CN104027815A - 一种丹参酮包合液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种丹参酮包合液，所述丹参酮包合液的主体分子为β-环糊精，客体分子为丹参酮，并提供了其制备方法和其在制备奶牛乳房注入剂中的应用。本发明的有益效果为：本发明制备了丹参酮β-环糊精包合物溶液并优化其制备工艺参数，通过对丹参酮理化性质的考察，借助单因素试验及正交试验设计，着重研究影响包合物溶液包合效果的各项工艺参数，得到环糊精用量最小，丹参酮包合率最高，增溶效果较好，质量较稳定的丹参酮环糊精包合溶液。
Description
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及一种丹参酮包合液及其制备方法和应用。
背景技术
奶牛乳房炎是对奶牛养殖业危害非常大的传染性疾病，可分为临床型急性乳房炎、临床型亚急性乳房炎和隐性型乳房炎，各不同类型乳房炎病例适应不同治疗药物和方案。临床型急性及亚急性乳房炎，易诊断、发病急、症状明显，治疗效果往往也较快速、明显；隐性型乳房炎无肉眼明显可见临床症状从而不易诊断、病程长，治疗效果不佳。病症易恶化，久治不愈，转化成顽固型乳房炎，则很难彻底治愈。
针对各类奶牛乳房炎病例，近几十年来国内研发的治疗奶牛乳房炎的药物层出不穷。早期利用抗生素结合对症治疗奶牛乳房炎，效果很好。但随着抗菌素的无限制性地使用，使诸多病原菌对抗生素已产生耐药性，继续用药，则只有大幅度加大用药剂量以维持疗效，而大剂量药物的使用会导致在牛奶中大量抗生素的残留，严重影响人类健康，因此，抗生素不再是治疗奶牛乳房炎的最佳选择。同时，研发新的抗生素难度增大、节奏变缓及其应用上的限制，为配合临床生产，目前迫切需要开发出安全、环保新型药物，十一五规划以来，该领域一直被视为影响国家农业发展，生态安全的重要环节。因此，行业内专家学者已经将目光投向了毒副作用低，不致产生耐药性的中药药物，但中药成分复杂，疗效缓慢，疗程长等因素也制约了应用中药治疗奶牛乳房炎的发展速度，但相对于化药对环境、人体健康的危害程度来说，中药更倾向于被选择。
丹参酮是从中药丹参中提取出的脂溶性成分，其药理作用广泛，如心血管药理作用、抗肿瘤活性、抗菌及抗病毒活性等。在兽医临床研究上，人们主要利用其较强抑菌活性开发治疗畜禽感染性疾病的抗菌药物。丹参酮对以金黄色葡萄球菌为主的急性感染，特别是对耐药金葡球菌株感染有显著疗效，但丹参酮水溶性差，理化性质不稳定等特点大大限制了它的应用，国内前前后后研究应用丹参酮治疗奶牛乳房炎已有二、三十年历史，但由于丹参酮脂水两难溶的性质，其溶解度问题一直是很难攻克的技术难题。
β-环糊精水溶性很大、毒副作用非常低、具有包载药物的独特的分子结构，是一种常用药用包载材料，应用β-环糊精将药物包络起来，可以增加药物溶解度、提高药物溶出速度、延长药物释放时间、提高药物生物利用度。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中丹参酮溶解度低的缺陷，提供了一种利用环糊精包合办法提高丹参酮溶解度，增大释药速率，提高其生物利用度从而增大疗效的丹参酮包合液。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种丹参酮包合液，所述丹参酮包合液的主体分子为β-环糊精，客体分子为丹参酮。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液，所述包合物中，丹参酮与β-环糊精的投料质量比为1：5或1:10或1:20或1:40或1：80。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液，所述包合物中，丹参酮与β-环糊精的投料质量比为1：80。
本发明的第二个目的是提供了上述的一种丹参酮包合液的制备方法，是采用R-β-环糊精不饱和水溶液法制备丹参酮包合液，即称取适量R-β-环糊精，置于圆底烧瓶中，加入适量蒸馏水，加热溶解，制成质量百分浓度为20%的不饱和R-β-环糊精溶液，水浴保温；另取适量丹参酮原料药粉，用少量无水乙醇溶解并缓慢滴加进入R-β-环糊精溶液中，同时加热搅拌3h后冷却，经0.22μm滤膜过滤除菌，收集滤液。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液的制备方法，所述搅拌温度为23℃、40℃或60℃。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液的制备方法，所述搅拌速度为300rmp、500rmp或700rmp。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液的制备方法，所述丹参酮包合液中无水乙醇的含量为5%、10%或15%。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液的制备方法，所述丹参酮包合液的pH值为6.5、7.5、8.5或9.5。
