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CN105120871A - 吡唑并嘧啶衍生物治疗PI3Kδ相关病症的用途 - Google Patents

吡唑并嘧啶衍生物治疗PI3Kδ相关病症的用途 Download PDF

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CN105120871A CN201480021187.1A CN201480021187A CN105120871A CN 105120871 A CN105120871 A CN 105120871A CN 201480021187 A CN201480021187 A CN 201480021187A CN 105120871 A CN105120871 A CN 105120871A
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Abstract

本申请提供使用式I化合物：

Description

吡唑并嘧啶衍生物治疗PI3Kδ相关病症的用途
本申请要求2013年3月1日申请的美国临时申请号61/771,480的优先权益，所述临时申请以全文引用的方式并入本文。
技术领域
本申请提供使用吡唑并嘧啶衍生物治疗PI3Kδ相关病症的方法。
背景
磷酸肌醇3-激酶(PI3K)属于在肌醇环的D3位置上使磷酸肌醇磷酸化的脂质信号传导激酶大家族(Cantley,Science,2002,296(5573):1655-7)。PI3K根据其结构、调控和底物特异性分成三个类别(类别I、II和III)。包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ在内的类别IPI3K为催化磷脂酰肌醇-4,5-双磷酸(PIP2)磷酸化，从而产生磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)的双重特异性脂质和蛋白质激酶家族。PIP3充当控制许多细胞过程，包括生长、存活、粘附和迁移的第二信使。所有四个类别IPI3K同工型皆以由催化亚基(p110)和控制其表达、活化和亚细胞定位的紧密缔合的调控亚基构成的杂二聚体形式存在。PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ与称为p85的调控亚基缔合且由生长因子和细胞因子经由酪氨酸激酶依赖性机制活化(Jimenez等,JBiolChem.,2002,277(44):41556-62)，而PI3Kγ与两个调控亚基(p101和p84)缔合且其活化是由G蛋白偶联受体的活化驱动(Brock等,JCellBiol.,2003,160(1):89-99)。PI3Kα和PI3Kβ普遍表达。相反，PI3Kγ和PI3Kδ主要在白血球中表达(Vanhaesebroeck等,TrendsBiochemSci.,2005,30(4):194-204)。
PI3K同工型的差异性组织分布的原因在于其生物功能不同。基因去除PI3Kα或PI3Kβ会导致胚胎致死，表明PI3Kα和PI3Kβ至少在发育期间具有必要且非冗余的功能(Vanhaesebroeck等,2005)。相反，尽管缺乏PI3Kγ和PI3Kδ的小鼠显示免疫系统改变，但其可存活、可繁殖且具有正常寿命。PI3Kγ缺乏会导致巨噬细胞和嗜中性球朝向发炎位点的募集障碍以及T细胞活化障碍(Sasaki等,Science,2000,287(5455):1040-6)。PI3Kδ突变型小鼠的B细胞信号传导具有特定缺陷，其导致B细胞发育障碍和抗原刺激后的抗体反应降低(Clayton等,JExpMed.2002,196(6):753-63；Jou等,MolCellBiol.2002,22(24):8580-91；Okkenhaug等,Science,2002,297(5583):1031-4)。
PI3Kγ和PI3Kδ突变型小鼠的表型表明这些酶可能在发炎和其他免疫基疾病中起作用且此在临床前模型中得到证实。在小鼠类风湿性关节炎(RA)和哮喘模型中，PI3Kγ突变型小鼠基本上免遭疾病影响(Camps等,NatMed.2005,11(9):936-43；Thomas等,EurJImmunol.2005,35(4):1283-91)。此外，显示用PI3Kγ的选择性抑制剂治疗野生型小鼠在MRL-lpr全身性狼疮肾炎(SLE)模型中减轻肾小球性肾炎(glomerulonephritis)并延长存活期且在RA模型中抑制关节发炎和损伤(Barber等,NatMed.2005,11(9):933-5；Camps等,2005)。类似地，用PI3Kδ的选择性抑制剂治疗的PI3Kδ突变型小鼠与野生型小鼠两者均显示在小鼠哮喘模型中具有减弱的过敏性气道发炎和过度反应(Ali等,Nature.2004,431(7011):1007-11；Lee等,FASEBJ.2006,20(3):455-65)且在RA模型中使疾病减弱(Randis等,Eur.J.Immunol.,2008,38(5):1215-24)。
已显示B细胞增殖在发炎性自身免疫性疾病的发展中起主要作用(Puri,FrontiersinImmunology(2012),3(256),1-16；Walsh,KidneyInternational(2007)72,676-682)。举例来说，B细胞支持T细胞自体反应性，所述反应性为发炎性自身免疫性疾病的一种重要组分。一旦活化且成熟，B细胞即可迁移至发炎部位且募集发炎细胞或分化成浆母细胞。因此，B细胞的活性可通过靶向B细胞刺激性细胞因子、B细胞表面受体或经由B细胞去除而加以影响。利妥昔单抗(Rituximab)—一种针对B细胞表面受体CD20的IgG1κ小鼠/人类嵌合单克隆抗体—已显示会去除CD20+B细胞。已显示使用利妥昔单抗具有治疗特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血或血管炎的功效。举例来说，用利妥昔单抗治疗使得罹患抗嗜中性球细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)的患者的疾病得到缓解并且证实周边B细胞被去除(Walsh,2007；Lovric,NephrolDialTransplant(2009)24:179-185)。类似地，在用利妥昔单抗治疗之后，报导在三分之一至三分之二患有混合冷球蛋白血症(cryoglobulinemia)血管炎的患者中发生完全反应，所述患者包括呈现出对其他治疗剂具有抗性或不耐受性的重型血管炎的患者(Cacoub,AnnRheumDis2008；67:283-287)。类似地，已显示利妥昔单抗具有治疗患有特发性血小板减少性紫癜(或免疫性血小板减少性紫癜)(Garvey,BritishJournalofHaematology,(2008)141,149-169；Godeau,Blood(2008),112(4),999-1004；Medeo,EuropeanJournalofHaematology,(2008)81,165-169)和自身免疫性溶血性贫血(Garvey,BritishJournalofHaematology,(2008)141,149-169)的患者的功效。
已发现PI3Kδ信号传导与B细胞存活、迁移和活化相关联(Puri,FrontiersinImmunology,2012,3(256),1-16,第1-5页；和Clayton,JExpMed,2002,196(6):753-63)。举例来说，PI3Kδ为由B细胞受体驱动的抗原依赖性B细胞活化所需。通过阻断B细胞粘附、存活、活化和增殖，PI3Kδ抑制可降低B细胞活化T细胞的能力，从而防止其活化和减少自体抗体和促发炎性细胞因子的分泌。因此，因PI3Kδ抑制剂能够抑制B细胞活化，将预期其可治疗可通过类似方法(如用利妥昔单抗(rituximab)使B细胞去除)治疗的B细胞介导的疾病。实际上，已显示PI3Kδ抑制剂为也可通过利妥昔单抗治疗的各种自身免疫性疾病，如关节炎的适用小鼠模型(Puri(2012))。此外，与自身免疫性相关联的先天样B细胞对PI3Kδ活性敏感，因为MZ和B-1细胞在缺乏p110δ基因的小鼠中几乎不存在(Puri(2012))。PI3Kδ抑制剂可降低自身免疫性疾病中牵涉的MZ和B-1细胞的迁移和活化。
所有四个类别IPI3K同工型除在发炎性疾病中的潜在作用之外，其也可在癌症中起作用。在包括乳癌、前列腺癌、结肠癌和子宫内膜癌的常见癌症中，编码p110α的基因常常突变(Samuels等,Science,2004,304(5670):554；Samuels等,CurrOpinOncol.2006,18(1):77-82)。这些突变中的80％由酶的螺旋结构域或激酶结构域中的三个氨基酸取代中的一者表示且导致激酶活性显著上调，从而在细胞培养物和动物模型中导致致癌转化(Kang等,ProcNatlAcadSciUSA.2005,102(3):802-7；Bader等,ProcNatlAcadSciUSA.2006,103(5):1475-9)。在其他PI3K同工型中尚未鉴别出这些突变，但有证据表明其可有助于恶性疾病的产生和发展。观测到PI3Kδ在急性成髓细胞性白血病中一贯过度表达(Sujobert等,Blood,2005,106(3):1063-6)且PI3Kδ的抑制剂可阻止白血病细胞生长(Billottet等,Oncogene.2006,25(50):6648-59)。观察到PI3Kγ在慢性骨髓性白血病中表达升高(Hickey等,JBiolChem.2006,281(5):2441-50)。也已在脑癌、结肠癌和膀胱癌中观测到PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ的表达改变(Benistant等,Oncogene,2000,19(44):5083-90；Mizoguchi等,BrainPathol.2004,14(4):372-7；Knobbe等,NeuropatholApplNeurobiol.2005,31(5):486-90)。此外，这些同工型已全部显示在细胞培养物中具有致癌性(Kang等,2006)。
出于这些原因，对开发可用于发炎性病症、自身免疫性疾病和癌症的新颖PI3K抑制剂存在需要。本发明是针对此需要和其他需要。
概述
本发明提供治疗患者的特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮肾炎、天疱疮、膜性肾病变、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma)、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)、前淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关的淋巴组织(MALT)淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、冒烟型骨髓瘤(也称无症状骨髓瘤)、意义未确定的单克隆γ球蛋白症(MGUS)、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中R2、R3、R4、R5和Cy在下文中加以定义。
本发明还提供一种用于本文所述的任何方法中的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明进一步提供本文所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制造用于本文所述的任何方法中的药剂的用途。
附图描述
图1描绘实施例269的化合物的晶体结构。
图2描绘实施例347持续14日在0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg下的每日两次剂量在弥漫性大B细胞淋巴瘤的Pfeiffer人类肿瘤异种移植物模型中的肿瘤抑制作用(y轴为肿瘤体积(mm3±SEM)；x轴为植入后的天数)。
详述
本发明提供一种治疗患者的特发性血小板减少性紫癜、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮肾炎、天疱疮、膜性肾病变、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、前淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关的淋巴组织(MALT)淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、冒烟型骨髓瘤(也称无症状骨髓瘤)、意义未确定的单克隆γ球蛋白症(MGUS)、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R2为C1-6烷基或C1-6卤烷基；
R4为卤基、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基；
R5为卤基、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基；
Cy选自C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤烷基、ORa1、SRa1、C(＝O)Rb1、C(＝O)NRc1Rd1、C(＝O)ORa1、OC(＝O)Rb1、OC(＝O)NRc1Rd1、NRc1Rd1、NRc1C(＝O)Rb1、NRc1C(＝O)ORb1、NRc1C(＝O)NRc1Rd1、C(＝NRe)Rb1、C(＝NRe)NRc1Rd1、NRc1C(＝NRe)NRc1Rd1、NRc1S(＝O)Rb1、NRc1S(＝O)2NRc1Rd1、S(＝O)Rb1、S(＝O)2Rb1和S(＝O)2NRc1Rd1；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地选自C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地选自C1-6烷基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
或Rc1和Rd1连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C1-3烷基取代；
各Re独立地选自H、CN、OH、C1-4烷基和C1-4烷氧基；且
各R11独立地选自OH、NO2、CN、卤基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、C1-3卤烷基、氰基-C1-3烷基、HO-C1-3烷基、C1-3烷氧基-C1-3烷基、C3-7环烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、硫基、C1-3烷基硫基、C1-3烷基亚磺酰基、C1-3烷基磺酰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基、二(C1-3烷基)氨甲酰基、羧基、C1-3烷基羰基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基羰基氨基、C1-3烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基、C1-3烷基氨基磺酰基、二(C1-3烷基)氨基磺酰基、氨基磺酰基氨基、C1-3烷基氨基磺酰基氨基、二(C1-3烷基)氨基磺酰基氨基、氨基羰基氨基、C1-3烷基氨基羰基氨基和二(C1-3烷基)氨基羰基氨基。
在一些实施方案中，R2为C1-3烷基或C1-3氟烷基。在一些实施方案中，R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基。在一些实施方案中，R2为甲基。在一些实施方案中，R2为乙基。
在一些实施方案中，R4为卤基、CN或C1-3烷基。在一些实施方案中，R4为F、Cl、CN或甲基。在一些实施方案中，R4为F。在一些实施方案中，R4为Cl。在一些实施方案中，R4为CN。在一些实施方案中，R4为甲基。
在一些实施方案中，R5为卤基、CN或C1-3烷基。在一些实施方案中，R5为Cl、CN或甲基。在一些实施方案中，R5为Cl。在一些实施方案中，R5为CN。在一些实施方案中，R5为甲基。
在一些实施方案中，Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。在一些实施方案中，Cy为4-6元杂环烷基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。在一些实施方案中，Cy选自环丙基环、苯基环、氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环、3-氧代基-吗啉-6-基、2-氧代基-吡咯烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-5-基、吡唑环、吡啶环和嘧啶环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
在一些实施方案中：
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
在一些实施方案中：
R2为C1-3烷基或C1-3氟烷基；
R4为卤基、CN或C1-3烷基；
R5为卤基、CN或C1-3烷基；
Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
在一些实施方案中：
R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基；
R4为F、Cl、CN或甲基；
R5为Cl、CN或甲基；
Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
在一些实施方案中：
R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基；
R4为F、Cl、CN或甲基；
R5为Cl、CN或甲基；
Cy选自环丙基环、苯基环、氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环、3-氧代基-吗啉-6-基、2-氧代基-吡咯烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-5-基、吡唑环、吡啶环和嘧啶环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地选自环丙基和环丁基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-4烷基；其中所述C1-4烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-4烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3烷氧基-C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-4烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
在一些实施方案中，化合物为式II化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物为式III化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物为式IV化合物：
或其药学上可接受的盐；其中：
G为NH，n为1，且V为O；或
G为NH，n为0，且V为O或CH2；或
G为O，n为0且V为NH。
在一些实施方案中，化合物为式IVa化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物为式IVb化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物为式IVc化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，化合物为式IVd化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式I：
中的星号碳为手性碳且所述化合物或所述盐为(S)-对映异构体。
在一些实施方案中，化合物为2012年8月31日申请的美国专利申请号13/601,349(美国专利公布号2013/0059835)中所述者，所述专利申请以全文引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，方法为一种治疗特发性血小板减少性紫癜(或特发性免疫血小板减少性紫癜)(ITP)的方法。在一些实施方案中，ITP为复发性ITP。在一些实施方案中，ITP为难治性ITP。
在一些实施方案中，方法为一种治疗自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的方法。
在一些实施方案中，方法为一种治疗血管炎的方法。在一些实施方案中，血管炎为白塞氏病(disease)、柯根氏综合症(Cogan'ssyndrome)、巨细胞性动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、高安氏动脉炎(Takayasu'sarteritis)、伯格氏病(Buerger'sdisease)(闭塞性血栓血管炎)、中枢神经系统血管炎、川崎病(Kawasakidisease)、多发性结节性动脉炎、车格-施特劳斯综合症(Churg-Strausssyndrome)、混合冷球蛋白血症血管炎(原发性或C型肝炎病毒(HCV)诱发)、亨诺克-许兰紫癜(Henoch-purpura，HSP)、过敏性血管炎、显微镜下多血管炎(microscopicpolyangiitis)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener'sgranulomatosis)或抗嗜中性球细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)。在一些实施方案中，方法为一种治疗肾炎的方法。
在一些实施方案中，治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法涉及复发性或难治性NHL或复发性滤泡NHL。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗患者的侵袭性淋巴瘤(例如生发中心B细胞样(GCB)或活化B细胞样(ABC)淋巴瘤)的方法，其包括向所述患者施用治疗量的本文所述的任何化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗患者的急性骨髓性白血病的方法，其包括向所述患者施用治疗量的本文所述的任何化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本申请提供一种治疗患者的伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)的方法，其包括向所述患者施用治疗量的本文所述的任何化合物或其药学上可接受的盐。应了解，为明确起见在各别实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可于单一实施方案中组合提供。反之，为简洁起见在单一实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可单独或以任何适合子组合提供。
在本说明书中的各处，描述二价连接取代基。明确意欲各二价连接取代基包括连接取代基的正向和反向形式两者。举例来说，-NR(CR’R”)n-包括-NR(CR’R”)n-与-(CR’R”)nNR-两者。当结构明确需要连接基团时，针对那个基团列出的马库西(Markush)变量应理解为连接基团。
术语“n元”(其中n为整数)通常描述某一部分中的成环原子数，其中成环原子数为n。举例来说，哌啶基为6元杂环烷基环的一实例，吡唑基为5元杂芳基环的一实例，吡啶基为6元杂芳基环的一实例，且1,2,3,4-四氢-萘为10元环烷基的一实例。
如本文所用，短语“任选被取代”意谓没有被取代或已被取代。如本文所用，术语“已被取代”意谓氢原子被移除且置换为取代基。应了解既定原子上的取代受原子价限制。
在整篇定义中，术语“Cn-m”指示包括端点的范围，其中n和m为整数且指示碳数目。实例包括C1-4、C1-6等。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“Cn-m烷基”是指可为直链或分支链的具有n至m个碳原子的饱和烃基团。在一些实施方案中，烷基含有1至6个碳原子、1至4个碳原子、1至3个碳原子、或1至2个碳原子。烷基部分的实例包括(但不限于)化学基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基；高级同系物，如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丙基等。
如本文所用，“Cn-m烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键且具有n至m个碳的烷基。在一些实施方案中，烯基部分含有2至6、2至4、或2至3个碳原子。示范性烯基包括(但不限于)乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基等。
如本文所用，“Cn-m炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键且具有n至m个碳的烷基。示范性炔基包括(但不限于)乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。在一些实施方案中，炔基部分含有2至6、2至4、或2至3个碳原子。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“亚烷基”是指二价烷基连接基团。亚烷基的实例包括(但不限于)乙-1,2-二基、丙-1,3-二基、丙-1,2-二基、丁-1,4-二基、丁-1,3-二基、丁-1,2-二基、2-甲基-丙-1,3-二基等。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“Cn-m烷氧基”是指式-O-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳。示范性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基氨基”是指式-NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷氧基羰基”是指式-C(O)O-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基羰基”是指式-C(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基羰基氨基”是指式-NHC(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)2-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“氨基磺酰基”是指式-S(O)2NH2的基团。
如本文所用，术语“Cn-m烷基氨基磺酰基”是指式-S(O)2NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“二(Cn-m烷基)氨基磺酰基”是指式-S(O)2N(烷基)2的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)2NH2的基团。
如本文所用，术语“Cn-m烷基氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)2NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“二(Cn-m烷基)氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)2N(烷基)2的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)NH2的基团。
如本文所用，术语“Cn-m烷基氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“二(Cn-m烷基)氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)N(烷基)2的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基氨甲酰基”是指式-C(O)-NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“硫基”是指式-SH的基团。
如本文所用，术语“Cn-m烷基硫基”是指式-S-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基亚磺酰基”是指式-S(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“Cn-m烷基磺酰基”是指式-S(O)2-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“氨基”是指式-NH2的基团。
如本文所用，术语“氨甲酰基”是指式-C(O)NH2的基团。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“羰基”是指-C(O)-基团。
如本文所用，术语“氰基-C1-3烷基”是指式-(C1-3亚烷基)-CN的基团。
如本文所用，术语“HO-C1-3烷基”是指式-(C1-3亚烷基)-OH的基团。
如本文所用，术语“C1-3烷氧基-C1-3烷基”是指式-(C1-3亚烷基)-O(C1-3烷基)的基团。
如本文所用，术语“羧基”是指式-C(O)OH的基团。
如本文所用，术语“二(Cn-m烷基)氨基”是指式-N(烷基)2的基团，其中两个烷基各自独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，术语“二(Cn-m烷基)氨甲酰基”是指式-C(O)N(烷基)2的基团，其中两个烷基各自独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，“卤基”是指F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，卤基为F或Cl。
如本文所用，“Cn-m卤烷氧基”是指具有n至m个碳原子的式-O-卤烷基的基团。一种示范性卤烷氧基为OCF3。在一些实施方案中，卤烷氧基仅经过氟化。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，单独或与其他术语组合使用的术语“Cn-m卤烷基”是指具有一个卤素原子至2s+1个可相同或不同的卤素原子的烷基，其中“s”为烷基中的碳原子数，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，卤烷基仅经过氟化(例如“氟烷基”)。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。
如本文所用，“环烷基”是指包括环化烷基和/或烯基的非芳香族环烃。环烷基可具有3、4、5、6或7个成环碳(C3-7)。环烷基的成环碳原子可任选被氧代基或硫离子基取代。环烷基还包括亚环烷基。示范性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环已二烯基、环庚三烯基等。在一些实施方案中，环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。环烷基的定义中还包括一个或多个芳香族环稠合于环烷基环(即具有与环烷基环共用的键)的部分，例如环戊烷、环己烷等的苯并或噻吩基衍生物。
如本文所用，“杂芳基”是指具有至少一个选自硫、氧和氮的杂原子环成员的单环芳香族杂环。在一些实施方案中，杂芳基环具有1、2、3或4个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基部分中的任何成环N皆可为N-氧化物。在一些实施方案中，杂芳基具有5-6个环原子和1或2个独立地选自氮、硫和氧的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基为5元或6元杂芳基环。
5元杂芳基环为具有含5个环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子独立地选自N、O和S。示范性5元环杂芳基为噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基和1,3,4-噁二唑基。
6元杂芳基环为具有含6个环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子独立地选自N、O和S。示范性6元环杂芳基为吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基和哒嗪基。
如本文所用，“杂环烷基”是指具有一个或多个选自O、N或S的成环杂原子的非芳香族单环杂环。杂环烷基中包括单环4、5、6和7元杂环烷基。示范性杂环烷基包括吡咯烷-2-酮、1,3-异噁唑烷-2-酮、哌喃基、四氢哌喃、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、3-氧代基-吗啉-6-基、2-氧代基-吡咯烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-5-基等。杂环烷基的成环碳原子和杂原子可任选被氧代基或硫离子基(例如C(O)、S(O)、C(S)或S(O)2等)取代。杂环烷基可经由成环碳原子或成环杂原子连接。在一些实施方案中，杂环烷基含有0至3个双键。在一些实施方案中，杂环烷基含有0至2个双键。在一些实施方案中，杂环烷基具有4-7或4-6个环原子和1或2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子且具有一个或多个氧化环成员。
在某些场合，定义或实施方案是指特定环(例如氮杂环丁烷环、吡啶环等)。除非另外指示，否则这些环可经由任何环成员连接，其限制条件为不超过原子的原子价。举例来说，氮杂环丁烷环可在任何环位置处连接，而氮杂环丁烷-3-基环在3-位置处连接。
本文所述的化合物可为不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则意指所有立体异构体，如对映异构体和非对映异构体。含有经过不对称取代的碳原子的本发明化合物可以光学活性或外消旋形式分离。如何自非光学活性起始物质制备光学活性形式的方法在本领域中为已知的，如通过解析外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可存在于本文所述的化合物中，且所有这些稳定异构体皆涵盖在本发明中。描述本发明化合物的顺式和反式几何异构体且其可以异构体的混合物形式或以分离异构形式分离。
在一些实施方案中，化合物具有(R)-构型。在一些实施方案中，化合物具有(S)-构型。
可通过本领域中已知的众多方法中的任一种对化合物的外消旋混合物进行解析。一种示范性方法包括使用为光学活性成盐有机酸的手性解析酸进行分段再结晶。适用于分段再结晶方法的解析剂为例如光学活性酸，如D型和L型酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、杏仁酸(mandelicacid)、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸，如β-樟脑磺酸。适于分段结晶方法的其他解析剂包括α-甲基苯甲基胺的立体异构纯形式(例如S和R形式或非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱(norephedrine)、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。
也可通过在装填有光学活性解析剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的管柱上洗脱来对外消旋混合物进行解析。适合洗脱溶剂组成可由本领域的技术人员确定。
本文所述的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键交换并伴随质子迁移而产生。互变异构形式包括质子转移互变异构体，其为具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。示范性质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚氨酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对、和质子可占据杂环系统的两个或两个以上位置的环形式，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚、和1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡状态或通过适当取代而在空间上锁定为一种形式。
本文所述的化合物也可包括中间体或最终化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氚和氘。
如本文所用的术语“化合物”意谓包括所述结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。除非另外规定，否则由名称或结构鉴别为一种特定互变异构形式的本文化合物意欲包括其他互变异构形式。
所有化合物和其药学上可接受的盐可连同如水和溶剂的其他物质一起存在(例如水合物和溶剂合物)或可分离。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或其盐实质上经过分离。“实质上经过分离”意谓化合物自其形成或检测时所处的环境至少部分或实质上分离。部分分离可包括例如本文所述的化合物增浓的组合物。实质上分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本文所述的化合物或其盐的组合物。分离化合物和其盐的方法在本领域中为常规的。
短语“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断的范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相称的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
如本文所用的表述“环境温度”和“室温”或“rt”为本领域中所了解，且通常指温度(例如反应温度)大约为进行反应所处的空间的温度，例如约20℃至约30℃的温度。
本发明还包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过使现有酸或碱部分转化成其盐形式而得到改性。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(如胺)的无机酸或有机酸盐；酸性残基(如羧酸)的碱盐或有机盐；等。本发明的药学上可接受的盐包括母体化合物的例如自无毒无机酸或有机酸形成的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法自含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。一般来说，这些盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备；一般来说，如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(ACN)的非水性介质优选。适合盐的清单见于Remington'sPharmaceuticalSciences,第17版,MackPublishingCompany,Easton,Pa.,1985,第1418页和JournalofPharmaceuticalScience,66,2(1977)中，其各自以全文引用的方式并入本文。
方法
本文所述的化合物可调节包括例如磷酸肌醇3-激酶(PI3K)在内的各种激酶中的一种或多种的活性。术语“调节”欲指能够增加或降低PI3K家族的一个或多个成员的活性。因此，本文所述的化合物可用于通过使PI3K与任一种或多种本文所述的化合物或组合物接触来调节所述PI3K的方法中。在一些实施方案中，本发明化合物可充当一种或多种PI3K的抑制剂。在其他实施方案中，本文所述的化合物可用于通过施用调节量的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来调节需要调节受体的个体的PI3K活性。在一些实施方案中，调节为抑制。
鉴于癌细胞生长和存活受多个信号传导路径影响，所以本发明适用于治疗特征在于药物抗性激酶突变体的疾病病况。此外，对活性受其调节的激酶展现不同偏好性的不同激酶抑制剂可组合使用。此方法可证明通过靶向多个信号传导路径来高效治疗疾病病况、降低细胞中出现药物抗性的可能性、且降低疾病治疗剂的毒性。
本发明化合物结合和/或调节(例如抑制)的激酶包括PI3K家族的任何成员。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ或PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kγ或PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kγ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K包括突变。突变可为一个氨基酸被置换成另一氨基酸，或缺失一个或多个氨基酸。在这些实施方案中，突变可存在于PI3K的激酶结构域中。
在一些实施方案中，使用一种以上本文所述的化合物来抑制一种激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)的活性。
在一些实施方案中，使用一种以上本文所述的化合物来抑制一种以上激酶，如至少两种激酶(例如PI3Kγ和PI3Kδ)。
在一些实施方案中，一种或多种化合物与另一激酶抑制剂组合用于抑制一种激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)的活性。
在一些实施方案中，一种或多种化合物与另一激酶抑制剂组合用于抑制一种以上激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)，如至少两种激酶的活性。
本文所述的化合物可具有选择性。“选择性”意谓化合物结合或抑制某一激酶的亲和力或性能相较于至少一种其他激酶分别较大。在一些实施方案中，本文所述的化合物为对PI3Kγ或PI3Kδ的选择性超过对PI3Kα和/或PI3Kβ的选择性的选择性抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的化合物为PI3Kδ的选择性抑制剂(例如超过PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ)。在一些实施方案中，本文所述的化合物为PI3Kγ的选择性抑制剂(例如超过PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ)。在一些实施方案中，选择性可为至少约2倍、5倍、10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1000倍。选择性可通过本领域中的常规方法进行测量。在一些实施方案中，选择性可在各酶的KmATP浓度下测试。在一些实施方案中，本文所述的化合物的选择性可通过与特定PI3K激酶活性相关的细胞分析测定。
如本文所用，术语“接触”是指使指定部分在体外系统或体内系统中集合在一起。举例来说，使PI3K与本文所述的化合物“接触”包括向具有PI3K的个体或患者(如人类)施用本发明化合物以及例如将本文所述的化合物引入含有包含PI3K的细胞或纯化制剂的样品中。
如本文所用，可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选为小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，且最优选为人类。
如本文所用，短语“治疗有效量”是指活性化合物或药用药剂的引发由研究人员、兽医、医生或其他临床医师在组织、系统、动物、个体或人类中所寻求的生物或医学反应的量。在一些实施方案中，向患者或个体施用的化合物或其药学上可接受的盐的剂量为约1mg至约2g、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约1mg至约100mg、约1mg至50mg、或约50mg至约500mg。
如本文所用，术语“治疗”是指以下一者或多者：(1)预防疾病；例如预防可能易患疾病、病状或病症但尚未经历或显示疾病的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症；(2)抑制疾病；例如抑制正经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症(即遏制病理学和/或症状的进一步发展)；和(3)改善疾病；例如改善正经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症(即逆转病理学和/或症状)，如降低疾病的严重性。
组合疗法
一种或多种其他药用药剂，如化学治疗剂、消炎剂、类固醇、免疫抑制剂以及Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、JAK(例如JAK1或JAK2)、c-MET、VEGFR、PDGFR、cKit、IGF-1R、RAF、FAK、AktmTOR、PIM和AKT(例如AKT1、AKT2或AKT3)激酶抑制剂(如WO2006/056399中所述者)或其他药剂(如治疗性抗体)可与本发明化合物组合用于治疗PI3K相关性疾病、病症或病状。一种或多种其他药用药剂可同时或依序向患者施用。
用于组合疗法中的示范性抗体包括(但不限于)曲妥珠单抗(Trastuzumab)(例如抗HER2)、雷珠单抗(Ranibizumab)(例如抗VEGF-A)、贝伐单抗(Bevacizumab)(商品名阿伐斯汀(Avastin)，例如抗VEGF)、帕尼单抗(Panitumumab)(例如抗EGFR)、西妥昔单抗(Cetuximab)(例如抗EGFR)、利妥星(Rituxan)(抗CD20)和针对c-MET的抗体。
一种或多种下列药剂可与本发明化合物组合使用且呈示为非限制性清单：细胞生长抑制剂、顺铂(cisplatin)、小红莓(doxorubicin)、泰索帝(taxotere)、泰素(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、开普拓(camptostar)、拓扑替康(topotecan)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲胺蝶呤(methoxtrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH66336、R115777、L778,123、BMS214662、易瑞沙(Iressa)、塔西瓦(Tarceva)、针对EGFR的抗体、GleevecTM、甘乐能(intron)、阿糖胞苷(ara-C)、阿霉素(adriamycin)、癌得星(cytoxan)、吉西他滨(gemcitabine)、尿嘧啶氮芥(Uracilmustard)、氮芥(Chlormethine)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、美法仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、三亚乙基蜜胺(Triethylenemelamine)、三亚乙基硫磷酰胺(Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、亚硝脲氮芥(Carmustine)、环己亚硝脲(Lomustine)、链脲霉素(Streptozocin)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabinephosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovirin)、ELOXATINTM、喷司他丁(Pentostatine)、长春花碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、博莱霉素(Bleomycin)、放线菌素(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、小红莓、表柔比星(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉素(Mithramycin)、去氧柯福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷(Teniposide)、17α-乙炔雌二醇(17.alpha.-Ethinylestradiol)、己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮(Testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟羟甲基睪酮(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostanolonepropionate)、睾内酯(Testolactone)、乙酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylprednisolone)、甲基睾酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Prednisolone)、曲安奈德(Triamcinolone)、氯烯雌酚(Chlorotrianisene)、羟孕酮(Hydroxyprogesterone)、胺鲁米特(Aminoglutethimide)、雌氮芥(Estramustine)、乙酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetate)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶(Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、诺维本(Navelbene)、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨(Capecitabine)、雷洛昔芬(Reloxafine)、卓洛昔芬(Droloxafine)、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、阿伐斯汀(Avastin)、赫赛汀(herceptin)、百克沙(Bexxar)、维尔科德(Velcade)、泽瓦林(Zevalin)、曲森洛(Trisenox)、希罗达(Xeloda)、长春瑞滨(Vinorelbine)、卟吩姆(Porfimer)、爱必妥(Erbitux)、脂质体(Liposomal)、噻替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、美法仑(Melphalan)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、来曲唑(Lerozole)、氟维司群(Fulvestrant)、依西美坦(Exemestane)、氟维司群(Fulvestrant)、异环磷酰胺(Ifosfomide)、利妥昔单抗(Rituximab)、C225、坎帕斯(Campath)、氯法拉宾(Clofarabine)、克拉屈滨(cladribine)、阿非迪霉素(aphidicolon)、利妥星(rituxan)、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、替扎他滨(tezacitabine)、Sml1、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)、曲平(triapine)、代多克斯(didox)、曲米多克斯(trimidox)、阿米多克斯(amidox)、3-AP、MDL-101,731、苯达莫司汀(bendamustine)(曲安达(Treanda))、奥法珠单抗(ofatumumab)或GS-1101(也称为CAL-101)。
示范性化学治疗剂包括蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米(bortezomib))、沙利度胺(thalidomide)、雷利米德(revlimid)、和DNA破坏剂，如美法仑、小红莓、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、亚硝脲氮芥等。
示范性类固醇包括皮质类固醇，如地塞米松(dexamethasone)或泼尼松。
示范性Bcr-Abl抑制剂包括美国专利号5,521,184、WO04/005281和US序列号60/578,491中公开的属类和种类的化合物和其药学上可接受的盐。
示范性适合Flt-3抑制剂包括如WO03/037347、WO03/099771和WO04/046120中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示范性适合RAF抑制剂包括如WO00/09495和WO05/028444中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示范性适合FAK抑制剂包括如WO04/080980、WO04/056786、WO03/024967、WO01/064655、WO00/053595和WO01/014402中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
示范性适合mTOR抑制剂包括如WO2011/025889中公开的化合物和其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明化合物可与一种或多种其他激酶抑制剂(包括伊马替尼(imatinib))组合使用，具体来说用于治疗对伊马替尼或其他激酶抑制剂具有抗性的患者。
在一些实施方案中，本发明化合物可与化学治疗剂组合用于治疗癌症(如多发性骨髓瘤)，且相较于对单独化学治疗剂的反应，可改良治疗反应而不加剧其毒性作用。用于治疗多发性骨髓瘤的其他药用药剂的实例例如可包括(不限于)美法仑、美法仑加泼尼松[MP]、小红莓、地塞米松和维尔科德(Velcade)(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其他另外的药剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF和FAK激酶抑制剂。累加或协同效应为组合本发明PI3K抑制剂与另一药剂的所要结果。此外，多发性骨髓瘤细胞对如地塞米松的药剂的抗性可在用本发明PI3K抑制剂治疗后逆转。药剂可与本发明化合物组合于单一或连续剂型中，或药剂可以单独剂型同时或依序施用。
在一些实施方案中，如地塞米松的皮质类固醇与本发明化合物组合施用给患者，其中与连续相反，间歇施用地塞米松。
在一些其他实施方案中，本发明化合物与其他治疗剂的组合可在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用给患者。
药用制剂和剂型
当用作药剂时，本文所述的化合物可以药用组合物形式施用。这些组合物可以医药技术中熟知的方式制备，且根据需要局部治疗抑或全身性治疗和欲治疗的区域而定，可通过多种途径施用。施用可为局部(包括透皮、表皮、眼部和施用到粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部(例如通过吸入或吹入散剂或气雾剂，包括使用喷雾器；气管内或鼻内)、口服或肠胃外施用。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌肉内注射或输注；或颅内(例如鞘内或脑室内)施用。肠胃外施用可呈单一团式剂量形式，或可例如通过连续灌注泵达成。用于局部施用的药用组合物和制剂可包括透皮贴片、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和散剂。常规药用载剂、水性、粉末状或油性基质、增稠剂等可为必需或合乎需要的。
