DE1002348B

DE1002348B - Process for the manufacture of oxidized steroids

Info

Publication number: DE1002348B
Application number: DEM18101A
Authority: DE
Inventors: Josef Fried; David Perlman; Richard W Thoma; Elwood O Titus
Original assignee: Olin Corp
Current assignee: Olin Corp
Priority date: 1952-04-10
Filing date: 1953-04-10
Publication date: 1957-02-14

Description

Verfahren zur Herstellung von oxydierten Steroiden Die Erfindung betrifft ein äußerst vorteilhaftes Verfahren zur Herstellung von oxydierten Steroiden, insbesondere von 11 a-Oxysteroiden, wie 3, 20-Diketopregnenen und 3-Oxy-20-ketopregnenen, die Zwischenprodukte für die Herstellung von Nebennierenrindenhormonen und[ oder anderen wertvollen Produkten darstellen.Process for Making Oxidized Steroids The invention relates to an extremely advantageous method of making oxidized steroids, in particular of 11 a-oxysteroids, such as 3, 20-diketopregnenes and 3-oxy-20-ketopregnenes, the Intermediates for the production of adrenal cortex hormones and [or others represent valuable products.

Die gemäß der Erfindung erhaltenen Oxydationsprodukte, z. B. 11 a-Oxyprogesteron, können z. B. sowohl in das bekannte 11-Ketoprogesteron als auch in Cortisonacetat übergeführt werden. Beispielsweise kann auch das 11 a-Oxyprogesteron mit Palladium in Äthylacetat katalytisch zu Allopregnan-11 a-ol-3, 20-dion reduziert werden. Das letztere kann mit Lithium-Aluminiumhydrid zu Allopregnan-3, 11 a, 20-triol reduziert und mit einem acylierenden (acetylierenden) Stoff unter milden Bedingungen behandelt werden, wobei man das 3-Acylderivat (z. B. Allopregnan-3, 11 a, 20-triol-3-acetat) erhält. Dieses wiederum kann mit Chromsäure zu Allopregnan-3-ol-11, 20-dion-3-acetat und nach bekannten Verfahren (z. B. Rosenkranz, Pataki und Djerassi, Journ. Amer. Chem. Soc., Bd. 73, 1951, S. 4055) in Cortisonacetat übergeführt werden. Diese Überführung in Cortisonacetat kann auch z. B. dadurch erfolgen, daß man Allopregnan-3-ol-11, 20-dion-3-acetat mit Essigsäureanhydrid und p-Toluolsulfonsäure in das 11, 20-Dienolacetat des Allopregnan-3-ol-11, 20-dion-3-acetats überführt und ohne Isolierung dann mit einem Überschuß von Perbenzoesäure in Chloroform behandelt, worauf man mit 2 n-Natriumhydroxydlösung unter Bildung von Allopregnan-3, 17a-diol-11, 20-dion verseift. Das letztere wird in Chloroform unter Bildung von 21-Brom-allopregnan-3, 17a-diol-11, 20-dion bromiert, und dieses wird mit Natriumjodid in Aceton und dann mit Kaliumacetat behandelt, wobei man Allopregnan-3, 17a, 21-triol-11, 20-dion-21-acetat (Reichsteins Verbindung D) erhält. Diese wird mit N-Bromacetamid unter Bildung von Allopregnan-3, 11, 20-trion-17a, 21-diol-21-acetat oxydiert, dieses wird bromiert und ohne Isolierung mit Natriumjodid behandelt, wobei man 2-Jod-4-pregner_-17a, 21-diol-3, 11, 20-trion-21-acetat erhält. Das letztere wird unter Bildung von Cortisonacetat mit Zinkstaub in Dioxan und Äthanol behandelt.The oxidation products obtained according to the invention, e.g. B. 11 a-oxyprogesterone, can e.g. B. both in the well-known 11-ketoprogesterone and in cortisone acetate be transferred. For example, 11 a-oxyprogesterone can also be used with palladium catalytically reduced in ethyl acetate to allopregnan-11 a-ol-3, 20-dione. That the latter can be reduced to allopregnan-3, 11 a, 20-triol with lithium aluminum hydride and treated with an acylating (acetylating) substance under mild conditions using the 3-acyl derivative (e.g. allopregnan-3, 11 a, 20-triol-3-acetate) receives. This in turn can with chromic acid to allopregnan-3-ol-11, 20-dione-3-acetate and by known methods (e.g. Rosenkranz, Pataki and Djerassi, Journ. Amer. Chem. Soc., Vol. 73, 1951, p. 4055) can be converted into cortisone acetate. This overpass in cortisone acetate can also, for. B. be done by allopregnan-3-ol-11, 20-dione-3-acetate with acetic anhydride and p-toluenesulfonic acid into 11, 20-dienol acetate of the allopregnan-3-ol-11, 20-dione-3-acetate transferred and then without isolation treated with an excess of perbenzoic acid in chloroform, whereupon with 2N sodium hydroxide solution saponified to form allopregnan-3, 17a-diol-11, 20-dione. The latter will brominated in chloroform to form 21-bromo-allopregnan-3, 17a-diol-11, 20-dione, and this is treated with sodium iodide in acetone and then with potassium acetate, where allopregnan-3, 17a, 21-triol-11, 20-dione-21-acetate (Reichstein's compound D) receives. This is with N-bromoacetamide to form allopregnan-3, 11, 20-trione-17a, 21-diol-21-acetate is oxidized, this is brominated and without isolation with sodium iodide treated, whereby 2-iodine-4-pregner_-17a, 21-diol-3, 11, 20-trione-21-acetate is obtained. The latter is formed with the formation of cortisone acetate with zinc dust in dioxane and ethanol treated.

4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dion läßt sich sowohl in das bekannte Adrenosteron als auch z. B. in Cortisonacetat überführen; 4-Pregnen-11 a, 21-diol-3, 20-dion ist in das bekannte Dehydrocorticosteronacetat überführbar; 11a, 17a-Dioxyprogesteron kann in das bekannte 4-Pregnen-17a-ol-3, 11, 20-trion umgewandelt werden.4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione can be used both in the well-known Adrenosterone as well as z. B. convert into cortisone acetate; 4-pregnen-11 a, 21-diol-3, 20-dione can be converted into the well-known dehydrocorticosterone acetate; 11a, 17a-dioxyprogesterone can be converted into the well-known 4-pregnen-17a-ol-3, 11, 20-trione.

Es ist an sich bekannt, Steroide mikrobiologisch, und zwar auch in der 11 a-Stellung, zu hydroxylieren. Dabei wurden jedoch von den erfindungsgemäß verwendeten Mikroorganismen verschiedene verwendet, die anderen Klassen angehören. So wurde z. B. bereits Progesteron mit Rhizopus arrhizus aus der Klasse der Phycomyceten unter Bildung des in der 11 a-Stellung hydroxylierten Derivats oxydiert.It is known per se, steroids microbiologically, including in the 11 a-position to be hydroxylated. However, were of the invention used various microorganisms belonging to other classes. So was z. B. already progesterone with Rhizopus arrhizus from the class of the Phycomycetes oxidized to form the derivative hydroxylated in the 11 a-position.

Es wurde gefunden, daß man oxydierte Steroide, und zwar insbesondere l 1 a-Oxysteroide, durch Behandlung von Desoxysteroiden, insbesondere von 11-Desoxysteroiden, mit Kulturen einer oxydierenden Pilzart des Stammes Aspergillus oder den daraus erhältlichen oxydierend wirkenden Enzymen in Anwesenheit von Sauerstoff herstellen kann. Aspergillus gehört in die Familie der Aspergilaceae oder Fungi imperfecti, hat also mit den. Bekannterweise verwendeten Mikroorganismen nichts gemein, außer daß beides Pilze sind. Das Verhalten von Aspergillus in Bezug auf die 11-Desoxysteroide war daher völlig unerwartet. Die Einwirkung der Enzyme kann entweder dadurch erfolgen, daß man in einem wäßrigen Medium das Steroid, den Sauerstoff und Enzyme von nicht mehr proliferierenden Zellen des Aspergillus zusammenbringt, oder vorzugsweise dadurch, daß man das Steroid in eine belüftete Kultur des Aspergillus einbringt.It has been found that oxidized steroids, in particular l 1 a-oxysteroids, by treating deoxysteroids, especially 11-deoxysteroids, with cultures of an oxidizing fungus species of the Aspergillus strain or those thereof produce available oxidizing enzymes in the presence of oxygen can. Aspergillus belongs to the family Aspergilaceae or Fungi imperfecti, so has with the. As is well known, microorganisms have nothing in common, except that both are mushrooms. The behavior of Aspergillus in relation to the 11-deoxysteroids was therefore completely unexpected. The enzymes can act either by that the steroid, oxygen and enzymes of not in an aqueous medium brings together more proliferating cells of the Aspergillus, or preferably thereby, that the steroid is placed in an aerated culture of the Aspergillus.

Die gemäß der Erfindung zu verwendenden oxydierenden Aspergillusarten sind unter anderem Aspergillus niger, Aspergillus amstelodami, Aspergillus nidulans und Aspergillus species ATCC 11267 (diese Zahl ist das Kennzeichen des :Mikroorganismus, das ihm von der American Type Culture Collection, Washington D. C., gegeben wurde). Zweckmäßig verwendet man einen Stamm von Aspergillus niger, der als vWisc. (Wisconsin) 72-2a bezeichnet wurde, oder ein Äquivalent. Das Verhalten dieses Stammes ist von Perlman, Kita & Peterson in Arch. of Biochemistry, Bd. 11, 1946, S. 123 beschrieben worden.The oxidizing Aspergillus species to be used according to the invention include Aspergillus niger, Aspergillus amstelodami, Aspergillus nidulans and Aspergillus species ATCC 11267 (this number is the identifier of : Microorganism given to him by the American Type Culture Collection, Washington D. C., was given). It is advisable to use a strain of Aspergillus niger, as vWisc. (Wisconsin) 72-2a, or its equivalent. Behaviour this strain is described by Perlman, Kita & Peterson in Arch. of Biochemistry, Vol. 11, 1946, p. 123.

