Zusatzpatent zum Hauptpatent Nr. 338 447 Verfahren zur Herstellung von Dehydroverbindungen der Steroidreihe Im Patent Nr. 338 447 wird ein Verfahren zur Herstellung von 1,2-Dehydrosteroiden beansprucht, wonach in 1,2-Stellung gesättigte Steroide der aeroben Einwirkung von Enzymen von Calonectria decora, Al ternaria passiflorae,
Ophiobolus heterostrophus oder Ophiobolus miyabeanus unterworfen werden.
Es wurde nun gefunden, dass man 1,2-Dehydro- oder 1,2;4,5-Bisdehydrosteroide auch dadurch erhal ten kann, wenn man in 1,2-Stellung oder in 1,2- und 4,5-Stellung gesättigte Steroide der aeroben Einwir kung von Enzymen von Pilzen der Gattung Didymella unterwirft. Diese Pilzgattung gehört der Ordnung Sphaeriales an.
Besonders gute, in vielen Fällen an nähernd quantitative Ausbeuten an 1,2-Dehydrover- bindungen bzw. 1,2;4,5-Bisdehydroverbindungen wer den mit Didymella lycopersici erzielt.
Als Ausgangsstoffe können die im eingangs ge nannten Hauptpatent angeführten Steroide verwendet werden. Ihre Umsetzung mit den erfindungsgemäss zu verwendenden Didymellaenzymen sowie die Isolie rung der Verfahrensprodukte und gegebenenfalls die Veresterung erhaltener Oxysteroide kann analog der Angaben des nämlichen Hauptpatents erfolgen.
In den folgenden Beispielen sind die Temperatu ren in Celsiusgraden angegeben.
<I>Beispiel 1</I> 2 g Natriumnitrat, 1 g prim. Kalium-ortho-phos- phat, 0,5g Magnesiumsulfat-heptahydrat, 0,5g Ka- liumchlorid, 50 g Glucose und 1 g Difco-Hefeextrakt werden in 1 Liter Leitungswasser gelöst, durch Zu satz einer Natriumhydroxyd-Lösung auf pH 5 ge bracht und sterilisiert.
Die erhaltene Nährlösung be- impft man mit 50 cm3 einer 4 Tage alten Schüttelkul tur von Didymella lycopersici und schüttelt sie 48 Stunden bei 27 , wobei sich die Kultur gut entwik- kelt. Dann wird unter sterilen Bedingungen eine Lö sung von 250 mg Cortexon in 10 cm3 Aceton zugege ben. Man schüttelt weitere 2 Tage bei 27 , putscht dann das Mycel ab, wäscht es mit Wasser und Essig ester und extrahiert die vereinigten Filtrate mit Essig ester.
Die Essigester-Lösungen wäscht man mit Was ser, trocknet sie und dampft sie im Vakuum ein, wo bei sich der erhaltene kristalline Rückstand bei der papierchromatographischen Untersuchung im System Bush B3 [Benzin-Ligroin :Benzol :Methanol :Wasser (6,67:3,33:8,0:2,0)]als fast reines 1-Dehydrocortexon erweist. Zur Reinigung lässt man es in Chloroformlö- sung durch eine Schicht Silicagel laufen. Das Chloro- form-Filtrat enthält wenig dünnflüssiges Öl.
Die wei teren, mit Chloroform unter Zusatz von 1 bis 3 % ter- tiär-Butanol erhaltenen Filtrate vereinigt man und dampft sie ein. Der Rückstand liefert, aus einem Ace- ton-Isopropyläther-Gemisch umkristallisiert 220 mg 1-Dehydrocortexon vom F.
= 189-195 (Zers.). <I>Beispiel 2</I> Zu 1 Liter einer gut entwickelten, wie im Beispiel 1 dargestellten Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 250 mg Cortison in 10 cm3 Methanol und lässt 72 Stunden bei 27 schütteln, wonach die Kultur-Flüssigkeit wie in Beispiel 1 angegeben,
aufgearbeitet wird. Auf Grund der papierchromatographischen Untersuchung im System Propylenglykol-Toluol enthält der Rück stand der Essigester-Extrakte als Steroidanteil prak tisch ausschliesslich 1-Dehydrocortison. Man filtriert den Rückstand in Chloroform-Lösung durch Silicagel. Die Chloroform-Filtrate geben wenig dünnflüssiges Öl.
