BRPI0816219B1 - compostos contendo guanidina úteis como antagonistas de receptor muscarínico, composição farmacêutica e uso - Google Patents

Description

(54) Título: COMPOSTOS CONTENDO GUANIDINA ÚTEIS COMO ANTAGONISTAS DE RECEPTOR MUSCARÍNICO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO (73) Titular: THERAVANCE BIOPHARMA R&D IP, LLC. Endereço: 901 GATEWAY BOULEVARD, SOUTH SAN FRANCISCO CA 94080, ESTADOS UNIDOS DA AMÉRICA(US) (72) Inventor: YU-HUA Jl; CRAIG HUSFELD; YONGQI MU; RICK LEE; Ll Ll.

Prazo de Validade: 10 (dez) anos contados a partir de 06/11/2018, observadas as condições legais

Expedida em: 06/11/2018

Assinado digitalmente por:

Liane Elizabeth Caldeira Lage

Diretora de Patentes, Programas de Computador e Topografias de Circuitos Integrados

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COMPOSTOS CONTENDO GUANIDINA ÚTEIS COMO ANTAGONISTAS DE RECEPTOR MUSCARÍNICO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção relaciona-se a compostos de contendo guanidina possuindo atividade antagonista do receptor muscarínico ou anticolinérgica. A invenção também se relaciona a composições farmacêuticas compreendendo estes compostos, processos para prepara-los e métodos de uso para tratar disfunções pulmonares.

ESTADO DA TÉCNICA

As disfunções pulmonares e respiratórias, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e asma, afligem muitos milhões de pessoas em todo o mundo e tais disfunções são a causa principal de morbidez e mortalidade.

Os antagonistas do receptor muscarínico são conhecidos por fornecerem efeitos broncoprotetores e portanto, tais compostos são úteis para tratar disfunções respiratórias, tais como COPD e asma. Quando usados para tratar dais disfunções, os antagonistas do receptor muscarínico são tipicamente administrados por inalação. Entretanto, mesmo quando administrados por inalação, uma quantidade significante do antagonista do receptor muscarínico é freqüentemente absorvida na circulação sistêmica resultando em efeitos colaterais sistêmicos, tal como boca seca, midríase e efeitos colaterais cardiovasculares.

Adicionalmente, muitos antagonistas do receptor muscarínico inalados possuem uma duração de ação relativamente curta exigindo que eles sejam administrados várias vezes por dia. Tal regime de dosagem múltipla diária

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2/112 não é apenas inconveniente mas também cria um risco significante de tratamento inadequado devido ao descumprimento do paciente com o horário freqüente de dosagem exigida.

Conseqüentemente, existe uma necessidade por novos antagonistas do receptor muscarinico. Particularmente, há uma necessidade por antagonistas do receptor muscarinico que possuam alta potência, efeitos colaterais sistêmicos reduzidos quando administrados por inalação, e uma ação de longa duração permitindo assim uma forma de dosagem única diária ou até mesmo semanal. Além disso, existe uma necessidade por antagonistas do receptor muscarinico que possuam alta afinidade pelo receptor e um receptor de meiavida longa. Espera-se que tais compostos sejam particularmente efetivos para tratar disfunções pulmonares, tais como COPD e asma, enquanto reduz ou elimina os efeitos colaterais, tais como boca seca e constipação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece novos compostos contendo guanidina possuindo atividade antagonista do receptor muscarinico ou anticolinérgica. Entre outras propriedades, descobriu-se que os compostos desta invenção possuem afinidade de ligação melhorada em relação aos subtipos do receptor muscarinico hM₂ e hM₃, possuem meias-vidas do receptor mais longas, possuem uma janela terapêutica mais ampla, ou possuem maior potência em comparação aos compostos relacionados. Consequentemente, espera-se que os compostos da invenção sejam úteis e vantajosos como agentes terapêuticos para tratar disfunções pulmonares.

Um aspecto da invenção relaciona-se aos compostos que

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3/112 possuem a fórmula I:

CD onde:

R¹ é selecionado a partir de alquil de C1-6-, alquenil de C2-6-, cicloalquil de C3-9- e heteroaril; R² é selecionado a partir de aril e heteroaril; R³ é selecionado a partir de H e alquileno -OH C0-1, ou R³ forma uma ligação dupla com

R¹, ou -CR¹R²R³ juntos formam um grupo de fórmula:

onde A é selecionado a partir de uma ligação, -O-, -S15 , -CH₂-, -CH=CH-, -CH2CH2-, -NH-, e -N(CH₃)-; e R⁴ é selecionado a partir de halo, -OH, alquil de Ci-e- e alcóxi de C1-8-;

X é selecionado a partir de uma ligação -O- e -O-CH2-; quando X é uma ligação, Y é -CH₂-, Y' é -N-, e Y é -CH₂; e quando X é -O- ou -O-CH2-, Y' é -CH-, Y é uma ligação e Y é -CH₂- ou -(CH₂)2-, ou Y é -CH₂- e Y é -CH₂-;

R⁵ é selecionado a partir de flúor e alquil de C1-4-; e a é 0 ou um inteiro de 1 a 3;

R⁶ e R⁷ são independentemente selecionados a partir de

He alquil de C1-4-, e também onde um entre R⁶ e R⁷ pode ser

-NH2 ;

Z é selecionado a partir de H, alquil de C1-6-, alquileno de C1-3-Q e -NH-alquileno de C0-1-Q, e Q é opcionalmente substituído com 1 a 5 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de

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Ci-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, -alquileno de C0-2-COOH, C(O)O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -S-alquil de C1-4, CONR^8aR^8b, -NH-C (0)-alquil de C1-4, -N-dialquil de C1-4 e N+(0)0; R^8a e R^8b são independentemente selecionados a partir de H e alquil de C1-4-;

onde R¹ e R² são opcionalmente substituídos com 1 a 5 grupos R^a independentemente selecionados a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-, ciano, halo, -0R^b, -C(O)OR^b, -SR^b, -S(O)R^b, -S (0) 2R^b,

-C(0)NR^cR^d, e -NR^cR^d; cada R^b é independentement selecionado a partir de H, alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4- e cicloalquil de C3-6-; cada R^c e R^d é independentemente selecionado a partir de H, alquil de C1-4, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-;

onde cada grupo alquil, alquenil, alquinil, alquileno e cicloalquil em R^a_d, R^4-8, e Z, é opcionalmente substituído com 1 a 5 átomos de flúor; onde cada cicloalquil em R^a_d é opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes independentemente selecionado a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, ciano, halo, -0 (alquil de C1-4) , —S (alquil de C1-4) , -S (0) (alquil de C1-4) ,

S (0)₂ (alquil de C1-4) , -NH₂, -NH (alquil de C1-4) , e -N (alquil de Ci-₄)2, onde cada grupo alquil, alquenil e alquinil é opcionalmente substituído com 1 a 5 substituintes flúor; e o grupo alquileno em Z é opcionalmente substituído com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de alquil de C1-2- e -OH; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Entre os compostos de fórmula I, compostos de interesse particular são aqueles que possuem uma constante

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5/112 de dissociação de inibição (Kí) , para ligação ao subtipo M₃ do receptor, menor ou igual a 100 nM; particularmente possuindo uma Kí menor ou igual a 50 nM; mais particularmente possuindo uma Kí menor ou igual a lOnM; e ainda mais particularmente possuindo uma Kí menor ou igual a 1,0 nM.

Um outro aspecto da invenção relaciona-se às composições farmacêuticas compreendendo um veiculo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção. Tais composições podem opcionalmente conter outros agentes terapêuticos tais como os agentes anti-inflamatórios esteroidais (por exemplo, corticosteróides) , agonistas do receptor p2-adrenérgico, inibidores da fosfodiesterase-4 e combinações destes. Consequentemente, em ainda um outro aspecto da invenção, uma composição farmacêutica compreende um composto da invenção, um segundo agente ativo e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Um outro aspecto da invenção relaciona-se a uma combinação de agentes ativos, compreendendo um composto da invenção e um segundo agente ativo. O composto da invenção pode ser formulado junto ou separadamente a partir do(s) agente(s) adicional(ais). Quando formulado separadamente, um veiculo farmaceuticamente aceitável pode ser incluído com o(s) agente(s) adicional(ais) . Assim, ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se a uma combinação de composições farmacêuticas, a combinação compreendendo: uma primeira composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção e um primeiro veículo farmaceuticamente aceitável; e uma segunda composição farmacêutica compreendendo um segundo agente ativo e um segundo veículo farmaceuticamente de 20/09/2018, pág. 10/127

6/112 aceitável. Esta invenção também se relaciona a um kit contendo tais composições farmacêuticas, por exemplo, onde a primeira e a segunda composições farmacêuticas são composições farmacêuticas separadas.

Os compostos da invenção possuem atividade antagonista do receptor muscarínico, e portanto, espera-se que sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar pacientes que sofrem de uma doença ou disfunção que sejam tratadas pelo bloqueio do receptor muscarínico. Assim, um aspecto da invenção relaciona-se a um método de produção de broncodilatação em um paciente, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade produtora de broncodilatação de um composto da invenção. A invenção é também direcionada a um método de tratar uma disfunção pulmonar tal como doença pulmonar obstrutiva crônica ou asma, compreendendo administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção. Um outro aspecto da invenção relaciona-se a um método para antagonizar um receptor muscarínico em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero, uma quantidade antagonizante do receptor muscarínico de um composto da invenção.

Uma vez que os compostos da invenção possuem atividade antagonista do receptor muscarínico, tais compostos são também úteis como ferramentas de pesquisa. Consequentemente, um aspecto da invenção relaciona-se a um método de uso de um composto da invenção como uma ferramenta de pesquisa, o método compreendendo conduzir um ensaio biológico usando-se um composto da invenção. Os compostos da invenção podem também ser usados para avaliar novos compostos químicos. Assim, um outro aspecto da de 20/09/2018, pág. 11/127

7/112 invenção relaciona-se a um método de avaliação de um composto de teste em um ensaio biológico, compreendendo: (a) conduzir um ensaio biológico com um composto de teste para fornecer um primeiro valor de ensaio; (b) conduzir o ensaio biológico com um composto da invenção para fornecer um segundo valor de ensaio; onde a etapa (a) é conduzida ou antes, ou após ou concomitantemente com a etapa (b) ; e (c) comparar o primeiro valor de ensaio da etapa (a) com o segundo valor de ensaio da etapa (b) . Ensaios biológicos exemplares incluem um ensaio de ligação do receptor muscarínico e um ensaio de broncoproteção em um mamífero. Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se a um método de estudo de um sistema biológico ou amostra compreendendo um receptor muscarínico, o método compreendendo: (a) colocar em contato o sistema biológico ou a amostra com um composto da invenção; e (b) determinar os efeitos causados pelo composto no sistema biológico ou amostra.

A invenção está também dirigida aos processos e intermediários úteis para preparar os compostos da invenção. Consequentemente, um outro aspecto da invenção relaciona-se a um processo de preparação de compostos da invenção, compreendendo: (a) um composto de ligação (1) e um composto (2) sob condições de formação de ligação de amida e desproteção do produto para formar o composto (3), ou a ligação de Mitsunobu ou transesterificação do composto (1) e composto (4) e desproteção do produto para formar o composto (5); (b) reagir o composto (3) ou composto (5) com o composto (6) para formar o composto (7); e (c) reagir o composto (7) e o composto (8) para fornecer um composto de fórmula I; onde os compostos de (1) a (9) são conforme de 20/09/2018, pág. 12/127

8/112 definido aqui. Em outros aspectos, a invenção relaciona-se a produtos preparados por qualquer um dos processos aqui descritos.

Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se ao uso de um composto da invenção para a produção de um medicamento, especialmente para a produção de um medicamento útil para tratar uma disfunção pulmonar ou para antagonizar um receptor muscarínico em um mamífero. Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se ao uso de um composto da invenção como uma ferramenta de pesquisa. Outros aspectos e modalidades desta invenção estão aqui divulgados.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Em um aspecto, esta invenção relaciona-se aos compostos que possuem a fórmula I:

Vi-, ^R'\ JL

Rí - W

N 1)1—z R^{T R} (O ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. Esta fórmula pode também ser descrita como:

ÍR^sk \ N ff Ali- γ¹ n + 'n-;

R--1.

RRConforme aqui usado, o termo composto da invenção inclui todos os compostos abrangidos pela fórmula I tal como as espécies incorporadas nas fórmulas II-VIII. Além disso, quando o composto da invenção contém um grupo básico ou ácido (por exemplo, grupos amino ou carboxil), o composto pode existir como uma base livre, ácido livre ou de 20/09/2018, pág. 13/127

9/112 em várias formas de sal. Todas as tais formas de sal estão incluídas no escopo da invenção. Consequentemente, aqueles habilitados na técnica irão reconhecer que a referência a um composto aqui, por exemplo, referência a um composto da invenção ou a um composto de fórmula I inclui um composto de fórmula I assim como sais farmaceuticamente aceitáveis deste composto a menos que de outra forma indicado. Além disso, os solvatos dos compostos de fórmula I estão incluídos no escopo da invenção.

Os compostos da invenção podem conter um ou mais centros quirais e, portanto, podem existir em várias formas estereoisoméricas. Quando tais centros quirais estão presentes, esta invenção relaciona-se a misturas racêmicas, estereoisômeros puros (isto é, enanciômeros ou diastereômeros), misturas enriquecidas com estereoisômeros e semelhantes a menos que de outra forma indicado. Quando uma estrutura química é descrita sem qualquer estereoquímica, é compreendido que todos os possível estereoisômeros são abrangidos por tal estrutura. Assim, por exemplo, o termo composto de fórmula I é objetivado para incluir todos os possíveis estereoisômeros do composto. Similarmente, quando um estereoisômero particular é mostrado ou aqui mencionado, será compreendido por aqueles habilitados na técnica, que menores quantidades de outros estereoisômeros podem estar presentes nas composições desta invenção a menos que de outra forma indicado, desde que a utilidade da composição como um todo não seja eliminada pela presença de tais outros isômeros. Enanciômeros individuais podem ser obtidos por numerosos métodos que são bem conhecidos na técnica, incluindo de 20/09/2018, pág. 14/127

10/112 cromatografia quiral usando-se uma fase estacionária ou suporte quiral, ou através da conversão química dos mesmos em diastereômeros, separando-se os diastereômeros por meios convencionais tal como cromatografia ou recristalização, e então se regenerando os enanciômeros originais. Adicionalmente, onde aplicável, todas os isômeros cis-trans ou E/Z (isômeros geométricos), formas tautoméricas e formas topoisoméricas dos compostos desta invenção estão inclusos no escopo desta invenção, a menos que de outra forma especificado.

Partieularmente, os compostos da fórmula I contém um centro quiral no átomo de carbono indicado pelo símbolo * na seguinte fórmula parcial (mostrada sem substituintes opcionais para clareza de entendimento), ilustrada com a metade cicloalquil de C5-9 - R¹ - sendo ciclopentil, a metade aril - R² - sendo fenil e R³ sendo -OH:

Em uma modalidade desta invenção, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (R). Nesta modalidade, os compostos de fórmula I possuem a configuração (R) no átomo de carbono identificado pelo símbolo * ou são enriquecidos em uma forma estereoisomérica possuindo a configuração (R) neste átomo de carbono. Em uma outra modalidade, o átomo de carbono identificado pelo símbolo * possui a configuração (S) . Nesta modalidade, os compostos de fórmula I possuem a configuração (S) no átomo de carbono identificado pelo símbolo * ou são enriquecidos de 20/09/2018, pág. 15/127

11/112 em uma forma estereoisomérica possuindo a configuração (S) neste átomo de carbono.

Os compostos da invenção, assim como aqueles compostos usados em sua síntese, podem também incluir compostos isotopicamente marcados, isto é, onde um ou mais átomos foram enriquecidos com átomos possuindo uma massa atômica diferente da massa atômica predominantemente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de Fórmula I, por exemplo, incluem, mas não estão limitados a ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O e ¹⁷O.

Descobriu-se que os compostos da invenção possuem atividade antagonista do receptor muscarínico. Entre outras propriedades, descobriu-se que os compostos da invenção possuem afinidade de ligação melhorada para os subtipos do receptor muscarínico hM₂ e hM₃, possuem meias-vidas de receptor mais longas, e possuem maior potência em comparação aos compostos relacionados, e é esperado que eles sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar disfunções pulmonares.

A nomenclatura usada aqui para designar os compostos da invenção está ilustrada nos Exemplos aqui. Esta nomenclatura foi originada usando-se o software AutoNom disponível comercialmente (MDL, San Leandro, Califórnia).

MODALIDADES REPRESENTATIVAS

Os seguintes substituintes e valores são objetivados para fornecerem exemplos representativos de vários aspectos e modalidades da invenção. Estes valores representativos são objetivados para também definir e ilustrar tais aspectos e modalidades e não são objetivados para excluir outras modalidades ou para limitar o escopo da invenção.

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Com relação	a isto, a	representação	que	um valor	ou
substituinte	particular	é preferida,	não	pretende	de
qualquer forma excluir	outros valores	ou	substituintes

desta invenção a menos que especificamente indicado.

R¹ pode ser um grupo alquil de Ci-6~, alquenil de C2-6-, cicloalquil de C3-9- ou heteroaril que seja não substituído ou substituído com 1 a 5 grupos R^a. R^a é independentemente selecionado a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-, cinao, halo, -OR^b, C(O)OR^b, -SR^b, -S(O)R^b, -S(O)2R^b, -C(O)NR^cR^d e -NR^cR^d. Cada R^b é independentemente selecionado a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-. Cada grupo R^c e grupo R^d é independentemente selecionado a partir de H, alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-. Em uma modalidade, R¹ é cicloalquil de C3-9-; em uma outra modalidade cicloalquil de C3-6-, isto é, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil ou ciclohexil; e em ainda uma outra modalidade R¹ é cicloalquil de C5-, isto é, ciclopentil. Em uma modalidade, R¹ é um grupo alquil de C3-6- tal como -CH2CH (CH₃) 2. Em uma outra modalidade, R¹ é um grupo alquenil de C2-6- tal como CH2CHCH2. Em uma modalidade, R¹ é não substituído. Em uma outra modalidade, R¹ é um heteroaril, tal como tiofenil (incluindo tiofen-2-il e tiofen-3-il).

Cada grupo alquil, alquenil, alquinil, alquileno e cicloalquil em R^a, R^b, R^c e R^d, pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor. Além disso, cada cicloalquil em R^a_d pode ser substituído com 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, ciano, halo, -O (alquil de C1-4) , -S (alquil de 20/09/2018, pág. 17/127

13/112 de C1-4) , -S (O) (alquil de C1-4) , -S (O) 2 (alquil de C1-4) , NH2, -NH (alquil de C1-4) e -N (alquil de Ci-₄)2, onde cada grupo alquil, alquenil e alquinil é opcionalmente substituído com 1 a 5 substituintes flúor.

R² pode ser um grupo aril que é não substituído ou substituído com 1 a 5 grupos R^a, que são definidos acima. Em uma modalidade, R² é fenil. Em uma outra modalidade, R² é fenil não substituído. Em uma outra modalidade, R² é um heteroaril, tal como tiofenil (incluindo tiofen-2-il e tiofen-3-il) .

R³ pode ser H ou -alquileno -OH C0-1, ou pode formar uma ligação dupla com R¹, que pode ser descrito como:

Em uma modalidade particular, R³ é -OH. Além disso, CR¹R²R³ juntos podem formar um grupo de fórmula:

r⁴ onde A é uma ligação, -O-, -S-, -CH2-, -CH=CH-,

CH2CH2-, -NH-, e -N(CH₃)-; e R⁴ é selecionado a partir de H, halo, -OH, alquil de Ci-β- e alcóxi de Ci-β-. O grupo alquil em R⁴ pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor. Em uma modalidade particular, -CR¹R²R³ juntos formam:

Nesta modalidade, A é -O- e R⁴ é H, conforme mostrado. Em uma modalidade, X é uma ligação, Y é -CH2-, Y' é de 20/09/2018, pág. 18/127

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N-, e Υ é —CH₂—, que pode ser descrito como:

- ÍR>

Em uma outra modalidade, X é -O- ou -O-CH₂-, Y' é -CH, Y' é uma ligação e Y é -CH₂- ou -(CH₂)₂-, que pode ser descrito como:

o , ; Ο /^R^ II ψ·^,Ντ_ PopW ° (R⁵),

OU

Vi^- respectivamente. Em uma outra modalidade, quando X é O- ou —O—CH₂—, Y' é -CH-, e tanto Y e Y são -CH₂-, que pode ser descrito como:

o

,.(R\ .(R }_a ⁷ \_/ * Ç Ό \_/ ' ou

R⁵ é selecionado a partir de flúor e alquil de C1-4-. O valor para a é 0 ou um inteiro de 1 a 3. Em uma modalidade particular, a é 0. O grupo alquil em R⁵ pode ser substituído com 1 a 5 átomos de flúor.