Im allgemeinen sind die Bedingungen zur Züchtung von Aspergillus für die erfindungsgemäßen Zwecke (außer für die Einbringung des zu oxydierenden Steroids) die gleichen wie bei der Züchtung solcher Mikroorganismen zur Erzeugung anderer Stoffwechselprodukte, z. B. der Zitronensäure. Der Aspergillus niger wächst auf einem geeigneten Nährmedium unter aeroben Bedingungen. Ein geeignetes Nährmedium besteht im wesentlichen aus einer Stickstoff liefernden und assimilierbaren Kohlenstoff und Energie liefernden Substanz. Die letztere kann ein Kohlehydrat, z. B. Saccharose, Melasse, Glukose, Stärke, Maltose oder Dextrin und/oder das Steroid selbst sein. Zweckmäßig erhält das Medium jedoch außer dem Steroid eine assimilierbaren Kohlenstoff und Energie liefernde Substanz. Diese letztere besteht mindestens zum Teil aus Fettsäuren mit mindestens 14 Kohlenstoffatomen oder Fetten. Die Verwendung einer solchen Fettsubstanz als Quelle für den Kohlenstoff und die Energie (insbesondere die Verwendung eines fetten Öles) ist insofern vorteilhaft, als sie die Fähigkeit des Steroids zur Bildung von Derivaten begünstigt. Erfindungsgemäß zu verwendende Fette sind unter anderem flüssiges Schweinefett, Sojabohnenöl, Leinsamenöl, Baumwollsamenöl, Erdnußöl, Kokosnußöl, Weizenöl, Rizinusöl, Sesamöl, rohes Palmöl, Hammeltalg, Spermöl, Olivenöl, Tristearin, Tripalmitin, Triolein, Trilaurin. Gemäß der Erfindung zu verwendende Fettsäuren sind unter anderem Stearinsäure, Palmitinsäure, Oleinsäure, Linolensäure und Myristinsäure.In general, the conditions for growing Aspergillus are for the purposes according to the invention (except for the introduction of the steroid to be oxidized) the same as when cultivating such microorganisms to produce others Metabolic products, e.g. B. citric acid. The Aspergillus niger grows up a suitable nutrient medium under aerobic conditions. A suitable nutrient medium consists essentially of a nitrogen supplying and assimilable carbon and energizing substance. The latter can be a carbohydrate, e.g. B. sucrose, Molasses, glucose, starch, maltose or dextrin and / or the steroid itself. However, in addition to the steroid, the medium expediently contains an assimilable carbon and energizing substance. The latter consists at least in part of fatty acids with at least 14 carbon atoms or fats. The use of such a fatty substance as a source for the carbon and the energy (especially the use of a fatty oil) is beneficial in that it increases the ability of the steroid to form favored by derivatives. Fats to be used according to the invention include liquid lard, soy, flaxseed oil, cottonseed oil, peanut oil, coconut oil, Wheat oil, castor oil, sesame oil, raw palm oil, mutton tallow, sperm oil, olive oil, tristearin, Tripalmitin, triolein, trilaurin. Fatty acids to be used according to the invention include stearic acid, palmitic acid, oleic acid, linolenic acid and myristic acid.

Der Stickstofflieferant kann natürlichen Ursprungs (z. B. Sojabohnenmehl, Auslaugflüssigkeit von Weizen, Fleischextrakt und/oder lösliche Brennereierzeugnisse) , oder synthetisch sein (d. h. die Stickstoffquelle kann aus einfachen synthetisierbaren organischen und anorganischen Verbindungen, wie Ammoniumsalzen, Alkalinitraten, Aminosäuren oder Harnstoff, bestehen).The nitrogen supplier can be of natural origin (e.g. soybean meal, Wheat leach liquor, meat extract and / or soluble distillery products) , or synthetic (i.e. the nitrogen source can be from simple synthetizable organic and inorganic compounds such as ammonium salts, alkali nitrates, Amino acids or urea).

Die Steroide, welche gemäß der Erfindung in geeignete Oxydationsprodukte übergeführt werden können, sind unter anderem die der 3-Oxo- (oder -Oxy)-20-ketopregnen-(oder -pregnan)-reihe und diejenigen der 3-Oxo- (oder -Oxy)-17-keto- (oder -oxy)-androsten- (oder -androstan)-reihe. Bevorzugt werden in 4-Stellung ungesättigte ; Pregnen-3, 20-dione verwendet, und zwar insbesondere Progesteron und 11-Desoxy-17-oxycorticosteron oder dessen Acetat. Beispiele für diese Steroide sind weiterhin 16a-Oxyprogesteron, 17a-Oxyprogesteron, 11-Desoxy-17-oxycorticosteron (Reichsteins Verbindung S), 11-Des- ; oxy-17-oxycorticosteronacetat, Desoxycorticosteron, Desoxycorticosteronacetat, Pregnanolon, 5-Pregnenolon, 5-Pregnen-3-ol-20-on-3-succinat, 4-Androsten-3, 17-dion, 16-Dehydroprogesteron und Testosteron. Enthält das Steroid eine oxydierbare Oxygruppe und ist deren Oxy- E dation jedoch nicht gewünscht, so kann die Oxygruppe in eine oxydationsbeständige Gruppe übergeführt werden, welche jedoch wieder in eine Oxygruppe umgewandelt werden kann, d. h., die Oxygruppe wird verestert oder veräthert oder durch ein Halogen ersetzt. E Die folgenden Beispiele erläutern das erfindungsgemäße Verfahren. Alle Schmelzpunkte sind in Celsiusgraden angegeben, und alle Werte für die spezifische Drehung wurden, wenn nicht anders angegeben, in Chloroform erhalten. Beispiel 1 a) Gärung. Ein Medium der folgenden Zusammensetzung wird hergestellt Feststoff aus einer beim Auslaugen von Weizen erhaltenen Flüssigkeit ....... 3,0 g N H4 H2 P 04 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3,0 g CAC0.............................. 2,5 g Sojabohnenöl........................ 2,29 Progesteron ......................... 0,20 g, mit destilliertem Wasser auf 1 1 Wasser aufgefüllt.The steroids which can be converted into suitable oxidation products according to the invention include those of the 3-oxo- (or -oxy) -20-ketopregnen (or -pregnan) series and those of the 3-oxo (or - Oxy) -17-keto (or -oxy) -androsten- (or -androstane) series. Preference is given to those unsaturated in the 4-position; Pregnen-3, 20-dione used, in particular progesterone and 11-deoxy-17-oxycorticosterone or its acetate. Examples of these steroids are furthermore 16a-oxyprogesterone, 17a-oxyprogesterone, 11-deoxy-17-oxycorticosterone (Reichstein's compound S), 11-des-; oxy-17-oxycorticosterone acetate, deoxycorticosterone, deoxycorticosterone acetate, pregnanolone, 5-pregnenolone, 5-pregnen-3-ol-20-one-3-succinate, 4-androsten-3, 17-dione, 16-dehydroprogesterone and testosterone. If the steroid contains an oxidizable oxy group and its oxy-E dation is not desired, the oxy group can be converted into an oxidation-resistant group, which can, however, be converted back into an oxy group, ie the oxy group is esterified or etherified or by a halogen replaced. E The following examples explain the process according to the invention. All melting points are given in degrees Celsius and all specific rotation values were obtained in chloroform unless otherwise specified. Example 1 a) Fermentation. A medium of the following composition is prepared Solid from a leaching of Wheat obtained liquid ....... 3.0 g N H4 H2 P 04. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.0 g CAC0 .............................. 2.5 g Soybean oil ........................ 2.29 Progesterone ......................... 0.20 g, made up to 1 liter of water with distilled water.

Der pH-Wert des Mediums wird mit Natriumhydroxydlösung auf 7 ± 0,1 eingestellt, worauf jeweils 100 ccm des Mediums in 500-ccm-Erlenmeyerkolben verteilt werden. Die Kolben werden mit Wattepfropfen abgeschlossen und 30 Minuten bei 120° in einem Sterilisator sterilisiert. Nach dem Abkühlen wird jeder Kolben mit 5 bis 10 % eines wie nachstehend beschrieben erhaltenen pflanzlichen Inoculurns von Aspergillus niger (Wisc. 72-2, vgl. Perlman, Kita und Peterson, Arch. of Biochemistry, Bd. 1I, 1946, S.123, außerdem D. A. Kita, Bachelor of Sience thesis der Universität von Wisconsin, 1944) geimpft. Die Kolben werden 72 Stunden in einem auf 25° gehaltenen Raum mechanisch geschüttelt. Der Inhalt der Flaschen wird dann vereinigt, mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4 ± 0,2 eingestellt und durch Seitzfilter abgesaugt. Das verwendete pflanzliche Inoculum ist auf Stammkulturen von lyophilisiertem Schrägagar während 24 bis 72 Stunden (gegebenenfalls unter Wiederholung dieser 24- bis 72-Stunden-Perioden) in einem Medium der folgenden Zusammensetzung gewachsen: 15 g Feststoffe aus der Auslaugflüssigkeit von Weizen, 10 g brauner Zucker, 6 g Na N 03, 0,001 g Zn S O4, 15 g wasserfreies K H2 P 04, 0,5 g Mg S 04 - 7 H, 0, 5 g Ca C 03, 2 g flüssiges Schweinefett, mit destilliertem Wasser auf 11 aufgefüllt. Das Ganze wurde in einem Autoklav 30 Minuten bei 120° sterilisiert.The pH of the medium is adjusted to 7 ± 0.1 with sodium hydroxide solution, whereupon 100 cc of the medium are distributed in 500 cc Erlenmeyer flasks. The flasks are closed with wadding plugs and sterilized for 30 minutes at 120 ° in a sterilizer. After cooling, each flask is filled with 5 to 10% of a vegetable inoculum obtained as described below from Aspergillus niger (Wisc. 72-2, cf. Perlman, Kita and Peterson, Arch. Of Biochemistry, Vol. 1I, 1946, p.123 , also DA Kita, University of Wisconsin Bachelor of Science thesis, 1944). The flasks are mechanically shaken for 72 hours in a room kept at 25 °. The contents of the bottles are then combined, adjusted to a pH value of 4 ± 0.2 with sulfuric acid and filtered off with suction through a Seitz filter. The vegetable inoculum used is grown on stock cultures of lyophilized agar slants for 24 to 72 hours (optionally with repetition of these 24 to 72 hour periods) in a medium of the following composition: 15 g solids from the leaching liquid of wheat, 10 g brown sugar , 6 g Na N 03, 0.001 g Zn S O4, 15 g anhydrous K H2 P 04, 0.5 g Mg S 04 - 7 H, 0.5 g Ca C 03, 2 g liquid pork fat, with distilled water to 11 filled up. The whole was sterilized in an autoclave at 120 ° for 30 minutes.

