在其控制的下起始来自DNA的增加水平的转录。
酵母的启动子片段也可以作用为同源重组的位点，以及表达载体并入至酵母的基因组内的相同位点；可选地，使用可选标记作为同源重组的位点。毕赤酵母的转化描述于Cregg等人，Mol.Cell.Biol.5:3376-3385，1985中。
来自毕赤酵母的适宜启动子的实例包括AOX1和启动子(Cregg等人Mol.Cell.Biol.9:1316-1323，(1989))；ICL1启动子(Menendez等人Yeast20(13):1097-108，(2003))；甘油醛-3-磷酸去氢酶启动子(GAP)(Waterham等人Gene186(1):37-44，(1997))；以及FLD1启动子(Shen等人Gene216(1):93-102，(1998))。GAP启动子是强组成性启动子，而AOX和FLD1启动子是可诱导性启动子。
其它酵母启动子包括：ADH1、乙醇去氢酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk以及自其衍生的嵌合启动子。此外，本发明中可以使用非酵母的启动子，诸如哺乳动物、昆虫、植物、爬虫类、两栖动物、病毒以及鸟类的启动子。最通常地，启动子会包含哺乳动物的启动子(可能对表达的基因是内源的)，或会包含于酵母系统中提供有效转录的酵母的启动子或病毒的启动子。
目标多肽不仅可以直接重组产生，而且也可以为带有一种异源多肽的融合多肽，异源多肽例如为信号序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定分裂的位点的其它多肽。一般来说，信号序列可以是载体的一个组份，或者其可以是插入至载体内的多肽编码序列的一部分。选择的异源信号序列优选是经由宿主细胞内的标准途径的一种所鉴定且处理者。啤酒酵母α因子原前信号已经被证实可有效分泌来自巴斯德毕赤酵母的各种重组型蛋白。其它酵母信号序列包括α配对因子信号序列、转化酶信号序列以及衍生自其它分泌的酵母多肽的信号序列。此外，这些信号肽序列可以是经工程化的，来用于提高于二倍体酵母表达系统内的分泌。其它目标分泌信号还包括哺乳动物的信号序列，其对于待分泌的蛋白可以是异源的，或可以是待分泌的蛋白的天然序列。信号序列包括前肽序列，并且在一些情况下可以包括原肽序列。许多这些信号序列是本领域中已知的，包括免疫球蛋白链上发现的信号序列，例如K28原前毒素序列、PHA-E、FACE、人类MCP-1、人类血清白蛋白信号序列、人类Ig重链、人类Ig轻链和类似物。举例来说，参见Hashimoto等人，ProteinEng11(2)75(1998)；以及Kobayashi等人，TherapeuticApheresis2(4)257(1998)。
可以通过插入转录活化子序列至载体中来增加转录。这些活化子是顺式DNA作用元件，通常为约10至300bp，其作用于启动子以增加其转录。转录增强子是相对地定位且位置独立的，已经发现转录增强子位于转录单元的5'和3'、在内含子内以及在编码序列本身内。增强子可以被剪接至表达载体中位于编码序列的5'或3'位置，但是优选地位于启动子的5'位点。
真核宿主细胞中使用的表达载体也可以含有转录终止以及稳定mRNA必需的序列。此类序列通常可得自于真核或病毒DNA或cDNA的未翻译区的翻译终止密码子的3'。这些区域含有的核苷酸区段转录为mRNA的未翻译部分内聚腺苷酸化片段。
使用标准连接技术或PCR/重组方法来建构含有一个或多个以上列出的组件的合适载体。将经分离的质粒或DNA片段按产生所需质粒所需形式切开、修改以及再连接，或通过重组方法来产生。为了分析以确认建构的质粒内的正确序列，使用连接混合物来转化宿主细胞，并酌情通过适当的抗生素抗性(例如氨比西林(ampicillin)或吉欧霉素(Zeocin))来选择成功的转化体。制备来自所述转化体的质粒，通过限制核酸内切酶消化和/或定序予以分析。
作为片段的限制和连接的替代方案，可使用基于att位点的重组方法和重组酶将DNA序列插入至载体中。此类方法描述于例如LandyAnn.的Rev.Biochem.58:913-949(1989)中；并且是本领域普通技术人员已知的。此类方法利用分子内DNA重组，其是通过λ和大肠杆菌编码的重组型蛋白的混合物所介导。重组发生于相互作用的DNA分子的特定连接(att)位点之间。关于att位点的描述参见Weisberg和Landy(1983)“Site-SpecificRecombinationinPhageLambda,inLambdaII”，Weisberg编(ColdSpringHarbor,N.Y.:ColdSpringHarborPress)，第211-250页。将位于重组位点的侧边的DNA区段交换以便在重组后att位点由各亲代载体所捐赠的序列组成的杂种序列。重组可发生于任何拓扑的DNA之间。
Att位点可以通过以下方式引入目标序列中：将目标序列连接至适当的载体中；经由使用特定引物来产生含有attB位点的PCR产物；产生经克隆至含有att位点的适当载体中的cDNA文库等。
如本文中所用，折叠是指多肽与蛋白质的三维结构，其中氨基酸残基之间的相互作用发挥功用而稳定所述结构。虽然非共价的相互作用在决定结构上是重要的，但是通常目标蛋白质会具有由2个半胱氨酸残基形成的分子内的和/或分子间的共价二硫键。关于天然存在的蛋白质与多肽或衍生物及其变体，适当的折叠通常地导致最理想的生物活性的排列，以及能方便地通过活性分析予以监测，例如配体结合、酶活性等。
在一些情况下，例如所需产物属于合成来源时，以生物活性为基础的测定会是较无意义的。此类分子的适当折叠可以基于生理性质、积极的考虑、模型研究等来决定。
可以通过引入编码提高折叠和二硫键形成的一种或多种酶(即折叠酶、伴侣蛋白等)的序列来进一步修饰表达宿主。此类序列可以利用如本领域中已知的载体、标记等而组成地或可诱导地表达于酵母宿主细胞中。所述序列(包括足以促成所需表达模式的转录调控元件)优选经由靶向方法而稳定地整合至酵母基因组中。
举例来说，真核PDI不仅是蛋白半胱氨酸氧化和二硫键同分异构作用的有效催化剂，而且也展现出分子伴侣活性。PDI的共表达能帮助具有多个二硫键的活性蛋白质的产生。人们对BIP(免疫球蛋白重链结合蛋白)；亲环蛋白；和类似物的表达也感兴趣。在本发明的一个实施方案中，单倍体亲代菌株中的各者表达不同的折叠酶，例如一种菌株可以表达BIP，而另一种菌株可以表达PDI或其组合。
术语"所需蛋白"或"所需抗体"可互换使用，且通常是指如本文中所描述的对于目标即CGRP具有特异性的亲代抗体或者自其衍生的嵌合或人源化抗体或其结合部分。术语“抗体”意欲包括任何含有多肽链的分子结构，其具有适合且鉴定表位的特定形状，其中一种或多种非共价结合相互作用使分子结构和表位之间的复合体稳定。原型抗体分子是免疫球蛋白，且来自所有来源(例如人类、啮齿动物、兔、奶牛、绵羊、猪、狗、其它哺乳动物、鸡、其它鸟类等)的所有类型免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等均被认为是“抗体”。根据本发明，可用作起始材料产生抗体的来源是兔。许多抗体编码序列已经被描述过；并且其它可以通过本领域中所熟知的方法培育出。其实例包括嵌合抗体、人类抗体和其它非人类哺乳动物抗体、人源化抗体、单链抗体(诸如scFv)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR(源自鲨鱼的单链抗体)、小分子免疫药物(SMIP)，以及抗体片段诸如Fab、F(ab')2等。参见StreltsovVA等人，StructureofasharkIgNARantibodyvariabledomainandmodelingofanearly-developmentalisotype,ProteinSci.11月；14(11):2901-9(2005),电子版20059月30日；GreenbergAS等人，Anewantigenreceptorgenefamilythatundergoesrearrangementandextensivesomaticdiversificationinsharks,Nature,3月9日；374(6518):168-73(1995)；NuttallSD等人，Isolationofthenewantigenreceptorfromwobbegongsharks,anduseasascaffoldforthedisplayofproteinlooplibraries,MolImmunol.8月；38(4):313-26(2001)；Hamers-CastermanC等人，Naturallyoccurringantibodiesdevoidoflightchains,Nature.1993年6月3日；363(6428):446-8；GillDS等人，Biopharmaceuticaldrugdiscoveryusingnovelproteinscaffolds,CurrOpinBiotechnol.12月；17(6):653-8(2006),电子版2006年10月19日。
举例来说，抗体或抗原结合片段可以通过基因工程来产生。在此种技术中，如同用其它方法，产生抗体的细胞对所需抗原或免疫原敏感。自抗体产生细胞分离的信使RNA用作模板以利用PCR扩增来制备cDNA。通过在表达载体中插入经扩增的免疫球蛋白cDNA的适当区段来产生载体文库，各载体含有保留起初抗原特异性的一个重链基因和一个轻链基因。通过将重链基因文库与轻链基因文库组合而建构组合文库。此导致共表达重链与轻链(类似抗体分子的Fab片段或抗原结合片段)的克隆文库。将携带这些基因的载体共转染至宿主细胞中。在经转染的宿主内抗体诱导基因合成时，重链与轻链蛋白会自行组装以产生活性抗体，其可通过抗原或免疫原筛选进行检测。
目标抗体编码序列包括由天然序列所编码的那些，以及由于遗传密码子的简并而与公开的核酸在序列上不相同的核酸、以及其变体。变体多肽能包括氨基酸(“aa”)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以是保守性氨基酸取代或消除非必须氨基酸的取代，诸如改变糖基化作用位点，或通过取代或缺失非功能所必需的一个或多个半胱氨酸残基以使错误折叠最小化。可设计变体以便保留或提高蛋白质的特定结构域(例如，功能结构域、催化性氨基酸残基等)的生物活性。变体还包括本文中所公开的多肽的片段，尤其生物活性片段和/或对应于功能性结构域的片段。克隆基因的体外诱变的技术为已知的。本发明还包括已经使用普通分子生物技术来修饰的多肽，从而改善其对蛋白水解降解的抗性或使溶解度性质优化或使其更合适作为治疗剂。
可以通过将获自一种物种的抗体产生细胞的可变轻链区和重链区(VL和VH)与来自另一物种的恒定轻链区和重链区组合的重组手段来制备嵌合抗体。嵌合抗体通常利用啮齿动物或兔的可变区以及人类恒定区，以产生主要是人类结构域的抗体。此类嵌合抗体的产生是本领域中所熟知的，并且可以通过标准手段来达成(如例如美国专利第5,624,659号中所描述，所述专利以全文引用方式并入本文中)。还预期本发明的嵌合抗体的人类恒定区可以选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区。
人源化抗体经工程化以含有甚至更多的类人免疫球蛋白结构域，并且仅并入动物来源的抗体的互补决定区。此通过检查单株抗体的可变区的高变环的序列以使其适合于人类抗体链的结构来达成。尽管表面错综复杂，但在实践上方法是简单的。参见，例如美国专利第6,187,287号，所述专利以引用方式全部并入本文中。
除了完整免疫球蛋白(或其重组对应体)以外，还可以合成包含表位结合位点的免疫球蛋白片段(例如，Fab、F(ab’)2或其它片段)。“片段”或最小的免疫球蛋白可以利用重组免疫球蛋白技术来设计。例如，可以通过合成融合的可变轻链区与可变重链区来产生供用于本发明中的“Fv”免疫球蛋白。抗体的组合也是令人感兴趣的，例如，二聚抗体，其包含两个不同的Fv特异性。在本发明的另一实施方案中，免疫球蛋白片段包含SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体和IgNAR。
免疫球蛋白及其片段可以经翻译后修饰，例如以添加可以使用在本发明的方法和组合物中的效应部分，诸如化学接头、可检测部分(诸如荧光染料、酶、毒素、底物、生物发光物质、放射性物质、化学发光部分等)或特异性结合部分(诸如链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或生物素等)。以下提供额外的效应分子的实例。
如果依照遗传密码子翻译多核苷酸序列产生多肽序列，那么多核苷酸序列"对应"于多肽序列(即，多核苷酸序列"编码"多肽序列)，如果两个序列编码相同的多肽序列，那么一个多核苷酸序列"对应"于另一个多核苷酸序列。
DNA建构体的"异源性"区域或结构域是更大DNA分子内的DNA的可鉴定区段，所述区段未发现与自然界存在的所述更大分子有所关连。因此，当异源区域编码哺乳动物基因时，所述基因两侧的DNA在来源生物体的基因组中通常并非侧临哺乳类动物基因组DNA。另一个异源区域的实例是建构体，其中编码序列本身在自然界中不存在(例如，其中基因组编码序列含有内含子的cDNA或具有不同于天然基因的密码子的合成序列)。等位基因变异或天然存在的突变事件并不会产生如本文中所界定的DNA的异源区域。
"编码序列"是对应于或编码蛋白质或肽序列的框内密码子序列(考虑到遗传密码子)。如果所述序列或其互补序列编码相同的氨基酸序列，那么这两个编码序列彼此对应。编码序列连同适当的调控序列可以经转录并翻译成多肽。聚腺苷酸化信号和转录终止序列通常会位于所述编码序列的3'。"启动子序列"是DNA调控区域，其能够结合细胞内的RNA聚合酶并且起始下游(3'方向)编码序列的转录。启动子序列通常含有供结合影响编码序列的转录的调控分子(例如，转录因子)的额外位点。当RNA聚合酶结合细胞内启动子序列且转录所述编码序列成为mRNA时，编码序列是在启动子序列的"控制下"或"操作地连接"至启动子，所述mRNA接而翻译成由编码序列编码的蛋白。
载体用来将外来物质(诸如DNA、RNA或蛋白质)引入有机体或宿主细胞中。典型载体包括重组病毒(用于多核苷酸)和脂质体(用于多肽)。"DNA载体"是复制子，诸如质粒、噬菌体或粘粒，其可以被另一个多核苷酸区段连接以导致连接区段的复制。"表达载体"是含有调节序列的DNA载体，所述调节序列通过适当的宿主细胞引导多肽合成。此通常意谓启动子与RNA聚合酶结合并且起始mRNA的转录，以及核糖体结合位点和起始信号引导mRNA翻译成多肽。在恰当的位点且在正确读框内并入一种多核苷酸序列至表达载体内，接着由载体来转化适当的宿主细胞，使得能够产生由所述多核苷酸序列编码的多肽。
多核苷酸序列的"扩增"是体外产生多拷贝的特定核酸序列。经扩增的序列通常呈DNA形式。进行此类扩增的各种技术描述于VanBrunt的综述文章中(Bio/Technol.,8(4):291-294(1990))。聚合酶连锁反应或PCR是核酸扩增的原型，并且本文中PCR的使用应视为其它合适的扩增技术的示范。
现已充分了解脊椎动物的抗体的一般结构(Edelman,G.M.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,190:5(1971))。抗体由分子量为大约23,000道尔顿的2个相同轻多肽链(“轻链”)和分子量为53,000-70,000的2个相同重链(“重链”)组成。4条链通过二硫键连接成“Y”构型，其中重链从“Y”构型的口部开始托住轻链。“Y”构型的“分支”部分称为Fab区；“Y”构型的茎部分称为FC区。氨基酸序列定位自“Y”构型顶部的N端末端进行至各链底部的C端末端。N端末端拥有可变区，可变区对于引出其的抗原具有特异性，且在长度上为大约100个氨基酸，在轻链与重链之间以及抗体与抗体之间有轻微的差异。
各链内的可变区连接至恒定区，其延伸链的余下长度，并且在特定种类的抗体中不随着抗体的特异性(即，引出其的抗原)而变化。有五种已知的主要种类的恒定区，其决定免疫球蛋白分子的种类(IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，对应于γ、μ、α、δ和ε(伽马(gamma)、缪(mu)、阿尔法(alpha)、德尔塔(delta)或伊普西龙(epsilon))重链恒定区)。恒定区或种类决定抗体随后的效应功能，包括补体的活化(Kabat,E.A.,StructuralConceptsinImmunologyandImmunochemistry,第2版,第413-436页,Holt,Rinehart,Winston(1976))，以及其它细胞反应(Andrews,D.W.，等人，ClinicalImmunobiology,第1-18页,W.B.Sanders(1980)；Kohl,S.，等人，Immunology,48:187(1983))；同时可变区决定其所反应的抗原。轻链分类为κ(卡帕(kappa))或λ(兰布达(lambda))。各重链种类能与κ或λ轻链制备。当由融合瘤或由B细胞产生免疫球蛋白时，轻链与重链互相共价键结，并且两个重链的“尾”部分通过共价二硫键而互相键结。
措辞“可变区”或“VR”是指抗体内各对轻链与重链内的区域，其直接参与抗体与抗原的结合。各重链在一端有可变域(VH)，接着为一些恒定域。各轻链在一端有可变域(VL)并且在其的另一端有恒定域；轻链的恒定域与重链的第一恒定域对齐，并且轻链可变域与重链可变域对齐。
措辞“互补决定区”、“高变区”或“CDR”是指抗体的轻链或重链的可变区内存在的一个或多个高变或互补决定区(CDR)(参见Kabat,E.A.等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.,(1987))。这些措辞包括如Kabat等人所定义的高变区(“SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,”KabatE.，等人，USDept.ofHealthandHumanServices,1983)或抗体的3维结构中的高变环(Chothia和Lesk,JMol.Biol.196901-917(1987))。各链内的CDR是通过构架区而保持很靠近并且与另一个链的CDR一起促成抗原结合位点的形成。在CDR内有已经被说明为选择性决定区(SDRs)的选出的氨基酸，其代表抗体-抗原相互作用中CDR所使用的关键接触残基(Kashmiri,S.,Methods,36:25-34(2005))。
措辞“构架区”或“FR”是指在抗体的轻链与重链的可变区内的一个或多个构架区(参见Kabat,E.A.等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.,(1987))。这些措辞包括插入于抗体的轻链与重链的可变区内CDR之间的氨基酸序列区域。
具有CGRP结合活性的抗CGRP抗体与其结合片段
本发明方法的例示性实施方案包含施用抗CGRP抗体及其片段至个体。例示性抗CGRP抗体与片段描述于美国专利公开第2012/0294797号中，其以全文引用方式并入本文中，而其它例示性抗CGRP抗体描述于接下来的段落中。
抗体Ab1
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQIDNO:1)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:2)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:3)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:4)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:5；SEQIDNO:6；和SEQIDNO:7的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:1的可变轻链序列或SEQIDNO:2的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:8；SEQIDNO:9；和SEQIDNO:10的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:3的可变重链序列或SEQIDNO:4的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:5；SEQIDNO:6；和SEQIDNO:7的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:5；SEQIDNO:6；和SEQIDNO:7的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:1的可变轻链序列或SEQIDNO:2的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:8；SEQIDNO:9；和SEQIDNO:10的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:8；SEQIDNO:9；和SEQIDNO:10的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:3的可变重链序列或SEQIDNO:4的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:1的可变轻链区；SEQIDNO:3的可变重链区；SEQIDNO:1的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:5；SEQIDNO:6；和SEQIDNO:7)；以及SEQIDNO:3的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:8；SEQIDNO:9；和SEQIDNO:10)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab1，其包含SEQIDNO:2与SEQIDNO:4，或可选地由SEQIDNO:2与SEQIDNO:4组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另外的优选实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab1，Fab片段包括SEQIDNO:1的可变轻链序列和SEQIDNO:3的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:3的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab1的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab1或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)。
抗体Ab2
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:11)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:12)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:13)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:14)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:15；SEQIDNO:16；和SEQIDNO:17的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:11的可变轻链序列或SEQIDNO:12的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:18；SEQIDNO:19；和SEQIDNO:20的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:13的可变重链序列或SEQIDNO:14的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:11或SEQIDNO:12的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:11或SEQIDNO:12的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:13或SEQIDNO:14的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:13或SEQIDNO:14的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:15；SEQIDNO:16；和SEQIDNO:17的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:15；SEQIDNO:16；和SEQIDNO:17的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:11的可变轻链序列或SEQIDNO:12的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:18；SEQIDNO:19；和SEQIDNO:20的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:18；SEQIDNO:19；和SEQIDNO:20的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:13的可变重链序列或SEQIDNO:14的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:11的可变轻链区；SEQIDNO:13的可变重链区；SEQIDNO:11的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:15；SEQIDNO:16；和SEQIDNO:17)；以及SEQIDNO:13的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:18；SEQIDNO:19；和SEQIDNO:20)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab2，其包含SEQIDNO:12与SEQIDNO:14，或可选地由SEQIDNO:12与SEQIDNO:14组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab2，Fab片段包括SEQIDNO:11的可变轻链序列和SEQIDNO:13的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:13的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab2的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab2或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab3