本发明还包括含有作为活性成分的本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，与一种或多种药学上可接受的载剂(赋形剂)组合的药用组合物。在一些实施方案中，组合物适于局部施用。在制备本发明组合物时，活性成分通常与赋形剂混合、由赋形剂稀释或封闭在这种载剂内呈例如胶囊、药囊、纸或其他容器形式。当赋形剂充当稀释剂时，其可为充当活性成分的媒介物、载剂或介质的固体、半固体或液体物质。因此，组合物可呈片剂、丸剂、散剂、含片、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如多达10重量％活性化合物的软膏剂、软质和硬质明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装散剂的形式。
在制备制剂时，活性化合物可在与其他成分组合之前进行研磨以提供适当粒度。如果活性化合物实质上不可溶，那么其可研磨成小于200目的粒度。如果活性化合物实质上可溶于水，那么粒度可通过研磨调整以使得在制剂中实质上均一分布，例如约40目。
可使用已知研磨程序(如湿磨)来研磨本文所述的化合物以获得适于形成片剂和其他制剂类型的粒度。本文所述的化合物的细粉状(纳米微粒)制剂可通过本领域中已知的方法制备，例如参见国际申请号WO2002/000196。
适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶(gumacacia)、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。本发明的组合物可经过配制以在通过使用本领域中已知的程序施用给患者之后使活性成分快速、持续或延迟释放。
组合物可配制成单位剂型，各剂量含有约5mg至约1000mg(1g)、更通常约100mg至约500mg活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为用于人类受试者和其他哺乳动物的单一剂量的实体个别单元，各单元含有经过计算以产生所要治疗效果的预定量的活性物质以及适合药用赋形剂。
在一些实施方案中，本发明组合物含有约5mg至约50mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这表示组合物含有约5mg至约10mg、约10mg至约15mg、约15mg至约20mg、约20mg至约25mg、约25mg至约30mg、约30mg至约35mg、约35mg至约40mg、约40mg至约45mg、或约45mg至约50mg活性成分。
在一些实施方案中，本发明组合物含有约50mg至约500mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这表示组合物含有约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、约200mg至约250mg、约250mg至约300mg、约350mg至约400mg、或约450mg至约500mg活性成分。
在一些实施方案中，本发明组合物含有约500mg至约1000mg活性成分。本领域的普通技术人员应了解这表示组合物含有约500mg至约550mg、约550mg至约600mg、约600mg至约650mg、约650mg至约700mg、约700mg至约750mg、约750mg至约800mg、约800mg至约850mg、约850mg至约900mg、约900mg至约950mg、或约950mg至约1000mg活性成分。
本文所述的化合物的类似剂量可用于本发明的方法和用途中。
活性化合物可在广泛剂量范围内有效且通常以药用有效量施用。然而，应了解实际施用的化合物的量将通常由医师根据相关情形来确定，所述情形包括欲治疗的病状、所选施用途径、施用的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性等。
对于制备如片剂的固体组合物，将主要活性成分与药用赋形剂混合以形成含有本发明化合物的均质混合物的固体预配制组合物。当称这些预配制组合物为均质时，活性成分通常均匀分散在整个组合物中以使组合物可易于再分成等效单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊。这种固体预制剂接着再分成含有例如约0.1mg至约1000mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。
本发明的片剂或丸剂可包覆包衣或以其他方式混配以提供给予作用延长的优势的剂型。举例来说，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者呈位于前者之上的包膜形式。两种组分可由用于抵抗胃中的崩解且允许内部组分完整进入十二指肠或延迟释放的肠溶层分隔开。多种物质可用于这些肠溶层或包衣，这些物质包括多种聚合酸和聚合酸与如虫胶(shellac)、十六醇和乙酸纤维素的物质的混合物。
可包含本发明的化合物和组合物以便口服或通过注射施用的液体形式包括水溶液、适合调味的糖浆、水性或油性悬浮液，和具有可食用油，如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的调味乳液，以及酏剂和类似药用媒介物。
用于吸入或吹入的组合物包括于药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液、和散剂。液体或固体组合物可含有如上所述的药学上可接受的适合赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过口服或鼻部呼吸途径施用以达成局部或全身性作用。组合物可通过使用惰性气体进行雾化。雾化溶液可直接自雾化装置呼吸或雾化装置可连接于面罩(facemask，tent)或间歇式正压呼吸机。溶液、悬浮液或散剂组合物可口服或通过鼻部自以适当方式递送制剂的装置施用。
局部制剂可含有一种或多种常规载剂。在一些实施方案中，软膏剂可含有水和一种或多种选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林(whiteVaseline)等的疏水性载剂。乳膏剂的载剂组成可基于水与甘油和一种或多种其他组分(例如单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六基硬脂醇)的组合。可使用异丙醇和水，适当时与其他组分(如甘油、羟乙基纤维素等)组合来配制凝胶剂。在一些实施方案中，局部制剂含有至少约0.1重量％、至少约0.25重量％、至少约0.5重量％、至少约1重量％、至少约2重量％或至少约5重量％本文所述的化合物。局部制剂可适当地包装于例如100g的管中，所述管任选连同有治疗所选适应症，例如牛皮癣或其他皮肤病状的说明书。
施用患者的化合物或组合物的量将根据所施用物、施用目的(如预防或治疗)、患者状态、施用方式等而变化。在治疗应用中，组合物可以足以治愈或至少部分遏制疾病和其并发症的症状的量施用已罹患所述疾病的患者。有效剂量将取决于以下因素：所治疗的疾病状况，以及主治临床医师视如疾病严重性、患者年龄、体重和一般状况等的因素所作的判断。
施用给患者的组合物可呈上述药用组合物形式。这些组合物可通过常规灭菌技术灭菌，或可进行无菌过滤。水溶液可包装用于按原样使用或可冻干，其中冻干制剂在施用之前与无菌水性载剂组合。化合物制剂的pH值通常将在3与11之间、更优选为5至9且最优选为7至8。应了解使用某些上述赋形剂、载剂或稳定剂将导致形成药用盐。
本发明化合物的治疗剂量可根据例如治疗所欲达成的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况、和处方医师的判断而变化。本文所述的化合物在药用组合物中的比例或浓度可根据许多因素，包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径而变化。举例来说，本文所述的化合物可以含有约0.1％至约10％w/v化合物的生理缓冲水溶液形式提供以用于肠胃外施用。一些典型剂量范围为每日每公斤体重约1μg至约1g。在一些实施方案中，剂量范围为每日每公斤体重约0.01mg至约100mg。剂量可能取决于如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方、和其施用途径的变量。有效剂量可自由体外或动物模型测试系统获得的剂量-反应曲线外推而来。
本发明的组合物可进一步包括一种或多种其他药用药剂，如化学治疗剂、类固醇、消炎化合物或免疫抑制剂，其实例列于本文中。
试剂盒
本发明还包括适用于例如治疗或预防PI3K相关性疾病或病症(如癌症)的药用试剂盒，其包括一个或多个含有包含治疗有效量的本文所述的化合物的药用组合物的容器。这些试剂盒必要时可进一步包括各种常规药用试剂盒组分中的一种或多种，如含一种或多种药学上可接受的载剂的容器、其他容器等，这些对本领域的技术人员是显而易知的。呈插页或标签形式的指示欲施用的组分的量、施用准则、和/或组分混合准则的说明书也可包括在试剂盒中。
合成
本文所述的化合物(包括其盐)可使用已知有机合成技术制备且可根据众多可能的合成途径中的任一者来合成。在一些实施方案中，化合物可如2012年8月31日申请的美国专利申请号13/601,349中所述加以制备，所述专利申请以全文引用的方式并入本文。
制备本文所述的化合物的反应可在可易于由有机合成领域的技术人员选择的适合溶剂中进行。适合溶剂可实质上不与起始物质(反应物)、中间体或产物在进行反应所处的温度(例如可在溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度的范围内的温度)下反应。既定反应可在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。取决于特定反应步骤，适于特定反应步骤的溶剂可由熟练技术人员选择。
本文所述的化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱除保护。保护和脱除保护的需要和适当保护基的选择可易于由本领域的技术人员确定。保护基的化学可见于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,第3版,Wiley&Sons,Inc.,NewYork(1999)中，所述文献以全文引用的方式并入本文。
可根据本领域中已知的任何适合方法监测反应。举例来说，产物形成可通过分光手段，如核磁共振光谱法(例如1H或13C)、红外光谱法、分光光度测定法(例如紫外线-可见光)、质谱；或通过色谱方法，如高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱(TLC)进行监测。化合物可由本领域的技术人员利用多种方法，包括高效液相色谱(HPLC)(“PreparativeLC-MSPurification:ImprovedCompoundSpecificMethodOptimization”KarlF.Blom,BrianGlass,RichardSparks,AndrewP.CombsJ.Combi.Chem.2004,6(6),874-883，其以全文引用的方式并入本文)和正相硅石色谱进行纯化。
举例来说，式I化合物可如流程I中所示来形成。化合物(i)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺进行卤化以得到化合物(ii)，其中X1＝Cl、Br或I。(ii)的卤基可在标准铃木(Suzuki)条件或标准斯蒂尔(Stille)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸(Negishi)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于Cy-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如Cy-M为Cy-B(OH)2、Cy-Sn(Bu)4或Zn-Cy)，以得到式(iii)衍生物。或者，Cy-M可为环胺(其中M为H且连接于胺氮)，其与化合物(ii)的偶合是通过在碱中或在布赫瓦尔德(Buchwald)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热而进行以得到酮(iii)。用如四氢硼酸钠的适合试剂还原酮(iii)可提供醇(iv)，其可转化成携带离去基的衍生物(v)(例如Lg为通过与三聚氯化氰反应所得的氯基或通过与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)。最终，可使化合物(v)与3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺((vi))在碱性条件(例如NaH或CsCO3或K2CO3)下反应以得到式I化合物(vii)。
流程I
或者，式I化合物也可如流程II中所示来形成。酮化合物(i)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺卤化以得到化合物(ii)，其中X1＝Cl、Br或I。酮(ii)可用如四氢硼酸钠的适合试剂还原以得到醇(iii)，其可转化成携带离去基的衍生物(例如Lg为通过与三聚氯化氰反应所得的氯基或通过与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)且接着与杂环反应以得到杂环衍生物(iv)。化合物(iv)的对映异构体可通过手性色谱分离以得到杂环化合物(v)的单一对映异构体。最终，(v)的卤基可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于Cy-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如Cy-M为Cy-B(OH)2、Cy-Sn(Bu)4或Zn-Cy)，以得到式I衍生物(vi)。
流程II
也可如流程III中所示形成式I化合物。酚(i)可使用光延(Mitsunobu)条件(例如R'OH、DEAD、Ph3P)或标准烷基化条件(R'-Lg，Lg＝离去基)进行烷基化以分别得到醚衍生物(ii)。(ii)的卤基可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于Cy-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如Cy-M为Cy-B(OH)2、Cy-Sn(Bu)4或Zn-Cy)，以得到式(iii)衍生物。或者，Cy-M可为环胺(其中M为H且连接于胺氮)，其与化合物(ii)的偶合是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)-钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热而进行以得到式(iii)化合物。可使用如流程I和II中所示的类似方法转化酮(iii)以得到式I化合物(iv)。或者，可使用如流程I和II中所示的类似方法转化卤基-酮(ii)以得到卤基中间体(v)。通过流程I和II中所述的类似方法进行Cy-M与卤基中间体(v)的铃木、斯蒂尔、根岸或布赫瓦尔德偶合也可得到式I化合物(vi)。
流程III
可用于流程I、II和III的过程中的酮可如以下流程IV中所示来形成。羧酸(i)可用偶合剂(例如HBTU或HATU)活化且接着与N,O-二甲基羟胺反应以得到N-甲氧基-N-甲基甲酰胺。酚可使用光延条件(例如R2OH、DEAD、Ph3P)或标准烷基化条件(R2-Lg，Lg＝离去基)进行烷基化以分别得到醚衍生物(ii)。(ii)的卤基(X1为卤基)可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于Cy-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如Cy-M为Cy-B(OH)2、Cy-Sn(Bu)4或Zn-Cy)，以得到式(iii)衍生物。或者，Cy-M可为环胺(其中M为H且连接于胺氮)，其与化合物(ii)的偶合是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热而进行以得到酰胺(iii)。化合物(iii)与式Me-MgX2(X2＝卤基)的格里纳试剂(Grignardreagent)的反应可得到酮(iv)。可使用如流程I、II和III中所示的类似方法转化酮(iv)以得到式I化合物。
流程IV
可用于流程I、II和III的过程中的酮也可如以下流程V中所示来形成。(i)的卤基(例如X1＝I)可在标准克内歇尔(Knochel)/根岸条件(例如在如三-(2-呋喃基)膦和三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)的钯(0)催化剂以及1,2-二溴乙烷和氯三甲基硅烷存在下)下偶合于锌试剂Cy-Zn(例如3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和Zn粉)以得到式(ii)衍生物。氮杂环丁烷(ii)可脱除保护(例如Pg＝Boc，使用TFA)且接着在烷基化、酰化或还原性胺化(例如R3X(如R3-Br、R3COCl、R3-SO2Cl、R3N＝C＝O或R3CHO)和还原剂)条件下反应以得到酮衍生物(iii)，其可通过流程I、II和III中所示的类似方法转化成式I化合物(v)。或者，酮(ii)可用适合试剂(NaBH4或科里氏(Corey's)手性CBS催化剂以主要得到醇的一种异构体)还原，所得醇可转化成离去基(例如Lg为通过与三聚氯化氰反应所得的氯基或通过与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)且接着使氯基或甲磺酸酯基与适当杂环(例如类似于流程I、II和III中所示的方法)反应以得到式(iv)衍生物。胺上的保护基可在标准条件下移除且接着在烷基化、酰化或还原性胺化条件(例如R3X(如R3-Br、R3COCl、R3-SO2Cl、R3N＝C＝O或R3CHO)和还原剂)下反应以得到式I化合物(v)。
流程V
式I化合物可如流程VI中所说明自酸氯化物化合物(i)合成。酸氯化物(i)与丙二腈在如氢化钠的碱存在下进行缩合可得到二氰基烯醇中间体，其可用如硫酸二甲酯的适当试剂在如碳酸氢钠的适当碱存在下加以O-甲基化以产生烯醇醚(ii)。烯醇醚(ii)与二盐酸肼在如三乙胺的适合碱存在下反应可得到吡唑化合物(iii)。可接着使吡唑化合物(iii)与甲酰胺反应以得到吡唑并嘧啶(iv)。最终，可使化合物(iv)与携带离去基团的适当化合物(v)在碱性条件下反应以得到式I化合物(vi)。
流程VI
式I化合物也可如流程VII中所示来形成。(i)的卤基X1可在标准赫克(Heck)条件(例如在如乙酸钯的钯(II)催化剂存在下)下偶合于烯(例如丙烯酸酯或丙烯酰胺)以得到式(ii)烯。烯(ii)与硝基甲烷在DBU存在下反应可得到硝基衍生物(iii)，其可在标准条件(例如NiCl2/NaBH4)下还原以得到游离胺，其环化以形成内酰胺(iv)。内酰胺可在标准条件(例如R3-X2，其中X2＝卤基，在如TEA或NaH的碱存在下)下进行烷基化以得到N-烷基-内酰胺(v)。式(v)化合物和由用如LiAlH4的适合还原剂还原内酰胺(v)获得的吡咯烷可使用流程I、II和III中所述的条件转化成式I化合物。
流程VII
式I化合物也可如流程VIII中所示来形成。(i)的卤基X1可在标准铃木条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于烯硼酸或酯以得到式(ii)烯。用mCPBA使烯(ii)环氧化可得到环氧化物(iii)，其可与仲胺或伯胺(胺＝NH2R3)反应以得到式(iv)氨基化合物。仲胺或叔胺衍生物(iv)可进一步与羰基二咪唑或光气反应以形成噁唑烷酮(v)或与乙酰基-卤化物(例如在如TEA的碱存在下氯-乙酰氯)反应以得到N-酰基衍生物，其可在用碱(例如NaH)处理后转化成吗啉酮衍生物(vi)。可使用标准条件(例如用THP基团保护的化合物可用如TFA或HCl的酸处理)脱除式(iv、v和vi)化合物的保护基以得到式I化合物。
流程VIII
式I化合物也可如流程IX中所示来形成。式(i)烯在适合条件(A或B，如JACS,2001,123(9),1862-1871和J.Org.Chem,2011,76,358-372中所述)下的夏普莱斯(Sharpless)氨基-羟基化可得到氨基-羟基异构体(ii)或(iii)。可使化合物(ii)和(iii)与羰基二咪唑或光气反应以形成噁唑烷酮(iv)或与乙酰基-卤化物(例如在如TEA的碱存在下氯-乙酰氯)反应以得到N-酰基衍生物，其可在用碱(例如NaH)处理后转化成吗啉酮衍生物(v)。替代性氨基-羟基异构体(iii)可如流程XV中所示转化成噁唑烷酮和吗啉酮衍生物。
流程IX
式I化合物可如流程X中所示来合成。(i)的卤基(例如X1＝Cl、Br、I)可在标准条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下频哪醇硼酸酯)下转化成硼酸酯(ii)。可使硼酸酯(ii)与芳基卤化物或杂芳基卤化物(例如R3-X2)在铃木条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和如Na2CO3的碱存在下)下反应以得到式(iii)。可使用流程I、II或III中所述的反应条件使式(iii)转化成式I。
流程X
可如流程XI中所示形成式I化合物，其中R4＝F或CN。化合物(i)可用适合酰化试剂(例如Me-COCl)酰化以形成酯，其可在路易斯(Lewis)酸条件(例如BF3/HOAc络合物)下重排以得到酮(ii)。酮(ii)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺卤化以得到酚(iii)，其中X1＝Cl、Br或I。化合物(iii)可进行烷基化(例如R2-X和碱，如NaH或Na2CO3；或在光延条件下)以得到醚(iv)。可置换(例如用NaCN或KCN置换)(iv)的氟基以得到氰基衍生物(v)。(v)的卤基可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶合于Cy-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如Cy-M为Cy-B(OH)2、Cy-Sn(Bu)4或Zn-Cy)，以得到式(vi)衍生物。或者，Cy-M可为环胺(其中M为H且连接于胺氮)，且通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热而偶合于化合物(v)以得到酮(vi)。用如四氢硼酸钠或科里CBS试剂的适合试剂还原酮(vi)可提供醇，其可转化成携带离去基的衍生物(例如Lg为通过与三聚氯化氰反应所得的氯基或通过与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)且接着与3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺在碱性条件(例如NaH或CsCO3或K2CO3)下反应以得到式I化合物(viii)。或者，可颠倒最后两步以使得酮(v)可还原以得到醇，其转化成离去基且首先用杂环置换并接着进行铃木、斯蒂尔、根岸或布赫瓦尔德偶合以得到式I化合物(viii)。也可通过去除流程XI中的氰化步骤来使氟基衍生物(iv)转化成式I化合物。
流程XI
式I化合物也可如流程XII中所示来形成。化合物(i)可用适合酰化试剂(例如Me-COCl)酰化以形成酯，其可在路易斯酸条件(例如AlCl3或BF3/HOAc络合物)下重排以得到酮(ii)。使用NX1S(例如NX1S＝N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺)使酮(ii)卤化可得到化合物(iii)，其中X1＝Cl、Br或I。可使用标准条件(例如无机碱(如K2CO3)和烷基卤化物(如Et-I))使酚转化成醚(iv)。(iv)的卤基可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)下偶合于R3-M，其中M为硼酸、硼酸酯或经过适当取代的金属(例如R3-M为R3-B(OH)2、R3-Sn(Bu)4或Zn-R3且R3为已被取代或没有被取代的烯烃，如乙烯基)，以得到式(v)衍生物。可接着使用夏普莱斯条件使烯二羟基化以得到二醇(vi)。可使用标准夏普莱斯不对称二羟基化方法达成仲醇的一种对映异构体的增强。仲醇可经由6步过程(例如伯醇的硅烷基保护(例如TBS-Cl和DIEA)、仲醇的甲磺酸化、用NaN3置换甲磺酸酯、用Ph3P还原叠氮化物、所得伯胺的Boc保护和接着用TBAF脱除伯醇上的硅烷基保护基)转化成经过N-Boc保护的胺以得到氨基-醇(vii)。可通过用光气处理使氨基-醇(vii)转化成噁唑烷酮且随后用如四氢硼酸钠或硼氢化钠的适合试剂还原酮可提供醇(viii)，其可转化成携带离去基的衍生物(ix)(例如Lg为通过与三聚氯化氰反应所得的氯基或通过与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)。最终，可使化合物(ix)与适当杂环(x)(例如3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮)在碱性条件(例如NaH或Cs2CO3或K2CO3)下反应以得到式I化合物(xi)。
流程XII
本发明将通过特定实施例的方式更详细描述。下列实施例是出于说明目的而提供，且不欲以任何方式限制本发明。本领域的技术人员将易于认识到可进行改变或修改以产生基本上相同结果的多种非关键参数。已根据至少一种本文所述的测定发现实施例的化合物为PI3K抑制剂。
实施例
除非另外规定，否则含有一个或多个手性中心的以下实施例化合物是以外消旋物形式或以异构混合物形式获得。任何以下产物的所指示的盐化学计量仅意欲指示可能的化学计量，且不应解释为排除可能以其他化学计量形成盐。缩写“h”和“min”分别指小时和分钟。
实施例1.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮
向1-(5-氯-2-羟基-4-甲基苯基)乙酮(来自Oakwood，50.0g，271mmol)于乙酸(300mL)中的搅拌溶液中添加N-碘丁二酰亚胺(73.1g，325mmol)且在加热包上历经3.5小时在60～80℃之间搅拌所得混合物，接着冷却至室温并搅拌过夜。分数份添加水(500mL)至混合物中，此举导致形成深色固体。在搅拌10分钟之后，在另外用水洗涤下过滤固体。在真空下干燥浅棕色至深棕色固体4小时，接着历经周末风干得到81.3g(97％)所要产物。C9H9ClIO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝310.9；实验值：311.0。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ13.21(s,1H),7.71(s,1H),2.65(s,3H),2.63(s,3H)ppm。
步骤2.1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮
添加碳酸钾(72.4g，524mmol)至1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(81.3g，262mmol)和碘代甲烷(19.6mL，314mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(250mL)中的混合物中。在室温下搅拌混合物4小时。添加水(500mL)且搅拌15分钟。过滤深色固体且在真空中干燥得到42.3g所要产物。滤液用EtOAc(4×)萃取。合并的滤液用水(2×)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且浓缩。在真空中干燥固体再得到37.2g所要产物。产物未进行进一步纯化即使用。C10H11ClIO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝324.9；实验值：325.0。1HNMR(300MHz,CDCl3):δ7.62(s,1H),3.78(s,3H),2.65(s,3H),2.62(s,3H)ppm。
步骤3.3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将锌(1.71g，26.2mmol)悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(45.0mL)中且添加1,2-二溴乙烷(210μL，2.5mmol)。在60℃下加热混合物10分钟且接着冷却至室温。添加氯三甲基硅烷(330μL，2.6mmol)且在60℃下搅拌10分钟并冷却至室温。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自Oakwood，6.25g，22.1mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液且在室温下搅拌混合物1小时。依序添加1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(5.00g，15.4mmol)、三-(2-呋喃基)膦(358mg，1.54mmol)和三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.70g，0.77mmol)且使反应混合物升温至70℃并搅拌过夜。冷却混合物至室温且于乙酸乙酯(EtOAc)与饱和NH4Cl溶液之间分配。分离各层且水层进一步用EtOAc(2×)萃取。合并的有机物用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，且浓缩。残余物在硅胶上用含0-30％EtOAc的己烷洗脱纯化得到3.0g(55％)呈橙色固体状的所要产物。C18H24ClNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝376.1；实验值：376.0。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.52(s,1H),4.32,(m,2H),4.16(m,3H),3.66(s,3H),2.59(s,3H),2.31(s,3H),1.45(s,9H)ppm。
步骤4.3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
向在0℃下搅拌的3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.3g，3.7mmol)于甲醇(20mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(0.167g，4.41mmol)。在0～5℃下搅拌混合物1小时。反应用水淬灭且用EtOAc(3×)萃取。合并的萃取物用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到1.3g(100％)所要产物。C18H26ClNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝378.2；实验值：378.1。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.37(s,1H),5.10(q,1H),4.30(m,2H),4.14(m,3H),3.63(s,3H),2.25(s,3H),1.48(d,3H),1.44(s,9H)ppm。
步骤5.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
称量三聚氯化氰(来自Aldrich，1.22g，6.62mmol)至烧瓶中且添加N,N-二甲基甲酰胺(0.512mL，6.62mmol)。在搅拌数分钟之后，添加3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.5g，4.2mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液。所得混合物在室温下搅拌过夜。添加水，且接着用二氯甲烷稀释。分离各层且有机物用饱和NaHCO3溶液、水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。所得残余物在硅胶上用含0-35％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所要产物(1.36g，86％)。C13H17ClNO的LCMS计算值：(M-Cl-Boc+H)+:m/z＝238.1；实验值：238.1。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.46(s,1H),5.44,(q,1H),4.32(m,2H),4.18-4.10(m,3H),3.67(s,3H),2.27(s,3H),1.79(d,3H),1.44(s,9H)ppm。
步骤6.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下，添加氢化钠(0.32g，8.0mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自ChemBridge，0.59g，4.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的悬浮液中。在室温下搅拌所得混合物25分钟，在所述时间期间悬浮液变成接近澄清溶液。向所得混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.35g，3.61mmol，来自实施例1，步骤5)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液。混合物在50℃下搅拌过夜。在冷却之后，混合物用水稀释且用EtOAc(2×)萃取。合并的萃取物用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，且浓缩。所得残余物在硅胶上用含0-10％MeOH的二氯甲烷洗脱纯化得到1.03g(59％)呈黄色胶状的所要产物。将外消旋产物施加在PhenomenexLux-纤维素2管柱(21.1×250mm，5微米粒度)上，用含10％乙醇的己烷以流速18mL/min洗脱，每次注射4mg，得到两种对映异构体。第一峰的滞留时间为8.34分钟且第二峰的滞留时间为10.92分钟。峰1(463mg)，C24H32ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝487.2；实验值：487.1。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.21(s,1H),7.37(s,1H),6.30,(q,1H),5.40(s,2H),4.23(m,2H),4.17～4.00(m,3H),3.57(s,3H),2.58(s,3H),2.16(s,3H),1.76(d,3H),1.37(s,9H)ppm。
步骤7.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(318mg，0.653mmol)(来自以上的峰1)于二氯甲烷(3.2mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(1.6mL，6.5mmol)。在室温下搅拌所得混合物75分钟。蒸发溶剂且在真空中干燥残余物得到0.30g呈双盐酸盐形式的所要产物。C19H24ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝387.2；实验值：387.1。
步骤8.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(58mg，0.13mmol)、丙酮(18.5μL，0.252mmol)和三乙胺(54.5μL，0.391mmol)于二氯甲烷(1.0mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠的树脂(108mg，0.249mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。过滤混合物且浓缩。粗产物使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到50mg(60％)呈TFA盐形式的所要产物。C22H30ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝429.2；实验值：429.1。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.47(s,1H),7.46(s,1H),6.29(q,J＝6.9Hz,1H),4.52(m,2H),4.21(m,1H),4.15(t,J＝9.8Hz,1H),4.06(t,J＝9.7Hz,1H),3.53(s,3H),3.39～3.27(m,1H),2.61(s,3H),2.11(s,3H),1.75(d,J＝6.8Hz,3H),1.11(dd,J＝6.0,3.8Hz,6H)ppm。
实施例2.1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐
步骤1.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
向外消旋3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(146mg，0.300mmol)(来自实施例1步骤6的外消旋中间体)于二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(0.75mL，3.0mmol)。在室温下搅拌2小时之后，蒸发溶剂且在真空中干燥所得残余物得到138mg呈盐酸盐形式的所要产物。C19H24ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝387.2；实验值：387.1。
步骤2.1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20.0mg，0.0435mmol，来自实施例2，步骤1)和三乙胺(30.3μL，0.217mmol)于二氯甲烷(0.20mL)中的混合物中添加乙酰氯(6.18μL，0.0870mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂且粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C21H26ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝429.2；实验值：429.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.35(s,1H),7.34(s,1H),6.26(q,1H),4.50(m,1H),4.28～4.20(m,2H),4.01(m,1H),3.88(m,1H),3.52(s,3H),2.58(s,3H),2.18(s,3H),1.75～1.71(m,6H)ppm。
实施例3.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-丙酰基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐
此化合物是使用与实施例2的程序类似的程序，用丙酰氯替代乙酰氯来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C22H28ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝443.2；实验值：443.2。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1H),7.33(s,1H),6.25(q,1H),4.49(m,1H),4.27～4.18(m,2H),4.02(m,1H),3.90(m,1H),3.54(s,3H),2.57(s,3H),2.18(s,3H),2.05(q,2H),1.72(d,3H),0.93(t,3H)ppm。
实施例4.1-(1-{5-氯-3-[1-(环丙基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-甲氧基-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和环丙烷甲醛(来自Aldrich)替代丙酮来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C23H30ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝441.2；实验值：441.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.06(s,1H),7.13(s,1H),5.96(q,1H),4.22(m,2H),4.07(m,1H),3.90(m,1H),3.80(m,1H),3.24(s,3H),2.68(t,2H),2.21(s,3H),1.80(s,3H),1.45(d,3H),0.64(m,1H),0.24(m,2H),0.01(m,2H)ppm。
实施例5.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C20H26ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝401.2；实验值：401.2。
实施例6.1-{1-[5-氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和乙醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C21H28ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝415.2；实验值：415.1。
实施例7.1-{1-[5-氯-3-(1-异丁基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和异丁醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C23H32ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝443.2；实验值：443.1。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.29(s,1H),7.38(s,1H),6.37(q,1H),5.37(s,2H),4.01(m,2H),3.87(m,1H),3.57(s,3H),3.05(t,1H),2.86(t,1H),2.64(s,3H),2.18(d,2H),2.11(s,3H),1.82(d,3H),1.62(m,1H),0.89(d,6H)ppm。
实施例8.1-{1-[3-(1-仲丁基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和2-丁酮替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C23H32ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝443.2；实验值：443.1
实施例9.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-3-[1-(2-甲氧基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲氧基乙醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C22H30ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝445.2；实验值：445.2。
实施例10.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺
此化合物是使用与实施例2的程序类似的程序，用异氰酸甲酯替代乙酰氯来制备粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C21H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝444.2；实验值：444.2。
实施例11.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮
向1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(5.00g，25.2mmol，来自Oakwood)于乙酸(100mL)中的搅拌溶液中添加N-溴丁二酰亚胺(4.93g，27.7mmol)且在100℃下加热所得混合物18小时。在冷却至环境温度之后，反应混合物在真空中浓缩，接着用饱和碳酸氢钠中和，滤出不溶性丁二酰亚胺。滤液用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，且接着在减压下浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0％至50％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所要产物(2.66g，38％)。C10H11BrClO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝277.0；实验值：277.0。1HNMR(DMSO-d6,300MHz):δ7.70(1H,s),3.77(3H,s),2.57(3H,s),2.50(3H,s)ppm。
步骤2.5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
向1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(0.38g，1.4mmol)和N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲酰胺(来自PepTech，0.46g，1.6mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的混合物中添加含碳酸钾(0.38g，2.7mmol)的水(2mL)。反应混合物用N2鼓泡。添加四(三苯膦)钯(0)(0.095g，0.082mmol)且反应在100℃下搅拌过夜。反应用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶上(用含0-100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物。C18H20ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝347.1；实验值：347.1。
步骤3.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
向5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(106mg，0.306mmol)于甲醇(2mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加四氢硼酸钠(14mg，0.37mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。有机层用MgSO4干燥且浓缩得到粗醇。C18H22ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝349.1；实验值：349.1。
步骤4.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
在室温下添加三聚氯化氰(85mg，0.46mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.036mL，0.46mmol)中。在形成白色固体(10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(2mL)和5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(115mg，0.330mmol，来自实施例11，步骤3)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜。添加水，且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，接着用MgSO4干燥，浓缩。残余物在硅胶上(用含0％至80％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(76mg，63％)。C18H21Cl2N2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝367.1；实验值：367.0。
步骤5.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6.1mg，0.041mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，2.0mg，0.082mmol)且在室温下搅拌混合物10分钟。向所得混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(15.0mg，0.0408mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液。混合物在室温下搅拌过夜。粗混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.1。
实施例13.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮
在N2下在搅拌下向4-氯-3-氟苯酚(来自Aldrich，20g，100mmol)中添加乙酰氯(14.1mL，199mmol)。所得混合物在室温下快速变成澄清溶液且其在60℃下加热2小时。分数份向所得混合物中添加三氯化铝(25.0g，187mmol)且在180℃下加热反应混合物30分钟。固体在高温下缓慢溶解。接着冷却反应混合物至室温同时小心涡旋烧瓶以使固体在烧瓶内部形成薄层，且接着在于冰浴中冷却下用1.0NHCl(300mL)缓慢淬灭并搅拌过夜。黄色沉淀物用水洗涤且在真空下干燥得到呈黄色固体状的所要产物(23.8g)，其未进行进一步纯化即直接用于下一步骤中。
步骤2.1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮
1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(23.8g，126mmol)于乙酸(100mL)中的溶液用N-碘丁二酰亚胺(34.1g，151mmol)处理且在70℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，用EtOAc稀释且用饱和NaHCO3溶液淬灭直至停止鼓泡为止。分离有机层，用水洗涤，用MgSO4干燥且汽提得到所要产物，其未进行进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤3.1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮
将1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(13g，41mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(41.3mL)中。依次添加碘代甲烷(3.9mL，62mmol)和碳酸钾(11g，83mmol)。在60℃下加热反应1小时。冷却混合物至室温，用乙醚稀释。分离有机层并合并，用水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶上(用含0％至10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(10g，70％)。C9H8ClFIO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝328.9；实验值：328.9。
步骤4.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将锌(0.682g，10.4mmol)与1,2-二溴乙烷(0.0598mL，0.694mmol)一起悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中。在70℃下加热混合物10分钟且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(0.088mL，0.69mmol)且持续搅拌1小时。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.5g，8.7mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液且在40℃下加热混合物1小时，随后添加1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(3.0g，9.1mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.16g，0.17mmol)和三-(2-呋喃基)膦(0.081g，0.35mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物。使反应混合物升温至70℃且搅拌过夜。接着冷却混合物至室温且于乙醚与饱和NH4Cl溶液之间分配。有机层用水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶上(用含0％至25％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.8g)。C17H21ClFNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝380.1；实验值：380.1。
步骤5.3-[3-氯-2-氟-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却为0℃的3-(3-乙酰基-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g，0.48mmol)于甲醇(3mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(0.022g，0.57mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。合并有机层，用MgSO4干燥且浓缩得到粗醇(0.19g)。C17H23ClFNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝382.1；实验值：382.0。
步骤6.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氟-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下添加三聚氯化氰(140mg，0.78mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.059mL，0.77mmol)中。在形成白色固体(约10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(4mL)和3-[3-氯-2-氟-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(197mg，0.547mmol)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜。添加水，且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，且浓缩。所得残余物在硅胶上(用含0％至30％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(110mg，53％)。