b) Extraktion der Oxydationsprodukte. 1880 ccm eines wie in a) erhaltenen Kulturfiltrats werden viermal mit je 11 Chloroform extrahiert, worauf der vereinigte Chloroformextrakt filtriert und im Vakuum zur Trockne gedampft wird. Der Rückstand wird in 15 ccm 80%igem wäßrigem Methanol aufgenommen, und die erhaltene Lösung wird viermal mit je 15 ccm Hexan zur Entfernung fettartiger Verunreinigungen extrahiert. Die Methanollösung wird dann auf ein kleines Volumen konzentriert und dreimal mit je 20 ccm Chloroform extrahiert. Der vereinigte Chloroformextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und dann zur Trockne gedampft, wobei man etwa 411 mg eines Rückstandes erhält, der beim Stehen kristallisiert.b) Extraction of the oxidation products. 1880 cc of one as obtained in a) Culture filtrate are extracted four times with 11 chloroform each time, whereupon the combined Chloroform extract is filtered and evaporated to dryness in vacuo. The residue is taken up in 15 cc of 80% aqueous methanol, and the resulting solution is extracted four times with 15 cc hexane each time to remove grease-like impurities. The methanol solution is then concentrated to a small volume and used three times extracted 20 ccm of chloroform each time. The combined chloroform extract is dried over sodium sulfate dried and then evaporated to dryness, leaving about 411 mg of a residue which crystallizes on standing.

c) Abtrennung der Bestandteile I und II. Die als I und II bezeichneten Bestandteile werden in heißem Aceton gelöst, worauf man sie kristallisieren läßt. Komponente I (ein Dioxyprogesteron) ist in Aceton schwer löslich und fällt daher aus der Lösung aus, während Komponente II (11-Oxyprogesteron) in der Mutterlauge verbleibt. Nach viermaliger Umkristallisation durch Lösen des kristallinen Rückstandes in heißem Aceton und Auskristallisation, wobei jeweils die Mutterlauge aufbewahrt wird, erhält man die Komponente I in einer Ausbeute von etwa 8 mg in im wesentlichen reiner Form. Nach Umkristallisation aus 95°/oigem Äthylalkohol besitzt die Komponente I die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 250 bis 253° (kapillar) ; [a] = --I-100° (c = 0,28); Ultraviolettabsorption: 7,nax (Alkohol) = 236 m#t (c = 15 000), Infrarotabsorption: @.max (Nujol; Paraffinöl) = 2,98 ,cc (OH), 589 lt (20-Keton) und 6,04 ,g (d 4-3-Keton). Analyse für C21 Hg" 04 Berechnet .... C = 72,80,H = 8,73; gefunden...... C = 72,66,H = 8,75. Diese Daten zeigen, daß die Komponente I ein Dioxyprogesteron ist, und zwar wahrscheinlich 6, 11 a-Dioxyprogesteron. Bei der Oxydation mit Chromsäure erhält man ein Tetraketon, und die Acetylierung ergibt ein Diacetat. Nach zwei Umkristallisationen aus Aceton-Hexan besitzt das erhaltene Oxydationsprodukt (ein Tetraketon) die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 144 bis 146°; [a] = -I- 143° (c = 0,87), Ultraviolettabsorption: Ama.x (Alkohol) = 249 m#t (a = 11500) @max (2 "/" K O H in Methanol) = 255 m#L (e = 9800), 370 m#t (e = 8900).c) Separation of constituents I and II. The constituents identified as I and II are dissolved in hot acetone, whereupon they are allowed to crystallize. Component I (a dioxyprogesterone) is sparingly soluble in acetone and therefore falls out of solution, while component II (11-oxyprogesterone) remains in the mother liquor. After four recrystallization by dissolving the crystalline residue in hot acetone and crystallization, the mother liquor being kept in each case, component I is obtained in a yield of about 8 mg in essentially pure form. After recrystallization from 95% ethyl alcohol, component I has the following properties: melting point about 250 to 253 ° (capillary); [a] = - I-100 ° (c = 0.28); Ultraviolet absorption: 7, nax (Alcohol) = 236 m # t (c = 15,000), infrared absorption: @ .max (Nujol; paraffin oil) = 2.98, cc (OH), 589 lt (20-ketone) and 6.04, g (d 4-3-ketone). Analysis for C21 Hg " 04 Calculated .... C = 72.80, H = 8.73; found ...... C = 72.66, H = 8.75. These data indicate that component I is a dioxyprogesterone, and that is likely 6,11α-dioxyprogesterone. Oxidation with chromic acid gives a tetraketone and acetylation gives a diacetate. After two recrystallizations from acetone-hexane, the oxidation product obtained (a tetraketone) has the following properties: melting point about 144 to 146 °; [a] = -I- 143 ° (c = 0.87), ultraviolet absorption: Ama.x (alcohol) = 249 m # t (a = 11500) @ max (2 "/" KOH in methanol) = 255 m # L (e = 9800), 370 m # t (e = 8900).

Analyse für C"H"04: Berechnet .... C = 73,66,H = 7,65; gefunden...... C = 73,77,H = 7,66. Das vorstehende Absorptionsspektrum ist für 3, 6-44-Endione charakteristisch, woraus sich ergibt, daß die eine Hydroxylgruppe der Komponente I sich in 6-Stellung befindet. Der von der zweiten Hydroxylgruppe in Komponente I gelieferte Beitrag zur Molekularrotation (d [M]D = - 10°) ergibt, daß sich diese Hydroxylgruppe in der l l a-Stellung befindet. Das ergibt sich auch ferner aus der entsprechenden Acetoxygruppe in dem Diacetat von I (- 37°) und aus der daraus durch Oxydation zu dem obigen Tetraketon (]- 407°) erhaltenen Ketogruppe. Der Beitrag 4 [M] D der 11 a-Oxy- der 11 a-Acetoxy- und der 11-Ketogruppe beträgt bei Anbringung an Progesteron -16' bzw. -51' bzw. +302'. Das durch Acetylierung erhaltene, aus Äthyläther-Hexan umkristallisierte Produkt (ein Diacetat der Formel C25H340g) besitzt die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 154 bis 155°; [a] _ + 80,6° (c = 0,92).Analysis for C "H" 04: Calculated .... C = 73.66, H = 7.65; found ...... C = 73.77, H = 7.66. The above absorption spectrum is characteristic of 3,644-endiones, from which it follows that the one hydroxyl group of component I is in the 6-position. The contribution made by the second hydroxyl group in component I to the molecular rotation (d [M] D = -10 °) shows that this hydroxyl group is in the ll a position. This is also evident from the corresponding acetoxy group in the diacetate of I (-37 °) and from the keto group obtained therefrom by oxidation to give the above tetraketone (] -407 °). The contribution 4 [M] D of the 11 a-oxy- der 11 a-acetoxy and the 11-keto group is -16 ' or -51' or +302 'when attached to progesterone. The product obtained by acetylation and recrystallized from ethyl ether-hexane (a diacetate of the formula C25H340g) has the following properties: melting point about 154 ° to 155 °; [a] _ + 80.6 ° (c = 0.92).