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:21)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:22)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:23)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:24)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:25；SEQIDNO:26；和SEQIDNO:27的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:21的可变轻链序列或SEQIDNO:22的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:28；SEQIDNO:29；和SEQIDNO:30的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:23的可变重链序列或SEQIDNO:24的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:21或SEQIDNO:22的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:21或SEQIDNO:22的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:25；SEQIDNO:26；和SEQIDNO:27的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:25；SEQIDNO:26；和SEQIDNO:27的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:21的可变轻链序列或SEQIDNO:22的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:28；SEQIDNO:29；和SEQIDNO:30的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:28；SEQIDNO:29；和SEQIDNO:30的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:23的可变重链序列或SEQIDNO:24的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:21的可变轻链区；SEQIDNO:23的可变重链区；SEQIDNO:21的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:25；SEQIDNO:26；和SEQIDNO:27)；以及SEQIDNO:23的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:28；SEQIDNO:29；和SEQIDNO:30)。
在本发明的一个实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab3，其包含SEQIDNO:22与SEQIDNO:24，或可选地由SEQIDNO:22与SEQIDNO:24组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab3，Fab片段包括SEQIDNO:21的可变轻链序列和SEQIDNO:23的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:21和/或SEQIDNO:23的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab3的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab3或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab4
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQIDNO:31)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:32)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:33)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:34)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:35；SEQIDNO:36；和SEQIDNO:37的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:31的可变轻链序列或SEQIDNO:32的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:38；SEQIDNO:39；和SEQIDNO:40的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:33的可变重链序列或SEQIDNO:34的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:31或SEQIDNO:32的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:31或SEQIDNO:32的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:33或SEQIDNO:34的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:33或SEQIDNO:34的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:35；SEQIDNO:36；和SEQIDNO:37的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:35；SEQIDNO:36；和SEQIDNO:37的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:31的可变轻链序列或SEQIDNO:32的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:38；SEQIDNO:39；和SEQIDNO:40的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:38；SEQIDNO:39；和SEQIDNO:40的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:33的可变重链序列或SEQIDNO:34的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:31的可变轻链区；SEQIDNO:33的可变重链区；SEQIDNO:31的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:35；SEQIDNO:36；和SEQIDNO:37)；以及SEQIDNO:33的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:38；SEQIDNO:39；和SEQIDNO:40)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab4，其包含SEQIDNO:32与SEQIDNO:34，或可选地由SEQIDNO:32与SEQIDNO:34组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab4，Fab片段包括SEQIDNO:31的可变轻链序列和SEQIDNO:33的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:31和/或SEQIDNO:33的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab4的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab4或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab5
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:41)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:42)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:43)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:44)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:45；SEQIDNO:46；和SEQIDNO:47的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:41的可变轻链序列或SEQIDNO:42的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:48；SEQIDNO:49；和SEQIDNO:50的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:43的可变重链序列或SEQIDNO:44的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:41或SEQIDNO:42的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:41或SEQIDNO:42的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:43或SEQIDNO:44的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:43或SEQIDNO:44的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:45；SEQIDNO:46；和SEQIDNO:47的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:45；SEQIDNO:46；和SEQIDNO:47的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:41的可变轻链序列或SEQIDNO:42的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:48；SEQIDNO:49；和SEQIDNO:50的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:48；SEQIDNO:49；和SEQIDNO:50的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:43的可变重链序列或SEQIDNO:44的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:41的可变轻链区；SEQIDNO:43的可变重链区；SEQIDNO:41的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:45；SEQIDNO:46；和SEQIDNO:47)；以及SEQIDNO:43的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:48；SEQIDNO:49；和SEQIDNO:50)。
在本发明的一个实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab5，其包含SEQIDNO:42与SEQIDNO:44，或可选地由SEQIDNO:42与SEQIDNO:44组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab5，Fab片段包括SEQIDNO:41的可变轻链序列和SEQIDNO:43的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:41和/或SEQIDNO:43的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab5的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab5或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab6
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:51)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:52)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:53)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:54)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:55；SEQIDNO:56；和SEQIDNO:57的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:51的可变轻链序列或SEQIDNO:52的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:58；SEQIDNO:59；和SEQIDNO:60的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:53的可变重链序列或SEQIDNO:54的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:51或SEQIDNO:52的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:51或SEQIDNO:52的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:53或SEQIDNO:54的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:53或SEQIDNO:54的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:55；SEQIDNO:56；和SEQIDNO:57的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:55；SEQIDNO:56；和SEQIDNO:57的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:51的可变轻链序列或SEQIDNO:52的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:58；SEQIDNO:59；和SEQIDNO:60的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:58；SEQIDNO:59；和SEQIDNO:60的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:53的可变重链序列或SEQIDNO:54的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:51的可变轻链区；SEQIDNO:53的可变重链区；SEQIDNO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:55；SEQIDNO:56；和SEQIDNO:57)；以及SEQIDNO:53的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:58；SEQIDNO:59；和SEQIDNO:60)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab6，其包含SEQIDNO:52与SEQIDNO:54，或可选地由SEQIDNO:52与SEQIDNO:54组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab6，Fab片段包括SEQIDNO:51的可变轻链序列和SEQIDNO:53的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:51和/或SEQIDNO:53的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab6的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab6或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab7
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQIDNO:61)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:62)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:63)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:64)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:65；SEQIDNO:66；和SEQIDNO:67的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:61的可变轻链序列或SEQIDNO:62的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:68；SEQIDNO:69；和SEQIDNO:70的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:63的可变重链序列或SEQIDNO:64的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:61或SEQIDNO:62的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:61或SEQIDNO:62的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:63或SEQIDNO:64的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:63或SEQIDNO:64的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:65；SEQIDNO:66；和SEQIDNO:67的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:65；SEQIDNO:66；和SEQIDNO:67的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:61的可变轻链序列或SEQIDNO:62的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:68；SEQIDNO:69；和SEQIDNO:70的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:68；SEQIDNO:69；和SEQIDNO:70的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:63的可变重链序列或SEQIDNO:64的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:61的可变轻链区；SEQIDNO:63的可变重链区；SEQIDNO:61的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:65；SEQIDNO:66；和SEQIDNO:67)；以及SEQIDNO:63的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:68；SEQIDNO:69；和SEQIDNO:70)。
在本发明的一个特别优选实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab7，其包含SEQIDNO:62与SEQIDNO:64，或可选地由SEQIDNO:62与SEQIDNO:64组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab7，Fab片段包括SEQIDNO:61的可变轻链序列和SEQIDNO:63的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:61和/或SEQIDNO:63的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab7的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab7或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab8
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:71)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:72)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:73)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:74)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:75；SEQIDNO:76；和SEQIDNO:77的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:71的可变轻链序列或SEQIDNO:72的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:78；SEQIDNO:79；和SEQIDNO:80的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:73的可变重链序列或SEQIDNO:74的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:71或SEQIDNO:72的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:71或SEQIDNO:72的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:73或SEQIDNO:74的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:73或SEQIDNO:74的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:75；SEQIDNO:76；和SEQIDNO:77的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:75；SEQIDNO:76；和SEQIDNO:77的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:71的可变轻链序列或SEQIDNO:72的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:78；SEQIDNO:79；和SEQIDNO:80的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:78；SEQIDNO:79；和SEQIDNO:80的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:73的可变重链序列或SEQIDNO:74的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:71的可变轻链区；SEQIDNO:73的可变重链区；SEQIDNO:71的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:75；SEQIDNO:76；和SEQIDNO:77)；以及SEQIDNO:73的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:78；SEQIDNO:79；和SEQIDNO:80)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab8，其包含SEQIDNO:72与SEQIDNO:74，或可选地由SEQIDNO:72与SEQIDNO:74组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab8，Fab片段包括SEQIDNO:71的可变轻链序列和SEQIDNO:73的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:71和/或SEQIDNO:73的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab8的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab8或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab9