进一步的，上述的一种丹参酮包合液的制备方法，所述搅拌温度为60℃；搅拌速度为300rmp；无水乙醇的含量为5%；pH值为7.5。
本发明的第三个目的是提供了上述的丹参酮包合液在制备奶牛乳房注入剂中的应用。
本发明的有益效果为：
本发明制备了丹参酮β-环糊精包合物溶液并优化其制备工艺参数，通过对丹参酮理化性质的考察，借助单因素试验及正交试验设计，着重研究影响包合物溶液包合效果的各项工艺参数，得到环糊精用量最小，丹参酮包合率最高，增溶效果较好，质量较稳定的丹参酮环糊精包合溶液。
通过对丹参酮理化性质的考察，丹参酮在水中溶解度极低，光照及加热对丹参酮也有一定影响，需要避光贮存。建立了丹参酮包合液含量测定方法，为包合物溶液制备工艺参数筛选、质量评价及质量控制提供了依据，丹参酮ⅡA质量浓度在9.18～45.92μg/mL范围内，线性关系良好(R2=0.9997)，方法平均回收率为97.53%，RSD值为1.74%，精密度良好，RSD值为1.21%；隐丹参酮质量浓度在3.54～17.68μg/mL范围内，线性关系良好(R2=0.9996)，平均回收率为96.86%，RSD值为1.14%，精密度良好，RSD值为0.75%。单因素试验考察了制备丹参酮包合物溶液各项工艺参数（如环糊精与药物投料比、温度、乙醇含量、搅拌时间、搅拌速度及PH），结果显示对丹参酮包合效果有显著影响的主要因素包括：环糊精与药物投料比、温度、乙醇含量、搅拌时间，以及对它们进行进一步优化的指导条件分别为80:1、60℃、5%、6h。通过L9（34）正交试验设计对制备工艺各参数组合进行优化，最终确定制备最优工艺条件为：环糊精与丹参酮投料比80:1、加热温度为60℃（1h）、乙醇含量为5%、搅拌时间为3小时。
附图说明
图1为丹参酮ⅡA质量浓度标准曲线。
图2为丹参酮ⅡA及隐丹参酮色谱图。
图3为包合后的丹参酮ⅡA及隐丹参酮色谱图。
具体实施方式
实施例1：
1、丹参酮乳房注入剂制备工艺：
1.1试验材料：
1.1.1药品与试剂：
丹参酮ⅡA对照品（批号110766-200619），隐丹参酮对照品（批号110852-200806）购自中国食品药品检定研究院；
丹参酮原料药粉（丹参酮含量41.7%，丹参酮ⅡA含量11.57%，隐丹参酮含量3.16%）由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所实验室自行提取；
R-β-环糊精，购自山东淄博千汇生物科技有限公司，含量≥98%；
丹参酮灌注液，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所生产（批号20130722、20130725、20130728）；
乙酸乙酯为分析纯、石油醚（60-90℃）、甲醇为色谱纯无水乙醇、正磷酸为分析纯；乙腈为色谱纯。
1.1.2 仪器：
Waters2695高效液相色谱仪—紫外检测器；磁力加热搅拌器（德国Heidolph公司，MR3001型）；电子分析天平（德国Sartorious公司，BT25S型）；电热恒温鼓风干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司，DHG-9070型）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；0.22μm微孔滤膜（天津津腾实验设备有限公司），GOODLOOK-1000型薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司）；硅胶G板（青岛海洋化工厂）；
1.2 试验方法：
1.2.1丹参酮含量测定方法的建立：
检测波长的选择：
精密称取丹参酮ⅡA对照品11.48mg,置于25mL棕色容量瓶中，加无水甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加无水甲醇稀释至刻度，摇匀，制成45.92μg/mL的溶液备用。另取R-β-环糊精适量，制成辅料溶液。用HPLC法在200-400nm波长范围内扫描对照品贮备液及辅料溶液。
色谱条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.026%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为270nm；柱温为25℃；流速为每分钟1.2 mL。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于20000。