Analyse Berechnet .... C = 69,74,H = 7,96; gefunden...... C = 69,74,H = 8,09. Aus beidem ergibt sich, daß es sich bei den neu eingeführten Hydroxylgruppen um sekundäre Hydroxylgruppen handelt.analysis Calculated .... C = 69.74, H = 7.96; found ...... C = 69.74, H = 8.09. It follows from both that the newly introduced hydroxyl groups are secondary hydroxyl groups.

d) Isolierung von 11 a-Oxyprogesteron (Komponente II). Die gesamte bei der Kristallisation der Komponente I (s. Abschnitt c) erhaltene Mutterlauge wird gereinigt und in 2 ccm Chloroform und 4 ccm Benzol gelöst. Die Lösung wird an einer Säule aus 6 g mit Schwefelsäure gewaschener Tonerde chromatographiert. Dann wird die Säule mit 150 ccm einer Mischung aus 1 Teil Chloroform und 2 Teilen Benzol eluiert. Die Lösungsmittel werden im Vakuum abgedampft, wobei man etwa 163 mg Kristalle erhält, welche durch Umkristallisation aus Aceton-Äther gereinigt werden. Das erhaltene 1 l a-Oxyprogesteron besitzt die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 166 bis 167°, [a] = -f- 177,5° (c = 1,22); Ultraviolettabsorption: Amax@ (Alkohol) -- 241 m#t (e = 17 000) ; Infrarotabsorption Am, (Nuj ol) = 2,91 (0 H), 585 #t (20-Keton) und 5,97 #L (d4-3-Keton).d) Isolation of 11 a-oxyprogesterone (component II). All of the mother liquor obtained during the crystallization of component I (see section c) is purified and dissolved in 2 cc of chloroform and 4 cc of benzene. The solution is chromatographed on a column of 6 g of alumina washed with sulfuric acid. The column is then eluted with 150 cc of a mixture of 1 part of chloroform and 2 parts of benzene. The solvents are evaporated in vacuo to give about 163 mg of crystals which are purified by recrystallization from acetone-ether. The 1 l of a-oxyprogesterone obtained has the following properties: melting point about 166 to 167 °, [a] = -f- 177.5 ° (c = 1.22); Ultraviolet absorption: Amax @ (alcohol) - 241 m # t (e = 17,000); Infrared absorption Am, (Nujol) = 2.91 (0 H), 585 #t (20-ketone) and 5.97 #L (d4-3-ketone).

Analyse für C21 H3" 03 Berechnet .... C = 76,33,H = 9,16; gefunden...... C = 76,12,H = 9,28. Das erhaltene Produkt ist mit dem bekannten, bei 187 bis 188° schmelzenden l1 ß-Oxyprogesteron nicht identisch. Es bildet ein Monoacetat der Formel C23 H3204, welches die folgenden Eigenschaften besitzt. Schmelzpunkt etwa 172 bis 174°; [a] + = 155° (c = 0,379). Analyse Berechnet .... C = 74,16; H = 8,66; gefunden...... C = 73,91,H = 8,50. Ferner kann es zu dem bekannten 11-Ketoprogesteron oxydiert werden, welches nach Umkristallisation aus Aceton-Hexan oder Äther die folgenden Eigenschaften besitzt: Schmelzpunkt etwa 170 bis 171,5° (kapillar); [a] = + 276° (c = 0,52 in Aceton). Fuchs und Reichstein, Helv. Chim. Act., Bd. 23, 1940, S. 648, geben an, daß 11-Ketoprogesteron bei 173 bis 175° (Block) schmilzt und ein [a] = + 238,4° (Aceton) besitzt. Eine Probe von 11-Ketoprogesteron, welches nach dem Verfahren von Fuchs und Reichstein aus Corticosteron hergestellt wurde, schmolz bei 170,5 bis l72° und besaß ein [a] = -[- 221° (c = 0,51 in Aceton). Wenn diese Probe mit dem wie vorstehend beschrieben erhaltenen 11-Ketoprogesteron vermischt wird, beträgt der Schmelzpunkt etwa 169 bis 172,5°. Die Ultrarotspektren dieser auf verschiedene Weise hergestellten 11-Ketoprogesterone sind in jeder Beziehung identisch. Beispiel 2 Ein Medium der folgenden Zusammensetzung wird hergestellt: 3 g Feststoffe der Auslaugflüssigkeit von Weizen, 2 g Sojabohnenöl, 3 g N H 4 H2 P O 4, 0,15g 17-Oxy-11-desoxycorticosteronacetat und so viel destilliertes Wasser, daß man insgesamt 1 1 erhält. Der p11-Wert des Mediums wird mit Natriumhydroxydlösung auf 6 eingestellt. Anteile von je 50 ccm dieses Mediums werden in 250-ccm-Erlenmeyerkolben verteilt; die Kolben werden mit Watte verschlossen und auf die übliche Weise in einem Sterilisator sterilisiert. Beim Abkühlen wird jeder Kolben mit 2 °/" eines pflanzlichen Inoculums von Aspergillus niger (Wisc. 72-2), welcher während 72 Stunden auf demselben Medium, jedoch ohne das Steroid gewachsen ist, geimpft. Die Kolben werden dann 48 Stunden auf einem Schüttelwerk auf 25° gehalten. Nach der Keimung wird der Inhalt der Flaschen zusammengegeben und dreimal mit einem gleichen Volumen Chloroform extrahiert. Die Anwesenheit eines Oxydationsprodukts des Steroidsubstrats in dem Chloroformextrakt macht sich bei Untersuchung nach dem Filterpapier-Chromatographierverfahren von Zaffaroni und Mitarb. bemerkbar (Sience, Bd. III, S. 6, 1950, Toluol-Propylenglykol-System). Die Oxydationsprodukte besitzen dabei eine gleiche oder ähnliche Wanderungsgeschwindigkeit wie Hydrocortison. Beispiel 3 Unter denselben Gärungsbedingungen wie unter a) von Beispiel 1, nur mit der Ausnahme, daß der Progesterongehalt des Mediums 0,5 pro Liter beträgt und das Inoculum Aspergillus species AT C C 11267 ist, und unter Anwendung desselben Extraktions-, Abtrennungs- und Isolierungsverfahrens, wie unter b) ff. von Beispiel l beschrieben, erhält man 6, 1 l a-Dioxyprogesteron und 11 a-Oxyprogesteron in gleicher Ausbeute und von gleichem Reinheitsgrad.Analysis for C21 H3 "03 Calculated .... C = 76.33, H = 9.16; found ...... C = 76.12, H = 9.28. The product obtained is not identical to the known 11 ß-oxyprogesterone, which melts at 187 to 188 °. It forms a monoacetate of the formula C23 H3204, which has the following properties. Melting point about 172 to 174 °; [a] + = 155 ° (c = 0.379). analysis Calculated .... C = 74.16; H = 8.66; found ...... C = 73.91, H = 8.50. It can also be oxidized to the known 11-ketoprogesterone, which after recrystallization from acetone-hexane or ether has the following properties: melting point about 170 to 171.5 ° (capillary); [a] = + 276 ° (c = 0.52 in acetone). Fuchs and Reichstein, Helv. Chim. Act., Vol. 23, 1940, p. 648 state that 11-ketoprogesterone melts at 173 to 175 ° (block) and an [a] = + 238.4 ° (acetone). A sample of 11-ketoprogesterone, which was prepared from corticosterone by the method of Fuchs and Reichstein, melted at 170.5 to 172 ° and had an [a] = - [- 221 ° (c = 0.51 in acetone). If this sample with is mixed with the 11-ketoprogesterone obtained as described above, the melting point is about 169 to 172.5 °. The ultra-red spectra of these 11-ketoprogesterones produced in different ways are identical in every respect. Example 2 A medium of the following composition is prepared: 3 g of wheat leach solids, 2 g of soybean oil, 3 g of NH 4 H2 PO 4, 0.15 g of 17-oxy-11-deoxycorticosterone acetate and distilled water enough to make a total of 1 1 receives. The p11 value of the medium is adjusted to 6 with sodium hydroxide solution. 50 cc portions of this medium are distributed in 250 cc Erlenmeyer flasks; the flasks are closed with cotton wool and sterilized in the usual way in a sterilizer. Upon cooling, each flask is inoculated with 2% of a vegetable inoculum of Aspergillus niger (Wisc. 72-2) grown for 72 hours on the same medium but without the steroid. The flasks are then placed on a shaker for 48 hours After germination, the contents of the bottles are combined and extracted three times with an equal volume of chloroform. The presence of an oxidation product of the steroid substrate in the chloroform extract is noticeable when examined using the filter paper chromatography method by Zaffaroni et al. Vol. III, p. 6, 1950, toluene-propylene glycol system) The oxidation products have the same or similar migration speed as hydrocortisone Example 3 Under the same fermentation conditions as under a) of Example 1, with the exception that the progesterone content of the medium is 0.5 per liter and the inoculum is Aspergillus species AT CC 11267 , and using Using the same extraction, separation and isolation process as described under b) ff. of Example 1, 6.1 l of a-dioxyprogesterone and 11 a-oxyprogesterone are obtained in the same yield and of the same degree of purity.

Beispiel 4 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen wie unter a) von Beispiel 1 werden angewendet, nur mit der Ausnahme, daß 0,50 g/1 11-Desoxy-17-oxycorticosteron (Reichsteins Verbindung S) anstatt Progesteron zugegeben werden. b) Extraktion und Abtrennung von Oxydationsprodukten. 3100 ccm des unter a) durch Vergärung von 1,75 g der Verbindung S erhaltenen Kulturfiltrats werden fünfmal mit je 1,51 Chloroform extrahiert; der vereinigte Chloroformextrakt wird filtriert und im Vakuum zur Trockne gedampft, wobei die Temperatur der überdestillierenden Flüssigkeit 40° nicht überschreitet. Der halbkristalline Rückstand (etwa 1 g) wird in 20 ccm warmem Chloroform suspendiert, und der kristalline Niederschlag (etwa 424 mg) wird abfiltriert. Das bei der Umkristallisation erhaltene Produkt (4-Pregnen-11 a,17a, 21-triol-3, 20-dion) besitzt die folgenden Eigenschaften: Prismatische Nadeln, Schmelzpunkt etwa 216 bis 219°; [a] = -f- 117° (c = 0,46 in absolutem Alkohol) ; @,max (Alkohol) = 242 m#t (E = 15 000).Example 4 a) Fermentation. The same fermentation conditions as under a) of Example 1 are used, with the exception that 0.50 g / 1 of 11-deoxy-17-oxycorticosterone (Reichstein's compound S) is added instead of progesterone. b) Extraction and separation of oxidation products. 3100 ccm of the culture filtrate obtained under a) by fermentation of 1.75 g of compound S are extracted five times with 1.5 l of chloroform each time; the combined chloroform extract is filtered and evaporated to dryness in vacuo, the temperature of the liquid which distills over not exceeding 40 °. The semicrystalline residue (about 1 g) is suspended in 20 cc of warm chloroform and the crystalline precipitate (about 424 mg) is filtered off. The product obtained in the recrystallization (4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione) has the following properties: prismatic needles, melting point about 216 to 219 °; [a] = -f- 117 ° (c = 0.46 in absolute alcohol); @, max (alcohol) = 242 m # t (E = 15,000).

