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CH422813A - Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptide - Google Patents

Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptide

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Publication number
CH422813A
CH422813A CH1290460A CH1290460A CH422813A CH 422813 A CH422813 A CH 422813A CH 1290460 A CH1290460 A CH 1290460A CH 1290460 A CH1290460 A CH 1290460A CH 422813 A CH422813 A CH 422813A
Authority
CH
Switzerland
Prior art keywords
sep
lys
arg
boc
val
Prior art date
Application number
CH1290460A
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English (en)
Inventor
Schwyzer Robert Dr Prof
Beat Dr Iselin
Heini Dr Kappeler
Werner Dr Rittel
Sieber Peter
Original Assignee
Ciba Geigy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ciba Geigy filed Critical Ciba Geigy
Priority to CH1290460A priority Critical patent/CH422813A/de
Priority to US152654A priority patent/US3247182A/en
Priority to ES0272025A priority patent/ES272025A1/es
Priority to GB41294/61A priority patent/GB1002041A/en
Publication of CH422813A publication Critical patent/CH422813A/de

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/695—Corticotropin [ACTH]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
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    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description


  



  Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptide
Gegenstand der Erfindung ist ein   VeRahren    zur Herstellung eines neuen   Heneikosapeptids    der Formel   
L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L- glutaminyl-L-histidy'1-L-phenylalanyl-L- arginyl'-L-tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L- prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L- arginyT-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysin    sowie der entsprechenden Verbindung, die statt des Glutaminylrestes den Rest der Glutaminsäure aufweist.



   Die neuen Verbindungen haben eine hohe adreno  corticotrope    Wirksamkeit und können   dementspre-    chend als Heilmittel in der Human-und   Veterinär-    medizin verwendet werden. Ferner können sie als Zwischenprodukte zur Herstellung von   Heilmitteln,    die eine längere Kette von Aminosäure aufweisen, wie der   adrenocorticotropen    Hormone selbst, verwendet werden.



   Die neuen   Heneikosapeptide    können nach den für die Peptidherstellung bekannten Methoden erhalten werden, wobei die Aminosäuren in der erwähnten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung   kleinerer Peptideinheiten verknüpft werden.   



   Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man die Aminosäuren   L-Serin,      L-Tyrosin,    L-Serin-,   L-Methionin,    L-Glutamin oder   LGlutaminsäure,      L-Histidin,      L-Phenylalanin,    L Arginin. L-Trytophan, Glycin, L-Lysin, L-Prolin,   L-Valin,    Glycin, L-Lysin,   L-Lysin,    L-Arginin, L Arginin, L-Prolin, L-Valin und L-Lysin in der angegebenen Reihenfolge unter intermediärem Schutz von Aminio-bzw. Carboxylgruppen miteinander ver  einigt.    In den Fig.   1    und 2 sind Ausführungsformen des Verfahrens illustriert.



   Für die Aminosäuren werden folgende Abkürzungen verwendet :
H-Arg-OH = L-Arginin    H-Glu-OH    = L-Glutaminsäure
H-Glu   (NH2)-OH = L-Glutamin       H-Gly-OH Glycin       H-His-OH    =   L-Histidin   
H-Lys-OH =   L-Lysin       H-Met-OH    =   L-Methionin   
H-Phe-OH   = L-Phenylialanin   
H-Pro-OH = L-Prolin
H-Ser-OH = L-Serin
H-Try-OH = L-Tryptophan
H-Tyr-OH = L-Tyrosin
H-Val-OH = L-Valin.



   BOC bedeutet eine tert.-Butyloxycarbonylgruppe.



     Aille    an der Reaktion nicht beteiligten, freien, funktionellen Gruppen werden zweckmässigerweise geschützt, insbesondere mittels durch Hydrolyse oder Reduktion leicht abspaltbarer Reste, die Carboxyl   gruppe vorzugsweise durch Veresterung, zum Bei-    spiel mit Methanol, tertiärem Butanol, Benzylalkohol (Bzy), p-Nitrobenzylalkohol (NB), die Aminogruppe beispielsweise durch Einführung des   Tosyl-    (= TOS),   Tritylrestes    (= TRI) oder der   Carbobenz-      oxygruppe      (=    Z) oder farbiger Schutzgruppen, wie der   p-Phenylazo-benzyloxycarbonylgruppe    (= PZ) und der   p- (p'-Methoxy-phenylazo)-benzyloxycarbo-      nylgruppe    (=   MZ)

      oder insbesondere des tert.  Butyloxycarbonylrestes.    Zum Schutz der Aminogruppe in der   Guanidogruppierung    des   Arginins    ist die Nitrogruppe geeignet ; die genannte Aminogruppe des Arginins muss aber bei der   Reakbiom    nicht notwendig geschützt werden.



   Die Umwandlung einer geschützten NH2-Gruppe in eine freie Gruppe sowie die Überführung einer funktionell abgewandelten Carboxylgruppe in eine freie Carboxylgruppe im Verlaufe des Verfahrens zur Herstellung der   Nonadekapeptide    und Zwischenprodukte kann nach an sich bekannten Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden bzw. reduzierenden Mitteln erfolgen.



   Je nach der Arbeitsweise erhalt man die neuen Verbindungen in Form von Basen oder ihren Saiten.



  Aus den Salzen können in an sich bekannter Weise die Basen gewonnen werden. Von letzteren wiederum lassen sich durch Umsetzung mit Säuren Salze ge  winnen.   



   Die verfahrensgemäss erhaltenen   Heneikosapep-    tide können in Form von pharmazeutischen Präparaten Verwendung finden.