标准曲线的绘制：
精密吸取对照品贮备液1mL,置于10mL棕色容量瓶中，加无水甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。另分别精密吸取该浓度溶液0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2mL于2mL离心管中，加无水甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为9.18μg/mL、18.37μg/mL、27.55μg/mL、36.74μg/mL、45.92μg/mL的系列对照品溶液备用，以甲醇溶液作空白对照，在选择的波长处测定上述对照品。以峰面积对进样质量浓度进行回归分析。
供试品样品的制备：
取100mL灌注液样品，加入等体积无水乙醇解包合，超声15min，静置12h,旋蒸除去乙醇，再用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯层溶液，旋蒸浓缩，甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中，精密称取该溶液适量并用甲醇稀释10倍，即得。
定量测定与丹参酮ⅡA利用率的计算：
取供试品溶液，进行测定峰面积，结合标准曲线回归方程计算样品中丹参酮ⅡA含量，并计算利用率。丹参酮ⅡA利用率=灌注液中丹参酮ⅡA量/投入原料药中丹参酮ⅡA量（投入原料药中丹参酮ⅡA量=投入原药量×11.57%）。
回收率试验：
取适量R-β-环糊精加蒸馏水至刻度，共9份，分3组，每组3份，每组分别加入丹参酮ⅡA对照品溶液适量，分别配制成质量浓度为10，15，20μg/mL高、中、低3种浓度样品溶液，涡旋混合均匀后按照供试品样品制备方法进行处理，按色谱条件测定峰面积并分别计算回收率及RSD值。
精密度试验：
取回收率试验项下同一浓度丹参酮ⅡA对照品溶液，按照色谱条件连续测定6次，记录峰面积，计算RSD值。
重复性试验：
取同一样品，按供试品制备方法制备5份供试品，按色谱条件进样分析，记录峰面积，计算RSD值。
稳定性试验：
取回收率试验项下15μg/mL溶液，分别放置0，6,12,24,48,72h后进样，记录峰面积，计算RSD值。
1.2.2丹参酮β-环糊精包合液的制备：
采用R-β-环糊精不饱和水溶液法制备丹参酮包合液，即称取适量R-β-环糊精，置于圆底烧瓶中，加入适量蒸馏水，加热溶解，制成浓度为20%的不饱和R-β-环糊精溶液，水浴保温。另取适量丹参酮原料药粉，用少量无水乙醇溶解并缓慢滴加进入R-β-环糊精溶液中，同时加热搅拌一定时间后冷却，经0.22μm滤膜过滤除菌，收集滤液。
1.2.3丹参酮β-环糊精包合液制备工艺单因素试验：
投料比单因素试验：
试验考察β-环糊精与丹参酮的投料质量比为5:1、10:1、20:1、40:1、80:1，60℃（加热1h）磁力搅拌6小时，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
温度单因素试验：
试验考察搅拌温度分别为23℃、40℃、60℃（加热1h）、60℃（加热6h），投料比为80:1，磁力搅拌6小时，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
搅拌时间单因素试验：
试验考察搅拌时间为3h、6h、12h、24h，投料比为80:1，60℃（加热1h）下磁力搅拌，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
乙醇含量单因素试验：
试验考察乙醇含量为5%、10%、15%，投料比为80:1,60℃（加热1h）磁力搅拌6小时，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
搅拌速度单因素试验：
试验考察搅拌速度为300rmp、500rmp、700rmp，投料比为80:1,60℃（加热1h）搅拌6小时，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
PH单因素试验：
试验考察PH为6.5、7.5、8.5、9.5，投料比为80:1，60℃（加热1h）搅拌6小时，对各组样品溶液丹参酮ⅡA利用率进行比较。
1.2.4 丹参酮-β-环糊精包合液制备工艺优化：
采用正交试验设计，因素及水平见表，以丹参酮ⅡA利用率为指标，按照正交表L9（34）设计方案，进行试验，丹参酮－R-β-环糊精包合液正交试验的因素和水平如表1所示。