Analyse für C21H3,05: Berechnet .... C = 69,50,H = 8,34; gefunden...... C = 69,46,H = 8,39. Monoacetat, Prismen mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 205,5 bis 208°; [a] _ + 117° (c = 0,84).Analysis for C21H3.05: Calculated .... C = 69.50, H = 8.34; found ...... C = 69.46, H = 8.39. Monoacetate, prisms with the following properties: melting point about 205.5 to 208 °; [a] _ + 117 ° (c = 0.84).

Analyse für C"H3407: , Berechnet .... C = 67,25,H = 7,68, gefunden...... C = 67,34,H = 7,67. Durch Oxydation läßt sich 4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dion in Adrenosteron überführen, das nach zweimaliger Umkristallisation aus Alkohol die folgenden Eigenschaften besitzt: Schmelzpunkt etwa 221 bis 225°; [a] = -E- 284° (c = 0,51).Analysis for C "H3407:, Calculated .... C = 67.25, H = 7.68, found ...... C = 67.34, H = 7.67. By oxidation, 4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione can be converted into adrenosterone, which after two recrystallization from alcohol has the following properties: melting point about 221 to 225 °; [a] = -E- 284 ° (c = 0.51).

Analyse für C19 H24 03 Berechnet .... C = 75,97,H = 8,05; gefunden...... C = 75,71,H = 7,97. Das erhaltene Adrenosteron ist von einer authentischen Probe von 4-Androsten-3, 11, 17-trion (Adrenosteron), welches durch Oxydation von Cortison mit Chromsäure erhalten wurde, nicht zu unterscheiden, und zwar in bezug auf den Schmelzpunkt (keine Schmelzpunktdepression beim Mischen), die spezifische Drehung und das Ultrarotspektrum.Analysis for C19 H24 03 Calculated .... C = 75.97, H = 8.05; found ...... C = 75.71, H = 7.97. The adrenosterone obtained is indistinguishable from an authentic sample of 4-androstene-3, 11, 17-trione (adrenosterone), which was obtained by oxidation of cortisone with chromic acid, with regard to the melting point (no melting point depression when mixing ), the specific rotation and the ultrared spectrum.

Ferner läßt sich das 4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dion zu Cortisonacetat acetylieren und dehydrieren; die erhaltenen Kristalle schmelzen nach zweimaliger Umkristallisation aus Aceton bei 243 bis 244°, wobei die Kristalle bei 85 bis 90° undurchsichtig werden und keine Schmelzpunktdepression beim Vermischen mit einer authentischen, bei 242 bis 244° schmelzenden und bei 84 bis 95° undurchsichtig werdenden Probe von Cortisonacetat zeigen, [a] _ + 168° (c = 0,63 in Aceton), 204° (c = 0,63).Furthermore, 4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione can be acetylated to cortisone acetate and dehydrogenated; the crystals obtained melt after two recrystallization from acetone at 243 to 244 °, the crystals becoming opaque at 85 to 90 ° and no melting point depression when mixed with an authentic sample of, melting at 242 to 244 ° and becoming opaque at 84 to 95 ° Show cortisone acetate [a] _ + 168 ° (c = 0.63 in acetone), 204 ° (c = 0.63).

Analyse für C23 H30 06 Berechnet .... C = 68,65,H = 7,46; gefunden...... C = 68,67,H = 7,54. Das Ultrarotspektrum des Produkts ist mit demjenigen einer authentischen Probe von Cortisonacetat identisch.Analysis for C23 H30 06 Calculated .... C = 68.65, H = 7.46; found ...... C = 68.67, H = 7.54. The ultrared spectrum of the product is identical to that of an authentic sample of cortisone acetate.

c) Isolierung eines anderen Oxydationsprodukts. Die in b) erhaltene Chloroformmutterlauge wird zur Trockne gedampft, und der Rückstand wird in einem kleinen Volumen Aceton aufgenommen. Beim Abkühlen im Kühlschrank erhält man eine kristalline Substanz. Nach zweimaliger Umkristallisation aus demselben Lösungsmittel erhält man ein Produkt mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt etwa 248 bis 250°; [a] _ + 97° (c = 0,50 in absolutem Alkohol) ; Amax (Alkohol) = 241 mp. (s = 16 000).c) Isolation of another oxidation product. The chloroform mother liquor obtained in b) is evaporated to dryness and the residue is taken up in a small volume of acetone. When cooling in the refrigerator, a crystalline substance is obtained. After two recrystallizations from the same solvent, a product is obtained with the following properties: melting point about 248 to 250 °; [a] _ + 97 ° (c = 0.50 in absolute alcohol); Amax (alcohol) = 241 mp. (s = 16,000).

Analyse für C21H3o05: Berechnet .... C = 69,58,H = 8,34; gefunden...... C = 69,45,H = 8,53. Das Produkt ist isomer mit 4-Pregnen-11 a, 17a, 21-triol-3, 20-dion.Analysis for C21H3o05: Calculated .... C = 69.58, H = 8.34; found ...... C = 69.45, H = 8.53. The product is isomeric with 4-pregnen-11 a, 17a, 21-triol-3, 20-dione.

Beispiel 5 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen, wie unter a) von Beispiel 1 beschrieben, werden angewendet, nur mit der Ausnahme, daß 0,5g/1 11-Desoxy-17-oxycorticosteronacetat anstatt Progesteron zugegeben werden.Example 5 a) Fermentation. The same fermentation conditions as under a) of Example 1 described are used, only with the exception that 0.5g / 1 11-deoxy-17-oxycorticosterone acetate can be added instead of progesterone.

b) Extraktion eines Oxydationsprodukts. Das unter a) durch Vergärung von 1,9g 11-Desoxy-17-oxycorticosteronacetat erhaltene Kulturfiltrat wird mit Chloroform extrahiert, und das Chloroform wird wie unter Abschnitt b) von Beispiel 4 aus dem Extrakt entfernt. Der Rückstand, etwa 420 mg, ergibt bei Weiterbehandlung . wie unter b) von Beispiel 4 etwa 156 mg Kristalle. Nach zweimaliger Umkristallisation aus Aceton schmilzt das erhaltene 4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dion bei 215 bis 218°.b) Extraction of an oxidation product. That under a) by fermentation Culture filtrate obtained from 1.9 g of 11-deoxy-17-oxycorticosterone acetate is treated with chloroform extracted, and the chloroform is as in section b) of Example 4 from the Extract removed. The residue, about 420 mg, yields on further treatment. how under b) of Example 4 about 156 mg of crystals. After two recrystallizations from acetone, the 4-pregnene-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione obtained melts at 215 up to 218 °.

Aus dem getrockneten Mycel dieser Gärung kann 11-Desoxy-17-oxycorticosteronacetat durch Extraktion mit Hexan zur Entfernung von Fettsubstanzen und darauffolgende Extraktion mit Aceton, Entfernung des Acetons im Vakuum gewonnen werden, wobei etwa 1,35 g eines kristallinen Rückstandes erhalten werden; durch Umkristallisation des Rückstandes aus Aceton erhält man etwa 930 mg der reinen, bei 234,6° schmelzenden Verbindung.From the dried mycelium of this fermentation can 11-deoxy-17-oxycorticosterone acetate by extraction with hexane to remove fatty substances and subsequent Extraction with acetone, removal of the acetone in vacuo, taking about 1.35 g of a crystalline residue are obtained; by recrystallization of the The residue from acetone gives about 930 mg of the pure, melting at 234.6 ° Link.

Beispiel 6 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen, wie unter a) von Beispiel 1 beschrieben, werden angewendet, mit der Ausnahme, daß 0,25 g pro Liter Desoxycorticosteron an Stelle von Progesteron zugegeben «erden.Example 6 a) Fermentation. The same fermentation conditions as under a) of Example 1 described are used with the exception that 0.25 g per Liters of deoxycorticosterone added instead of progesterone.

