CH475353A - Verfahren zur Herstellung des neuen Antibioticums SL 3042 - Google Patents

Description

      Verfahren        zur    Herstellung des neuen     Antibioticums        SL   <B>3042</B>    Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren  zur Herstellung eines neuen     Antibioticums,    das nach  stehend mit     SL    3042 bezeichnet wird.  



  Erfindungsgemäss, gelangt man zu dem neuen     Anti=          bioticum        SL    3042, indem man einen neuen Stamm der       Pilzspecies        Panus        conchatus    (Ball. ex. Fr.) Fr. in einer  Nährlösung züchtet und das-     Antibioticum    aus der     Fer-          mentationsbrühe    auf an sich bekannte Weise, z. B.  durch Extraktion- oder     Adsorption,    isoliert und reinigt.  



  Der neue;     erfindungsgemäss    verwendete Stamm  von     Panus-        conchatus        (Bull.    ex.     Fr.)-    Fr. wurde aus  einem in Tirol     (Oesierreich)    gefundenen Fruchtkörper       isoliert    und eine Probe davon beim     United        States    De=       partment    of     Agricultare        (Northem        Utilization        Research          and        Development    Division),     Peoria,

          I11./USA,    unter  der Nummer     NRRL    3253 deponiert.  



  Der neue Stamm     Panus        conchatus        (Bull.    ex. Fr.)  Fries,     NRRL    3253, wächst auf einem     Malz-Hefeex-          trakt-Agar    bei 27  C mit einem, farblosen     Substratmy-          cel    und einem lockeren weissen     Luftmycel.    Das     Mycel     zeigt die für     Basidiomyceten    typische Schnallenbildung.  Der Durchmesser der     hyalinen        Hyphen    variiert von  1,6 bis     4,1,u.     



  Auf seinem     natürlichen-        Substrat,    an     Stümpfen-    und  Ästen der     Zitterpappel    und Buche,     fruktifiziert        Panus          conchatus    entsprechend' der Beschreibung von R.

   Küh  ner und H.     Romagnesi,    Flore     analytique    des Champi  gnons     superieurs,    Massen- et     Cie.,    Paris 1953, S. 70,  und derjenigen     Beschreibung    von     R.        Singer,        The        Aga-          ricales    in Modern     Taxonomy,        Weinheim,        published        by     J.     Cramer    1962,<B>9.172.</B>  



  Für das-     erfindungsge        sässe.    Verfahren können auch  Stämme verwendet werden; wie sie     z-    B. durch Selek  tion oder Mutation unter Einwirkung von     Ultraviolett-          oder    Röntgenstrahlen oder durch Anwendung anderer       Massnahmen,    wie     z        B-.    durch. Behandlung von     Labora-          toriumskulturen-    mit     geeigneten    Chemikalien aus dem  neuen Stamm     Panus        eonehatus-        (Bull.    ex.

   Fr.) Fries ge  wonnen werden: können-    Der, neue Stamm von     Panus        conehatus        (Buil:    ex.       Fr.)    Fries     lässt    sich auf vielerlei Nährböden; die die  üblichen Nährstoffe enthalten, züchten.

   So     verwendet     ein- solcher Stamm die für,     kohlenstaffheterotrophen     Organismen üblicherweise benutzten Nährstoffe, bei       spielsweise    Glucose, Stärke,     Dextrin,        Lactose,    Rohr  zucker usw. als     Kohlenstoffquelle,    organische und an  organische     stickstoffhaltige    Verbindungen, wie     Pepton,     Hefe- oder Fleischextrakte,     Ammoniumsulfat,        Ammo-          niumnitrat;

          Aminosäuren    usw. als Stickstoffquelle,       sowie-    die üblichen Mineralsalze und, Spurenelemente.  



  Eine Verfahrensform zur- Herstellung des neuen       Antibioticums    besteht     darin,    dass ein flüssiges Nährme  dium mit     Mycel    eines neuen Stammes von-     Panus        con-          chatus        (Bull.    ex. Fr.) Fries beimpft und die Kultur 5  bis 10 Tage bei 27      inkubiert    wird.