Mit Chloroform-Aceton (6:4) erhält man einen kristallinen Rückstand, der aus einem Aceton-Äther- Gemisch umkristallisiert 225 mg reines 1-Dehydro- cortison vom F. = 231-234 liefert. <I>Beispiel 3</I> Zu 1 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 hergestellten Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 250 mg Hydrocortison in 10 cmg Methanol. Nach 10 tägigem Schütteln bei 27 wird die Kultur wie in Bei spiel 1 angegeben aufgearbeitet.
Der Rückstand der Essigester-Lösungen erweist sich im Papierchromato- gramm (System Propylenglykol-Toluol) als fast reines 1-Dehydro-hydrocortison. Zur Abtrennung von Be- gleitsubstanzen nimmt man ihn in Chloroform auf und filtriert die Lösung durch Silicagel. Die Chloro- form-Eluate, die eine kleine Menge eines dünnflüssi gen öls enthalten, werden verworfen.
Die Chloro- form-Aceton-(1:1)-Eluate vereinigt man und dampft sie ein. Der Rückstand wird aus Methanol oder einem Aceton-Äther-Gemisch umkristallisiert, wobei 2l0 mg reines 1-Dehydro-hydrocortison vom F. = 238-241 erhalten werden.
<I>Beispiel 4</I> Zu 120 ml einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 30 mg 3,11,20-Triketo-17a,21-dioxy-allopregnan in 2 ml Methanol. Man lässt 10 Tage bei 27 schütteln und arbeitet die Kultur, wie in Beispiel 1 angegeben, auf.
Der Rückstand der Essigesterextrakte enthält auf Grund der papierchromatographischen Untersuchung im System Propylenglykol-Toluol neben unveränder tem Ausgangsmaterial 1-Dehydrocortison, das durch Chromatographie an Silicagel und anschliessende Kri stallisation aus einem Aceton-Äther-Gem1SCh in reiner Form gewonnen wird.
<I>Beispiel 5</I> Auf analoge Weise erhält man aus Progesteron, Pregnan-3,20-dion, Corticosteron, 11-Dehydro-corti- costeron, 17a-Oxy-cortexon, Testosteron oder 44 Androsten-3,17-dion die entsprechenden 41;
4-Diene. <I>Beispiel 6</I> 2 g Natriumnitrat, 1 g prim. Kalium-ortho-phos- phat, 0,5g Magnesiumsulfatheptahydrat, 0,5g Ka- liumchlorid, 50 g Glucose und 1 g Difco-Hefeextrakt werden in 1 Liter Leitungswasser gelöst,
durch Zusatz einer Natriumhydroxydlösung auf pH 5 gebracht und sterilisiert. Die erhaltene Nährlösung beimpft man mit 50 ml einer 4 Tage alten Schüttelkultur vonDidymella lycopersici und schüttelt sie 48 Stunden bei 27 , wo bei sich die Kultur gut entwickelt. Zu 120 ml dieser Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter ste rilen Bedingungen eine Lösung von 30 mg 9a-Fluor- hydrocortison in 2 ml Methanol.
Man lässt 5 Tage bei 27 schütteln, nutscht dann das Mycel ab, wäscht es mit Wasser und Essigester und extrahiert die vereinig ten Filtrate mit Essigester. Die Essigesterlösungen wäscht man mit Wasser, trocknet sie und dampft sie im Vakuum ein. Der Extraktionsrückstand enthält auf Grund der papierchromatographischen Untersu chung 1-Dehydro-9a-fluor-hydrocortison, das mittels eines präparativen Papierchromatogramms (System Propylenglykol-Toluol) vom unveränderten Ausgangs material abgetrennt wird.