b) Isolierung von Epicorticosteron. 3,581 des unter a) bei der Vergärung von 1 g Desoxycorticosteron erhaltenen Kulturfiltrats werden viermal mit j e 21 Chloroform extrahiert. Die Chloroformextrakte werden zusammengeschüttet und konzentriert, wobei man etwa 1,01 g amorphen Feststoff erhält. Dieser Feststoff wird in 5 ccm Chloroform und 20 ccm Benzol gelöst, und die Lösung wird an einer Säule aus 30 g Kieselsäuregel (bekannt unter dem Handelsnamen z,Silicagela) chromatographiert. Bei der Elution erhält man folgende Ergebnisse: Elutionsmittel Volumen Feststoff (ccm) (mg) Chloroform-Benzol (1:4) ...... 300 Spuren Chloroform-Benzol (1:1) ...... 500 " Chloroform ......... «********'« 400 " Aceton-Chloroform (1:9) ...... 340 " Aceton-Chloroform (1:4) ...... 850 670,2 Aceton-Chloroform (1:1) ...... 525 103,2 Aceton ....................... 250 19,5 Die mit Aceton-Chloroform (1:4) eluierten Feststoffe kristallisieren aus einer Aceton-Äther-Mischung leicht in Form von Stäbchen oder in Form von Prismen aus Äthylacetat und besitzen die foluenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 153 bis 154°; [a] = -I- 168° (c = 0,7). Analyse für Cal H30 0 4 Berechnet .... C = 72,80,H = 80,73; gefunden...... C = 72,90,H = 8,76. Das Produkt ist 4-Pregnen-11 a, 21-diol-3, 20-dion, welches sich zu einem Produkt acetylieren läßt, das aus einer Mischung von Aceton und Äther umkristallisiert, nadelförmige Kristalle bildet, welche bei 169° erweichen und bei 172 bis 177° schmelzen. Eine Umkristallisation aus derselben Lösungsmittelmischung erhöht den Schmelzpunkt auf 177,5 bis 179°. Eine authentische Probe von Dehydrocorticosteronacetat schmilzt bei 178 bis 179,5°. Eine Mischung der beiden zeigt keine Schmelzpunktdepression, und die Ultrarotspektren sind identisch. Das erhaltene Produkt besitzt weiter die folgenden Eigenschaften: [a] = + 239° (c = 0,5). Analyse für Ca3H3005: Berechnet .... C = 71,46,H = 7,84; gefunden...... C = 71,54,H = 7,99. Beispiel 7 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen wie unter a) von Beispiel 1 werden angewendet, nur mit der Ausnahme, daß an Stelle von Progesteron 0,25g pro Liter 17a-Oxyprogesteron zugesetzt werden.b) Isolation of epicorticosterone. 3.581 of the culture filtrate obtained under a) during the fermentation of 1 g of deoxycorticosterone are extracted four times with 21% chloroform each time. The chloroform extracts are poured together and concentrated to give approximately 1.01 g of an amorphous solid. This solid is dissolved in 5 cc of chloroform and 20 cc of benzene, and the solution is chromatographed on a column of 30 g of silica gel (known under the trade name z, silica gel). The following results are obtained from the elution: Eluent volume solid (ccm) (mg) Chloroform-benzene (1: 4) ...... 300 traces Chloroform-Benzene (1: 1) ...... 500 " Chloroform ......... «******** '« 400 " Acetone-chloroform (1: 9) ...... 340 " Acetone-Chloroform (1: 4) ...... 850 670.2 Acetone-chloroform (1: 1) ...... 525 103.2 Acetone ....................... 250 19.5 The solids eluted with acetone-chloroform (1: 4) crystallize easily from an acetone-ether mixture in the form of rods or in the form of prisms made of ethyl acetate and have the following properties: melting point 153 to 154 °; [a] = -I- 168 ° (c = 0.7). Analysis for Cal H30 0 4 Calculated .... C = 72.80, H = 80.73; found ...... C = 72.90, H = 8.76. The product is 4-pregnen-11a, 21-diol-3, 20-dione, which can be acetylated to a product that recrystallizes from a mixture of acetone and ether, forms needle-shaped crystals that soften at 169 ° and at 172 Melting up to 177 °. Recrystallization from the same solvent mixture increases the melting point to 177.5 ° to 179 °. An authentic sample of dehydrocorticosterone acetate melts at 178 to 179.5 °. A mixture of the two shows no melting point depression and the ultrared spectra are identical. The product obtained further has the following properties: [a] = + 239 ° (c = 0.5). Analysis for Ca3H3005: Calculated .... C = 71.46, H = 7.84; found ...... C = 71.54, H = 7.99. Example 7 a) Fermentation. The same fermentation conditions as under a) of Example 1 are used, with the exception that instead of progesterone 0.25 g per liter of 17a-oxyprogesterone are added.

b) Extraktion und Isolierung von Oxydationsprodukten. Das in a) bei der Vergärung von 1 g 17a-Oxyprogesteron erhaltene Kulturfiltrat wird, wie unter b) von Beispiel 4 beschrieben, mit Chloroform extrahiert. Der etwa 514 mg wiegende Rückstand wird in Chloroform gelöst, und die Lösung wird an 15 g »Silicagelu chromatographiert. Das Chromatogramm wird mit 1300 ccm einer Mischung von 5 °% Aceton in Chloroform eluiert, und die Lösungsmittel werden verdampft, wobei man etwa 245 mg farblose Kristalle erhält, welche aus Äthylacetat-Hexan umkristallisiert werden. Das erhaltene Produkt, welches mit dem nachstehend beschriebenen 11a, 17a-Dioxyprogesteron isomer ist und wahrscheinlich 17a-Methyl-D-homo-4-androsten-lla, 17a-diol-3, 20-dion ist (Verbindung X), besitzt die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 261,2°; [a] _ -@- 46° (c = 0,74).b) Extraction and isolation of oxidation products. The culture filtrate obtained in a) during the fermentation of 1 g of 17a-oxyprogesterone is extracted with chloroform as described under b) of Example 4. The residue, which weighs about 514 mg, is dissolved in chloroform, and the solution is chromatographed on 15 g of silica gel. The chromatogram is eluted with 1300 cc of a mixture of 5% acetone in chloroform and the solvents are evaporated to give about 245 mg of colorless crystals which are recrystallized from ethyl acetate-hexane. The product obtained, which is isomeric with 11a, 17a-dioxyprogesterone described below and is likely to be 17a-methyl-D-homo-4-androstene-lla, 17a-diol-3, 20-dione (Compound X), has the following Properties: melting point 261.2 °; [a] _ - @ - 46 ° (c = 0.74).

Analyse für Cal H30 0 4 Berechnet .... C = 72,80,H = 8,73; gefunden...... C = 72,92,H = 8,84. Durch Oxydation mit Chromsäureanhydrid in Eisessig erhält man ein Produkt, welches aus Acetonäther in Form farbloser Plättchen kristallisierte. Das erhaltene 11-Keton besitzt die folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 238 bis 242°, [a] = + 121 (c = 0,48).Analysis for Cal H30 0 4 Calculated .... C = 72.80, H = 8.73; found ...... C = 72.92, H = 8.84. Oxidation with chromic anhydride in glacial acetic acid gives a product which crystallized from acetone ether in the form of colorless platelets. The 11-ketone obtained has the following properties: melting point 238 to 242 °, [a] = + 121 (c = 0.48).

Analyse für Cal H" 04: Berechnet .... C = 73,23,H = 8,19; gefunden...... C = 73,33,H = 8,34. Eine weitere Elution des Chromatogramms mit 550 ccm einer 100%igen Mischung von Aceton-Chloroform und Verdampfung der Lösungsmittel ergibt etwa 150 mg eines kristallinen Produkts. Bei der Umkristallisation aus Äthylacetat-Äther erhält man farblose Plättchen mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 219 bis 221°; [a] _ + 87° (c = 0,57).Analysis for Cal H "04: Calculated .... C = 73.23, H = 8.19; found ...... C = 73.33, H = 8.34. Further elution of the chromatogram with 550 cc of a 100% mixture of acetone-chloroform and evaporation of the solvents gives about 150 mg of a crystalline product. Recrystallization from ethyl acetate-ether gives colorless platelets with the following properties: melting point 219 to 221 °; [a] _ + 87 ° (c = 0.57).

Analyse für Cal H30 04 Berechnet .... C = 72,80,H = 8,73; gefunden...... C = 73,11,H = 8,70. Das Produkt ist 11a, 17a-Dioxyprogesteron, was sich aus seiner Oxydation zu dem bekannten 4-Pregnen-17a-ol-3, 11, 20-trion ergibt; aus Äthylacetat-Äther farblose Tetraeder mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 232,5°; [a] = 186° (c = 0,33).Analysis for Cal H30 04 Calculated .... C = 72.80, H = 8.73; found ...... C = 73.11, H = 8.70. The product is 11a, 17a-dioxyprogesterone, which results from its oxidation to the well-known 4-pregnen-17a-ol-3, 11, 20-trione; from ethyl acetate-ether colorless tetrahedra with the following properties: melting point 232.5 °; [a] = 186 ° (c = 0.33).

Analyse für Cal Hab 04 Berechnet .... C = 73,23,H = 8,19; gefunden...... C = 73,24,H = 8,37. Der Schmelzpunkt und die spezifische Drehung stimmen mit der von Kritchevsky und Mitarb. im journ. Amer. Chem. Soc., Bd. 74, 1952, S. 483, angegebenen Daten überein.Analysis for Cal Hab 04 Calculated .... C = 73.23, H = 8.19; found ...... C = 73.24, H = 8.37. The melting point and specific rotation agree with that of Kritchevsky et al. in the journ. Amer. Chem. Soc., Vol. 74, 1952, p. 483.

Durch Acetylierung von 11a, 17a-Dioxyprogesteron erhält man aus Aceton-Äther große Prismen mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 205 bis 208°; [a] = + 65° (c = 0,61).Acetylation of 11a, 17a-dioxyprogesterone produces large prisms from acetone-ether with the following properties: melting point 205 to 208 °; [a] = + 65 ° (c = 0.61).