   Die Züchtung kann  unter     aeroben    Bedingungen in: einer     Oburflächenkultur     oder     submers        unter        Schütteln    oder in     Fermentern    mit       Begasung    durch Luft oder Sauerstoff unter Rühren er  folgen.

   Sobald eine maximale Menge an     Antibioticum     produziert worden ist, wird filtriert und das     Antibioti-          cum    durch     extraktive    oder     adsorptive        Arbeitsure-          thoden-    auf an sich     bekannte    Weise aus dem Filtrat ge  wonnen.  



  Eine Methode, die sich als vorzugsweise geeignet  erwiesen hat, ist die Extraktion des Filtrates mit Essig  ester, jedoch können auch andere organische Lösungs  mittel, wie z. B. Benzol, Chloroform,     Butylacetat,          Methylenehlorid    oder     Butanol,    verwendet werden.     An-          schliessend    werden die Extrakte vom Lösungsmittel  befreit, z.

   B. durch     Destillation,    und der Rückstand zur  Isolierung des gewünschten     Antibioticums    auf     chroma-          tographischem    Wege an     adsorbierenden    Mitteln, wie  Tonerde, Kieselgel,     Magnesiumsilicat    und dgl.     oder          mittels-Gegenstromverteilung    gereinigt.  



  Das neue     Antibioticum        SL    3042 kann wie folgt  charakterisiert werden:       SL    3042 ist ein     leicht    gelbliches, hochaktives, neutral           reagierendes        Öl        der        Mikroanalyse        C=62,30/0,        H=6,7%,          0=30,

  3        %        mit        dem        Refraktionsindex        [n]        D        20        =        1'5306     und der     spezifischen    Drehung [a]     D20    =<B>-611</B> (c = 0,4     in          CH2Cl2).     



       UV.-Spektrum:        Maxima    242     nm        [E]        i        em    = 229     und     302,5     mg    = 20,2, Schulter bei 320 mg  = 15,5     (in    Methanol).     (Fig.    1)       IR.-Spektrum:

      Banden bei 3580, 3400, 2970, 2910,  1680, 1600, 1440, 1375, 1235, 1210,  1100, 1035, 990, 928, 875, 845,  815     cm-'        (in        Methylenchlorid).        (Fig.    2)  Das neue     Antibioticum        SL    3042 zeigt eine gute       cytostatische        Wirksamkeit    und kann zur therapeuti  schen     Bekämpfung    von Tumorerkrankungen an  Mensch und Tier verwendet werden. Diese     Wirkung     wird durch die Hemmung der     Vermehrung    von  Tumorzellen (Zellen des     Mäuse-Mastocytoms    P-815)  bestimmt.

   Im geeigneten Nährboden vermehren sich  diese Tumorzellen     innert    40 Stunden auf das vier- und  fünffache der Ausgangszahl. Die DE-50 (Konzentra  tion, welche die Vermehrung um 50 0/a hemmt) von       SL    3042 ist     1gg/ml.     



  Das     Antibioticum        SL    3042 besitzt auch eine spezi  fische     antiprotozoale    Wirkung,     insbesondere    gegen       Trypanosoma        cruzi    mit der     MIC        (MIC    = Dosis, bei       der        mehr        als        50        %        der        Trypanosomen        unbeweglich          sind)    10     ,ug/ml.     



  Die akute     Toxizität    DL 50 von     SL    3042 bei der  weissen Maus ist 23 mg/kg     i.p.     



  Das     erfindungsgemäss    hergestellte     Antibioticum          SL    3042 kann als     Arzneimittel    allein, und zwar sowohl  in öliger Form als auch als Rohkonzentrat oder     in    ent  sprechenden Arzneiformen für orale,     enterale    oder       parenterale    Verabreichung verwendet werden. Zwecks  Herstellung geeigneter Arzneiformen wird dieses mit  anorganischen oder organischen, pharmakologisch in  differenten Hilfsstoffen verarbeitet. Als Hilfsstoffe wer  den verwendet z. B.  