R⁶ e R⁷ são independentemente selecionados a partir de H e alquil de C1-4-. Além disso, um entre R⁶ ou R⁷ pode ser —NH2. Em uma modalidade particular, R⁶ é hidrogênio ou alquil de C1-4-. Em uma outra modalidade, R⁷ é hidrogênio. Em ainda uma outra modalidade particular, tanto R⁶ quando R⁷ são hidrogênios. O grupo alquil em R⁶ e R⁷ pode ser substituído com átomos de flúor. Por exemplo, R⁶ e/ou R⁷ pode ser -CH3 assim como -CFH2, -CF₂H ou -CF3.

Z é selecionado a partir de hidrogênio, alquil de C1-6, -alquileno de C1-3-Q e -NH-alquileno de C0-1-Q. Em uma de 20/09/2018, pág. 19/127

15/112 modalidade, Z é -CH2-Q. Em uma outra modalidade, Z é (CH2)2-Q. Em ainda uma outra modalidade, Z é -(CH2)3^_Q. Em ainda uma outra modalidade, Z é -NH-Q. Em ainda uma outra modalidade, Z é NH-CH2-Q. Em uma outra modalidade, Z é hidrogênio ou alquil de C1-6-. Grupos alquil de C1-6exemplares incluem metil, propil, butil e pentil. Os grupos alquil e alquileno em Z podem ser substituídos com 1 a 5 átomos de flúor. Também, o grupo alquileno em Z pode ser substituído com 1 a 2 substituintes independentemente selecionados a partir de alquil de C1-2- e -OH. Por exemplo, em uma modalidade, Z é -CH(CH3)-.

Q é um cicloalquil de C3-7-, aril ou grupo heteroaril. Grupos de cicloalquil de C3-7- exemplares incluem ciclopropil, ciclohexil e cicloheptil. Grupos aril exemplares incluem fenil e naftil. Em uma modalidade, Q é fenil. Grupos heteroaril exemplares incluem grupos pirrolil, imidazolil, tiazolil, oxazolil, furanil, tiofenil, triazolil, pirazolil, isoxazolil, isotiazolil, piridinil, pirazinil, piradazinil, pirimidinil, triazinil, indilil, benzofuranil, benzopiranil, benzotiofenil, benzoimidazolil, benzotiazolil, benzodioxolil, quinonil, isoquinolil, quinazolinil, e quinoxalinil. São de interesse particular grupos tiazolil (por exemplo, tiazol-2-il e tiazol-4-il), furanil (por exemplo, furan-2-il e furan-3il), tiofenil (por exemplo, tiofen-2-il e tiofen-3-il), pirazolil (por exemplo, lH-pirazol-3-il), piridinil (por exemplo, piridin-2-il), indolil (por exemplo, lH-indol-2il, lH-indol-4-il e lH-indol-5-il), benzofuranil (por exemplo, benzofuran-5-il), benzotiofenil (por exemplo, benzo[b]tiofen-2-il e benzo[b]tiofen-5-il), e benzodioxolil de 20/09/2018, pág. 20/127

16/112 (por exemplo, benzo[1,3]dioxol-5-il) .

Q pode ser substituído com 1 a 5 grupos R⁸ independentemente selecionado a partir de halo (por exemplo, Cl e F) , alquil de C1-4- (por exemplo, -CH3) , alquileno de C0-4-OH (por exemplo, -OH e -CH2OH) , ciano, alquileno de C0-2-COOH, -C (O) O-alquil de C1-4 (por exemplo, 0(0)0-0Η₃), -O-alquil de C1-4 (por exemplo, -OCH3) , -Salquil de C1-4 (por exemplo, -S-CH3) , -CONR^8aR^8b, -NH-C(O)alquil de C1-4, -N-di-alquil de C1-4-, e -N⁺(O)O, onde R^8a e R^8b são independentemente selecionados a partir de H e alquil de C1-4-. Cada grupo alquil e alquileno em R⁸ podem ser substituídos com 1 a 5 átomos de flúor. Por exemplo, R⁸ pode ser um grupo alquil de C1-4- substituído com flúor tal como -CF₃ ou um grupo alquil de C1-4-O- substituído com flúor tal como -OCF3.

Em uma modalidade, Q é substituído com um grupo R⁸ selecionado a partir de halo, alquil de C1-4-, -alquileno de C0-4-OH, ciano, -C (O) O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -Salquil de C1-4 e -CONR^8aR^8b, onde cada grupo alquil é opcionalmente substituído com 1 a 3 átomos de flúor. Em uma outra modalidade, Q é substituído com dois grupos R⁸ que são grupos halo (que podem ser iguais ou diferentes) . Em uma modalidade, Q é um grupo cicloalquil de C3-7-. Em uma modalidade, Q é um grupo aril não substituído. Em uma outra modalidade, Q é um grupo aril possuindo um grupo R⁸ selecionado a partir de halo, alquil de C1-4-, ciano, alquileno de C0-2-COOH, -C (O) O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -S-alquil de C1-4 e -CONR^8aR^8b, onde cada grupo alquil é opcionalmente substituído com 1 a 3 átomos de flúor. Em ainda uma outra modalidade, Q é um grupo aril possuindo de 20/09/2018, pág. 21/127

17/112 dois grupos R⁸ que são grupos halo. Em uma modalidade, Q é um grupo heteroaril não substituído. Em uma outra modalidade, Q é um grupo heteroaril possuindo um grupo R⁸ que é um grupo alquil de C1-4-.

Em uma modalidade, a invenção relaciona-se a compostos que possuem a fórmula I, onde R¹ é isobutil, ciclopentil ou tiofenil, R² é fenil ou tiofenil; R³ é -OH, ou -CR¹R²R³ juntos formam um grupo de fórmula:

-U

COO a é 0; R⁶ é H ou alquil de C1-4-; R⁷ é H; Zé H, alquil de C1-6-, alquileno de C1-3-Q, ou -NH-alquileno de C0-1-Q; Q é ciclohexil, cicloheptil, fenil, benzodioxolil, benzofuranil, benzotiofenil, furanil, indolil, pirazolil,

Q é opcionalmente R⁸ independentemente piridinil, tiazolil ou tiofenil; substituído com 1 a 2 grupos selecionado a partir de halo, alquil de C1-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, —C (O) O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -Salquil de C1-4 e -CONH2; e os grupos alquil em R⁸ são opcionalmente substituídos com 1 a 5 átomos de flúor.

Em uma outra modalidade, a invenção relaciona-se a um composto possuindo a fórmula II:

Ν N Μ—Z (Π) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde R^1-3,

R^6-7 e Z são conforme definidos para a fórmula I. Em uma modalidade particular, a invenção relaciona-se aos compostos de fórmula II, onde: R¹ é ciclopentil ou tiofenil; R² é fenil ou tiofenil; R³ é OH; R⁶ é H ou alquil de 20/09/2018, pág. 22/127

18/112 de C1-2-; R⁷ é H; Zé alquil de Ci-6-, alquileno de C1-3-Q, ou -NH-alquileno de C0-1-Q; Q é ciclohexil, cicloheptil, fenil, benzodioxolil, benzofuranil, benzotiofenil, furanil, indolil, pirazolil, piridinil, tiazolil ou tiofenil; Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de C1-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, -C (O) O-alquil de C1-4, -0alquil de C1-4, -S-alquil de C1-4 e -CONH2; e os grupos alquil em R⁸ são opcionalmente substituídos com 1 a 5 átomos de flúor.

Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se aos compostos que possuem a fórmula lia:

(Ha) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde R⁶ e Z são conforme definidos para a fórmula I. Em uma modalidade particular, a invenção relaciona-se aos compostos de fórmula lia, onde: R⁶ é H ou alquil de C1-2-; Z é alquil de C1-6-, alquileno de C1-3-Q, ou -NH-alquileno de C0-1-Q; Q é ciclohexil, cicloheptil, fenil, benzodioxolil, benzofuranil, benzotiofenil, furanil, indolil, pirazolil, piridinil, tiazolil ou tiofenil; Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de C1-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, -C (0) O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -Salquil de C1-4 e -CONH2; e os grupos alquil em R⁸ são opcionalmente substituídos com 1 a 5 átomos de flúor.

Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se aos de 20/09/2018, pág. 23/127

19/112 compostos que possuem a fórmula Ilb:

-xJC

-|^_yi N~C^lkylene-Q

OH (Hb) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde Q é conforme definido para a fórmula I. Em uma modalidade particular, a invenção relaciona-se aos compostos de fórmula Ilb, onde: Q é ciclohexil, cicloheptil, fenil, benzodioxolil, benzofuranil, benzotiofenil, furanil, indolil, pirazolil, piridinil, tiazolil ou tiofenil; Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de Ci-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, -C (O) O-alquil de C1-4, -0-

alquil	de	Ci-4, -S-alquil de C1-4 e -CONH2;	e os grupos
alquil	em	R8 são opcionalmente substituídos	com 1 a 5
átomos	de	flúor. Em uma outra modalidade,	a invenção

relaciona-se aos compostos de fórmula Ilb, onde Q é furanil ou tiofenil.

Ainda um outro aspecto da invenção relaciona-se aos compostos que possuem a fórmula IIc:

o

“N N N-C^alkylene-Q

OH .1.

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde Z é conforme definido para a fórmula I. Em uma modalidade particular, a invenção relaciona-se aos compostos de fórmula IIc, onde: Q é fenil, furanil ou tiofenil; e o fenil em Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo e alquileno de C0-4-OH.

de 20/09/2018, pág. 24/127

20/112

Em ainda uma outra modalidade, a invenção relaciona-se a um composto possuindo a fórmula III:

X.

N tjl—Z

R⁷ (KQ ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde R^1-3, R^6-7 e Z são conforme definidos para a fórmula I. Em uma modalidade particular, a invenção relaciona-se aos compostos de fórmula III, onde: R¹ é ciclopentil; R² é fenil; R³ é -OH; R⁶ e R⁷ são Η; Z é -alquileno de C1-3-Q; Q é fenil, benzofuranil, furanil piridinil ou tiofenil; e o fenil em Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo e -alquileno de C0-4-OH.

Em ainda uma outra modalidade, a invenção relaciona-se a um composto possuindo a fórmula IV:

^R (TV) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, onde R^1-3, R^6-7 e Z são conforme definidos para a fórmula I. Em uma relaciona-se aos ou

modalidade	particular,	a	invenção
compostos	de fórmula	IV,	onde:	R1
ciclopentil	; R2 é fenil;	R3 é	-OH; R6 e	R7
de Ci-6- ou -alquileno	de	C1-3-Q; Q	é

isobutil piridinil ou tiofenil; Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R8 independentemente selecionados a partir de halo, alquil de C1-4- ou -alquileno de C0-4-OH e -O-alquil de

C1-4; e os grupos alquil em R⁸ são opcionalmente substituídos com 1 a 5 átomos de flúor.

de 20/09/2018, pág. 25/127

21/112

Um grupo particular de compostos de Fórmula I é aquele divulgado no Pedido de Patente U.S. Provisório de número 60/967.914, depositado em 7 de setembro de 2007. Este grupo inclui os compostos de Fórmula I':

onde: R¹ é selecionado a partir de alquil de Ci-6-, alquileno de C2-6- e cicloalquil de C3-9-; R² é aril; R³ é selecionado a partir de H e -alquileno -OH C0-1, ou forma uma ligação dupla com R¹; ou -CR¹R²R³ juntos formam um grupo de fórmula: _d onde A é uma ligação, -O-, -S-, -CH2-, -CH=CH-,

CH2CH2-, -NH- ou -N(CH)-; e onde R⁴ é selecionado a partir de H, halo, -OH, alquil de Ci-₈- e alcóxi de Ci-₈-, X é uma ligação, -O- ou -O-CH2-; quando X é uma ligação, Y é -CH2-, Y’ é -N- e Y é -CH2-; quando X é -O- ou -O-CH2-, Y' é -CH, e Y é uma ligação e Y é -CH2- ou -(CH2)2-, ou Y é -CH2- e Y é -CH2-; R⁵ é selecionado a partir de flúor e alquil de C1-4- e a é 0 ou um inteiro de 1 a 3; R⁶ e R⁷ são independentemente selecionados a partir de H e alquil de C1-4-, e também onde um entre R⁶ ou R⁷ pode ser -NH2; Z é selecionado a partir de H, alquil de C1-6-, -alquileno de C1-3-Q, e -NH-alquileno de C0-1-Q, onde Q é selecionado a partir de cicloalquil de C3-7, aril ou heteroaril, opcionalmente substituídos com 1 a 5 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de

C1-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, alquileno de C0-2-COOH, de 20/09/2018, pág. 26/127

22/112

C(O)O-alquil de C1-4, -O-alquil de C1-4, -S-alquil de C1-4, CONR^8aR^8b, -NH-C (O)-alquil de C1-4, -N-dialquil de C1-4, e N⁺(O)O, onde R^8a e R^8b são independentemente selecionados a partir de H e alquil de C1-4-; onde R¹ e R² são opcionalmente substituídos com 1 a 5 grupos R^a selecionados a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-, ciano, halo, -OR^b, -C(O)OR^b, SR^b, -S(O)R^b, -S(O)₂R^b, -C(O)NR^cR^d e -NR^cR^d; onde cada R^b é independentemente selecionado a partir de H, alquil de C1-4, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-, ; e cada R^c e R^d é independentemente selecionado a partir de H, alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, cicloalquil de C3-6-; onde cada grupo alquil, alquenil, alquinil, alquileno e cicloalquil em R^a_d, R^4-8 e Z, é opcionalmente substituído com 1 a 5 átomos de flúor; onde cada cicloalquil em R^a_d é opcionalmente substituído com 1 a 3 substituintes independentemente selecionados a partir de alquil de C1-4-, alquenil de C2-4-, alquinil de C2-4-, ciano, halo, -O (alquil de C1-4) , -S (alquil de C1-4) , -S (O) (alquil de C1-4) , -S (O) 2 (alquil de C1-4) , -NH2, -NH (alquil de C1-4) e N (alquil de (81-4)2, onde cada grupo alquil, alquenil e alquinil é opcionalmente substituído com 1 a 5 substituintes flúor; e o grupo alquileno em Z é opcionalmente substituído com 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados a partir de alquil de C1-2- e -OH; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Além disso, compostos particulares da invenção que são de interesse incluem aqueles expostos nos Exemplos abaixo, assim como os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

DEFINIÇÕES de 20/09/2018, pág. 27/127

23/112

Quando se descreve os compostos, composições, métodos e processos da invenção, os seguintes termos possuem os significados a seguir, a menos que de outra forma indicado. Adicionalmente, conforme aqui usado, as formas no singular um, uma e o/a incluem as formas no plural correspondentes a menos que o contexto de uso dite de outra forma claramente. Os termos compreendendo, incluindo e possuindo são objetivados para serem inclusivos e significam que pode haver elementos adicionais que não os elementos listados. Todos os números que expressão quantidades de ingredientes, propriedades tais como peso molecular, condições de reação, e assim por diante, são aqui usados para serem compreendidos como sendo modificados em todos os exemplos pelo termo cerca de, a menos que de outra forma indicado. Consequentemente, os números expostos aqui são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se procura obter pela presente invenção. Pelo menos, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina de equivalente ao escopo das reivindicações, cada número deve pelo menos ser interpretado à luz dos algarismos significativos relatados e pela aplicação de técnicas de arredondamento ordinárias.

O termo alquil significa um grupo hidrocarboneto saturado monovalente que pode ser linear ou ramificado. A menos que de outra forma definido, tais grupos alquil tipicamente contêm de 1 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, alquil de C1-2-, alquil de C1-4- e alquil de Ci6~. Grupos alquil representativos incluem, por meio de exemplo, metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, secbutil, isobutil, terc-butil, n-pentil, n-hexil, n-heptil, de 20/09/2018, pág. 28/127

24/112 n-octil, n-nonil, n-decil e semelhantes.

Quando um número específico de átomos de carbono é objetivado para um termo particular aqui usado, o número de átomos de carbono é mostrado conforme subscrito. Por exemplo, o termo alquil de C1-4- significa um grupo alquil possuindo de 1 a 4 átomos de carbono, e o termo cicloalquil de C5-9- significa um grupo cicloalquil possuindo de 5 a 9 átomos de carbono, onde os átomos de carbono estão em qualquer configuração aceitável.

O termo alquileno significa um grupo hidrocarboneto saturado divalente que pode ser linear ou ramificado. A menos que de outra forma definido, tais grupos alquileno tipicamente contêm de 0 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, alquileno de C0-1-, alquileno de C0-2-, alquileno de C0-4-, alquileno de C0-5-, alquileno de C1-4-, alquileno de C1-2-, alquileno de C2-4-, alquileno de C2-5- e alquileno de C3-6-· Grupos alquileno representativos incluem, por meio de exemplo, metileno, etano-1,2-diil (etileno), propano-1,2-diil, propano-1,3-diil, butano1,4-diil, pentano-1,5-diil e semelhantes. É compreendido que quando o termo alquileno inclui zero carbono tal como alquileno de C0-1- ou alquileno de C0-5-, tais termos são objetivados para incluir a ausência de átomos de carbono, isto é, o grupo alquileno não está presente exceto por uma ligação covalente ligando os grupos separados pelo termo alquileno.

O termo alquenil significa um grupo hidrocarboneto insaturado monovalente que pode ser linear ou ramificado e que possui pelo menos uma, e tipicamente 1, 2 ou 3, ligações duplas carbono-carbono. A menos que de outra forma de 20/09/2018, pág. 29/127

25/112 definido, tais grupos alquenil tipicamente contêm de 2 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, alquenil de C2-4e alquenil de C2-6-· Grupos alquenil representativos incluem, por meio de exemplo, etenil, n-propenil, isopropenil, n-but-2-enil, n-hex-3-enil e semelhantes. O termo alquenileno significa um grupo alquenil divalente, e grupos alquenilenos exemplares incluem alquenileno de C23-.

O termo alcóxi significa um grupo monovalente da fórmula (alquil)-O-, onde alquil é conforme aqui definido. A menos que de outra forma definido, tais grupos alcóxi tipicamente contêm de 1 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, alcóxi de C1-4- e alcóxi de Ci-β-. Grupos alcóxi representativos incluem, por meio de exemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, isobutoxi, terc-butoxi, e semelhantes.

O termo alquinil significa um grupo hidrocarboneto insaturado monovalente que pode ser linear ou ramificado e que possui pelo menos uma, e tipicamente 1, 2 ou 3, ligações triplas carbono-carbono. A menos que de outra forma definido, tais grupos alquinil tipicamente contêm de 2 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, alquinil de C2-4- e alquinil de C2-6- · Grupos alquinil representativos incluem, por meio de exemplo, etinil, n-propinil, n-but-2inil, n-hex-3-inil e semelhantes.

O termo aril significa um hidrocarboneto aromático monovalente possuindo um único anel (isto é, fenil) ou anéis fundidos (isto é, naftaleno) . A menos que de outra forma definido, tais grupos aril contêm tipicamente de 6 a átomos de carbono de anel e incluem, por exemplo, aril de 20/09/2018, pág. 30/127

26/112 de θε-ίο- · Grupos aril representativos incluem, por meio de exemplo, fenil e naftaleno-l-il, naftaleno-2-il, e semelhantes.