   In den nachfolgenden Beispielen sind die Tem  peraturen    in Celsiusgraden angegeben. 
EMI3.1     





  NHz <SEP> BO <SEP> C
<tb> H-I <SEP> Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro-OH <SEP> H-Val <SEP> Lys-OCHg
<tb> i
<tb> NHa <SEP> BOC <SEP> BOC <SEP> BOC
<tb> j
<tb> BOC-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro-OH <SEP>  < 
<tb> NHa <SEP> BOC <SEP> BOC <SEP> BOC <SEP> BOC
<tb> :

  
<tb> BOC-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Lys-OCH3
<tb> t
<tb> NH2
<tb> H-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Lys-OCHs, <SEP> 8 <SEP> CF3COOH
<tb> i
<tb> OH
<tb> OH
<tb> i
<tb> H-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro-OH, <SEP> 8HC1
<tb>    Fig.

   1    
EMI4.1     

 (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> R"R'
<tb> R-Ser-Y+ <SEP> R-Tyr-Y+ <SEP> R-Ser-Y+ <SEP> R-Met-Y+ <SEP> R-Glu-Y+ <SEP> R-His-Y+ <SEP> R-Phe-Y+ <SEP> R-Arg-Y+ <SEP> R-Try-Y+ <SEP> R-Gly-X
<tb> 1 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 6 <SEP> 7 <SEP> 8 <SEP> 9 <SEP> 10
<tb> Z <SEP> Z <SEP> Z <SEP> R'R'
<tb> A <SEP> A <SEP> A <SEP> I <SEP> I
<tb> R-Lys-Y+ <SEP> R-Pro-Y+ <SEP> R-Val-Y+ <SEP> R-Gly-Y+ <SEP> R-Lys-Y+ <SEP> R-Lys-Y+ <SEP> R-Arg-Y+ <SEP> R-Arg-Y+ <SEP> R-Pro-Y <SEP> +
<tb> 11 <SEP> 12 <SEP> 13 <SEP> 14 <SEP> 15 <SEP> 16 <SEP> 17 <SEP> 18 <SEP> 19
<tb> PZ <SEP> (MZ)
<tb> i
<tb> Yal <SEP> Lys-OIIB20 <SEP> 21 <SEP> 1
<tb> (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> Rlf <SEP> (NHO <SEP> R'z <SEP> Z <SEP> Z <SEP> R'R'PZ <SEP> (MZ)

  
<tb> R-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Lys-ONB
<tb> (OBzy) <SEP> g <SEP> Y <SEP> Y <SEP> Y <SEP> Y <SEP> Y <SEP> Y <SEP> g <SEP> g <SEP> Y <SEP> I
<tb> (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> (OBzy) <SEP> R" <SEP> (NH <SEP> R'Z <SEP> Z <SEP> Z <SEP> R'R'PZ <SEP> (MZ)
<tb> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i <SEP> i
<tb> H, <SEP> Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Lys-ONB
<tb> 1 <SEP> H&commat;

  -Katalyse <SEP> Elektrolyse <SEP> (fiir <SEP> R'= <SEP> N02)
<tb> (NHS)
<tb> I
<tb> H-Ser <SEP> Tyr <SEP> Ser <SEP> Met <SEP> Glu <SEP> His <SEP> Phe <SEP> Arg <SEP> Try <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Gly <SEP> Lys <SEP> Lys <SEP> Arg <SEP> Arg <SEP> Pro <SEP> Val <SEP> Lys-OH
<tb>    R' = -NO2 oder Di-carbobenzoxy, R" = OBzy oder ONB; R = TRI, BOC, p-Methoxy-carbobenzoxy oder Phthalyl (im letzten Fall Abspaltung durch Hydrazin); Y = -OH, gemischtes oder symmetrisches Anhydrid, aktivierter Ester, Azid, aktiviertes Amid.



  Fig. 2    
Beispiel 1
27, 06 mg (0, 01   mMol)      L-Seryl-L-tyrosyl-L-       seryl-L-methionylLL-gl'utaminyl-L-histidyl-
L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl- glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valylLglycyl-L- lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-
L-prol'lin-hexaacetat     (französische Patentschrift Nr. 1310 534) werden in
1 ml Wasser gelöst und mit   1    ml Dioxan   und 0,    4 ml    0,    ln Natronlauge versetzt. Nun   wird auf 0  gskühlt.   



   Nach Zugabe von 8, 58 mg t-Butyloxycarbonyl-azid  (0, 06 mMol) werden im Laufe von 6 Stunden 0, 6 ml    0,    1n Natronlauge in ganz kleinen Portionen unter
Rühren zugegeben. Nach weiteren 15 Stunden wird die Lösung nach Zugabe von 0, 4   ml    0, ln Salzsäure im Vakuum zur Trockene verdampft, der Rückstand in Wasser gelöst und lyophilisiert. Der gut getrocknete, farblose Rückstand wird in 1 mlt Dimethylformamid gelöst und nach Zugabe von 35, 9 mg   (0,      1      mMol,   
10facher Überschuss) L-Valyl-N-t-butyloxycarbonyl L-lysin-methylester auf -5  gekühlt. Diese Lösung wird mit 20, 6 mg Dicyclohexylcarbodiimid versetzt und 15 Stunden aufbewahrt.



   Alsdann wird die Lösung im Vakuum vorsichtig auf etwa die Hälfte eingeengt und mit 10 Liter trockenem Essigester versetzt. Dabei fällt das Henei  kosapeptid-Derivat    als unlösliches, farbloses Pulver aus, und die Überschüsse an   Dicyclohexylcarbodi-    imid und Dipeptidester gehen in Lösung. Das Pro dukt wird noch zweimal umgelöst.



   Ungeachtet der kleinen Verunreinigung durch Dicyclohexylharnstoff wird die Verbindung in. 0, 5 ml Trifluoressigsäure gelöst und darin   1      Sssundebei    Zimmertemperatur aufbewahrt. Nach Verdampfen des Lösungsmittels wird das Heneikosapeptid-Glu5  RI-amid-lys21-methylester-octa-trifluoracetat    in   elektro-    phoretisch reiner Form gewonnen   (Papierelektro-    phorese bei 3000 V, pH 1, 9). Es zeigt eine be  trächtliche    Cofticotropin-Wirkung.   Ausbeute 95 %.   