       Für    Tabletten und     Dragdes:     Milchzucker, Stärke, Talk,       Stearinsäure    usw.  



  für     Sirupe:     Rohrzucker-,     Invert-          zucker-,        Glucoselösungen     <B>USW.</B>  



  für     Injektionspräparate:     Wasser,     Alkohole,        Gly-          cerin,        pflanzliche    Öle und       dergl.     



  für Suppositorien:       natürliche    oder gehärtete  Öle, Wachse u. a. mehr.  Zudem können die Zubereitungen geeignete     Kon-          servierungs-,        Stabilisierungs-,    Netzmittel, Lösungsver-    mittler,     Süss-    und Farbstoffe,     Aromantien    usw. enthal  ten.  



       In    dem nachfolgenden Beispiel, welches     die    Aus  führung des Verfahrens erläutert, den Umfang der Er  findung aber     in    keiner Weise einschränken soll, erfol  gen alle Temperaturangaben     in    Celsiusgraden. Die       Schmelz-    bzw. Zersetzungspunkte sind auf dem     Kofler-          Block    bestimmt.  



  <I>Beispiel</I>       In    einem     Fermenter    werden 100 Liter     einer    Nähr  lösung, die pro Liter  20 g     Cerelose     2 g     Malzextrakt    (Schweiz.

   Ferment AG)  2 g     Bacto-Yeast     2 g     Pepton     2 g     KH2P04     2<B>9</B>     M9S04.        7H20    und       entmineralisiertes    Wasser  enthält, mit 10 Liter     einer        Vorkultur    von     Panus        con-          chatus        (Bull.    ex.

   Fr.) Fries     angeimpft    und unter Belüf  tung (1     L/Min.)    und unter Rühren (300 Umdrehungen/  Min.) 88 Stunden bei 27      irrkubiert.    Die     Kulturbrühe     wird filtriert und das Filtrat vom     pH    4 bis 4,5 mit  dreimal 50 Litern Essigester extrahiert. Der Essigester  Extrakt wird einmal mit 5 Liter Wasser gewaschen,  über     MgS04    getrocknet und nach Filtration     im     Vakuum zur Trockne gebracht.

   Der Rückstand wird       an        2000        g        Kieselgel        (Merck        0,2-0,5        %)        chromatogra-          phiert.    Zur     Eluation    wird zuerst     Benzol-Äther    (75:25)  verwendet.     Eluation        mit        Benzol-Äther    (1:1) ergibt rei  nes     SL    3042.

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung des neuen Antibioticums SL 3042 mit folgenden Charakteristica: Mikroanalyse: C = 62,3 %, H = 6,7 %, 0 = 30,3 0/0 mit dem Refraktionsindex [n] D 20 = l'5306 spez. Drehung:

   [a] D20 = -61 (c = 0,4 in CH2C12). UV: Spektrum: Maxima 242 nm. [E] i lm = 229 und 302,5 mg = 20,2, Schulter bei 320 mg = 15,5 (in Methanol). (Fig. 1).

   IR.-Spektrum: Banden bei 3580, 3400, 2970, 2910, 1680, 1600, 1440, 1375, 1235, 1210, 1100, 1035, 990; 928, 875, 815 cm-1 (in Methylenchlorid). (Fig 2), dadurch gekennzeichnet, dass man den Stamm NRRL 3253 der Pilzspecies Panus conchatus (Bull. ex.

   Fr.) Fries oder seine Mutanten in einer Nährlösung züchtet und hierauf das Antibioticum SL 3042 aus der Nährlösung isoliert und reinigt. <I>Anmerkung des</I> Eidg. <I>Amtes für geistiges Eigentum:</I> Sollten Teile der Beschreibung mit der im Patentanspruch gegebenen Definition der Erfindung nicht in Einklang stehen, so sei daran erinnert, dass gemäss Art. 51 des Patentgesetzes der Patentanspruch für den sachlichen Geltungsbereich des Patentes massgebend ist.