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQIDNO:81)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:82)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:83)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:84)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:85；SEQIDNO:86；和SEQIDNO:87的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:81的可变轻链序列或SEQIDNO:82的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:88；SEQIDNO:89；和SEQIDNO:90的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:83的可变重链序列或SEQIDNO:84的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:81或SEQIDNO:82的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:81或SEQIDNO:82的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:83或SEQIDNO:84的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:83或SEQIDNO:84的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:85；SEQIDNO:86；和SEQIDNO:87的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:85；SEQIDNO:86；和SEQIDNO:87的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:81的可变轻链序列或SEQIDNO:82的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:88；SEQIDNO:89；和SEQIDNO:90的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:88；SEQIDNO:89；和SEQIDNO:90的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:83的可变重链序列或SEQIDNO:84的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:81的可变轻链区；SEQIDNO:83的可变重链区；SEQIDNO:81的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:85；SEQIDNO:86；和SEQIDNO:87)；以及SEQIDNO:83的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:88；SEQIDNO:89；和SEQIDNO:90)。
在本发明的一个实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab9，其包含SEQIDNO:82与SEQIDNO:84，或可选地由SEQIDNO:82与SEQIDNO:84组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab9，Fab片段包括SEQIDNO:81的可变轻链序列和SEQIDNO:83的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:81和/或SEQIDNO:83的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab9的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab9或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab10
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:91)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:92)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:93)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:94)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:95；SEQIDNO:96；和SEQIDNO:97的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:91的可变轻链序列或SEQIDNO:92的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:98；SEQIDNO:99；和SEQIDNO:100的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:93的可变重链序列或SEQIDNO:94的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:91或SEQIDNO:92的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:91或SEQIDNO:92的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:93或SEQIDNO:94的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:93或SEQIDNO:94的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:95；SEQIDNO:96；和SEQIDNO:97的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:95；SEQIDNO:96；和SEQIDNO:97的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:91的可变轻链序列或SEQIDNO:92的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:98；SEQIDNO:99；和SEQIDNO:100的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:98；SEQIDNO:99；和SEQIDNO:100的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:93的可变重链序列或SEQIDNO:94的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:91的可变轻链区；SEQIDNO:93的可变重链区；SEQIDNO:91的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:95；SEQIDNO:96；和SEQIDNO:97)；以及SEQIDNO:93的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:98；SEQIDNO:99；和SEQIDNO:100)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab10，其包含SEQIDNO:92与SEQIDNO:94，或可选地由SEQIDNO:92与SEQIDNO:94组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab10，Fab片段包括SEQIDNO:91的可变轻链序列和SEQIDNO:93的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:91和/或SEQIDNO:93的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab10的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab10或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab11
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQIDNO:101)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:102)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:103)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:104)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:105；SEQIDNO:106；和SEQIDNO:107的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:101的可变轻链序列或SEQIDNO:102的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:108；SEQIDNO:109；和SEQIDNO:110的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:103的可变重链序列或SEQIDNO:104的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:101或SEQIDNO:102的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:101或SEQIDNO:102的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:103或SEQIDNO:104的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:103或SEQIDNO:104的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:105；SEQIDNO:106；和SEQIDNO:107的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:105；SEQIDNO:106；和SEQIDNO:107的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:101的可变轻链序列或SEQIDNO:102的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:108；SEQIDNO:109；和SEQIDNO:110的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:108；SEQIDNO:109；和SEQIDNO:110的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:103的可变重链序列或SEQIDNO:104的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:101的可变轻链区；SEQIDNO:103的可变重链区；SEQIDNO:101的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:105；SEQIDNO:106；和SEQIDNO:107)；以及SEQIDNO:103的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:108；SEQIDNO:109；和SEQIDNO:110)。
在本发明的一个实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab11，其包含SEQIDNO:102与SEQIDNO:104，或可选地由SEQIDNO:102与SEQIDNO:104组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab11，Fab片段包括SEQIDNO:101的可变轻链序列和SEQIDNO:103的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:101和/或SEQIDNO:103的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab11的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab11或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab12
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:111)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:112)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:113)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:114)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:115；SEQIDNO:116；和SEQIDNO:117的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:111的可变轻链序列或SEQIDNO:112的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:118；SEQIDNO:119；和SEQIDNO:120的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:113的可变重链序列或SEQIDNO:114的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:111或SEQIDNO:112的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:111或SEQIDNO:112的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:113或SEQIDNO:114的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:113或SEQIDNO:114的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:115；SEQIDNO:116；和SEQIDNO:117的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:115；SEQIDNO:116；和SEQIDNO:117的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:111的可变轻链序列或SEQIDNO:112的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:118；SEQIDNO:119；和SEQIDNO:120的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:118；SEQIDNO:119；和SEQIDNO:120的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:113的可变重链序列或SEQIDNO:114的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:111的可变轻链区；SEQIDNO:113的可变重链区；SEQIDNO:111的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:115；SEQIDNO:116；和SEQIDNO:117)；以及SEQIDNO:113的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:118；SEQIDNO:119；和SEQIDNO:120)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab12，其包含SEQIDNO:112与SEQIDNO:114，或可选地由SEQIDNO:112与SEQIDNO:114组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab12，Fab片段包括SEQIDNO:111的可变轻链序列和SEQIDNO:113的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:111和/或SEQIDNO:113的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab12的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab12或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab13
在一个实施方案中，本发明包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(SEQIDNO:121)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:122)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS(SEQIDNO:123)。
本发明还包括嵌合抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:124)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:125；SEQIDNO:126；和SEQIDNO:127的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:121的可变轻链序列或SEQIDNO:122的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:128；SEQIDNO:129；和SEQIDNO:130的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:123的可变重链序列或SEQIDNO:124的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:121或SEQIDNO:122的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:121或SEQIDNO:122的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:123或SEQIDNO:124的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:123或SEQIDNO:124的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:125；SEQIDNO:126；和SEQIDNO:127的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:125；SEQIDNO:126；和SEQIDNO:127的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:121的可变轻链序列或SEQIDNO:122的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:128；SEQIDNO:129；和SEQIDNO:130的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:128；SEQIDNO:129；和SEQIDNO:130的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:123的可变重链序列或SEQIDNO:124的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:121的可变轻链区；SEQIDNO:123的可变重链区；SEQIDNO:121的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:125；SEQIDNO:126；和SEQIDNO:127)；以及SEQIDNO:123的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:128；SEQIDNO:129；和SEQIDNO:130)。
在本发明的一个实施方案中，嵌合抗CGRP抗体是Ab13，其包含SEQIDNO:122与SEQIDNO:124，或可选地由SEQIDNO:122与SEQIDNO:124组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab13，Fab片段包括SEQIDNO:121的可变轻链序列和SEQIDNO:123的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:121和/或SEQIDNO:123的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab13的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab13或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
抗体Ab14
在一个实施方案中，本发明包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQIDNO:131)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的轻链序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:132)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的可变重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:133)。
本发明还包括人源化抗体，其具有CGRP结合特异性且具有包含以下陈述的序列的重链序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:134)。
本发明还预期包含以下的抗体：SEQIDNO:135；SEQIDNO:136；和SEQIDNO:137的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:131的可变轻链序列或SEQIDNO:132的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，和/或SEQIDNO:138；SEQIDNO:139；和SEQIDNO:140的多肽序列中的一者或多者，所述多肽序列对应于SEQIDNO:133的可变重链序列或SEQIDNO:134的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以上陈述的CDR、可变重链与可变轻链序列、以及重链与轻链序列中的一者或多者的组合，或可选地由所述序列组成，包括全部所述序列。
本发明还预期具有CGRP结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:131或SEQIDNO:132的多肽序列组成。在本发明的另一实施方案中，本发明的抗体片段包含SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的多肽序列，或可选地由SEQIDNO:133或SEQIDNO:134的多肽序列组成。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:135；SEQIDNO:136；和SEQIDNO:137的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:135；SEQIDNO:136；和SEQIDNO:137的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:131的可变轻链序列或SEQIDNO:132的轻链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
在本发明的另一实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含SEQIDNO:138；SEQIDNO:139；和SEQIDNO:140的多肽序列中的一者或多者，或可选地由SEQIDNO:138；SEQIDNO:139；和SEQIDNO:140的多肽序列中的一者或多者组成，所述多肽序列对应于SEQIDNO:133的可变重链序列或SEQIDNO:134的重链序列的互补决定区(CDR，或高变区)。