表1
。
1.2.5丹参酮β-环糊精包合液溶解度考察：
取适量丹参酮药粉，加入制备好的丹参酮灌注液中，制成过饱和溶液，按照供试品样品制备方法处理上述溶液，HPLC测定丹参酮ⅡA及隐丹参酮含量，计算溶解度。
1.3 丹参酮制备工艺研究结果：
1.3.1 丹参酮含量测定方法的建立：
试验结果表明，丹参酮ⅡA在270nm波长处有最大吸收峰，空白辅料在此波长处无吸收，不干扰丹参酮ⅡA测定，故选择270nm为检测波长；丹参酮ⅡA质量浓度在9.18～45.92μg/mL范围内，如图1丹参酮ⅡA质量浓度标准曲线所示，峰面积与质量浓度有良好的线性关系，标准曲线回归方程为：y=94586x-36618(R2=0.9997)；丹参酮ⅡA回收率试验结果如表2所示，该方法平均回收率为97.53%，RSD值为1.74%；精密度良好，RSD值为1.21%；重复性良好，RSD值为1.46%；72小时内稳定，RSD值为1.37%。
表2
。
1.3.2 丹参酮β-环糊精包合液制备工艺单因素试验结果：
投料比单因素试验表明：β-环糊精与丹参酮药粉投料比为5:1、10:1、20:1、40:1、80:1时，丹参酮ⅡA利用率分别为1.82% 、3.71% 、17.83% 、28.54% 、84.29%，本次试验中发丹参酮ⅡA利用率逐渐升高故两者投料比初步设定为80:1。
温度单因素试验结果表明：温度为23℃、40℃、60℃（加热1h）、60℃（加热6h）时，丹参酮ⅡA利用率分别为62.85% 、45.74% 、73.05% 、45.01%，由于β类环糊精的载药特性及制备反应特点，一定程度加热有利于反应进行，加热过度可能导致逆反应发生，故温度值初步设定为60℃（加热1h）。
搅拌时间单因素试验结果表明：搅拌时间为3h、6h、12h、24h时，丹参酮ⅡA利用率分别为60.94%、73.05%、62.58%、72.43%，搅拌时间在大于等于6小时后丹参酮ⅡA利用率已经没有明显提高，故为了提高制备工艺效率，将搅拌时间初步设定为6h。
乙醇含量单因素试验结果表明：乙醇含量为5%、10%、15%时，丹参酮ⅡA利用率分别为13.97%、54.21%、48.23%，制备过程中加入适量乙醇有助于将原料药粉分散于水溶液中，可以加快反应过程，但加入过量乙醇会加速反应结合物的降解，故初步将乙醇含量设定为10%；
搅拌速度单因素试验结果表明：搅拌速度为300rmp、500rmp、700rmp时，丹参酮ⅡA利用率分别为78.06%、58.05%、60.99%，搅拌速度在300rmp时效率最高，但综合试验误差因素考虑在3种搅拌速度情况下丹参酮ⅡA利用率基本相差不大，表明该因素不是影响工艺制备的主要因素。
PH值单因素试验结果表明：PH值在6.5、7.5、8.5、9.5时，丹参酮ⅡA利用率分别为56.73%、62.82%、49.44%、61.40%，PH值为7.5时，获得最大丹参酮ⅡA利用率，但可以看出在该系列PH值范围内，丹参酮ⅡA利用率变化不大，表明PH值亦非影响工艺制备的主要因素；
1.3.3 丹参酮β-环糊精包合液制备工艺的优化结果：
丹参酮β-环糊精包合液L9（34）正交试验结果如表3所示，通过对极差R值的比较，各因素对试验结果影响大小顺序为A>B>D>C，即：投料质量比> 温度>乙醇浓度>搅拌时间，其中投料质量比是影响工艺的主要因素，温度、乙醇浓度次之，搅拌时间影响最小，对同一因素的3个水平比较得知：A2>A1>A3、B2>B3>B1、C2>C3>C1、D1>D3>D2，由此可得到最佳制备条件为A2B2C2D1。方差分析结果如表4所示，表明：若α=0.05，因素A有显著影响，若α=0.1，因素ABD均有显著性。综合直观分析和方差分析结果，最佳工艺条件可选为A2B2D1，即R-β-环糊精与丹参酮药粉投料质量比为80:1,温度为60℃（1h）,乙醇含量为5%，搅拌时间对制备影响不显著，为节省工艺时间，定为3h即可。
表3
。
表4（α=0.1）
。
1.3.4 丹参酮β-环糊精包合液的制备方法结果：
1）先将适量R-β-环糊精加入纯水中溶解制成20%的不饱和溶液，加热至60℃并保温；
2）边磁力搅拌边向环糊精溶液中缓慢滴加丹参酮药物（与环糊精质量比为1:80）的乙醇溶液（占总溶液体积的5%）；
3）加热搅拌3h，其中加热时间1h；
4）0.22μm微孔滤膜过滤，即得丹参酮－R-β-环糊精包合物溶液。
1.3.5 丹参酮β-环糊精包合液有效成分溶解度考察结果：
试验结果显示，通过β-环糊精对丹参酮的包合作用，丹参酮包合液中治疗奶牛乳房炎最关键的两种单体丹参酮ⅡA及隐丹参酮在水中的溶解度可分别达到0.38mg/mL和0.14mg/mL，丹参酮在包合溶液中溶解度可达到1.32～1.82mg/mL，较丹参酮原料药粉在水中溶解度有很大提高。