步骤7.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.9mg，0.053mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，2.5mg，0.11mmol)且在室温下搅拌混合物10分钟。向混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氟-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.053mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的溶液。反应混合物在35℃下搅拌过夜，接着用水淬灭，用乙醚萃取。合并的有机层用MgSO4干燥且浓缩得到所要产物，其直接用于下一步骤中。C23H29ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝491.2；实验值：491.1。
步骤8.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
在室温下，3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(14mg，0.028mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(0.2mL，0.8mmol)处理1小时，且接着移除溶剂得到1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐。向粗盐酸盐于乙腈(0.1mL)/甲醇(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加N,N-二异丙基乙胺(0.1mL，0.6mmol)和丙酮(0.050mL，0.68mmol)。搅拌混合物30分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.030g，0.14mmol)。反应在室温下搅拌过夜，接着淬灭且用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C21H27ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝433.2；实验值：433.1。
实施例14.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮
将1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(18.9g，60.9mmol)(来自实施例1，步骤1)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(60.8mL)中。依次添加碘乙烷(7.3mL，91mmol)和碳酸钾(17g，120mmol)。在60℃下加热反应1小时。冷却混合物至室温，用乙醚稀释。合并有机层，用水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶上(用含0-10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(18.9g，91.7％)。C11H13ClIO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝339.0；实验值：339.0。
步骤2.5-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
向1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(0.69g，2.0mmol)和N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲酰胺(0.68g，2.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中添加含碳酸钾(0.56g，4.1mmol)的水(3mL，200mmol)。反应用N2鼓泡。添加四(三苯膦)钯(0)(0.24g，0.20mmol)且鼓泡以N2。反应在95℃下搅拌过夜。反应用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶上(用含0％至90％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.6g，82％)。C19H22ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝361.1；实验值：361.0。
步骤3.5-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
向冷却为0℃的5-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(0.60g，1.7mmol)于甲醇(10mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(0.075g，2.0mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。萃取物用MgSO4干燥且浓缩得到粗醇(0.6g)。C19H24ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝363.1；实验值：363.0。
步骤4.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
在室温下添加三聚氯化氰(0.43g，2.3mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.18mL，2.3mmol)中。在形成白色固体(10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(10mL)和5-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(0.6g，2mmol)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜，接着用二氯甲烷稀释且用饱和NaHCO3溶液洗涤。有机层用MgSO4干燥，浓缩。残余物在硅胶上(用含0％至50％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.58，90％)。C19H23Cl2NO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝381.1；实验值：381.0。
步骤5.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(47mg，0.31mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，12.6mg，0.524mmol)且在室温下搅拌所得混合物10分钟。向混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(100mg，0.3mmol，来自实施例14，步骤4)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液。反应在35℃下搅拌过夜。淬灭反应且施加在RP-HPLC上(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)得到呈双TFA盐形式的所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C25H29ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝494.2；实验值：494.1。
实施例16.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇
在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(来自实施例11，步骤1)(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，接着用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至40％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.30g，90％)。
步骤2.4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈
将1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(0.30g，1.1mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲腈(来自Combi-Blocks，0.27g，1.2mmol)、碳酸钠(230mg，2.1mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(100mg，0.13mmol)于乙腈(8mL)/水(2mL)中的混合物脱气且接着用N2再填充。在95℃下搅拌反应2小时，接着冷却且用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至40％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.249g，75％)。C16H16ClN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝303.1；实验值：303.0。
步骤3.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈
在室温下搅拌三聚氯化氰(170mg，0.94mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(73μL，0.94mmol)的混合物10分钟且接着添加4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(190mg，0.628mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物不进行纯化即直接用于下一步骤中(121mg，60％)。C16H15Cl2N2O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝321.0；实验值：321.0。
步骤4.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈
添加氢化钠(20mg，0.50mmol)至4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(90mg，0.28mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(63mg，0.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中且反应在30℃下搅拌过夜。冷却混合物，用水处理且接着过滤得到所要产物。C22H21ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝434.1；实验值：434.2。
步骤5.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸
将含氢氧化钠(1.0M)的水(0.70mL，0.70mmol)添加至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.060g，0.14mmol)于乙醇(1.0mL)中的混合物中且在95℃下加热所得混合物6小时。此时，添加浓HCl以将pH值调节至约3。移除溶剂且残余物未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C22H22ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝453.1；实验值：453.2。
步骤6.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
在室温下将含2.0M二甲胺的THF(0.14mL，0.28mmol)添加至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(9.6mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时。粗混合物使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.2。
实施例17.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基吡啶甲酰胺
此化合物是使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用2.0M甲胺的THF溶液替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C23H25ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝466.2；实验值：466.2。
实施例18.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺
此化合物是使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用乙醇胺替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C24H27ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝496.2；实验值：496.2。
实施例19.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
此化合物是使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用2-(甲基氨基)乙醇替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C25H29ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝510.2；实验值：510.2。
实施例20.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇
步骤1.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯
在室温下搅拌三聚氯化氰(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(来自实施例16，步骤1)(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至10％EtOAc的己烷洗脱纯化(1.01g，60％)。
步骤2.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
添加氢化钠(36mg，0.91mmol)至3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(150mg，0.503mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中且反应在30℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至70％EtOAc的CH2Cl2洗脱纯化(103mg，50％)。C16H18BrClN5O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝410.0；实验值：410。将外消旋产物施加在PhenomenexLux-纤维素1管柱(21.1×250mm，5微米粒度)上，用含5％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。
步骤3.1-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑
在0℃下添加含叔丁醇钾(1.0M)的THF(0.60mL，0.60mmol)至4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(0.1g，0.5mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物5分钟，接着冷却至0℃且用(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(0.2mL，0.8mmol)处理。反应在室温下搅拌过夜，接着用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩得到粗产物，其通过硅胶色谱用含0％至30％EtOAc的己烷洗脱纯化。C17H34BN2O3Si的计算值：(M+H)+:m/z＝353.2；实验值：353.1。
步骤4.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.026g，0.062mmol)(手性纯，来自步骤2的第一峰)、1-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(0.024g，0.069mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6.1mg，0.0075mmol)于乙腈(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物脱气且接着用N2再填充。在95℃下搅拌反应混合物2小时，接着用浓HCl(0.1mL)处理且接着在室温下搅拌1小时。粗混合物使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化，得到所要产物。产物分离为单一对映异构体。C21H25ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.2；实验值：442.2。
实施例21.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐
步骤1.3'-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸甲酯
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.15mmol，手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、[3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基]硼酸(来自Combi-Blocks，0.041g，0.20mmol)、碳酸钠(36mg，0.34mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6mg，0.007mmol)于乙腈(1.2mL)/水(0.3mL)中的混合物抽真空且接着用N2再填充。在95℃下搅拌反应2小时。接着移除溶剂且粗混合物通过硅胶色谱用含0％至70％EtOAc的CH2Cl2洗脱纯化，得到所要产物(54mg，75％)。C24H24ClFN5O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝484.2；实验值：484.1。
步骤2.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸
添加单水合氢氧化锂(13mg，0.31mmol)至以上制备的3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸甲酯(0.030g，0.062mmol)于甲醇(0.2mL)/四氢呋喃(0.2mL)/水(0.09mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应1.5小时，接着用浓HCl(60μL)处理以将pH值调节至2。移除溶剂得到粗产物，其未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C23H22ClFN5O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝470.1；实验值：470.2。
步骤3.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐
在室温下将含2.0M二甲胺的THF(0.1mL，0.2mmol)添加至以上制备的3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸(12mg，0.026mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(20mg，0.04mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(11μL，0.077mmol)。搅拌反应1小时，用水淬灭。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到呈TFA盐形式的所要产物。产物分离为单一对映异构体。C25H27ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝497.2；实验值：497.2。
实施例22.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,6'-二甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐
此化合物是使用与实施例21，步骤3的程序类似的程序，用2.0M甲胺的THF溶液替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物分离为单一对映异构体。C24H25ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝483.2；实验值：483.2。
实施例23.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶甲酰胺三氟乙酸盐
步骤1.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈
将1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(0.15g，0.54mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲腈(来自Frontier，0.14g，0.59mmol)、碳酸钠(110mg，1.1mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(52mg，0.064mmol)于乙腈(4mL)/水(1mL)中的混合物脱气且接着用N2再填充。在95℃下搅拌反应2小时，冷却，用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，且接着用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至40％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所要产物(114mg，70％)。C16H16ClN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝303.1；实验值：303.0。
步骤2.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈
在室温下搅拌三聚氯化氰(170mg，0.94mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(73μL，0.94mmol)的混合物10分钟且接着添加5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(190mg，0.628mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，接着过滤且浓缩。所得粗产物未进行进一步纯化即直接用于下一步骤中(110mg，55％)。C16H15Cl2N2O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝321.0；实验值：321.0。
步骤3.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈
添加氢化钠(20mg，0.50mmol)至5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(90mg，0.28mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(63mg，0.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中且反应在30℃下搅拌过夜。混合物用水处理且接着过滤得到所要产物。C22H21ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝434.1；实验值：434.2。
步骤4.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸
添加含氢氧化钠(1.0M)的水(0.70mL，0.70mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.060g，0.14mmol)于乙醇(1.0mL)中的混合物中。反应在95℃下加热6小时，随后添加浓HCl以将pH值调节至约3。移除溶剂且所得残余物未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C22H22ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝453.1；实验值：453.2。
步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶甲酰胺三氟乙酸盐
在室温下添加乙醇胺(15μL，0.25mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(9.6mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时，且接着用水淬灭。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到呈TFA盐形式的所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C24H27ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝496.2；实验值：496.2。
实施例24.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺三氟乙酸盐
此化合物是使用与实施例23的程序类似的程序，用2-(甲基氨基)乙醇替代乙醇胺来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C25H29ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝510.2；实验值：510.2。
实施例40.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
催化剂预先形成：无水二甲基乙酰胺(DMA)在使用之前先用温和N2流净化30分钟。用10mL二甲基乙酰胺和26.8μL浓H2SO4制备50mMH2SO4溶液且接着用N2净化10分钟。向配备有磁性搅拌棒和隔膜盖的8mL小瓶中添加Pd(OAc)2(22.5mg，100μmol)和2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(95.3mg，200μmol)。将小瓶抽空且用N2填充三次，用温和N2流净化10分钟。添加H2SO4(2.0mL，50mM于DMA中)，且在油浴中在80℃下搅拌催化剂混合物30分钟得到均质咖啡色-棕色溶液。
添加以上催化剂(0.05mL)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(来自实施例19)(4.0mg，0.0078mmol)、锌(0.22mg，0.0034mmol)和氰化锌(0.92mg，0.0078mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(0.1mL)中的混合物中。将混合物脱气且反应接着在120℃下加热1.5小时。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到所要产物。产物以外消旋混合物形式分离。C26H29N8O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝501.2；实验值：501.2。
实施例41.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
步骤1：N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-胺
在微波中在150℃下加热4-氯-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(330mg，1.9mmol)和1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.58mL，3.9mmol)于1-丁醇中的溶液40分钟。通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(240mg，42％)。C16H19N4O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝299.1；实验值：299.2。
步骤2：5-[3-氯-5-(1-{4-[(2,4-二甲氧基苯甲基)氨基]-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基}乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-胺(110mg，0.37mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液用氢化钠(30mg，0.75mmol)处理且在20℃下搅拌30分钟。反应混合物用5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(130mg，0.34mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液处理且在50℃下加热过夜。反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩成粗残余物。通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(110mg，49％)。C34H38ClN6O4的LCMS：(M+H)+:m/z＝629.3；实验值：629.1。
步骤3：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
5-[3-氯-5-(1-{4-[(2,4-二甲氧基苯甲基)氨基]-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基}乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(85mg，0.14mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液用三氟乙酸(2mL)处理且在20℃下搅拌3小时并在40℃下搅拌20分钟。通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％三氟乙酸的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(44mg，46％)。产物以外消旋混合物形式分离。C25H28ClN6O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝479.2；实验值：479.0。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.8(brs,0.5H),8.50(brs,0.5H),8.37(brs,2H),7.91-7.86(m,0.5H),7.80-7.75(m,0.5H),7.68-7.58(m,3H),7.17(d,J＝7.3Hz,1H),6.19(q,J＝6.9Hz,1H),3.04(s,3H),3.01(s,3H),2.94(s,3H),2.61(s,3H),2.05(s,3H),1.83(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例43.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈
步骤1.1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮
添加1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(例如来自实施例13，步骤1)(20.0g，101mmol，1.00当量)和50％硫酸水溶液(120mL)至烧瓶中。在水浴中在搅拌下加热所得混合物至60℃。在8分钟间隔内分三份(7.0g+7.0g+7.52g)添加N-溴丁二酰亚胺(21.52g，120.9mmol，1.20当量)。在60℃下加热反应混合物3小时之后，反应完成。反应混合物用水(160ml)和二氯甲烷(DCM)(300ml)稀释，且搅拌混合物0.5小时。分离有机层且水层用二氯甲烷(100ml)萃取。合并的有机层用1NHCl(100ml×2)、水(100ml)、盐水(60ml)洗涤，且在减压下浓缩得到呈浅黄色固体状的粗产物(29.1g)。将粗产物溶解于HOAc(100ml)中且接着在搅拌下用水(200ml)稀释。在室温下搅拌所得混合物20分钟且产物通过过滤收集并干燥，得到呈浅黄色固体状的1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(21.8g，80.9％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ13.18(s,1H,-OH),7.78(d,J＝7.78Hz,1H),2.63(s,3H)。
步骤2.4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈
将1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(2.0g，7.5mmol)与氰化钾(0.58g，9.0mmol)一起组合于N,N-二甲基甲酰胺(16mL，210mmol)中且在油浴中加热至85℃。在加热18小时之后，使反应冷却至室温且添加碘乙烷(0.90mL，11mmol)和碳酸钾(2.1g，15mmol)。加热反应至65℃且通过LC/MS监测。在加热3小时之后，反应完成且使其冷却至室温，接着溶解于乙酸乙酯中并用水、盐水洗涤，且用硫酸镁干燥。浓缩所得溶液得到呈棕色油状的粗产物。产物通过硅胶快速管柱色谱用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体残余物形式的4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(1.15gm，50％)，C11H9BrClNO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝301.9,303.9；实验值：(无离子化)。
步骤3.2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈
在0℃下添加四氢硼酸钠(38mg，0.99mmol)至4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(200mg，0.7mmol)于甲醇(5mL，100mmol)中的混合物中。在室温下搅拌反应1小时，浓缩且于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到呈澄清油状的粗2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈(0.15gm，100％)，C11H11BrClNO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝303.9,305.9；实验值：304.0,305.9。
步骤4.2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈
将三聚氯化氰(0.11g，0.59mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中。在搅拌数分钟之后，添加2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈(150mg，0.49mmol)于二氯甲烷(3mL，50mmol)中的溶液。所得混合物在室温下搅拌过夜。反应于水与二氯甲烷之间分配。有机层用饱和NaHCO3溶液、水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，且浓缩。粗产物通过快速管柱色谱用0-30％EtOAc/己烷的梯度洗脱纯化得到呈半固体状的2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈(0.12gm，75％)，C11H10BrCl2NO的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝323.9,320.9；实验值：(不良离子化)。
步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈
添加氢化钠(16mg，0.41mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(33mg，0.22mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中的混合物中且搅拌10分钟。添加含2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈(60mg，0.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)且反应在50℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。产物通过快速管柱色谱用CH2Cl2/MeOH0-10％洗脱纯化，得到呈固体状的4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.05gm，60％)。C17H16BrClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝437.0,435.0；实验值：436.9,434.7。
步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈
向4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(20mg，0.04mmol)和3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶(19mg，0.069mmol)于乙腈(2mL，40mmol)中的混合物中添加含碳酸钠(10mg，0.09mmol)的水(0.5mL，30mmol)。反应以鼓泡氮气进行脱气。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2mg，0.002mmol)且用N2再脱气。反应在100℃下加热2小时。粗产物用制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色无定形固体状的所要产物(0.004g，20％)。产物以外消旋混合物形式分离。C23H22ClN7O3S的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝512.1；实验值：512.2。1HNMR(500MHz,DMSO)δ9.20(d,J＝2.1Hz,1H),9.12(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(t,J＝2.0Hz,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H),6.36(q,J＝7.0Hz,1H),3.54(dt,J＝14.0,7.0Hz,1H),3.37(s,3H),3.36-3.30(m,1H),2.58(s,3H),1.81(d,J＝7.0Hz,3H),0.92(t,J＝6.9Hz,3H)。
实施例44.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺
标题化合物是以与实施例43，步骤6类似的方式，但使用N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶甲酰胺(Peptech，目录号BE1622)制备得到粗产物，其用制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色无定形固体状的所要产物(0.005g，22％)。产物以外消旋混合物形式分离。C25H25ClN8O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝505.1；实验值：505.1。1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.72(dd,J＝2.1,0.7Hz,1H),8.14-8.12(m,1H),8.11(s,1H),7.75(s,1H),7.71(dd,J＝8.0,0.7Hz,1H),6.35(q,J＝7.0Hz,1H),3.61-3.48(m,1H),3.42-3.31(m,1H),3.03(s,3H),2.95(s,3H),2.57(s,3H),1.80(d,J＝7.1Hz,3H),0.92(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例65.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)烟碱酰胺(来自PepTech)(25mg，0.091mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌2小时。过滤混合物且滤液通过RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物分离为单一对映异构体。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.2。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.64(1H,s),8.54(1H,brs),8.13(1H,s),7.82(1H,m),7.53(1H,s),7.42(2H,brs),6.28(1H,q,J＝6.5Hz),3.22(3H,s),2.95(6H,m),2.58(3H,s),2.04(3H,s),1.77(3H,d,J＝6.5Hz)ppm。
实施例66.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.091mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物且滤液用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物。产物分离为单一对映异构体。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.2。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.78(2H,brs),8.48(1H,m),8.36(1H,s),7.86(1H,brs),7.65(1H,brs),7.58(1H,s),6.33(1H,q,J＝7.0Hz),3.19(3H,s),3.03(3H,s),2.97(3H,s),2.62(3H,s),2.06(3H,s),1.81(3H,d,J＝7.0Hz)ppm。
实施例67.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
步骤1.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
在室温下在二氯甲烷(17mL)中用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(8.15mL，32.6mmol)处理3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.6g，3.2mmol，来自实施例13，步骤7)2小时。浓缩混合物至干燥得到所要产物。C18H21ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝391.1；实验值：391.1。
步骤2.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(0.90g，1.9mmol，实施例67，步骤1)、丙酮(1.0mL，14mmol)和三乙胺(2.5mL，18mmol)于二氯甲烷(20mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(2.5g，5.8mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，接着过滤，用水洗涤，用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到粗产物(870mg，100％)。C21H27ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝433.2；实验值：433.1。
步骤3.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的单一对映异构体
在PhenomenexLux纤维素-2管柱上分离1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(870mg，2.0mmol)的对映异构体，用含10％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，且管柱装载量为每次注射约8mg，分离两种对映异构体。第一峰滞留时间10.9分钟；第二峰滞留时间13.6分钟。浓缩含有第一峰(110mg，13％)的洗脱份且使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物分离为单一对映异构体。C21H27ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝433.2；实验值：433.1。
实施例68.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.032mmol，来自实施例67，步骤1)和三乙胺(18μL，0.13mmol)于乙醇(0.53mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(6.8μL，0.097mmol)。在90℃下加热所得混合物3小时，接着用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。在PhenomenexLux纤维素C-4管柱(5μM，21.2×250mm)上分离对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，得到两种对映异构体。第一峰(2.7mg，18％)滞留时间8.9分钟；C21H27ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝449.2；实验值：449.1。1HNMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.11(1H,s),7.42(1H,d,J＝8.5Hz),7.25(2H,brs),6.21(1H,q,J＝7.5Hz),4.28(1H,d,J＝4.0Hz),3.82(3H,m),3.62(3H,s),3.55(1H,m),3.05(1H,m),2.97(1H,m),2.55(3H,s),2.28(2H,m),1.70(2H,d,J＝7.5Hz),1.00(3H,d,J＝6.0Hz)ppm。第二峰滞留时间10.0分钟。
实施例71.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.041mmol，来自实施例67，步骤1的外消旋中间体)和三乙胺(28μL，0.20mmol)于甲醇(0.1mL)/乙腈(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(39μL，0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物在室温下用6.0M氯化氢的水溶液(0.07mL，0.4mmol)处理10分钟且接着用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(2.5mg，13％)。产物以外消旋混合物形式分离。C20H25ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝435.2；实验值：435.1。
实施例72.1-{1-[5-氯-4-氟-2-甲氧基-3-(1-氧杂环丁烷-3-基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.041mmol，来自实施例67，步骤1的外消旋中间体)和三乙胺(28μL，0.20mmol)于甲醇(0.1mL)/乙腈(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加37％甲醛(15μL，0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(1.2mg，6.3％)。产物以外消旋混合物形式分离。C19H23ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝405.2；实验值：405.1。
实施例94.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯
在室温下添加三聚氯化氰(200mg，1.1mmol)至N,N-二甲基甲酰(0.083mL，1.1mmol)中。在形成白色固体(约10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(5mL)和3-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(310mg，0.77mmol)。在添加之后，所得混合物在室温下搅拌过夜。添加水，且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶(用0％至40％EtOAc/己烷洗脱)上纯化以得到所要产物(140mg，43％)。C22H26Cl2NO3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝422.1；实验值：422.0。
在140℃下加热3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(0.375g，0.888mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.16g，1.1mmol)、碳酸铯(0.43g，1.3mmol)和碘化钾(15mg，0.089mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2.8mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，且用水洗涤。浓缩有机层且在硅胶上(用含0％至100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.24g，50％)。C28H32ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝535.2；实验值：535.0。在PhenomenexLux纤维素C-2管柱(5μM，21.2×250mm)上分离对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，且管柱装载量为每次注射约4.5mg，分离两种对映异构体。第一峰滞留时间:21.2分钟；第二峰滞留时间:24.6分钟。
步骤2.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
将3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(170mg，0.32mmol，外消旋中间体)和5％钯(80mg)组合于甲醇(12mL)中，向其中添加0.25M氯化氢的水溶液(3.2mL，0.79mmol)。悬浮液在室温下在H2气球压力下氢化2小时。过滤悬浮液。滤液用饱和NaHCO3溶液中和，且用二氯甲烷萃取。合并的有机层用MgSO4干燥且过滤，浓缩得到所要产物(117mg，92％)。C20H26ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝401.2；实验值：401.1。
步骤3.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)
添加丙酮(9.3μL，0.13mmol)至含1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10.2mg，0.0254mmol)的甲醇(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)/乙腈(0.1mL)中且在室温下搅拌混合物10分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(16mg，0.076mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，且接着用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物(2.3mg，22％)。产物分离为单一对映异构体。C23H32ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝443.2；实验值：443.1。