本发明还预期包括本文所描述抗体片段中的一者或多者的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，具有CGRP结合特异性的抗体片段包含，或可选地由下列抗体片段中的一者、两者、三者或更多者(包括全部)组成：SEQIDNO:131的可变轻链区；SEQIDNO:133的可变重链区；SEQIDNO:131的可变轻链区的互补决定区(SEQIDNO:135；SEQIDNO:136；和SEQIDNO:137)；以及SEQIDNO:133的可变重链区的互补决定区(SEQIDNO:138；SEQIDNO:139；和SEQIDNO:140)。
在本发明的一个实施方案中，人源化抗CGRP抗体是Ab14，其包含SEQIDNO:132与SEQIDNO:134，或可选地由SEQIDNO:132与SEQIDNO:134组成，并且具有至少一种本文陈述的生物活性。
在本发明的另一实施方案中，抗体片段包含，或可选地由具有CGRP结合特异性的Fab(抗原结合片段)片段组成。关于抗体Ab14，Fab片段包括SEQIDNO:131的可变轻链序列和SEQIDNO:133的可变重链序列。本发明的此实施方案还预期在所述Fab中的SEQIDNO:131和/或SEQIDNO:133的添加、缺失和变体，同时保留CGRP结合特异性。
在此(下文)所述的本发明的一个实施方案中，可通过Ab14的酶消化作用(例如木瓜蛋白酶)来产生Fab片段。在本发明的另一实施方案中，可经由在诸如CHO、NSO或HEK293细胞的哺乳动物细胞、真菌、昆虫或微生物系统诸如酵母细胞(例如二倍体酵母，诸如二倍体毕赤酵母属)与其它酵母菌株中表达来产生抗CGRP抗体，诸如Ab14或其Fab片段。适宜的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
在另一实施方案中，抗体片段可能以下列非限制性形式中的一种或多种呈现：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和单链Fv抗体形式。在一个优选实施方案中，本文中所述的抗CGRP抗体还包含κ恒定轻链序列，其包含下文陈述的序列：
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:283)。
在另一个优选实施方案中，本文中所述的抗CGRP抗体还包含γ-1恒定重链多肽序列，其包含下文陈述的序列：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:284)。
在另一实施方案中，本发明预期一种经分离的抗CGRP抗体，其包含选自下列的VH多肽序列：SEQIDNO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133、或其变体；并还包含选自下列的VL多肽序列：SEQIDNO:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131、或其变体，其中所述VH或VL多肽中的一个或多个构架残基(FR残基)已被另一个氨基酸残基取代，而产生特异性结合CGRP的抗CGRP抗体。本发明预期这些抗体的人源化与嵌合形式。所述嵌合抗体可包括源自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19恒定区的Fc。
在本发明的一个实施方案中，在起始本文中所提及的人源化过程之前，所述抗体或VH或VL多肽源自或选自一种或多种兔B细胞群体。
在本发明的另一实施方案中，抗CGRP抗体及其片段不具有CGRP-R的结合特异性。在本发明的另一实施方案中，抗CGRP抗体及其片段抑制CGRP与CGRP-R的缔合。在本发明的另一实施方案中，抗CGRP抗体及其片段抑制CGRP与CGRP-R和/或与附加蛋白和/或与其多聚体的缔合，和/或拮抗其生物效应。
如以上所描述，抗体及其片段可以予以翻译后修饰以加入效应部分，例如化学接头，可检测部分，诸如举例来说，荧光染料、酶、底物、生物发光物质、放射性物质、以及化学发光部分、或功能性部分，诸如举例来说链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂和放射性物质。
抗体或其片段还可进行化学修饰而提供附加优点，诸如增加多肽的溶解性、稳定性和循环时间(体内半衰期)，或降低免疫原性(参见美国专利第4,179,337号)。用于衍生化作用的化学部分可选自水溶性聚合物，诸如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。抗体及其片段可在分子内的随机位置或在分子内的预定位置进行修饰，并且可包括一个、两个、三个或更多个连接的化学部分。
聚合物可具有任何分子量，且可为分支或未分支。对于聚乙二醇，为便于处理与制备，分子量优选介于约1kDa与约100kDa之间(术语“约”指示在制备聚乙二醇时，有些分子比所述分子量来得重，有些分子则较轻)。取决于所需治疗概况(例如所需持续释放期间、如果有任何生物活性时的效应、处理的方便性、抗原性程度或缺乏抗原性，以及聚乙二醇对于治疗性蛋白或类似物的其它已知效应)而定，可采用其它大小。举例来说，聚乙二醇的平均分子量可为约200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000kDa。分支型聚乙二醇描述于例如美国专利第5,643,575号；Morpurgo等人，Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996)；Vorobjev等人，NucleosidesNucleotides18:2745-2750(1999)；以及Caliceti等人，Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)，其各自的公开内容以引用方式并入本文中。
有数种连接方法可供所属领域技术人员使用，参见例如EP0401384，其以引用方式并入本文中(将PEG与G-CSF偶合)，另参见Malik等人，Exp.Hematol.20:1028-1035(1992)(报导使用三氟代乙烷磺酰氯对GM-CSF进行聚乙二醇化)。举例来说，经由反应基团，诸如游离氨基或羧基，聚乙二醇可经由氨基酸残基而共价结合。反应基团是可与活化的聚乙二醇分子结合者。具有游离氨基的氨基酸残基可包括赖氨酸残基和N端氨基酸残基；具有游离羧基的那些可包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基和C端氨基酸残基。巯基也可作为用于连接聚乙二醇分子的反应基团。就治疗目的来说，优选连接在氨基上，诸如连接在N端或赖氨酸基团上。
如上文所示，聚乙二醇可经由与任何数目的氨基酸残基的键结而与蛋白质连接。举例来说，聚乙二醇可经由与赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸残基的共价键而与多肽连接。可采用一种或多种反应化学来连接聚乙二醇与特定氨基酸残基(诸如赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或连接一种类型以上的氨基酸残基(诸如赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸及其组合)。
可选地，抗体或其片段可经由与白蛋白(包括但不限于重组型人类血清白蛋白或其片段或变体(参见例如于1999年3月2日颁予的美国专利第5,876,969号、EP专利0413622，和于1998年6月16日颁予的美国专利第5,766,883号，所述专利以引用方式整体并入本文中))或其它循环血液蛋白，诸如转铁蛋白或铁蛋白融合，而增加体内半衰期。在一个优选实施方案中，本发明的多肽和/或抗体(包括其片段或变体)与成熟形式的人类血清白蛋白融合(即，如EP专利0322094的图1与图2中所示的人类血清白蛋白的第1至585个氨基酸)，所述专利在此以全文引用方式并入本文中。本发明还涵盖编码本发明融合蛋白的聚核苷酸。
关于可检测部分，另外的例示性酶包括但不限于山葵过氧化酶、乙酰胆碱酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶以及荧光素酶。另外的例示性荧光材料包括但不限于罗丹明、荧光黄、荧光异硫氰酸盐、伞形酮、二氯三嗪胺、藻红素以及丹磺酰氯。其它例示性化学发光部分包括但不限于流明诺(luminal)。其它例示性生物发光物质包括但不限于荧光素与水母发光蛋白。其它例示性放射性物质包括但不限于碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)和磷32(32P)。
就功能性部分来说，例示性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤、氨喋呤、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪；烷化剂诸如氮芥、噻替哌苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、丝裂霉素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亚硝脲、环磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露醇、链佐霉素、丝裂霉素C、顺二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂与卡铂(伯尔定(Paraplatin))；蒽环素包括道诺霉素(daunorubicin)(先前称为道诺霉素(daunomycin))、多柔比星(阿霉素)、地托比星、洋红霉素、伊达比星、表柔比星、米托蒽醌与比生群；抗生素包括更生霉素(放线菌素D)、博莱霉素、卡奇霉素、光辉霉素和安曲霉素(AMC)；以及抗有丝分裂剂诸如长春花生物碱、长春新碱和长春碱。其它细胞毒性剂包括紫杉醇(泰素(Taxol))、蓖麻毒蛋白、假单胞菌外毒素、吉西他滨、细胞迟缓素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根碱、依托泊苷、替尼泊苷、秋水仙素、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾固酮、糖皮质素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、丙卡巴肼、羟基脲、天冬酰氨酸酶、皮质类固醇、米托坦(O,P'-(DDD))、干扰素和这些细胞毒性剂的混合物。
其它细胞毒性剂包括但不限于化疗药物，诸如卡铂、顺铂、紫杉醇、吉西他滨、卡奇霉素、多柔比星、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱和博莱霉素。来自植物与细菌的毒性酶，诸如蓖麻毒蛋白、白喉毒素和假单胞菌毒素，可与人源化或嵌合抗体或其结合片段接合，而产生细胞类型特异性杀灭试剂(Youle等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA77:5483(1980)；Gilliland等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA77:4539(1980)；Krolick等人，Proc.Nat'lAcad.Sci.USA77:5419(1980))。
其它细胞毒性剂包括如Goldenberg在美国专利案第6,653,104号中所述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射免疫结合剂，其中发射α或β粒子的放射性核素在使用或不使用复合物形成剂的情况下稳定地偶合至抗体或其结合片段。此类放射性核素包括β发射体，诸如磷-32(32P)、钪-47(47Sc)、铜-67(67Cu)、镓-67(67Ga)、钇-88(88Y)、钇-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、钐-153(153Sm)、镏-177(177Lu)、铼-186(186Re)或铼-188(188Re)，以及α发射体，诸如砹-211(211At)、铅-212(212Pb)、铋-212(212Bi)或铋-213(213Bi)或锕-225(225Ac)。
用于使抗体或其结合片段与可检测部分等缔合的方法是本领域中已知的，诸如举例来说以下描述的那些方法：Hunter等人，Nature144:945(1962)；David等人，Biochemistry13:1014(1974)；Pain等人，J.Immunol.Meth.40:219(1981)；以及Nygren,J.,Histochem.andCytochem.30:407(1982)。
本文中描述的实施方案还包括与本文中陈述的抗体、抗体片段、二聚抗体、SMIP、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、多肽、可变区以及CDR基本上同源的变体和等效物。这些可以含有，例如，保守性取代突变(即，一个或多个氨基酸由相似的氨基酸取代)。举例来说，保守性取代是指一个氨基酸用相同的一般种类的另一者取代，例如，用另一个酸性氨基酸取代一个酸性氨基酸、用另一个碱性氨基酸取代一个碱性氨基酸、或者由另一个中性氨基酸取代一个中性氨基酸。保守性氨基酸取代的目的是本领域中所熟知的。
在另一实施方案中，本发明预期多肽序列，其与本文中陈述的抗体片段、可变区与CDR的多肽序列中的任何一个或多个具有至少90％或更大的序列同源性。更优选地，本发明预期多肽序列，其与本文中陈述的抗体片段、可变区与CDR的多肽序列中的任何一个或多个具有至少95％或更大的序列同源性，甚至还更优选地至少98％或更大的序列同源性，且还更优选地至少99％或更大的序列同源性。确定核酸与氨基酸序列之间的同源性的方法是本领域普通技术人员所熟知的。
在另一实施方案中，本发明还预期如本文中陈述的还具有抗CGRP活性的抗体片段、可变区与CDR的以上详述的多肽同系物。抗CGRP活性的非限制性实例陈述于本文中。
在另一实施方案中，本发明还预期与前述序列中的任何一个结合的抗独特型抗体的产生和用途。在一个例示性实施方案中，此类抗独特型抗体能施用至已经接受抗CGRP抗体的个体，以调整、降低或中和抗CGRP抗体的效应。此类抗独特型抗体也可以用于治疗自身免疫疾病，自身免疫疾病特征在于存在抗CGRP抗体。此类抗独特型抗体的另一个例示性用途是用于检测本发明的抗CGRP抗体，举例来说监测个体的血液或其它体液中存在的抗CGRP抗体的水平。
本发明还预期抗CGRP抗体，其包含用本文中描述的多肽或多核苷酸序列中的任何一个代替本文中描述的其它多核苷酸序列中的任何一个。举例来说而非限制，本发明预期包含本文中描述的可变轻链与可变重链序列中的任何一个的组合的抗体，并且还预期本文中描述的CDR序列中的任何一个取代本文中描述的其它CDR序列中的任何一个所产生的抗体。
本发明其它例示性实施方案
在另一实施方案中，本发明预期一种或多种抗人类CGRP抗体或其抗体片段，其如同选自于以下的抗人类CGRP抗体一般，特异地结合至完整人类CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，和/或竞争结合至相同的线性或构象表位：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14。所述一种或多种抗人类CGRP抗体或其抗体片段可以为非天然存在的，诸如人源化或嵌合抗体、非天然存在的抗体片段、并入标记或标记的抗体等。在一个优选实施方案中，所述抗人类CGRP抗体或其抗体片段如同Ab3、Ab6、Ab13或Ab14一般，特异地结合至完整人类CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，和/或竞争结合至相同的线性或构象表位。
本发明的一个优选实施方案涉及嵌合或人源化抗体及其片段(包括Fab片段)，其具有CGRP结合特异性和抑制由CGRP与CGRP受体的结合作用所介导的生物活性。在本发明的一个实施方案中，所述嵌合或人源化抗CGRP抗体选自Ab3、Ab6、Ab13或Ab14。
在本发明的另一实施方案中，所述抗人类CGRP抗体为一种抗体，当通过利用跨越天然人类CGRP多肽全长的重叠线性肽片段的表位绘图予以确定时，其特异地结合至完整CGRP多肽或其片段上特异地结合Ab3、Ab6、Ab13或Ab14的相同的线性或构象表位。
本发明还涉及一种如同本文中公开的抗体或抗体片段的抗CGRP抗体，其结合至相同的CGRP表位和/或与抗CGRP抗体竞争结合至CGRP，包括但不限于选自于以下的抗CGRP抗体：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14。
在另一实施方案中，本发明还涉及一种经分离的抗CGRP抗体或抗体片段，其包含选自以下的VH多肽序列所含有的一或更多个CDR：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133、或其变体，和/或选自以下的VL多肽序列所含有的一或更多个CDR：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131、或其变体。
本发明还预期以上讨论的一种或多种抗人类CGRP抗体是无糖基化的或假如有糖基化仅包含甘露糖残基；其含有已经修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化作用的Fc区域；是人类的、人源化的、单链或嵌合的；并且是衍生自兔(亲代)抗人类CGRP抗体的人源化抗体。
本发明还预期一种或多种抗人类CGRP抗体，其中于所述抗体的可变轻链区和可变重区域的构架区(FR)分别是人类FR，其是未经修饰的或其已经通过用亲代兔抗体的相应FR残基来取代所述可变轻或重链区内的一个或多个人类FR残基而修饰，且其中所述人类FR已衍生自人类可变重链与轻链抗体序列，所述序列是以其相对于文库内包含的其它人类生殖抗体序列与相应兔可变重或轻链区的高水平同源性为基础，而自人类生殖抗体序列的文库选出。
在本发明的一个实施方案中，抗人类CGRP抗体或片段可特异地结合至体内CGRP表达人类细胞和/或循环可溶性CGRP分子，包括表达在患有与CGRP表达细胞相关的疾病的患者的人类细胞上或通过所述细胞所表达的CGRP。
本发明还预期直接地或间接地连接至可检测标记或治疗剂的抗人类CGRP抗体或片段。
本发明还预期一个或多个核酸序列，其导致如以上陈述的抗人类CGRP抗体或抗体片段的表达，所述核酸序列包括包含酵母或人类偏好密码子或可选地由所述酵母或人类偏好密码子组成。本发明还预期包含所述核酸序列的载体(包括质粒或重组病毒载体)。本发明还预期表达以上陈述的至少一种抗体的宿主细胞或重组型宿主细胞，包括哺乳动物细胞、酵母细胞、细菌细胞和昆虫细胞。在一个优选实施方案中，宿主细胞是酵母细胞。在另一优选实施方案中，酵母细胞是二倍体酵母细胞。在一个例示性实施方案中，酵母细胞是毕赤酵母。
本发明还预期一种治疗方法，其包括向患有与CGRP表达细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的本文中描述的至少一种抗人类CGRP抗体或片段。本发明还预期所述治疗方法涉及施用本文中公开的两种或两种以上抗CGRP抗体或其片段。如果对于患者施用一种以上抗体，所述多种抗体可同时或并行施用，或者其可交错施用。
本发明的具有CGRP结合特异性的抗CGRP抗体及其片段的抗CGRP活性也可以通过其对CGRP的结合力或其对CGRP的亲和力的强度来描述。在本发明的一个实施方案中，本发明的具有CGRP结合特异性的抗CGRP抗体及其片段以低于或等于以下的解离常数(KD)结合至CGRP：5x10-7M、10-7M、5x10-8M、10-8M、5x10-9M、10-9M、5x10-10M、10-10M、5x10-11M、10-11M、5x10-12M、10-12M、5x10-13M或10-13M。优选地，抗CGRP抗体与其片段以低于或等于10-11、5x10- 12M或10-12M的解离常数结合CGRP。在本发明的另一实施方案中，本发明的具有CGRP结合特异性的抗CGRP抗体及其片段与线性或构象CGRP表位结合。
在本发明的另一实施方案中，本发明的具有CGRP结合特异性的抗CGRP抗体及其片段的抗CGRP活性以低于或等于10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10- 7S-1的脱离速率结合至CGRP。
在本发明的另一实施方案中，本发明的具有CGRP结合特异性的抗CGRP抗体及其片段的抗CGRP活性是通过预防、改善或减少与CGRP相关的疾病或病症的症状，或可选地治疗与CGRP相关的疾病或病症而展现出抗CGRP活性。与CGRP相关的疾病或病症的非限制性实例陈述于本文中。
编码抗CGRP抗体多肽的多核苷酸
在例示性实施方案中，所述抗CGRP抗体可以由本文所含的生物序列表列举的多核苷酸序列所编码，或者本领域普通技术人员容易鉴定的其它编码多核苷酸所编码。其实例包括SEQIDNO141的多核苷酸(编码SEQIDNO:1的多肽)、SEQIDNO:142的多核苷酸(编码SEQIDNO:2的多肽)、SEQIDNO:143的多核苷酸(编码SEQIDNO:3的多肽)、SEQIDNO:144的多核苷酸(编码SEQIDNO:4的多肽)、SEQIDNO:151的多核苷酸(编码SEQIDNO:11的多肽)、SEQIDNO:152的多核苷酸(编码SEQIDNO:12的多肽)、SEQIDNO:153的多核苷酸(编码SEQIDNO:13的多肽)、SEQIDNO:154的多核苷酸(编码SEQIDNO:14的多肽)、SEQIDNO:161的多核苷酸(编码SEQIDNO:21的多肽)、SEQIDNO:162的多核苷酸(编码SEQIDNO:22的多肽)、SEQIDNO:163的多核苷酸(编码SEQIDNO:23的多肽)、SEQIDNO:164的多核苷酸(编码SEQIDNO:24的多肽)、SEQIDNO:171的多核苷酸(编码SEQIDNO:31的多肽)、SEQIDNO:172的多核苷酸(编码SEQIDNO:32的多肽)、SEQIDNO:173的多核苷酸(编码SEQIDNO:33的多肽)、SEQIDNO:174的多核苷酸(编码SEQIDNO:34的多肽)、SEQIDNO:181的多核苷酸(编码SEQIDNO:41的多肽)、SEQIDNO:182的多核苷酸(编码SEQIDNO:42的多肽)、SEQIDNO:183的多核苷酸(编码SEQIDNO:43的多肽)、SEQIDNO:184的多核苷酸(编码SEQIDNO:44的多肽)、SEQIDNO:191的多核苷酸(编码SEQIDNO:51的多肽)、SEQIDNO:192的多核苷酸(编码SEQIDNO:52的多肽)、SEQIDNO:193的多核苷酸(编码SEQIDNO:53的多肽)、SEQIDNO:194的多核苷酸(编码SEQIDNO:54的多肽)、SEQIDNO:201的多核苷酸(编码SEQIDNO:61的多肽)、SEQIDNO:202的多核苷酸(编码SEQIDNO:62的多肽)、SEQIDNO:203的多核苷酸(编码SEQIDNO:63的多肽)、SEQIDNO:204的多核苷酸(编码SEQIDNO:64的多肽)、SEQIDNO:211的多核苷酸(编码SEQIDNO:71的多肽)、SEQIDNO:212的多核苷酸(编码SEQIDNO:72的多肽)、SEQIDNO:213的多核苷酸(编码SEQIDNO:73的多肽)、SEQIDNO:214的多核苷酸(编码SEQIDNO:74的多肽)、SEQIDNO:221的多核苷酸(编码SEQIDNO:81的多肽)、SEQIDNO:222的多核苷酸(编码SEQIDNO:82的多肽)、SEQIDNO:223的多核苷酸(编码SEQIDNO:83的多肽)、SEQIDNO:224的多核苷酸(编码SEQIDNO:84的多肽)、SEQIDNO:231的多核苷酸(编码SEQIDNO:91的多肽)、SEQIDNO:232的多核苷酸(编码SEQIDNO:92的多肽)、SEQIDNO:233的多核苷酸(编码SEQIDNO:93的多肽)、SEQIDNO:234的多核苷酸(编码SEQIDNO:94的多肽)、SEQIDNO:241的多核苷酸(编码SEQIDNO:101的多肽)、SEQIDNO:242的多核苷酸(编码SEQIDNO:102的多肽)、SEQIDNO:243的多核苷酸(编码SEQIDNO:103的多肽)、SEQIDNO:244的多核苷酸(编码SEQIDNO:104的多肽)、SEQIDNO:251的多核苷酸(编码SEQIDNO:111的多肽)、SEQIDNO:252的多核苷酸(编码SEQIDNO:112的多肽)、SEQIDNO:253的多核苷酸(编码SEQIDNO:113的多肽)、SEQIDNO:254的多核苷酸(编码SEQIDNO:114的多肽)、SEQIDNO:261的多核苷酸(编码SEQIDNO:121的多肽)、SEQIDNO:262的多核苷酸(编码SEQIDNO:122的多肽)、SEQIDNO:263的多核苷酸(编码SEQIDNO:123的多肽)、SEQIDNO:264的多核苷酸(编码SEQIDNO:124的多肽)、SEQIDNO:271的多核苷酸(编码SEQIDNO:131的多肽)、SEQIDNO:272的多核苷酸(编码SEQIDNO:132的多肽)、SEQIDNO:273的多核苷酸(编码SEQIDNO:133的多肽)或SEQIDNO:274的多核苷酸(编码SEQIDNO:134的多肽)。
B细胞筛选以及分离
在一个实施方案中，本发明预期可用于分离至少一种CGRP抗原特异性细胞的抗原特异性B细胞克隆群体的制备与分离、所述CGRP抗原特异性细胞可用于产生对抗CGRP的单株抗体，其对于所需CGRP抗原或对应于此类抗体的核酸序列具特异性。例如在授予Carvalho-Jensen等人的美国专利公开第US2007/0269868号中教示了所述抗原特异性B细胞的克隆群体的制备与分离方法，所述专利公开的公开内容以全文引用方式并入本文中。在本文的实例中还教示了所述抗原特异性B细胞的克隆群体的制备与分离方法。本领域中已知按尺寸或密度来“富集”细胞群体的方法。参见例如美国专利第5,627,052号。在通过抗原特异性富集所述细胞群体以外，可使用这些步骤。
人源化抗体的方法
在另一实施方案中，本发明预期用于人源化抗体重链与轻链的方法。例如在授予Olson等人的美国专利申请公开第US2009/0022659号与在授予Garcia-Martinez等人的美国专利第7,935,340号中教示了可应用于抗CGRP抗体的用于人源化抗体重链与轻链的方法，所述专利各自的公开内容以全文引用方式并入本文中。
筛选分析
本发明还包括筛选测定，其经设计以协助鉴定展现出CGRP相关的疾病或病症的症状的患者与CGRP相关的疾病或病症。举例来说，本发明包括检测个体的胰岛素不敏化(抗性)或葡萄糖利用的测定。所述个体任选地可以处于空腹状态或进食后状态。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段用来检测从展现出与CGRP相关的疾病或病症的症状的患者所获得的生物样本中的CGRP的存在。CGRP的存在或其提高的水平当与于可比较的生物样本中的CGRP的疾病前水平相比时，可以有益于诊断与CGRP相关的疾病或病症。