2、实验结论：
2.1本实施例通过对包合物制备工艺单因素的考察，确定了影响丹参酮乳房注入剂制备工艺的因素，再通过正交试验设计优化了丹参酮乳房注入剂的制备工艺，最佳制备工艺条件为：丹参酮药物与环糊精投料比为1:80、加热温度为60℃、搅拌时间为3小时以及乙醇含量为5%。
2.2丹参酮包合物溶液采用不饱和溶液法制备，具体制备方法如下：
1）将R-β-环糊精加入纯水中溶解制成20%的不饱和溶液、加热至60℃并保温；
2）边磁力搅拌边缓慢滴加丹参酮乙醇溶液进入R-β-环糊精溶液中；
3）加热1h，搅拌3h，微孔滤膜过滤，即得包合物溶液。
2.3对该包合物溶液进行简单的质量评价结果为：
该包合液外观呈棕红色、均匀透明，无明显沉淀；丹参酮ⅡA及隐丹参酮在包合物溶液中的溶解度可分别达到0.38mg/mL和0.14 mg/mL；丹参总酮在溶解度可达到1.32-1.82mg/mL，较丹参酮在水中溶解度明显提高。
根据图2、图3可以看到，丹参酮ⅡA及隐丹参酮包合前后的有效成分未发生变化，但其溶解度发生改变，故包合试验是成功的。
本发明提供的奶牛乳房注入剂是用水为溶剂，只有包合物才可制备该剂型，以往技术中，不包合是不能够制备水溶性助溶剂的。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种丹参酮包合液，其特征在于，所述丹参酮包合液的主体分子为β-环糊精，客体分子为丹参酮。
2.根据权利要求1所述的一种丹参酮包合液，其特征在于，所述包合物中，丹参酮与β-环糊精的投料质量比为1：5或1:10或1:20或1:40或1：80。
3.根据权利要求2所述的一种丹参酮包合液，其特征在于，所述包合物中，丹参酮与β-环糊精的投料质量比为1：80。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种丹参酮包合液的制备方法，其特征在于，是采用R-β-环糊精不饱和水溶液法制备丹参酮包合液，即称取适量R-β-环糊精，置于圆底烧瓶中，加入适量蒸馏水，加热溶解，制成质量百分浓度为20%的不饱和R-β-环糊精溶液，水浴保温；另取适量丹参酮原料药粉，用少量无水乙醇溶解并缓慢滴加进入R-β-环糊精溶液中，同时加热搅拌3h后冷却，经0.22μm滤膜过滤除菌，收集滤液。
5.根据权利要求4所述的一种丹参酮包合液的制备方法，其特征在于，所述搅拌温度为23℃、40℃或60℃。
6.根据权利要求5所述的一种丹参酮包合液的制备方法 ，其特征在于，所述搅拌速度为300rmp、500rmp或700rmp。
7.根据权利要求6所述的一种丹参酮包合液的制备方法，其特征在于，所述丹参酮包合液中无水乙醇的含量为5%、10%或15%。
8.根据权利要求7所述的一种丹参酮包合液的制备方法，其特征在于，所述丹参酮包合液的pH值为6.5、7.5、8.5或9.5。
9.根据权利要求8所述的一种丹参酮包合液的制备方法，其特征在于，所述搅拌温度为60℃；搅拌速度为300rmp；无水乙醇的含量为5%；pH值为7.5。
10.根据权利要求1-3任一所述的丹参酮包合液在制备奶牛乳房注入剂中的应用。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105943541A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-09-21 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 用于治疗奶牛干乳期乳房炎的长效乳房注入剂及其制备方法 |
| WO2017060329A1 (en) * | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for preventing plastic-induced degradation of biologicals |
| US9974737B2 (en) | 2013-09-19 | 2018-05-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Adenovirus formulations |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1410068A (zh) * | 2001-09-25 | 2003-04-16 | 房其年 | 水溶性丹参酮的制备方法 |
| CN1686104A (zh) * | 2005-04-12 | 2005-10-26 | 四川大学 | 丹参酮固体分散体和包合物及其用途 |