O termo cicloalquil significa um grupo hidrocarboneto carboxílico saturado monovalente. A menos que de outra forma definido, tais grupos cicloalquil contêm tipicamente de 3 a 10 átomos de carbono e incluem, por exemplo, cicloalquil de C3-6-, cicloalquil de C3-7- e cicloalquil de C5-9-. Grupos cicloalquil representativos incluem, por meio de exemplo, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil e semelhantes.

O termo grupo hidrocarboneto divalente significa um grupo hidrocarboneto divalente que é composto principalmente de átomos de carbono e hidrogênio e que contém opcionalmente um ou mais heteroátomos. Tais grupos hidrocarboneto divalentes podem ser ramificados ou não ramificados, saturados ou insaturados, acíclicos ou cíclicos, alifáticos ou aromáticos, ou combinações destes. O grupo hidrocarboneto divalente pode opcionalmente conter heteroátomos incorporados na cadeia de hidrocarboneto ou como substituintes ligados à cadeia de hidrocarboneto.

O termo halo significa flúor, cloro, bromo ou iodo.

Conforme aqui usado, a expressão possuindo a fórmula ou possuindo a estrutura não é objetivada para ser limitante e é usada da mesma forma que o termo compreendendo é comumente usado.

O termo heteroaril significa um grupo aromático monovalente possuindo um único anel ou dois anéis fundidos e contendo no anel pelo menos um heteroátomo (tipicamente de 1 a 3 heteroátomos) selecionado a partir de nitrogênio, de 20/09/2018, pág. 31/127

27/112 benzopiranil, benzotiazolil, oxigênio ou enxofre. A menos que de outra forma definido, tais grupos heteroaril contêm tipicamente de 5 a 10 átomos de carbono de anel e incluem, por exemplo, heteroaril de C2-9-. Grupos heteroaril representativos incluem, por meio de exemplo, pirrolil, imidazolil, tiazolil, oxazolil, furanil, tiofenil, triazolil, pirazolil, isoxazolil, isotiazolil, piridinil, pirazinil, piradazinil, pirimidinil, triazinil, indolil, benzofuranil, benzotiofenil, benzoimidazolil, benzodioxolil, quinolil, isoquinolil, quinazolinil, quinoxalinil e etc, onde o ponto de ligação é em qualquer átomo de anel carbono ou nitrogênio disponível.

O termo opcionalmente substituído significa que o grupo em questão pode ser não substituído ou pode ser substituído uma ou várias vezes, tal como de 1 a 3 vezes ou de 1 a 5 vezes. Por exemplo, um grupo alquil que é opcionalmente substituído com 1 a 5 átomos de flúor, pode ser não substituído, ou pode conter 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos de flúor.

O termo farmaceuticamente aceitável refere-se a um material que não é biologicamente ou de oura forma inaceitável quando usado na invenção. Por exemplo, o termo veículo farmaceuticamente aceitável refere-se a um material que pode ser incorporado em uma composição e administrado a um paciente sem causar efeitos biológicos inaceitáveis ou interagir de forma inaceitável com outros componentes da composição. Tais materiais farmaceuticamente aceitáveis tipicamente atenderam aos padrões exigidos de testes toxicológicos e de produção, e incluem aqueles materiais identificados como ingrediente inativos adequados de 20/09/2018, pág. 32/127

28/112 pela Administração de Alimentos e Medicamentos dos Estados

Unidos (FDA).

O termo sal farmaceuticamente aceitável significa um sal preparado a partir de uma base ou um ácido que é aceitável para a administração a um paciente, tal como um mamífero (por exemplo, sais que oferecem segurança aceitável para um mamífero para um dado regime de dosagem). Entretanto, é compreendido que não é exigido que os sais cobertos pela invenção sejam sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como os sais de compostos intermediários que não são objetivados para administração a um paciente. Sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, quando um composto de fórmula I contém tanto uma metade básica quando uma metade ácida, zwitteríons podem ser formados e estão incluídos no termo sal conforme aqui usado. Sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio, zinco e semelhantes. Sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primária, secundária e terciária, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas que ocorrem naturalmente e semelhantes, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, W,W'-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, W-etilmorfolina, W-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histitina, hidrabamina, de 20/09/2018, pág. 33/127

29/112 isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina, e semelhantes. Sais derivados de ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem tais dos ácidos bórico, carbônico, hidrohálico (hidrobrômico, hidroclórico, hidrofluórico ou hidroiódico), nítrico, fosfórico, sulfâmico e sulfúrico. Sais derivados de ácidos orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de ácidos hidroxi-alifáticos (por exemplo, os ácidos cítrico, glucônico, glicólico, láctico, lactobiônico, málico e tartárico), ácidos monocarboxílicos alifáticos (por exemplo, os ácidos acético, butírico, fórmico, propiônico e trifluoroacético), aminoácidos (por exemplo, os ácidos aspártico e glutâmico), ácidos carboxílicos aromáticos (por exemplo, os ácidos benzóicos, pclorobenzóico, difenilacético, gentíssico, hipúrico e trifenilacético), hidroxiácidos aromáticos (por exemplo, os ácidos o-hidroxibenzóico, p-hidroxibenzóico, 1-hidroxinaftaleno-2-carboxílico e 3-hidroxinaftaleno-2carboxílico), ácido ascórbico, ácidos dicarboxílicos (por exemplo, os ácidos fumárico, maleico, oxálico e succínico), os ácidos glucorônico, mandélico, múcico, nicotínico, orótico, pamóico, pantotênico, sulfônico (por exemplo, os ácidos benzenossulfônico, canfossulfônico, edisílico, etanossulfônico, isetiônico, metanossulfônico, naftalenossulfônico, naftaleno-1,5-dissulfônico, naftaleno2,6-dissulfônico e p-toluenossulfônico), ácido xinafóico, e semelhantes.

O termo quantidade terapeuticamente efetiva de 20/09/2018, pág. 34/127

30/112 significa uma quantidade suficiente para efetuar o tratamento quando administrado a um paciente em necessidade de tratamento, isto é, a quantidade de medicamento necessária para se obter o efeito terapêutico desejado. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente efetiva para tratar doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) é uma quantidade de composto necessária para, por exemplo, reduzir, suprimir, eliminar ou impedir os sintomas de COPD, ou para trarar a causa que fundamenta a COPD. Por outro lado, uma quantidade efetiva é aquela quantidade necessária para se obter um resultado desejado, que pode não necessariamente ser uma quantidade terapeuticamente efetiva. Por exemplo, quando se estuda um sistema que compreende antagonizar um receptor muscarínico, uma quantidade efetiva pode ser a quantidade necessária para antagonizar o receptor.

O termo tratar ou tratamento conforme usado aqui significa tratar ou o tratamento de uma doença ou condição médica (tal como COPD) em um paciente, tal como um mamífero (particularmente um humano) que inclui: (a) impedir que a doença ou condição médica ocorra, isto é, tratamento profilático de um paciente; (b) melhorar a doença ou condição médica, isto é, eliminar ou causar a regressão da doença ou condição médica em um paciente; (c) suprimir a doença ou condição médica, isto é, retardar ou interromper o desenvolvimento da doença ou condição médica em um paciente; ou (d) aliviar os sintomas da doença ou condição médica em um paciente. Por exemplo, o termo tratar COPD incluira impedir que a COPD ocorra, melhorar a COPD, suprimir a COPD e aliviar os sintomas de COPD. O termo de 20/09/2018, pág. 35/127

31/112 paciente é objetivado para incluir aqueles animais, tais como humanos, que estão em necessidade de tratamento ou prevenção de doença, que estão sendo atualmente tratados para a prevenção da doença ou o tratamento de uma doença ou condição médica específica, assim como indivíduos de teste em que os compostos da invenção estão sendo avaliados ou sendo usandos em um ensaio, por exemplo, um modelo animal.

Todos os outros termos aqui usados são objetivados para terem seu significado usual conforme compreendido por aqueles habilitados na técnica a qual eles pertencem.

PROCEDIMENTOS SINTÉTICOS GERAIS métodos similares ou reagentes e materiais

Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de materiais iniciais facilmente disponíveis usando-se os seguintes métodos gerais, os procedimentos expostos nos Exemplos, ou utilizando-se outros métodos, reagentes e materiais iniciais que são conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Embora os seguintes procedimentos possam ilustrar uma modalidade particular da invenção, será compreendido que outras modalidades da invenção podem ser similarmente preparadas usando-se os mesmo métodos ou utilizando-se outros métodos, iniciais conhecidos daqueles habilitados na técnica. Será também avaliado que onde são fornecidas condições de processo típicas ou preferidas (isto é, temperaturas de reação, tempos, proporções molares dos reagentes, solventes, pressões, etc.), outras condições de processo também podem ser usadas a menos que de outra forma declarado. Embora as condições de reação ideais irão tipicamente variar dependendo dos vários parâmetros de reação tais como os reagentes, solventes e quantidades de 20/09/2018, pág. 36/127

32/112 particulares usadas, aqueles habilitados na técnica podem determinar facilmente as condições de reação adequadas usando-se procedimentos de otimização de rotina.

Adicionalmente, como será aparente àqueles habilitados na técnica, os grupos de proteção convencionais podem ser necessários ou desejados para impedir que certos grupos funcionais passem por reações indesejadas. A escolha de um grupo de proteção adequado para um grupo funcional particular, assim como as condições e reagentes adequados para a proteção e desproteção de tais grupos funcionais, são bem conhecidos na técnica. Grupos funcionais que podem ser portegidos de modo a impedir reações indesejados incluem, por meio de exemplo, grupos carboxi, grupos amino, grupos hidroxil, grupos tiol, grupos carbonil e semelhantes. Grupos de proteção de carboxi representativos incluem, mas não estão limitados a, ésteres, tais como metil, etil, terc-butil, benzil (Bn), p-metoxibenzil (PMB), 9-fluroenilmetil (Fm), trimetilsilil (TMS), tercbutildimetilsilil (TBS), difenilmetil (benzidril, DPM, e semelhantes; amidas e hidrazidas. Grupos de proteção de hidroxil representativos incluem, mas não estão limitados a, grupos silil incluindo grupos trialquilsilil de Ci-6, tais como trimetilsilil (TMS), trietilsilil (TES), tercbutildimetilsilil (TBS) e semelhantes; ésteres (grupos acil) incluindo grupos alcanoil de Ci-6, tais como formil, acetil e semelhantes; grupos arilmetil, tais como benzil (Bn) , p-metoxibenzil (PMB), 9-fluorenilmetil (Fm) , difenilmetil (benzidril, DPM) e semelhantes; e éteres. Grupos de proteção representativos para grupos tiol incluem tioéteres e tioésteres. Grupos de proteção representativos de 20/09/2018, pág. 37/127

33/112 seguintes esquemas para grupos carbonil incluem acetais e cetais. Outros grupos de proteção que não aqueles descritos aqui podem ser usados, se desejado. Por exemplo, numerosos grupos de proteção, e sua introdução e remoção, estão descritos em T. W. Greene e G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, 3^a edição, Wiley, New York, 1999, e referências citadas nesta. Mais especificamente, as abreviações e reagentes são usados nos apresentados abaixo:

P representa um grupo de proteção de amino, um termo que é aqui usado para significar um grupo de proteção adequado para impedir reações não desejadas em um grupo amino. Grupos de proteção de amino representativos incluem, mas não estão limitados a, terc-butoxicarbonil (BOC), tritil (Tr), benziloxicarbonil (Cbz), 9fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc), formil, trimetilsilil (TMS), terc-butildimetilsilil (TBS), e semelhantes. Técnicas de desproteção padrões são usadas para remover o grupo P¹. Por exemplo, a desproteção do grupo N-BOC pode usar um reagente tal como HCI ou HCI 4M em 1,4-dioxano.

Bases adequadas para uso nestes esquemas incluem, por meio de ilustração e não de limitação, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, trietilamina, piridina, 1,8-diazabiciclo-[5.4.0]undec-7-eno (DBU), Ν,Ν-diisopropilenoetilamina (DIPEA), hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, t-butóxido de potássio e hidretos metálicos.

Diluentes ou solventes inertes adequados para uso nestes esquemas incluem, por meio de ilustração e não de limitação, tetrahidrofurano (THF), acetonitrila (MeCN), de 20/09/2018, pág. 38/127

34/112 tolueno, /V,/V-dimetilformamida (DMF), dimetil sulfóxido (DMSO), diclorometano (DCM), clorofórmio, tetracloreto de carbono (CHCI3) , 1,4-dioxano, metanol, etanol, água e semelhantes.

Reagentes adequados de união de ácido carboxílico/amina incluem hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), hexafluorofosfato de benzotriazol-1iloxitris(dimetilamino)fosfônio (PyBOP), hexafluorofosfato de de O-(7-azabenzotriazol-l-il-/V,/V,/V',/V'-tetrametilurônio (HATU), diciclohexilcarbodiimida (DCC), N- (3dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida (EDCI), carbonildiimidazol (CDI) e semelhantes. Reações de união são conduzidas em um diluente inerte na presença de uma base e são executadas sob condições de formação de ligação de amida convencionais.

Todas das reações são tipicamente conduzidas a uma temperatura dentro da faixa de -78°C a 100°C, por exemplo, à temperatura ambiente. Tipicamente, as reações são monitoras pelo uso de cromatografia em camada fina (TLC) , cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e/ou LCMS até finalização. As reações pode estar completas em minutos, ou podem levar horas, tipicamente de 1 a 2 horas e até 48 horas. Até finalização, a listura pode ser também tratada a fim de se obter o produto desejado. Por exemplo, a mistura pode ser sujeitada a um ou mais dos seguintes procedimentos: remoção ou separação (por exemplo, entre o acetato de etila e água ou entre THF 5% em acetato de etila e ácido fosfórico 1M) ; extração (por exemplo, com acetato de etila, CHCI3, Diclorometano KOH/clorofórmio); lavagem (por exemplo, com NaCl aquoso saturado, NaHCO3 saturado, de 20/09/2018, pág. 39/127

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Na2CO₃ (5%) , CHC1₃, HCI ou NaOH) ; secage, (por exemplo, sobre MgSO4 ou Na2SÜ4) ; remoção de solvente (por exemplo, em vácuo); filtração; concentração (por exemplo, em vácuo) e/ou purificação (por exemplo, cromatografia em sílica gel, cromatografia flash ou HPLC de fase reversa).

Por meio de ilutração, os compostos de fórmula I podem ser preparados por um ou mais dos seguintes processos exemplares. Os reagentes são todos comercialmente disponíveis e/ou podem ser facilmente sintetizados por técnicas que são bem conhecidas.

Formação do Grupo Principal onde X é uma ligação

O composto (3) é formado unindo-se os compostos (1) e (2) sob condições de formação de ligação de amida convencionais seguida por uma etapa de desproteção.

Exemplos do composto (1) incluem o ácido (R) ciclopentilhidroxifenil acético (R¹ é ciclopentil, R² é fenil e R³ é hidróxi) . Exemplos do composto (2) incluem 1piperazinacarboxilato de t-butila (a é 0, P¹ é BOC) .

Formação do Grupo Principal onde X é -O-

OH ΗΟ-'ς M-P U) (4)

O compos (Mitsunobu e 40:2380-2382) na presença to (5) é

Yamada . O compos de um formado por uma reação de Mitsunobu (1967) M. Bull. Chem. Soc. JPN. to (1) e o composto (4) são reagidos catalisador fosfina tal como de 20/09/2018, pág. 40/127

36/112 trifenilfosfina e um azodicarboxilato tal como azodicarboxilato de dietila ou azodicarboxilato de diisopropila, seguida por uma etapa de desproteção para produzir o composto (5) . O composto (5) pode também ser preparado por transesterificação.

Exemplos do composto (1) incluem o ácido (R) ciclopentilhidroxifenil acético (R¹ é ciclopentil, R² é fenil e R³ é hidróxi). Exemplos do composto (4) incluem o éster t-butílico do ácido (R)-3-hidroxipirrolidina-lcarboxílico (a é 0, P¹ é BOC, Y é um ligação, Y' é -CH- e Y é -CH2-) , éster t-butílico do ácido hidroxipiperidina-1carboxílico (a é 0, P¹ é BOC, Y é -CH2-, Y' é -CH- e Y é CH2-) ou éster t-butílico do ácido (R)-3-hidroxipiperidina1-carboxílico (a é 0, P¹ é BOC, Y é uma ligação, Y' é -CHe Y é -(CH₂)₂-) .

Adição da Metade Guanidina ao Grupo Principal Deslocamento da I^a Metade de Benzotriazol

DIPEA é adicionado ao composto (3) ou composto (5) em um solvente apropriado. O composto (6), o agente guanidinilante, é então adicionado e a reação agitada à temperatura ambiente até finalização, tipicamente de 30 minutos a várias horas, para produzir o composto (7), que é usado diretamente na próxima etapa. O composto (6) é facilmente preparado pelo método descrito em Katritzky e outros, (2000) J. Org. Chem. 65(23):8080-8082. Um exemplo de composto (6) é C- (bi s-benzotriazol-l-il) metileno amina (R⁶ is H).

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Formação de Guanidina Substituída (Formação de Guanidina Tri- ou Tetra-substítuída)

H

R' (8)

O composto (7) é adicionado ao composto (8) e a mistura é mantida à temperatura ambiente ou aquecida (~60°C) até finalização, tipicamente cerca de 14 a 24 horas. A reação é então resfriada à temperatura ambiente, se necessário, e o solvente removido. O material bruto é então purificado para fornecer um composto de fórmula I. Exemplos do composto (8) incluem 2-tiofenemetil amina, 4hidroxibenzil amina e benzilamina.

Detalhes adicionais relacionados às condições de reação específicas e outros procedimentos para preparação dos compostos representativos da invenção ou intermediários destes estão descritos nos Exemplos expostos abaixo.

UTILIDADE

Os compostos da invenção possuem atividade antagonista do receptor muscarínico, e em uma modalidade, a potência nanomolares. Em uma modalidade, os compostos da invenção são seletivos para inibição da atividade do suptipo M3 do receptor muscarínico sobre a atividade do suptipo M3 do receptor muscarínico. Em uma outra modalidade, os compostos da invenção são seletivos para inibição da atividade dos suptipos M3 e M₂ do receptor muscarínico sobre a atividade dos suptipos M₂, M4 e M5 do receptor muscarínico. Adicionalmente, espera-se que os compostos da invenção possuam uma duração de ação desejável. Conseqüentemente, em uma outra modalidade específica, a invenção relaciona-se a de 20/09/2018, pág. 42/127

38/112 compostos que possuem uma duração de ação de mais de cerca de 24 horas. Além disso, espera-se que os compostos da invenção possuam efeitos colaterais reduzidos, tal como boca seca, em doses eficazes quando administrados por inalação comparados a outros antagonistas do receptor muscarínico conhecidos administrados por inalação (tal como, tiotrópio).

Uma medida da afinidade de um composto para o subtipo M₃ do receptor é a constante de dissociação de inibição (Kí) para ligação ao receptor. Espera-se que os compostos da invenção tenham uma Kí para o subtipo M₃ do receptor menor que ou igual a 100 nM, conforme determinado, por exemplo, pelo ensaio de deslocamento de radioligante in vitro. Os compostos de interesse particular incluem aqueles que possuem uma Kí menor ou igual a 50 nM, e em uma outra modalidade, os compostos possuem uma Kí menor ou igual a 10 nM, e em ainda uma outra modalidade, os compostos possuem uma Kí menor ou igual a 1,0 nM. Os compostos de interesse ainda mais particular incluem aqueles que possuem uma Kí menor ou igual a 500 pM, e em uma outra modalidade, os compostos possuem uma Kí menor ou igual a 200 pM. Nota-se em alguns casos que os compostos da invenção podem possuir fraca atividade antagonista do receptor muscarínico. Em tais casos, aqueles habilitaods na técnica irão reconhecer que estes compostos ainda possuem utilidade como ferramentas de pesquisa.

Também de interesse particular são aqueles compostos que possuem uma ID50 menor ou igual a 100 gg/mL 24 horas após a dosagem, mais particularmente aqueles compostos que possuem uma ID50 menor ou igual a 30 gg/mL 24 horas após a de 20/09/2018, pág. 43/127

39/112 dosagem.