实施例95.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇双(三氟乙酸盐)
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.9mg，0.020mmol，来自实施例94，步骤2的外消旋中间体)于四氢呋喃(0.09mL)/乙腈(0.09mL)/甲醇(0.09mL)中的混合物中添加{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(19μL，0.098mmol)且搅拌混合物10分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(12mg，0.059mmol)。所得混合物在室温下搅拌4小时，接着用含6.0M氯化氢的水(30μL，0.2mmol)处理10分钟。混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物(3.2mg，40％)。产物以外消旋混合物形式分离。C22H30ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝445.2；实验值：445.1。
实施例96.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇双(三氟乙酸盐)
步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯
在PhenomenexLux纤维素C-2管柱(5μM，21.2×250mm)上分离来自实施例94，步骤1的对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，且管柱装载量为每次注射约4.5mg，分离两种对映异构体。第一峰滞留时间:21.2分钟；第二峰滞留时间:24.6分钟。
步骤2.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
如实施例94，步骤2中所述在5％钯存在下氢化3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(来自先前步骤的第一峰的手性中间体)得到所要手性产物。C20H26ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝401.2；实验值：401.1。
步骤3.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇双(三氟乙酸盐)
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.02mmol，来自步骤2的手性中间体)和三乙胺(9μL，0.07mmol)于异丙醇(0.05mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(4.5μL，0.064mmol)。所得混合物在90℃下搅拌过夜，冷却且用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物(3.4mg，34％)。产物分离为单一非对映异构体。C23H32ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝459.2；实验值：459.1。
实施例99.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇三氟乙酸盐
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9.8mg，0.024mmol，来自实施例94，步骤2的外消旋中间体)、六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓(14mg，0.037mmol)和三乙胺(10μL，0.073mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.15mL)中的混合物中添加85％(2S)-2-羟基丙酸的水溶液(3.2μL，0.037mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时。混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈三氟乙酸(TFA)盐形式的所要产物(2.9mg，29％)。产物以外消旋混合物形式分离。C23H30ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝473.2；实验值：473.1。
实施例102.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(21mg，0.046mmol)(实施例1，步骤7，来自峰1的手性中间体)和三乙胺(20μL，0.1mmol)于异丙醇(0.10mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(3.2μL，0.046mmol)。在90℃下搅拌所得混合物。在90分钟之后，再添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(6.4μL)且在90℃下搅拌过夜。在冷却之后，混合物用甲醇稀释且使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6mg(30％)产物。产物分离为单一非对映异构体。C22H30ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝445.2；实验值：445.2。
实施例104.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.04mmol)(实施例1，步骤7，来自峰1的手性中间体)、{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(8.3mg，0.048mmol)和三乙胺(19μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(38mg，0.087mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物且浓缩。将粗产物溶解于四氢呋喃(1mL)中且冷却至0℃。添加含1.0M氟化四正丁基铵的THF(0.44mL，0.44mmol)且升温至室温。在3小时之后，蒸发溶剂。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到8.1mg(40％)所要产物。产物分离为单一对映异构体。C21H28ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝431.2；实验值：431.3。
实施例105.(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(16mg，0.035mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)和三乙胺(14μL，0.10mmol)于乙腈(0.7mL)中的混合物中添加溴乙腈(2.7μL，0.038mmol)。在室温下搅拌所得混合物2.5小时。混合物用乙腈稀释且通过使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物。部分蒸发纯洗脱份且接着通过添加1NNaOH使其呈碱性。水性混合物用二氯甲烷(2×)萃取。干燥(MgSO4)萃取物、过滤且浓缩。在真空中干燥固体得到6.9mg(46％)所要产物。产物分离为单一对映异构体。C21H25ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝426.2；实验值：426.0。
实施例108.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
在室温下历经周末搅拌1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.024mmol，来自实施例1，步骤7的第一峰的手性中间体)、三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(6.8mg，0.029mmol)和三乙胺(12μL，0.085mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物。蒸发溶剂且粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到4.5mg(39％)所要产物。产物分离为单一对映异构体。C21H25ClF3N6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝469.2；实验值：469.1。
实施例110.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N-甲基丙酰胺三氟乙酸盐
1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(26mg，0.067mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)、(2R)-2-溴丙酸(7.3μL，0.081mmol)和三乙胺(19μL，0.13mmol)于乙腈(0.8mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。反应未完成，因此将其加热至50℃。在4小时之后，蒸发溶剂。向粗残余物中添加氯化甲基铵(4.5mg，0.067mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)、三乙胺(19μL，0.13mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(45mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。添加反应混合物至含有饱和NaHCO3的小瓶中且用EtOAc(2×)萃取。干燥(MgSO4)有机物、过滤且浓缩。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到1.4mg(3.6％)呈TFA盐形式的所要产物。产物分离为单一非对映异构体。C23H31ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝472.2；实验值：472.2。
实施例113.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-3,3,3-三氟丙-1-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.04mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)和三乙胺(19μL，0.13mmol)于乙腈(0.6mL)中的混合物中添加2-溴-3,3,3-三氟丙-1-醇(来自SynquestLabs，9.2mg，0.048mmol)。添加N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)，此举产生澄清溶液，将其在70℃下搅拌过夜。混合物用水稀释且使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6.6mg(30％)所要产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C22H27ClF3N6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝499.2；实验值：499.1。
实施例115.(2R)-3-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1,1,1-三氟丙-2-醇
在微波中在120℃下加热1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.044mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)、(2R)-2-(三氟甲基)环氧乙烷(9.4μL，0.11mmol)和三乙胺(18μL，0.13mmol)于乙醇(0.3mL)中的混合物25分钟。混合物用MeOH稀释且通过RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6.2mg(28％)所要产物。产物分离为单一对映异构体。C22H27ClF3N6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝499.2；实验值：499.1。
实施例118.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.033mmol，来自实施例1，步骤7，峰1的手性中间体)、(2S)-2-羟基丙酸(4.3μL，0.049mmol)(L-乳酸，85％水溶液)与三乙胺(14μL，0.098mmol)的混合物于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的混合物中添加六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓(19mg，0.049mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物用MeOH稀释且使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到3.0mg(20％)所要产物。产物分离为单一对映异构体。C22H28ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝459.2；实验值：459.2。
实施例121.(2R)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇三氟乙酸盐
此化合物是使用与实施例118的程序类似的程序(自来自实施例1，步骤7，峰1的手性物质起始)，用(R)-2-羟基丙酸替代(2S)-2-羟基丙酸(4.3μL，0.049mmol)、和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻替代六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物。产物分离为单一对映异构体。C22H28ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝459.2；实验值：459.2。
实施例139.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的对映异构体
步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮
此化合物是根据实施例13步骤3的程序，使用1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮和碘乙烷作为起始物质来制备。C10H10ClFIO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝342.9；实验值：342.9。
步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
向配备有磁性搅拌棒和橡胶隔膜的圆底烧瓶装入氯化锂(3.9g，91mmol)。在140℃下在高真空下加热烧瓶10分钟且在冷却至室温之后用氮气回填。添加锌(6.0g，91mmol)且在140℃下在高真空下加热烧瓶10分钟并在冷却至室温之后用氮气回填。经由注射器添加四氢呋喃(THF)(38mL)和1,2-二溴乙烷(233μL，2.70mmol)。在60℃下加热混合物10分钟且接着冷却至室温。添加氯三甲基硅烷(68μL，0.54mmol)和含碘(69mg，0.27mmol)的THF(1mL)且在60℃下搅拌所得混合物10分钟，接着冷却至室温。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(12.17g，42.99mmol)于THF(10mL)中的溶液且在40℃下搅拌混合物1小时并在室温下搅拌混合物1小时。在高真空下将装有1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(13.0g，38.0mmol)、乙酸钯(170mg，0.76mmol)、2'-(二环己基膦基)-N,N,N',N'-四甲基联苯-2,6-二胺(660mg，1.5mmol)和甲苯(35mL)的另一烧瓶抽空且用氮气回填。冷却混合物至0℃且经由注射器缓慢添加以上制备的锌试剂。在添加之后，加热反应至50℃过夜。反应溶液于EtOAc与饱和NH4Cl溶液之间分配。分离各层且水层进一步用EtOAc(2×)萃取。合并的有机物用水、盐水洗涤，接着用MgSO4干燥，且浓缩。粗混合物在硅胶管柱上纯化得到呈橙色油状的所要产物(6.3g，45％)。C18H23ClFNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝394.1；实验值：394.1。
步骤3.3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C18H25ClFNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝396.1；实验值：396.1。
步骤4.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
此化合物是根据实施例13步骤6的程序，使用3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(外消旋)和三聚氯化氰作为起始物质来制备。
步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.10g，7.37mmol)、碳酸铯(3.2g，10mmol)和碘化钾(111mg，0.670mmol)于DMF(20mL)中的混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.63g，6.70mmol)且在90℃下搅拌混合物3小时。在真空中移除溶剂。残余物用乙酸乙酯和水稀释。水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物在硅胶管柱上(用100％乙酸乙酯洗脱)纯化得到呈泡沫状的所要产物(2.15g，63％)。C24H31ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝505.2；实验值：505.2。
步骤6.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(275mg，0.544mmol)于二氯甲烷(2.4mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的二噁烷溶液(1.1mL，4.4mmol)。在室温下搅拌反应溶液6小时。在减压下移除溶剂得到呈白色固体状的所要产物(250mg，96％)。C19H23ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝405.2；实验值：405.1。
步骤7.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(49mg，0.10mmol)、丙酮(8.28μL，0.113mmol)和三乙胺(44.3μL，0.318mmol)于二氯甲烷(0.67mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(89mg，0.20mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物且浓缩并接着通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到外消旋产物。LCMS：实验值：m/z＝447.2(M+H)+。外消旋混合物通过手性HPLC(管柱IA，用5％乙醇/95％己烷在流速18mL/min下洗脱)分离得到两个峰(异构体1：9.5mg，21％；异构体2：9.2mg，20％)。
异构体1(首先洗脱，滞留时间：4.4分钟)：1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.10(s,1H),7.45(d,1H),6.21(m,1H),3.70(m,5H),2.91(m,2H),2.53(s,3H),2.17(m,1H),1.66(d,3H),1.31(t,3H),0.81(m,6H)ppm；C22H29ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝447.2；实验值：447.2。
异构体2(其次洗脱，滞留时间：19.5分钟)：C22H29ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝447.2；实验值：447.2。
实施例140.1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.042mmol，来自实施例139，步骤6的外消旋中间体)和三乙胺(18μL，0.12mmol)于乙醇(1mL)中的混合物中添加2,2-二甲基-环氧乙烷(6.98μL，0.0837mmol)。在微波反应器中在120℃下加热所得混合物45分钟。反应用甲醇稀释且用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈白色固体状的所要产物(3.4mg，17％)。产物以外消旋混合物形式分离。C23H31ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝477.2；实验值：477.3。
实施例1411-(1-{5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.040mmol，来自实施例139，步骤6的外消旋中间体)和三乙胺(20μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的混合物中添加三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(11mg，0.048mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。在减压下蒸发溶剂且粗混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(3.8mg，19％)。产物以外消旋混合物形式分离。C21H24ClF4N6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝487.2；实验值：487.1。
实施例149(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇
步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的对映异构体
外消旋混合物通过手性HPLC(管柱IA，用5％乙醇/95％己烷在流速18mL/min下洗脱)分离得到两个峰；异构体1(首先洗脱)：滞留时间：16.8分钟；C24H31ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝505.2；实验值：505.2；异构体2(其次洗脱)：滞留时间：19.5分钟；C24H31ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝505.2；实验值：505.2。
步骤21-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
此化合物是使用与实施例139步骤6的程序类似的程序，用3-{3-[(1S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自手性分离的第一峰)作为起始物质来制备。C19H23ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝405.2；实验值：405.1。
步骤3.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(46mg，0.11mmol)(来自异构体1)和三乙胺(50μL，0.4mmol)于异丙醇(0.3mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(16μL，0.23mmol)。在90℃下搅拌所得混合物3小时。在冷却之后，混合物用乙腈稀释且通过RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(12mg，23％)。产物分离为单一非对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.05(s,1H),7.38(d,1H),6.15(m,1H),4.26(d,1H),3.76-3.60(m,6H),2.99(m,2H),2.48(s,3H),2.22(m,2H),1.62(d,3H),1.25(t,3H),0.93(d,3H)ppm；C22H29ClFN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝463.2；实验值：463.2。
实施例156.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-1-醇
步骤1.(2S)-2-溴丙酸甲酯
在0℃下添加DMF(28μL，0.36mmol)至(2S)-2-溴丙酸(0.552g，3.61mmol)和乙二酰氯(0.61mL，7.2mmol)于二氯甲烷(4.6mL)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中移除溶剂。将残余物溶解于二氯甲烷中且用甲醇(1.5mL，36mmol)和吡啶(0.44mL，5.4mmol)处理。在室温下搅拌反应溶液2小时。反应溶液用饱和碳酸氢钠溶液淬灭且用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩得到所要产物(0.51g，85％)。
步骤2.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯
向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(20.1mg，0.0475mmol，来自实施例1，步骤7的手性中间体)于乙腈(1mL)中的溶液中添加三乙胺(23μL，0.17mmol)和(2S)-2-溴丙酸甲酯(9.5mg，0.057mmol)。在室温下搅拌反应溶液4小时。移除溶剂得到所要产物(6.2mg，28％)。C23H30ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝473.2；实验值：473.3。
步骤3.(2R)-2-(3-{3-[(1S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-1-醇
在0℃下用含1.0M氢化二异丁基铝的甲苯(0.1mL，0.1mmol)处理(2R)-2-(3-{3-[(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯(6.2mg，0.013mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液3小时。反应用甲醇淬灭且用制备型RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(0.8mg，14％)。产物分离为单一非对映异构体。C22H30ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝445.2；实验值：445.1。
实施例158.1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇
此化合物是使用与实施例140类似的程序，用1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(来自实施例1，步骤7的手性中间体)和2,2-二甲基-环氧乙烷作为起始物质来制备。产物分离为单一对映异构体。C23H32ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝459.2；实验值：459.1。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.04(s,1H),7.23(bs,2H),7.16(s,1H),6.14(m,1H),3.96(s,1H),3.85(m,3H),3.45(s,3H),2.94(m,1H),2.80(m,1H),2.49(s,3H),2.14(s,2H),2.00(s,3H),1.63(d,3H),0.98(s,6H)ppm。
实施例159.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N,N-二甲基丙酰胺
步骤1.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸
向(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯(来自实施例156步骤2的手性中间体)(13mg，0.027mmol)于乙腈(0.6mL)和水(0.2mL)中的溶液中添加氢氧化锂(2.4mg，0.10mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。反应溶液用乙酸乙酯和1MHCl溶液稀释。分离有机层且用Na2SO4干燥，过滤且浓缩得到所要产物(10.2mg，83％)。C22H28ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝459.2；实验值：459.1。
步骤2.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N,N-二甲基丙酰胺
在室温下向(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸(4mg，0.009mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(4mg，0.009mmol)于DMF(0.3mL)中的溶液中添加三乙胺(4μL，0.03mmol)和二甲胺盐酸盐(0.9mg，0.01mmol)。搅拌反应混合物1小时，接着用甲醇稀释且通过制备型RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(2.7mg，63％)。产物分离为单一非对映异构体。C24H33ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝486.2；实验值：486.1。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.09(s,1H),7.23(s,1H),6.18(m,1H),3.78(m,3H),3.50(s,3H),3.01(s,3H),3.0-2.9(m,3H),2.77(s,3H),2.54(s,3H),2.06(s,3H),1.67(d,3H),0.98(d,3H)ppm。
实施例161.[1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)环丁基]乙腈
向1-[(1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(10mg，0.022mmol，来自实施例1，步骤7的手性中间体)于乙腈(0.1mL)中的溶液中依次添加亚环丁基乙腈(4.1mg，0.044mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(13μL，0.087mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙腈稀释且通过制备型RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(4.3mg，41％)。产物分离为单一对映异构体。C25H31ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.0。
实施例163.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
步骤1.4-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
此化合物是使用与实施例139步骤2的程序类似的程序，用1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮和4-碘哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备。C20H28ClNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝404.1；实验值：404.1。
步骤2.4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用4-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C20H30ClNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝406.1；实验值：406.1。
步骤3.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
此化合物是根据实施例13步骤6的程序，使用4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(外消旋)和三聚氯化氰作为起始物质来制备。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.44(s,1H),5.46(m,1H),4.23(bs,2H),3.73(s,3H),3.29(bs,1H),2.78(bs,2H),2.40(s,3H),2.27-2.09(m,2H),1.78(d,3H),1.63(m,2H),1.43(s,9H)ppm。
步骤4.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-甲酸叔丁酯
此化合物是根据实施例139步骤5的程序，使用4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备。C26H36ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝515.3；实验值：515.2。
步骤5.1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐
此化合物是根据实施例139步骤6的程序，使用4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备。C21H28ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝415.2；实验值：415.2。
步骤6.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
此化合物是根据实施例139步骤7的程序，使用1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲醛作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C22H30ClN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝429.2；实验值：429.1。
实施例164.1-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-基)-2-甲基丙-2-醇
此化合物是使用与实施例140的程序类似的程序，用1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(来自实施例163，步骤5的外消旋中间体)和2,2-二甲基-环氧乙烷作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C25H36ClN6O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝487.3；实验值：487.3。1HNMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.05(s,1H),,7.24(bs,2H),7.22(s,1H),6.16(m,1H),4.01(bs,1H),3.67(s,3H),2.97(m,3H),2.49(s,3H),2.32(s,3H),2.15-2.04(m,6H),1.63(d,3H),1.40(m,2H),1.03(s,6H)ppm。
实施例166.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}环丁醇三氟乙酸盐
步骤1.1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮
将1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.0g，3.2mmol，来自实施例1，步骤2)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(0.66mL，3.9mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(0.26g，0.32mmol)和碳酸钾(1.3g，9.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的混合物用N2脱气且在80℃下加热过夜。在冷却至室温之后，反应混合物用水和乙酸乙酯稀释。有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩且在硅胶管柱上(用含0％至10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.60g，82％)。C12H14ClO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝225.1；实验值：225.1。
步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)环丁酮
向1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮(530mg，2.4mmol)于乙醚(10mL)中的溶液中添加锌-铜偶(1.8g，14mmol)。在40℃下加热反应混合物且历经2小时缓慢添加三氯乙酰氯(1.4mL，13mmol)和磷酰氯(1.2mL，13mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(3mL)中的溶液。在添加之后，反应混合物在回流下搅拌过夜。反应用饱和NaHCO3溶液淬灭且用乙醚稀释。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。在室温下搅拌含残余物和锌(0.31g，4.7mmol)的乙酸(10mL)2小时且接着回流过夜。再添加一份锌且再回流4小时。混合物用水稀释且用乙醚萃取。有机相连续用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，接着用MgSO4干燥且浓缩。粗物质用快速色谱(用含0％至30％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化得到所要产物(0.17g，27％)。C14H16ClO3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝267.1；实验值：267.0。
步骤3.3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇
此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)环丁酮和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C14H19ClO3Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝293.1；实验值：293.1。
步骤4.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇
向3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇(170mg，0.628mmol)于二甲亚砜(1mL)中的溶液中添加三聚氯化氰(64mg，0.34mmol)。在搅拌过夜之后，反应混合物用乙醚和水稀释。水层用乙酸乙酯萃取一次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗物质用硅胶管柱纯化得到所要产物(39.6mg，22％)。C14H18ClO2的LCMS计算值：(M-Cl)+:m/z＝253.1；实验值：253.2。
步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}环丁醇三氟乙酸盐
此化合物是根据实施例139步骤5的程序，使用3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C20H25ClN5O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝402.2；实验值：402.2。
实施例167.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮
向1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(5.00g，25.2mmol，来自Oakwood)于乙酸(100mL)中的搅拌溶液中添加N-溴丁二酰亚胺(4.93g，27.7mmol)且在100℃下加热所得混合物18小时。在冷却至环境温度之后，反应混合物在真空中浓缩，接着用饱和碳酸氢钠中和，滤出不溶性丁二酰亚胺。滤液用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，且接着在减压下浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0％至50％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所要产物(2.66g，38％)。C10H11BrClO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝277.0；实验值：277.0。1HNMR(DMSO-d6,300MHz):δ7.70(1H,s),3.77(3H,s),2.57(3H,s),2.50(3H,s)ppm。
步骤2.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇
在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，接着用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至40％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所要产物(0.30g，90％)。
步骤3.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯
在室温下搅拌三聚氯化氰(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(来自实施例16，步骤1)(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至10％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所要产物(1.01g，60％)。
步骤4.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
在140℃下搅拌3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(150mg，0.503mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol，ACESPharma产品清单，条目号47024)、碘化钾(9.0mg，0.05mmol)和碳酸铯(330mg，1.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物1小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至70％EtOAc的CH2Cl2洗脱纯化，得到所要产物(103mg，50％)。C16H18BrClN5O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝410.0；实验值：410.2。将外消旋产物施加在PhenomenexLux-纤维素1管柱(21.1×250mm，5微米粒度)上，用含5％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。峰1，滞留时间：12.35分钟；峰2，滞留时间：14.98分钟。
步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(来自先前步骤手性分离的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.091mmol，来自PepTech公司氨基酸类似物和硼酸丛书，条目号BE1622-1)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物且滤液用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物(2.9mg，6.7％)。产物分离为单一对映异构体。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.2。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.78(2H,brs),8.48(1H,m),8.36(1H,s),7.86(1H,brs),7.65(1H,brs),7.58(1H,s),6.33(1H,q,J＝7.0Hz),3.19(3H,s),3.03(3H,s),2.97(3H,s),2.62(3H,s),2.06(3H,s),1.81(3H,d,J＝7.0Hz)ppm。
实施例183.1-[1-(5-氯-3-{1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吡唑-4-基}-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
步骤1.1-(2-氯乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑
在75℃下搅拌4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(0.39g，2.0mmol)、1-溴-2-氯乙烷(0.3mL，3mmol)和碳酸铯(1.3g，4.0mmol)于乙腈(6mL)中的混合物5小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水，盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩并通过色谱用己烷/EtOAc(最大EtOAc30％)洗脱来纯化产物(0.45g，88％)。C11H19BClN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝257.1；实验值：257.0
步骤2.N,N-二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙胺
1-(2-氯乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(0.10g，0.39mmol)、碘化钠(58mg，0.39mmol)和含2.0M二甲胺的THF(1.0mL，2.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物在80℃下搅拌过夜。移除溶剂得到所要产物，其用于下一步骤中。C13H25BN3O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝266.2；实验值：266.3
步骤3.1-[1-(5-氯-3-{1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吡唑-4-基}-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，10mg，0.024mmol)、N,N-二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]-乙胺(8.6mg，0.036mmol)、碳酸钠(5.2mg，0.049mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(4.0mg，0.0049mmol)于乙腈(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物抽真空且用N2再填充并在95℃下搅拌2小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(3.1mg，28％)。产物分离为单一对映异构体。C23H30ClN8O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝469.2；实验值：469.2。
实施例184.2-[(5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-基)氨基]乙醇
步骤1.1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，25.0mg，0.06mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶(20.mg，0.088mmol)、碳酸钠(12mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.5mg，0.012mmol)于乙腈(1mL)/水(0.3mL)中的混合物用N2脱气且在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。产物通过色谱用CH2Cl2/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C21H21ClFN6O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝427；实验值：427.2。
步骤2.2-[(5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-基)氨基]乙醇
在130℃下搅拌1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.023mmol)和乙醇胺(0.10mL)于1-丁醇(1mL)中的混合物5小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(1.6mg，15％)。产物分离为单一对映异构体。C23H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝468.2；实验值：468.2。
实施例188.2-(5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-2-基氧基)乙醇
添加氢化钠(20mg，0.5mmol)至1,2-乙烷二醇(0.5mL，9mmol)中且在室温下搅拌混合物10分钟。此时添加1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.023mmol)且反应接着在110℃下搅拌过夜。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(1.8mg，17％)。产物分离为单一对映异构体。C23H26ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝469.2；实验值：469.1。
实施例189.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-(2,2-二氟乙氧基)-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
步骤1.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-羟基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺
在-78℃下添加含1.0M三溴化硼的CH2Cl2(250μL，0.25mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(实施例167，步骤5，(第一峰)60mg，0.13mmol)于二氯甲烷(1.2mL)中的混合物中且接着使反应升温至室温。此时，添加浓HCl(0.1mL)且搅拌混合物4小时。反应通过添加饱和NaHCO3淬灭。接着用二氯甲烷萃取混合物。合并的萃取物用盐水洗涤，干燥且浓缩得到所要粗产物(40mg，68％)，其未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C23H25ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝466.2；实验值：466.2。
步骤2.5-[3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-(2,2-二氟乙氧基)-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺
在0℃下添加偶氮二甲酸二异丙酯(13μL，0.064mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-羟基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(15.0mg，0.0322mmol)、2,2-二氟乙醇(7.9mg，0.096mmol，来自AlfaAesar，条目号B22201)和三苯膦(17mg，0.064mmol)于四氢呋喃(0.5mL)中的混合物中且接着在室温下搅拌反应24小时。粗物质用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物(1.6mg，6.6％)。产物分离为单一对映异构体。C25H27ClF2N7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝530.2；实验值：530.2。