本发明的另一实施方案提供一种诊断或筛选分析以在展现出本文中鉴定的CGRP相关的疾病或病症的症状的患者中协助诊断与CGRP相关的疾病或病症，其包括利用翻译后修饰的抗CGRP抗体或其结合片段来分析来自所述患者的生物样本中的CGRP表达水平。抗CGRP抗体或其结合片段可以经翻译后修饰以包括如本公开中先前陈述的可检测部分。
可以使用如本文中陈述的经修饰抗CGRP抗体或其结合片段来测定生物样本中的CGRP水平，并且比较所述生物样本中的CGRP水平对于CGRP的标准水平(例如，在正常生物样本中的水平)。熟练临床医生将了解正常生物样本之间可以存在一些可变性，且当评估结果时会考虑到这些。在本发明的一个实施方案中，可使用本发明的抗CGRP抗体来获得CGRP表达水平与葡萄糖代谢不良的特定阶段的关联性。举例来说，将循环CGRP水平与葡萄糖和/或胰岛素水平建立关联性将可允许建立胰岛素不敏化或高血糖症的水平。可以额外地使用本领域已知的方法来测量个体的胰岛素敏感性，例如如Muniyappa等人所述(AmJPhysiolEndocrinolMetab294:E15-E26,2008)，其以全文引用方式并入本文中。简单来说，可以使用多种方法来测量胰岛素敏感性，包括高胰岛素血性-正常血糖葡萄糖钳制术、胰岛素抑制试验、QUICKI、HOMA、1/胰岛素或松田指数(Matusdaindex)。本领域普通技术人员将能够测量许多个体的CGRP以建立与临床上界定的糖尿病发展或糖尿病前期的阶段相应CGRP表达范围。
以上列举的测定也可以用于监测疾病或病症，其中将来自认为患有CGRP相关的疾病或病症的患者的生物样本中所获得的CGRP水平与来自同一患者先前生物样本中的CGRP水平作比较，以确定是否于所述患者的CGRP水平已经随着例如治疗方案而改变。本领域普通技术人员将了解通过测量患者不同间隔的CGRP，可以确定个体代谢葡萄糖能力的损伤的进展。
本发明还涉及一种检测表达CGRP的细胞的存在的体内成像方法，所述方法包括施用诊断有效量的诊断组合物。所述检测可用作设计糖尿病或处于发生糖尿病的风险的患者的有效治疗方案的规划疗法的一部分。
在一个实施方案中，本发明的方法包括用于治疗葡萄糖代谢不良，诸如胰岛素抗性、胰岛素分泌不良或高血糖症的组合本文中公开的抗CGRP抗体的一种或多种组合物。特别受关注的是例如下列的一种或多种：磺酰脲类、PPAR-γ激动剂、GPL-1受体激动剂、二肽基肽酶IV抑制剂、淀粉素类似物、双胍类、多巴胺D2受体激动剂、美格替奈类、α葡萄糖苷酶抑制剂、抗异常血脂症胆酸螯合剂、胰岛素、细胞因子疗法、基因疗法和抗体疗法，以及抗CGRP抗体或其片段。双胍类的实例包括：二甲双胍，诸如Glucophage和GlucophageXR(BristolMyersSquibb/MerckSerono)、Fortamet(Watson)、Glumetza(Biovail/Depomed/Santarus)，以及学名药。磺酰脲类的实例包括格列美脲(Glimepiride)，诸如亚莫利(Amaryl)(Sanofi)以及学名药；格列吡嗪(Glipizide)，诸如瑞易宁(Glucotrol)和瑞易宁XL(Pfizer)以及学名药；格列本脲(Glyburide)/格列本脲(glibenclamide)，诸如达安疗(Diabeta)(Sanofi)、优降糖(Micronase)/格列纳斯(Glynase)(Pfizer)以及学名药；二甲双胍+格列本脲，诸如Glucovance(BristolMyersSquibb)、SuguanM(Sanofi-Aventis)、GlicoRest、GlucoNorm(Abiogen)、Bi-Euglucon(Roche)以及学名药；二甲双胍+格列吡嗪，诸如Metaglip(BristolMyersSquibb)以及学名药。PPAR-γ激动剂的实例包括：罗格列酮(Rosiglitazone)，诸如梵帝雅(Avandia)(GlaxoSmithKline)；吡格列酮，诸如爱妥糖(Actos)(Takeda)以及学名药；罗格列酮+二甲双胍，诸如Avandamet(GlaxoSmithKline)；吡格列酮+二甲双胍，诸如ActoplusMetXR(Takeda)；吡格列酮+格列美脲，诸如Avandaryl/Avaglim(GlaxoSmithKline)；吡格列酮+格列美脲，诸如Duetact/Tandemact/Sonias(Takeda)。GPL-1受体激动剂的实例包括：艾塞那肽，诸如百泌达(Byetta)(BristolMyersSquibb/AstraZeneca)；利拉鲁肽，诸如Victoza(NovoNordisk)；艾塞那肽LAR，诸如Bydureon(BristolMyersSquibb/AstraZeneca)。二肽基肽酶IV(DPP-IV或DPP4)抑制剂的实例包括：西他列汀(Sitagliptin)，诸如Januvia，Merck；维格列汀(Vildagliptin)，诸如Galvus(Novartis)；赛格列汀(Saxagliptin)，诸如Onglyza(BristolMyersSquibb/AstraZeneca)；阿格列汀(Alogliptin)，诸如Nesina(Takeda/Furiex)；林格列汀(Linagliptin)，诸如Trazenta(BoehringerIngelheim/EliLilly)；特格列汀(Teneligliptin)，诸如Tenelia(MitsubishiTanabe/DaiichiSankyo)；西他列汀+二甲双胍，诸如Janumet(Merck)和JanumetXR(Merck)；西他列汀+辛伐他汀(simvastatin)，诸如JuviSync(Merck)；维格列汀+二甲双胍，诸如Eurcreas(Novartis)；赛格列汀+二甲双胍，诸如Kombiglyze/KombiglyzeXR(AstraZeneca/BristolMyersSquibb)；阿格列汀+吡格列酮，诸如Liovel(Takeda/Furiex)；林格列汀+二甲双胍，诸如Jentadueto(BoehringerIngelheim/EliLilly)。美格替奈类的实例包括：瑞格列奈(Repaglinide)，诸如GlucoNorm/Prandin/NovoNorm(DaiichiSankyo/FournierPharma/NovoNordisk)；那格列奈(Nateglinide)，诸如Starlix(Novartis)、Fastic(DaiichiSankyo)、Starsis(Astellas)以及学名药；米格列奈(Mitiglinide)，诸如Glufast(Kissei/Takeda)。α葡萄糖苷酶抑制剂的实例包括：阿卡波糖(Acarbose)，诸如Precose/Glucobay(Bayer)以及学名药；米格列醇(Miglitol)，诸如Glyset(Pfizer)、Diastabol(Sanofi)、Seibule(SanwaKagaku)以及学名药；伏格列波糖(voglibose)，诸如Basen(Takeda)以及学名药。胆酸螯合剂的实例包括：考来维仑(Colesevelam)，诸如Cholestagel(Sanofi)、Welchol(DaiichiSankyo)。多巴胺D2受体激动剂的实例包括：溴隐亭(Bromocriptine)，诸如Cycloset(Santarus)。淀粉素类似物的实例包括：普兰林肽(Pramlintide)，诸如Symlin(BristolMyersSquibb/AstraZeneca)。快速作用胰岛素的实例包括：赖脯胰岛素，诸如Humalog(EliLilly)；门冬胰岛素诸如NovoLog(NovoNordisk)、NovoRapid(NovoNordisk)、赖谷胰岛素诸如Apidra(Sanofi)。常规型人体胰岛素的实例包括：Humulin/UmulineRapide(EliLilly)、NovolinR(NovoNordisk)、Actrapid(Sanofi)。中间作用型胰岛素的实例包括：HumulinN(EliLilly)、NovolinN(NovoNordisk)。长效型胰岛素的实例包括：甘精胰岛素诸如Lantus(Sanofi)和地特胰岛素例如Levemir(NovoNordisk)。
本发明还提供一种用于检测本发明的抗CGRP抗体与CGRP的结合作用的试剂盒。具体来说，所述试剂盒可用于检测是否存在与本发明的抗CGRP抗体或其免疫反应性片段进行特异性反应的CGRP。所述试剂盒还可包括与底物结合的抗体、具有抗原反应性的二级抗体和用于检测二级抗体与抗原的反应的试剂。此试剂盒可为ELISA试剂盒和可酌情包括底物、初级与二级抗体，和任何其它所需试剂，诸如可检测部分、酶底物和呈色试剂，例如本文中所述者。所述诊断试剂盒还可为免疫印迹试剂盒的形式。所述诊断试剂盒还可为化学发光试剂盒的形式(MesoScaleDiscovery，Gaithersburg，MD)。所述诊断试剂盒还可为基于镧系元素的检测试剂盒(PerkinElmer，SanJose，CA)。
具有领域的临床医生将了解生物样本包括但不限于血清、血浆、尿液、唾液、粘液、胸膜液、关节液以及脊髓液。
改善或减少与CGRP相关的疾病或病症的症状，或者治疗或预防与CGRP相关的疾病或病症的方法
在本发明的另一实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其片段对于改善或减少与CGRP相关的疾病或病症的症状，或者治疗或预防与CGRP相关的疾病或病症是有用的。本文中描述的抗CGRP抗体或其片段、以及组合也能以如下更加详尽地描述的药学组合物的形式施用至需要治疗与CGRP相关的疾病或病症的患者。
在本发明的另一实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其片段适用于改善或减少下列的症状，或治疗或预防下列的症状：葡萄糖耐受不良、胰岛素抗性(不敏化)、胰岛素分泌不良、脂毒性作用、高血糖症、由于糖尿病、糖尿病前期、第1型糖尿病、第2型糖尿病或妊娠糖尿病所致的胰脏β细胞衰竭。
在例示性实施方案中，本文中所述的抗CGRP抗体或其片段可以施用至有发展糖尿病的风险的个体，诸如诊断为糖尿病前期的个体。不欲受理论限制，认为通过恢复胰岛素敏感性，所述抗CGRP抗体可能可以延迟或预防进展成糖尿病。
在其它例示性实施方案中，本文中所述的抗CGRP抗体或其片段可以施用至另一种治疗的施用没有达到血糖量正常的患者，诸如以下的治疗：二甲双胍、吡格列酮、磺酰脲类、格列奈类，口服噻唑烷二酮类(TZD)诸如吡格列酮、GLP-1激动剂诸如艾塞那肽、DPP4抑制剂诸如西他列汀、维格列汀、赛格列汀、阿格列汀、林格列汀或特格列汀的治疗，或组合疗法，诸如二甲双胍和吡格列酮、二甲双胍和磺酰基脲、二甲双胍和格列奈类、二甲双胍和TZD、二甲双胍和吡格列酮、二甲双胍和GLP-1激动剂、二甲双胍和艾塞那肽、西他列汀和二甲双胍、西他列汀和辛伐他汀、维格列汀和二甲双胍、赛格列汀和二甲双胍、阿格列汀和吡格列酮、或林格列汀和二甲双胍。
在其它例示性实施方案中，本文中所述的抗CGRP抗体或其片段可以施用至例如具有身体质量指数至少25的个体内用于预防或治疗肥胖症。不欲受理论限制，认为本抗CGRP抗体可以增加周边和/或肝脏的葡萄糖利用，由此增加代谢率和使重量减轻。所述抗CGRP抗体可以组合另一种抗肥胖剂来施用，诸如奥利司他、利莫纳班、西布曲明、肽YY(PYY，降低食欲的36个氨基酸肽)、PYY类似物、CB-1拮抗剂、利莫纳班、瘦素、瘦素类似物或芬特明。
施用
在本发明的一个实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以介于约0.1和100.0mg/kg接受个体的体重之间的浓度施用至个体。在本发明的一个实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以约0.4mg/kg接受个体的体重的浓度施用至个体。在本发明的另一实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以每二十六周一次或更少的频率施用至接受个体，例如每十六周一次或更少、每八周一次或更少、每四周一次或更少、每2周一次或更少、每周一次或更少、或每天一次或更少。
Fab片段可以每2周或更少、每周或更少、或每天一次或更少、每日多次和/或每数小时施用。在本发明的一个实施方案中，患者每日接受有效获得所欲结果的0.1mg/kg至40mg/kg的Fab片段，其以每日分成1至6次的分次剂量给药，或以持续释放形式给药。
应了解，对于特定患者所施用的抗体或Fab浓度，可能高于或低于在上文两个前面的段落中所列的例示性施用浓度。
本领域中具有技术者能够经由例行实验来确定施用的有效剂量和频率，举例来说通过本文中的公开以及以下的教示的指引：Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S.,&Parker,K.L.(2006).Goodman&Gilman'sthepharmacologicalbasisoftherapeutics.NewYork:McGraw-Hill；Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.,&Mycek,M.J.(2006).Pharmacology.Lippincott'sillustratedreviews.Philadelphia：LippincottWilliams&Wilkins；以及Golan,D.E.(2008).Principlesofpharmacology:thepathophysiologicbasisofdrugtherapy.Philadelphia,Pa.,[等]:LippincottWilliams&Wilkins。
在本发明的另一实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合以药学制剂形式施用至个体。
“药学组合物”是指合适于施用至哺乳动物的化学或生物的组合物。这些组合物可以特别地配方供用于通过一些途径中的一种或多种施用，所述途径包括但不限于经颊、表皮、硬脑膜上、吸入、动脉内、心内、侧脑室内、真皮内、肌内、鼻内、眼内、腹膜内、脊椎内、椎管内、静脉内、经口、肠胃外、通过灌肠或栓剂的直肠方式、皮下、真皮下、舌下、经皮以及经粘膜的途径。此外，可通过注射、粉末、液体、凝胶、滴剂或其它方式进行施用。
在本发明的一个实施方案中，本文中描述的抗CGRP抗体或其CGRP结合片段以及所述抗体或抗体片段的组合可以任选地组合以一个或多个活性剂予以施用。此类活性剂包括止痛剂、抗组胺剂、退热剂、抗发炎剂、抗生素、抗病毒剂以及抗细胞因子剂。活性剂包括TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调节激素的激动剂、拮抗剂以及调节剂，包括对前述任何一个有反应的抗体，以及对其受体的任何一个有反应的抗体。活性剂还包括但不限于2-芳基丙酸、醋氯芬酸(Aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、乙酰水杨酸(阿司匹林)、阿氯芬酸(Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、阿莫西匹灵(Amoxiprin)、安替比林(Ampyrone)、芳香基烷酸、阿扎丙酮(Azapropazone)、贝诺酯/苯乐来(Benorylate/Benorilate)、苯恶洛芬(Benoxaprofen)、溴芬酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、塞来昔布(Celecoxib)、胆碱水杨酸镁、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制剂、右布洛芬(Dexibuprofen)、右旋酮洛芬(Dexketoprofen)、双氯酚酸(Diclofenac)、二氟尼柳(Diflunisal)、屈恶昔康(Droxicam)、乙柳酰胺(Ethenzamide)、依托度酸(Etodolac)、依托考昔(Etoricoxib)、费索胺(Faislamine)、芬那酸(Fenamicacid)、芬布芬(Fenbufen)、非诺洛芬(Fenoprofen)、氟芬那酸(Flufenamicacid)、氟诺洛芬(Flunoxaprofen)、氟吡洛芬(Flurbiprofen)、布洛芬(Ibuprofen)、异丁普生(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凯布宗(Kebuzone)、克特普芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯诺昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、罗美昔布(Lumiracoxib)、水杨酸镁(Magnesiumsalicylate)、甲氯芬那酸(Meclofenamicacid)、甲芬那酸(Mefenamicacid)、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、甲基水扬酸(Methylsalicylate)、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、萘普生(Naproxen)、N-芳基邻氨基苯甲酸(N-Arylanthranilicacid)、神经生长因子(NGF)、奥沙美辛(Oxametacin)、奥沙普嗪(Oxaprozin)、昔康(Oxicams)、羟布宗(Oxyphenbutazone)、帕瑞考昔(Parecoxib)、非那宗(Phenazone)、保泰松(Phenylbutazone)、保泰松(Phenylbutazone)、吡罗西康(Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、洛芬(profens)、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑烷(Pyrazolidine)衍生物、罗非昔布(Rofecoxib)、双水杨酯(Salicylsalicylate)、水杨酰胺(Salicylamide)、水杨酸盐类、物质P、磺砒酮(Sulfinpyrazone)、舒林酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、替诺昔康(Tenoxicam)、噻洛芬酸(Tiaprofenicacid)、托芬那酸(Tolfenamicacid)、托美汀(Tolmetin)以及戊地昔布(Valdecoxib)。
抗组胺剂可为预防组胺的作用或预防组胺自细胞(如肥大细胞)释出的任一化合物。抗组胺剂包括但不限于阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑(astemizole)、阿扎他定(azatadine)、氮卓斯汀(azelastine)、贝他塔斯汀(betatastine)、溴苯那敏(brompheniramine)、布克力嗪(buclizine)、西替利嗪(cetirizine)、西替利嗪类似物、氯苯那敏(chlorpheniramine)、氯马斯汀(clemastine)、CS560、赛庚啶(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右旋氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、依巴斯汀(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、非索非那定(fexofenadine)、HSR609、羟嗪(hydroxyzine)、左卡巴斯汀(levocabastine)、乐雷塔定(loratidine)、甲基莨菪碱(methscopolamine)、咪唑斯汀(mizolastine)、诺阿斯咪唑(norastemizole)、苯茚达明(phenindamine)、普洛敏太定(promethazine)、吡拉明(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)和曲尼司特(tranilast)。
抗生素包括但不限于艾米康丝菌素(Amikacin)、氨基糖苷(Aminoglycosides)、阿莫西林(Amoxicillin)、氨比西林、安莎霉素(Ansamycins)、砷酚胺(Arsphenamine)、阿齐霉素(Azithromycin)、阿洛西林(Azlocillin)、氨曲南(Aztreonam)、枯草菌素(Bacitracin)、碳头孢烯(Carbacephem)、碳青霉烯(Carbapenems)、卡苯尼西林(Carbenicillin)、头孢克洛(Cefaclor)、头孢羟氨芐(Cefadroxil)、头孢氨芐(Cefalexin)、头孢噻吩(Cefalothin)、头孢噻啶(Cefalotin)、头孢孟多(Cefamandole)、头孢唑啉(Cefazolin)、头孢地尼(Cefdinir)、头孢托仑(Cefditoren)、头孢吡肟(Cefepime)、头孢克肟(Cefixime)、头孢哌酮(Cefoperazone)、头孢噻肟(Cefotaxime)、头孢西丁(Cefoxitin)、头孢泊肟(Cefpodoxime)、头孢丙烯(Cefprozil)、头孢他啶(Ceftazidime)、头孢布烯(Ceftibuten)、头孢唑肟(Ceftizoxime)、头孢必普洛(Ceftobiprole)、头孢曲松(Ceftriaxone)、头孢呋肟(Cefuroxime)、头孢菌素(Cephalosporins)、氯霉素(Chloramphenicol)、西司他丁(Cilastatin)、环丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉霉素(Clarithromycin)、克林达霉素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、粘菌素(Colistin)、复方新诺明(Co-trimoxazole)、达福普汀(Dalfopristin)、地美环素(Demeclocycline)、双氯西林(Dicloxacillin)、地红霉素(Dirithromycin)、多利培南(Doripenem)、多西环素(Doxycycline)、依诺沙星(Enoxacin)、尔他培南(Ertapenem)、红霉素(Erythromycin)、乙胺丁醇(Ethambutol)、氟氯西林(Flucloxacillin)、磷霉素(Fosfomycin)、呋喃唑酮(Furazolidone)、夫西地酸(Fusidicacid)、加替沙星(Gatifloxacin)、格尔德霉素(Geldanamycin)、见大霉素(Gentamicin)、(Glycopeptides)、除莠霉素(Herbimycin)、亚胺培南(Imipenem)、异烟肼(Isoniazid)、卡那霉素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、林可霉素(Lincomycin)、雷奈佐利(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳头孢(Loracarbef)、大环内酯(Macrolides)、磺胺米隆(Mafenide)、美洛培南(Meropenem)、耐甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米诺环素(Minocycline)、单环内酰胺(Monobactams)、莫西沙星(Moxifloxacin)、莫匹罗星(Mupirocin)、萘夫西林(Nafcillin)、新霉素(Neomycin)、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、诺氟沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、苯唑西林(Oxacillin)、羟四环霉素(Oxytetracycline)、巴龙霉素(Paromomycin)、青霉素(Penicillin)、青霉素类、哌拉西林(Piperacillin)、平板霉素(Platensimycin)、多粘菌素B(PolymyxinB)、多肽、百浪多息(Prontosil)、吡嗪酰胺(Pyrazinamide)、喹诺酮(Quinolones)、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、罗红霉素(Roxithromycin)、大观霉素(Spectinomycin)、链霉素(Streptomycin)、磺胺乙酰(Sulfacetamide)、磺胺甲噻唑(Sulfamethizole)、氨苯磺胺(Sulfanilimide)、柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)、磺胺异噁唑(Sulfisoxazole)、磺胺类、替考拉宁(Teicoplanin)、泰利霉素(Telithromycin)、四环霉素(Tetracycline)、四环霉素类、替卡西林(Ticarcillin)、梯尼达诺(Tinidazole)、泰百霉素(Tobramycin)、甲氧芐啶(Trimethoprim)、甲氧芐啶磺胺甲异噁唑(Trimethoprim-Sulfamethoxazole)、醋竹桃霉素(Troleandomycin)、曲氟沙星(Trovafloxacin)以及万古霉素(Vancomycin)。
活性剂还包括醛固酮(Aldosterone)、倍氯米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮质类固醇(Corticosteroids)、可体松(Cortisol)、乙酸可体松(Cortisoneacetate)、乙酸脱氧皮质酮(Deoxycorticosteroneacetate)、乙酸地塞米松(Dexamethasone)、乙酸氟氢可体松(Fludrocortisoneacetate)、糖皮质激素、氢化可体松(Hydrocortisone)、甲泼尼松龙(Methylprednisolone)、泼尼松龙(Prednisolone)、泼尼松(Prednisone)、类固醇以及曲安西龙(Triamcinolone)。还预期这些活性剂的任何合适的组合。
“药学赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”是在其中配制活性治疗剂的载体，通常是液体。在本发明的一个实施方案中，活性治疗剂为本文中描述的人源化抗体、或其一个或更多个片段。赋形剂通常不提供任何药学活性给制剂，但其可以提供化学和/或生物稳定性，以及释放特性。例示性制剂可以见于例如Remington’sPharmaceuticalSciences,第19版,Grennaro,A.编,1995，其以引用方式并入。