Analyse für C" H" 06 Berechnet .... C = 71,10,H = 8,30; gefunden...... C = 71,01,H = 8,16. Beispiel 8 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen, wie unter a) im Beispiel 1 beschrieben, werden angewendet, nur mit der Ausnahme, daß an Stelle von Aspergillus niger Aspergillus species ATCC 11267 und an Stelle von Progesteron 17a-Oxy-progesteron in einer Menge von 0,25 g pro Liter verwendet wird.Analysis for C "H" 06 Calculated .... C = 71.10, H = 8.30; found ...... C = 71.01, H = 8.16. Example 8 a) Fermentation. The same fermentation conditions as described under a) in Example 1 are used, with the exception that instead of Aspergillus niger Aspergillus species ATCC 11267 and instead of progesterone 17a-oxy-progesterone in an amount of 0.25 g per Liter is used.

b) Extraktion von Oxydationsprodukten. Das unter a) bei der Vergärung von 875 mg 17a-Oxyprogesteron erhaltene Kulturfiltrat wird, wie unter b) von Beispiel 1 beschrieben, mit Chloroform extrahiert. Nach Entfernung des Chloroforms verbleiben etwa 500 mg Rückstand. Der Rückstand wird in Chloroform gelöst und die Lösung an 15 g »Silicagela chromatographiert. Bei der Elution mit 300 ccm Chloroform werden etwa 35 mg nicht identifizierter Nebenprodukte entfernt. Weitere Elution mit 200 ccm einer Mischung von 5 0/0 Aceton in Chloroform entfernt etwa 20 mg der im Beispiel 7 beschriebenen D-Homoverbindung. Die Elution mit 1500 ccm 10 0/0 Aceton enthaltendem Chloroform ergibt etwa 410 mg des Primärprodukts, nämlich 11 a, 17a-Dioxyprogesteron, das bei 215 bis 219° schmilzt und ein [a] = + 87° (c = 0,52) besitzt.b) Extraction of oxidation products. The culture filtrate obtained under a) during the fermentation of 875 mg of 17a-oxyprogesterone is extracted with chloroform as described under b) of Example 1. After removal of the chloroform, about 500 mg of residue remain. The residue is dissolved in chloroform and the solution is chromatographed on 15 g of silica gel. Elution with 300 cc of chloroform removes about 35 mg of unidentified by-products. Further elution with 200 cc of a mixture of 50/0 acetone in chloroform removes about 20 mg of the D-homo compound described in Example 7. Elution with chloroform containing 1500 cc of 10 0/0 acetone gives about 410 mg of the primary product, namely 11 a, 17a-dioxyprogesterone, which melts at 215 to 219 ° and has an [a] = + 87 ° (c = 0.52).

Beispiel 9 a) Gärung. Die gleichen Gärungsbedingungen, wie unter a) von Beispiel 1 beschrieben, werden angewendet, nur mit der Ausnahme, daß an Stelle von Progesteron 0,50 g pro Liter 5-Pregnenolon zugegeben werden.Example 9 a) Fermentation. The same fermentation conditions as under a) described by Example 1 are used, with the exception that in place of progesterone 0.50 g per liter of 5-pregnenolone are added.

b) Extraktion und Isolierung von Oxydationsprodukten. Das unter a) bei der Vergärung von 1 g 5-Pregnenolon erhaltene Kulturfiltrat wird, wie unter b) von Beispiel l beschrieben, mit Chloroform extrahiert, wobei man 169 mg eines fettfreien Steroids erhält. Das Produkt wird in 10 ccm einer Mischung von Chloroform und Benzol (1 : 3) gelöst, und die Lösung wird an 4 g mit Schwefelsäure gewaschener Tonerde chromatographiert. Die Elution des Chromatogramms mit 150 ccm Chloroform-Benzol (1:1) und Verdampfung des Lösungsmittels ergibt etwa 40 mg 11 a-Oxyprogesteron. Nach der Umkristallisation aus Aceton-Äther schmilzt das Produkt bei 156 bis 159° und besitzt .ein [a] _ + 71° (c = 0,52).b) Extraction and isolation of oxidation products. The culture filtrate obtained under a) during the fermentation of 1 g of 5-pregnenolone is, as described under b) of Example 1, extracted with chloroform, 169 mg of a fat-free steroid being obtained. The product is dissolved in 10 cc of a mixture of chloroform and benzene (1: 3) and the solution is chromatographed on 4 g of alumina washed with sulfuric acid. Elution of the chromatogram with 150 cc of chloroform-benzene (1: 1) and evaporation of the solvent gives about 40 mg of 11α-oxyprogesterone. After recrystallization from acetone-ether, the product melts at 156 to 159 ° and has a [a] _ + 71 ° (c = 0.52).

Eine weitere Eluierung des Chromatogramms mit 150 ccm Chloroform und Verdampfung des Chloroforms ergibt etwa 75 mg eines Stoffes (vermutlich 6, 11 a-Dioxyprogesteron ), welcher nach Umkristallisation aus Aceton bei 247 bis 250° schmilzt und dessen Amaa (Alkohol) = 235 mp, beträgt (s = 14 000).Another elution of the chromatogram with 150 cc of chloroform and Evaporation of the chloroform gives about 75 mg of a substance (probably 6, 11 a-dioxyprogesterone ), which melts after recrystallization from acetone at 247 to 250 ° and its Amaa (Alcohol) = 235 mp, is (s = 14,000).

Nichtoxydiertes 5-Pregnenolon kann aus dem trocknen Mycel durch Extraktion mit Chloroform, Entfernung des Chloroforms im Vakuum, Suspension des Rückstandes in Hexan, Abfiltrieren der erhaltenen Kristalle (etwa 654 mg) und Umkristallisation aus Aceton erhalten werden. Das so gewonnene 5-Pregnenolon schmilzt bei 186 bis 190° und besitzt ein [a] = -E- 24° (c = 1,4).Unoxidized 5-pregnenolone can be obtained from the dry mycelium by extraction with chloroform, removal of the chloroform in vacuo, suspension of the residue in hexane, filtering off the crystals obtained (about 654 mg) and recrystallization from acetone. The 5-pregnenolone obtained in this way melts at 186 to 190 ° and has an [a] = -E- 24 ° (c = 1.4).

Beispiel 10 Unter Anwendung der unter a) und b) von Beispiel 4 beschriebenen Methoden, jedoch mit Aspergillus species ATCC 11267 an Stelle von Aspergillus niger als Vergärungsorganismus, erhielt man 582 mg chloroformunlösliche Kristalle mit den folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 216 bis 219°; [a] _ -I- 117°, (c = 1 in absolutem Äthanol).Example 10 Using the methods described under a) and b) of Example 4, but with Aspergillus species ATCC 11267 instead of Aspergillus niger as the fermentation organism, 582 mg of chloroform-insoluble crystals with the following properties were obtained: melting point 216 ° to 219 °; [a] _ -I- 117 °, (c = 1 in absolute ethanol).

Analyse für C21 Hso 05 Berechnet .... C = 69,58,H = 8,34; gefunden...... C = 69,88,H = 8,09. Das Ultrarotspektrum des nach der Umkristallisation aus Aceton erhaltenen Produkts ist mit demjenigen einer authentischen Probe von 4-Pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dion identisch.Analysis for C21 Hso 05 Calculated .... C = 69.58, H = 8.34; found ...... C = 69.88, H = 8.09. The infrared spectrum of the product obtained after recrystallization from acetone is identical to that of an authentic sample of 4-pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dione.

Beispiel 11 Unter den gleichen Bedingungen wie im Beispiel 10, jedoch bei Vergärung des 11-Oxy-17-oxycorticosterons in einer Menge von 1 g pro Liter, erhält man eine Ausbeute von 467 mg 4-Pregnen-1l a, 17a, 21-triol-3, 20-dion. Beispiel 12 Unter den gleichen Bedingungen wie im Beispiel 10, jedoch unter Verwendung von 11-Desoxy-17-oxycorti costeronacetat, erhält man etwa 204 mg 4-Pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dion.Example 11 Under the same conditions as in Example 10, however with fermentation of 11-oxy-17-oxycorticosterone in an amount of 1 g per liter, a yield of 467 mg of 4-pregnen-1l a, 17a, 21-triol-3, 20-dione is obtained. example 12 Under the same conditions as in Example 10, but using 11-deoxy-17-oxycorti costeronacetat, you get about 204 mg 4-pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dione.

Beispiel 13 Unter den gleichen Bedingungen wie im Beispiel 12, jedoch unter Verdoppelung der Gärungszeit, erhält man etwa 220 mg 4-Pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dion.Example 13 Under the same conditions as in Example 12, however doubling the fermentation time, you get about 220 mg 4-pregnen-1la, 17a, 21-triol-3, 20-dione.

Beispiel 14 Unter den gleichen Bedingungen wie im Beispie14, jedoch unter Verwendung einer rohen, bei der Verseifung von 11-Desoxy-17-oxycorticosteron-21-acetat erhaltenen Mischung, erhält man etwa 589 mg 4-Pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dion. Die für eine Zugabe zu 2 1 Medium ausreichende rohe Verseifungsmischung wird so hergestellt, daß man 1 g 11-Desoxy-17-oxycorticosteron-21-acetat in einer Mischung aus 47 ccm Methanol und einer Lösung von 700 mg Kaliumbicarbonat in 13 ccm Wasser suspendiert und die Suspension 18 Stunden bei Raumtemperatur in einer verschlossenen Flasche schüttelt.Example 14 Under the same conditions as in Example 14, however using a crude, in the saponification of 11-deoxy-17-oxycorticosterone-21-acetate obtained mixture, about 589 mg of 4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3, 20-dione are obtained. The crude saponification mixture sufficient for addition to 2 liters of medium becomes like this prepared by adding 1 g of 11-deoxy-17-oxycorticosterone-21-acetate in a mixture from 47 cc of methanol and a solution of 700 mg of potassium bicarbonate in 13 cc of water suspended and the suspension for 18 hours at room temperature in a sealed Bottle shakes.