实施例192.1-[1-(5-氯-3-环丙基-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
向微波小瓶中添加1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.037mmol，来自实施例167，步骤4的峰1)、环丙基三氟硼酸钾(8mg，0.06mmol，来自FrontierScientific，条目号C10298)、磷酸钾(23mg，0.11mmol)和四(三苯膦)钯(4.2mg，0.0036mmol)和接着甲苯(0.3mL)/水(0.1mL)。密封小瓶且用N2脱气三次。在110℃下加热反应20小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(1.1mg，8％)。产物分离为单一对映异构体。C19H23ClN5O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝372.2；实验值：372.2。
实施例195.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙酮
向圆底烧瓶中置放含1-(3-溴-5-氯-2-羟基-4-甲基苯基)乙酮(6.0g，23mmol)的无水DMF(22.8mL)。接着依次添加碳酸钾(6.3g，46mmol)和碘乙烷(2.73mL，34.2mmol)。在60℃下搅拌所得悬浮液2小时。将混合物倾入100mL水中且用200mL乙醚萃取。分离有机层、合并且用水和饱和NaCl溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩得到6.0g褐色油状物。C11H13BrClO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝293.0；实验值：293.0。
步骤2.1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙醇
在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，接着用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至30％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.30g，90％)。
步骤3.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-乙氧基-2-甲基苯
在室温下搅拌三聚氯化氰(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙醇(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至10％EtOAc的己烷洗脱纯化(1.01g，60％)。
步骤4.1-(1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
在140℃下搅拌3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-乙氧基-2-甲基苯(150mg，0.50mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol)、碘化钾(9mg，0.05mmol)和碳酸铯(330mg，1.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物1小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。粗产物通过硅胶色谱用含0％至70％EtOAc的CH2Cl2洗脱纯化(103mg，50％)。C17H20BrClN5O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝423.1；实验值：423.0。将外消旋产物施加于PhenomenexLux-纤维素1管柱(21.1×250mm，5微米粒度)上，用含4％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。峰1，滞留时间：8.64分钟；峰2，滞留时间：10.64分钟。
步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(来自先前步骤手性分离的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.09mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物且滤液用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物(2.3mg，5％)。产物分离为单一对映异构体。C25H29ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝494.2；实验值：494.2。
实施例200.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
步骤1.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，322mg，0.76mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-2-甲腈(210mg，0.91mmol，来自Combi-Blocks目录，条目号PN-0143)、碳酸钠(130mg，1.2mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(99mg，0.12mmol)于乙腈(5mL)/水(2mL)中的混合物用N2脱气且在95℃下搅拌反应2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。产物(0.28g，85％)通过色谱用CH2Cl2/MeOH(最大MeOH6％)洗脱来纯化。C22H21ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝434.1；实验值：434.1。
步骤2.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶甲酸二盐酸盐
添加1.0M氢氧化钠(2.9mL，2.9mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.250g，0.576mmol)于乙醇(4.0mL)中的混合物中且在95℃下加热所得混合物6小时。此时，添加浓HCl以将pH值调节至约3。移除溶剂且残余物未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C22H22ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝453.1；实验值：453.2。
步骤3.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)
在0℃下添加含2.0M二甲胺的THF(2.0mL，4.0mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(250mg，0.552mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(370mg，0.83mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(0.23mL，1.6mmol)。搅拌反应1小时。粗混合物用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所要产物。产物分离为单一对映异构体。C24H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝480.2；实验值：480.2。1HNMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.67(brs,1H),8.36(s,1H),7.58(s,1H),7.41(m,2H),6.32(q,2H),3.20(s,3H),3.00(s,3H),2.94(s,3H),2.62(s,3H),2.03(s,3H),1.80(d,3H)ppm。
实施例203.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
步骤1.[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸叔丁酯
在0℃下添加含1.0M叔丁醇钾的THF(2.4mL，2.4mmol)至4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(0.39g，2.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物5分钟。在冷却至0℃之后，向混合物中添加溴乙酸叔丁酯(0.5mL，3mmol)。在室温下搅拌反应2小时，接着用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。产物(0.5g，81％)通过色谱用己烷/EtOAc(最大EtOAc30％)洗脱来纯化。C15H26BN2O4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝309.2；实验值：309.1。
步骤2.(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯
将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(70mg，0.16mmol)(来自实施例195，步骤4的第一峰)、[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸叔丁酯(65mg，0.21mmol)、碳酸钠(30.mg，0.28mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(23mg，0.028mmol)于乙腈(3mL)/水(0.7mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。产物(65mg，78％)通过色谱用CH2Cl2/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C26H33ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝526.2；实验值：526.3。
步骤3.(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸双三氟乙酸盐
添加三氟乙酸(0.5mL)至(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯(0.065g，0.12mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应4小时。移除溶剂得到粗产物，其用于下一步骤中。C22H25ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝470.2；实验值：470.1。
步骤4.2-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
在室温下添加碳酸铵(20mg，0.21mmol)至(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸双三氟乙酸盐(10mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(2.5mg，25％)。产物分离为单一对映异构体。C22H26ClN8O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝469.2；实验值：469.2。
实施例208.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺双(三氟乙酸盐)
步骤1.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
在室温下将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.12mmol，来自实施例195，步骤4的峰1)与含乙酸钾(0.035g，0.35mmol)和4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二氧硼戊环](0.060g，0.24mmol)的二甲亚砜(0.44mL)组合于微波小瓶中。将其用氮气脱气且接着添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(0.01g，0.01mmol)。在油浴中加热反应至105℃过夜。使其冷却，接着溶解于乙酸乙酯中且用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。产物(15mg，20％)通过色谱用CH2Cl2/MeOH(最大MeOH10％)洗脱来纯化。C23H32BClN5O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝472.2；实验值：472.3。
步骤2.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺双(三氟乙酸盐)
将1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.032mmol)、6-氯-N,N-二甲基烟碱酰胺(12mg，0.064mmol)、碳酸钠(9.0mg，0.085mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6.9mg，0.0085mmol)于乙腈(0.9mL)/水(0.2mL)中的混合物用N2脱气且接着在95℃下搅拌过夜。粗物质使用RP-HPLC((XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所要产物(2mg，9％)。产物分离为单一对映异构体。C25H29ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝494.2；实验值：494.2。
实施例209.5-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-甲氧基-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈
添加预先形成的催化剂(0.05mL，来自实施例40)至1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.7mg，0.019mmol)、锌(0.54mg，0.0082mmol)和氰化锌(2.2mg，0.019mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(0.3mL)中的混合物中。将混合物用氮气脱气3次。在120℃下加热反应1.5小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(2.1mg，27％)。产物分离为单一对映异构体。C21H23N8O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝403.2；实验值：403.2。
以下化合物的实验程序和LCMS质谱数据(MS)概述于表1中。
表1
1根据所列化合物的实验程序合成；
2化合物分离为单一对映异构体。
实施例212.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈
步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮
所要化合物是根据用以形成外消旋中间体的实施例13，步骤3的程序，使用碘乙烷替代碘甲烷作为起始物质来制备，产率90％。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.68(d,J＝8.3Hz,1H),3.94(q,J＝7.0Hz,2H),2.61(s,3H),1.48(t,J＝7.0Hz,3H)。C10H10ClFIO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝342.9,344.9；实验值：342.9,344.8。
步骤2.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈
1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(7.3g，21mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中的溶液用氰化钾(2.1g，32mmol)处理且在40℃下搅拌5小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且倾入饱和碳酸氢钠溶液/水(1:1)中。分离有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗棕色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈黄色固体状的所要产物(6.1g，81％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(s,1H),3.93(q,J＝7.0Hz,2H),2.61(s,3H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H)。C11H10ClINO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝349.9；实验值：349.9。
步骤3.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
添加锌(4.60g，70.3mmol)和烘干的硅藻土(870mg)至烧瓶中且在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟并接着用氮气回填。依次添加N,N-二甲基乙酰胺(57mL)和1,2-二溴乙烷(430μL，5.0mmol)且在70℃下加热混合物10分钟并接着冷却至室温。反应混合物用氯三甲基硅烷(630μL，5.0mmol)逐滴处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(18g，62mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(28mL)中的溶液逐滴处理(用水浴保持内部温度低于40℃)且在40℃下加热2小时。锌-碘试剂(经由导管转移)经过塑料过滤器(适当密封以避免氛围暴露)直接过滤至经过氮气吹拂的清洁干燥烧瓶中。反应混合物用三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(720mg，0.79mmol)和三-(2-呋喃基)膦(370mg，1.6mmol)处理且用氮气脱气数分钟。反应混合物用4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(14g，41mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(130mL)中的溶液(用氮气脱气)快速处理且在70℃下加热2小时。反应混合物倾入饱和氯化铵溶液中且用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×500mL)和盐水(1×500mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗制深色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(5％-45％)纯化得到所要产物(14g，88％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.46(s,1H),4.42-4.20(m,5H),3.80(q,J＝7.0Hz,2H),2.59(s,3H),1.44(s,9H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。C15H16ClN2O4的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝323.1；实验值：323.0。
步骤4.3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧氮杂硼茂(9.7g，35mmol)于四氢呋喃(100mL)中的溶液用含1.0M硼烷-THF络合物的四氢呋喃(42mL，42mmol)处理且在20℃下搅拌15分钟。冷却反应混合物至-30℃且用3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(13g，35mmol)于四氢呋喃(110mL)中的溶液缓慢处理。含有起始物质酮的烧瓶再用四氢呋喃(20mL)冲洗且添加至反应混合物中。历经30分钟的时期使反应混合物升温至0℃且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭，倾入饱和碳酸氢钠溶液中，且用乙酸乙酯萃取。分离水层且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗制深色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-70％)纯化得到呈对映异构体的98:2混合物形式的呈黄色泡沫状的所要产物(10.4g，78％)(滞留时间＝7.73分钟和9.41分钟；ChiralPakAD-H管柱，4.6×150mm，5微米粒度，用含5％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.56(s,1H),5.15-5.07(m,1H),4.41-4.17(m,5H),3.74(q,J＝7.0Hz,2H),2.12(d,J＝3.7Hz,1H),1.49-1.37(m,15H)。C15H18ClN2O4的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝325.1；实验值：325.1。
步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自步骤4的对映异构体的98:2混合物)(10g，27mmol)于二氯甲烷(260mL)中的溶液依次用三乙胺(11mL，82mmol)和甲烷磺酸酐(7.1g，41mmol)处理且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释且用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗甲磺酸酯，其未进行进一步纯化即使用。粗甲磺酸酯中间体于N,N-二甲基甲酰胺(140mL)中的溶液用碳酸铯(13g，41mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(4.7g，31mmol)处理且在60℃下加热1小时。反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速管柱色谱(100％二氯甲烷至含有3％甲醇的70％乙腈/30％二氯甲烷)纯化得到呈对映异构体的95:5混合物形式的呈黄色泡沫状的所要产物(8.7g，对于2个步骤来说62％)(RT＝4.29分钟和6.00分钟；PhenomenexLux纤维素C-1管柱，4.6×150mm，5微米粒度，用含15％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。此物质通过手性HPLC(PhenomenexLux纤维素C-1管柱，21.2×250mm，5微米粒度，用含15％乙醇的己烷在10ml/min下洗脱)分离得到7.0g所要峰1物质(滞留时间8.20分钟)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.51(s,1H),6.32(q,J＝7.1Hz,1H),5.48(brs,2H),4.40-4.18(m,5H),4.05-3.93(m,1H),3.81-3.65(m,1H),2.64(s,3H),1.81(d,J＝7.1Hz,3H),1.48(t,J＝7.0Hz,3H),1.43(s,9H)。C25H31ClN7O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝512.2；实验值：512.3。
步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自步骤5的峰1对映异构体)(2.2g，4.2mmol)于二氯甲烷(11mL)中的溶液用三氟乙酸(11mL)逐滴处理且在室温下搅拌30分钟。浓缩反应混合物得到油状物，其自乙醇(2×)再浓缩得到残余物。将此物质溶解于最小量的甲醇中，逐滴添加至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(100ml)中，且用2:1二氯甲烷/异丙醇萃取若干次得到所要产物(1.8g，定量)，其未进行进一步纯化即使用。少量所要产物通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.37-4.26(m,1H),3.91-3.61(m,6H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H)。C20H23ClN7O的LCMS：(M+H)+:m/z＝412.2；实验值：412.1。
实施例213.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(实施例212，步骤6中的手性中间体)(0.30g，0.73mmol)于甲醇(7.3mL)中的溶液用甲醛(37％于水中)(0.54mL，7.3mmol)处理且其在室温下搅拌5分钟。反应混合物用氰基硼氢化钠(0.092g，1.5mmol)处理且在室温下搅拌2小时。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(0.16g，50％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.48(s,1H),6.27-6.18(m,1H),4.10-3.98(m,1H),3.96-3.86(m,2H),3.83-3.74(m,1H),3.72-3.64(m,1H),3.10-2.98(m,2H),2.54(s,3H),2.20(s,3H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H),1.32(t,J＝6.7Hz,3H)。C21H25ClN7O的LCMS：(M+H)+:m/z＝426.2；实验值：426.2。
实施例219.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(300mg，0.74mmol，来自实施例212的手性中间体)于四氢呋喃(14mL)中的溶液依次用三乙胺(260μL，1.8mmol)和2-溴乙醇(63μL，0.89mmol)逐滴处理且在60℃下搅拌6小时。反应混合物再用2-溴乙醇(26μL，0.37mmol)处理且在60℃下再搅拌6小时。反应混合物倾入饱和碳酸氢钠溶液中且用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(0.15g，44％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),7.56(s,1H),6.36-6.25(m,1H),4.48(brs,1H),4.19-4.07(m,1H),4.04-3.94(m,2H),3.91-3.82(m,1H),3.81-3.72(m,1H),3.20-3.08(m,2H),2.62(s,2H),2.57(s,3H),1.79(d,J＝6.8Hz,3H),1.40(t,J＝6.6Hz,3H)。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.1。
实施例220.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(50mg，0.12mmol，来自实施例212的手性中间体)于乙醇(1.7mL)中的溶液用(S)-(-)-甲基环氧乙烷(21μL，0.30mmol)处理且在微波中在125℃下加热15分钟。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(27mg，47％)。产物分离为单一非对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.48(s,1H),6.23(q,J＝6.9Hz,1H),4.35(d,J＝4.5Hz,1H),4.13-3.99(m,1H),3.97-3.88(m,2H),3.85-3.63(m,2H),3.61-3.51(m,1H),3.15-2.99(m,2H),2.55(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.71(d,J＝7.0Hz,3H),1.32(t,J＝6.9Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。C23H29ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝470.2；实验值：470.2。
实施例236.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸叔丁酯
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.38g，0.92mmol，来自实施例212的手性中间体)于N,N-二甲基甲酰胺(4.6mL)中的溶液依次用碳酸钾(0.51g，3.7mmol)和2-溴-2-甲基丙酸叔丁酯(0.86mL，4.6mmol)处理且在60℃下加热3小时。反应混合物倾入水中且用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％)纯化得到所要产物(0.43g，83％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.44(s,1H),6.22(q,J＝6.8Hz,1H),4.12-3.97(m,1H),3.88-3.70(m,4H),3.62-3.48(m,2H),2.54(s,3H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H),1.17(s,9H),1.05(s,6H)。C28H37ClN7O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝554.3；实验值：554.3。
实施例237.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈
步骤1.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)
将2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(0.36g，0.65mmol，来自实施例236的手性中间体)溶解于三氟乙酸(3.2mL)/水(0.065mL)的预混合溶液中且在室温下搅拌3小时并在50℃下搅拌30分钟。浓缩反应混合物且自乙腈(2×)再浓缩得到呈胶状的所要产物。此胶状物用少量甲基-叔丁基醚处理，涡旋直至形成固体。倾析甲基-叔丁基醚且浓缩残余物得到所要产物(0.51g，109％)，其未进行进一步纯化即使用。C24H29ClN7O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝498.2；实验值：498.3。
步骤2.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈
冷却2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)(0.10g，0.16mmol)于四氢呋喃(0.9mL)中的溶液至-25℃，用4-甲基吗啉(0.072mL，0.65mmol)和氯甲酸异丁酯(0.085mL，0.65mmol)处理，且在-15℃下搅拌15分钟。反应混合物经过抛弃式过滤器滤筒过滤至另一圆底烧瓶中。接着冷却此溶液至-20℃且逐滴添加四氢硼酸钠(0.031g，0.82mmol)于最小量水中的溶液。反应混合物在-15℃下搅拌30分钟，倾入水中，且用乙酸乙酯萃取。分离有机层，浓缩，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(3.5mg，4％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.50(s,1H),7.35(brs,2H),6.23(q,J＝6.7Hz,1H),4.44-4.35(m,1H),4.04-3.88(m,1H),3.86-3.73(m,1H),3.72-3.57(m,3H),3.12(d,J＝4.7Hz,2H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H),1.31(t,J＝6.9Hz,3H),0.80(s,6H)。C24H31ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝484.2；实验值：484.2。
实施例239.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酰胺
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)(0.05g，0.069mmol，来自实施例237，步骤1的手性中间体)和含2.0M氨的乙醇(0.17mL，0.34mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用三乙胺(0.048mL，0.35mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.046g，0.10mmol)处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用几滴水淬灭，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(25mg，73％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.51(s,1H),7.23(s,1H),6.98(s,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.09-3.96(m,1H),3.84-3.61(m,4H),3.39-3.34(m,1H),3.32-3.28(m,1H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝7.0Hz,3H),1.31(t,J＝6.9Hz,3H),1.02(s,6H)。C24H30ClN8O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝497.2；实验值：497.3。
实施例247.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.04g，0.097mmol，来自实施例212的手性中间体)和2-羟基-2-甲基-丙酸(0.012g，0.12mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.54mL)中的溶液依次用三乙胺(0.034mL，0.24mmol)和六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(0.048g，0.13mmol)处理且在室温下搅拌30分钟。反应混合物用甲醇和乙腈稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用甲醇/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(7mg，14％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.54(d,J＝4.5Hz,1H),6.25(q,J＝7.2Hz,1H),5.08(s,1H),4.88-4.77(m,1H),4.73-4.60(m,1H),4.50-4.35(m,1H),4.29-4.09(m,2H),3.85-3.73(m,2H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H),1.37(t,J＝6.3Hz,3H),1.26(s,3H),1.22(s,3H)。C24H29ClN7O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝498.2；实验值：498.2。
实施例261.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈
步骤1.4-乙酰基-6-氯-2-碘-3-甲氧基苯甲腈
1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(来自实施例13，步骤3的中间体)(18g，54mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液用氰化钾(5.2g，81mmol)处理且在40℃下搅拌6小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且倾入饱和碳酸氢钠溶液/水(1:1)中。分离有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗制棕色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈黄色固体状的所要产物(11g，61％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.60(s,1H),3.81(s,3H),2.62(s,3H)。C10H8ClINO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝335.9；实验值：335.9。
步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
添加锌(5.0g，77mmol)和烘干的硅藻土(520mg)至烧瓶中且在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟并接着用氮气回填。依次添加N,N-二甲基乙酰胺(53mL)和1,2-二溴乙烷(400μL，4.6mmol)且在70℃下加热混合物15分钟并接着冷却至室温。反应混合物用氯三甲基硅烷(580μL，4.6mmol)逐滴处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(16g，58mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(26mL)中的溶液逐滴处理(用水浴保持内部温度低于40℃)且在40℃下加热2小时。锌-碘试剂(经由导管转移)经过塑料过滤器(适当密封以避免氛围暴露)直接过滤至经过氮气吹拂的清洁干燥烧瓶中。反应混合物用三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(670mg，0.73mmol)和三-(2-呋喃基)膦(340mg，1.5mmol)处理且用氮气脱气数分钟。反应混合物用4-乙酰基-6-氯-2-碘-3-甲氧基苯甲腈(13g，39mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(120mL)中的溶液(用氮气脱气)快速处理且在70℃下加热2小时。反应混合物倾入饱和氯化铵溶液中且用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×500mL)和盐水(1×500mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗制深色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(5％-40％)纯化得到所要产物(12g，85％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(s,1H),4.39-4.29(m,1H),4.28-4.11(m,4H),3.68(s,3H),2.58(s,3H),1.38(s,9H)。
步骤3.3-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯(4.3g，16mmol)于四氢呋喃(46mL)中的溶液用1.0M硼烷-THF络合物的四氢呋喃溶液(19mL，19mmol)处理且在20℃下搅拌15分钟。冷却反应混合物至-30℃且用3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(5.7g，16mmol)于四氢呋喃(49mL)中的溶液缓慢处理。含有起始物质酮的烧瓶再用四氢呋喃(9mL)冲洗且添加至反应混合物中。在添加完成之后，反应温度为-20℃。历经30分钟的时期使反应混合物升温至-5℃。反应混合物在0℃下用水淬灭，倾入饱和碳酸氢钠溶液中，且用乙酸乙酯萃取。分离水层且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗制深色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-100％)纯化得到呈对映异构体的97:3混合物形式的呈米色泡沫状的所要产物(5.5g，97％)(滞留时间＝12.19分钟和13.18分钟；PhenomenexLux纤维素C-2管柱，4.6×150mm，5微米粒度，用含8％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),5.48(d,J＝4.6Hz,1H),5.00-4.90(m,1H),4.43-4.31(m,1H),4.30-4.10(m,4H),3.66(s,3H),1.38(s,9H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H)。C14H16ClN2O4的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝311.1；实验值：311.1。
步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下3-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(8.6g，23mmol)(来自步骤3的对映异构体的97:3混合物)于二氯甲烷(220mL)中的溶液依次用三乙胺(8.2mL，59mmol)和甲烷磺酸酐(6.1g，35mmol)处理且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释且用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗甲磺酸酯，其未进行进一步纯化即使用。冷却粗甲磺酸酯中间体于N,N-二甲基甲酰胺(82mL)中的溶液至0℃，用氢化钠(1.2g，30mmol)(60％于矿物油中)处理，且在0℃下搅拌30分钟。历经10分钟的时期，反应混合物用3-(3-氯-2-氰基-6-甲氧基-5-{1-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(11g，24mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(170mL)中的溶液逐滴处理且在0℃下搅拌30分钟并在50℃下加热1小时。反应混合物用水和饱和碳酸氢钠溶液稀释且用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×150mL)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速管柱色谱(2％甲醇/98％二氯甲烷至7％甲醇/93％二氯甲烷[二氯甲烷含有0.5％三乙胺])纯化得到呈对映异构体的9:1混合物形式的所要产物(9.1g，对于2个步骤来说77％)。此物质通过手性HPLC(滞留时间＝5.81分钟和8.94分钟；ChiracelAD-H管柱，20×250mm，5微米粒度，用含10％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射10mg)分离得到6.9g所要峰1物质。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.52(s,1H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.45-4.33(m,1H),4.27-4.13(m,4H),3.70(s,3H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.37(s,9H)。C20H21ClN7O3的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。
步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.7g，3.3mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液用三氟乙酸(20mL)处理且在室温下搅拌20分钟。浓缩反应混合物得到残余物，其用甲醇(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)稀释。此水溶液用盐水(50mL)稀释且用二氯甲烷/异丙醇的5:1混合物(5×100mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸钠干燥且浓缩得到所要产物(1.4g，97％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.34(brs,2H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.40-4.26(m,1H),3.90-3.68(m,4H),3.63(s,3H),2.55(s,3H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H)。C19H21ClN7O的LCMS：(M+H)+:m/z＝398.1；实验值：398.1。
实施例262.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(50mg，0.13mmol)于甲醇(3mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(20mg，0.31mmol)和甲醛(37％于水中)(37μL，0.50mmol)处理且在室温下搅拌20分钟。反应混合物用乙酸(170μL，2.9mmol)淬灭，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(30mg，58％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.37(brs,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.10-3.96(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.63(s,3H),3.05-2.94(m,2H),2.55(s,3H),2.18(s,3H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H)。C20H23ClN7O的LCMS：(M+H)+:m/z＝412.2；实验值：412.1。
实施例268.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(400mg，1.0mmol)于四氢呋喃(14mL)中的溶液用三乙胺(350μL，2.5mmol)和2-溴乙醇(85μL，1.2mmol)处理且在60℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(0.14g，31％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.41(t,J＝5.4Hz,1H),4.12-4.03(m,1H),3.97-3.88(m,2H),3.64(s,3H),3.38-3.34(m,2H),3.09-3.01(m,2H),2.55(s,3H),2.41(t,J＝5.9Hz,2H),1.72(d,J＝7.0Hz,3H)。C21H25ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝442.2；实验值：442.2。
实施例268和269的化合物是自实施例261中的相同手性中间体合成。根据实施例269中的晶体结构测定，在乙-1,1-二基的1位上的碳处的立体化学为S。因为实施例268的化合物是自与实施例269相同的手性中间体合成，所以本领域的普通技术人员将预期在实施例268的乙-1,1-二基的1位上的碳也呈S构型。因此，相信实施例268的化合物为(S)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈。
实施例269.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(2.5g，6.3mmol)于乙醇(130mL)中的溶液用(S)-(-)-甲基环氧乙烷(1.1mL，16mmol)处理且在微波中在120℃下加热25分钟。浓缩反应混合物得到残余物，其通过快速管柱色谱使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％；甲醇含有0.5％三乙胺)和通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)进行纯化得到所要产物(0.76g，26％)。产物分离为单一非对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.34(brs,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.35(brs,1H),4.14-3.99(m,1H),3.98-3.87(m,2H),3.64(s,3H),3.60-3.52(m,1H),3.13-2.99(m,2H),2.55(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.75-1.69(m,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。
实施例269的化合物的晶体结构测定
C22,H26,N7,O2,CL1+H2O
晶体数据：C22H28ClF0N7O3，自ACN/水，无色，针状，约0.500×0.070×0.050mm，单斜晶，C2， β＝101.967(4)°，Z＝4，T＝-100.℃，式量＝473.96，密度＝1.401g/cm3，μ(Mo)＝0.21mm-1
数据收集：BrukerSMARTAPEX-IICCD系统，MoKalpha辐射，标准聚焦管，阳极功率＝50kV×42mA，晶体至板的距离＝5.0cm，512×512像素/帧，射束中心＝(256.13,253.14)，总帧数＝704，振动/帧＝0.50°，暴露/帧＝120.1秒/帧，SAINT积分，hkl最小/最大＝(-27,34，-6,6，-23,11)，输入shelx的数据＝7578，独特数据＝5186，2θ范围＝3.20至56.74°，2θ56.74的完成率＝99.70％，R(int-xl)＝0.0331，应用SADABS校正。
解析和细化：结构使用XS(Shelxtl)解析，使用shelxtl软件包细化，通过F2全矩阵最小平方细化，散射因子来自Int.Tab.VolC表4.2.6.8和6.1.1.4，数据数＝5186，约束数＝2，参数数＝313，数据/参数比＝16.57，F2拟合良度＝1.02，R指数[I>4σ(I)]R1＝0.0524，wR2＝0.1033，R指数(所有数据)R1＝0.0826，wR2＝0.1162，最大差异峰和谷＝0.294和细化flack参数＝0.05(8)，除NH2和水氢之外的所有氢原子皆已使用骑式模型(ridingmodel)加以理想化。
结果：不对称单元含有如图1中所示的一个分子和一个水分子，其中热椭球体接近50％机率度。预期结构得到确认。基于在C21处的已知S构型确定绝对构型。在C7处的构型确定为S。flack参数也确认构型正确。基于晶体结构，相信实施例269的化合物为4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈。晶体结构展示于图1中。
实施例272和273.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟基-1-甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈的非对映异构体
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(40mg，0.10mmol)于甲醇(2mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(16mg，0.25mmol)和丙酮醇(28μL，0.40mmol)处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用乙酸(100μL，1.8mmol)淬灭，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物。此非对映异构体混合物通过手性HPLC(RT＝3.70分钟和6.58分钟；PhenomenexLux纤维素C-4管柱，21.2×250mm，5微米粒度，用含20％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射5mg)分离得到所要峰1异构体(化合物272)(19mg，41％)和峰2异构体(化合物273)(23mg，50％)。峰1：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.34(brs,2H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.43(t,J＝5.2Hz,1H),4.07-3.82(m,3H),3.64(s,3H),3.31-3.24(m,1H),3.17-3.06(m,2H),3.06-2.97(m,1H),2.55(s,3H),2.21-2.11(m,1H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H),0.81(d,J＝6.3Hz,3H)。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。峰2：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.35(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.43(t,J＝5.5Hz,1H),4.06-3.91(m,2H),3.89-3.79(m,1H),3.64(s,3H),3.30-3.24(m,1H),3.15-3.00(m,3H),2.55(s,3H),2.21-2.10(m,1H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H),0.82(d,J＝6.2Hz,3H)。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。