   Amid-und   Esterfunktionen    werden verseift durch Aufbewahrung in 0, ln Salzsäure-Lösung während 24 Stunden bei Zimmertemperatur, nachdem die Tri  f ! uoracstatreste durch    Passieren einer Säule von     Ambert IR-4B (Acetat-Form)    gegen Acetat Reste ausgetauscht worden waren. Durch Lyophilisieren erhält man das   Heneikosapeptid in    Form des s   Octa-hydrochlorids,    Ausbeute   84 %.    Es zeigt eine grosse   Corticotropin-Wirkung.   



   Das   Dipeptidd'erivat, L-Valyl-Ns-t-butyloxycar-      bonyl-L-lysin-methylester, wird'folgendermassen her-    gestellt :
Carbobenzoxy-L-valin und   Ne-t-Butyloxycarbo-      nyl-L-lysin-methylester    (vgl. französische Patentschrift Nr.   1297 720, Beispiel    3) werden im Verhältnis 2, 51 g zu 2, 60 g in 50 ml Acetonitril gelöst und bei  -5  mit 2, 06 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt.



  Nach 3 Stunden hat sich 90 % des erwarbeten Dicyclo  hexylharnstoffs    ausgeschieden. Dieser wird abfiltriert, das Filtrat wird zur Trockene verdampft, der Rückstand wird in Essigester gelöst und mit verdünnter, kalter Salzsäure,   Kaliumcarbonatlösung und'Wasser    gewaschen. Nach   dlem    Trocknen mit Natriumsulfat und Verdampfen des Lösungsmittels werden 4, 0 g (81 %) Carbobenzoxy-L-valyl-N-t-N-butyloxycarbonyl  L-lysin-methylester    als   dickflüssiges Öl    erhalten.



   Die   Carbobenzoxygruppe    wird durch Hydrieren von 4, 0 g der obigen Verbindung in 100   mi    Methanol und 8   ml ! ln Salzsäure    in Gegenwart von 0, 5 g   10%-    iger Pd-Kohle-Katalysator abgespalten. Nach 40 Minuten wird beim Durchperlen von Wasserstoff kein Kohlendioxyd mehr entwickelt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat in Vakuum vorsichtig verdampft. Der Rückstand wird sofort mit 10   ml    Essigester und 10 ml   konz.      Kaliuscarbonatllösung    geschüttelt, wobei der freie Dipeptidester sich in der organischen Schicht   Töst.    Diese wird abgetrennt und mit festem Kaliumcarbonat getrocknet.

   Nach Verdampfen des   Essigesters    verbleibt der L-Valyl-N-t  butyloxycarbonyl-L-lysin-methylester    als dickflüssiges   01,    welches sofort weiterverarbeitet werden muss.



   Beispiel 2    1.    H-Lys (PZ)-OBzy, HCl
3, 84 g N-PZ-Lysin werden in 38 ml abs. Tetrahydrofuran aufgeschlämmt und während einer Stunde mit Phosgen behandelt bei   40 .    Die klare Lösung wird im Vakuum bei 40'verdampft, der kristallisierte Rückstand mit 20 ml abs. Benzylalkohol, enthaltend 0, 73 g   Salzsäure-Gas,    während 3 Minuten auf 60  erwärmt, wobei eine klare Lösung entsteht.



  Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird mit 60 ml abs.   Ather    versetzt, dabei kristallisiert das Hydrochlorid aus. Ausbeute : 4, 19 g =   82%    der Theorie, P.   188-190  unter    Zers. Zur Analyse wird aus   Methanol-Ather umkristallisiert.    F. 191  unter Zersetzung.



   In analoger Weise werden das   Nt-MZ-L-Lysin-      benzylester-hydrochlorid sowie das    entsprechende p  Nitrobenzylesterderivat      hergestellit.    Deren weitere Verarbeitung ist ganz analog der   des N-PZL-Lysin-      benzylester-hydrochlorids.   



  2. BOC-Val-Lys (PZ)-OBzy
2, 64 g   Ne-PZ-Lysin-benzylester-HCl    werden in Chloroform und wenig Methanol gelöst und bei   0     mit Kaliumcarbonatlösung ausgeschüttelt. Nach Trocknen mit Natriumsulfat wird das Lösungsmittel im Vakuum bei   40  verdampft,    der kristallisierte Rückstand zusammen mit 1, 12 g BOC-Valin in 14 ml Acetonitril gelöst und bei 0  mit 1, 17 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Nach Stehenlassen über Nacht bei 0  wird die dicke Fällung abgenutscht und mit eiskaltem Acetonitril gewaschen. Das Peptid wird mit dem Dicyclohexylharnstoff auskristallisiert.



  Durch Extraktion mit Dimethylformamid wird das Peptid vom Harnstoff getrennt, aus dem   Dimethyl-    formamid kristallisiert es nach Zugabe von Wasser aus. Ausbeute : 2, 50 g = 72 % ; F.   154-156 .   



   Zur Analyse wird aus Äthanol-Wasser   umkristalli-    siert. 



  3.   H-Val-Lys      (PZ)-OBzy,    HCl
2, 02 g   BOC-Valyl-Ns-PZ-lysin-benzylester    werden in 26 ml abs. Essigester gelöst, mit 40 ml 3, 3n Salzsäure in Essigester versetzt und 1 Stunde bei Raumtemperatur aufbewahrt. Beim Verdampfen des Lösungsmittels am Vakuum bei 40  fällt das Hydrochlorid fest aus. Ausbeute : 1, 78 g = 97% ; F. 200 bis   201  unter Zersetzung.   



   Der   Dipsptidestsr    kann in der in Fig. 2 gezeigten Weise mit den weiteren Aminosäuren zum Henei  kosapeptid    kondensiert werden.