Das Rohprodukt wird zur Identifizierung im Hochvakuum getrocknet und mit 4 ml Pyridin-Essigsäureanhydrid-(1:1)-Gemisch in üb licher Weise bei Zimmertemperatur acetyliert. Das er haltene 21-Acetat des 1-Dehydro-9a-fluor-hydrocorti- sons wird aus einem Aceton-Petroläther-Gemisch um kristallisiert und schmilzt bei 235-237 .
<I>Beispiel 7</I> 2 g Natriumnitrat, 1 g prim. Kalium-ortho-phos- phat, 0,5g Magnesiumsulfat-heptahydrat, 0,5g Ka- liumchlorid, 50 g Glucose und 1 g Difco-Hefeextrakt werden in 1 Liter Leitungswasser gelöst, durch Zu satz einer Natriumhydroxydlösung auf pH 5 gebracht und sterilisiert.
Die erhaltene Nährlösung beimpft man mit 50 ml einer 4 Tage alten Schüttelkultur von Didymella lycopersici und schüttelt sie 48 Stunden bei 27 , wobei sich die Kultur gut entwickelt. Zu 120 ml dieser Kultur von Didymella lycopersici gibt man un ter sterilen Bedingungen eine Lösung von 30 mg 9,llss-Oxido-17a-oxy-cortexon-21-acetat in 2 ml Me thanol. Man lässt 5 Tage bei 27 schütteln, nutscht dann das Mycel ab, wäscht es mit Wasser und Essig ester und extrahiert die vereinigten Filtrate mit Essig ester.
Die Essigesterlösungen wäscht man mit Wasser, trocknet sie und dampft sie im Vakuum ein. Der Ex traktionsrückstand enthält auf Grund der papierchro- matographischen Untersuchung 1-Dehydro-9,llss- oxido-17a-oxy-cortexon, das mittels eines präparati- ven Papierchromatogramms (System Propylenglykol- Toluol) von unverändertem Ausgangsmaterial abge trennt wird.
Das Rohprodukt wird im Hochvakuum getrocknet und mit 4 ml Pyridin-Essigsäureanhydrid- (1:1)-Gemisch in üblicher Weise bei Zimmertempe ratur acetyliert.
<I>Beispiel 8</I> Zu 2 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 500 mg 44-3,11,20-Trioxo-17a-methyl-21-acetoxy- pregnen in 15 ml Aceton. Man lässt 3 Tage lang bei 27 schütteln und arbeitet dann, wie in Beispiel 1 be schrieben, auf.
Der Extraktionsrückstand (585 mg) besteht auf Grund der papierchromatographischen Untersuchung praktisch nur aus d1.4-3,11,20-Trioxo- 17a-methyl-21-oxy-pregnadien. Durch Kristallisation aus einem Aceton-Petroläther-Gemisch wird es in Na deln gewonnen, dieb ei 183-l86 unter leichter Zer setzung schmelzen. [a]n = + l20 (Alkohol), UV.- Absorption: A"," 240 my. (E = 14600).
Das IR.- Spektrum zeigt die für 414-3-Ketone charakteristi schen Banden bei 5,98,u, 6,131s. und 6,21,u. <I>Beispiel 9</I> Zu 4 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 1 g 17a-Äthinyl-testosteron in 25 ml Aceton. Man lässt 8 Tage lang bei 27 schütteln und arbeitet dann die Kultur gemäss den Angaben in Beispiel 1 auf.
Die papierchromatographische Untersuchung des Extrak tionsrückstandes zeigt, dass er praktisch nur aus 1-De- hydro-17a-äthinyl-testosteron besteht. Durch Kristal lisation aus einem Aceton-Äther-Gemisch wird die reine Substanz erhalten. F. 228-233 . [a]D = -17 (Chloroform).
<I>Beispiel 10</I> Zu 2 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 180 mg 6-Dehydro-cortexon-21-acetat in 10 ml Ace ton und lässt dann 3 Tage lang bei 27 schütteln. Dann wird die Kultur, wie in Beispiel 1 beschrieben, aufgearbeitet. Der Extraktionsrückstand (190 mg) be steht gemäss papierchromatographischerUntersuchung praktisch ausschliesslich aus freiem 1,6-Bis-d'ehydro- cortexon, das aus Aceton-Äther-Gemischen kristalli siert wird.