实施例281.2-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基苯甲腈
在0℃下4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(60mg，0.15mmol)于四氢呋喃(2mL)中的溶液依次用三乙胺(53μL，0.38mmol)和乙酰氯(13μL，0.18mmol)处理且在20℃下搅拌过夜。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(39mg，59％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.52(d,J＝2.5Hz,1H),7.36(brs,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.57-4.36(m,3H),4.30-4.21(m,1H),4.18-4.08(m,1H),3.71(d,J＝3.1Hz,3H),2.55(s,3H),1.78-1.71(m,6H)。C21H23ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝440.2；实验值：440.1。
实施例285.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(40mg，0.10mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液用三乙胺(35μL，0.25mmol)处理，冷却至0℃，用甲烷磺酰氯(9.3μL，0.12mmol)处理且在0℃下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(20mg，42％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.55(s,1H),7.35(brs,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.54-4.40(m,1H),4.27-4.12(m,4H),3.68(s,3H),3.01(s,3H),2.55(s,3H),1.74(d,J＝7.1Hz,3H)。C20H23ClN7O3S的LCMS：(M+H)+:m/z＝476.1；实验值：476.1。
实施例289.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(20mg，0.05mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液依次用三乙胺(20μL，0.14mmol)和氯甲酸甲酯(4.7μL，0.06mmol)处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(12mg，52％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.51(s,1H),7.34(brs,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.53-4.38(m,1H),4.36-4.17(m,4H),3.71(s,3H),3.55(s,3H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H)。C21H23ClN7O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.1。
实施例292.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N-(叔丁基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(20mg，0.05mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液依次用三乙胺(20μL，0.14mmol)和2-异氰酸基-2-甲基-丙烷(7.2μL，0.063mmol)处理且在室温下搅拌过夜。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(16mg，64％)。产物分离为单一对映异构体。C24H30ClN8O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝497.2；实验值：497.2。
实施例293.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酰胺
在微波中在120℃下加热3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N-(叔丁基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(来自实施例292的手性中间体)(16mg，0.032mmol)于三氟乙酸(2mL)中的溶液10分钟。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(7mg，50％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.62(s,1H),7.35(brs,2H),6.28(q,J＝6.9Hz,1H),5.70(brs,1H),4.62-4.49(m,1H),4.34-4.20(m,1H),3.83(s,3H),3.78-3.49(m,2H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H)。C20H22ClN8O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝441.2；实验值：441.1。
实施例296.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(40mg，0.10mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液依次用三乙胺(40μL，0.29mmol)和氯甲酸对硝基苯酯(23μL，0.13mmol)处理且在室温下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物，其即刻使用。氨基甲酸对硝基苯酯中间体于四氢呋喃(1mL)中的溶液依次用三乙胺(15μL，0.11mmol)和1.0M二甲胺的四氢呋喃(150μL，0.15mmol)溶液处理且在密封管中在60℃下加热2小时。浓缩反应混合物，用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物(13mg，28％)。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.49(s,1H),7.36(brs,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.44-4.23(m,3H),4.22-4.10(m,2H),3.69(s,3H),2.76(s,6H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H)。C22H26ClN8O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝469.2；实验值：469.1。
实施例298.1-{1-[4,5-二氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
步骤1.1-(4,5-二氯-2-羟基苯基)乙酮
在60℃下搅拌3,4-二氯苯酚[AKScientific](30g，18mmol)于乙酰氯(19mL，270mmol)中的溶液2小时。冷却反应混合物至20℃，用三氯化铝(37g，280mmol)逐份处理，且在180℃下加热30分钟。冷却反应混合物至20℃且溶液硬化成不容易分裂开的固体块。冷却此物质至0℃且用1MHCl分数份缓慢淬灭。用足够HCl使物质固体块缓慢分裂开且此异质混合物在20℃下搅拌过夜以确保均一性。过滤固体，用大量水洗涤，且在真空下干燥得到呈褐色固体状的所要产物(38g，定量)。
步骤2.1-(4,5-二氯-2-羟基-3-碘苯基)乙酮
1-(4,5-二氯-2-羟基苯基)乙酮(12g，59mmol)于乙酸(70mL)中的溶液用N-碘丁二酰亚胺(16g，71mmol)处理且在90℃下搅拌18小时。反应混合物再用N-碘丁二酰亚胺(8g，36mmol)处理且在90℃下搅拌4小时。浓缩反应混合物，用乙酸乙酯稀释，且用饱和碳酸氢钠淬灭直至停止鼓泡为止。分离有机层且水层用乙酸乙酯再萃取。干燥合并的有机层且浓缩得到棕色固体。此物质自甲醇中再结晶得到呈褐色固体状的所要产物(9.0g，46％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ13.36(s,1H),7.85(s,1H),2.65(s,3H)。C8H6Cl2IO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝330.9,332.9；实验值：330.8,332.9。
步骤3.1-(4,5-二氯-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮
1-(4,5-二氯-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(16g，47mmol)和碳酸钾(17g，120mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液用碘代甲烷(6.4mL，100mmol)处理且在60℃下搅拌1小时。反应混合物用水稀释且用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗固体。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(5％-30％)纯化得到呈橙色固体状的所要产物(14g，84％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.69(s,1H),3.79(s,3H),2.60(s,3H)。C9H8Cl2IO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝344.9,346.9；实验值：344.8,346.9。
步骤4.3-(3-乙酰基-5,6-二氯-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将锌(4.5g，69mmol)与1,2-二溴乙烷(420μL，4.9mmol)一起悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(54mL)中。在70℃下加热混合物10分钟且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(620μL，4.9mmol)且持续搅拌1小时。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(17g，61mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液且在40℃下加热混合物1小时，随后快速添加1-(4,5-二氯-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(14g，41mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(710mg，0.77mmol)和三-(2-呋喃基)膦(360mg，1.6mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的混合物。反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物接着于乙酸乙酯与饱和氯化铵溶液之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到粗残余物，其通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-25％)纯化得到所要产物(12g，77％)。C17H21Cl2NO4Na的LCMS：(M+Na)+:m/z＝396.1；实验值：396.0。
步骤5.3-[2,3-二氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下历经5分钟用四氢硼酸钠(1.9g，51mmol)逐份处理3-(3-乙酰基-5,6-二氯-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(9.6g，26mmol)于甲醇(240mL)中的溶液且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用乙酸(7.3mL，130mmol)淬灭且用饱和碳酸氢钠溶液(约50mL)处理。浓缩反应混合物以移除大部分甲醇(至约60mL)，倾入饱和碳酸氢钠溶液(150ml)中，且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到所要产物(9.6g，定量)，其未进行进一步纯化即使用。C13H16Cl2NO4的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝320.0；实验值：320.0。
步骤6.3-[2,3-二氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下添加N,N-二甲基甲酰胺(0.92mL，12mmol)至固体三聚氯化氰(2.2g，12mmol)中(DMF由固体吸收)。使混合物静置10分钟，用二氯甲烷(60mL)处理，且搅拌数分钟以瓦解固体。反应混合物用3-[2,3-二氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.0g,8.0mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液处理且在35-40℃下搅拌2小时。反应混合物再用N,N-二甲基甲酰胺(1mL)处理且在35-40℃下搅拌4小时。反应需要在35-40℃下在搅拌下再用N,N-二甲基甲酰胺(1mL)处理过夜以进行至完成。反应混合物用水和二氯甲烷稀释。分离有机相且用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩成粗残余物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(5％-40％)纯化得到所要产物(2.8g，90％)。C13H15Cl3NO3的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)+:m/z＝338.0,340.0；实验值：337.9,339.9。
步骤7.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5,6-二氯-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
3-[2,3-二氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.5mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.43g，2.9mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(23mL)中的溶液用碳酸铯(1.2g，3.8mmol)和碘化钾(42mg，0.25mmol)处理且在100℃下加热10小时。反应混合物用乙酸乙酯(75mL)和水(75mL)稀释。分离水层且用乙酸乙酯(2×50mL)再萃取。合并的有机层用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩成粗残余物。粗物质通过快速管柱色谱使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％)纯化得到所要产物(0.97g，75％)。C23H29Cl2N6O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝507.2,509.2；实验值：507.0,509.0。
步骤8.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-4,5-二氯-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5,6-二氯-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.97g，1.9mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液用三氟乙酸(10mL)处理且在20℃下搅拌30分钟。浓缩反应混合物且残余物用甲醇(约20mL)稀释且用饱和碳酸氢钠溶液处理(至pH值为约8)。浓缩反应混合物以移除甲醇。油状物悬浮于水层中，萃取至二氯甲烷/异丙醇的5:1混合物中，用硫酸镁干燥，过滤，且浓缩得到所要产物(0.77g，99％)，其未进行进一步纯化即用于下一步骤中。C18H21Cl2N6O的LCMS：(M+H)+:m/z＝407.1,409.1；实验值：407.0,409.0。
步骤9.1-{1-[4,5-二氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-4,5-二氯-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.098mmol)于甲醇(2.6mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(15mg，0.25mmol)和乙醛(22μL，0.39mmol)处理且在20℃下搅拌20分钟。反应混合物用乙酸(130μL，2.3mmol)淬灭，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所要产物。此外消旋混合物通过手性HPLC(RT＝18.6分钟和22.0分钟；PhenomenexLux纤维素C-4管柱，21.2×250mm，5微米粒度，用含5％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射2.5mg)分离得到所要峰1异构体(11mg，26％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.45(s,1H),7.33(brs,2H),6.21(q,J＝6.9Hz,1H),3.98-3.77(m,3H),3.57(s,3H),2.92-2.83(m,1H),2.79-2.72(m,1H),2.55(s,3H),2.35-2.22(m,2H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),0.86(t,J＝7.1Hz,3H)。C20H25Cl2N6O的LCMS：(M+H)+:m/z＝435.1；实验值：435.0。
实施例307.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈
步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
所要化合物是根据实施例212，步骤5(手性中间体)的程序，使用5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺[ACESPharma]替代3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备，产率18％。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),6.93(brs,1H),6.79(s,1H),6.17(q,J＝7.1Hz,1H),5.24(s,2H),4.40-4.27(m,4H),4.27-4.18(m,1H),4.03-3.92(m,1H),3.80-3.70(m,1H),2.43(s,3H),1.74(d,J＝7.1Hz,3H),1.43(s,9H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H)。C26H32ClN6O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝511.2；实验值：511.2。
步骤2.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈
所要化合物是根据实施例212，步骤6的程序，使用3-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯替代3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备，产率99％。C21H24ClN6O的LCMS：(M+H)+:m/z＝411.2；实验值：411.1。
步骤3.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈
所要化合物是根据实施例213的程序，使用4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈替代4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈、和丙酮替代甲醛作为起始物质来制备，产率65％。产物分离为单一对映异构体。1HNMR(300MHz,dmso)δ7.95(s,1H),7.19(s,1H),7.16-7.13(m,1H),6.58(s,2H),6.11(q,J＝7.1Hz,1H),4.04-3.67(m,5H),3.04-2.92(m,2H),2.36(s,3H),2.27-2.12(m,1H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.30(t,J＝6.9Hz,3H),0.85(dd,J＝6.1,1.8Hz,6H)。C24H30ClN6O的LCMS：(M+H)+:m/z＝453.2；实验值：453.3。
实施例315.4-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈
步骤1：4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈
将1-(4-溴-2-羟基-5-甲基苯基)乙酮(8.5g，37mmol，AlfaAesar目录号H29125)与氰化锌(8.7g，74mmol)组合于经过氮气脱气的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)中且添加三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(1.0g，1.1mmol)和(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(1.5g，2.6mmol)。将反应用氮气再次脱气且加热至120℃并通过LC/MS监测。在加热18小时之后，反应完成，使反应冷却至室温，溶解于乙酸乙酯中且用水(2X)、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈深琥珀色油状的粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体状的4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.3g，98％)。C10H10NO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝176.1；实验值：176.2。
步骤2：4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈
将4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.7g，38mmol)溶解于乙酸(80mL)中且添加N-碘丁二酰亚胺(10.g，46mmol)。在油浴中加热反应至80℃且通过LC/MS监测。在加热4小时之后，反应完成。使其冷却且在真空中浓缩得到深色油状物。油状物溶解于乙酸乙酯中且用水、碳酸氢钠(3×，直至残余物略显碱性为止)、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈浅黄色固体状的4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(7.2g，62％)。C10H9INO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝301.9；实验值：301.9。
步骤3：4-乙酰基-2-碘-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈
将4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，17mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中且添加碳酸钾(4.6g，33mmol)和碘代甲烷(2.1mL，33mmol)。加热反应至60℃且通过LC/MS监测。在加热2小时之后，反应完成。使其冷却，用乙酸乙酯(300mL)稀释且过滤以移除残余固体。有机层用水(3X)、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈深色固体状的粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱来纯化得到呈浅黄色结晶固体状的4-乙酰基-3-甲氧基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，96％)。C11H11INO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝315.9；实验值：316.0。
步骤4：3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将锌(1.70g，26.0mmol)与硅藻土(烘干，500mg)一起在烧瓶中研磨直至固体呈现为均质，在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟且接着用氮气回填。将固体悬浮于N,N-二甲基乙酰胺(4.2mL)中且添加1,2-二溴乙烷(0.13mL，1.5mmol)。在70℃下加热反应混合物30分钟且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(0.16mL，1.3mmol)且在室温下持续搅拌2小时。接着缓慢添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.70g，9.52mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(4.35mL)中的溶液且在50℃下加热所得混合物2小时。使锌-碘试剂冷却至室温且在注射器中溶解并经过PTFE过滤器(配有针)直接过滤至三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.111g，0.121mmol)和三-(2-呋喃基)膦(0.056g，0.24mmol)和4-乙酰基-2-碘-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈(2.0g，6.3mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(19.6mL)中的通过鼓泡以N2而预脱气的悬浮液中。反应混合物用氮气再次脱气且加热至70℃。在加热30分钟之后，根据LC/MS指示反应完成。使其冷却，溶解于乙酸乙酯中且用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩得到呈油状的粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷；乙酸乙酯梯度洗脱来纯化得到呈澄清油状的3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。(1.8g，82％)。C15H17N2O4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝289.1；实验值：289.1。
步骤5：3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.2g，6.4mmol)溶解于甲醇(20mL)中且在冰浴中冷却。逐份添加四氢硼酸钠(0.26g，7.0mmol)且通过LC/MS监测反应。在搅拌1小时之后，反应完成。其用乙酸乙酯和水稀释。合并的有机层用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈黄色泡沫状的粗3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.1g，99％)。C15H19N2O4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝291.1；实验值：291.1。
步骤6：3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.1g，6.4mmol)溶解于二氯甲烷(50.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.59mL)中，在冰浴中冷却且缓慢添加亚硫酰氯(0.56mL，7.7mmol)。在搅拌2小时之后，根据LC/MS指示反应完成，且于乙酸乙酯与水之间分配。合并的有机层用水饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈油状的粗3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.2g，100％)。C15H18ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝309.1；实验值：309.1。
步骤7：3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.3g，6.3mmol)与碳酸铯(4.1g，13mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.4g，9.4mmol)一起溶解于N,N-二甲基甲酰胺(68mL)中且在油浴中加热至80℃。搅拌反应18小时且使其冷却至室温。反应混合物溶解于乙酸乙酯中，过滤，用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶FCC用(己烷:含10％乙醇的乙酸乙酯)梯度洗脱纯化得到呈半固体状的3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.5g，50％)。C25H32N7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝478.2；实验值：478.2。对映异构体通过手性管柱HPLC分离，使用：PhenomenexLUX纤维素管柱，21.1×250mm，5微米，含15％乙醇的己烷，18mL/min，每次注射约5mg，得到：第一峰滞留时间：2.1分钟，3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯；第二峰滞留时间：3.9分钟，3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。
步骤8：4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)
在室温下将3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g，0.73mmol)(步骤7，峰1)溶解于二氯甲烷(3.0mL)和三氟乙酸(1.0mL)中。在搅拌1小时之后，根据LC/MS指示反应完成。在真空中浓缩反应得到呈粘稠琥珀色油状的4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)(0.50g，100％)。C20H24N7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝378.2；实验值：378.2。
步骤9：4-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈
将4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)(0.074g，0.10mmol)溶解于乙醇(3.0mL)和DIPEA(0.071mL，0.41mmol)中且添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(0.0071g，0.12mmol)。反应于密封管中加热至90℃且通过LC/MS监测。在加热6小时之后，反应不进行处理即通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.018g，40％)。产物分离为单一对映异构体。C23H30N7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝436.2；实验值：436.3。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.21(s,1H),6.22(q,J＝7.1Hz,1H),4.34(d,J＝4.5Hz,1H),4.09-3.83(m,3H),3.60(s,3H),3.58-3.51(m,1H),3.12-2.95(m,2H),2.55(s,3H),2.33(s,3H),2.27(d,J＝5.9Hz,2H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。
实施例316.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]苯甲腈
步骤1.5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺
添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(500mg，5mmol)至六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓(1400mg，3.7mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1000μL，7mmol)和5-溴吡啶-2-甲酸(500mg，2mmol，FrontierScientific目录号B1704)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌过夜且根据LC/MS指示反应完成。反应于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷:EtOAc(0-30％)梯度洗脱纯化得到5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺澄清油状物(0.50g，60％)。C8H10BrN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝244.9,246.9；实验值：244.9,246.9。
步骤2.1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮
在0℃下逐滴添加含3.0M氯化甲基镁的THF(0.5mL)至5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(200mg，0.8mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物中。在室温下搅拌1小时之后，反应用1NNH4Cl淬灭且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤且用MgSO4干燥，浓缩得到粗产物1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮(0.15g，90％)。C7H7BrNO的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝199.9,201.9；实验值：199.9,201.9。
步骤3.2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇
在0℃下逐滴添加含3.0M氯化甲基镁的THF(0.3mL)至1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮(100mg，0.5mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物中。在室温下搅拌1小时之后，反应用1NNH4Cl淬灭且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤且用MgSO4干燥，浓缩得到粗2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(0.1g，100％)。C8H11BrNO的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝215.9,217.9；实验值：215.8,217.8。
步骤4.[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸
2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(70mg，0.3mmol)、4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二氧硼戊环](90.mg，0.36mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(10mg，0.01mmol)和乙酸钾(100mg，1mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在120℃下加热过夜。根据LC/MS指示反应完成，在真空中浓缩得到粗[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸。C8H13BNO3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝182.1；实验值：182.1。
步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]苯甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)
添加含碳酸钠(10mg，0.09mmol)的水(0.5mL)至4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(20mg，0.04mmol，来自实施例43，步骤5的外消旋中间体)和[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸(12mg，0.069mmol，实施例306，步骤4)于乙腈(1mL)中的混合物中。将反应混合物用N2脱气且添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2mg，0.002mmol)。反应用N2再次脱气且加热至100℃维持1小时。使反应冷却至室温且不进行处理即通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水；乙腈梯度(经过TFA缓冲)洗脱来纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物。产物以外消旋混合物形式分离。C25H27ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝492.1；实验值：492.1。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.60(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(s,1H),7.96(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.73(s,1H),6.36(q,J＝7.0Hz,1H),3.52-3.40(m,1H),3.40-3.30(m,1H),2.59(s,3H),1.80(d,J＝7.0Hz,3H),1.48(d,J＝2.3Hz,6H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例318.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈
步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈
4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈是通过实施例43，步骤1和步骤2中所述的类似方法，但使用N-碘丁二酰亚胺来制备。C11H10ClINO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝349.9；实验值：350.0。
步骤2.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈
将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(0.20g，0.57mmol)与吡咯烷(0.052mL，0.63mmol)组合于含碳酸铯(0.19g，0.57mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中且在密封管中加热至120℃。在加热18小时之后，使反应冷却，溶解于乙酸乙酯中，用水、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱来纯化得到呈油状的4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，27％)。C15H18ClN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝293.1；实验值：293.1。
步骤3.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈
将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，0.15mmol)溶解于甲醇(3mL)中且在冰浴中冷却。添加四氢硼酸钠(0.0058g，0.15mmol)且通过LC/MS监测反应。在搅拌1小时之后，反应溶解于乙酸乙酯中且用水、碳酸氢钠、盐水洗涤并用硫酸镁干燥得到呈澄清油状的粗6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，100％)。C15H20ClN2O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝295.1；实验值：295.1。
步骤4.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈
将6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，0.15mmol)溶解于二氯甲烷(3.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.002mL，0.03mmol)中且在冰浴中冷却。添加亚硫酰氯(0.017mL，0.23mmol)且通过LC/MS监测反应。在搅拌2小时之后，反应完成。反应接着溶解于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠、盐水洗涤，用硫酸镁干燥且浓缩得到呈黄色油状的粗6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.048g，100％)。C15H19Cl2N2O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝313.1；实验值：313.1。
步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈
将6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.048g，0.15mmol，外消旋混合物)与3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.034g，0.23mmol)和碳酸铯(0.10g，0.31mmol)组合于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中且在油浴中加热至85℃。在加热18小时之后，反应完成。粗反应不进行处理即通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.012g，18％)。产物以外消旋混合物形式分离。C21H25ClN7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝426.1；实验值：426.1。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),6.91(s,1H),6.25(q,J＝7.1Hz,1H),3.71(dp,J＝15.7,8.1,7.2Hz,4H),3.49-3.35(m,2H),2.55(s,3H),2.00-1.76(m,4H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例319.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈
步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈
向4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(50mg，0.1mmol，实施例318，步骤1)、3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(21mg，0.17mmol，Chem-Impex目录号20140)和碳酸铯(70.mg，0.21mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中添加(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(40mg，0.07mmol)和三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(60mg，0.07mmol)。反应混合物用N2脱气。在80℃下加热反应2小时且通过LC/MS监测。使反应冷却至室温，用水稀释且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶FCC用(己烷:EtOAc0-70％)梯度洗脱纯化得到呈澄清油状的4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，70％)。C15H18ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝309.1；实验值：309.1。
步骤2.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈
将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.1mmol)溶解于冷却至0℃的甲醇(5mL)中且添加四氢硼酸钠(5.5mg，0.14mmol)。在0℃下搅拌反应1小时。反应于EtOAc与水之间分配。合并的有机层用水和饱和NaHCO3、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩得到粗6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，100％)。C15H20ClN2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝311.1；实验值：311.1。
步骤3.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈
将6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.1mmol)(外消旋混合物)溶解于二氯甲烷(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(100μL，1mmol)中。在室温下逐滴添加亚硫酰氯(18μL，0.24mmol)且搅拌反应2小时。反应用EtOAc稀释，用水和饱和NaHCO3、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩得到粗6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，100％)。C15H19Cl2N2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝329.1；实验值：329.1。
步骤4.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈
添加碳酸铯(50mg，0.2mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16mg，0.10mmol)和6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.09mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中的混合物中且反应在80℃下搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩成粗产物。产物通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.007g，20％)。产物以外消旋混合物形式分离。C21H25ClN7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),6.80(s,1H),6.18(d,J＝7.1Hz,1H),4.58-4.44(m,2H),4.18(m,1H),4.13-4.01(m,2H),3.81-3.62(m,2H),3.23(s,3H),2.55(s,3H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.35(t,J＝7.0Hz,3H)。
实施例320.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-6-甲基苯甲腈
步骤1：4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)
使用实施例315中所述的方法，但在步骤3中使用碘代乙烷替代碘代甲烷，制备中间体4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)。C21H26N7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝392.2；实验值：392.2。
步骤2.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-6-甲基苯甲腈
向4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(70mg，0.2mmol)于甲醇(50mL)中的混合物中添加丙酮(0.1mL，2mmol)和氰基硼氢化钠(17mg，0.27mmol)。在室温下搅拌反应1小时，且根据LC/MS指示反应完成。反应用水淬灭且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤且浓缩得到粗产物。产物通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.030g，40％)。产物以外消旋混合物形式分离。C24H32N7O的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝434.2；实验值：434.3。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ8.17(s,1H),7.35(s,1H),6.37(q,J＝7.1Hz,1H),4.17-3.98(m,4H),3.90-3.71(m,3H),2.65(s,3H),2.46(s,4H),1.84(d,J＝7.1Hz,3H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H),1.03(dd,J＝6.2,1.4Hz,6H)。
实施例321.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈
在室温下使4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(0.055g，0.14mmol，来自实施例320，步骤1的手性中间体)与四氢呋喃(22mL)、DIPEA(0.049mL，0.28mmol)和2,2-二甲基-环氧乙烷(0.018mL，0.21mmol)组合。加热反应至95℃且搅拌过夜。使反应冷却至室温且不进行处理即通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱来纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.035g，50％)。产物分离为单一对映异构体。C25H34N7O2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝464.3；实验值：464.3。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.23(s,1H),6.21(q,J＝6.8Hz,1H),4.00(m,4H),3.81-3.54(m,2H),3.15(m,2H),2.53(s,3H),2.33(s,3H),2.27(bs,2H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.30(t,J＝6.9Hz,3H),1.04(s,6H)。
实施例322.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈
将4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(0.075g，0.10mmol，来自实施例320，步骤1的手性中间体)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)和DIPEA(0.089mL，0.51mmol)中且添加2-羟基-2-甲基-丙酸(0.013g，0.12mmol)和六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓(0.058g，0.15mmol)。在室温下搅拌反应18小时且根据LC/MS指示反应完成。产物不进行处理即通过在C-18管柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(缓冲至pH10)洗脱来纯化得到呈白色无定形固体状的标题化合物(0.025g，51％)。产物分离为单一对映异构体。C25H32N7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝478.2；实验值：478.2。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.29(s,1H),6.24(q,J＝6.8Hz,1H),5.07(s,1H),4.90-4.75(m,1H),4.73-4.58(m,1H),4.39(p,J＝8.5Hz,1H),4.30-4.05(m,2H),3.75(d,J＝7.1Hz,2H),2.54(s,3H),2.38(s,3H),1.72(d,J＝6.9Hz,3H),1.35(t,J＝6.1Hz,3H),1.26(s,3H),1.23(s,3H)。
实施例310和311.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体
步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇
所要化合物是根据实施例212，步骤4的程序(外消旋混合物)，使用1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮替代3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质制备成对映异构体的96:4混合物，产率94％(RT＝3.56分钟和4.28分钟；ChiralTechnologiesChiralPakAD-H管柱，20×250mm，5微米粒度，用含5％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。C11H13ClIO的LCMS：(M-(OH))+:m/z＝323.0；实验值：322.9。
步骤2.1-[1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺
所要化合物是根据实施例212，步骤5的程序，使用1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇(来自步骤1的96:4混合物)替代3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质制备成单一对映异构体，产率32％(所要峰1，滞留时间＝3.39分钟；ChiralPakIA管柱，20×250mm，5微米粒度，用含3％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱)。C17H20ClIN5O的LCMS：(M+H)+:m/z＝472.0；实验值：472.0。
步骤3.(2E)-3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}丙烯酸甲酯
将密封管中的1-[1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自步骤2的峰1单一异构体)(0.61g，1.3mmol)于乙腈(7.4mL)中的悬浮液用氮气脱气且用三苯膦(0.048g，0.18mmol)、丙烯酸甲酯(0.41mL，4.5mmol)和乙酸钯(0.029g，0.13mmol)处理，随后用三乙胺(0.54mL，3.9mmol)处理且在100℃下加热16小时。冷却反应混合物至室温，过滤，且固体用乙腈洗涤。滤液浓缩成残余物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯(含有3％甲醇)的己烷(0％-100％)纯化得到所要产物(0.40g，72％)。C21H25ClN5O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝430.2；实验值：430.2。
步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-4-硝基丁酸甲酯的非对映异构体
(2E)-3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}丙烯酸甲酯(0.40,g，0.93mmol)于硝基甲烷(6.3mL)中的溶液用1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(0.14mL，0.93mmol)处理且在90℃下搅拌22小时。浓缩反应混合物，用甲醇稀释，且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用含乙腈的具有0.1％三氟乙酸的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化。浓缩LCMS洗脱份以移除乙腈，用固体碳酸氢钠处理，且萃取至乙酸乙酯中。浓缩乙酸乙酯得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物(0.22g，48％)。C22H28ClN6O5的LCMS：(M+H)+:m/z＝491.2；实验值：491.2。
步骤5.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-4-硝基丁酸甲酯(0.089g，0.18mmol)于甲醇(1.3mL)中的溶液用六水合氯化镍(0.087g，0.36mmol)处理且搅拌5分钟。冷却反应混合物至0℃，用四氢硼酸钠(0.073g，1.9mmol)分四份处理，且在室温下搅拌30分钟。在60℃下加热反应混合物1.5小时，冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和二氯甲烷(25mL)稀释，且通过硅藻土过滤。硅藻土用二氯甲烷洗涤且滤液转移至分液漏斗中。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩成残余物。粗残余物用甲醇稀释且通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要峰1非对映异构体(16mg，21％)和峰2非对映异构体(19mg，24％)。峰1(化合物310)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.89(s,1H),7.34(s,1H),6.21(q,J＝7.1Hz,1H),4.38-4.22(m,1H),3.93-3.80(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.65-3.55(m,1H),3.28-3.20(m,1H),2.54(s,3H),2.29(dd,J＝17.5,8.3Hz,1H),2.21(s,3H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.40(t,J＝6.9Hz,3H)。C21H26ClN6O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝429.2；实验值：429.2。峰2(化合物311)：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.89(s,1H),7.33(s,1H),6.20(q,J＝7.1Hz,1H),4.38-4.22(m,1H),3.90-3.68(m,2H),3.65-3.56(m,1H),3.28-3.17(m,1H),2.54(s,3H),2.32(dd,J＝17.3,8.5Hz,1H),2.21(s,3H),1.69(d,J＝7.0Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C21H26ClN6O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝429.2；实验值：429.2。
实施例323.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈
步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-乙烯基苯甲腈
4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(1.3g，3.6mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(740μL，4.3mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(100mg，0.20mmol)和碳酸钾(1.5g，11mmol)于1,4-二噁烷(20mL)和水(10mL)中的混合物在80℃下加热过夜。冷却混合物至室温且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩。使用含乙酸乙酯的己烷(0-20％)在硅胶上纯化得到所要化合物，780mg，87％。C13H13ClNO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝250.1；实验值：250.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.78(s,1H),6.83(m,1H),6.10(m,1H),5.83(m,1H),3.84(m,2H),2.58(s,3H),1.22(m,3H)。
步骤2.[2-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯
添加含0.2M四氧化锇的水(0.5mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(参考LawrenceHarris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)(0.91g，3.3mmol)于乙腈(10mL)中的溶液中且搅拌10分钟。添加4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-乙烯基苯甲腈(0.56g，2.2mmol)于乙腈(10mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(2mL)且反应在室温下搅拌3小时。反应用含饱和10M二亚硫酸二钾的水(12mL)淬灭且搅拌5分钟。添加水且反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所要化合物，610mg，72％。C18H24ClN2O5的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝383.1；实验值：383.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.62(s,1H),7.03(brs,1H),5.68(brs,1H),3.96(m,1H),3.69(m,1H),3.31(m,1H),3.19(m,1H),2.60(s,3H),1.30(m,12H)。
步骤3.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈
[2-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(290mg，0.76mmol)(来自步骤2的外消旋混合物)用含4.0M氯化氢的1,4-二噁烷(6.1mL)处理15分钟且蒸发混合物。将残余物溶解于四氢呋喃(2.3mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.66mL，3.8mmol)中。添加N,N-羰基二咪唑(250mg，1.5mmol)且反应混合物在70℃下回流过夜。蒸发反应混合物。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所要化合物，110mg，47％。C14H14ClN2O4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝309.1；实验值：309.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.00(brs,1H),7.93(s,1H),5.99(m,1H),3.89(m,1H),3.81(m,2H),3.52(m,1H),2.58(s,3H),1.23(m,3H)。
步骤4.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈
在0℃下添加四氢硼酸钠(19mg，0.50mmol)至4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(100mg，0.34mmol)(来自步骤3的外消旋混合物)于甲醇(1.6mL，38mmol)中的混合物中且在室温下搅拌反应混合物10分钟并蒸发。残余物用乙酸乙酯稀释，用1NHCl、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩得到呈四种非对映异构体的混合物形式的所要化合物，58mg，55％。C14H16ClN2O4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝311.1；实验值：311.1。
步骤5.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈
向6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(58mg，0.19mmol)(来自步骤4的四种非对映异构体的混合物)、N,N-二甲基甲酰胺(36μL)于二氯甲烷(1mL)中的混合物中添加亚硫酰氯(40.μL，0.56mmol)且在室温下搅拌混合物20分钟。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩得到呈四种非对映异构体的混合物形式的所要化合物，55mg，91％。C14H15Cl2N2O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝329.0；实验值：329.1。
步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈
添加碳酸铯(0.11g，0.34mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.20mmol)(来自步骤5的四种非对映异构体的混合物)于N,N-二甲基甲酰胺(0.91mL)中的混合物中且搅拌10分钟。向混合物中添加含6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(56mg，0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)且在90℃下搅拌反应1小时。通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)进行纯化得到以下所要化合物：峰1(两种非对映异构体的外消旋混合物)：C20H21ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.17(s,1H),8.00(brs,1H),7.79(s,1H),6.25(m,1H),5.92(m,1H),3.90(m,3H),3.57(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)；峰2(2种非对映异构体的外消旋混合物)：C20H21ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.12(s,1H),8.00(brs,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。
使用含20％乙醇的己烷在PhenomenexLux纤维素-1(21.2×250mm，5微米粒度)上以18mL/min对峰2(两种非对映异构体的外消旋混合物)进行手性纯化得到峰3和峰4。峰3，滞留时间＝12.22分钟(单一对映异构体)：C20H21ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.12(s,1H),7.98(brs,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。峰4，滞留时间＝16.25分钟(单一对映异构体)。C20H21ClN7O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝442.1；实验值：442.1。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.12(s,1H),7.98(brs,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。
实施例324.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮
步骤1.1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮
1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(2.6g，9.5mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(1.9mL，11mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(400mg，0.5mmol)和碳酸钾(4.0g，29mmol)于1,4-二噁烷(60mL)和水(30mL)中的混合物。在80℃下加热所得混合物3小时。冷却混合物至室温且用乙酸乙酯萃取。使用含乙酸乙酯的己烷(0-20％)在硅胶上纯化得到所要化合物，2.0g，94％。C12H14ClO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝225.1；实验值：225.1。
步骤2.[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯
添加含0.2M四氧化锇的水(1mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(2.0g，7.2mmol)(参考LawrenceHarris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)于乙腈(22mL)中的溶液中且搅拌10分钟。添加1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮(1.1g，4.8mmol)于乙腈(22mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(5mL)。在室温下搅拌反应3小时。反应用含饱和10M二亚硫酸二钾的水(25mL)淬灭且搅拌5分钟。添加水至反应中且混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所要化合物，1.2g，69％。C17H24ClNO5Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝380.1；实验值：380.1。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ7.48(s,1H),6.80(m,1H),5.50(brs,1H),5.20(brs,1H),3.83(s,3H),3.32(m,1H),3.22(m,1H),2.59(s,3H),2.55(s,3H),1.32(s,9H)。
使用含8％乙醇的己烷在流速18mL/min下在ChiralPakAD-H(20×250mm，ChiralTechnologies，5微米粒度)上进行手性纯化得到峰1(单一对映异构体)(滞留时间＝9.86分钟)和峰2(单一对映异构体)(滞留时间＝11.47分钟)。
步骤3.N-[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]-2-氯乙酰胺
[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.47mmol)(来自步骤2的峰1)用4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(12mL)处理15分钟。蒸发溶剂，添加二氯甲烷(6mL)和三乙胺(200μL，1.4mmol)且冷却混合物至0℃。缓慢添加氯乙酰氯(45μL，0.56mmol)且在0℃下搅拌10分钟。蒸发溶剂至干燥。添加水且混合物用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，且浓缩得到呈单一对映异构体形式的粗残余物。C14H17Cl2NO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝356.1；实验值：356.1。
步骤4.6-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吗啉-3-酮
向N-[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]-2-氯乙酰胺(170mg，0.50mmol)(来自步骤3的单一对映异构体)于四氢呋喃(4mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加氢化钠(于矿物油中的60％分散液；39mg，1.0mmol)的混合物且搅拌1小时。反应用水淬灭且用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，且浓缩得到呈单一对映异构体形式的粗残余物，61mg，41％。C14H17ClNO4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝298.1；实验值：298.1。
步骤5.6-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮
在0℃下向6-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吗啉-3-酮(27mg，0.090mmol)(来自步骤4的单一对映异构体)于甲醇(2mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(6.8mg，0.18mmol)且搅拌1小时。通过制备型LCMS(pH10)纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所要化合物，20mg，76％。C14H17ClNO3的LCMS计算值：(M-OH)+:m/z＝282.1；实验值：282.1。
步骤6.6-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮
在室温下搅拌亚硫酰氯(15μL，0.21mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10.0μL)的混合物10分钟。添加6-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮(19.0mg，0.0634mmol)(来自步骤5的两种非对映异构体的外消旋混合物)于二氯甲烷(1.0mL)中的溶液且混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所要化合物，19mg，94％。C14H17ClNO3的LCMS计算值：(M-Cl)+:m/z＝282.1；实验值：282.1。
步骤7.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮
在140℃下加热6-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮(19.0mg，0.0597mmol)(来自步骤6的两种非对映异构体的外消旋混合物)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11mg，0.072mmol)、碳酸铯(29mg，0.090mmol)和碘化钾(0.99mg，0.006mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.19mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，用水洗涤，浓缩且通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)进行纯化得到2.5mg，10％的峰1(单一对映异构体，滞留时间10.15分钟)：C20H24ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝431.2；实验值：431.1，和2.7mg，10％的峰2(单一对映异构体，滞留时间10.76分钟)：C20H24ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝431.2；实验值：431.1。
实施例325.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮
步骤1.5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮
向[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.40mmol)(峰1，来自实施例324，步骤2的单一对映异构体)于四氢呋喃(2.5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)和N,N-羰基二咪唑(130mg，0.80mmol)。使反应在70℃下回流10分钟。蒸发反应至干燥。使用含(0-50％)乙酸乙酯的己烷在硅胶上纯化得到呈单一对映异构体形式的所要化合物，78mg，69％。C13H15ClNO4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝284.1；实验值：284.1。
步骤2.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮
在0℃下向5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮(21mg，0.072mmol)(来自步骤1的单一对映异构体)于甲醇(1mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(5.5mg，0.14mmol)。在0℃下搅拌混合物1小时。其用甲醇稀释且使用pH10缓冲液用制备型LCMS纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所要化合物，17mg，83％。C13H15ClNO3的LCMS计算值：(M-OH)+:m/z＝268.1；实验值：268.1。
步骤3.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮
在室温下搅拌三聚氯化氰(16mg，0.084mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15μL)的混合物10分钟。添加5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(16mg，0.056mmol)(来自步骤2的两种非对映异构体的外消旋混合物)于二氯甲烷(0.3mL)中的溶液且反应在室温下搅拌过夜。添加亚硫酰氯(12μL，0.17mmol)且搅拌10分钟。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所要化合物，17mg，100％。C13H16Cl2NO3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝304.0；实验值：304.1。
步骤4.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮
在140℃下加热5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(17mg，0.056mmol)(来自步骤3的两种非对映异构体的外消旋混合物)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.067mmol)、碳酸铯(27mg，0.084mmol)和碘化钾(0.93mg，0.0056mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.18mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，用水洗涤，浓缩且通过制备型LCMS(pH10)纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所要化合物，2.2mg，9％；C19H22ClN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝417.1；实验值：417.1。
实施例345-348.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体
步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇
1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(20.0g，58.4mmol；实施例212，步骤1)和1,2-乙烷二醇(6.5mL，120mmol)于甲苯(190mL)中的溶液用单水合对甲苯磺酸(1.1g，5.8mmol)处理。烧瓶配备填充有筛的迪安-斯达克分水器(Dean-Starktrap)，且回流3小时。冷却反应混合物且添加至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(250mL)中并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到粗制橙色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-20％)纯化得到所要产物(22g，99％)。C12H14ClFIO3的LCMS：(M+H)+:m/z＝387.0；实验值：386.9。
步骤2.(2E)-3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]丙烯酸乙酯
将2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(22g，58mmol)(来自步骤1)、(2E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)丙烯酸乙酯(16mL，70mmol)和碳酸钾(24g，170mmol)于1,4-二噁烷(230mL)和水(110mL)中的混合物用氮气脱气10分钟。反应混合物用[1,1'-双(二苯基膦基\)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2.4g，2.9mmol)处理，用氮气再脱气10分钟，且在80℃下加热2小时。反应混合物通过硅藻土过滤且用乙酸乙酯(300mL)洗涤。滤液倾入水(400mL)中。分离水层且再用乙酸乙酯(300mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到粗制棕色固体。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到所要产物(20g，96％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝16.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),6.70(dd,J＝16.5,0.9Hz,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),4.10-3.99(m,2H),3.91(q,J＝7.0Hz,2H),3.87-3.76(m,2H),1.73(s,3H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H)。C17H21ClFO5的LCMS：(M+H)+:m/z＝359.1；实验值：359.1。
步骤3.3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]-4-硝基丁酸乙酯
(2E)-3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基\)苯基]丙烯酸乙酯(10g，28mmol)(来自步骤2)于硝基甲烷(100mL)中的溶液用1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(4.6mL，31mmol)处理且在60℃下搅拌15小时。反应混合物倾入水(400mL)中且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩成粗制橙色油状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所要产物(10.4g，89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(d,J＝9.1Hz,1H),4.82(ddd,J＝12.5,7.6,1.4Hz,1H),4.68(dd,J＝12.5,7.2Hz,1H),4.54-4.40(m,1H),4.15-3.90(m,6H),3.89-3.75(m,2H),2.85(ddd,J＝16.0,8.6,1.4Hz,1H),2.73(dd,J＝16.1,6.2Hz,1H),1.70(s,3H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)。C18H24ClFNO7的LCMS：(M+H)+:m/z＝420.1；实验值：420.1。
步骤4.4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]吡咯烷-2-酮的对映异构体
使3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]-4-硝基丁酸乙酯(1.0g，2.4mmol)(来自步骤3)于乙醇(16mL)中的悬浮液升温以溶解固体。使溶液冷却回环境温度，用氮气脱气，且用2800雷尼镍(RaneyNickel)于水(1.5mL)中的浆料处理。反应混合物用氮气再次脱气且用氢气球氢化3小时。反应混合物通过硅藻土过滤且浓缩得到中间体氨基酯(0.93g，100％)。将中间体氨基酯溶解于甲苯(12mL)中且在110℃下加热12小时。冷却反应混合物至环境温度，此时有固体自溶液沉淀。冷却此混合物至0℃，搅拌30分钟，过滤，用冷甲苯洗涤，且干燥得到呈对映异构体的混合物形式的所要产物(0.61g，75％)。C16H20ClFNO4的LCMS：(M+H)+:m/z＝344.1；实验值：344.1。对映异构体的混合物通过手性HPLC分离得到作为峰1和峰2的个别对映异构体(RT分别＝5.39分钟和7.01分钟；PhenomenexLux纤维素C-1，21.2×250mm，5微米粒度，用含20％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。
步骤5.4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮的对映异构体
来自步骤4的分离的对映异构体各自个别处理成最终化合物。4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]吡咯烷-2-酮(1.7g，5.0mmol)(来自步骤4)于甲醇(17mL)中的溶液用含6.0M氯化氢的水(11mL，69mmol)逐滴处理且在20℃下搅拌30分钟。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(75ml)中且用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到所要产物[来自峰1(1.5g，99％)；来自峰2(1.5g，99％)]，其未进行进一步纯化即使用。来自峰1：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,1H),4.16-3.99(m,1H),3.83(q,J＝7.0Hz,2H),3.65-3.54(m,1H),3.30-3.23(m,1H),2.55(s,3H),2.33(dd,J＝16.8,8.4Hz,1H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H)。C14H16ClFNO3的LCMS：(M+H)+:m/z＝300.1；实验值：300.0。来自峰2：1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,1H),4.13-4.00(m,1H),3.87-3.77(m,2H),3.65-3.55(m,1H),3.31-3.23(m,1H),2.55(s,3H),2.32(ddd,J＝16.9,8.4,1.6Hz,1H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H)。C14H16ClFNO3的LCMS：(M+H)+:m/z＝300.1；实验值：300.1。
步骤6.4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]吡咯烷-2-酮的非对映异构体
来自步骤5的对映异构体各自个别处理成最终产物。在0℃下在氮气氛围下用四氢硼酸钠(0.10g，2.7mmol)处理4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(0.402g，1.34mmol)(来自步骤5)于无水甲醇(6.7mL)中的溶液且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭且在搅拌下倾入水(50mL)/乙酸乙酯(100mL)中。使混合物升温至环境温度且分离水层并再用乙酸乙酯(50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到白色泡沫状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙腈(含有7％甲醇)的二氯甲烷(0％-100％)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物[来自峰1(0.40g，99％)；来自峰2(0.40g，99％)]。来自峰1：C14H18ClFNO3的LCMS：(M+H)+:m/z＝302.1；实验值：302.0。来自峰2：C14H18ClFNO3的LCMS：(M+H)+:m/z＝302.1；实验值：302.1。
步骤7.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]吡咯烷-2-酮的非对映异构体
来自步骤6的非对映异构体的混合物各自个别处理成最终产物。4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]吡咯烷-2-酮(0.41g，1.4mmol)(来自步骤6)于二氯甲烷(12mL)中的溶液依次用N,N-二甲基甲酰胺(0.011mL，0.14mmol)和亚硫酰氯(0.21mL，2.9mmol)逐滴处理且在20℃下搅拌30分钟。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液中且用二氯甲烷萃取。分离有机层且用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到所要产物[来自峰1(0.38g，87％)；来自峰2(0.39g，89％)]以及由氯化物消除形成的17-18％的苯乙烯。这些混合物未进行进一步纯化即使用。来自峰1：C14H17Cl2FNO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝320.1；实验值：320.0。来自峰2：C14H17Cl2FNO2的LCMS：(M+H)+:m/z＝320.1；实验值：320.0。
步骤8.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体
来自步骤7的非对映异构体的混合物各自个别处理成最终产物。在100℃下加热4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]吡咯烷-2-酮(0.36g，1.1mmol)(来自步骤7)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.19g，1.3mmol)、碳酸铯(0.54g，1.7mmol)和碘化钾(18mg，0.11mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(7.4mL)中的混合物4.5小时。反应混合物倾入水(30ml)中且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取得到非对映异构体((S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；和(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮)的混合物。非对映异构体的混合物通过制备型LCMS(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所要产物[自峰1分离出峰A(化合物345)(0.13g，54％)和峰B(化合物346)(0.11g，46％)；自峰2分离出峰A(化合物347)(0.15g，63％)和峰B(化合物348)(0.14g，55％)]。化合物346：1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.82(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(brs,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.05-3.90(m,1H),3.88-3.78(m,2H),3.63-3.53(m,1H),3.29-3.20(m,1H),2.54(s,3H),2.38-2.21(m,1H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C20H23ClFN6O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝433.2；实验值：433.1。化合物347：1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.77(s,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.26(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.04-3.94(m,1H),3.93-3.85(m,1H),3.84-3.77(m,1H),3.61-3.53(m,1H),3.27-3.22(m,1H),2.54(s,3H),2.30(dd,J＝18.1,8.6Hz,1H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.40(t,J＝6.9Hz,3H)。C20H23ClFN6O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝433.2；实验值：433.1。
实施例349-352.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体
步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈的对映异构体
在80℃下搅拌4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(0.20g，0.67mmol)(来自实施例345，步骤5)和氰化钠(0.057g，1.2mmol)于二甲亚砜(1.5mL)中的外消旋混合物3小时。反应混合物倾入水(35mL)中且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到粗残余物。粗物质通过快速管柱色谱使用含乙醚(含有10％甲醇)的己烷(0％-100％)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所要产物(0.15g，71％)。C15H16ClN2O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝307.1；实验值：307.0。对映异构体的混合物通过手性HPLC分离得到作为峰1和峰2的个别对映异构体(RT＝5.00分钟和10.4分钟；PhenomenexLux纤维素C-2，21.2×250mm，5微米粒度，用含60％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。
步骤2.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体
来自步骤1的对映异构体各自个别处理成最终产物。在0℃下在氮气氛围下用四氢硼酸钠(0.20g，5.4mmol)处理4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.83g，2.7mmol；来自峰2：0.86g，2.8mmol)于无水甲醇(14mL)中的溶液且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭且在搅拌下倾入水(50mL)/乙酸乙酯(100mL)中。使混合物升温至环境温度且分离水层并再用乙酸乙酯(50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物[来自峰1(0.83g，99％)；来自峰2(0.87g，99％)]。来自峰1：C15H18ClN2O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝309.1；实验值：309.1。来自峰2：C15H18ClN2O3的LCMS：(M+H)+:m/z＝309.1；实验值：309.1。
步骤3.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体
来自步骤2的非对映异构体的混合物各自个别处理成最终产物。6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.83g，2.7mmol；来自峰2：0.87g，2.8mmol)于二氯甲烷(23mL)中的溶液依次用N,N-二甲基甲酰胺(0.021mL，0.27mmol)和亚硫酰氯(0.490mL，6.72mmol)逐滴处理且在20℃下搅拌2小时。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液中且用二氯甲烷萃取。分离有机层且用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物[来自峰1(0.85g，97％)；来自峰2(0.90g，98％)]。这些混合物未进行进一步纯化即使用。来自峰1：C15H17Cl2N2O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝327.1；实验值：327.1。来自峰2：C15H17Cl2N2O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝327.1；实验值：327.1。
步骤4.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体
来自步骤3的非对映异构体的混合物各自个别处理。在90℃下加热6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.85g，2.6mmol；来自峰2：0.89g，2.7mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.46g，3.1mmol)、碳酸铯(1.3g，3.9mmol)和碘化钾(43mg，0.26mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(17mL，220mmol)中的混合物3小时。反应混合物倾入水(100mL)/乙酸乙酯(100mL)中且通过硅藻土过滤以移除黑色固体。分离水层且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，且浓缩得到白色泡沫状物。粗物质通过快速管柱色谱使用含甲醇的二氯甲烷(0％-20％)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所要产物[来自峰1(0.49g，43％)；来自峰2(0.53g，44％)]。对来自峰1的非对映异构体进行的分析型手性HPLC分析公开归因于差向异构存在四个峰而非所要两个峰的混合物。对来自峰2的非对映异构体进行的分析也公开四个峰。合并所述两组混合物且通过手性HPLC纯化得到四个个别峰(RT＝6.41分钟、8.13分钟、9.93分钟、14.4分钟；PhenomenexLux纤维素C-2，21.2×250mm，5微米粒度，用含60％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。接着在实施例A3和B2的分析中测试峰1(化合物351)、峰2(化合物349)、峰3(化合物352)和峰4(化合物350)的化合物。化合物349：1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.88(s,1H),7.58(s,1H),7.30(brs,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.32-4.20(m,1H),4.00-3.91(m,1H),3.90-3.81(m,1H),3.65-3.59(m,1H),3.49-3.42(m,1H),2.55(s,3H),1.74(d,J＝7.0Hz,3H),1.43(t,J＝6.9Hz,3H)。C21H23ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝440.2；实验值：440.2。化合物352：1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.12(s,1H),7.88(s,1H),7.56(s,1H),7.30(brs,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.32-4.19(m,1H),3.97-3.82(m,2H),3.67-3.59(m,1H),3.49-3.40(m,1H),2.59-2.52(m,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H),1.42(t,J＝6.9Hz,3H)。C21H23ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝440.2；实验值：440.2。
实施例353和354.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮的非对映异构体
步骤1：1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮
在80℃下加热1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(13.3g，38.8mmol)(来自实施例139，步骤1)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧硼戊环(7.9mL，46mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(1.0g，1.0mmol)和碳酸钾(16g，120mmol)于1,4-二噁烷(200mL)和水(100mL)中的混合物2小时。冷却混合物至室温且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且浓缩。使用含乙酸乙酯的己烷(0-30％)在硅胶上纯化得到所要化合物，7.0g，74％。C12H13ClFO2的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝243.0；实验值：243.1。
步骤2：1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮
将AD-混合物-α(5.8g，7.3mmol)(Aldrich#392758)与水(21mL)一起于叔丁醇(21mL)中搅拌15分钟。添加1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮(1.0g，4.1mmol)(来自步骤1)且搅拌悬浮液16小时。添加亚硫酸钠(6.2g，49mmol)且搅拌悬浮液15分钟。反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-80％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所要化合物，900mg，80％。使用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下在PhenomenexLux纤维素C-2(21.2×250mm，ChiralTechnologies，5微米粒度)上进行手性纯化得到峰1(单一对映异构体)(滞留时间＝7.88分钟)和峰2(单一对映异构体)(滞留时间＝11分钟)；所要对映异构体为峰2。C12H13ClFO3的LCMS计算值：(M-OH)+:m/z＝259.1；实验值：259.1。
步骤3：1-[3-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-1-羟乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮
将1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2mmol)(来自步骤2，峰2)与N,N-二异丙基乙胺(4.0mL，23mmol)一起于1,2-二氯乙烷(6mL)中搅拌且添加1.0M叔丁基二甲基硅烷基氯的1,2-二氯乙烷溶液(7.6mL)。加热混合物至80℃维持3小时且冷却至室温。蒸发并使用含乙酸乙酯的己烷(0-50％)在硅胶上纯化得到所要化合物，800mg，80％。C18H28ClFO4SiNa的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝413.1；实验值：413.1。