  4 BOC-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
2, 8 g   BOC-Pro-OH    werden in 17 ml abs.   Tetra-    hydrofuran und 1, 8   ml Triäthylamin gelöst    und bei -15  mit 1, 6 ml Pivaloylchlorid versetzt. 15 Minuten wird bei - 15  rührengelassen. In der Zwischenzeit wird aus 7, 93 g   H-Val-Lys      (PZ)-OBzy,      HCI    in Dimethylformamid und Triäthylamin das   H-Val-Lys-      (PZ)-OB    hergestellt und   diese Losung    zum obigen gemischten Anhydrid gegeben. Man bewahrt die   Mi-    schung über Nacht bei 0  auf, verdünnt dann mit Essigester und schüttelt bei 0  mit verdünnter Salzsäure und Natriumbicarbonatlösung aus.

   Nach Verdampfen des Lösungsmittels wird der Rückstand aus   Athanol-Wasser    umkristallisiert. Ausbeute 8, 8 g gleich 88 % der Theorie ; F.   123-125 .   



  5. H-Pro-Lys (PZ)-OBzy,   HC1   
Das   Tripeptidderivat    wird durch Decarbobenzoxylierung wie unter 3. beschrieben erhalten. Nach Umkristallisieren aus Methanol-Ather schmilzt die Substanz bei   218-219 .   



  6. BOC-Arg   (Zs)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
1, 15 g   N-BOC-Ne--Di-carbobenzoxy-L-arginin    werden in 11   ml    abs. Tetrahydrofuran und 0, 29 ml Triäthylamin gelöst.   Bei-15  werden    0, 28 ml   Chlor-      kohlensäureisobutylester zugegeben    und 15 Minuten   bei-15     gerührt. Dazu gibt man eine Lösung von 1, 00 g H-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy,   lIC1    in 4 ml abs.



  Dimethylformamid und 0, 2 ml Triäthylamin. Nach einstündigem Rihren bei 0  wird über Nacht bei   0  aufbewahrt,    dann mit Essigester   verdUnnt,    bei 0  mit Salzsäure und Natriumhydrogencarbonat gewaschen, getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum verdampft. Der   Na-BOC-NE-Dicarbobenzoxy-      Arg-Pro-Val-Lys (PZ)-benzylester besteht    aus einem   festen, nichlt kristalqisierbaren    Schaum. Ausbeute : 1, 69 g =   100%    der Theorie.



   Das Produkt ist dünnschichtchromatographisch einheitlich im System Chloroform-Aceton (7 : 3) Rf 0, 53 und   Benzol-Aceton      (1    : 1) Rf 0, 67.



  7.   H-Arg (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
1, 2 g   BOC-Tetrapeptid    werden mit 7, 5 ml Trifluoressigsäure 10 Minuten stehengelassen ; nach Verdampfen   der Trifliuoressigsäure    wird das   O1    in Chlo  roform    gelöst, bei   0  mit Wasser    und d'ann mit Kaliumcarbonatlösung gewaschen, getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum verdampft. Man erhält 990 ml   =    90% der Theorie eines festen orangen Schaums. Die Substanz ist   diinnschichtchromato-    graphisch einheitlich ; im System Benzol-Aceton (1 :   1)    Rf   0,    09 und   Dioxan-Wass, er (9 : 1)    Rf 0, 71.



  8. BOC-Arg (Zz)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
Das obige   Pentapeptidderivat    wird aus 1, 72 g BOC-Arg   (Zs)    und 2, 175 g H-Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy in analoger Weise wie unter 6.   beschrie-    ben hergestellt. Ausbeute : 3, 12 g = 97 % der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm : in   Benzol-Acetat    (1 :   1)    Rf 0,   71    ; in   Chloroform-Aceton    (7 : 3) Rf 0, 57.



  9. H-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
Aus obigem 3, 12 g BOC-Pentapeptidderivat wird die   BOC-Gruppe    in gleicher Weise wie unter 7. beschrieben abgespalten. Ausbeute : 2, 90 g =   99%    der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm :   Einheitldch.    Rf 0, 48 in   Benzo1LAceton    (1 : 1) und 0, 18 in Chloroform Aceton (7 : 3).



  10. BOC-Lys (Z)-Arg   (Z2)-Arg      (Z2)-Pro-Val-   
Lys (PZ)-OBzy
587 mg des unter 9. beschriebenen Produkts werden mit 235 mg BOC-Lys (Z)-OH, in analoger Weise wie unter 6. beschrieben, umgesetzt. Das Rohprodukt wird aus Tetrahydrofuran-Äther umgefällt. Ausbeute : 725 mg = 100% der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm : In   Benzol-Aceton    (1 :   1)    Rf 0, 68, in   Chloroform-Aceton    (7 : 3) Rf 0, 36.



     11. H-Lys (Z)-Arg    (Z2)-Arg (Z2)-Pro-Val
Lys (PZ)-OBzy
Aus 614 mg   BOC-Hexapeptid    wird in analoger Weise wie unter   7.    beschrieben die BOC-Gruppe abgespalten. Ausbeute : 574 mg = 99 %.



   Dünnschichtchromatogramm :   Benzol-Aceton      (1    :   1)    Rf 0, 38 ; Chloroform-Aceton (7 : 3) Rf 0, 11.



  12. BOC-Lys   (Z)-Lys    (Z)-Arg (Z2)-Arg (Z2)
Pro-Val-Lys   (PZ)-OBzy   
3, 26 g H-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys-      (PZ)-OBzy    und 1, 19 g BOC-Lys   (Z)-Nitrophenyl-    ester werden in 7 ml abs. Tetrahydrofuran über Nacht bei   40     gerührt. Die dicke Mischung wird in wenig Dimethylformamid gelöst   und in 300    ml   Ather-Petroläther      (2    :   1)    eingetropft. Man saugt die Fällung ab und wäscht gut mit Ather. Ausbeute : 3, 45 g = 88%.



   Dünnschichtchromatogramm : Benzol-Aceton (1 :   1)    Rf 0, 57 einheitlich ;   Chloroform-Aceton    (7:3) Rf 0, 22 einheitlich.



  13. H-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-   
Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus   d ! em    obigen 3, 45 g   Peptidderivat    spaltet man die BOC-Gruppe wie unter 7. beschrieben ab. Ausbeute : 3, 20 g =   97 % der Theorie.   