Im IR: Spektrum finden sich die für die 41,4-3-Ketone charakteristischen Banden bei 5,98,u, 6,13,u. und 6,22,u.
<I>Beispiel 11</I> Zu 4 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 1 g 11-Dehydro-progesteron in 20 ml Aceton. Man lässt 8 Tage bei 27 schütteln und arbeitet dann, wie in Beispiel 1 beschrieben, auf. Im Extraktionsrück stand kann mittels papierchromatographischer Unter suchung ausschliesslich das 1,11-Bis-dehydro Progeste ron nachgewiesen werden. Es wird aus einem Aceton- Petroläther-Gemisch in kristalliner Form erhalten und zeigt im IR.-Spektrum u. a.
Banden bei 5,98,u, 6,14,u und 6,22,u.
<I>Beispiel 12</I> Zu 2 Liter einer gut entwickelten, wie in Bei spiel 1 erhaltenen Kultur von Didymella lycopersici wird unter sterilen Bedingungen eine Lösung von 500 mg 17a-Methyl-testosteron in 15 ml Aceton ge- geben. Man lässt 3 Tage bei 27 schütteln und arbei tet dann die Kultur gemäss den Angaben in Beispiel 1 auf. Der Extraktionsrückstand wird in wenig Aceton gelöst. Bei der Zugabe von Äther wird das 1-Dehy- dro-17a-methyl-testosteron in derben Kristallen er halten. F. 163-164 . [a]j) = 0 (Chloroform).
Additional patent to main patent no. 338 447 Process for the production of dehydro compounds of the steroid series In the patent no. 338 447 a process for the production of 1,2-dehydrosteroids is claimed, according to which steroids saturated in the 1,2-position of the aerobic action of enzymes of Calonectria decora , Al ternaria passiflorae,
Ophiobolus heterostrophus or Ophiobolus miyabeanus.
It has now been found that 1,2-dehydro- or 1,2- 4,5-bisdehydrosteroids can also be obtained by saturating in the 1,2-position or in the 1,2- and 4,5-positions Steroids subjected to aerobic action by enzymes from fungi of the genus Didymella. This genus of mushrooms belongs to the order Sphaeriales.
Particularly good, in many cases almost quantitative yields of 1,2-dehydro compounds or 1,2; 4,5-bisdehyde compounds are achieved with Didymella lycopersici.
The steroids listed in the main patent mentioned at the outset can be used as starting materials. Their implementation with the didymella enzymes to be used according to the invention and the isolation of the products of the process and, if appropriate, the esterification of oxysteroids obtained can be carried out analogously to the information in the same main patent.
In the following examples, the temperatures are given in degrees Celsius.
<I> Example 1 </I> 2 g sodium nitrate, 1 g prim. Potassium orthophosphate, 0.5 g magnesium sulfate heptahydrate, 0.5 g potassium chloride, 50 g glucose and 1 g Difco yeast extract are dissolved in 1 liter of tap water and brought to pH 5 by adding a sodium hydroxide solution and sterilized.
The nutrient solution obtained is inoculated with 50 cm3 of a 4-day-old shaking culture of Didymella lycopersici and shaken for 48 hours at 27, the culture developing well. Then a solution of 250 mg of cortexone in 10 cm3 of acetone is added under sterile conditions. It is shaken for a further 2 days at 27, then the mycelium is washed off, washed with water and ethyl acetate and the combined filtrates are extracted with ethyl acetate.
The ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in vacuo, where the crystalline residue obtained is found in the paper chromatographic analysis in the Bush B3 system [petrol-ligroin: benzene: methanol: water (6.67: 3 , 33: 8.0: 2.0)] turns out to be almost pure 1-dehydrocortexone. To clean it, it is run through a layer of silica gel in chloroform solution. The chloroform filtrate contains little thin oil.