Ensaios exemplares para determinar as propriedades dos compostos da invenção, tal como a atividade antagonizante do receptor muscarínico, são descritos nos Exemplos e incluem por meio de ilustração e não de limitação, ensaios que medem a ligação do receptor muscarínico hMi, hM2, hM3, hM4 e hM5 (por exemplo, conforme descrito no Ensaio 1) . Ensaios funcionais úteis para determinar a atividade antagonizante do receptor muscarínico dos compostos da invenção incluem por menor de ilustração e não de limitação, ensaios que medem as mudanças mediadas por ligante em monofosfato de adenosina cíclica intracelular (cAMP), mudanças mediadas por ligante na atividade da enzima adenilil ciclase (que sintetiza o cAMP), mudanças mediadas por ligante na incorporação de 5'-Ο-(γtio) trifosfato de guanosina ([³⁵S]GTPyS) em membranas isoladas através da troca catalisada por receptor de ([³⁵S]GTPyS) por GDP, mudanças mediadas por ligante em íons cálcio intracelular livres (medida, por exemplo, com um leitor de placa de imagem ligado a fluorescência ou FLIPR® a partir de Molecular Devices, Inc.) e semelhantes. Ensaios exemplares são descritos no Ensaio 2. Espera-se que os compostos desta invenção antagonizem ou diminuam a ativação dos receptores muscarínicos em qualquer um dos ensaios listados acima, ou ensaios de uma natureza similar, e serão tipicamente usados nestes estudis a uma concentração variando de cerca de 0,1 a 100 nanomolares. Assim, os ensaios supracitados são úteis na determinação da utilidade terapêutica, por exemplo, a atividade de broncodilatação, dos compostos da invenção.

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Outras propriedades e utilidades dos compostos da invenção podem ser demonstradas usando-se vários ensaios in vitro e in vivo bem conhecidos daqueles habilitados na técnica. Por exemplo, a potência in vivo dos composto da invenção pode ser medida em um modelo de animal tal como o modelo de Einthoven. De forma resumida, a atividade broncodilatadora de um composto é avaliada em um animal anestesiado (o modelo de Einthoven) , que usa pressão de ventilação como uma medida substituta de resistência das vias aéreas. Veja, por exemplo, Einthoven (1892) Pfugers Arch. 51:367-445; e Mohammed e outros, (2000) Pulm Pharmacol Ther. 13(6):287-92, assim como o Ensaio 3 que descreve um modelo de Einthoven em rato. Em uma modalidade, um composto da invenção administrado a uma dose de 100 gg/mL no modelo de Einthoven em rato exibe uma inibição da resposta broncoconstritoca em 24 horas maior ou igual a 35%, e em uma outra modalidade, exibe uma inibição em 24 horas maior ou igual a 70%. Um outro ensaio in vivo útil no ensaio antisialagogo em rato (por exemplo, conforme descrito no Ensaio 4).

Espera-se que os compostos da invenção sejam úteis como agentes terapêuticos para tratar condições médicas mediadas pelos receptores muscarínicos. Deste modo, é esperado que os pacientes que sofrem de uma doença ou disfunção que é tratada pelo bloqueio do receptor muscarínico possam ser tratados pela administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um antagonista do receptor muscarínico da invenção. Tais condições médicas incluem, por meio de exemplo, disfunções ou doenças pulmonares incluindo aquelas associadas com obstrução das de 20/09/2018, pág. 45/127

41/112 vias aéreas reversível, tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (por exemplo, bronquite crônica e chiante e enfisema), asma, fibrose pulmonar, rinite alérgica, rinorréia, e semelhantes. Outras condições médicas que podem ser tratadas com antagonistas do receptor muscarínico são disfunções do trato genitourinário, tal como bexiga superativa ou hiperatividade detrusora e seus sintomas; disfunções do trato gastrointestinal, tais como síndrome do intestino irritável, doença diverticular, acalasia, disfunções de hipermotilidade gastrointestinal e diarréia; arritmias cardíacas, tal como bradicardia sinus; doença de Parkinson; disfunções cognitivas, tal como doença de Alzheimer, dismenorréia e semelhantes.

A quantidade de agente ativo administrada por dose ou a quantidade total administrada por dia pode ser prédeterminada ou pode ser determinada com base no paciente individual levando-se em consideração numerosos fatores, incluindo a natureza e severidade da condição do paciente, a condição que está sendo tratada, a idade, peso e a saúde geral do paciente, a tolerância do paciente ao agente ativo, a rota de administração, considerações farmacológicas tais como os perfis de atividade, eficácia, farmacocinética e toxicologia do agente ativo e quaisquer agentes secundários administrados, e semelhantes. O tratamento de um paciente que sofre de uma doença ou condição médica (tal como COPD) pode começar com uma dosagem pré-determinada ou uma dosagem determinada pelo médico que está tratando do paciente, e continuará por um período de tempo necessário para impedir, melhorar, suprimir ou aliviar os sintomas da doença ou condição de 20/09/2018, pág. 46/127

42/112 médica. Os pacientes que passam por tal tratamento serão tipicamente monitorados de forma rotineira para determinar a efetividade da terapia. Por exemplo, no tratamento de COPD, um melhoramente significativo no volume expiratório forçado (medido em um segundo) pode ser usado para determinar a efetividade do tratamento. Indicadores similares para outras doenças e condições aqui descritas são bem conhecidos daqueles habilitados na técnica, e estão facilmente disponíveis ao médico que está tratando o paciente. O monitoramento contínuo pelo médico irá garantir que a quantidade ideal de agente ativo será administrado em um dado momento, assim como facilitará a determinação da duração do tratamento. Isto é grande valor quando agentes secundários também estão sendo administrados, uma vez que sua seleção, dosagem e duração da terapia podem também requerer ajustes. Deste modo, o regime de tratamento e programação de dosagem podem ser ajustados durante o curso da terapia de forma que a menor quantidade de agente ativo que exiba a efetividade desejada seja administrada e, também, que a administração seja continuada apenas enquanto necessário para tratar de forma bem sucedida a doença ou condição médica.

Consequentemente, em uma modalidade, os compostos da invenção são úteis para tratar doenças do músculo liso em mamíferos, incluindo humanos e seus animais de companhia (por exemplo, cachorros, gatos e semelhantes). Tais disfunções do músculo liso incluem, por meio de ilustração, bexiga superativa, doença pulmonar obstrutiva crônica e síndrome do intestino irritável. Tipicamente, doses adequadas para tratar disfunções do músculo liso ou outras de 20/09/2018, pág. 47/127

43/112 disfunções mediadas pelos receptores muscarínicos irão variar de cerca de 0,14 pg/kg/dia a cerca de 7 mg/kg/dia do agente ativo; incluindo de cerca de 0,15 pg/kg/dia a cerca de 5 mg/kg/dia. Para um humano médio de 7 0 kg, isto daria cerca de 10 pg por dia a cerca de 500 mg por dia do agente ativo.

Em uma modalidade específica, os compostos da invenção são úteis para tratar doenças pulmonares ou respiratórias, tal como COPD ou asma, em mamíferos incluindo humanos, através da administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto. Geralmente, a dose para tratar uma disfunção pulmonar irá variar de cerca de 10 pg/dia a cerca de 1.500 pg/dia. O termo COPD é compreendido por aqueles habilitados na técnica como incluindo uma variedade de condições respiratórias, incluindo bronquite obstrutiva crônica e enfisema, conforme exemplificado pelos ensinamentos de Barnes (2000) N. Engl. J. Med. 343:269-78, e referências aqui citadas. Quando usados para tratar uma doença pulmonar, os compostos da invenção são opcionalmente administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, tal como um agonista do p2adrenoreceptor; um corticosteróide, um agente antiinflamatório não esteroidal, ou combinações destes.

Quando administrados por inalação, os compostos da invenção tipicamente possuem o efeito de produzir broncodilatação. Consequentemente, em outros aspectos do método, a invenção está direcionada a um método para produzir broncodilatação em um paciente, o método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade produtora de broncodilatação de um composto da invenção.

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Geralmente, a dose terapeuticamente efetiva para produzir broncodilatação irá variar de cerca de 10 a 1.500 gg/dia.

Em uma outra modalidade, os compostos da invenção são usados para tratar bexiga superativa. Quando usado para tratar bexiga superativa, uma dose típica irá variar de cerca de 1,0 a 500 mg/dia. Em ainda uma outra modalidade, os compostos da invenção são usados para tratar síndrome do intestino irritável. Quando usado para tratar síndrome do intestino irritável, os compostos da invenção serão tipicamente administrados oralmente ou de forma intrarretal, e uma dose típica irá variar de cerca de 1,0 a 500 mg/dia.

Uma vez que os compostos desta invenção possuem atividade antagonista do receptor muscarínico, tais compostos são também úteis como ferramentas de pesquisa para investigação ou estudo de sistemas biológicos ou amostras possuindo os receptores muscarínicos. Qualquer sistema biológico ou amostra adequados que possuam receptores muscarínicos Μι, M₂, M₃, M4 e/ou M5 pode ser empregado em tais estudos, os quais podem ser conduzidos ou in vitro ou in vivo. Sistemas biológicos ou amostras representativos adequados para tais estudos incluem, mas não estão limitados a células, extratos celulares, membranas de plasma, amostras de tecido, órgãos isolados, mamíferos (tais como camundongos, ratos, proquinhos da índia, coelhos, cachorros, porcos, humanos e assim por diante) e semelhantes, com os mamíferos sendo de interesse particular. Em uma modalidade particular da invenção, um receptor muscarínico em um mamífero é antagonizado pela administração de uma quantidade antagonizante do receptor de 20/09/2018, pág. 49/127

45/112 muscarínico de um composto da invenção. Os compostos da invenção podem também ser usados como ferramentas de pesquisa através da condução de ensaios biológicos usando tais compostos.

Quando usados como uma ferramenta de pesquisa, um sistema biológico ou amostra compreendendo um receptor muscarínico é tipicamente contatado com uma quantidade antogonizante do receptor muscarínico de um composto da invenção. Após o sistema biológico ou amostra serem expostos ao composto, os efeitos da antagonização dos receptor muscarínico são então determinados usando-se procedimentos e equipamentos convencionais, tal como medindo-se a ligação em um ensaio de ligação de radioligante ou mudanças mediadas por ligante em um ensaio funcional ou determinando-se a quantidade de broncoproteção fornecida pelo composto em um ensaio de broncoproteção em um mamífero. A exposição incluir contatar células ou tecido com o composto, administrar o composto a um mamífero, por exemplo, por administração i.p. ou i.v., e assim por diante. Esta etapa de determinação pode compreender medir uma resposta, isto é, uma análise quantitativa ou pode compreender uma observação, isto é, uma análise qualitativa. Medir uma resposta envolve, por exemplo, determinar os efeitos do composto no sistema biológico ou amostra usando-se procedimento e equipamentos convencionais, tais como ensaios de ligação de radioligante e medição das mudanças mediadas por ligante em ensaios funcionais. Os resultados do ensaio podem ser usados para determinar o nível de atividade assim como a quantidade de composto necessária para alcançar o resultado desejado, de 20/09/2018, pág. 50/127

46/112 isto é, uma quantidade antagonizante do receptor muscarínico. Tipicamente, a etapa de determinação irá envolver a determinação dos efeitos mediados por ligante do receptor muscarínico.

Adicionalmente, os compostos da invenção podem ser usados como ferramentas de pesquisa para avaliar outros compostos químicos, e desta forma são também úteis em ensaios de classificação para descobrir, por exemplo, novos compostos que possuem atividade de ligação do receptor muscarínico. Desta forma, um composto da invenção é usado como um padrão em um ensaio para permitir a comparação dos resultados obtidos com um composto de teste e com os compostos da invenção para identificar aqueles compostos de testes que possuem ligação quase igual ou superior, se houver. Por exemplo, os dados de ligação do receptor muscarínico (conforme determinado, por exemplo, por ensaios de deslocamento de radioligante in vitro) para um composto de teste ou um grupo de compostos de teste são comparados aos dados de ligação do receptor muscarínico para um composto da invenção para identificar aqueles compostos de teste que possuem ligação de receptor muscarínico quase igual ou superior, se houver. Alternativamente, por exemplo, os efeitos broncoprotetores podem ser determinados para os compostos de teste e um composto da invenção em um ensaio de broncoproteção em um mamífero e estes dados comparados para identificar os compostos de teste que fornecem efeitos broncoprotetores quase iguais ou superires. Este aspecto da invenção inclui, como modalidades separadas, tanto a geração dos dados de comparação (usando-se os ensaios apropriados) quanto a de 20/09/2018, pág. 51/127

47/112 análise dos dados de teste para identificar os compostos de

teste de	interesse	. Assim,	o composto	de teste pode ser
avaliado	em	um	ensaio	biológico,	por um método
compreendendo	as	etapas	de: (a) conduzir um ensaio
biológico	com	um	composto de teste	para fornecer um
primeiro	valor	de	ensaio;	(b) conduzir	o ensaio biológico

com um composto da invenção para fornecer um segundo valor de ensaio; onde a etapa (a) é conduzida ou antes, ou após ou concomitantemente com a etapa (b) ; e (c) comparar o primeiro valor de ensaio da etapa (a) com o segundo valor de ensaio da etapa (b). Ensaios biológicos exemplares incluem ensaios de ligação do receptor muscarínico.

COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÃO FARMACÊUTICAS

Os compostos da invenção são tipicamente administrados a um paciente na forma de uma composição ou formulação farmacêutica. Tais composições farmacêuticas podem ser administradas ao paciente por qualquer rota aceitável de administração, incluindo, mas não limitada aos modos de administração por inalação, oral, nasal, tópico (incluindo transdérmico) e parenteral. Também, os compostos da invenção podem ser administrados, por exemplo, oralmente, em múltiplas doses por dia, ou em uma dose diária única ou uma dose semanal única. Será compreendido que qualquer forma dos compostos da invenção, (isto é, base livre, sal farmaceuticamente aceitável, solvato, etc.) que seja adequado para o modo particular de administração, pode ser usado nas composições farmacêuticas discutidas aqui.

Consequentemente, em uma modalidade, a invenção relaciona-se a uma composição farmacêutica compreendendo um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da de 20/09/2018, pág. 52/127

48/112 invenção. As composições podem conter outros agentes terapêuticos e/ou de formulação, se desejado. Um composto da invenção pode também ser referido aqui como o agente ativo.

As composições farmacêuticas desta invenção contêm tipicamente uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção. Aqueles habilitados na técnica irão reconhecer, entretanto, que uma composição farmacêutica pode conter mais de uma quantidade terapeuticamente efetiva, isto é, composições volumosas, ou menos de uma quantidade terapeuticamente efetiva, isto é, doses unitárias individuais designadas para administração múltipla para alcançar uma quantidade terapeuticamente efetiva. Em uma modalidade, a composição irá conter de cerca de 0,01 a 95% em peso de agente ativo, incluindo, de cerca de 0,01 a 30% em peso, tal como de cerca de 0,01 a 10% em peso, com a quantidade real dependendo da própria formulação, da rota de administração, da frequência de dosagem e assim por diante. Em uma outra modalidade, uma composição adequada para inalação, por exemplo, compreende de cerca de 0,01 a 30% em peso ou o agente ativo em uma outra modalidade compreende de cerca de 0,01 a 10% em peso do agente ativo.

Qualquer veículo ou excipiente convencional pode ser usado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um veículo ou excipiente particular, ou combinações de veículos ou excipientes, irá depender do modo de administração que está sendo utilizado para tratar um paciente particular ou do tipo de condição médica ou estado da doença. Com relação a isto, a preparação de uma de 20/09/2018, pág. 53/127

49/112 composição adequada para um modo de administração particular está bem inserida no escopo daqueles habilitados na técnica farmacêutica. Adicionalmente, os veículos ou excipientes usados em tais composições estão comercialmente disponíveis. Por meio de ilustração adicional, técnicas de formulação convencionais estão descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^a edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); e H.C. Ansel e outros, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^a edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).

Exemplos representativos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados aos seguintes: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, tais como amido de milho e amido de batata; celulose, tal como celulose microcristalina, e seus derivados, tais com carboximetil celulose de sódio, etil celulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafrão, óleo de gergelim, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tal como propileno glicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; Agar; agentes de tamponamento, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água livre de pirogênio; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções de tampão de fosfato; gases propelentes comprimidos, como de 20/09/2018, pág. 54/127

50/112 clorofluorocarbonos e hidrofluorocarbonos; e outras substâncias compatíveis atóxicas empregadas em composições farmacêuticas.

As composições farmacêuticas são tipicamente preparadas misturando-se ou combinando-se completamente e intimamente o agente ativo com um veículo farmaceuticamente aceitável e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura combinada uniformemente resultante pode então ser moldada ou carregada em comprimidos, cápsulas, pílulas, caixas, cartuchos, distribuidores e similares, usando-se procedimentos e equipamentos convencionais.

Em uma modalidade, as composições farmacêuticas são adequadas para a administração por inalação. Composições adequadas para administração por inalação estarão tipicamente sob a forma de um aerossol ou um pó. Tais composições são geralmente administradas usando-se dispositivos de entrega bem conhecidos, tais como um inalador nebulizador, um inalador de pó seco, ou um inalador com dose medida, exemplos que estão descritos abaixo.

Em uma modalidade específica da invenção, uma composição farmacêutica compreendendo o agente ativo é administrada por inalação usando-se um inalador nebulizador. Tais dispositivos nebulizadores tipicamente produzem uma corrente de ar de alta velocidade que faz com que a composição seja pulverizada como uma névoa que é transportada para dentro do trato respiratório do paciente. Consequentemente, quando formulado para uso em um inalador nebulizador, o agente ativo é tipicamente dissolvido em um veículo adequado para formar uma solução. Alternativamente, de 20/09/2018, pág. 55/127

51/112 o agente ativo pode ser micronizado e combinado com um veiculo adequado para formar uma suspensão de partículas micronizadas de tamanho respirável, onde o termo micronizadas é tipicamente definido como cerca de 90% das partículas possuindo um diâmetro mediano de massa de menos de cerca de 10 pm. O termo diâmetro de massa mediana significa o diâmetro de forma que metade da massa das partículas esteja contida nas partículas com diâmetro maior e metade esteja contida nas partículas com diâmetro menor.

Dispositivos nebulizadores adequados incluem o Inalador Respimat® Soft Mist™ (Boehringer Ingelheim), o Sistema de Fornecimento Pulmonar AERx® (Aradigm Corp.), e o Nebulizador Reutilizável PARI LC Plus (Pari GmbH). Uma composição exemplar para utilização em um inalador nebulizador compreende uma solução aquosa isotônica compreendendo de cerca de 0,05 pg/mL a cerca de 10 mg/mL de um composto da invenção. Em uma modalidade, tal solução possui um pH de cerca de 4 a 6.

Em uma outra modalidade específica da invenção, uma composição farmacêutica compreendendo o agente ativo é administrada por inalação usando-se um inalador de pó seco (DPI) . Tais DPIs tipicamente administram o agente ativo como um pó de fluxo livre que é disperso em uma corrente de ar do paciente durante a inspiração. A fim de se conseguir um pó de fluxo livre, o agente ativo é tipicamente formulado com um excipiente adequado, tal como lactose, amido, manitol, dextrose, ácido poliláctico, polilactídeoco-glicolídeo e combinações destes. Tipicamente, o agente ativo é micronizado e combinado com um veículo para formar uma combinação adequada para inalação. Consequentemente, em de 20/09/2018, pág. 56/127

52/112 uma modalidade da invenção, o agente ativo está sob forma micronizada. Por exemplo, uma composição representativa para utilização em um DPI compreende lactose seca possuindo um tamanho de partícula entre cerca de 1 pm e cerca de 100 pm (por exemplo, lactose moída seca) e partículas micronizadas do agente ativo. Tal formulação de pó seco pode ser feita, por exemplo, combinando-se a lactose com o agente ativo e então se combinando a seco os componentes. Alternativamente, se desejado, o agente ativo pode ser formulado sem um excipiente. A composição é então carregada em um DPI, ou em cartuchos ou cápsulas de inalação para utilização com um DPI. DPIs são bem conhecidos daqueles de habilidade comum na técnica, e muitos destes dispositivos estão comercialmente disponíveis, com dispositivos representativos incluindo Aerolizer® (Novartis) , airmax™ (IVAX), ClickHaler® (Innovata Biomed), Diskhaler® (GlaxoSmithKline), Diskus® or Accuhaler (GlaxoSmithKline), Easyhaler® (Orion Pharma), Eclipse™ (Aventis), FlowCaps® (Hovione), Handihaler® (Boehringer Ingelheim), Pulvinal® (Chiesi), Rotahaler® (GlaxoSmithKline), SkyeHaler™ ou Certihaler™ (SkyePharma), Twisthaler (Schering-Plough), Turbuhaler® (AstraZeneca), Ultrahaler® (Aventis), e similares.