   Dünnschichtchromatogramm : Benzol-Aceton (1 :   1)    Rf 0, 32 ;   Chloroform-Aceton    (7 : 3) Rf 0, 09.



  14.   BOC-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2-Arg   (Z2)-   
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus obigen 3, 20 g Heptapeptidderivat und   686    mg   BOC-Val-Gly-OH    wird nach dem unter 6. beschriebenen Verfahren der geschützte Nonapeptidester hergestellt. Er wird durch Umfällen aus Di   methylformamid/Atber      gemeinigt.    Ausbeute : 2, 92 g gloich 81 % der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm :   Benzol-Aceton      (1    : 1) Rf 0, 34 ; Dioxan Rf 0, 72.



   Das BOC-Val-Gly-OH wird folgendermassen hergestellt :
Aus 5 g   BOC-Valin    und 3, 54 g   Gycinäthyl-    esterhydrochlorid wird nach der unter 4.   beschrie-    benen Methode   BOC-Val-Gly-OEt    hergestellt. Ausbeute : 4, 45 g =   64%    der Theorie ; F.   95-96  nach    Kristallisation aus Ligroin.



   4, 3 g des Athylesters werden in 80   ml    Dioxan mit 32 ml   0,    5n Natronlauge während 30 Minuten verseift. Nach Einengen   des Lösungsmittels über-    schichtet man mit Essigester, säuert bei   0  mit konz.   



  Salzsäure an und extrahiert mit Essigester. Nach   Neutralwaschen und Verdampfen hinterbleiben    3, 90 g eines Harzes gleich 100 der Theorie.



   Das   Dicyclohexylaminsalz    davon kristallisiert bei F.   167-169 .   



   15. H-Val-Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg (Z2)
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 2, 92 g des   BOC-Nonapeptidesters    wird wie unter 7. beschrieben die BOC-Gruppe abgespalten.



  Ausbeute : 2, 54 g = 91   %    der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm :   Chloroform-Metha-    nol (9 : 1) Rf 0, 4.



  16. BOC-Pro-Val-Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-   
Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
2, 985 g   Nonapeptidester    werden mit 466 mg   BOC-Prdlin    nach der unter   6.    beschriebenen Methode umgesetzt. Das erhaltene Rohprodukt wird aus Di   methylformamid-Ather-Petroläther umgefällt. Aus-    beute : 2, 70 g = 83 % der Theorie.



   Dünnschichtchromatogramm :   Chloroform-Metha-    nol (9 : 1) Rf 0, 9.



  17.   H-Pro-ValLGly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-   
Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
2, 30 g   BOC-Dekapeptidester    werden wie unter 5. beschrieben mit Trifluoressigsäure behandelt. Ausbeute : 2, 108 g =   96 %    der Theorie.



   Da die Dünnschichtchromatographie infolge der abnehmenden Loslichkeit nur noch schwierig durchzuführen ist, wird folgende Methode zur   Reinheits-    prüfung verwendet :
Einige mg der obigen Substanz werden in Di  methylformamid gelöst, mit 1 Tropfen Triäthylamin    und einigen mg 2,   4-Dinitrofluorbenzol    versetzt. Nach Stehen über Nacht bei Zimmertemperatur wird das s   Dinitrophenylpeptid    mit Ather ausgefällt,   abzentm-    fugiert und mit Salzsäure total hydrolysiert. Die Dinitrophenylaminosäuren werden chromatographisch untersucht. Es wurde nur   ätherlösliches      Dinitrophe-    nyl-prolin gefunden.



  18.   BOC-Lys (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)
Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
2, 10 g   Dekapepttdester    und   700    mg BOC-Lys (Z) Nitrophenylester werden in 5 ml Dimethylformamid 2 Tage bei Zimmertemperatur und 12 Stunden bei   45     aufbewahrt. Durch Eintropfen in 250 ml Ather wird das   Undekapeptidesterderivat    gefällt. Ausbeute : 2, 255 g = 93   %.   



     19.    H-Lys   (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)
Arg(Z2)-Arg(Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Das obige Produkt wird entsprechend der unter 7. beschriebenen Methode behandelt. Ausbeute : 2, 08 g gleich 96 % der Theorie.



   Dinitrophenylierung : Ausgeführt wie unter 17. beschrieben. Bei diesem Versuch werden keine   äther-      löhslichen Dinitrophenylaminosäuren    erhalten, es wird einzig das   wasserlösliche a-Dinitrophenyl-lysin    gefunden.



  20. BOC-Gly-Lys   (Z)-Pro-Val-Gl ! y-Lys    (Z)-Lys (Z)
Arg   (Z2)-Arg      (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
1, 68 g des unter 19. erhaltenen Produkts werden mit 230 mg   BOC-Glycin    nach der unter 6. beschriebenen Methode umgesetzt. Ausbeute : 1, 725 g gleich 97 % der Theorie.



  21.   H-Gly-Lys    (Z)-Pro-Val-Gly-Lys   (Z)-Lys      (Z)-@   
Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys      (PZ)-OBzy   
1, 725 g   BOC-Dodekapeptidester    werden nach der unter 7. beschriebenen Methode behandelt. Ausbeube : 1, 592 g =   96% der Theorie.   



     Dinitrophenylierung    : Es wird nur   ätherlösliches    Dinitrophenyl-glycin gefunden, keine wasserlöslichen Dinitrophenylaminosäuren.



  22. BOC-Try-Gly-Lys (Z)-Pro-Val-Gly-Lys (Z)
Lys   (Z)-Arg    (Z2)-Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
3, 85 g Dodekapeptidesterderivat und 1, 12 g BOC Tryptophan werden nach der unter 6. beschriebenen Methode umgesetzt. Man reinigt das Produkt durch Umfällen aus   Dimcthylformamid-Ather.    Ausbeute : 4, 11 g geschützter   Tridekapeptidester    = 96% der Theorie.