如本文中使用的“药学上可接受的载体”或“赋形剂”包括任何以及全部的生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂。在一个实施方案中，载体适于肠胃外施用。可选地，载体可以适于静脉内、腹膜内、肌内或舌下施用。药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液，以及用于即席制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。此类介质和试剂用于药学上活性物质的用途是本领域中所熟知的。除了与活性化合物不相容的任何惯用的介质和试剂以外，其在本发明的药学组合物中的用途是预期的。还可在组合物中并入补充性活性化合物。
药学组合物通常地必须于制备和储存的条件下是无菌且稳定的。本发明预期以冻干形式存在的药学组合物。组合物可以配制成溶液、微乳剂、脂质体或其它合适于高药物浓度的有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)，以及其合适的混合物。本发明还预期在药学组合物中纳入稳定剂。例如在分散液情况下可通过维持所需粒度和通过使用表面活性剂而维持适当的流动性。
在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇诸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化钠。通过包括例如单硬脂酸盐类与明胶的试剂，可以延长可注射组合物的吸收。此外，碱性多肽可以配制成定时释放制剂，例如配制成包含缓释聚合物的组合物。活性化合物可以用防止化合物不被快速释放的载体来制备，诸如控制释放制剂，包括植入物和微胶囊化递送系统。可使用生物可降解的生物相容聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯、聚乳酸以及聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(PLG)。制备此类制剂的众多方法是本领域技术人员已知的。
对于各个列举的实施方案，可通过各种剂型施用所述化合物。本领域中具有本领域普通技术人员已知的任何生物上可接受的剂型，并且其组合是预期的。此类剂型的实例包括但不限于可复原粉末、酏剂、液体、溶液、悬浮液、乳剂、粉末、颗粒、粒子、微粒、可分散颗粒、扁囊剂、吸入剂、气溶胶吸入剂、贴剂、粒子吸入剂、植入物、储库植入物、可注射物(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)、注入物及其组合。
本发明各种所说明的实施方案的以上描述不欲为穷尽性的或限制本发明所公开的确切形式。尽管在本文中出于说明目的而描述本发明的特定实施方案和实施例，但是如相关领域技术人员所认出的各种等效修改能落在本发明的范畴内。本文中所提供关在本发明的教示可以应用在除以上所描述的实施例以外的其它目的。
鉴于以上的详细说明，可对本发明进行这些及其它变化。一般来说，在以下权利要求书中，所用术语不应解释成将本发明限于说明书和权利要求书中公开的特定实施方案。因此，本发明并非受限于公开内容，本发明的范畴是完全地由下列权利要求书决定。
可以以前述说明和实施例中具体描述的方式以外的方式实行本发明。鉴于上述教示能够对本发明进行许多修改和变化，且因此落在所附权利要求书的范畴内。
相关用于获得抗原特异性B细胞的克隆群体的某些教示公开于2006年5月19日提交的美国临时专利申请第60/801,412号中，其公开内容以全文引用方式并入本文中。
涉及兔来源的单株抗体的人源化以及优选序列修饰以维持抗原结合亲和力的某些教示公开于2008年5月21日提交的国际申请第PCT/US2008/064421号中，该专利对应于标题为“NovelRabbitAntibodyHumanizationMethodsandHumanizedRabbitAntibodies”的国际申请公开第WO/2008/144757号，其公开内容以全文引用方式并入本文中。
相关利用配对胜任酵母产生抗体或其片段与相应方法的某些教示公开于2006年5月8日提交的美国专利申请第11/429,053号(美国专利申请公开第US2006/0270045号)中，其公开内容以全文引用方式并入本文中。
某些CGRP抗体多核苷酸与多肽公开于伴随此专利申请提交的序列表中，并且所述序列表的公开内容以全文引用方式并入本文中。
在本发明的背景、详细说明和实施例中所引述的各文件(包括专利、专利申请、期刊文章、摘要、手册、书籍或其它公开内容)的整个公开内容以全文引用方式并入本文中。
陈述下列实施例以便于提供本领域普通技术人员如何做以及如何使用本发明的完全公开和描述，而并非意欲限制视为本发明的范畴。已经努力确保涉及使用的数目(例如数量、温度、浓度等)的正确性，但应允许一些的实验错误和误差。除非另外方指明，否则份数为重量份数，分子重量为平均分子量，温度为摄氏度；并且压力为大气压力或接近大气压力。
实施例
实施例1
用Ab14100mg/kg来治疗正常大鼠(经由静脉内途径，在钳制术程序之前48h施用单次)并与二甲双胍500mg/kg的效应作比较(经由经口途径，在钳制术程序之前24h和4h施用两次)。此实施例中使用的抗体由SEQIDNO132和134的轻多肽链和重多肽链组成。
于进食条件下测量治疗前、用二甲双胍和Ab14治疗后18h以及用Ab14治疗后42h的血糖。这2种化合物在这些条件下不影响血糖。于空腹条件下测量血糖，刚好在钳制术前，并且仅二甲双胍具有显著降低的效应(17％)。这2种化合物会使进食条件下，治疗前、用二甲双胍治疗后18h，以及用Ab14治疗后42h所测量的血浆胰岛素稍微地减少，还有胰岛素抗性指数HOMA-IR也是(不显著)。
测定获自刚好在钳制术程序之前、治疗后48小时的Ab14治疗的动物的血浆样本的Ab14的浓度。此分析的结果确认进行钳制术程序的大鼠全身暴露量范围为642至797μg/mLAb14。
为了评估对于全身胰岛素敏感性的效应，使用0.3U/Kg/h胰岛素和3H-葡萄糖执行钳制术程序。大鼠在灌流180分钟之前，先空腹6小时。在灌流140分钟后到达稳态，并且计算140分钟至180分钟的葡萄糖输注率(GIR)、全身葡萄糖转换(GTO)、肝脏葡萄糖的生成(HGP)、糖酵解作用和糖原合成。在钳制术结束之前1小时施用14-C-2-脱氧葡萄糖的推注，以测量组织特异性的葡萄糖利用。如同预期的，二甲双胍通过增加糖酵解作用和糖原合成，而使GIR(27％)和GTO(30％)显著地增加。二甲双胍使混合外股肌(VL，49％p<0.05)、糖酵解伸趾长肌(EDL，19％NS)内的葡萄糖利用增加，以及使心脏内的葡萄糖利用减少(-39％，p<0.01)，据推测可能是由于心肌脂肪酸氧化的刺激。Ab14倾向使GIR和GTO(NS)增加，以及对VL内(70％，p<0.01)、EDL内(26％，NS)和氧化比目鱼肌内(27％，NS)的葡萄糖利用有比二甲双胍更强的效应。Ab14还倾向增加心脏内的葡萄糖利用(21％,NS)。与二甲双胍相似，Ab14不影响白色脂肪组织内(深部和皮下)的葡萄糖利用率。
总之，Ab14在急性治疗之后，良好的倾向于改善正常大鼠的全身葡萄糖利用，且对于肌肉(VL)内的葡萄糖利用率有显著的效应。
方法
雄性史-道二氏大鼠在整个实验期是圈养于笼子(1500cm2x21cm)中。动物笼子的垫料每周更换一次。动物在适应期是以3-4只动物一组的方式圈养，且然后在手术后个别圈养直到进行钳制术程序。倒转的12小时光周期(在上午8点关灯)，22±2℃和55±10％相对湿度。提供标准饮食(RM1(E)801492，SDS)与自来水供随意取用。
在2周的适应期之后，将大鼠麻醉(异氟醚)并于股静脉提供导管。接着在钳制术程序之前为5-6天的恢复期。
于上午07:30和08:00之间(刚好在关灯之前)，用血糖计从尾巴尖端来测量血糖(BG)，以及刚好在测量血浆胰岛素之后执行血液采集(在EDTA上)。下表描述所述情况：
血浆样本保持在-80℃直到胰岛素测量(使用ELISA法)。
从每只第2组动物获得刚好在钳制术程序之前的血液样本(～200μL)，处理成血浆(～60μL)，并且维持在-80℃，供用于随后利用MesoScaleDiscovery(MSD)ELISA平台来判定Ab14的浓度。
在钳制术程序T0之前48h(在钳制术之前2天下午02:00)，经由静脉内途径来施用媒介物和Ab14。
在钳制术程序T0之前24h和4h(在钳制术前一天下午02:00和钳制术当天的上午10:00)，经由口服途径来施用二甲双胍。
大鼠在钳制术开始之前(～8h，刚好在血液采集后)，先空腹6小时。
使用3H-葡萄糖作为示踪剂以及0.3U/Kg/h胰岛素输注，从下午02:00(T0)执行高胰岛素血性-正常血糖钳制术至下午05:00(T+3h)。同时进行葡萄糖溶液输注，并调整输注率以达到稳态(～100+/-10mg/dL)。每10分钟使用血糖计从尾巴尖端测量血糖。在最后一小时期间(稳态)，从尾巴尖端采集血液(10μL)，以及评估下列参数：葡萄糖输注率；全身葡萄糖利用率；肝脏葡萄糖生成率；全身糖原和糖酵解率。
为了判定个别组织的葡萄糖利用率，在D-[3-3H]-葡萄糖输注结束之前60min，执行经由股静脉推注注射每只大鼠100μCi的脱氧-D-葡萄糖2-14C(14C-2-DOG)。于注射之后0、5、10、15、20、25、30、45和60分钟时，从尾静脉尖端采样10μL微量血液，来判定血浆14C-2-DOG的消失和葡萄糖浓度。在实验期间结束时，将外股肌(VL)、糖酵解伸趾长肌(EDL)和比目鱼肌、附睾和腹股沟白色脂肪组织、心尖，以及皮肤(作为负对照)剥离，急速冷冻并保持在-80℃。将各组织的一片溶解于1MNaOH内，然后用1MHCl予以中和。D-2-14C脱氧葡萄糖6-磷酸盐。通过使用氢氧化锌(0.3M)溶液或过氯酸溶液(6％)而使D-2-14C脱氧葡萄糖差别性沉淀。测量两个放射性含量来评估表示为ng/mg/min的葡萄糖摄取。
在钳制术结束时测量血浆胰岛素水平。
使用GraphPadprism软件来执行统计分析。使用单因素ANOVA加上邓尼特事后检定来分析直方图，并且使用ANOVA二因素加上庞费洛尼事后检定来分析曲线。当p值<0.05时，认为差异是显著的。NS：不显著。
结果和讨论
血糖和胰岛素测量。于进食条件下，与媒介物组相比，用Ab14100mg/kg治疗后42h和用二甲双胍500mg/kg治疗后18h，血糖水平不受影响(图1A)。然而，Ab14和二甲双胍分别使血浆胰岛素水平减少11％和18％(不显著，图1B)。然后，与媒介物组相比，胰岛素抗性指数HOMA-IR以相似的方式减少(图1C)。另一方面，在6小时空腹条件下，二甲双胍显著地使血糖于治疗30h后减少17％(图1D)。
全身葡萄糖通量。在Ab14100mg/kg单次施用48h后，以及二甲双胍500mg/kg最后一次施用4h之后，在6小时空腹条件下执行高胰岛素血性-正常血糖钳制术。
与媒介物组相比，二甲双胍显著地使GIR发展由输注开始之后60分钟增加。Ab14倾向使GIR发展增加，主要在130分钟输注之后(图2A)。
所有组的葡萄糖输注率均在140min达到平线区。于此稳态期间所有组的血糖水平是相似的(图2B)。在钳制术结束时所有组的血浆胰岛素水平是相似的(图2C)。在钳制术结束时的血浆胰岛素水平与进食条件下所测得的血浆胰岛素水平几乎是相同的，即，使用来获得高胰岛素血症的胰岛素剂量是生理的剂量。
接着计算140分钟至180分钟输注的葡萄糖通量(图3)。Ab14与二甲双胍分别使葡萄糖输注率增加18％(NS)和27％(p<0.05)，以及分别使葡萄糖转换18％(NS)和30％(p<0.05)。此超生理剂量的胰岛素完全抑制3组中的肝脏葡萄糖的生成。Ab14不影响糖酵解作用率，而二甲双胍却使糖酵解作用率增加43％(NS)。Ab14使糖原合成的速率增加23％，与二甲双胍相似(NS)。
还判定个别组织的葡萄糖利用率，在D-[3-3H]-葡萄糖输注结束之前60min，使用经由股静脉推注注射每只大鼠100μCi的脱氧-D-葡萄糖2-14C(14C-2-DOG)。测量两个放射性含量来评估表示为ng/mg/min的葡萄糖摄取。如图4A-C中所示，二甲双胍使混合外股肌(VL，49％p<0.05)、糖酵解伸趾长肌(EDL，19％NS)内的葡萄糖利用增加，以及二甲双胍使心脏内的葡萄糖利用减少(-39％，p<0.01)，据推测可能是由于心肌脂肪酸氧化的刺激，其为二甲双胍已知的效应。Ab14倾向使葡萄糖输注率和全身葡萄糖转换(NS)增加，以及对VL内(70％，p<0.01)、EDL内(26％，NS)和氧化比目鱼肌内(27％，NS)的葡萄糖利用有比二甲双胍更强的效应。Ab14还倾向增加心脏(21％,NS)内的葡萄糖利用。与二甲双胍相似，Ab14不影响白色脂肪组织内的葡萄糖利用率(深部和皮下)。
Ab14血浆浓度分析。进行钳制术程序的第2组动物的Ab14血浆浓度范围从642到797μg/mL，以及支持高达48小时的全身暴露量。
结论。用Ab14的急性治疗会使血浆胰岛素稍微降低，且通过增加糖原合成和肌肉的葡萄糖利用，而倾向使全身葡萄糖利用增加。
实施例2
此实施例评估Ab14改善胰岛素抗性大鼠模型的胰岛素敏感性的能力。在此模型中，喂食大鼠高脂(69％)和高果糖(14％)的饮食(HFD)6周来诱发葡萄糖失耐，并且与进食正常食物的对照动物相比，血浆胰岛素水平变成显著地增加且糖血症变成稍微增加。此实施例使用的抗体由SEQIDNO132和134的轻多肽链和重多肽链组成。
用Ab14来治疗进食HFD6周的大鼠，持续2周，并且执行2步骤的高胰岛素血性-正常血糖钳制术以评估胰岛素敏感性。在第一个步骤期间使用生理剂量的胰岛素，并且在第二个步骤期间使用药学剂量的胰岛素，以分别评估在这两种条件下周边和肝脏的胰岛素敏感性的效应。
总结
在HFD6周后根据大鼠的葡萄糖失耐(于口服耐糖试验(OGTT)期间的AUC计算结果)及其HOMA-IR(胰岛素抗性指数)而随机化成治疗组。HFD大鼠的15天治疗是用10、30和100mg/kg/周的Ab14(静脉内，一周相间隔地施用两次)，或每天用二甲双胍200mg/kg/天于饮水中。
体重和摄食量每周测量3次直到治疗10天。于第10天和第15天测量HOMA-IR。于第15天或第16天执行2步骤的钳制术(5mU/kg/min且然后15mU/kg/min胰岛素)。使用3H-葡萄糖示踪剂输注来评估钳制术程序期间的葡萄糖转换(GTO)。
在研究结束时，当与进食正常食物的对照大鼠相比时，观察到HFD大鼠于体重、空腹血糖、血浆胰岛素和C肽展现出显著增加，以及在2步骤的高胰岛素血性正常血糖钳制术期间，葡萄糖输注率(GIR)展现出显著减少。
当与HFD加上媒介物对照组相比时，Ab14治疗对于体重或摄食量没有效应，而二甲双胍组显著地使两个参数都减少。
100mg/kg的Ab14于治疗15天之后显著地使HOMA-IR减少38％(通过降低空腹血糖和血浆胰岛素)。于第15天二甲双胍对HOMA-IR有不显著的(ns)降低效应。Ab14治疗还使C肽显著地降低(在10mg/kg下30％且在100mg/kg下29％)。
当与HFD媒介物对照组相比时，在钳制术步骤第一个步骤期间，于Ab14治疗组内观察到增加的GIR(ns)，而二甲双胍对GIR有程度稍微小的显著增加效应。30或100mg/kg的Ab14以及二甲双胍治疗在钳制术第二个步骤期间使GIR显著地增加(分别为36、28和27％)。
当与HFD媒介物对照组相比时，30mg/kg的Ab14在钳制术程序第一个步骤期间倾向使增加GTO(17％，ns)。30mg/kg的Ab14对两个钳制术步骤期间的糖酵解作用和糖原合成有稍微增加的效应(ns)。
在第一个步骤期间，Ab14或二甲双胍治疗只有稍微但却是显著地使肝脏葡萄糖的生成(HGP)减少(介于11-20％之间)。在第二个步骤期间，当与HFD媒介物对照组相比时，10mg/kg的Ab14使HGP不显著减少(78％)，而30或100mg/kg的Ab14和二甲双胍完全地抑制HGP。
总之，于HFD大鼠模型中观察到Ab14静脉内施用后改善的胰岛素抗性(主要为肝脏)。
方法
82只史-道二氏大鼠(研究开始实为8周龄，平均重量为约250克)在整个实验期是圈养于笼子(904cm2x23cm)中。动物笼子的垫料每周更换3次。动物在适应期、HFD和治疗时期是以2-3只动物一组的方式圈养。然后大鼠在手术后个别圈养直到进行钳制术程序。在倒转的12小时光周期(在上午8点关灯)，并且维持22±2℃和55±10％相对湿度下圈养大鼠。在开始HFD进食之前，提供至少5天的适应期。在适应期期间，提供标准饮食(RM1(E)801492，SDS)与自来水供随意取用。
在适应期之后，10只大鼠进食正常食物(NC)，而72只大鼠在整个实验中均进食HFD(RD1，SAFE)。
高脂肪饮食组成如下(千卡％)：蛋白质：17.3％；碳水化合物(果糖)：14％；脂肪(猪油))：68.7％；胆固醇1.65％，胆酸0.65％。
在HFD进食6周之后，大鼠空腹6小时，以及执行口服耐糖试验。接着将呈现最低的AUC(～17％)大鼠排除在研究以外。然后根据大鼠的AUC(耐糖指数)和HOMA-IR(胰岛素抗性指数)将剩余的大鼠随机地分派成不同的组。
于治疗的第1天和第8天早晨经由静脉内途径(经由尾静脉，于异氟醚麻醉下)每周施用Ab14(10、30、100mg/kg)和媒介物。
二甲双胍(200mg/kg/天)施用于饮水中～2周，直到钳制术程序为止。用二甲双胍治疗的大鼠于第1天和第8天是用媒介物予以治疗(经由尾静脉)。
测试组如下：
第1组：NC+媒介物静脉内(n＝10)
第2组：HFD+媒介物静脉内(n＝10)
第3组：HFD+Ab1410mg/kg静脉内(n＝10)
第4组：HFD+Ab1430mg/kg静脉内(n＝10)
第5组：HFD+Ab14100mg/kg静脉内(n＝10)
第6组：HFD+二甲双胍200mg/kg于饮水中+媒介物静脉内(n＝10)
在HFD进食的最后一周期间，筛选之前，一周测量水摄取3次来评估自来水中的二甲双胍稀释度。
在正常食物和HFD6周之后，82只大鼠从上午08:00空腹至下午02:00(6小时)。于下午02:00(t0)进行葡萄糖推注施用(2.5g/kg)。于t-30、0、15、30、60、90、120、150min测量血糖(使用血糖计，从尾巴尖端采集血滴)。于t-30从尖尾采集血液(40μL，在EDTA上)来测量血浆胰岛素(ELISA法)。
计算曲线下面积(AUC)。呈现最高AUC的12只进食HFD的大鼠被认为是葡萄糖失耐比较少的，并且被排除在研究以外。剩余的60只大鼠是根据大鼠的均质AUC、HOMA-IR和体重而随机地分派成6组。
在HFD的第一个6周期间，每周测量一次体重。在治疗的第一个10天期间，每周测量3次体重。测量48h或72h期间的摄食量，刚好是在治疗之前，并且在治疗期间直到手术程序(第11天)为止，每周测量3次摄食量。
在开始治疗之前(OGTT当天)以及在治疗的第10天，全部大鼠从上午08:00空腹。于下午01:30，从尾巴尖端采集血液(40μL，在EDTA上)。测量(使用血糖计)和血浆胰岛素(ELISA法)。
于第11天，将大鼠麻醉(异氟醚)并于股静脉植入导管。接着在钳制术程序之前为4天的恢复期。
钳制术的早晨，大鼠空腹6小时(从上午8:00至下午02:00)。刚好在钳制术程序之前(于～下午01:00)，从第3组、第4组、第5组和第6组的每只大鼠的尾巴尖端采集血液样本(～160μL，在EDTA上)，处理成血浆(～60μL)，并且维持在-80℃直到要评估Ab14的浓度。虽然没有分析对照和二甲双胍组的抗体浓度，但是从第1组、第2组和第7组的大鼠采集相似量的血液(并丢弃)。
于第15或16天，执行2步骤的高胰岛素血性-正常血糖钳制术，其是使用3H-葡萄糖作为示踪剂(除了正常食物组以外)，以及从下午02:00(T0)至下午04:00(T+2h)为5mU/kg/min胰岛素输注，接着从下午04:00至下午05:30(t+3.5h)为15mU/kg/min胰岛素输注。同时进行葡萄糖溶液输注，并调整输注率以达到稳态(100+/-10mg/dL)。每10分钟使用血糖计从尾巴尖端测量血糖。于各步骤的稳态期间，从尾巴尖端规律地采集血液(10μL)。
评估下列参数：葡萄糖输注率(在所有组中)；全身葡萄糖利用率(除了正常食物组以外)；肝脏葡萄糖生成率(除了正常食物组以外)；全身糖原和糖酵解率(除了正常食物组以外)。
此外，除了正常食物组以外，在钳制术实验结束之前1小时执行推注注射14C-2DOG，以及在钳制术结束时采集下列组织的样本并保留用于进一步评估：
外股肌(VL)；伸趾长肌(EDL)；比目鱼肌心尖；附睾白色脂肪组织腹股沟的白色脂肪组织皮肤(负对照)。
测量刚好在输注开始之前(～T-30min)，在步骤1(T2h)和步骤2(T3.5h)的稳态结束时的血浆胰岛素和C肽水平。就此来说，从尾巴尖端执行血液采集(～100μL，在EDTA上)。
使用GraphPadprism软件来执行统计分析。使用ANOVA二因素加上庞费洛尼事后检定来分析曲线。使用t检定来分析直方图，以比较HFD加上媒介物对照组和正常食物加上媒介物对照组。使用单因素ANOVA加上邓尼特事后检定来分析直方图，以比较Ab14和二甲双胍组对抗HFD加上媒介物对照组。当p值<0.05时，认为差异是显著的。NS：不显著。
结果
动物模型和筛选。在开始治疗之前，8周龄的大鼠进食富含果糖的高脂肪饮食(HFD，69％脂肪和16％果糖)7周。HFD组的体重为522±5g，相对来说进食正常食物的对照组的体重448±13g。所以在第42天于HFD体重增加16％(t检定的p<0.001(图5)。在7周后，HFD群体体重增加187±3g，相对来说进食正常食物的对照组的158±9g(于第42天t检定的p<0.001，图6)。
在HFD的第7周期间，执行口服耐糖试验来评估HFD群体的葡萄糖失耐。HFD群体的血糖的水平直到葡萄糖施用之后150min仍是较高的(未显示)。与进食对照食物的大鼠(未显示)相比时，HFD大鼠计算出的AUC相对于T0为显著较高的(9％)。
用t-30的OGTT来计算HOMA-IR(胰岛素抗性指数)。将呈现较高的AUC和较高的HOMA-IR的大鼠随机地分派成6组。与进食对照食物组相比时，HFD组的AUC为较高的(～9％，未显示)，并且HOMA-IR(34％，未显示)和体重为较高的(～17％，p<0.001，图7)。
体重和摄食量的追踪。于治疗10天之后追踪体重。Ab14治疗对于体重没有效应。进食对照食物大鼠的体重仍是显著地低于HFD媒介物组(图7)。Ab14(30mg/kg)使体重增重稍微减少(ns)，而二甲双胍200mg/kg从治疗的第二天开始使体重增重出现显著地减少。
如同预期的，HFD媒介物组内的摄食量比进食对照食物组更少。Ab14治疗对于追踪的摄食量(图8A)或累积摄食量(图8B未显示)没有效应。二甲双胍显著地使累积摄食量减少25％。在手术程序之前第9天和第10天之间的动物空腹中断了摄食量的测量。
生化参数。当与进食对照食物的对照组相比时，HFD媒介物组的空腹血糖于第0天、第10天和第15天分别增加5％(ns)、11％(ns)和20％(p<0.001)。Ab14或二甲双胍治疗于第10天没有效应。当与HFD媒介物组相比时，Ab14100mg/kg的治疗于第15天对于空腹血糖有显著减少的效应(图9)。
当与进食对照食物组相比时，HFD媒介物组的空腹血浆胰岛素于第0天、第10天和第15天分别增加33％(ns)、49％(ns)和67％(p<0.01)。于第10天Ab14治疗没有效应，而二甲双胍使血浆胰岛素减少37％(ns)。于治疗15天之后，10、30或100mg/kg的Ab14治疗分别使血浆胰岛素减少26、16或18％(ns)，而二甲双胍使血浆胰岛素减少11％(ns，图10)。
如同预期的，第15天的血浆C肽水平概况与血浆胰岛素水平相似，但是其的效应更明显且变化较小。当与进食对照食物组相比时，HFD媒介物组的C肽显著地增加67％。10、30或100mg/kg的Ab14治疗分别使C肽水平减少30％(p<0.05)、23％(ns)和29％(p<0.05)，而二甲双胍使C肽减少13％(ns)(图11，左下图)。
当与进食对照食物组相比时，HFD媒介物组的胰岛素抗性指数HOMA-IR于第0天增加36％(ns)，于第10天增加42％(ns)，以及于第15天增加98％(p<0.01)。与HFD媒介物相比，Ab14于治疗10天之后没有效应，而二甲双胍有36％的减少的效应(ns)。于治疗15天之后，10、30或100mg/kg的Ab14治疗分别使HOMA-IR减少33％(ns)、17％(ns)和38％(p<0.05)，而二甲双胍倾向使HOMA-IR减少18％(ns，图12)。
高胰岛素血性钳制术。图13显示在2步骤的高胰岛素血性期间随时间的葡萄糖输注率(GIR)。在第一个步骤期间(5mU/kg/min胰岛素)，肝脏葡萄糖的生成(HGP)被不完全地抑制，并且当肝脏葡萄糖的生成被抑制时，葡萄糖输注率(GIR)比第二个步骤(15mU/kg/min胰岛素)期间为更低。
在两个钳制术步骤期间，进食对照食物组的GIR比HFD媒介物组更高，并且确认了HFD大鼠在8-9周饮食之后具有胰岛素抗性表型。在第一个钳制术步骤期间，二甲双胍对于GIR没有效应，而Ab14治疗组的GIR平线区为稍微高的(ns)。在第二个钳制术步骤期间，观察到所有治疗组的GIR平线区比HFD媒介物组为更高，并观察到二甲双胍和30或100mg/kg的Ab14具有显著差异(图13)。使用ANOVA二因素加上庞费洛尼事后检定来评估相对HFD的统计显著性。在第一个钳制术步骤期间，只有于时间点50和60分钟的正常食物的对照、媒介物治疗的大鼠的GIR为显著地不同(分别为p<0.01和p<0.05)。在第二个钳制术步骤期间，用30mg/kgAb14治疗的HFD大鼠于时间点160-210分钟的GIR显著地不同(对于时间点160分钟，p<0.05，而对于时间点170-210分钟，p<0.01)，用100mg/kgAb14予以治疗的HFD大鼠于时间点170-210分钟的GIR显著地不同(对于时间点190分钟，p<0.01，而对于时间点170-180分钟和200-210分钟，p<0.05)，并且用二甲双胍治疗的HFD大鼠于时间点170-210分钟的GIR显著地不同(对于时间点180分钟和190分钟，p<0.01，而对于时间点170分钟和200-210分钟，p<0.05)。
计算各平线区的GIR平均值(图14)。与进食对照食物组相比，HFD媒介物组的GIR在第一个步骤和第二个步骤期间分别显著地减少32％(p<0.05)和17％(p<0.01)。10、30或100mg/kg的Ab14使第一个步骤期间的GIR增加(ns)(分别为26、37和29％)，而二甲双胍也有11％的增加(ns)效应。在第二个步骤期间，当与HFD媒介物组相比时，所有治疗使GIR增加：Ab1410、30或100mg/kg分别为19％(ns)、36％(p<0.01)和28％(p<0.05)，而二甲双胍为27％(p<0.05)。
如同预期的，在两个钳制术步骤期间的血糖平均值对应于正常血糖状态。虽然在第一个钳制术步骤期间，于进食对照食物组和HFD媒介物组之间有显著差异，但是糖血症仍是在正常范围内，并且两个组的生物状态是一样的(图14)。