Em ainda uma outra modalidade específica da invenção, a composição compreendendo o agente ativo é administrada por inalação usando-se um inalador de dose medida (MDI). Tais MDIs tipicamente descarregam uma quantidade medida do agente ativo utilizando gás propelente comprimido. Formulações de dose medida compreendem, assim, uma solução ou suspensão do agente ativo em um propelente liquefeito, de 20/09/2018, pág. 57/127

53/112 na técnica, e comercialmente como um clorofluorocarbono como CCI3F ou um hidrofluoroalcano (HFA) como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134a) e 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano (HFA 227), embora HFAs sejam geralmente preferidos devido a preocupações acerca dos clorofluorocarbonos afetarem a camada de ozônio. Componentes opcionais adicionais de formulações de HFA incluem co-solventes, tais como etanol ou pentano, e tensoativos, tais como trioleato de sorbitano, ácido oléico, lecitina e glicerina. Veja, por exemplo, a Patente U. S. de número 5.225.183 para Purewal e outros, EP 0717987 A2 (Minnesota Mining and Manufacturing Company), e WO 92/22286 (Minnesota Mining and Manufacturing Company). Uma composição representativa para uso em um MDI compreende de cerca de 0,01% a 5% em peso de agente ativo; de cerca de 0% a 20% em peso de etanol e de cerca de 0% a 5% em peso de tensoativo; com o restante sendo um propelente de HFA. Tais composições são tipicamente preparadas pela adição de hidrofluoroalcano resfriado ou pressurizado a um recipiente adequado contendo o agente ativo, etanol (se presente) e o tensoativo (se presente). Para preparar uma suspensão, o agente ativo é micronizado e então combinado com o propelente. A formulação é carregada dentro de uma lata de aerossol, que forma uma porção do MDI. MDIs são bem conhecidos daqueles de habilidade comum muitos destes dispositivos estão disponíveis, com dispositivos representativos incluindo Sistema Inalador AeroBidm (Forest

Pharmaceuticals), Aerossol Inalador Atrovent (Boehringer

Ingelheim), Flovent® (GlaxoSmithKline), Inalador Maxair (3M) , Inalador Proventil® (Schering), Aerossol de Inalação de 20/09/2018, pág. 58/127

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Serevent® (GlaxoSmithKline), e similares. Alternativamente, uma formulação em suspensão pode ser preparada através de secagem por pulverização de uma cobertura de tensoativo sobre partículas micronizadas do agente ativo. Veja, por exemplo, WO 99/53901 (Glaxo Group Ltd.) e WO 00/61108 (Glaxo Group Ltd.) .

Exemplos adicionais de processos de preparação de partículas respiráveis, e formulações e dispositivos adequados para dosagem por inalação são descritos nas Patentes U. S. de número 5.874.063 para Briggner e outros; 5.983.956 para Trofast; 6.221.398 para Jakupovic e outros; 6.268.533 para Gao e outros; 6.475.524 para Bisrat e outros; e 6.613.307 para Cooper.

Em outra modalidade, as composições farmacêuticas são adequadas para administração oral. Composições adequadas para administração oral podem estar sob a forma de cápsulas, tabletes, pílulas, losangos, drágeas, pós, grânulos; soluções ou suspensões em um líquido aquoso ou não aquoso; emulsões líquidas de óleo em água ou água em óleo; elixires ou xaropes; e similares; cada um contendo uma quantidade predeterminada do agente ativo.

Quando objetivadas para administração oral em uma forma de dosagem sólida (isto é, como cápsulas, comprimidos, pílulas similares), composição compreenderá tipicamente o agente ativo e um ou mais veículo(s) farmaceuticamente aceitável(eis), como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio. Formas de dosagem sólida podem também compreender: cargas ou diluentes, tais como amidos, celulose microcristalina, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; ligantes, tais como de 20/09/2018, pág. 59/127

55/112 carboximetilcelulose, alginatos, gelatinas, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; umectantes, tal como glicerol; agentes desintegrantes, tal como Agar-agar, carbonato de cálcio, amido de batata e de tapioca, ácido algínico, alguns silicatos e/ou carbonato de sódio; agentes retardantes de solução, tal como parafina; aceleradores de absorção, tais como compostos de quaternário de amônio; agentes umectantes, tal como álcool cetílico e/ou monoestearato de glicerol; absorventes, tais como caulim e/ou argila bentonita; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e/ou misturas destes; agentes corantes; e agentes de tamponamento.

Agentes de liberação, agentes umectantes, agentes de cobertura, adoçantes, agentes flavorizantes e aromatizantes, preservativos e antioxidantes podem também estar presentes nas composições farmacêuticas. Agentes de revestimento exemplares para comprimidos, cápsulas, pílulas e etc., incluem aqueles usados para revestimentos entéricos, tais como ftalato de acetato de celulose, ftalato de acetato de polivinila, ftalato de hidroxipropil metilcelulose, copolímeros de ácido metacrílico-éster de ácido metacrílico, trimetilato de acetato de celulose, carboximetil etil celulose, succinato de acetato de hidroxipropil metil celulose e similares. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem:

antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, hidrocloreto de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfato de sódio, sulfito de sódio e similares;

antioxidantes solúveis em óleos, tais como palmitato de de 20/09/2018, pág. 60/127

56/112 ascorbil, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, lecitina, gaiato de propila, alfa-tocoferol e similares, e agentes quelantes metálicos, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiaminotetraacético, sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e similares.

Composições podem também ser formuladas para fornecer liberação lenta ou controlada do agente ativo usando-se, por meio de exemplo, hidroxipropil metil celulose em proporções variadas ou outras matrizes poliméricas, lipossomos e/ou microesferas. Além disso, as composições farmacêuticas da invenção podem conter agentes opacificantes e podem ser formuladas de forma a liberarem o agente ativo apenas ou, preferivelmente, em uma certa parte do trato gastrintestinal, opcionalmente, de uma maneira retardada. Exemplos de composições combinadas que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O agente ativo pode também estar sob a forma microencapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes acima descritos.

As formas de dosagem líquidas adequadas para administração oral incluem, por meio de ilustração, emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Formas de dosagem líquidas tipicamente compreendem o agente ativo e um diluente inerte, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, óleos (por exemplo, óleos de semente de algodão, amendoin, milho, germe, oliva, castor, e gergelim), glicerol, álcool de 20/09/2018, pág. 61/127

57/112 tetrahidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e misturas destes. Suspensões, podem conter agentes de suspensão tais como, por exemplo, álcoois isoestearílico etoxilado, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, metahidróxido de alumínio, bentonita, Agar-agar e tragacanto, e misturas destes.

Quando objetivadas para administração oral, as composições farmacêuticas da invenção podem ser embaladas em uma forma de dosagem unitária. O termo forma de dosagem unitária refere-se a uma unidade fisicamente separada adequada para medicamentar por dose um paciente, isto é, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de agente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado ou sozinho ou em combinação com uma ou mais unidades adicionais. Por exemplo, tais formas de dosagem unitárias podem ser cápsulas, comprimidos, pílulas e etc.

Os compostos da invenção podem também ser administrados por meio parenteral (por exemplo, por injeção intravenosa, subcutânea, intramuscular ou intraperitoneal). Para tal administração,o agente ativo é fornecido em uma solução, suspensão ou emulsão estéril. Solventes exemplares para preparação de tais formulações incluem água, solução salina, álcoois de baixo peso molecular como propileno glicol, polietileno glicol, óleos, gelatina, ésteres de ácidos graxos como oleato de etila e similares. Uma formulação parenteral típica é uma solução aquosa de pH 4 a 7 estéril do agente ativo. As formulações pareterais podem também conter um ou mais solubilizantes, estabilizadores, preservativos, agentes umectantes, emulsificantes e agentes de 20/09/2018, pág. 62/127

58/112 dispersantes. Estas formulações podem ser tornadas estéreis pelo uso de um meio injetável estéril, um agente esterilizante, filtração, irradiação ou calor.

Os compostos da invenção podem também ser administrados de forma transdérmica usando-se sistemas e excipientes de entrega transdérmica conhecidos. Por exemplo, o composto pode ser misturado com melhoradores de permeaçao, de como propileno glicol, monolaurato polietileno glicol, azacicloalcan-2-onas e similares, e incorporado em um adesivo ou sistema de fornecimento similar. Excipientes adicionais incluindo agentes de gelificação, emulsificantes e tampões, podem ser usados em tais composições transdérmicas se desejado.

Se desejado, os compostos desta invenção podem ser administrados em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos. Assim, em uma modalidade, composições da invenção podem, opcionalmente, conter outras drogas que são co-administradas com um composto da invenção. Por exemplo, a composição podem também compreender uma ou mais drogas (também chamados de agente(s) secundário (s)) selecionadas a partir do grupo de outros broncodilatadores (por exemplo, inibidores de PDE3, moduladores de adenosina 2b e agonistas do receptor β₂ adrenérgico); agentes antiinflamatórios (por exemplo, agentes antiinflamatórios esteroidais, tais como corticosteróides e glucocorticóides; agentes antiinflamatórios não esteroidais (NSAIDs), e inibidores de

PDE4) ; outros antagonistas de receptor muscarínico (isto é, agentes anticolinérgicos) ; agentes antiinfectivos (por exemplo, antibióticos Gram Positivos e Gram Nagativos e agentes antivirais); antihistaminas; inibidores de de 20/09/2018, pág. 63/127

59/112 secundário.

invenção, uma composição protease; bloqueadores aferentes (por exemplo, agonistas D₂ e moduladores de neuroquinina); e combinações destes. Vários exemplos de tais agentes terapêuticos são bem conhecidos na técnica, e exemplos são descritos abaixo. Combinando-se um composto da invenção com um agente secundário, pode-se alcançar terapia dupla, isto é, atividade antagonista de receptor muscarínico e atividade associada com o agente secundário (por exemplo, agonista de receptor βι adrenérgico), em alguns casos administrando-se duas composições e em alguns casos administrando-se uma única composição contendo o agente ativo e o agente Desta forma, ainda em outro aspecto da farmacêutica compreende um composto da invenção, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Terceiro, quarto e etc. agentes ativos podem ser também incluídos na composição. Por exemplo, uma composição pode compreender um composto da invenção, um agente secundário selecionado a partir de corticosteróides, agonistas do receptor β₂ adrenérgico; inibidores de fosfodiesterase-4 e combinações destes; e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade compreende um composto da específica, composição invenção, um agonista do receptor β₂ adrenérgico e um agente antiinflamatório esteroidal. Em terapia de combinação, a quantidade de composto da invenção que é administrada, assim como a quantidade de agentes secundários, pode ser inferior à quantidade tipicamente administrada em monoterapia.

Um composto da invenção pode ser fisicamente misturado com o segundo agente ativo para formar uma composição de 20/09/2018, pág. 64/127

60/112 contendo ambos os agentes, ou cada agente pode estar presente em composições separadas e distintas que são administradas ao paciente simultaneamente ou sequencialmente. Por exemplo, um composto da invenção pode ser combinado com um segundo ingrediente ativo utilizandose procedimentos e equipamentos convencionais para formar uma combinação de agentes ativos compreendendo o composto da invenção e um segundo agente ativo. Adicionalmente, os agentes ativos podem ser combinados a um veículo farmaceuticamente aceitável para formar uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção, um segundo agente ativo e um veículo farmaceuticamente aceitável. Nesta modalidade, os componentes da composição são tipicamente misturados ou combinados para criar uma mistura física. A mistura física é então administrada em uma quantidade terapeuticamente efetiva usando-se qualquer uma das rotas descritas aqui.

Alternativamente, os agentes ativos podem permanecer separados e distintos antes da administração ao paciente. Nesta modalidade, os agentes não são fisicamente misturados juntos antes da administração, mas são administrados simultaneamente ou em momentos separados como composições separadas. Tais composições podem ser embaladas separadamente ou podem ser embaladas juntas como um kit. Quando administradas em momentos separados, o agente secundário será tipicamente administrado menos de 24 horas após a administração do composto da invenção. Em outras modalidades, este relacionamento de tempo é inferior a 12 horas, inferior a 8 horas, inferior a 6 horas, inferior a 4 horas, inferior a 3 horas, inferior a 1 hora inferior a de 20/09/2018, pág. 65/127

61/112 trinta minutos, inferior a dez minutos, inferior a um minuto ou imediatamente após a administração do composto da invenção,

Isto também chamado de administração sequencial. Assim, um composto da invenção pode administrado pro sequencialmente a inalação simultaneamente outro agente ativo utilizando ser ou um dispositivo de fornecimento por inalação que empregue compartimentos separados (por exemplo, embalagens tipo blister) para cada agente ativo, onde sequencial pode significar ser administrado imediatamente após a administração do composto da invenção ou em algum momento predeterminado posterior (por exemplo, uma hora depois ou três horas depois). Alternativamente, a combinação pode ser administrada utilizando-se dispositivos de fornecimento separados, isto é, um dispositivo de fornecimento para cada agente terapêutico. Adicionalmente, os agentes podem ser entregues por diferentes vias de administração, isto é, um por inalação e o outro por administração oral.

Em uma modalidade, o kit compreende uma primeira forma de dosagem compreendendo um composto da invenção e pelo menos uma forma de dosagem adicional compreendendo um ou mais agentes secundários aqui expostos, em quantidade suficiente para executar os métodos da invenção. A primeira forma de dosagem e a segunda (ou terceira, etc.) forma de dosagem compreendem, juntas, uma quantidade terapeuticamente efetiva de agentes ativos para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição médica em um paciente.

Agente(s) secundário(s), quando incluído(s), está/estão presente(s) em uma quantidade terapeuticamente de 20/09/2018, pág. 66/127

62/112 efetiva, isto é, tipicamente administrado(s) em uma quantidade que produza um efeito terapeuticamente benéfico quando co-administrados com um composto da invenção. 0 agente secundário pode estar sob a forma de um sal, solução, estereoisômero oticamente puro farmaceuticamente aceitável, e assim por diante. Assim, agentes secundários listados abaixo são pretendidos para inclusão em todas as formas e estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados utilizando-se procedimentos e reagentes convencionais. Doses adequadas para um agente secundário estão tipicamente na faixa de cerca de 0,05 pg/dia a cerca de 500 mg/dia.

Em uma modalidade particular, um composto da invenção é administrado em combinação com um agonista do receptor β₂ adrenérgico. Agonistas do receptor β₂ adrenérgico representativos incluem, mas não estão limitados a, albuterol, bitolterol, fenoterol, formoterol, indacaterol, isoetarina, levalbuterol, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, salmefamol, salmeterol, terbutalina, e similares. Outros agonistas do receptor β₂ adrenérgico que podem ser utilizados em combinação com compostos da invenção incluem, mas não estão limitados a, 3—(4—{[6— ({(2R)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)fenil]etiljamino)-hexil]oxi}-butil)benzenosulfonamida e 3(-3-{[7-({(2R)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3(hidroximetil)fenil]etil}-amino)heptil]oxi}propil)benzenosulfonamida e compostos relacionados divulgados em WO 02/066422 (Glaxo Group Ltd.); 3—[3—(4—{[6— ([(2R)-2-hidroxi-2-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)fenil]etil} amino)hexil]oxi}butil)fenil] imidazolidina-2,4-diona e de 20/09/2018, pág. 67/127

63/112 compostos relacionados divulgados em WO 02/070490 (Glaxo

Group Ltd.); 3-(4-{[6-({ (2R)-2-[3-(formilamino)-4hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)-hexil] oxi}butil)benzenesulfonamida, 3-(4-([6-({ (2S)-2-[3(formilamino) -4-hidroxi-fenil]-2hidroxietil}amino)hexil]oxijbutil)benzenesulfonamida, 3(4 — {[6 — ({ (2R/S)-2-[3-(formilamino)-4-hidróxifenil]-2hidroxietil}amino)hexil] oxi}butil)benzeno-sulfonamida, N(t-butil)-3-(4-([6-({(2R)-2-[3-(formilamino)-4hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil] oxijbutil) benzenesulfonamida, N-(t-butil)-3-(4-([6-({2 S)—2-[3(formilamino)-4-hidroxifenil]-2-hidroxietil}amino)hexil] oxi}butil)benzene-sulfonamide, N-(t-butil)-3-(4-([6(((2R/S)-2-[3-(formilamino)-4-hidroxifenil]-2hidroxietil}amino) hexil]oxi}butil)benzenesulfonamida e compostos relacionados divulgados em WO 02/076933 (Glaxo Group Ltd.); 4-{(IR)-2-[(6-(2-[(2,6-diclorobenzil)oxi]etoxi}hexil) amino]-1-hidroxietil}-2(hidroximetil)fenol e compostos relacionados divulgados em WO 03/024439 (Glaxo Group Ltd.); N-(2-[4-{(R)-2-hidroxi-2feniletilamino)fenil] etil}-(R)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4hidroxifenil)-etilamina e compostos relacionados divulgados a Patente U.S. de número 6.576.793 para Moran e outros; N{2-[4-(3-fenil-4-metoxifenil)aminofenil] etil}-(R)-2hidroxi-2-(8-hidroxi-2(1H)-quinolinon-5-il)etilamina, e compostos relacionados divulgados na Patente U.S. de número

6.653.323 para Moran e outros. Em uma modalidade particular, o agonista do P2-adrenoreceptor é um sal monohidrocloreto cristalino de 77-{2-[4-( (R)-2-hidroxi-2feniletilamino)fenil]etil}-(R)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4de 20/09/2018, pág. 68/127

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O	agonista do	β2-
em	uma quantidade
0,05	pg a cerca de	500

prednisona;

triamcinolona;

adrenoreceptor será administrado suficiente para fornecer de cerca de pg por dose.

Em uma modalidade particular, um composto da invenção é administrado em combinação com um agente antiinflamatório esteroidal. Agentes antiinflamatórios esteroidais representativos incluem, mas não estão limitados a, dipropionato de beclometasona; budesonida; propionato de butixocorte; 20R-16oí, 17a- [butilidenebis (oxi) ] -6a, 9adifluoro-lip-hidroxi-17p-(metiltio)androsta-4-en-3-ona (RPR-106541); ciclesonida; dexametasona; 6a,9a-difluoro17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-Ιΐβ-hidroxi -16a-metil-3oxoandrosta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico S-fluorometil éster; 6α,9a -difluoro-l^-hidroxi-16a-metil-17a-[(4-metil1,3-tiazol-5-carbonil)oxi] -3-oxoandrosta-l,4^ίθηο-17βácido carbotióico S-fluorometil éster; 6a,9a-difluoro-l^hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-propioniloxiandrosta-l,4-dieno17β-ácido carbotióico (S)-(2-oxotetrahidrofurano-3S-il) éster; flunisolida; propionato de fluticasona; metil prednisolona; furoato de mometasona; prednisolona;

rofleponida;

e similares antiinflamatório esteroidal será administrado em uma quantidade suficiente para fornecer de cerca de 0,05 pg a cerca de 500 pg por dose.

Uma combinação exemplar é um composto da invenção coadministrado com salmeterol como um agonista de receptor β2 adrenérgico, e propionato de fluticasona como o agente antiinflamatório esteroidal. Uma outra combinação exemplar

ST-126; acetonida de Tipicamente, o agente de 20/09/2018, pág. 69/127

65/112 é um composto da invenção co-administrado com um sal de monohidrocloreto cristalino de 77-{2-[4-( (R)-2-hidroxi-2feniletilamino)fenil]etil}-(P)-2-hidroxi-2-(3-formamido-4hidroxifenil)etilamina como o agonista do P2-adrenoreceptor e éster S-fluorometil do ácido 6a,9a-difluoro-17a-[(2furanilcarbonil)oxi]-lip-hidroxi-16a-metil-3-oxoandrosta1,4-dieno-17β-carbotióico como o agente antiinflamatório esteroidal.