  23.   H-Try-Gly-Lys      (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)
Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-Lys    (PZ)-OBzy
4, 0 g des obigen Produkts werden nach der unter 7. beschriebenen Methode behandelt. Ausbeute : 3, 86 g = 100% der Theorie.



  24. BOC-Arg   (Z2)-Try-Gly-Lys    (Z)-Pro-Val-Gly
Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-   
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Die obigen 3, 86 g   Peptidfester    werden mit 2, 37 g BOC-Arg (Z2)-OH nach der unter 6. beschriebenen Methode umgesetzt. Man fällt aus   Dimethylformamid-    Ather um. Ausbeute : 4, 40 g geschützter Tetrade  kapeptidester    = 96 % der Theorie.



  25. H-Arg (Z2)-Try-Gly-Lys(Z)-Pro-Val-Gly
Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-Val-   
Lys (PZ)-OBzy
4, 30 g der obigen   BOC-Verbindung    werden wie unter 7. beschrieben behandelt. Ausbeute : 4, 15 g gleich 99   %    der Theorie.



   Dinitrophenylierung : Chromatographisch wird nur wasserlösliches   Dnnitrophenyl-arginin    gefunden.



  26. BOC-Phe-Arg   (Z2)-Try-Gly-Lys      (Z)-Pro-Val-   
Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-Arg      (Z2)-Pro-   
Val-Lys   (PZ)-OBzy    
Aus 4, 15 g des obigen Produkts und 2, 14 g BOC  Phenylalanin-p-nitrophenylester    wird nach der unter 18. beschriebenen Methode 4, 25 g geschützter Pentadekapeptidester = 95 % der Theorie erhalten.



  27. H-Phe-Arg (Z2)-Try-Gly-Lys   (Z)-Pro-Val-   
Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-Pro-   
Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 4, 18 g obiger   BOC-Verbindung    werden nach der unter 7. beschriebenen Methode 4, 14 g Penta  dekapeptidtesterderivat      =    102 % der Theorie erhalten.



   Dinitrophenylierung : Es wird nur das ätherlösliche   Dinitrophenyl-phenylalanin    erhalten.



  28. BOC-His-Phe-Arg (Z)-Try-Gly-Lys (Z)-Pro
Val-Gly-Lys   (Z)-Lys    (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-   
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 4, 14 g des obigen Produkts und 1,   30 g    BOC Histidin werden nach der unter 6. beschriebenen Methode 4, 31 g   (=      97%    der Theorie) geschützter   Hexadekapeptidester erhalten.   



  29.   H-His-Phe Arg (Z2)-Try-Gly-Lys    (Z)-Pro-Val
Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-Arg (Z2)-Pro-   
Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus   4,    20 g der obigen   BOC-Verbindung    wird nach der unter 7. beschriebenen Methode 3, 90 g   BOC-freier    Hexadekapeptidester   =    95 % der Theorie erhalten.



  30. BOC-Glu   (OBzy)-His-Phe-Arg    (Z2)-Try-Gly
Lys   (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-   
Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus obigen 3, 90 g   und 1,    5 g   BOC-Glutamin-      säure-y-benzylester werden    nach der unter 6. beschriebenen Methode 3, 93 g des geschützten Hepta  dekapeptidesters    erhalten. Ausbeute 92 % der Theorie.



  31. H-Glu   (OBzy)-His-Phe-Arg      (Z2)-Try-Gly-Lys    (Z)
Pro-Val-Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-   
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 1, 954 g der obigen   BOC-Verbindung    werden nach der unter 7. beschriebenen Methode 1, 957 g BOC-freier   Heptadekapeptidester      (100% der Theorie)    erhalten.



     Dinitrophenylierung    : Es wird einzig   Dinitro-    phenylglutaminsäure gefunden.



  32.   BOC-Met-Glu    (OBzy)-His-Phe-Arg (Z2)-Try
Gly-Lys (Z)-Pro-Val-Gly-Lys (Z)-Lys (Z)
Arg   (Z2)-Arg    (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 2, 00 g des obigen Peptidesters und 752 mg   BOC-Methiomin    wird nach der unter 6. beschriebenen Methode der geschützte   Octadekapeptidester    hergestellt. Ausbeute : 1, 91 g = 90 % der Theorie.



  33. H-Met-Glu   (OBzy)-His-Phe-Arg      (Z2)-Try-Gly-   
Lys   (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-   
Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
1, 87 g des obigen Produkts werden nach der unter 7. beschriebenen Methode behandelt. Ausbeute :
1, 88 g   BOC-freier Octadekapeptidester    = 100% der Theorie.



  34. BOC-Ser (Bzy)-Met-Glu (OBzy)-His-Phe
Arg (Z2)-Try-Gly-Lys   (Z)-Pro-Val-Gly-Lys    (Z)
Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)
OBzy
1, 88 g des obigen Produkts und 797 mg BOC Serin (Bzy) werden nach der unter 6.   beschrie-    benen Methode umgesetzt. Ausbeute : 1, 847 g ge  schützter Nonadekapeptidester =92% der Theorie.   



  35. H-Ser   (Bzy)-Met-Glu      (OBzy)-His-Phe-Arg    (Z2)
Try-Gly-Lys   (Z)-Pro-Val ; Gly-Lys (Z)-Lys    (Z)
Arg (Z2)-Arg (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
Die Behandlung von 1, 826 g des obigen Produkts nach der unter 7. beschriebenen Methode liefert 1, 82 g BOC-freien   Nonadekapeptidester    = 100 % der Theorie.



  36. BOC-Tyr (Bzy)-Ser (Bzy)-Met-Glu (OBzy)-His
Phe-Arg   (Z2)-Try-Gly-Lys    (Z)-Pro-Val-Gly-Lys (Z)
Lys   (Z)-Arg (Z2)-Arg    (Z2)-Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
1, 82 g des obigen Produkts werden mit 1075 mg BOC-Tyrosin (Bzy) nach der unter 6.   beschriebe-    nen Methode umgesetzt. Ausbeute : 1, 90 g geschützter Eikosapeptidester = 96 % der Theorile.