步骤4：甲烷磺酸1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙酯
在室温下将1-[3-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-1-羟乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2.0mmol)(来自步骤3)与三乙胺(2.0mL，14mmol)和甲烷磺酸酐(670mg，3.8mmol)一起于1,2-二氯乙烷(15mL)中搅拌1.5小时。混合物倾入盐水中且用二氯甲烷萃取。萃取物用硫酸钠干燥，过滤且蒸发得到所要化合物，830mg，100％。C18H27ClFO3Si的LCMS计算值：(M-OMs)+:m/z＝373.1；实验值：373.1。
步骤5：1-[3-(1-叠氮基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮
将甲烷磺酸1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙酯(0.83g，1.77mmol)(来自步骤4)于二甲亚砜(10mL)中搅拌且添加叠氮化钠(0.12g，1.8mmol)。加热混合物至50℃维持1小时且冷却至室温。混合物倾入盐水中且用乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸钠干燥，过滤且蒸发得到所要化合物，736mg，100％。C18H27ClFN3O3SiNa的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝438.1；实验值：438.1。
步骤6：1-[3-(1-氨基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮
将1-[3-(1-叠氮基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(750mg，1.8mmol)(来自步骤5)与水(0.33mL)一起于四氢呋喃(10mL)中搅拌且添加三苯膦。加热混合物至60℃维持2小时且冷却至室温。添加盐水且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸钠干燥，过滤且蒸发得到所要化合物，700mg，100％。C18H30ClFNO3Si的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝390.2；实验值：390.2。
步骤7：(1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯
将1-[3-(1-氨基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2.0mmol)(来自步骤6)与二碳酸二-叔丁酯(780mg，3.6mmol)一起于四氢呋喃(30mL)中搅拌且添加N,N-二异丙基乙胺(0.94mL，5.4mmol)。在室温下搅拌混合物30分钟。添加盐水且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-30％)在硅胶上纯化得到所要化合物，550mg，60％。C23H37ClFNO5SiNa的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝512.2；实验值：512.2。
步骤8：[1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.0mmol)(来自步骤7)于四氢呋喃(10mL)中搅拌且添加1.0M氟化四正丁基铵的四氢呋喃溶液(1.5mL)。在室温下搅拌混合物30分钟且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-50％)在硅胶上纯化得到所要化合物，238mg，60％。C17H23ClFNO5Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝398.1；实验值：398.1。
步骤9：4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮
将[1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(234mg，0.62mmol)(来自步骤8)溶解于1,2-二氯乙烷(12mL)中且添加2.0M光气的甲苯溶液(0.93mL)。加热混合物至80℃维持1.5小时。蒸发并使用含乙酸乙酯的己烷(0-85％)在硅胶上纯化得到所要化合物，175mg，93％。C13H14ClFNO4的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝302.1；实验值：302.1。
步骤10：4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮
在0℃下将4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮(175mg，0.58mmol)于甲醇(10mL)中搅拌且添加四氢硼酸钠(33mg，0.87mmol)。在室温下搅拌混合物1小时且蒸发。添加水且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且蒸发得到非对映异构体的约1:1混合物，175mg，99％。C13H15ClFNO4Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝326.1；实验值：326.1。
步骤11：4-[3-氯-5-(氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮
将4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(150mg，0.49mmol)(来自步骤10)与N,N-二甲基甲酰胺(96μL)一起于二氯甲烷(4mL)中搅拌且添加亚硫酰氯(110μL，1.5mmol)。蒸发混合物。添加水且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且蒸发得到所要化合物，159mg，100％。
步骤12：4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮
将4-[3-氯-5-(氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(160mg，0.50mmol)(来自步骤11)与碳酸铯(324mg，0.99mmol)一起于N,N-二甲基甲酰胺(21mL)中搅拌且添加3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(89mg，0.60mmol)。加热混合物至80℃维持1.5小时且冷却至室温。混合物用水稀释且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridgeC18管柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化分离出两种非对映异构体(峰1[化合物353]Rt＝4.9分钟和峰2[化合物354]Rt＝5.6分钟)；从而提供呈所要单一对映异构体形式的化合物354，28mg，13％。峰2：C19H21ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝435.1；实验值：435.1。1HNMR(300MHz,CD3OD):δ8.15(s,1H),7.62(m,1H),6.31(m,1H),5.39(m,1H),4.79(m,1H),4.40(m,1H),3.95(m,1H),3.80(m,1H),2.60(s,3H),1.80(m,3H),1.40(m,3H)。
实施例355-358.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮的非对映异构体
步骤1：[2-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯
添加含0.2M四氧化锇的水(10mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(LawrenceHarris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)(19g，70mmol)于乙腈(210mL)中的溶液中且搅拌10分钟。添加1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮(11.2g，46mmol)(来自实施例353，步骤1)于乙腈(210mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(50mL)且在室温下搅拌反应3小时。反应用饱和10M二亚硫酸二钾水溶液(240mL)淬灭且搅拌5分钟。添加水且反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤且用硫酸钠干燥，过滤且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所要化合物，16.6g，95％。C17H23ClFNO5Na的LCMS计算值：(M+Na)+:m/z＝398.1；实验值：398.0。
步骤2：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮
使用与实施例353(步骤8-12)相同的程序制备所要单一对映异构体(峰3)，例外的处为来自此实施例中的步骤1的中间体为外消旋物且因此在步骤12中进行四种非对映异构体的最终分离。使用含30％乙醇的己烷在流速18mL/min下在PhenomenexLux纤维素C-4(21×250mm，ChiralTechnologies，5微米粒度)上进行手性纯化得到峰1：化合物355(单一对映异构体)(滞留时间＝12.7分钟)，峰2：化合物356(单一对映异构体)(滞留时间＝14.2分钟)，峰3：化合物357(单一对映异构体)(滞留时间＝20.3分钟)，和峰4：化合物358(单一对映异构体)(滞留时间＝28.9分钟)；活性最大的对映异构体为峰3。C19H21ClFN6O3的LCMS计算值：(M+H)+:m/z＝435.1；实验值：435.1。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):δ8.15(s,1H),7.81(s,1H),7.71(d,1H),7.26(bs,1H),6.23(m,1H),5.84(t,1H),3.92(m,1H),3.83(m,1H),2.52(s,3H),1.75(d,3H),1.40(m,3H)。
实施例361-363.4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈的非对映异构体
基于实施例269的立体化学，各非对映异构体的立体化学相信为4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例361)、4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例362)和4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例363)(以下显示结构)
实施例361的合成：
向(R)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(6.00g，14.3mmol)中添加甲醇(72mL)。在室温下向所得悬浮液中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(2.01mL，28.6mmol)且在室温下搅拌混合物19小时。再添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(0.50mL，7.2mmol)且再继续搅拌1小时。向反应混合物中添加水(280mL)且搅拌混浊溶液。混合物用二氯甲烷(300mL×4)萃取。合并有机层且用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过二氧化硅管柱色谱用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱来纯化。收集含有产物的洗脱份且蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物。通过NMR光谱术和质谱分析标题化合物的样品且得到以下数据。1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.30(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.32(brs,1H),4.07(m,1H),3.94(m,2H),3.65(s,3H),3.59(m,1H),3.08(m,2H),2.56(s,3H),2.38-2.19(m,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。
实施例362的合成：
向(S)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(293.0mg，0.73mmol)中添加甲醇(3.7mL)。在室温下向所得悬浮液中添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(103μL，1.46mmol)且在室温下搅拌混合物19小时。再添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(51.3μL，0.73mmol)且再继续搅拌2.5小时。向反应混合物中添加水(14mL)且搅拌混浊溶液。混合物用二氯甲烷(4×16mL)萃取。合并有机层且用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过二氧化硅管柱色谱用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱来纯化。收集含有产物的洗脱份且蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物。通过NMR光谱术和质谱分析标题化合物的样品且得到以下数据。1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.30(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.37(brs,1H),4.09(m,2H),3.93(m,2H),3.65(s,3H),3.59(m,1H),3.12(m,2H),2.56(s,3H),2.39-2.26(m,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。C22H27ClN7O2的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。
实施例363的合成：
向(R)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(6.0g，14.3mmol)中添加甲醇(72mL)。在室温下向所得悬浮液中添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(2.01mL，28.6mmol)且在室温下搅拌混合物18小时。向反应混合物中添加水(280mL)且搅拌混浊溶液。混合物用二氯甲烷(300mL×4)萃取。合并有机层且用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过二氧化硅管柱色谱用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱来纯化。收集含有产物的洗脱份且蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化以得到标题化合物。通过NMR光谱术和质谱分析标题化合物的样品且得到以下数据。1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.29(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.31(d,J＝4.2Hz,1H),4.11-4.00(m,1H),3.98-3.90(m,1H),3.65(s,3H),3.61-3.53(m,2H),3.07(m,2H),2.56(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。
开发3种HPLC方法来使立体异构体与实施例269的化合物分离。开发方法A来使非对映异构体实施例361与实施例269分离。实施例361和实施例269的滞留时间分别为15.7分钟和11.5分钟。色谱条件描述于表B1中。
表B1
管柱 Phenomenex纤维素3(250mm，4.6mm，5微米)
移动相 89.9％己烷/10％乙醇/0.1％二乙胺(预混合)
流速 1mL/min
操作时间 30分钟
检测波长 247nm
定量 峰面积比率
开发方法B来使非对映异构体实施例362与实施例269分离。实施例362和实施例269的滞留时间分别为26.4分钟和21.7分钟。色谱条件描述于表B2中。
表B2
管柱 Phenomenex纤维素4(250mm，4.6mm，5微米)
移动相 84.9％己烷/15％乙醇/0.1％二乙胺(预混合)
流速 1mL/min
操作时间 40分钟
检测波长 247nm
定量 峰面积比率
开发方法C来使三种立体异构体实施例361、实施例362和实施例363与实施例269分离。立体异构体实施例361、实施例362和实施例363在滞留时间12.9分钟以宽带形式洗脱，而实施例269在滞留时间14.3分钟洗脱。可通过组合来自方法A、B和C的数据对对映异构体实施例363的含量进行估计。色谱条件描述于表B3中。
表B3
管柱 Phenomenex纤维素1(250mm，4.6mm，5微米)
移动相 88％己烷、12％乙醇(含有0.1％二乙胺)
流速 1mL/min
操作时间 25分钟
检测波长 247nm
定量 峰面积比率
实施例A1：PI3K酶测定
PI3激酶发光测定试剂盒是自EchelonBiosciences(SaltLakeCity,UT)购得，所述试剂盒包括脂质激酶底物D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基、3-O-磷酸基连接的D-肌-磷脂酰肌醇4,5-双磷酸(PtdIns(4,5)P2)(PIP2)、生物素化I(1,3,4,5)P4、PI(3,4,5)P3检测蛋白。包括供体和接受体珠粒的AlphaScreenTMGST检测试剂盒是自PerkinElmerLifeSciences(Waltham,MA)购得。PI3Kδ(p110δ/p85α)是自Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl2、DTT、EDTA、HEPES和CHAPS是自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。
PI3Kδ的AlphaScreenTM测定
在来自ThermoFisherScientific的384孔REMP盘中以最终体积40μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释且添加至盘孔中，随后添加其他反应组分。DMSO在测定中的最终浓度为2％。在室温下在50mMHEPES(pH7.4)、5mMMgCl2、50mMNaCl、5mMDTT和0.04％CHAPS中进行PI3K测定。反应通过添加ATP起始，将由20μMPIP2、20μMATP、1.2nMPI3Kδ组成的最终反应混合物孵育20分钟。接着转移10μL反应混合物至5μL含50nM生物素化I(1,3,4,5)P4的淬灭缓冲液：50mMHEPES(pH7.4)、150mMNaCl、10mMEDTA、5mMDTT、0.1％吐温-20(Tween-20)中，随后添加10μL悬浮于含有25nMPI(3,4,5)P3检测蛋白的淬灭缓冲液中的AlphaScreenTM供体和接受体珠粒。供体珠粒与接受体珠粒两者的最终浓度为20mg/ml。在密封盘之后，在室温下在黑暗位置孵育盘2小时。在Fusion-α微盘读取器(Perkin-Elmer)上测定产物活性。通过使用GraphPadPrism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC50确定。
实施例A2：PI3K酶测定
材料：脂质激酶底物磷酸肌醇-4,5-双磷酸(PIP2)是自EchelonBiosciences(SaltLakeCity,UT)购得。PI3K同工型α、β、δ和γ是自Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl2、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS是自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。
在来自ThermoFisherScientific的透明底96孔盘中以最终体积24μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释且添加至盘孔中，随后添加其他反应组分。DMSO在测定中的最终浓度为0.5％。在室温下在20mMMOPS(pH6.7)、10mMMgCl2、5mMDTT和0.03％CHAPS中进行PI3K测定。制备含有50μMPIP2、激酶和不同浓度抑制剂的反应混合物。反应通过添加含有2.2μCi[γ-33P]ATP的ATP至最终浓度1000μM来起始。PI3K同工型α、β、δ和γ在测定中的最终浓度分别为1.3、9.4、2.9和10.8nM。孵育反应180分钟且通过添加100μL1M磷酸钾(pH8.0)、30mMEDTA淬灭缓冲液来终止。接着转移100μL反应溶液等分试样至96孔MilliporeMultiScreenIP0.45μmPVDF过滤盘中(过滤盘分别用200μL100％乙醇、蒸馏水和1M磷酸钾(pH8.0)预先湿润)。在MilliporeManifold上在真空下抽吸过滤盘且用18×200μL含有1M磷酸钾(pH8.0)和1mMATP的洗涤缓冲液洗涤。在通过抽吸干燥和点印之后，盘在孵育箱中在37℃下风干过夜。PackardTopCount接头(Millipore)接着连接于盘，随后在各孔中添加120μLMicroscint20闪烁混合液(PerkinElmer)。在密封盘之后，通过在Topcount(Perkin-Elmer)上进行闪烁计数来测定产物的放射性。通过使用GraphPadPrism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC50确定。
实施例A3：PI3Kδ闪烁亲近测定
材料
[γ-33P]ATP(10mCi/mL)是自Perkin-Elmer(Waltham,MA)购得。D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基、3-O-磷酸基连接的D-肌-磷脂酰肌醇4,5-双磷酸(PtdIns(4,5)P2)(PIP2)，CAS204858-53-7是自EchelonBiosciences(SaltLakeCity,UT)购得。PI3Kδ(p110δ/p85α)是自Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl2、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS是自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。麦胚凝集素(WheatGermAgglutinin，WGA)YSiSPA闪烁珠粒是自GEhealthcarelifesciences(Piscataway,NJ)购得。
在来自ThermoFisherScientific的聚苯乙烯384孔基质白色盘中以最终体积25μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释且添加至盘孔中，随后添加其他反应组分。DMSO在测定中的最终浓度为0.5％。在室温下在20mMMOPS(pH6.7)、10mMMgCl2、5mMDTT和0.03％CHAPS中进行PI3K测定。反应通过添加ATP起始，最终反应混合物由20μMPIP2、20μMATP、0.2μCi[γ-33P]ATP、4nMPI3Kδ组成。孵育反应210分钟且通过添加40μL悬浮于淬灭缓冲液：150mM磷酸钾(pH8.0)、20％甘油、25mMEDTA、400μMATP中的SPA珠粒终止。SPA珠粒的最终浓度为1.0mg/mL。在密封盘之后，各盘在室温下振荡过夜且在1800rpm下离心10分钟，通过在Topcount(Perkin-Elmer)上进行闪烁计数来测定产物的放射性。通过使用GraphPadPrism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC50确定。如通过测定A3所确定，实施例的IC50数据呈现于表2中。如通过分析A2所确定，实施例361和363的IC50数据显示于表3中。
表2
实施例编号 PI3Kδ SPA IC50(nM)*
1 +
2 +
3 +
4 +
5 +
6 +
7 +
8 +
9 +
10 +
11 +
13 +
14 +
16 +
17 +
18 +
19 +
20(第1峰) +
20(第2峰) +++
21 +
22 +
23 +
24 +
40 ++
41 +++
43 +
44 +
65 +
66 +
67(第1峰) +
68(第1峰) +
71 +
72 +
94 +
95 +
96 +
99 +
102 +
104 +
105 +
108 +
110 +
113 +
115 +
实施例编号 PI3Kδ SPA IC50(nM)*
118 +
121 +
139(第1峰) +
140 +
141 +
149 +
156 +
158 +
159 +
161 +
163 +
164 +
166 +
167 +
168 +
169 +
183 +
184 +
188 +
189 +
192 ++
195 +
200 +
203 +
208 +
209 ++
212 +
213 +
219 +
220 +
236 +
237 +
239 +
247 +
261 +
262 +
268 +
269 +
272 +
273 +
281 +
285 +
289 +
292 +
293 +
296 +
298(第1峰) +
实施例编号 PI3Kδ SPA IC50(nM)*
307 +
315 +
316 +
318 +
319 +
320 +
321(第1峰) +
322(第1峰) +
310 +
311 +
323(第1峰) +
323(第2峰) +
323(第3峰) +++
323(第4峰) +
324(第1峰) +++
324(第2峰) +
325 +
345 +++
346 +
347 +
348 +++
349 +
350 +++++
351 +++
352 +
353 +++++
354 +
355 +++
356 +++
357 +
358 +++++
362 +
表3
实施例编号 PI3Kδ IC50(nM)*
361 +++++
363 +++
*栏符号(对于表2和3)：
+表示≤10nM
++表示>10nM至50nM
+++表示>50nM至200nM
++++表示>200nM至500nM
+++++表示>500nM
实施例B1：B细胞增殖测定
为获得B细胞，通过在菲科尔-希帕克(Ficoll-Hypague)(GEHealthcare,Piscataway,NJ)上进行标准密度梯度离心自正常无药物供体的周边血液分离人类PBMC且与抗CD19微珠粒(MiltenyiBiotech,Auburn,CA)一起孵育。接着根据制造商说明书通过使用autoMacs(MiltenyiBiotech)进行阳性免疫拣选来纯化B细胞。
纯化的B细胞(2×105/孔/200μL)于RPMI1640、10％FBS和山羊F(ab’)2抗人类IgM(10μg/ml)(Invitrogen，Carlsbad,CA)中在不同量的测试化合物存在下于96孔超低结合盘(Corning，Corning,NY)中培养3日。接着添加含[3H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer，Boston,MA)的PBS至B细胞培养物中，再维持12小时，随后通过经由GF/B过滤器(PackardBioscience，Meriden,CT)用水过滤来分离所并入的放射性且通过用TopCount(PackardBioscience)进行液体闪烁计数加以测量。
实施例B2：Pfeiffer细胞增殖测定
Pfeiffer细胞系(弥漫性大B细胞淋巴瘤)是自ATCC(Manassas,VA)购得且维持在推荐培养基(RPMI和10％FBS)中。为测量化合物的抗增殖活性，在一定浓度范围的测试化合物存在或不存在下，将Pfeiffer细胞与培养基一起涂铺(2×103个细胞/孔/200μl)至96孔超低结合盘(Corning，Corning,NY)中。在3-4日之后，接着添加含[3H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer，Boston,MA)的PBS至细胞培养物中，再维持12小时，随后通过经由GF/B过滤器(PackardBioscience，Meridenj,CT)用水过滤来分离所并入的放射性且通过用TopCount(PackardBioscience)进行液体闪烁计数加以测量。所选化合物的IC50数据呈现于表4中。
表4
实施例编号 Pfeiffer IC50(nM)*
67(第1峰) +
68(第1峰) +
96 +
102 +
104 ++
121 ++
139(第1峰) +
140 +
149 +
163 ++
167 +
195 +
200 +
213 +
219 +
220 +
262 +
268 +
269 +
315 +
354 +
357 +
346 +
347 +
349 +
*栏符号：
+表示≤10nM
++表示>10nM至50nM
实施例C：Akt磷酸化测定
Ramos细胞(来自伯基特氏淋巴瘤(Burkittslymphoma)的B淋巴细胞)是自ATCC(Manassas,VA)获得且维持在RPMI1640和10％FBS中。细胞(3×107个细胞/管/3毫升于RPMI中)在37℃下与不同量的测试化合物一起孵育2小时且接着在37℃水浴中用山羊F(ab’)2抗人类IgM(5μg/mL)(Invitrogen)刺激17分钟。经过刺激的细胞在4℃下用离心法短暂离心且使用300μL溶解缓冲液(CellSignalingTechnology，Danvers,MA)制备完全细胞提取物。对所得溶解产物进行音波处理且收集上清液。通过根据制造商说明书使用PathScan磷酸化Akt1(Ser473)夹心式ELISA试剂盒(CellSignalingTechnology)分析上清液中Akt的磷酸化程度。
实施例D：Pfeiffer淋巴瘤模型
方法：
雌性SCID小鼠(5至8周龄，CharlesRiverLaboratories,Wilmington,MA)用含1×107个肿瘤细胞(Pfeiffer，ATCC#CRL-2632,Manassas,VA)和基质胶(BDBiosciences#354234)的0.2mL无菌生理盐水接种。接种是在侧腹上以皮下方式进行。在对培养的细胞接种之后3至6周收集肿瘤组织片段(约3mm×3mm)且替代细胞接种进行皮下植入。使用钝头镊以固体碎片形式植入组织片段。根据肿瘤尺寸，在肿瘤接种之后15至25日开始对带有肿瘤的小鼠进行治疗。对动物进行拣选以使各组中的平均肿瘤体积大致相等。在治疗第一日，所有组中的最小平均肿瘤体积为150mm3且各组由7个动物组成。口服(PO)向小鼠施用实验治疗剂实施例347。治疗频率为每日2次，持续最少14日以达成功效。使用数码测径规每周2至3次测量皮下肿瘤的尺寸。通过在2个维度测量肿瘤且利用等式：体积＝[长度×(宽度2)]/2来计算肿瘤体积；其中较大数值为长度，且较小数值为宽度。如果形成多个肿瘤，那么最终体积为个别肿瘤的服从同一等式的总和：例如2个肿瘤；体积＝{[L1×(W1)2]/2}+{[L2×(W2)2]/2}。对肿瘤生长的影响报导为肿瘤生长抑制百分比(％TGI)。TGI百分比用等式：(1-(Tx体积/对照体积))*100计算，其中对照体积为在既定日的媒介物或未治疗肿瘤的体积，且Tx体积为在同日的任何治疗组肿瘤体积。使用ANOVA：单因子试验来评估治疗与媒介物对照之间的统计差异。
结果：
实施例347是作为单一药剂在作为NHL亚型的弥漫性大B细胞淋巴瘤的Pfeiffer人类肿瘤异种移植物模型中加以评价。在体外，Pfeiffer癌细胞显示对实施例347的抗增殖作用敏感。因此，基于将肿瘤细胞皮下接种至免疫损害的SCID小鼠中来建立肿瘤模型且带有肿瘤的小鼠持续14日在0.3、1、3或10mg/kg下接受每日两次口服剂量的媒介物或实施例347。随着剂量递增，实施例347治疗使肿瘤生长受抑制22％、24％、36％和58％(肿瘤生长抑制百分比)(图2)。
除本文所述的修改之外，本发明的各种修改也将为本领域的技术人员根据以上描述所显而易知。这些修改也意欲属于随附权利要求书的范围内。本申请中引用的各参照案，包括所有专利、专利申请和公布皆以全文引用的方式并入本文。

Claims (36)

1.一种治疗患者的特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮肾炎、天疱疮、膜性肾病变、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma)、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)、前淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、骨髓纤维化、粘膜相关的淋巴组织(MALT)淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、脾边缘区淋巴瘤、原发性渗出淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、浆细胞白血病、髓外浆细胞瘤、冒烟型骨髓瘤(也称无症状骨髓瘤)、意义未确定的单克隆γ球蛋白症(MGUS)、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R2为C1-6烷基或C1-6卤烷基；
R4为卤基、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基；
R5为卤基、OH、CN、C1-4烷基、C1-4卤烷基、C1-4烷氧基或C1-4卤烷氧基；
Cy选自C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、NO2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤烷基、ORa1、SRa1、C(＝O)Rb1、C(＝O)NRc1Rd1、C(＝O)ORa1、OC(＝O)Rb1、OC(＝O)NRc1Rd1、NRc1Rd1、NRc1C(＝O)Rb1、NRc1C(＝O)ORb1、NRc1C(＝O)NRc1Rd1、C(＝NRe)Rb1、C(＝NRe)NRc1Rd1、NRc1C(＝NRe)NRc1Rd1、NRc1S(＝O)Rb1、NRc1S(＝O)2NRc1Rd1、S(＝O)Rb1、S(＝O)2Rb1和S(＝O)2NRc1Rd1；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地选自C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地选自C1-6烷基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基；其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
或Rc1和Rd1连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C1-3烷基取代；
各Re独立地选自H、CN、OH、C1-4烷基和C1-4烷氧基；且
各R11独立地选自OH、NO2、CN、卤基、C1-3烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、C1-3卤烷基、氰基-C1-3烷基、HO-C1-3烷基、C1-3烷氧基-C1-3烷基、C3-7环烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、硫基、C1-3烷基硫基、C1-3烷基亚磺酰基、C1-3烷基磺酰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基、二(C1-3烷基)氨甲酰基、羧基、C1-3烷基羰基、C1-4烷氧基羰基、C1-3烷基羰基氨基、C1-3烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基、C1-3烷基氨基磺酰基、二(C1-3烷基)氨基磺酰基、氨基磺酰基氨基、C1-3烷基氨基磺酰基氨基、二(C1-3烷基)氨基磺酰基氨基、氨基羰基氨基、C1-3烷基氨基羰基氨基和二(C1-3烷基)氨基羰基氨基。
2.如权利要求1所述的方法，其中R2为C1-3烷基或C1-3氟烷基。
3.如权利要求1所述的方法，其中R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基。
4.如权利要求1所述的方法，其中R2为甲基。
5.如权利要求1所述的方法，其中R2为乙基。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为卤基、CN或C1-3烷基。
7.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为F、Cl、CN或甲基。
8.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为F。
9.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为Cl。
10.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为CN。
11.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中R4为甲基。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中R5为卤基、CN或C1-3烷基。
13.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中R5为Cl、CN或甲基。
14.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中R5为Cl。
15.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中R5为CN。
16.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中R5为甲基。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
18.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中Cy为4-6元杂环烷基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
19.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中Cy选自环丙基环、苯基环、氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环、3-氧代基-吗啉-6-基、2-氧代基-吡咯烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-5-基、吡唑环、吡啶环和嘧啶环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中：
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
21.如权利要求1所述的方法，其中：
R2为C1-3烷基或C1-3氟烷基；
R4为卤基、CN或C1-3烷基；
R5为卤基、CN或C1-3烷基；
Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
22.如权利要求1所述的方法，其中：
R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基；
R4为F、Cl、CN或甲基；
R5为Cl、CN或甲基；
Cy选自C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、苯基和5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代；
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、CN、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地为C3-7环烷基，其任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-6烷基，其中所述C1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-6烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；且
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-3烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
23.如权利要求1所述的方法，其中：
R2为甲基、乙基或2,2-二氟甲基；
R4为F、Cl、CN或甲基；
R5为Cl、CN或甲基；
Cy选自环丙基环、苯基环、氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环、3-氧代基-吗啉-6-基、2-氧代基-吡咯烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-4-基、2-氧代基-噁唑烷-5-基、吡唑环、吡啶环和嘧啶环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3基团取代。
各R3独立地选自Cy1、-(C1-3亚烷基)-Cy1、卤基、C1-6烷基、ORa1、NRc1Rd1、C(＝O)Rb1、C(＝O)ORa1、C(＝O)NRc1Rd1和S(＝O)2Rb1，其中所述C1-6烷基任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Cy1独立地选自环丙基和环丁基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R11基团取代；
各Ra1、Rc1和Rd1独立地选自H和C1-4烷基；其中所述C1-4烷基任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各Rb1独立地为C1-4烷基，其任选被1、2或3个独立选择的R11基团取代；
各R11独立地为OH、CN、卤基、氰基-C1-3烷基、C1-3烷氧基-C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤烷氧基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3烷基)氨基、C1-3烷基羰基、C1-4烷氧基羰基、氨甲酰基、C1-3烷基氨甲酰基或二(C1-3烷基)氨甲酰基。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式II化合物：
或其药学上可接受的盐。
25.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式III化合物：
或其药学上可接受的盐。
26.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式IV化合物：
或其药学上可接受的盐；其中：
G为NH，n为1，且V为O；或
G为NH，n为0，且V为O或CH2；或
G为O，n为0且V为NH。
27.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式IVa化合物：
或其药学上可接受的盐。
28.如权利要求1至中任一所述的方法，其中所述化合物为式IVb化合物：
或其药学上可接受的盐。
29.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式IVc化合物：
或其药学上可接受的盐。
30.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述化合物为式IVd化合物：
或其药学上可接受的盐。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，或其药学上可接受的盐，其中式I：
中的星号碳为手性碳且所述化合物或所述盐为(S)-对映异构体。
32.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物是选自：
1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-丙酰基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-(1-{5-氯-3-[1-(环丙基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-甲氧基-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[5-氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[5-氯-3-(1-异丁基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[3-(1-仲丁基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-(1-{5-氯-2-甲氧基-3-[1-(2-甲氧基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基吡啶酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇；
3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺；
3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,6'-二甲基联苯-4-甲酰胺；
5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈；
5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶酰胺
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；
1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇；
1-{1-[5-氯-4-氟-2-甲氧基-3-(1-氧杂环丁烷-3-基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇；
(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈；
1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N-甲基丙酰胺；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-3,3,3-三氟丙-1-醇；
(2R)-3-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1,1,1-三氟丙-2-醇；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇；
(2R)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧代基丙-2-醇；
1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇；
1-(1-{5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇；
(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-1-醇；
1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇；
(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N,N-二甲基丙酰胺；
[1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)环丁基]乙腈；
1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-基)-2-甲基丙-2-醇；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}环丁醇；
5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶酰胺；
1-[1-(5-氯-3-{1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吡唑-4-基}-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
2-[(5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-基)氨基]乙醇；
2-(5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-2-基氧基)乙醇；
5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-(2,2-二氟乙氧基)-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶酰胺；
5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶酰胺；
4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶酰胺；
2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺；
6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺；
5-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-甲氧基-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈；
1-(1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(嘧啶-5-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
1-(1-(3-(2-氨基嘧啶-5-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}苯甲腈；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸叔丁酯；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈；
2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酰胺；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟基-1-甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈；
2-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N-(叔丁基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酰胺；
3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺；
1-{1-[4,5-二氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；
4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈；
4-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-6-甲基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧代基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈；
6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；
4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧代基吡咯烷-3-基)苯甲腈；
4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮；
5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮；
4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；
或任何以上提及者的药学上可接受的盐。
33.如权利要求1所述的方法，其中所述方法为治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血、血管炎、全身性红斑狼疮、狼疮肾炎、天疱疮、膜性肾病变、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、结外边缘区淋巴瘤、活化B细胞样(ABC)弥漫性大B细胞淋巴瘤或生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤的方法。
34.如权利要求1所述的方法，其中所述方法为治疗选自复发性ITP和难治性ITP的特发性血小板减少性紫癜(ITP)的方法。
35.如权利要求1所述的方法，其中所述方法为治疗选自以下的血管炎的方法：白塞氏病、柯根氏综合症、巨细胞性动脉炎、风湿性多肌痛(PMR)、高安氏动脉炎、伯格氏病(闭塞性血栓血管炎)、中枢神经系统血管炎、川崎病、结节性多动脉炎、车格-施特劳斯综合症、混合型冷球蛋白血症血管炎(原发性或C型肝炎病毒(HCV)诱发的)、亨诺克-许兰紫癜(HSP)、过敏性血管炎、显微镜下多血管炎、韦格纳氏肉芽肿病和抗嗜中性球细胞质抗体相关(ANCA)全身性血管炎(AASV)。
36.如权利要求1所述的方法，其中所述方法为治疗选自复发性NHL、难治性NHL和复发性滤泡NHL的非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的方法。
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