| CN101406515A (zh) * | 2008-12-02 | 2009-04-15 | 黑龙江省汇丰动物保健品有限公司 | 一种治疗奶牛乳房炎的乳房灌注液及其制备方法 |
-
2014
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1410068A (zh) * | 2001-09-25 | 2003-04-16 | 房其年 | 水溶性丹参酮的制备方法 |
| CN1686104A (zh) * | 2005-04-12 | 2005-10-26 | 四川大学 | 丹参酮固体分散体和包合物及其用途 |
| CN101406515A (zh) * | 2008-12-02 | 2009-04-15 | 黑龙江省汇丰动物保健品有限公司 | 一种治疗奶牛乳房炎的乳房灌注液及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 石远: "注射用丹参酮ⅡA包合物的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》, 30 November 2008 (2008-11-30), pages 057 - 8 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9974737B2 (en) | 2013-09-19 | 2018-05-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Adenovirus formulations |
| US10272032B2 (en) | 2013-09-19 | 2019-04-30 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Adenovirus forumations |
| US11484494B2 (en) | 2013-09-19 | 2022-11-01 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Adenovirus formulations |
| WO2017060329A1 (en) * | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for preventing plastic-induced degradation of biologicals |
| CN108135843A (zh) * | 2015-10-06 | 2018-06-08 | 扬森疫苗与预防公司 | 用于预防生物制品的塑料诱导降解的方法 |
| AU2016336235B2 (en) * | 2015-10-06 | 2019-10-03 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for preventing plastic-induced degradation of biologicals |
| EA036412B1 (ru) * | 2015-10-06 | 2020-11-09 | Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. | Способ обеспечения защиты аденовируса от разрушения, вызванного взаимодействием с пластиком, и применение 2-гидроксипропил--циклодекстрина для защиты аденовируса |
| CN108135843B (zh) * | 2015-10-06 | 2021-11-02 | 扬森疫苗与预防公司 | 用于预防生物制品的塑料诱导降解的方法 |
| CN105943541A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-09-21 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 用于治疗奶牛干乳期乳房炎的长效乳房注入剂及其制备方法 |
| CN105943541B (zh) * | 2016-06-27 | 2019-02-12 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 用于治疗奶牛干乳期乳房炎的长效乳房注入剂及其制备方法 |
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