  37. H-Tyr (Bzy)-Ser   (Bzy)-Met-Glu      (OBzy)-His-       Phe-Arg      (Z2)-Try-Gly-Lys    (Z)-Pro-Val-Gly
Lys (Z)-Lys (Z)-Arg   (Z2)-Arg      (Z2)-Pro-Val-   
Lys (PZ)-OBzy
1, 885 g der obigen   BOC-Verbindung    werden nach der unter 7. beschriebenen Methode behandelt. Ausbeute : 1, 91 g   BOC-freier Eikosapeptidester    gleich    100%    der Theorie.



  38. BOC-Ser (Bzy)-Tyr   (Bzy)-Ser      (Bzy)-Met-   
Glu (OBzy)-His-Phe-Arg (Z2)-Try-Gly-Lys (Z)
Pro-Val-Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg   (Z2)-   
Pro-Val-Lys (PZ)-OBzy
1, 91 g von obigem   Peptidester    und 825 mg BOC-Berin (Bzy) werden nach der unter 6. be  schriebenen    Methode umgesetzt. Ausbeute : 1, 903 g geschützter Heneikosapeptidester = 94 % der Theorie.



  39. H-Ser (Bzy)-Tyr (Bzy)-Ser   (Bzy)-Met-Glu    (OBzy)   His-Phe-Arg (Z2)-Try-Gly-Lys (Z)-Pro-Val-   
Gly-Lys (Z)-Lys (Z)-Arg (Z2)-Arg (Z2)-Pro
Val-Lys (PZ)-OBzy
Aus 1, 875 g der obigen   BOC-Verbindung    wird durch Behandlung mit Trifluoressigsäure, entsprechend der unter 7. beschriebenen Methode, die BOC Gruppe abgespalten. Das Rohprodukt wird durch   Losen in siedendem Alkohot    und Abkühlen pulvrig erhalten. Ausbeute : 1, 73 g =   94% der Theorie.   



  40.   H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-   
Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg
Pro-Val-Lys-OH
259 mg des unter 39. beschriebenen Produkts werden in   1    Liter flüssigem Ammoniak gerührt bis zur Lösung. Nun werden beim Siedepunkt des Ammoniaks kleine Natriumstückchen zugegeben bis zur bleibenden Blaufärbung. Das überschüssige Natrium wird mit Ammoniumacetat zersetzt und das Ammoniak verdampfen   l'assen.    Man löst den Rückstand in Wasser, wobei 55 mg gelbe, unlösliche Substanz zurückbleibt. Die wässrige Lösung wird lyophilisiert und   der Rückstand in U, ln Essigsäure durch präpa-    rative Hochspannungselektrophorese (700 V)   ge    reinigt. Die   Sakaguchi-positiven Fraktionen werden    vereinigt und lyophilisiert.

   Ausbeute : 75, 9 mg Hexaacetat. Sie zeigen   corticotrope    Wirkung.



   Die in den einzelnen Stufen verwendeten Aminosäurederivate werden wie folgt hergestellt : a)   N&alpha;-BOC-N#,      N#-Dicarbobenzoxy-L-arginin   
2, 82 g   N#,N#-dicarbobenzoxy-L-arginin    werden in 60 ml Dioxan und 60 ml Wasser mit 2, 8 g Magnesiumoxyd und 1, 77 ml   BOC-Azid    über Nacht bei 45  gerührt. Man dampft das Dioxan im Vakuum ab, versetzt die wässrige Lösung mit Essigester und säuert bei   0  mit    2n Salzsäure an. Der   Essigester-    extrakt wird nach dem Waschen mit Wasser   ein-    gedampft. Rückstand : 2,   70    g BOC-Arg (Z2) gleich 78 % der Theorie.



   Zur Reinigung wird das Produkt durch eine Säule von Silicagel (54 g) filtriert. Die mit   Chloro-      form-Essigester    (1 :   1)    eluierbare Substanz wird aus   Methanol-Wasser      umkrdstallisiert.    Ausbeute'2, 21 g gleich   64% der Theorie    ; F. 141-143 . b)   N-BOC-Ne-Carbobenzoxy-L-lysin-p-    nitrophenylester
12, 7 g BOC-Lys (Z)   und 5,    5 g   p-Ndtrophenol    werden in 65 ml Essigester gelöst und bei   0  mit    7, 6 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Nach 5 Stunden saugt man den Dicyclohexylharnstoff ab und verdampft den Essigester.

   Der   Rückstand wird dn    Me  thylenchlorid    gelöst und bei   0  mit    0, 5n Kaliumcarbonatlösung extrahiert. Nach Waschen mit Salzsäure und Wasser und Trocknen mit Natriumsulfat wird das Lösungsmittel verdampft und der Rückstand aus Athanol-Wasser umkristallisiert. Ausbeute : 16, 3 g BOC-Lys (Z)- % der Theorie ; F. 91,   5-92 .    c)   BOC-L-Histidin   
Zu einer Lösung von 19, 2 g   L-Histildin-HCl    in 100   mI    2n Natronlauge und 200 ml Dioxan werden bei   45  langsam    14, 6 ml BOC-Azid und 110 ml ln Natronlauge zugetropft.

   Nach Rühren über Nacht wird das Dioxan im Vakuum eingedampft,   die wäss-    rige Lösung mit Essigester extrahiert und dann im Vakuum auf wenige ml eingeengt. Man überschichtet die Lösung mit Butanol, säuert bei   0     mit   Schwefel-    säure an und extrahiert mehrmals mit Butanol. Die   Butanol-Auszüge hinterlassen    nach dem Verdampfen des Lösungsmittels 15, 1 g = 59 % der Theorie eines Harzes des BOC-His, das   papierchromatographisch    einheitlich ist.