Beispiel 15 Unter den im Beispie14 beschriebenen Bedingungen, jedoch mit einer Steroidmenge von 0,25 g pro Liter und unter Verwendung des Mikroorganismus Aspergillus amstelodami an Stelle von Aspergillus niger, erhält man aus 0,5g 11-Desoxy-17-oxy-corticosteron etwa 383 mg Steroide. Diese werden in 10 ccm Chloroform aufgenommen; der etwa 164 mg wiegende kristalline Niederschlag wird abfiltriert und aus Aceton umkristallisiert. Der erhaltene Stoff schmilzt bei 217 bis 220°. Sein Ultrarotspektrum ist mit dem von 4-Pregnen-1 1a, 17a, 21-triol-3, 20-dion identisch.Example 15 Under the conditions described in Example 14, however with a steroid amount of 0.25 g per liter and using the microorganism Aspergillus amstelodami instead of Aspergillus niger is obtained from 0.5 g of 11-deoxy-17-oxy-corticosterone about 383 mg of steroids. These are taken up in 10 cc of chloroform; of about 164 mg of crystalline precipitate is filtered off and recrystallized from acetone. The substance obtained melts at 217 to 220 °. Its ultrared spectrum is with that of 4-pregnen-1 1a, 17a, 21-triol-3, 20-dione are identical.

Die Chloroformmutterlauge wird zurTrockne gedampft, in etwas Aceton aufgenommen, die Lauge abgekühlt, und die erhaltenen Kristalle (etwa 33 mg) werden aus Aceton umkristallisiert. Das Produkt schmilzt bei 248,5 bis 250°, und sein Ultrarotspektrum ist mit dem des unter c) von Beispiel 4 beschriebenen Produktes identisch.The chloroform mother liquor is evaporated to dryness in a little acetone taken up, the liquor cooled, and the crystals obtained (about 33 mg) are recrystallized from acetone. The product melts at 248.5 to 250 °, and its ultra-red spectrum is identical to that of the product described under c) of Example 4.

Beispiel 16 Unter den gleichen Bedingungen wie im Beispie14, jedoch unter Verwendung von Aspergillus nidulans an Stelle von Aspergillus niger, erhält man etwa 732 mg eines Steroids aus 1 g 11-Desoxy-17-oxycorticosteron. Aus diesem Produkt erhält man etwa 571 mg 4-Pregnenlla, 17a, 21-triol-3, 20-dion, welches nach Umkristallisation aus Aceton bei 216 bis 219° schmilzt und das richtige Ultrarotspektrum zeigt.Example 16 Under the same conditions as in Example 14, however using Aspergillus nidulans instead of Aspergillus niger one about 732 mg of a steroid from 1 g of 11-deoxy-17-oxycorticosterone. For this Product is obtained about 571 mg of 4-pregnenlla, 17a, 21-triol-3, 20-dione, which according to Recrystallization from acetone at 216 to 219 ° melts and the right ultra-red spectrum shows.

In den vorstehenden Beispielen können gemäß der Erfindung auch andere Medien zur Anwendung kommen, wobei natürlich die einzige Voraussetzung ist, daß diese Medien das Wachstum der verwendeten Aspergillusart in Anwesenheit von Sauerstoff unterhalten. Die gesamte als Nebenprodukt erzeugte Zitronensäure (beispielsweise bei Verwendung von Saccharose oder Melasse als teilweiser oder ausschließlicher Lieferant für Kohlenstoff und Energie) oder alle anderen wertvollen Nebenprodukte (z. B. Amylasen oder Proteinasen) können nach den üblichen Verfahren zu ihrer Gewinnung aus Aspergilluskulturen erhalten werden. Während der Gärung soll ständig steriler Sauerstoff zugegeben sein, was auf die zur Durchführung von Gärungen in Anwesenheit von Sauerstoff übliche Weise erzielt werden kann, indem man z. B. eine große Fläche des Mediums der Luft aussetzt oder indem man bedeckte, belüftete Kulturen verwendet. Die Inkubationszeit kann den Oxydationsgrad bei den jeweiligen Steroidsubstraten bestimmen und wird natürlich unterbrochen, wenn das Medium den höchsten Gehalt an dem gewünschten Produkt aufweist, was sich jeweils auf einfache Weise bestimmen läßt.In the above examples, others can also be used in accordance with the invention Media are used, the only requirement of course being that this media stimulates the growth of the Aspergillus species used in the presence of oxygen to chat. All citric acid produced as a by-product (for example when using sucrose or molasses as partial or exclusive Supplier of carbon and energy) or any other valuable by-product (e.g. amylases or proteinases) can be obtained by the usual methods can be obtained from cultures of Aspergillus. During fermentation it should be constantly more sterile Oxygen should be added, which is necessary to carry out fermentations in the presence of oxygen usual manner can be achieved by z. B. a large area exposure of the medium to air or by using covered, aerated cultures. The incubation time can determine the degree of oxidation in the respective steroid substrates determine and is naturally interrupted when the medium has the highest content the desired product, which can be easily determined in each case leaves.

In den vorstehenden Beispielen wird das Steroidsubstrat in das Gärungsmedium vor Einsaat des Aspergillus eingebracht. In diesem Fall wird das Steroid zweckmäßig zu seiner leichteren Handhabung in Chloroform gelöst (z. B. 1 ccm Chloroform pro 100 ccm Medium). Das Chloroform wird dabei während der Sterilisation (d. h. vor der Einsaat) wieder aus dem Medium entfernt. Das Steroidsubstrat kann jedoch auch nach der Einsaat des Aspergillus und sogar nachdem das Wachstum desselben eingesetzt hat, zugegeben werden. Das Steroidsubstrat kann auch dadurch oxydiert werden, daß man das Steroid und Luft in einer wäßrigen Suspension nicht proliferierender Zellen des Aspergillus zusammenbringt oder indem man das Steroid, Luft und Enzyme des Aspergillus in einem wäßrigen zellfreien Medium zusammenbringt. Beispielsweise wird eine auf dem Medium von Beispiel 1, jedoch ohne Progesteron gewachsene 3 Tage alte Kultur von Aspergillus niger zentrifugiert, in destilliertem Wasser wieder suspendiert, erneut zentrifugiert und abermals in destilliertem Wasser suspendiert. Die Suspension wird in einen Kolben gebracht, und es wird z. B. Progesteron zugegeben. Der Kolben wird 24 Stunden lang bei 24° in Bewegung gehalten, worauf die Suspension filtriert wird. Das gebildete 11 a-Oxyprogesteron wird durch Chloroformextraktion des Filtrats und weitere Behandlung wie unter b) ff. von Beispiel 1 gewonnen. Gemäß der Erfindung können auch andere übliche Maßnahmen bei der Gärung Anwendung finden. So kann z. B. der Aspergillus auf einem fürseineVermehrunggünstigsten Medium gezüchtet werden, das Mycel kann von der Kulturflüssigkeit nach erfolgter Vermehrung abgetrennt und in einem neuen, das Steroidsubstrat enthaltenden Medium (z. B. dem im Beispiel 1 beschriebenen) wieder suspendiert werden. Das Aspergillusmycel kann auch mehrmals verwendet werden, d. h., die das Oydationsprodukt des Steroids enthaltende Kulturflüssigkeit wird von dem Mycel abgetrennt, die Flüssigkeit wird zur Gewinnung dieses Oxydationsprodukts behandelt, und das letztere wird in einer neuen Menge von steroidhaltigem Medium wieder suspendiert.In the examples above, the steroid substrate is in the fermentation medium introduced before sowing the Aspergillus. In this case the steroid becomes expedient dissolved in chloroform for easier handling (e.g. 1 ccm chloroform per 100 cc medium). The chloroform is used during the sterilization (i.e. before the sowing) is removed from the medium again. However, the steroid substrate can also after the Aspergillus is sown and even after it has grown has to be admitted. The steroid substrate can also be oxidized in that one the steroid and air in an aqueous suspension of non-proliferating cells of the Aspergillus or by combining the steroid, air and enzymes of the Aspergillus in an aqueous cell-free medium. For example, a the medium of Example 1, but without progesterone, a 3-day-old culture centrifuged by Aspergillus niger, resuspended in distilled water, centrifuged again and resuspended in distilled water. The suspension is placed in a flask, and it is z. B. Progesterone added. The piston is kept in motion for 24 hours at 24 ° and the suspension is filtered will. The 11 a-oxyprogesterone formed is obtained by chloroform extraction of the filtrate and further treatment as under b) ff. of Example 1 obtained. According to of the invention, other conventional measures can also be used in fermentation. So z. B. the Aspergillus is grown on a medium most favorable to its propagation The mycelium can be separated from the culture fluid after it has multiplied and in a new medium containing the steroid substrate (e.g. that in the example 1) are suspended again. The Aspergillus mycelium can also be used several times be used, d. i.e., the culture fluid containing the steroid's oxidation product is separated from the mycelium, the liquid is used to recover this oxidation product treated, and the latter is in a new amount of steroid-containing medium suspended again.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the production of oxidized steroids, characterized in that one steroids with an oxidizing type of fungus of the Aspergillus strain or with oxidizing agents obtainable from such fungi Treated enzymes in the presence of oxygen and, optionally, the obtained oxidized steroids in a known manner, in particular by extraction.

2. The method according to claim 1 for the preparation of at least oxidized in 11 a-position Steroids, characterized in that one is an 11-deoxysteroid, in particular a 3, 20-diketo- or 3-oxy-20-ketopregnene, used as the starting compound.

3. Procedure according to claim 1, characterized in that progesterone, 17-oxy-11-deoxycorticosterone or its ester, deoxycorticosterone, 17a-oxyprogesterone or 5-pregnenolone as Starting compound used.

4. The method according to claim 1, characterized in that the biological oxidation with enzymes in particular of Aspergillus niger (Wisc. 72-2) Aspergillus amstelodami, Aspergillus nidulans and Aspergillus species ATCC 11267 is carried out. Considered Papers Nature, Vol. 162, 1948, p.619; Vol. 163, 1949, p.219; Journ. Amer. Chem. Soc., Vol. 74, 1952, p. 1871.