The further filtrates obtained with chloroform with the addition of 1 to 3% tertiary butanol are combined and evaporated. The residue gives, recrystallized from an acetone-isopropyl ether mixture, 220 mg of 1-dehydrocortexone from F.
= 189-195 (dec.). <I> Example 2 </I> A solution of 250 mg of cortisone in 10 cm3 of methanol is added under sterile conditions to 1 liter of a well-developed culture of Didymella lycopersici as shown in Example 1 and the mixture is shaken at 27 for 72 hours, after which the Culture liquid as indicated in example 1,
is worked up. Based on the paper chromatographic investigation in the propylene glycol-toluene system, the residue of the ethyl acetate extracts contains almost exclusively 1-dehydrocortisone as a steroid component. The residue in chloroform solution is filtered through silica gel. The chloroform filtrates give a little thin oil.
With chloroform-acetone (6: 4) a crystalline residue is obtained which, recrystallized from an acetone-ether mixture, gives 225 mg of pure 1-dehydrocortisone with a melting point of 231-234. <I> Example 3 </I> A solution of 250 mg of hydrocortisone in 10 cmg of methanol is added under sterile conditions to 1 liter of a well-developed culture of Didymella lycopersici prepared as in Example 1. After 10 days of shaking at 27, the culture is worked up as indicated in Example 1.
The residue of the ethyl acetate solutions turns out to be almost pure 1-dehydro-hydrocortisone in the paper chromatogram (propylene glycol-toluene system). To remove accompanying substances, it is taken up in chloroform and the solution is filtered through silica gel. The chloroform eluates, which contain a small amount of a low-viscosity oil, are discarded.
The chloroform-acetone (1: 1) eluates are combined and evaporated. The residue is recrystallized from methanol or an acetone-ether mixture, whereupon 2l0 mg of pure 1-dehydro-hydrocortisone of F. = 238-241 are obtained.
<I> Example 4 </I> A solution of 30 mg 3,11,20-triketo-17a, 21-dioxy- is added under sterile conditions to 120 ml of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in example 1 allopregnan in 2 ml of methanol. The mixture is shaken at 27 for 10 days and the culture is worked up as indicated in Example 1.
The residue of the ethyl acetate extracts contains, on the basis of the paper chromatographic analysis in the system propylene glycol-toluene, in addition to unchanged tem starting material 1-dehydrocortisone, which is obtained in pure form by chromatography on silica gel and subsequent crystallization from an acetone-ether mixture.
<I> Example 5 </I> In an analogous manner, progesterone, pregnane-3,20-dione, corticosterone, 11-dehydro-corticosterone, 17a-oxy-cortexon, testosterone or 44 androstene-3,17- dion the corresponding 41;
4-serve. <I> Example 6 </I> 2 g sodium nitrate, 1 g prim. Potassium orthophosphate, 0.5 g magnesium sulfate heptahydrate, 0.5 g potassium chloride, 50 g glucose and 1 g Difco yeast extract are dissolved in 1 liter of tap water,
brought to pH 5 by adding a sodium hydroxide solution and sterilized. The resulting nutrient solution is inoculated with 50 ml of a 4 day old shaking culture of Didymella lycopersici and shaken for 48 hours at 27, where the culture develops well. A solution of 30 mg of 9a-fluorohydrocortisone in 2 ml of methanol is added to 120 ml of this culture of Didymella lycopersici under sterile conditions.
The mixture is shaken for 5 days at 27, then the mycelium is sucked off, washed with water and ethyl acetate, and the combined filtrates are extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in a vacuum. Based on the paper chromatographic investigation, the extraction residue contains 1-dehydro-9a-fluoro-hydrocortisone, which is separated from the unchanged starting material by means of a preparative paper chromatogram (propylene glycol-toluene system).
For identification, the crude product is dried in a high vacuum and acetylated with 4 ml of pyridine-acetic anhydride (1: 1) mixture in a customary manner at room temperature. The 21-acetate of 1-dehydro-9a-fluoro-hydrocortisons obtained is crystallized from an acetone-petroleum ether mixture and melts at 235-237.