   Es wird noch durch Umfällen aus Äthanol-Äther gereinigt, wobei ein sehr   hygrosko-    pisches, amorphes Pulver erhalten wird. d)   BOC-L-Glutaminsäure-y-benzylester   
Eine Suspension von 6, 9 g   L-Glutaminsäure-y-    benzylester n 50 ml Dioxan wird mit 4, 45   ml    BOC Azid versetzt. Bei   45     wird unter Rühren eine Lösung von 6, 1 g Kaliumhydrogencarbonat in 50 ml Wasser zugetropft. Die Aminosäure geht dabei langsam in Lösung. Nach Rühren über Nacht verdampft man das Dioxan im Vakuum, extrahiert dib wässrige Lösung mit Essigester, säuert dann bei   0     mit   Sali-    säure an und extrahiert mit Essigester.

   Nach Waschen mit Wasser werden die Essigesterauszüge mit Na  triumbicarbonatlösung    (5   %)    und Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand besteht aus einem nicht kristallisierenden Öl. Ausbeute 7, 9   g    BOC-Glu (OBzy) = 81 % der Theorie.



   Das   Dicyclohexylaminsalz    kristallisiert praktisch quantitativ aus Ather oder Essigester und wenig   Petroläther.    F.   145-146 .    e) BOC-L-Phenylalanin-p-nitrophenylester
6, 2 g BOC-L-Phenylalanin, 3, 9 g   p-Nitrophenol    und 25 ml abs. Essigester werden bei 0  mit 5, 3 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Man lässt über Nacht bei   0  stehen. Durch, schwaches Erwärmen    wird der auskristallisierte Nitrophenylester in Lösung gebracht, dann der Dicyclohexylharnstoff abgenutscht und d'as Filtrat im Vakuum zur Trockene verdampft.



  Nach Umkristallisieren aus Äthanol werden 6, 1 g gleich 69 % der Theorie an Nitrophenylester vom F.



     130-132  erhalten.    Das analysenreine Produkt schmilzt bei   135 .    f) BOC-O-Benzyl-L-serin
10, 8 g O-Benzyl-L-serin-methylester-D-hydrogentartrat werden mit 23 ml 4n Natronlauge versetzt.



  Nach 15 Minuten wird die erhaltene Lösung mit Eisessig auf pH 6 gestellt. Man saugt das auskristal  lisierte    O-Benzyl-L-serin ab und wäscht es mit Was  ser.    Ausbeute : 4, 95 g =   84%    der Theorie. Dieses Produkt wird in 25, 4 ml In Natronlauge und 25 ml Dioxan gelöst, bei   45     mit 3, 88 ml   BOC-Azid und    langsam mit 28 ml In Natronlauge versetzt. Nach Rühren über Nacht verdampft man das Dioxan im Vakuum, extrahiert die wässrige Lösung mit   Essig-    ester, säuert dann bei   0     mit Salzsäure an und extrahiert wieder mit Essigester.

   Die Essigesterauszüge werden im Vakuum eingeengt, mit 4, 2 ml Dicyclohexylamin   versetzt, mit Petroläther zur    Kristalilisation gebracht und das Salz abgenutscht. Ausbeute : 8, 2 g   Dicyclohexylaminsalz = 68    % der Theorie ; F.   134-135 .   



   Das   Dicyclohexylaminsalz    wird warm in Wasser gelöst, mit Essigester überschichtet, auf 0  gekühlt und mit 2n Salzsäure angesäuert. Die Essigesterlösung wird nochmals mit Salzsäure, dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und verdampft. BOC-O-Benzyl-L-serin bildet ein Öl. Die Ausbeute ist quantitativ.

Claims (1)

  1. PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung neuer Heneikosapep- tide der Formel L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L- glutaminyl-(oder glutamyl)-L-histidyl-L- phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl- L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-proliyl-L- valyl-L-lysin, dadurch gekennzeichnet, dass man die Aminosäuren L-Serin, L-Tyrosin, L-Serin, L-Methionin, L-Glutamin oder L-Glutaminsäure, L-Histidin, L-Phenyl- alanin, L-Arginin, L-Tryptophan, Glycin, L-Lysin, L-Prolin, L-Valin, Glycin, L1Lysin, L-Lsysin L Arginin, L-Arginin, L-Prolin, L-Valm und L,
    Lysin in der angegebenen Reihenfolge unter intermediärem Schutz von Amino-bzw. Carboxylgruppen miteinander vereinigt.
    UNTERANSPRUCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man das Nonadekapeptid L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L- glutaminyl- (oder gliutamyl)-L-histidyl-L- phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl- glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valylLglycyl-L lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolin, dessen a.-Aminogruppe und e-Aminogruppen geschützt sind, mit dam Dipeptidester L-Valyl-L-lysin- ester, dessen #-Aminogruppe geschützt ist, in Gegen- wart eines Carbodiimids kondenstert und in dem erhaltenen Heneikosapeptid die geschützten Gruppen in Freiheit setzt.
    2. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man das Heneikosapeptid durch stufenweise Vereinigung der einzelnen Aminosäuren vom Carboxylende her, über das Dipeptidderivat L-Valyl-L-lysin-ester mit geschützter #-Aminogruppe herstellt.
    3. Verfahren nach Patentanspruch oder den Unteransprüchen 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man die freien Aminogruppen durch den tert. Butyloxycarbonylrest schützt.
    4. Verfahren nach Unteranspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als Dipeptidderivat den L-Valyl-paraphenylazo-benzyloxycarbonyl-L lysin-benzylester verwendet.
    5. Verfahren nach Patentanspruch oder Unter- anspruch 1, dadurch gekenn ichnet, dass man tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L- seryl-L-methionyl-L-glutaminyl-L histidyl-L-phenylalanyl'-L-arginyl-L- tryptophyl-glycyl-N-tert.-butyloxycarbonyl- L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-N-#-tert. butyloxycarbo, nyl-L-lysyl-NE-tert.- butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L arginyl-L-prolin mit L-Valyl-N-tert.-butylbxycarbonyl-L-lysin-methyl- ester in Gegenwart eines Carbodiimids kondensiert.
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