测量钳制术程序期间的血浆胰岛素。如同预期的，在两个钳制术步骤结束时所有组之间的胰岛素水平是相似的。在第一个钳制术步骤期间，胰岛素浓度为大约140μU/mL，并且是进食条件下预期的生理水平。在第二个钳制术步骤之后，胰岛素浓度为大约490μU/mL，此为药学水平(图11，上图)。
还测量了在钳制术程序期间的C肽(图11，右下图)。在正常血糖条件期间，β细胞会抑制胰岛素分泌，且因而血浆C肽水平很低并不可解释。
在钳制术程序期间所有HFD组的3H-葡萄糖是与胰岛素一起输注(进食对照食物组中没有)。接着计算全身葡萄糖通量。在第一个钳制术步骤期间，所有组的葡萄糖转换(GTO)是相似的，不包括30mg/kg的Ab14，当与HFD媒介物组相比时，其倾向使GTO增加(17％，ns)。用30mg/kg的Ab14予以治疗之后，糖酵解作用和糖原合成倾向分别增加15％和16％(ns，图15)。
在第二个钳制术步骤期间，所有治疗组的GTO，糖酵解作用和糖原合成是与相似的，且当与HFD媒介物组相比时，观察到Ab1430mg/kg治疗组的糖原合成少量的增加(10％，ns)。30mg/kg(p<0.05)和100mg/kg(ns)的Ab14会完全抑制HGP，如同二甲双胍(ns)一般，以及10mg/kg的Ab14治疗会使HGP减少78％(ns，图16)。
结论。HFD大鼠模型中用Ab14治疗会通过减少空腹血糖以及血浆胰岛素水平而使HOMA-IR减少。此外，Ab14明显改善肝脏胰岛素敏感性，然而却没有清楚观察到Ab14对于全身周边的胰岛素敏感性的效应。如同预期的，二甲双胍治疗也会改善肝脏胰岛素敏感性。
实施例3
此实施例评估Ab14对于祖克糖尿病肥胖(ZDF)大鼠，大鼠糖尿病模型的模型内的葡萄糖代谢的效应和对于血糖控制的效应。评估慢性施用Ab14于从糖尿病前(高胰岛素血性，血糖量正常)状态进展至明显糖尿病(低胰岛素血性，高血糖)状态的ZDF大鼠内对于血糖控制的效应。这些动物在几周龄之前产生糖尿病前期，其特征在于有显著的高胰岛素血症来补偿其进展中的胰岛素抗性，但是具有轻微的高血糖症或没有高血糖症。此在10-12周龄之前会由于胰脏β细胞衰竭，而快速地进展至明显糖尿病，其特征在于低胰岛素血症，以及显著的高血糖症。此实施例使用的抗体由SEQIDNO132和134的轻多肽链和重多肽链组成。
方法
81只ZDFfa/fa大鼠(CharlesRiverLaboratories，法国)和10只瘦ZDF？/+大鼠(对照)以1-2只动物一组的方式，圈养于通风且丰富的圈养笼中，处于正常12小时光周期(在下午8点关灯)，22±2℃和50±10％相对湿度。大鼠送来时为7周龄且在研究开始前适应一周。用ZDF大鼠的标准饮食(Purina5008，CharlesRiver)来喂食大鼠，并提供自来水供随意取用。监测所有动物在整个研究中任何不健康、治疗的不良反应或发病率的征兆每天至少一次。
8周龄的雄性ZDFfa/fa大鼠为高胰岛素血性且缓和性糖尿病。由于此状态下血糖和胰岛素水平的变异性，所以根据其HOMA-IR来筛选且选择ZDF大鼠。
对于AB14治疗组，以两种不同剂量20mg/kg/周(第3组和第7组)或60mg/kg/周(第4组和第8组)、于第1、8、15和22天经由尾静脉(静脉内，5mL/kg)每周施用一次。所有其它组每周用媒介物1(静脉内，5mL/kg)治疗一次。于第1、8、15和22天早上、同时于异氟醚麻醉下执行静脉内治疗。施用的体积是根据最近的体重而分别修改。
于上午8:00和10:00之间，经由口服途径(口服，5mL/kg)每天施用一次二甲双胍(Met)和吡格列酮(PIO)，持续28天，除了OGTT当天以外或静脉治疗以后，有一些口服治疗是在上午10:00后完成。第5组、第7组和第8组用200mg/kg/天的二甲双胍治疗，而第6组用10mg/kg/天的吡格列酮来治疗。所有其它组每天用媒介物2(口服，5mL/kg)治疗，持续28天。用最近的体重来计算各组的施用的平均体积。
测试组概述于下表中。Met：二甲双胍。
在1周的适应期之后，称全部大鼠的重量且空腹6小时(从上午～8:00至下午～2:00)。于下午～2:00时，从尾巴尖端采集血液(～150μL，EDTA)。测量血糖(使用血糖计)血浆和胰岛素(ELISA)，并计算HOMA-IR(胰岛素抗性指数)。呈现极端的HOMA-IR值的11只ZDFfa/fa大鼠排除在研究以外，但是继续圈养28天用于在研究结束时采集血浆。然后根据其HOMA-IR和体重，而将剩余的70只大鼠随机地分派成7组。瘦大鼠全部留在第1组且只用媒介物予以治疗。
在治疗的4周期间，每周测量两次体重。
测量刚好在筛选程序之前的摄食量，且然后在第一个三周治疗期间测量24h的摄食量每周2次。在OGTT(第4周)周期间，每周测量摄食量一次。
在每次血液采集之前，执行空腹(于第0天从上午8:00至下午02:00为6小时，以及于第12、19和26天从下午～6:00至上午～8:00隔夜)。于第0天下午～2:00时(筛选之前，150μL，EDTA钾)，以及于第12天(110μL，EDTA钾)、第19天(150μL，EDTA钾)和第26天(110μL，EDTA钾)在给药之前上午～8:00时，从尾巴尖端采集血液。
于第0天、第12天、第19天和第26天测量空腹血糖(血糖计)。于第0天，以及于第12天、第19天和第26天在给药之前，测量空腹血浆胰岛素、肽-C水平(ELISA法)、游离脂肪酸、三酸甘油酯、总胆固醇(比色法)，以及HDL-胆固醇(磷钨酸沉淀，比色法)。总胆固醇-HDL-胆固醇计算为非HDL-胆固醇。于第0天、第19天和第28天测量果糖胺。于第0天和第28天测量HbA1c(DCA2000)。
如下执行口服耐糖试验(OGTT)。于第25天，大鼠在下午～6:00行空腹并于第二天(于第26天)执行口服耐糖试验。在上午～8:00(T-60)执行血液采集(110μL，EDTA)用于测量生化参数。一小时以后(上午～09:00)，施用口服葡萄糖推注(1.5g/kg)(T0)。于T-60、T0、T15、T30、T60、T90、T120和T180分钟时测量血糖(血糖计或在高糖血症的情况下用比色法)。根据T0时所测得的血糖值来计算曲线下面积(AUC)。于T-60、T15(～40μL的血，EDTA)，和T30分钟(～40μL的血，EDTA)时，测量血浆胰岛素和C肽(ELISA法)。
于第28天2小时的限食(从上午8:00至上午10:00)之后，以异氟醚来麻醉研究的80只大鼠。采集血液(从腹静脉～3000μL，用K2-EDTA)用于决定AB14的血浆浓度。血浆(～200μL的3个等分试样)保持在-80℃直到测试。然后切除胰脏组织。通过切除腹静脉和主动脉而使大鼠安乐死。
将各个胰脏分成2部分(纵向切割)。一块于10％福尔马林溶液内固定用于组织病理加工。另一块胰脏急速冷冻并保持在-80℃用于决定胰岛素和胰岛素原水平。
于圈养28天之后，将排除在研究以外的11只ZDFfa/fa大鼠予以牺牲。以异氟醚来麻醉所述大鼠。从腹静脉采集血液(用EDTA钾的最大体积)。冷冻血浆样本(2个等分试样，各1mL)用于进一步测试。通过切除腹静脉和主动脉而使大鼠安乐死。
使每个胰脏样本于酸性缓冲液内均质化，并且使用ELISA试剂盒来测量下列组的胰岛素和胰岛素原含量：
第1组：瘦大鼠+媒介物(n＝10)
第2组：ZDF大鼠+媒介物(n＝10)
第4组：ZDF大鼠+AB1460mg/kg/周(n＝10)
第5组：ZDF大鼠+二甲双胍200mg/kg/天(n＝10)
第8组：ZDF大鼠+AB1460mg/kg/周+二甲双胍200mg/kg/天(n＝10)
在最多为24-48小时期间内，将各个胰脏样本于4％福尔马林溶液内固定；福尔马林的体积比样本体积的5-10倍更高以确保恰当的固定作用。48h之后，将样本放置于70％乙醇内。然后将样本包含于石蜡里面供用于下列组的组织加工：
第1组：瘦大鼠+媒介物(n＝10)
第2组：ZDF大鼠+媒介物(n＝10)
第4组：ZDF大鼠+AB1460mg/kg/周(n＝10)
第5组：ZDF大鼠+二甲双胍200mg/kg/天(n＝10)
第8组：ZDF大鼠+AB1460mg/kg/周+二甲双胍200mg/kg/天(n＝10)
在描绘出胰岛之后，通过影像分析经标示的(棕色)和未经标示的(蓝色)区域，来定量胰岛素标示的表面和强度。
当费雪检定(Fishertest)没有显示出变异数的显著差异时，使用司徒顿检定(studenttest)来比较媒介物ZDF大鼠和瘦大鼠的平均值。如果没有，则使用非参数曼-怀特尼检定。
治疗的ZDF大鼠的平均值是使用单因素ANOVA+邓尼特事后检定来与媒介物ZDF大鼠比较。如果巴勒检定(Bartlett’stest)显示出变异数的显著差异，则使用非参数克鲁斯卡尔-沃利斯检定+邓恩事后检定。
AB1420mg/kg单独的平均值是使用单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定来与二甲双胍单独或二甲双胍200mg/kg与AB1420mg/kg的组合相比。
AB1460mg/kg单独的平均值是使用单因素ANOVA+纽曼-科伊尔斯事后检定来与二甲双胍200mg/kg单独或二甲双胍200mg/kg与AB1460mg/kg的组合相比。
使用二因素ANOVA+庞费洛尼事后检定来分析曲线。
如果大鼠于所有或几乎所有参数均是离群值，则其会被排除在分析以外。此造成四只大鼠被排除，各者来自不同的组。
结果
如同预期的，当与瘦大鼠相比时，8周龄的ZDF大鼠的HOMA-IR明显增加(～111相对于3.5，图18A)。ZDF大鼠为缓和性高血糖性的(～180相对于113mg/dL，图18B)且高胰岛素血性(～250相对于12.6μU/mL，图18C)。ZDF大鼠的体重稍微增加(图18D)。
与瘦大鼠相比，在整个治疗期间ZDF大鼠的体重仍是较高的(图19A)，而瘦大鼠与ZDF大鼠之间的体重增重是相似的(图19B)。
与ZDF媒介物大鼠相比，吡格列酮从治疗8天使体重显著地增加，并且在治疗期间结束时，体重增重为更高3倍(图19A和B)。与媒介物ZDF大鼠相比之下，所有其它药物治疗对于体重没有显著的效应。AB1460mg/kg+二甲双胍200mg/kg的组合从治疗22天使体重增重显著地增加(图19B)。
与瘦大鼠相比，媒介物ZDF大鼠的摄食量为增加～2倍(于第13天为显著的)。当与ZDF媒介物大鼠相比时，用吡格列酮治疗的大鼠显示出倾向较高的摄食量(于第15、20和22天为显著的，图20A)。当与瘦组(leangroup)相比时，媒介物ZDF组的累积摄食量增加94％(p<0.01)，以及当与媒介物ZDF组相比时，吡格列酮组增加14％(NS，图20B)。当与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，其它治疗对于摄食量没有效应。
在26天的治疗期间中，不论是空腹6小时或一夜之后，瘦大鼠的空腹血糖仍是在正常范围内(图21A)。此与正常的胰岛素水平相关(图21B)。于媒介物ZDF大鼠方面，隔夜空腹血糖于第12天达到362±32mg/dL(于约10周龄)，并且直到治疗期间结束，仍是显著地比瘦大鼠更高(图21A)。此与第12天、第19天和第26天所测得的减少的血浆胰岛素水平相关(49.2±6.7、41.2±4.8和36.6±2.7μU/mL–p<0.001，相对于瘦大鼠，图21B)，以及与减少的血浆C肽水平相关(2813±249、2472±195、2156±165pM-<p<0.001，相对于瘦大鼠(图21D)。瘦大鼠和媒介物ZDF大鼠的HOMA-IR发展反映出血糖以及血浆胰岛素水平的变化(图21C)。
吡格列酮从治疗12天使隔夜血糖的水平显著地减少至正常的水平(p<0.001，图21A)。AB14的两种剂量于治疗12、19或26天之后，均使血糖减少约15％(n.s，图21A)。与AB14相比，二甲双胍200mg/kg于第12天有相似的效应，但是于第19天和第26天没有观察到此效应。与媒介物治疗的ZDF大鼠相比，AB1420mg/kg+二甲双胍的组合于第12天使血糖稍微降低(12％,ns)，并且于第19和26天显示为没有效应(图21A)。相比之下，AB1460mg/kg组合以二甲双胍于第12天显著地使血糖的水平降低(38％，p<0.01，相对于媒介物治疗的ZDF大鼠)。虽然统计上不显著，但是仍然于第19和26天观察到血糖降低(分别为22％和27％，图21A)。
吡格列酮似乎对于胰岛素分泌没有保护效应，因与媒介物ZDF大鼠相比时，吡格列酮于第12天、第19天和第26天对于血浆胰岛素和C肽水平没有显示效应(图21B和D)。因此，血糖水平的降低与吡格列酮的胰岛素敏化效应相关，当与媒介物ZDF大鼠相比时，此效应于第12天、第19天和第26天使HOMA-IR分别降低67％、62％和54％(图21C)。
与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，AB1420mg/kg于第12天、第19天和第26天没有改变血浆胰岛素和C肽水平，以及HOMA-IR(图21B-D)。同时，AB1460mg/kg于第12天、第19天和第26天使血浆胰岛素水平分别增加74％、21％和19％(ns，相对于媒介物ZDF大鼠，图21B)。
AB1460mg/kg于第12天使血浆C肽水平增加10％(ns)，以及于第19和26天没有效应(图21D)。
与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，二甲双胍于第12天、第19天和第26天使血浆胰岛素水平分别增加79％、55％和48％(ns，图21B)。二甲双胍于第12天、第19天和第26天使血浆C肽水平分别增加23％、21％和9％，(NS，相对于媒介物治疗的ZDF大鼠，图21D)。
与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，AB1420mg/kg+二甲双胍的组合于第12天、第19天和第26天使血浆胰岛素水平分别增加2倍(NS，图21B)。AB1420mg/kg+二甲双胍的组合于第12天、第19天和第26天使血浆C肽水平分别增加21％、23％和25％(NS，图21D)。
与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，AB1460mg/kg+二甲双胍的组合于第12天、第19天和第26天使血浆胰岛素水平分别显著地增加2.5、2.3和2.7倍。AB1460mg/kg+二甲双胍的组合从第12天使血浆C肽水平显著地增加45％(第12天)、48％(第19天)和52％(第26天)(p<0.05，相对于媒介物治疗的ZDF大鼠，图21D)。
于此种胰岛素分泌随时间而降低的模型内，HOMA-IR的增加反映出胰岛素分泌的改善。因而，与媒介物ZDF组比较，经二甲双胍单独或与AB14的组合治疗的组观察到HOMA-IR的增加，并且于第12天、第19天和第26天均保持此增加(图21C)。
与瘦大鼠比较，8周龄的媒介物治疗的ZDF大鼠(208±6相对于144±2μM，p<0.001)的果糖胺为显著更高的(66％)。在治疗期间瘦大鼠的果糖胺水平仍在相似的范围内，但是于治疗19天(253±5μM，p<0.001)和28天(234±6μM，p<0.001)之后，媒介物ZDF大鼠的果糖胺水平增加(图22)。如同预期的，吡格列酮从第19天使果糖胺水平显著地降低(于第19天为30％且于第28天为25％，p<0.001)。AB1420和60mg/kg对于果糖胺水平没有效应。与媒介物治疗的大鼠比较，二甲双胍只有在第19天(6％，ns)显示出倾向更低的果糖胺水平。与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，AB1420mg/kg+二甲双胍的组合于第19天和第28天分别显示出不显著的倾向较低的果糖胺水平达10％和8％。AB1460mg/kg+二甲双胍的组合同样地于第28天显示出不显著的倾向较低的果糖胺水平(9％)(图22)。
与瘦大鼠比较，8周龄的ZDF大鼠的HbA1c为更较高的(4.3±0.1％相对于3.1±0.04％)，但这些值落在正常范围内。
于12周龄的ZDF大鼠方面，HbA1c于第28天达到病理值8.8±0.2％，(p<0.001，ZDF相对于瘦大鼠，图23)。与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，AB1420和60mg/kg于治疗28天之后，对于HbA1c水平没有效应。于治疗28天之后，吡格列酮和二甲双胍使HbA1c分别显著地减少44和15％(图23)。二甲双胍与AB1420mg/kg的组合以及二甲双胍与AB1460mg/kg的组合使HbA1c分别显著地减少11和19％(图23)。
与瘦大鼠相比，8周龄的ZDF大鼠的血浆三酸甘油酯水平明显增加(～8mM相对于～0.7mM，图24A)。
与媒介物相比，吡格列酮从治疗的第12天使血浆三酸甘油酯水平明显减少。AB1420mg/kg于第12天和第19天使血浆三酸甘油酯水平稍微减少(分别为15％和7％，ns)，以及于第26天没有效应。AB1460mg/kg于第12天、第19天和第26天使血浆三酸甘油酯水平分别稍微减少14％、9％和12％(ns)。二甲双胍于第12天、第19天和第26天使血浆三酸甘油酯水平分别增加26％、40％以及49％(从第19天为显著的)。当与媒介物ZDF组比较时，二甲双胍+AB1420mg/kg的组合于第19天和第26天显示出倾向于更高的血浆三酸甘油酯(分别为13％和23％，ns)。二甲双胍+AB1460mg/kg的组合于第12天、第19天和第26天显示出倾向于为较高的血浆三酸甘油酯(分别为9％、48％以及43％，从第19天为显著的，图24A)。
在空腹6小时之后，8周龄的ZDF大鼠的血浆游离脂肪酸水平比瘦大鼠更高(～0.85mM相对于～0.59mM)。在隔夜空腹之后(最大的解脂状态)，10和11周的游离脂肪酸水平是与相似的(～1.3mM)。12周治疗之后，当与瘦大鼠比较，如同较低的游离脂肪酸水平所表明，ZDF大鼠的解脂能力减小(1.05±0.06相对于1.38±0.03mM，图24B)。与媒介物ZDF大鼠比较，用吡格列酮的治疗大鼠显示出较低的血浆游离脂肪酸水平，于第12天达35％(p<0.001)、于第19天达17％(ns)，以及于第26天达30％(p<0.05)。AB1420和60mg/kg没有效应。当与媒介物ZDF大鼠相比时，二甲双胍于第12天、第19天和第26天使游离脂肪酸水平增加14％、25％和8％，但是不显著。二甲双胍单独或与AB1420mg/kg的组合有相似的效应。另一方面，当与媒介物ZDF组比较，二甲双胍与AB1460mg/kg组合仅于第19天显示出增加的效应(20％，NS，图24B)。
与瘦大鼠比较，8周龄的ZDF大鼠的血浆总胆固醇和HDL-胆固醇水平为更较高的，以及于之后的4周逐渐地增加(图25A-B，图26A-B)。8周龄时瘦大鼠和ZDF大鼠的血浆非HDL-胆固醇水平是相似的，但是从10周ZDF大鼠和瘦大鼠的血浆非HDL-胆固醇水平随时间增加(图25C和图26C)。因为ZDF组之间第0天的总胆固醇和HDL-胆固醇有显著差异(图25)，所以以离第0天的相对值来表示结果(图26)。如图26A中所示，吡格列酮倾向预防血浆总胆固醇水平随时间增加。AB1420mg/kg与二甲双胍没有效应。与媒介物ZDF组比较，AB1460mg/kg于第12天、第19天和第26天使总胆固醇分别增加8％、14％和15％。与媒介物ZDF组比较，当与二甲双胍组合，AB1420mg/kg于第12和26天分别使总胆固醇增加15％和10％，而AB1460mg/kg于第12天、第19天和第26天分别使总胆固醇增加24％、21％和13％。与媒介物比较，吡格列酮于第12天、第19天和第26天分别地为血浆HDL-胆固醇增加38％、17％和19％。二甲双胍单独没有效应。单独或与二甲双胍组合的AB1420mg/kg和60mg/kg治疗12天、19天和26天之后，会使血浆HDL-胆固醇水平增加11至22％。于治疗12天之后，所有ZDF组的血浆非HDL-胆固醇水平(图26C)是相似的。与媒介物比较，AB1420mg/kg、AB1460mg/kg、二甲双胍单独、或二甲双胍与AB14组合对于非HDL-胆固醇水平没有效应。只有吡格列酮于第19天和第26天分别使血浆非HDL-胆固醇水平显著地减少49％和47％。
于治疗26天之后执行口服耐糖试验。当与媒介物治疗的ZDF瘦大鼠比较，预期葡萄糖负荷之前和葡萄糖负荷之后的媒介物治疗ZDF大鼠的血糖水平为更高(图27A)。与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，只有吡格列酮治疗的ZDF大鼠在所有时间点显示出显著降低的血糖水平。与媒介物比较，AB1460mg/kg和二甲双胍的组合于t-60分钟时，倾向使血糖的水平降低(图27A)，而其它药物治疗没有显示出显著的效应。与瘦大鼠比较，媒介物治疗的ZDF大鼠血糖的曲线下面积(AUC)显著地增加3.7倍。与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，用吡格列酮治疗的大鼠的血糖AUC显示出54％的显著降低。AB1420mg/kg、AB1460mg/kg以及二甲双胍单独或二甲双胍与AB1420mg/kg或60mg/kg的组合显示出AUC不显著的降低(分别为7％、11％、6％、7％和17％)。当与AB14或二甲双胍单独作比较，AB1460mg/kg+二甲双胍的组合于降低AUC是稍微有效的(图27B)。
于葡萄糖负荷之后15和30分钟时测量血浆胰岛素和C肽水平。胰岛素和C肽二者的浓度对时间曲线是相似的。媒介物、AB1420mg/kg和AB1460mg/kg治疗组的胰岛素和C肽水平是与相似的，二甲双胍和吡格列酮治疗组使胰岛素和C肽水平稍微增加，且与二甲双胍组合的AB1420mg/kg和AB1460mg/kg所治疗的组是以剂量依赖性方式使胰岛素和C肽水平增加更多(图28A-B)。评估胰岛素或C肽对葡萄糖攻击反应而分泌的能力，此是通过离T-60分钟时计算的相对值来表示结果。如同预期的，当与瘦大鼠相比时，媒介物ZDF大鼠明显地失去其对葡萄糖攻击反应而分泌胰岛素和C肽的能力(图29A-B)。当与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，用吡格列酮治疗的大鼠于时间T15和T30使胰岛素分泌分别增加20％(p<0.05)和5％。所有其它治疗于时间T15对于胰岛素分泌没有效应。二甲双胍于时间T30使胰岛素分泌减少26％(p<0.01)。AB1420mg/kg单独于时间T30没有效应，且与二甲双胍组合显示倾向使胰岛素分泌减少(14％，ns)。AB1460mg/kg单独或与二甲双胍组合显示出倾向使胰岛素分泌分别减少19％和18％(图29A)。当与瘦大鼠相比时，媒介物治疗的ZDF大鼠于时间T15和T30，对葡萄糖负荷反应的C肽分泌(图29B)显著地降低达～40％。当与媒介物治疗的ZDF大鼠比较，只有吡格列酮于时间T15和T30分别显著地使C肽分泌增加21％和22％。
如同预期的，当与瘦大鼠相比时，12周龄的ZDF大鼠的胰脏胰岛素原(图30A)和胰岛素(图30B)水平显著地减少。AB1460mg/kg和二甲双胍完全地预防胰岛素原的降低，并且AB1460mg/kg组合二甲双胍显著地增加胰岛素原水平(p<0.05，相对于媒介物)(图30A)。AB1460mg/kg使胰脏胰岛素水平稍微增加，且二甲双胍或AB1460mg/kg组合二甲双胍显著地增加胰岛素水平(p<0.05，相对于媒介物)(图30B)。与瘦大鼠相比，ZDF大鼠的胰岛素原/胰岛素比率显著地增加，然而药物治疗没有观察到变化(图30C)。
此研究中报告没有毒性的迹象，聚焦在媒介物、AB14、二甲双胍或AB14/二甲双胍的组合治疗的瘦大鼠或ZDF大鼠胰脏的显微镜变化。
提供媒介物对照的ZDF大鼠内注意到有更高的局灶性至多局灶性大的/巨大的胰岛发生率和严重性，此对应于胰岛增生和胰岛纤维化(表1和表2)。
表1.组织病理发生率的观察。除非另外指明，否则所有治疗组都是ZDF大鼠。Met.：二甲双胍200mg/kg/天。
表2.组织病理分析：基本发现的组平均分数。除非另外指明，否则所有治疗组都是ZDF大鼠。Met.：二甲双胍200mg/kg/天。
与瘦大鼠相比，媒介物治疗的ZDF大鼠有轻微的胰岛细胞空泡形成和增加的胰岛纤维化发生率和严重性。全部的药物治疗，AB1460mg/kg、二甲双胍、或二甲双胍与AB14的组合一致倾向使空泡形成和胰岛纤维化严重性减少。这些效应在AB14与二甲双胍组合时是更加明显的。
如同预期的，免疫组织化学分析所测得的胰脏胰岛素显示出ZDF大鼠的胰岛素标示的减少。如同从胰岛素含量(图30B)测量观察到的，药物治疗会稍微预防此胰岛素标示的减少，且当AB14与二甲双胍组合时的效应优选(图31)。
讨论
8周龄的ZDF大鼠有明显的胰岛素抗性和严重的高胰岛素血性，但只有缓和性高血糖性，通过静脉给予剂量为0mg/kg(媒介物)、20mg/kg，或60mg/kg的Ab14每周一次，持续4周。在此时间期间，媒介物治疗的对照进展至明显糖尿病，且在研究的第12天之前成为严重的低胰岛素血性和明确的高血糖性，此与年龄10周之前完全胰脏β细胞衰竭一致。此在研究结束时通过直接测量胰脏的胰岛素和胰岛素原水平来确认，胰岛素和胰岛素原水平都显著降低，并且通过免疫组织化学评估胰脏的胰岛素标示，其还引人注目地减低。此外，在研究结束时进行的组织学分析还证实使这些动物的胰岛细胞空泡形成、胰岛增生(大的/巨大的胰岛)、以及胰岛纤维化的发生率和严重性增加，与糖尿病胰岛病变一致。
相比之下，两种剂量的AB14会部分预防研究的第12天媒介物治疗的对照组的空腹血糖上升，并且于研究的第19天和第26天也观察到此种部分预防作用。此外，高剂量的Ab14也会部分预防研究的第12天媒介物治疗的对照组，观察到的血浆胰岛素和C肽水平的下降。于研究的第19天和第26天也观察到此种部分预防作用，但是程度较小，此表示适度的延迟疾病进展(胰脏β细胞衰竭)，并且表明此化合物的胰脏β细胞部分保护作用。实际上，当在研究结束(第28天)得到胰脏组织时，于媒介物治疗的对照组内观察到，高剂量的Ab14也会完全预防胰脏胰岛素原水平的下降，并且当直接测量或通过免疫组织化学分析测量，也会观察到胰脏胰岛素水平的下降的部分预防作用。此外，在研究结束组织学评估时，于媒介物治疗的动物注意到Ab14一贯地降低胰岛空泡形成、胰岛纤维化和胰岛增生，此进一步指明对糖尿病胰岛病变的有利影响。
如实施例2中所展示，当与媒介物治疗的对照组相比时，Ab14对摄食量或体重没有效应，表明Ab14对以上所评估的参数的效应不是由于卡路里的限制或者重量减轻所致。

Claims (47)

1.一种在有需要的个体中增加周边和/或肝脏的葡萄糖利用的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
2.一种在有需要的个体中减少胰岛素抗性的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
3.一种在有需要的个体中治疗、预防或控制肥胖症的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
4.一种在有需要的个体中达成持续的血糖量正常的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
5.一种在有需要的个体中增加瘦肉组织与体脂肪的比率的方法，其包括向所述个体施用有效量的包含抗人类CGRP抗体或抗体片段的组合物。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其有效治疗或延迟第II型糖尿病和/或肥胖症的发病，和/或预防功能性胰脏β细胞的丧失。