Outras combinações adequadas incluem, por exemplo, outros agentes antiinflamatórios, por exemplo, NSAIDs (tais como cromoglicato de sódio; nedocromil sódio; inibidores de fosfodiesterase (PDE) (por exemplo, teofilina, inibidores de PDE4 ou inibidores de PDE3/PDE4 misturados); antagonistas de leucotrieno (por exemplo, monteleukast) ; inibidores da síntese de leucotrieno; inibidores de iNOS; inibidores de protease, tais como inibidores de triptase e elastase; antagonistas de beta-2 integrina e agonistas e antagonistas do receptor de adenosina (por exemplo, agonistas de 2a adenosina) ; antagonistas de citoquina (por exemplo, antagonistas de quimoquina, tais como um anticorpo de interleucina (anticorpo de alL), especificamente uma terapia de aIL-4, uma terapia de aIL-13, ou uma combinação destes); ou inibidores de síntese de citoquina.

Em uma modalidade particular, um composto da invenção é administrado em combinação com inibidores de fosfodiesterase-4 (PDE4) ou inibidores de PDE3/PDE4 misturados. Inibidores de PDE4 ou inibidores de PDE3/PDE4 misturados representativos incluem, mas não estão limitados a, ácido cis 4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4metoxifenil)ciclohexan-l-carboxílico, 2-carbometoxi-4de 20/09/2018, pág. 70/127

66/112 mepenzolato, metilsulfato ciano-4-(3-ciclopropilmetoxi-4 -difluorometoxifenil) ciclohexan-l-ona; ácido cis-[4-ciano-4-(3 ciclopropilmetoxi-4-difluorometoxifenil)ciclohexan-l-ol]; ácido cis-4-ciano-4-[3-(ciclopentiloxi)-4metoxifenil]ciclohexano-l-carboxílico e similares, ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Outros inibidores de PDE4 ou PDE4/PDE3 misturados representativos incluem AWD12-281 (elbion); NCS-613 (INSERM); D-4418 (Chiroscience and Schering-Plough); CI-1018 ou PD-168787 (Pfizer); compostos benzodioxol divulgados em WO99/16766 (Kyowa Hakko); K-34 (Kyowa Hakko); V-11294A (Napp); roflumilast (Byk-Gulden);

compostos de ptalazinona divulgados em WO99/47505 (BykGulden) ; Pumafentrine (Byk-Gulden, agora Altana); arofilina (Almirall-Prodesfarma); VM554/UM565 (Vernalis); T-440 (Tanabe Seiyaku); e T2585 (Tanabe Seiyaku).

Em uma modalidade particular, um composto da invenção é administrado em combinação com um antagonista muscarínico (isto é, agente anticolinérgico). Antagonistas muscarínicos representativos incluem, mas não estão limitados a, atropina, sulfato de atropina, óxido de atropina, nitrato de metilatropina, hidrobrometo de homatropina, hidrobrometo de hiosciamina (d, 1), hidrobrometo de scopolamina, brometo de bromida, metantelina, brometo de propantelina, anisotropina, brometo de metila, brometo de clidínio, copirrolato (Robinul), iodeto de isopropamida, brometo de cloreto de tridihexetila (Pathilone) , de hexocíclio, hidrocloreto de trihexilfenidil, pirenzepina, telenzepina, AF-DX 116 e metoctramina e similares.

Em uma modalidade particular, um composto da invenção de 20/09/2018, pág. 71/127

67/112 é administrado em combinação com um anti-histamínico (isto é, antagonista do receptor Hi) . Anti-histamínicos representativos incluem, mas não estão limitados a, etanolaminas, como maleato de carbinoxamina, fumarato de clemastina, hidrocloreto de difenilhidramina e dimenidrinato; etilenodiaminas, como maleato de pirilamina, hidrocloreto de tripelenamina e citrato de tripelenamina; alquilaminas, como clorferinamina e acrivastina; piperazinas, como hidrocloreto de hidroxizina, panoato de hidroxizina, hidrocloreto de ciclizina, lactato de ciclizina, hidrocloreto meclizina e hidrocloreto de cetirizina; piperidinas, como astemizol, hidrocloreto de levocabastina, loratadina ou seu análogo descarboetoxi, terfenadina e hidrocloreto de fexofenadina; hidrocloreto de azelastina; e similares.

As seguintes formulações ilustram composições farmacêuticas representativas da invenção:

Composições Exemplares para Administração por um DPI

Um composto da invenção (0,2 mg) é micronizado e então combinado com lactose (25 mg). Esta mistura combinada é então carregada em um cartucho de inalação de gelatina. Os conteúdos do cartucho são administrados usando-se um DPI, por exemplo.

Um composto micronizado da invenção (100 mg) é combinado com lactose moída (25 g) (por exemplo, lactose em que não mais que cerca de 85% das partículas tenham um MMD de cerca de 60 pm a cerca de 90 pm e não menos que 15% das partículas possuam um MMD de menos de 15 pm). Esta mistura combinada é então carregada em blísteres individuais de um pacote de blíster descascável, em uma quantidade de 20/09/2018, pág. 72/127

68/112 suficiente para fornecer cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose. Os conteúdos dos blísteres são administrados usando-se um DPI.

Alternativamente, um composto micronizado da invenção (1 g) é combinado com lactose moída (200 g) para formar uma composição volumosa possuindo uma relação de peso entre o composto e a lactose moída de 1:200. A composição combinada é embalada em um DPI capaz de fornecer entre cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose.

Alternativamente, um composto micronizado da invenção (100 mg) e um agonista do receptor β2 adrenérgico micronizado (500 mg) são combinados com lactose moída (30 g). A mistura combinada é então carregada em blísteres individuais de um pacote de blíster descascável, em uma quantidade suficiente para fornecer cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose. Os conteúdos dos blísteres são administrados usando-se um DPI.

Composições Exemplares para Utilização em um MDI

Um composto micronizado da invenção (10 g) é disperso em uma solução preparada dissolvendo-se lecitina (0,2 g) em água desmineralizada (200 mL). A suspensão resultante é seca por pulverização e então micronizada para formar uma composição micronizada compreendendo partículas possuindo um diâmetro inferior a cerca de 1,5 pm. A composição micronizada é então carregada em cartuchos de MDI contendo 1,1,1,2-tetrafluoroetano pressurizado em uma quantidade suficiente para fornecer cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose quando administrado pelo

MDI.

Alternativamente, uma suspensão contendo 5% em peso do de 20/09/2018, pág. 73/127

69/112 composto da invenção, 0,5% em peso de lecitina e 0,5% em peso de trealose é preparada dispersando-se 5 gramas de um composto da invenção como partículas micronizadas com tamanho médio inferior a 10 pm em uma solução coloidal formada a partir de 0,5 g de trealose e 0,5 g de lecitina dissolvidos em 100 mL de água desmineralizada. A suspensão é seca por pulverização e o material resultante é micronizado em partículas possuindo um diâmetro médio inferior a 1,5 pm. As partículas são carregadas em latas com 1,1,1,2-tetrafluoroetano pressurizado.

Composições Exemplares para Utilização em um Inalador

Nebulizador

Um composto da invenção (25 mg) é dissolvido em solução salina isotônica tamponada com citrato (pH =5) (125 mL). A mistura é agitada e sonicada até que o composto seja dissolvido. 0 pH da solução é verificado e ajustado, se necessário, ao pH 5 adicionando-se lentamente hidróxido de sódio IN aquoso. A solução é administrada usando-se um dispositivo nebulizador que fornece cerca de 10 pg a cerca de 500 pg do composto da invenção por dose.

Cápsulas de Gelatina Duras Exemplares para Administração Oral

Um composto da invenção (50 g), lactose seca por pulverização (440 g) e estearato de magnésio (10 g) são completamente misturados. A composição resultante é então carregada em cápsulas de gelatina dura (500 mg da composição por cápsula).

Suspensão Exemplar para Administração Oral

Os seguintes ingredientes são misturados para formar uma suspensão contendo 100 mg de composto por 10 mL de de 20/09/2018, pág. 74/127

70/112 suspensão :

Ingredientes

Quantidade

1,0 g 0,5 g 2,0 g 0,15 g 0,05 g 25,5 g 12,85 g 1,0 g

0,035 mL 0,5 mg

q.s. até 100 mL

Composto da Invenção FumaÁcido Fumárico

Cloreto de Sódio

Metilparabeno Propilparabeno Açúcar Granulado Sorbitol (solução a 70%)

Veegum® K (silicato de alumínio e magnésio)

Flavorizante

Corante

Água Destilada

Formulação Injetável Exemplar para Administração por Injeção

Um composto da invenção (0,2 g) é combinado com uma solução tampão de acetato de sódio 0,4 M (2,0 mL) . O pH da solução resultante é ajustado a pH 4 usando-se ácido hidroclórico 0,5N ou hidróxido de sódio 0,5N, conforme necessário, e então água suficiente para injeção é adicionada para fornecer um volume total de 20 mL. A mistura é então filtrada através de um filtro estéril (0,22 mícron) para fornecer uma solução estéril adequada para administração por injeção.

EXEMPLOS

As Preparações e Exemplos a seguir são fornecidas para ilustrar modalidades específicas da invenção. Estas modalidades específicas, entretanto, não pretendem limitar o escopo da invenção de qualquer forma a menos que

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 75/127

71/112 especificamente indicado.

As seguintes abreviações possuem os seguintes significados a menos que de outra forma indicado e quaisquer outras abreviações aqui usadas e não definidas possuem seu significado padrão:

AC	adenileiciase
BSA	albumina de soro bovino
cAMP	monofosfato de adenosina 3’-5’ cíclica
CHO	ovário de hamster chinês
cM5	receptor M5 de chimpanzé
DCM	diclorometano (isto é, cloreto de metileno)
DiPEA	/V,/V-diisopropile ti lamina
dPBS	solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco
DMF	N,N-dimet i1fo rmami da
EDCi	N- (3-dimetilaminopropil) -N ’ -etilcarbodiimida
EDTA	ácido etilenodiaminotetraacético
EtOAc	acetato de etila
FBS	soro de feto bovino
FLIPR	leitor de placa por imagem fluorométrica
HBSS	Solução Salina Tamponada de Hank
HEPES	ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinotanosulfônico
hMi	receptor Mi humano clonado
hM2	receptor M2 humano clonado
hM3	receptor M3 humano clonado
hM4	receptor M4 humano clonado
hM5	receptor M5 humano clonado
HOBt	hidrato de 1-hidroxibenzotriazol
MCh	metileolina
MeOH	metanol

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 76/127

72/112

TFA	ácido trifluoroacético
THF	tetrahidrofurano

Qualquer outra abreviação aqui utilizada, mas não definida, possui seu significado padrão aceito de forma geral. A menos que observado em contrário, todos os materiais, como reagentes, materiais iniciais e solventes foram adquiridos a partir de fornecedores comerciais (como Sigma-Aldrich, Fluka, Riedel-de Haen e similares) e foram utilizados sem purificação adicional. As reações foram executadas sob atmosfera de nitrogênio, a menos que de outra forma observado. 0 progresso das misturas reacionais foi monitorado por cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia líquida de alta performance analítica (HPLC analítica), e espectrometria de massa, os detalhes são fornecidos abaixo e separadamente nos exemplos específicos das reações. As misturas de reação foram trabalhadas conforme descrito especificamente em cada reação; comumente elas forma purificadas por extração e outros métodos de purificação tal como cristalização dependente de temperatura e de solvente, e precipitação. Além disso, as misturas de reação foram rotineiramente purificadas por

HPLC preparativa.

Preparação 1

Ácido (R)-ciclopentilhidroxifenil acético

(2R, 5R) -2-t-Butil-5-fenil-l, 3-dioxolan-4-ona (la) :

Ácido (R)-mandélico (20g, 130 mmol) foi dissolvido em

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 77/127

73/112 pentano anidro (200 mL, 1,7 mol) . Pivaldeído (13,6 g, 153 mmol) foi adicionado seguido por ácido trifluorometanosulfônico (488 pL, 5,4 mmol). A reação foi deixada para refluxo a 36°C sob nitrogênio. Após 5,5 horas, a mistura foi deixada para resfriar à temperatura ambiente antes da agitação com 200 mL de uma solução de NaHCCb a 8% em peso por 10 minutos. O pentano em excesso foi removido por evaporação rotativa. Os sólidos foram coletados por filtração e rinsados (100 mL de água) enquanto estavam sob filtração a vácuo. Os sólidos foram secos durante a noite sob vácuo para produzir intermediário (la) como um sólido branco (23,8 g, 88% de pureza).

(2R,5R)-2-t-butil-5-(1-hidroxiciclopentil)-5-fenil1,3-dioxolan-4-ona (lb) : Hexametildisilazida de lítio (0,8 g, 4,7 mmol; 4,7 mL de l,0M em hexanos) foi adicionada a THF anidro (5,4 mL, 65 mmol) a -78°C. Intermediário (la) (800 mg, 3,6 mmol) em 5,3 mL de THF anidro foi adicionado à solução gota a gota durante 15 minutos. Após 30 minutos, adicionou-se ciclopentano (451 pL, 5,1 mmol) gota a gota durante menos de 1 minuto. Após 2 horas, 0,8 mL de Na₂HPÜ4 aquoso saturado foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 5 minutos. A mistura foi adicionada a 8 mL de cloreto de amônio aquoso saturado. A camada aquosa foi lavada (2x80 mL de EtOAc), e as camadas orgânicas foram comninadas, secas sobre Na₂SO4, filtradas e

combinadas. 0	produto	cru (780 mg)	foi purificado	por
cromatografia	rápida	(5% a 15% de	gradiente de EtOAc
durante 30	minutos	com hexanos)	para produzir	o
intermediário	(lb) .

(2R,5S)-2-t-butil-5-ciclopent-l-enil-5-fenil-l,3de 20/09/2018, pág. 78/127

74/112 dioxolan-4-ona (lc) : mmol) foi dissolvido intermediário (lb) (650 mg, 2,1 em 6,8 mL de THF anidro e a solução foi resfriada a 0°C. Adicionou-se cloreto de tionila (436 pL, 6 mmol) gota a gota, seguido pela adição de piridina (777 pL, 9,6 mmol). A mistura foi agitada a 0°C por 1 hora. Cloreto de amônio aquoso saturado (14 mL) foi adicionado e a mistura foi agitada por 5 minutos enquanto aquece à temperatura ambiente. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada (2 x 100 mL de EtOAc) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre Na2SÜ4, filtradas e concentradas para produzir um intermediário (lc) como um óleo amarelo claro (540 mg) , que foi utilizado na próxima etapa de purificação adicional.

Ácido (S)-ciclopent-l-enil-hidroxifenilacético (ld): O

intermediário	(lc)	(540 mg, 1,9 mmol)	foi	dissolvido em
MeOH (927 pL,	22,8	mmol). Adicionou-se	água	(1,84 mL, 12
mmol), seguida	pela	adição de KOH (1,1	g.	18,8 mmol). A

reação submetida a refluxo a 130°C por 3 horas. A mistura foi então diluída a 250 mL com cloreto de amônio saturado e então lavada (2x100 mL de hexano). A emulsão aquosa restante foi lavada (2x250 mL de EtOAc). As camadas de EtOAc foram combinadas, lavadas com 50 mL de NaCl saturado, secas sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada para produzir intermediário (ld) como um sólido amarelo-marrom (290 mg).

O intermediário (ld) (280 mg, 1,3 mmol) foi dissolvido em MeOH (2,50 mL, 61,7 mmol) e o frasco de reação foi submetido a refluxo com nitrogênio antes que 28 mg de Os/C a 10% fossem adicionados à mistura. A mistura foi então agitada à temperatura ambiente sob hidrogênio a 101,33 kPa e a reação foi monitorada por HPLC até que o material de 20/09/2018, pág. 79/127

75/112 inicial fosse consumido (aprox. 24 horas). O recipiente da mistura foi limpo com jato de nitrogênio, então a mistura foi filtrada através de celita e rinsada com MeOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo para se obter o composto do título como um sólido ligeiramente amarelo (284 mg).

Preparação 2 (K)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-l-piperazin-l-iletanona

A uma solução agitada de ácido (R) ciclopentilhidroxifenila cético (10,0 g, 45,4 mmol) em DCM (200 mL) adicionou-se t-butil 1-piperazinocarboxilato (8,5 g, 45,5 mmol). À reação adicionou-se DIPEA (23,7 mL, 13,6 mmol), HOBt (10,4 g, 68,1 mmol) e então EDCI (10,4 g, 54,4 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 12 horas. A mistura foi então lavada com NaOH IN (300 mL), HCI IN (300 mL) e então com NaCl aquoso saturado (300 mL) . A camada orgânica foi removida, seca sobre MgSO4, e depois filtrada. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Uma solução de TFA/DCM a 20% foi adicionada ao material cru e a mistura resultante foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Adicionou-se DCM (300 mL) e a mistura foi lavada com bicarbonato de sódio saturado (300 mL) . A camada orgânica foi então removida, seca sobre MgSO4 e filtrada. O material cru foi purificado através de cromatografia com sílica gel (MeOH/DCM a 10% com NH3 a 1% (aq.)) para fornecer o composto título como um pó branco (9,0 g, 31,2 mmol).

de 20/09/2018, pág. 80/127

76/112

EXEMPLO 1

4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-W-tiofen-2ilmetilpiperaz ino-1-carboxamidina

A uma solução agitada de (H)-2-ciclopentil-2-hidroxi2-fenil-l-piperazin-l-iletanona (3,9 g, 13,7 mmol) em DMF (200 mL) , adicionou-se DIPEA (4,8 mL, 27,3 mmol) e depois

C-(bis-bensotriazol-l-il)metilenoamina (3,6 g, 13,7 mmol). Isto foi agitado à temperatura ambiente por 30 minutos, seguido pela adição de C-tiofen-2-il-metilamina (2,8 mL, 27,3 mmol) . A mistura foi aquecida a 60°C por cerca de 14 horas. A reação foi resfriada à temperatura ambiente e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material cru foi purificado por HPLC de fase reversa para fornecer o composto do título como um sal TFA (0,7 g, 1,3 mmol) . MS m/z:[M+H]⁺ calculado para C23H30N4O2S = 427,21; encontrado:

427,2.

Síntese Alternativa

DIPEA (7,3 mL, 41,6 mmol) foi adicionado a (H)-2ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-l-piperazin-l-iletanona (6,0 g, 20,8 mmol) dissolvidos em etanol (90 mL, 2 mol) .

Adicionou-se C-(bis-benzotriazol-l-il)-metilenoamina (6,0 g, 22,9 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos. Adicionou-se C-tiofen-2-ilmetilamina (4,9 g, 41,6 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite a 55°C. A mistura foi condensada e o produto purificado por HPLC para fornecer o composto título

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77/112 como um sal TFA (7,3 g, 98% de pureza) . MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C23H30N4O2S = 427,21; encontrado: 427,4.

EXEMPLO 2

4-((E)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- (45 hidroxibenzil)piperazino-l-carboxamidina

A uma solução agitada de (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi10 2-fenil-l-piperazin-l-iletanona (5,00 g, 17,3 mmol; preparada conforme descrito na Preparação 1) em DMF (200 mL) , adicionou-se DIPEA (10,6 mL, 60,7 mmol) e depois C(bis-bensotriazol-l-il)metilenoamina (5,48 g, 20,8 mmol). Isto foi agitado à temperatura ambiente por 30 minutos, seguido pela adição de 4-hidroxibenzilamina (12,0 mL, 97 mmol). A mistura foi aquecida a 60°C por cerca de 14 horas. A reação foi resfriada à temperatura ambiente e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material cru foi purificado por HPLC de fase reversa para fornecer o

0 composto do título como um sal TFA (1,7 g, 3,1 mmol) . MS m/z: [M + H⁺] calculado para C24H32N4O3 = 437,25; encontrado:

437,2.