<I> Example 7 </I> 2 g sodium nitrate, 1 g prim. Potassium orthophosphate, 0.5 g magnesium sulfate heptahydrate, 0.5 g potassium chloride, 50 g glucose and 1 g Difco yeast extract are dissolved in 1 liter of tap water, brought to pH 5 by adding a sodium hydroxide solution and sterilized.
The resulting nutrient solution is inoculated with 50 ml of a 4-day-old shaking culture of Didymella lycopersici and shaken for 48 hours at 27, the culture developing well. A solution of 30 mg 9, llss-oxido-17a-oxy-cortexon-21-acetate in 2 ml of methanol is added to 120 ml of this culture of Didymella lycopersici under sterile conditions. The mixture is shaken at 27 for 5 days, then the mycelium is sucked off, washed with water and ethyl acetate and the combined filtrates are extracted with ethyl acetate.
The ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in a vacuum. On the basis of the paper chromatographic examination, the extraction residue contains 1-dehydro-9, llss-oxido-17a-oxy-cortexon, which is separated from unchanged starting material by means of a preparative paper chromatogram (propylene glycol-toluene system).
The crude product is dried in a high vacuum and acetylated with 4 ml of pyridine-acetic anhydride (1: 1) mixture in the usual way at room temperature.
<I> Example 8 </I> To 2 liters of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in Example 1, a solution of 500 mg 44-3,11,20-trioxo-17a-methyl- 21-acetoxy pregnen in 15 ml of acetone. The mixture is shaken at 27 for 3 days and then worked up as described in Example 1.
The extraction residue (585 mg) consists practically only of d1.4-3,11,20-trioxo-17a-methyl-21-oxy-pregnadiene based on the paper chromatographic analysis. It is obtained in needles by crystallization from an acetone-petroleum ether mixture, which thieves at 183-186 melt with slight decomposition. [a] n = + 120 (alcohol), UV absorption: A "," 240 my. (E = 14600).
The IR spectrum shows the bands characteristic of 414-3-ketones at 5.98, u, 6.131s. and 6.21, u. <I> Example 9 </I> A solution of 1 g of 17a-ethynyl testosterone in 25 ml of acetone is added under sterile conditions to 4 liters of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in Example 1. The mixture is shaken at 27 for 8 days and the culture is then worked up as described in Example 1.
The paper chromatographic examination of the extraction residue shows that it consists practically only of 1-dehydro-17a-ethinyl-testosterone. The pure substance is obtained by crystallization from an acetone-ether mixture. F. 228-233. [a] D = -17 (chloroform).
<I> Example 10 </I> To 2 liters of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in Example 1, a solution of 180 mg of 6-dehydro-cortexon-21-acetate in 10 ml of acetone is added under sterile conditions and then let shake at 27 for 3 days. The culture is then worked up as described in Example 1. According to paper chromatographic analysis, the extraction residue (190 mg) consists almost exclusively of free 1,6-bis-d'ehydrocortexone, which is crystallized from acetone-ether mixtures.
In the IR: spectrum, the bands characteristic of the 41,4-3-ketones are found at 5.98, u, 6.13, u. and 6.22, u.
<I> Example 11 </I> A solution of 1 g of 11-dehydro-progesterone in 20 ml of acetone is added under sterile conditions to 4 liters of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in Example 1. The mixture is shaken at 27 for 8 days and then worked up as described in Example 1. Only 1,11-bis-dehydro progesterone can be detected in the extraction residue by means of paper chromatography. It is obtained in crystalline form from an acetone-petroleum ether mixture and shows u in the IR. a.
Bands at 5.98, u, 6.14, u and 6.22, u.
<I> Example 12 </I> To 2 liters of a well-developed culture of Didymella lycopersici as obtained in Example 1, a solution of 500 mg of 17a-methyl testosterone in 15 ml of acetone is added under sterile conditions. It is left to shake for 3 days at 27 and then the culture is worked up as described in Example 1. The extraction residue is dissolved in a little acetone. With the addition of ether the 1-dehydro-17a-methyl-testosterone is obtained in coarse crystals. F. 163-164. [a] j) = 0 (chloroform).