7.如权利要求6所述的方法，其中施用外源性胰岛素的需求被延迟。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述个体已被诊断为具有糖尿病前期或展现出一个或多个发展为第II型糖尿病的风险因素。
9.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述个体为绝经前、围绝经期、绝经期或绝经后。
10.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述个体展现出一个或多个糖尿病前期的症状，其包含：空腹血糖水平介于100mg/dL和125mg/dl之间；摄食75克葡萄糖溶液或摄食每公斤体重1.75克葡萄糖的葡萄糖溶液至75克最大剂量，2小时之后血糖水平介于140mg/dL和199mg/dL之间；和/或糖化血红蛋白介于5.7％和6.4％之间。
11.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述个体展现出一个或多个糖尿病的症状，其包含：空腹血糖水平大于125mg/dl；摄食75克葡萄糖溶液或摄食每公斤体重1.75克葡萄糖的葡萄糖溶液至75克最大剂量，2小时之后血糖水平为至少200mg/dL；和/或糖化血红蛋白为至少6.5％。
12.如权利要求8所述的方法，其中所述个体展现出一个或多个发展为第II型糖尿病的风险因素，其包括：第II型糖尿病的家族史；一个或多个双亲或兄弟姐妹先前被诊断为具有第II型糖尿病；血脂异常；总血液三酸甘油酯水平为至少200mg/dL；血液高密度脂蛋白水平小于35mg/dL；肥胖症；身体质量指数大于25kg/m2；妊娠糖尿病的病史；先前产生的婴儿出生重量大于9lbs；高血压；收缩压为至少140mmHg；舒张压为至少90mmHg；先前测量空腹血糖为至少99mg/dL；血管疾病；多囊卵巢综合征；或黑棘皮症。
13.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述个体已被诊断为具有第II型糖尿病。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述个体用以下的治疗难以治愈：GLP-1、艾塞那肽-1、促胰岛素分泌素、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、利拉鲁肽、艾塞那肽LAR、DPP-4拮抗剂、GLP-1受体激动剂或另一GLP-1激动剂。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括向所述个体施用除抗人类CGRP抗体或抗体片段以外的抗糖尿病剂或抗肥胖剂。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述抗糖尿病剂或抗肥胖剂包括下列中的一种或多种：淀粉素、淀粉素激动剂、磺酰脲类、降钙素、胰高血糖素、PPAR-γ激动剂、GPL-1受体激动剂、二肽基肽酶IV抑制剂、淀粉素类似物、双胍类、多巴胺D2受体激动剂、美格替奈类、α葡萄糖苷酶抑制剂、抗异常血脂症胆酸螯合剂、促胰岛素分泌素、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、胃抑肽(GIP)、肠促胰液素肽、胰岛素、SGLT2抑制剂、葡萄糖再吸收抑制剂、非诺贝特、贝特类、抗胃饥饿素抗体或抗体片段、纤维母细胞生长因子受体(FGFR)-1(IIIb)、FGFR-1(IIIc)、抗体或抗体片段、和/或FGFR-4(IIIc)、抗CD38抗体或抗体片段、抗MIC-1抗体、或MIC-1结合片段、二甲双胍或前述任一种的组合。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述抗糖尿病剂为二甲双胍。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其有效使重量减轻。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经施用的抗人类CGRP抗体或抗体片段不会使体内胰岛素分泌显著地增加。
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述经施用的抗人类CGRP抗体或抗体片段不会导致胰腺炎发生率增加或者与胰脏发炎相关的标记或细胞因子的表达增加。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段是以介于约0.1和100.0mg/kg接受个体的体重之间的剂量施用给所述个体。
23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为人类抗体。
24.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为非天然存在的。
25.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为非天然存在的抗体片段。
26.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为人源化抗体。
27.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为嵌合抗体。
28.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段特异地结合至完整CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，和/或竞争结合至完整CGRP多肽或其片段上的相同或重叠的线性或构象表位，如同选自由以下组成的组的抗人类CGRP抗体：
a.Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；
b.Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；
c.Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；
d.Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；
e.Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；
f.Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
g.Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
h.Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
i.Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
j.Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；
k.Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；
l.Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；
m.Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及
n.Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的抗体中所含的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR：
a.Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；
b.Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；
c.Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；
d.Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；
e.Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；
f.Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
g.Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
h.Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
i.Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
j.Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；
k.Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；
l.Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；
m.Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及
n.Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
30.如权利要求28所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段具有与选自由以下组成的组的抗体至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列：
a.Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；
b.Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；
c.Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；
d.Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；
e.Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；
f.Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
g.Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
h.Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
i.Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
j.Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；
k.Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；
l.Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；
m.Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及
n.Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
31.如权利要求28所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的抗体：
a.Ab1，其包含SEQIDNO:2的VL与SEQIDNO:4的VH；
b.Ab2，其包含SEQIDNO:12的VL与SEQIDNO:14的VH；
c.Ab3，其包含SEQIDNO:22的VL与SEQIDNO:24的VH；
d.Ab4，其包含SEQIDNO:32的VL与SEQIDNO:34的VH；
e.Ab5，其包含SEQIDNO:42的VL与SEQIDNO:44的VH；
f.Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
g.Ab7，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
h.Ab8，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH；
i.Ab9，其包含SEQIDNO:62的VL与SEQIDNO:64的VH；
j.Ab10，其包含SEQIDNO:72的VL与SEQIDNO:74的VH；
k.Ab11，其包含SEQIDNO:82的VL与SEQIDNO:84的VH；
l.Ab12，其包含SEQIDNO:92的VL与SEQIDNO:94的VH；
m.Ab13，其包含SEQIDNO:102的VL与SEQIDNO:104的VH；以及
n.Ab14，其包含SEQIDNO:112的VL与SEQIDNO:114的VH。
32.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段如同所述抗人类CGRP抗体Ab6一般，特异地结合至完整CGRP多肽或其片段上相同的线性或构象表位，和/或竞争结合至完整CGRP多肽或其片段上的相同或重叠的线性或构象表位，所述抗人类CGRP抗体Ab6包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH。
33.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含所述抗人类CGRP抗体Ab6中所含的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或优选全部六个CDR，所述抗人类CGRP抗体Ab6包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH。
34.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段具有与所述抗人类CGRP抗体Ab6至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列，所述抗人类CGRP抗体Ab6包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH，其中所述抗体任选地含有所述抗人类CGRP抗体Ab6中所含的全部六个CDR，所述抗人类CGRP抗体Ab6包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH。
35.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含Ab6，其包含SEQIDNO:52的VL与SEQIDNO:54的VH。
36.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含人类、嵌合或人源化抗体。
37.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段包含Fab、F(ab’)2、scFv或IgNar或另一单价抗体片段。
38.一种适合用于如前述权利要求中任一项所述的方法的组合物，其包含有效量的组合物，所述组合物包含抗人类CGRP抗体或抗体片段以及除抗人类CGRP抗体或抗体片段以外的抗糖尿病剂或抗肥胖剂。
39.如权利要求38所述的组合物，其中所述抗人类CGRP抗体或抗体片段为如权利要求28-31或36-37中任一项所述的一种，或优选为如权利要求32-36中任一项所述的一种。
40.如权利要求39所述的组合物，其中所述抗糖尿病剂或抗肥胖剂包含下列的一种或多种：淀粉素、淀粉素激动剂、磺酰脲类、降钙素、胰高血糖素、PPAR-γ激动剂、GPL-1受体激动剂、二肽基肽酶IV抑制剂、淀粉素类似物、双胍类、多巴胺D2受体激动剂、美格替奈类、α葡萄糖苷酶抑制剂、抗异常血脂症胆酸螯合剂、促胰岛素分泌素、促胰岛素分泌素类似物、促胰岛素分泌素激动剂、胃抑肽(GIP)、肠促胰液素肽、胰岛素、SGLT2抑制剂、葡萄糖再吸收抑制剂、非诺贝特、贝特类、二甲双胍、抗胃饥饿素抗体或抗体片段、纤维母细胞生长因子受体(FGFR)-1(IIIb)、FGFR-1(IIIc)、抗体或抗体片段、和/或FGFR-4(IIIc)、抗CD38抗体或抗体片段、抗MIC-1抗体或MIC-1结合片段、或前述任一种的组合。
41.如权利要求39所述的组合物，其中所述另外的抗糖尿病剂或抗肥胖剂包含二甲双胍。
42.一种鉴定使周边葡萄糖利用增加的抗人类CGRP抗体或抗体片段的方法，其包括：向个体施用抗人类CGRP抗体或抗体片段，测量所述个体的周边葡萄糖利用，以及比较所述个体的周边葡萄糖利用水平与至少一个对照个体的周边葡萄糖利用水平。
43.一种鉴定使肝脏葡萄糖利用增加的抗人类CGRP抗体或抗体片段的方法，其包括：向个体施用抗人类CGRP抗体或抗体片段，测量所述个体的肝脏葡萄糖利用，以及比较所述个体的肝脏葡萄糖利用水平与至少一个对照个体的周边葡萄糖利用水平。
44.如权利要求42或43所述的方法，其中所述个体为人类、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物、非人类动物的糖尿病模型。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述非人类动物的糖尿病模型选自进食高脂肪饮食的大鼠和祖克糖尿病肥胖(ZDF)大鼠。
46.如权利要求42至45中任一项所述的方法，其中相对于所述对照个体，所述抗人类CGRP抗体或抗体片段使周边葡萄糖利用增加至少10％、至少20％或至少50％。
47.如权利要求42至46中任一项所述的方法，其中所述至少一个对照个体包括在施用所述抗人类CGRP抗体或抗体片段之前的所述个体。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI712419B (zh) * 2013-07-03 2020-12-11 美商艾爾德生物製藥股份有限公司 使用抗ｃｇｒｐ抗體之葡萄糖代謝的調節
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
KR102274964B1 (ko) 2014-03-21 2021-07-09 테바 파마슈티컬스 인터내셔널 게엠베하 칼시토닌 유전자-관련 펩티드에 대한 길항제 항체 및 그의 사용 방법
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
FI3515937T3 (fi) 2016-09-23 2026-02-11 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Refraktaarisen migreenin hoito
AU2020202454A1 (en) 2020-04-06 2021-10-21 H. Lundbeck A/S Treatment of most bothersome symptom (MBS) associated with migraine using anti-CGRP antibodies
CN116057185A (zh) * 2020-08-15 2023-05-02 雷杰纳荣制药公司 治疗具有编码降钙素受体(calcr)的变体核酸分子的受试者的肥胖症
KR20240049275A (ko) 2021-08-27 2024-04-16 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 항-cgrp 항체를 사용한 군발성 두통의 치료
WO2025262247A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 H. Lundbeck A/S Treatment of headache disorders and/or psychiatric symptoms using anti-cgrp antibodies, and compositions and methods related thereto

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5266561A (en) * 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5364841A (en) * 1988-01-11 1994-11-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
US20120294797A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Brian Robert Kovacevich Anti-cgrp compositions and use thereof

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
GB8720115D0 (en) 1987-08-26 1987-09-30 Cooper G J S Treatment of diabetes mellitus
GB8725529D0 (en) 1987-10-30 1987-12-02 Delta Biotechnology Ltd Polypeptides
WO1989006135A1 (en) * 1988-01-11 1989-07-13 Amylin Corporation Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5175145A (en) 1988-08-26 1992-12-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of diabetes mellitus with amylin agonists
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
EP0403631B1 (en) * 1989-01-03 1995-08-09 Motorola, Inc. Method of making high density solder bumps and a substrate socket for high density solder bumps
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
CA2020786A1 (en) * 1989-07-10 1991-01-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
WO1994021293A1 (en) 1993-03-19 1994-09-29 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
JP3053873B2 (ja) 1994-08-12 2000-06-19 イムノメディクス，インコーポレイテッド Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
CA2471833A1 (en) * 2001-11-26 2003-06-05 Protemix Corporation Limited Methods of compositions for normalizing lipid levels in mammalian tissues
DK1678314T3 (da) 2003-10-22 2012-12-03 Keck Graduate Inst Fremgangsmåde til syntetisering af heteromultimere polypeptider i gær ved anvendelse af en haploid parringsstrategi
RS20080200A (sr) * 2005-11-14 2009-07-15 Rinat Neuroscience Corp., Antagonistička antitela usmerena protiv kalcitonina, peptida povezanog sa genom, i postupak njihovog korišćenja
NZ572807A (en) 2006-05-19 2011-10-28 Alder Biopharmaceuticals Inc Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells
KR101615715B1 (ko) 2007-05-21 2016-04-27 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도
JP5859202B2 (ja) 2007-05-21 2016-02-10 アルダーバイオ・ホールディングズ・エルエルシー 新規のウサギ抗体ヒト化方法及びヒト化ウサギ抗体
TW201531484A (zh) 2007-05-21 2015-08-16 Alder Biopharmaceuticals Inc 抗ＴＮＦ-α之抗體及其用途
JP6189832B2 (ja) * 2011-05-20 2017-08-30 アルダーバイオ・ホールディングズ・エルエルシー 慢性および急性の下痢を治療または予防するための抗ｃｇｒｐ若しくは抗ｃｇｒｐ−ｒの抗体または抗体断片の使用
TWI712419B (zh) * 2013-07-03 2020-12-11 美商艾爾德生物製藥股份有限公司 使用抗ｃｇｒｐ抗體之葡萄糖代謝的調節

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5266561A (en) * 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
US5364841A (en) * 1988-01-11 1994-11-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
US20120294797A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Brian Robert Kovacevich Anti-cgrp compositions and use thereof

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