EXEMPLO 3

4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Nfurano-2-ilmetilpiperazino-l-carboxamidina

Foram adicionados (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilPetição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 82/127

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1-piperazin-l-iletanona (2,0 g, 6,9 mmol) e C(bisbenzotriazol-l-il)metilenoamina (2,0 g, 7,6 mmol) a etanol (40,0 mL, 685 mmol), seguidos pela adição de DIPEA (2,4 mL, 13,9 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por cerca de 1 hora até que todos os sólidos estivessem dissolvidos, para formar o intermediário. Adicionou-se furfurilamina (1,2 mL, 13,9 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 35°C até que a reação estivesse completa (cerca de 22 horas). A purificação por HPLC preparativo produziu o composto título como um sal TFA (329 mg, 6,9 mmol, 97,5% de pureza) . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H30N4O3 = 411,23; encontrado: 411,2.

EXEMPLO 4

Após os procedimentos descritos nos exemplos anteriores e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 4-1 a 4-52, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

Ex.	Z	Q
4-1	-CH(CH3) -q	fenil
4-2	-ch2-q	3,4-difluorofenil
4-3	-ch2-q	4-metoxifenil
4-4	-ch2-q	tiofen-3-il
4-5	-ch2-q	fenil
4-6	-ch2-q	3-fluorofenil
4-7	- (CH2)2-Q	fenil
4-8	-ch2-q	piridin-2-il

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79/112

4-9	-ch2-q	3-hidróxifenil
4-10	-ch2-q	4-fluorofenil
4-11	-ch2-q	2-fluorofenil
4-12	-ch2-q	ciclohexil
4-13	-ch2-q	3-metoxifenil
4-14	-ch2-q	3, 5-difluorofenil
4-15	-ch2-q	tiazol-2-il
4-16	-ch2-q	lH-pirazol-3-il
4-17	-NH-Q	fenil
4-18	-ch2-q	furan-3-il
4-19	-ch2-q	2-metil-tiazol-4-il
4-20	-ch2-q	propil
4-21	-ch2-q	butil
4-22	-ch2-q	pentil
4-23	-NH-Q	2-fluorofenil
4-24	-NH-Q	2-clorofenil
4-25	-NH-Q	3-fluorofenil
4-26	-NH-Q	3-clorofenil
4-27	-NH-Q	4-metilfenil
4-28	-NH-Q	4-fluorofenil
4-29	-NH-Q	4-clorofenil
4-30	-NH-Q	4-metoxifenil
4-31	-CH2-Q	éster metílico de ácido 4-benzóico
4-32	-ch2-q	lH-indol-2-il
4-33	-ch2-q	cicloheptil
4-34	-ch2-q	2-hidróxifenil
4-35	-ch2-q	4-trifluorometoxifenil
4-36	-ch2-q	4-amidofenil
4-37	-ch2-q	4-hidroximetilfenil

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80/112

4-38	-ch2-q	lH-indol-5-il
4-39	-ch2-q	benzofuran-5-il
4-40	-ch2-q	4-metilfenil
4-41	-ch2-q	4-metilsulfanilfenil
4-42	-ch2-q	3-cianofenil
4-43	-ch2-q	3-amidofenil
4-44	-ch2-q	2-metilfenil
4-45	-ch2-q	3-metilfenil
4-46	-ch2-q	lH-indol-4-il
4-47	-ch2-q	3-metilsulfanilfenil
4-48	-ch2-q	benzo[b]tiofen-5-il
4-49	-ch2-q	benzo[1,3]dioxol-5-il
4-50	-ch2-q	benzo[b]tiofen-2-il
4-51	-ch2-q	1-metil-lH-pirazol-3-il
4-52	-ch2-q	ciclopentil

(4-1) 4- (2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N( (R)-1-feniletil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2, 435,27; encontrado: 435,2.

(4-2) 4-(2-ciclopentibl-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N5 (3,4-difluorobenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C25H30F2N4O2, 457,23; encontrado:

457,2.

(4-3) 4-(2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N- (4metoxibenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O3, 451,26; encontrado: 451,2.

(4-4) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Ntiofen-3-ilmetil-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H30N4O2S, 427,21; encontrado: 427,4.

(4-5) N-benzil-4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 85/127

81/112 fenilacetil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/zz [M+H]⁺ calculado para C25H32N4O2, 421,25; encontrado: 421,2.

(4-6) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N(3-fluorobenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado: 439,2.

(4-7) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Nfenetilpiperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2, 435,27; encontrado: 435,2.

(4-8) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N10 piridin-2-ilmetil-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N5O2, 422,25; encontrado: 422,2.

(4-9) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil acetil)N- (3-hidroxibenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H32N4O3, 437,25; encontrado:

437,2.

(4-10) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (4-fluorobenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado: 439,2.

(4-11) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)20 N- (2-fluorobenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C25H31FN4O2, 439,24; encontrado: 439,2.

(4-12) /V-ciclohexilmetil-4-((R)-2-ciclopentil-2hidroxi-2-fenilacetil) piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H38N4O2, 427,30; encontrado: 427,2.

(4-13) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil acetil)

-N- (3-metoxibenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O3, 451,26; encontrado: 451,2.

(4-14) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(3,5-difluorobenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C25H30F2N4O2, 457,23; encontrado:

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 86/127

82/112

457.2.

(4-15) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)W-tiazol-2-ilmetil-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H29N5O2S, 428,20; encontrado: 428,2.

(4-16) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(lH-pirazol-3-ilmetil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H30N6O2, 411,24; encontrado:

411.2.

(4-17) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)10 N- (fenilamino)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H31N5O2, 422,25; encontrado: 422,2.

(4-18) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)W-furan-3-ilmetilpiperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H30N4O3, 411,23; encontrado: 411,2.

(4-19) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(2-metiltiazol-4-ilmetil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H31N5O2S, 442,22; encontrado:

442.2.

(4-20) W-butil-4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-220 fenilacetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H34N4O2, 387,27; encontrado: 387,2.

(4-21) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-pentilpiperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H36N4O2, 401,28; encontrado: 401,2.

(4-22) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)W-hexilpiperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H38N4O2, 415,30; encontrado: 415,2.

(4-23) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (2-fluorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado: 440,2.

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 87/127

83/112 (4-24) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(2-clorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado: 456,2.

(4-25) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)5 N- (3-fluorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado: 440,2.

(4-26) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (3-clorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado: 456,2.

(4-27) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (4-metilfenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C25H33N5O2, 436,26; encontrado: 436,2.

(4-28) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (4-fluorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H30FN5O2, 440,24; encontrado: 440,2.

(4-29) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (4-clorofenil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H] ⁺ calculado para C24H30CIN5O2, 456,21; encontrado: 456,2.

(4-30) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)20 N-(4-metoxifenil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H33N5O3, 452,26; encontrado: 452,2.

(4-31) éster metílico de ácido 4-({[4-((R)-2ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazino-1carboximidoil]amino}metil)benzóico. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H34N4O4, 479,26; encontrado: 479,2.

(4-32) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (lH-indol-2-ilmetil) piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H33N5O2, 460,26; encontrado: 460,2.

(4-33) 77-cicloheptilmetil-4- ( (R)-2-ciclopentil-230 hidroxi-2-fenilacetil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 88/127

84/112 [M+H]⁺ calculado para C26H40N4O2, 441,32; encontrado: 441,2.

(4-34) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(2-hidroxibenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C25H32N4O3, 437,25; encontrado: 437,2.

(4-35) 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(4-trifluorometoxibenzil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H31F3N4O3, 505,24; encontrado:

505.2.

(4-36) 4-({[4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-210 fenilacetil)piperazino-1carboximidoil]amino}metil)benzamida. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N5O3, 464,26; encontrado: 464,2.

(4-37) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(4-hidroximetilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O3, 451,26; encontrado:

451.2.

(4-38) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (lH-indol-5-ilmetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H33N5O2, 460,26; encontrado: 460,2.

(4-39) W-benzofuran-5-ilmetil-4-((R)-2-ciclopentil-2hidroxi-2-fenilacetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H32N4O3, 461,25; encontrado: 461,2.

(4-40) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(4-metilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2, 435,27; encontrado: 435,2.

(4-41) 4- ( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N-(4-metilsulfanilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2S, 4 67,24; encontrado:

467.2.

(4-42) N-(3-cianobenzil)-4- ( (R) -2-ciclopentil-2Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 89/127

85/112 hidroxi-2-fenilacetil)piperazino-l-carboxamidina. MS m/z:

[M+H]⁺ calculado para C26H31N5O2, 446,25; encontrado: 446,2.

(4-43) 3-({[4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2fenilacetil)-piperazino-l-carboximidoil]aminojmetil) benzamida. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N5O3, 464,26;

encontrado: 464,2.

(4-44) 4- (R) -2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil) -N(2-metilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2, 435,27; encontrado: 434,2.

(4-45) 4-(R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N(3-metilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2, 435,27; encontrado: 435,2.

(4-46) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)

-N- (lH-indol-4-ilmetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H33N5O2, 460,26; encontrado:

460,2.

(4-47) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)N- (3-metilsulfanilbenzil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2S, 4 67,24; encontrado:

467,2.

(4-48) ZV-benzo [b] tiophen-5-ilmetil-4- ( (R) -2ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-acetil)piperazino-lcarboxamidina . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H32N4O2S, 477,22; encontrado: 477,2.

(4-49) ZV-benzo [1,3] dioxol-5-ilmetil-4-(R)-2ciclopentil-2-hidroxi-2-fenil-acetil)piperazino-lcarboxamidina . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H32N4O4, 465,24; encontrado: 465,2.

(4-50) ZV-benzo [b] tiophen-2-ilmetil-4- (R) -230 ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)piperazino-1Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 90/127

86/112 carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H32N4O2S

477,22; encontrado: 477,2.

(3-51) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)

N- (l-metil-lH-pirazol-3-ilmetil)piperazino-l-carboxamidina

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H32N6O2, 425,26; encontrado

425,2.

(3-52) 4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)

W-ciclopentilmetil-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z [M+H]⁺ calculado para C24H36N4O2, 413,28; encontrado: 413,2.

EXEMPLO 5

Após os procedimentos descritos nos exemplo anteriores e substituindo-se os materiais iniciais reagentes apropriados, os compostos 5-1 e 5-2, possuindo que segue, foram também preparados como sais TFA:

(5-1) N-benzil-4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2fenilacetil)-W'-metil-piperazino-l-carboxamidina (R⁶ =

CH3) . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H34N4O2 = 435,27 encontrado: 435,2.

(5-2) N-benzil-4-((R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-225 fenilacetil)-W'-etilpiperazino-l-carboxamidina (R⁶ = -CH3)

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H36N4O2 = 4 4 9,28 encontrado: 449,2.

Preparação 3

Éster t-butílico de ácido (R)-3((R)-2-ciclopentil-2 30 hidroxi-2-fenilacetoxi)pirrolidina-l-carboxílico

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 91/127

87/112

A temperatura ambiente, azodicarboxilato diisopropilico (980 pL, 1,5 mmol) a uma mistura de ácido (A)-ciclopentilhidroxifenilacético (1,1 g, 5 mmol), éster t-butilico de ácido (A)-3hidroxipirrolidino-l-carboxílico (1,0 g, 5,5 mmol) e trifenil-fosfina (1,3 g, 5 mmol) em 10 mL de THF. A mistura de reação foi então agitada à temperatura ambiente durante a noite.

O solvente foi removido e 100 mL de EtOAc foram adicionados. A camada orgânica foi lavada com uma solução de bicarbonato de sódio (50 mL x 3), depois com NaCl aquoso e seca sobre sulfato de sódio. O solvente foi removido, fornecendo 4 g de produto cru, que foi purificado por cromatografia rápida (EtOAc/hexano) para produzir o composto titulo (1,5 g, 99% de pureza).

Preparação 4 (K)-pirrolidin-3-il éster de ácido (K)ciclopentilhidroxifenilacético

hidroxi-2-fenilacetoxi)pirrolidino-l-carboxilico (1,3 g) em mL de 1,4-dioxano foi adicionado a 4 mL de HCI 4M em 1,4dioxano e agitado à temperatura ambiente durante a noite de 20/09/2018, pág. 92/127

88/112 para produzir o composto título como um sal de HCI (1 g).

EXEMPLO 6 (R)-1- (ΛΓ-benzilcarbamimidoil) pirrolidin-3-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético

hidroxi-2-fenilacetoxi)pirrolidino-l-carboxílico (97,5 mg, 0,3 mmol) em 3 mL de DMF foi adicionado a DIPEA (130 pL, 750 pmol), seguido pela adição de C-(bis-benzotriazol-1il)-metilenoamina (87 mg, 330 pmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, seguida pela adição de benzilamina (39 pL, 360 pmol). A mistura de reação foi então agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido e o soluto purificado por cromatografia de fase reversa para produzir o composto título como um sal TFA (78,2 mg, 99,5% de pureza). MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H31N3O3, 422,24; encontrado: 422,2.

EXEMPLO 7

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 7-1 a 7-18, possuindo a fórmula a seguir, foram também preparados como sais TFA:

Ex.

Q

de 20/09/2018, pág. 93/127

89/112

7-1	fenil
7-2	tiofen-2-il
7-3	2-hidróxifenil
7-4	3-hidróxifenil
7-5	4-hidróxifenil
7-6	furan-2-il
7-7	furan-3-il
7-8	2-fluorofenil
7-9	3-fluorofenil
7-10	4-fluorofenil
7-11	2,6-difluorofenil
7-12	3,4-difluorofenil
7-13	3, 5-difluorofenil
7-14	4-trifluorometilfenil
7-15	5-metilfuran-2-il
7-16	piridin-2-il
7-17	- (CH2) 2-fenil
7-18	-CH2-fenil

(7-1) 1-(AZ-benzilcarbamimidoil)-pirrolidin-3-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H31N3O3, 422,24; encontrado: 422,4.

(7-2) (R) — 1 — (2V-tiophen-2-ilmetil5 carbamimidoil)pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C23H29N3O3S, 428,19; encontrado: 428,4.

(7-3) (R)-1-[Λ7-(2-hidroxibenzil)carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) 10 ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H3IN3O4, 438,23; encontrado: 438,5.

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 94/127

90/112

(7-4)	(R) -1- [77- (3-hidroxibenzil) -
carbamimidoil]pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C25H31N3O4, 438,23; encontrado: 438,5.

(7-5)	(R) -1- [77- (4-hidroxibenzil) -
carbamimidoil]pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C25H31N3O4, 438,23; encontrado: 438,3.

(7-6)	(R) -1- (77-furan-2-ilmetil-
carbamimidoil)pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C23H29N3O4, 412,22; encontrado: 412,2.

(7-7)	(R) -1- (77-furan-3-ilmetil-
carbamimidoil)pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C23H29N3O4, 412,22; encontrado: 412,2.

(7-8)	(R) -1- [77- (2-fluoro-benzil) -
carbamimidoil]pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C25H30FN3O3, 440,23; encontrado: 440,3.

(7-9)	(R) -1- [77- (3-fluoro-benzil) -
carbamimidoil]pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C25H30FN3O3, 440,23; encontrado: 440,4.

(7-10)	(R) -1- [77- (4-fluorobenzil) -
carbamimidoil]pirrolidin-3-il	éster de ácido (R) -
ciclopentilhidroxifenilacético.	MS m/z: [M+H]+ calculado

para C25H30FN3O3, 440,23; encontrado: 440,4.

(7-11) (R) -1- [77- (2,6-difluorobenzil) carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) de 20/09/2018, pág. 95/127

91/112 ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C25H29F2N3O3, 458,22; encontrado: 458,2.

(7-12) (R)-1-[2S7—(3, 4-difluorobenzil)carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C25H29F2N3O3, 458,22; encontrado: 458,2.

(7-13) (R) -1- [77- (3,5-difluorobenzil) carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético . MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C25H29F2N3O3, 458,22; encontrado: 458,2.

(7-14) (R) -1- [77- (4-trifluorometoxibenzil) carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C26H30F3N3O4, 506,22; encontrado: 506,2.

(7-15) (R) — 1 — [77- (5-metil-furan-2lmetil)carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O4, 426,23; encontrado: 426,2.

(7-16) (R) -1- (77-piridin-2-ilmetilcarbamimidoil)pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C24H30N4O3, 423,23; encontrado: 423,2.

(7-17) (R) — 1 — [77- (3-fenilpropil) carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido (R) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C27H35N3O3, 450,27; encontrado: 450,2.

(7-18) (R) -1- (77-phenetilcarbamimidoil) -pirrolidin-3-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z·. [M+H]⁺ calculado para C26H33N3O3, 436,25; encontrado: 436,2.

EXEMPLO 8 de 20/09/2018, pág. 96/127

92/112

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 8-1 a 8-13, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

Ex.	Q
8-1	fenil
8-2	tiofen-2-il
8-3	furan-2-il
8-4	furan-3-il
8-5	2-hidróxifenil
8-6	3-hidróxifenil
8-7	4-hidróxifenil
8-8	3-metóxifenil
8-9	2-fluorofenil
8-10	3-fluorofenil
8-11	4-fluorofenil
8-12	piridin-2-il
8-13	benzofuran-5-il

(8-1) 1-(N-benzilcarbamimidoil)piperidin-4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N3O3, 436,25; encontrado: 436,5.

(8-2) 1- (N-tiofen-2-ilmetil-carbamimidoil)piperidin4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético.

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O3S, 442,21;

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 97/127

93/112 encontrado: 442,4.

(8-3) 1- (W-furan-2-ilmetil-carbamimidoil)piperidin-4il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O4, 426,23; encontrado:

426,2.

(8-4) 1- (W-furan-3-ilmetil-carbamimidoil)piperidin-4il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O4, 426,23; encontrado:

426.2.

(8-5) 1- [Λ7-(2-hidroxibenzil)-carbamimidoil]piperidin4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N3O4, 452,25; encontrado:

452.2.

(8-6) 1- [Λ7-(3-hidroxibenzil)carbamimidoil]piperidin4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N3O4, 452,25; encontrado:

452,2.

(8-7) 1- [Λ7- (4-hidroxibenzil) -carbamimidoil] piperidin4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H33N3O4, 452,25; encontrado:

452.2.

(8-8) 1-[N- (3-metoxibenzil)-carbamimidoil]piperidin-4il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C27H35N3O4, 466,26; encontrado:

466.2.

(8-9) 1-[N- (2-fluorobenzil)-carbamimidoil]piperidin-4il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H32FN3O3, 454,24; encontrado:

454.2.

(8-10) 1-[N- (3-fluorobenzil)-carbamimidoil]piperidinde 20/09/2018, pág. 98/127

94/112

4-il éster de ácido (P)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H32FN3O3, 454,24; encontrado:

454.2.

(8-11) 1-[N- (4-fluorobenzil)-carbamimidoil]piperidin4-il éster de ácido (P)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H32FN3O3, 454.24; encontrado:

454.2.

(8-12) 1- (77-piridin-2-ilmetil-carbamimidoil) piperidin4-il éster de ácido (P)-ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C25H32N4O3, 437,25; encontrado:

437,2.

(8-13) 1- (77-benzofuran-5-ilmetil-carbamimidoil) piperidin-4-il éster de ácido (P) ciclopentilhidroxifenilacético. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C28H33N3O4, 476,25; encontrado: 476, 4.

EXEMPLO 9

Seguindo os procedimentos anterior e substituindo-se os reagentes apropriados benzilcarbamimidoil)piperidin-3-il ciclopentilhidroxifenilacético foi sal TFA:

descritos materiais no exemplo iniciais e (P)-l-(Néster de ácido (P) também preparado como um

MS m/z: [M + H] ⁺ calculado para C26H33N3O3, 436,25;

encontrado: 436,5.

EXEMPLO 10

Seguindo os procedimentos descritos no exemplo de 20/09/2018, pág. 99/127

95/112 anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, l-[N-(3fenilpropil)carbamimidoil]piperidin-4-il (R)-ciclopentilhidroxifenilacético foi como um sal TFA:

éster de ácido também preparado

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C28H37N3O3, 464,28;

encontrado: 464,4.

EXEMPLO 11

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 11-1 e 11-2, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

(11-1) (R)-1-(W-metilcarbamimidoil)-pirrolidin-3-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético (Z = CH₃) . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para Ci9H27N₃O₃, 346,21; encontrado: 346,2.

(11-2) (R)-1-(W-butilcarbamimidoil)-pirrolidin-3-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético (Z = (CH₂)3CH₃). MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H₃₃N₃O₃, 388,25;

encontrado: 388,2.

EXEMPLO 12

Seguindo os procedimentos descritos no exemplo de 20/09/2018, pág. 100/127

96/112 anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, l-carbamimidoil-piperidin-4-il éster de ácido (R)-ciclopentilhidroxifenilacético foi também preparado como um sal TFA:

0N=H

X A

JN, 'NH.

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C19H27N3O3, 346,21;

encontrado: 346,1.

EXEMPLO 13

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 13-1 a 13-2, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

(13-1) (R)-1-(A/-benzilcarbamimidoil)-pirrolidin-3-il éster de ácido 2-hidroxi-4-metil-2-fenilpentanóico (Q = fenil). MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O3, 410,24;

encontrado: 410,2.

(13-2) (R)-1-[N- (4-hidroxibenzil) carbamimidoil]pirrolidin-3-il éster de ácido 2-hidroxi-4metil-2-fenilpentanóico (Q = 4-hidroxifenil). MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C24H31N3O4, 426,23; encontrado: 426,2.

EXEMPLO 14

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 101/127

97/112

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 14-1 a 14-4, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

Ex.	Q
14-1	fenil
14-2	tiofen-2-il
14-3	4-hidróxifenil
14-4	furan-2-il

(14-1) N-benzil-4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen-210 ilacetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H24N4O2S2, 441,13; encontrado: 441,0.

(14-2) 4-(2-hidróxi-2,2-di-tiophen-2-ilacetil) - ^Λtiofen-2-ilmetil-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C20H22N4O2S3, 447,09; encontrado: 447,0.

(14-3) N- (4-hidroxibenzil)-4-(2-hidroxi-2,2-di-tiofen2-il-acetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C22H24N4O3S2, 457,13; encontrado: 457,0.

(14-4) W-furan-2-ilmetil-4-(2-hidróxi-2,2-di-tiofen-2il-acetil)-piperazino-l-carboxamidina. MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C20H22N4O3S2, 431,11; encontrado: 431,0.

EXEMPLO 15

Após os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, os compostos 15-1 a 15-2, possuindo a fórmula que segue, foram também preparados como sais TFA:

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 102/127

98/112

(15-1) 1-[N- (3-fenilpropil)carbamimidoil]piperidin-4il éster de ácido 9H-xanteno-9-carboxílici (Z = -(CH2)3~ fenil) . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C29H31N3O3, 470,24;

encontrado: 470,4.

(15-2) (F)— 1 —(N-benzilcarbamimidoil)pirrolidin-3-il éster de ácido 9H-xanteno-9-carboxílico (Z = -CH2-fenil) . MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C26H25N3O3, 428,19; encontrado: 428,5.

EXEMPLO 16

Seguindo os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, l-carbamimidoilpiperidin-3-ilmetil éster de ácido 9H-xanteno-9-carboxílico foi também preparado como um sal TFA:

A nh₂

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C21H23N3O3, 366, 17;

encontrado: 366,2.

EXEMPLO 17

Seguindo os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, l-carbamimidoilpirrolidin-3-ilmetil éster de ácido 9H-xanteno-9-carboxílico foi também preparado como um sal TFA:

de 20/09/2018, pág. 103/127

99/112

calculado para

MS m/z: [M + H] ⁺ encontrado: 352,2.

C20H21N3O3,

352,16;

EXEMPLO 18

Seguindo os procedimentos descritos no exemplo anterior e substituindo-se os materiais iniciais e reagentes apropriados, l-carbamimidoil-piperidin-4-ilmetil éster de ácido 9H-xanteno-9-carboxilico foi também preparado como um sal TFA:

MS m/z: [M+H]⁺ calculado para C21H23N3O3, 366, 17;

encontrado: 366,2.

Ensaio 1

Ensaio de Ligação de Radioligante Preparação de Membrana a partir de Células Expressando Subtipos hMi, hM₂, I1M3 e I1M4 do Receptor Muscarinico

Linhas de célula CHO que expressam de forma estável os subtipos hMi, hM2, hM₃ e hM4 do receptor muscarinico humano clonado, respectivamente, foram desenvolvidas até sua quase confluência em meio consistindo de HAM's F-12 suplementado com FBS 10% e 250 pg/mL de Geneticin. As células foram desenvolvidas em uma emcubadora com CO2 a 5%, 37 °C e suspensas com EDTA em dPBS 2mM. As células foram coletadas de 20/09/2018, pág. 104/127

100/112 por 5 minutos de centrifugação a 650 x g, e as pelotas de célula foram armazenadas congeladas a -80°C ou membranas foram preparadas imediatamente. Para a preparação da membrana, as pelotas de célula foram ressuspensas em tampão de lise e homogeneizadas com um disruptor de tecido Polytron PT-2100 (Kinematica AG; 20 segundos x 2 jatos) . As membranas brutas foram centrifugadas a 40.000 x g por 15 minutos a 4°C. A pelota de membrana foi então novamente suspensa com tampão de ressuspensão e homogeneizada novamente com o disruptor de tecido Polytron. A concentração de proteína da suspensão de membrana foi determinada pelo método descrito em Lowry, O. e outros, Journal of Biochemistry_f 193.265 (1951) . Todas as membranas foram armazenadas congeladas em alíguotas a -80°C ou foram usadas imediatamente. Alíguotas de membranas de receptor hM5 preparadas foram adguiridas diretamente de Perkin Elmer e armazenadas a -80°C até o uso.

Ensaio de Ligação de Radioligante para Receptor Muscarínico Subtipos hMi, hM2,hM3, hM₄ e hMs

Os ensaios de ligação de radioligante foram executados em placas de microtitulação de 96 cavidades em um volume de ensaio total de 1000 pL. Membranas de célula CHO gue expressam de forma estável o subtipo hMi, hM2, hM3, hM4 ou hMs do receptor muscarínico foram diluídas em tampão de ensaio às seguintes concentrações de proteína alvo especificadas (pg/cavidade) : 10 pg para hMi, 10 a 15 pg para hM2, 10 a 2 0 pg para hM3, 10 a 2 0 pg para hM4 e 10 a 12 pg para hMs. As membranas foram rapidamente homogeneizadas usando-se um disruptor de tecido Polytron (10 segundos) antes da adição da placa de ensaio. Os estudos de ligação

Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 105/127

101/112 (TRK666, 84,0

Buckinghamshire, de saturação para determinar os valores de Kb do radioligante foram executados usando-se cloreto de L-[Nmetil-³H]escopolaminometila ( [³H]-NMS)

Ci/mmol, Amersham Pharmacia Biotech,

England) a concentrações variando de 0,001 nM a 20 nM. Os ensaios de deslocamento para determinação dos valores de Kí dos compostos de teste foram executados com [³H]-NMS a 1 nM e onze diferentes concentrações de composto de teste. Os compostos do teste foram inicialmente dissolvidos a uma concentração de 40 μΜ em tampão de diluição e depois diluídos serialmente 5x com tampão de diluição até concentrações finais variando de 400 fM a 4 μΜ. A ordem de adição e volumes para as placas de ensaio foram como segue: 825 mL de tampão do ensaio com BSA 0,1%, 25 pL de radioligante, 100 pL de composto de teste diluído e 50 pL em membranas. As placas de ensaio foram incubadas por 6 horas a 37°C. As reações de ligação foram finalizadas por rápida filtração sobre placas de filtro de fibra de vidro GF/B (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) pré-tratadas com polietilenoimina 0,3% (PEI). As placas de filtro foram lavadas três vezes com tampão de lavagem (HEPES 10 mM) para remover a radioatividade não ligada. As placas foram então secas ao ar e 50 pL de fluido de cintilação líquida Microscint-20 (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) foram adicionados a cada cavidade. As placas foram então contadas em um contador de cintilação líquida PerkinElmer Topcount (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) . Os dados de ligação foram analisados por análise de regressão não linear com o pacote de software GraphPad Prism Software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando-se o modelo de de 20/09/2018, pág. 106/127

102/112 competição de sítio único. Os valores de Kí para os compostos de teste foram calculados a partir de valores de IC50 observados e o valor de Kb do radioligante, usando-se a equação de Cheng-Prusoff (Cheng Y; Prusoff W. H. Biochemical Pharmacology 22(23):3099-108 (1973)). Os valores de Kí foram convertidos a valores de pKí para determinar a média geométrica e intervalos de 95% de segurança. Esta estatística concisa foi então convertida de volta a valores de Kí para relatoo de dados.

Neste ensaio, um valor de Kí menor indica que o composto de teste possui uma afinidade de ligação maior para o receptor testado. Descobriu-se que compostos exemplares da invenção que foram testados neste ensaio possuem um valor de Kí inferior a cerca de 100 nM para o subtipo M3 do receptor muscarínico neste ensaio. Mais tipicamente descobriu-se que estes compostos possuem valores de Kí inferiores a 50 nM, com alguns compostos possuindo valores de Kí inferiores a cerca de 10 nM ou inferiores a cerca de 1,0 nM.

Ensaio 2

Ensaios de Potência Funcional de Receptor Muscarínico Bloqueio da Inibição Mediada por Agonista do Acúmulo de cAMP

Neste ensaio, a potência funcional de um composto de teste foi determinada medindo-se a capacidade do composto de teste para bloquear a inibição por oxotremorina do acúmulo de cAMP mediado por forscolina em células CHO-Kl expressando o receptor hM2.

Os ensaios de cAMP foram executados em um formato de radioimunoensaio usando-se o Flashplate Adenylyl Cyclase de 20/09/2018, pág. 107/127

103/112

Activation Assay System com ¹²⁵I-cAMP (NEN SMP004B, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA), de acordo com as instruções dos fabricantes.

As células foram rinsadas uma vez com dPBS e suspensas com solução tripsina-EDTA (tripsina 0,05%/EDTA 0,53 mM) conforme descrito no Ensaio 1. As células desprendidas foram lavadas duas vezes por centrifugação a 650 x g pot cinco minutos em 50 mLs de dPBS. A pelota de célula foi então ressuspensa em 10 mL de dPBS, e as células forma contadas com um Coulter Zl Dual Particle Counter (Beckman Coulter, Fullerton, CA) . As células são centrifugadas novamente a 650 x g por 5 minutos e ressuspensas em tampão de estimulação a uma concentração de ensaio de 1,6 x 10⁶ 2,8 x 10⁶ células/mL.

O composto de teste é inicialmente dissolvido a uma concentração de 400 μΜ em tampão de diluição (dPBS suplementado com 1 mg/mL de BSA (0,1%)), e então diluido serialmente com tampão de diluição a concentrações finais variando de 100 μΜ a 0,1 nM. Oxotremorina é diluida de uma maneira similar.

Para medir a inibição da atividade de AC da oxotremorina, 25 pL de forscolina (concentração final de 25 μΜ diluida em dPBS), 25 pL de oxotremorina diluida e 50 pL de células são adicionados às cavidades de ensaio do agonista. Para medir a capacidade de um composto de teste de bloquear a atividade de AC inibida por oxotremorina, 25 pL de forscolina e oxotremorina (concentrações finais de 25 μΜ e 5 μΜ, respectivamente, diluídas em dPBS) , 25 pL do composto de teste diluído e 50 pL de células são adicionados às cavidades de ensaio restantes.

de 20/09/2018, pág. 108/127

104/112

As reações são incubadas por 10 minutos a 37 °C e interrompidas por adição de 100 pL de tampão de detecção gelado. As placas são seladas, incubadas durante a noite à temperatura ambiente e contadas na manhã seguinte em um contador de cintilação liquida PerkinElmer TopCount (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) . A quantidade de cAMP produzida (pmol/cavidade) é calculada com base nas contagens observadas para as amostras e padrões de cAMP, conforme descrito no manual do usuário do fabricante. Os dados são analisados por análise de regressão não linear com o pacote de software GraphPad Prism Software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando-se o modelo de regressão não linear, equação de competição de sitio único. A equação de Cheng-Prusoff é usada para calcular o Kí, usando-se o EC50 da curva de resposta de concentração de oxotremorina e a concentração do ensaio de oxotremorina como o Kd e [L] , respectivamente. Os valores de Kí são convertidos a valores de pKí para determinar a média geométrica e intervalos de 95% de segurança. Estas estatísticas concisas são então convertidas de volta a valores de Kí para relato de dados.

Neste ensaio, um valor de Kí menor indica que o composto de teste possui uma atividade funcional maior no receptor testado. Espera-se que os compostos exemplificados da invenção possuem um valor de Kí inferior a cerca de 100 nM para o bloqueio de inibição por oxotremorina de acúmulo de cAMP mediado por forscolina em células CHO-Kl expressando o receptor hM2.

Bloqueio de Ligação [³⁵S]GTPyS Mediada por Agonista

Em um segundo ensaio funcional, a potência funcional de 20/09/2018, pág. 109/127

105/112 dos compostos de teste pode ser determinada medindo-se a capacidade dos compostos de bloquear a ligação de [³⁵S]GTPyS estimulada por oxotremorina em células CHO-Kl expressando o receptor hM2.

No momento do uso, membranas congeladas são descongeladas e então diluídas em tampão de ensaio com uma concentração de tecido final de 5-10 pg de proteína por cavidade. As membranas são rapidamente homogeneizadas usando-se um disruptor de tecido Polytron PT-2100 e então adicionadas às placas de ensaio.

O valor de EC90 (concentração efetiva para resposta máxima de 90%) para estímulo de ligação de [³⁵S]GTPyS pelo agonista oxotremorina é determinado em cada experimento.

Para determinar a capacidade de um composto de teste em inibir a ligação de [³⁵S]GTPyS estimulada por oxotremorina, o seguinte é adicionado a cada cavidade das placas de 96 cavidades: 25 pL de tampão de ensaio com [³⁵S]GTPyS (0,4 nM) , 25 pL de oxotremorina (EC90) e GDP (3 pM) , 25 pL de composto de teste e 25 pL de membranas de célula CHO expressando o receptor hM2. As placas de ensaio são então incubadas a 37 °C por 60 minutos. As placas de ensaio são filtradas sobre filtros GF/B pré-tratados com 1% de BSA usando-se um coletor de 96 cavidades PerkinElmer. As placas são rinsadas com tampão de lavagem resfriado com gelo por 3 vezes durante 3 segundos e então são secas a ar ou a vácuo. Líquido de cintilação Microscint-20 (50 pL) é

adicionado a	cada cavidade,	e cada placa é	selada e a
radioatividade	contada	em	um contador	TopCounter
(PerkinElmer).	Os dados	são	analisados por	análise de
regressão não	linear com	o	pacote de software GraphPad

de 20/09/2018, pág. 110/127

106/112

Prism Software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando-se o modelo de regressão não linear, equação de competição de sitio único. A equação de Cheng-Prusoff é usada para calcular o Kí, usando-se os valores de IC50 da curva de resposta de concentração para o composto de teste e a concentração de oxotremorina no ensaio como o Ko e [L] , concentração de ligante, respectivamente.

Neste ensaio, um valor de Kí menor indica que o composto de teste possui uma atividade funcional maior no receptor testado. Espera-se que os compostos exemplificados da invenção possuam um valor de Kí inferior a cerca de 100 nM para o bloqueio de estimulação por oxotremorina de ligação de [³⁵S]GTPyS em células CHO-Kl expressando o receptor hM2.

Bloqueio de Liberação de Cálcio Mediada por Agonista através de Ensaios de FLIPR

Os subtipos do receptor muscarinico (receptores Μι, M3 e M5) , que se ligam às proteínas G_q, ativam a rota da fosfolipase C (PLC) na ligação do agonista ao receptor. Como um resultado, a PLC ativada hidrolisa o difosfato de fosfatilinositol (PIP2) a diacilglicerol (DAG) e fosfatidil-1,4,5-trifosfato (IP3) , que por sua vez gera liberação de cálcio a partir de provisões intracelulares, isto é, retículo endoplásmico e sarcoplásmico. O ensaio de FLIPR (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) se beneficia deste aumento em cálcio intracelular pelo uso de um corante sensível à cálcio ((Fluo-4AM, Molecular Probes, Eugene, OR) que fluoresce quando liga-se a cálcio livre. Este evento de fluorescência é medido em tempo real por FLIPR, que detecta a mudança em fluorescência de uma monocamada de células de 20/09/2018, pág. 111/127

107/112 clonadas com Mi e M3 humano, e receptores M5 de chimpanzés. A potência do antagonista pode ser determinada pela capacidade dos antagonistas em inibir os aumentos mediados pelo agonista no cálcio intracelular.

Para os ensaios de estimulação de cálcio de FLIPR, células CHO que expressam de forma estável os receptores hMi, hM3 e CM5 são semeadas em placas de FLIPR de 96 cavidades na noite antes do ensaio ser feito. As células

semeadas	são lavadas	duas vezes	por	Cellwash	(MTX
Labsystems,	Inc.) com tampão FLIPR (10	mm	HEPES, pH =	7,4,
cloreto de	cálcio 2 mM,	probenecida	2,5	mM em HBSS	sem

cálcio e magnésio) para remover o meio de crescimento e deixar 50 pL/cavidade de tampão FLIPR. As células são então incubadas com 50 pL/cavidade de FLUO-4AM 4 pM (uma solução 2X foi feita) por 40 minutos a 37 °C, 5% de dióxido de carbono. Seguindo-se o periodo de incubação do corante, as células são lavadas duas vezes com tampão FLIPR, deixando um volume final de 50 pL/cavidade.

Para se determinar a potência do antagonista, o estimulo dependente de dose de liberação de Ca²⁺ intracelular para oxotremorina é primeiro determinado de forma que a potência do antagonista possa ser posteriormente medida contra o estimulo de oxotremorina a uma concentração de EC90. As células são primeiro incubadas com tampão de diluição de composto por 20 minutos, seguido pela adição de agonista, que é executada por FLIPR. Um valor de EC90 para oxotremorina é gerado de acordo com o método detalhado na medição de FLIPR e a seção de redução de dados abaixo, em conjunto com a fórmula ECf = ((F/100F) ^Λ1/Η) * ECêo . Uma concentração de oxotremorina de 3 x ECf de 20/09/2018, pág. 112/127

108/112 é preparada em placas de estimulação de forma que uma concentração de EC90 de oxotremorina é adicionada a cada cavidade nas placas de ensaio de inibição de antagonista.

Os parâmetros usado para FLIPR são: duração de exposição de 0,4 segundo, força do laser de 0,5 watts, comprimento de onde da excitação de 4 88 nm, e comprimento de onda de emissão de 550 nm. A linha base é determinada medindo-se a mudança na florescência por 10 segundos antes a adição de agonista. Depois da estimulação do agonista, o FLIPR mede continuamente a mudança de fluorescência a cada 0,5 a 1 segundo por 1,5 minuto para capturar a mudança de fluorescência máxima.

A mudança de fluorescência é expressa como fluorescência máxima menos a fluorescência da linha de base para cada cavidade. Os dados brutos são analisados contra o logaritmo da concentração de droga por regressão não linear com GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) usando-se o modelo incluso para resposta de dose sigmoidal. Os valores de Kí do antagonista são determinados por Prism usando-se o valor EC50 de oxotremorina como o Kb e EC90 de oxotremorina para a concentração de ligante de acordo com a equação de Cheng-Prusoff (Cheng & Prusoff, 1973).

Neste ensaio, um valor de Kí menor indica que o composto de teste possui uma atividade funcional maior no receptor testado. Espera-se que os compostos exemplificados da invenção possuam um valor de Kí inferior a cerca de 100 nM para o bloqueio de liberação de cálcio mediada por agonista em células CHO expressando de forma estável o receptor hM3.

Ensaio 3 de 20/09/2018, pág. 113/127

109/112

Ensaio de Einthoven em Rato

Este ensaio in vivo é usado para avaliar os efeitos broncoprotetores dos compostos de teste que exibem atividade de antagonista do receptor muscarínico.

Todos os compostos de teste são diluídos em água estéril e são dosados através da rota de inalação (IH). Os ratos (Sprague-Dawley, macho, 250 g a 350 g) são expostos ao aerossol gerado por Conjunto Nebulizador LC Star e induzidos por uma mistura de gases (5% CO2/95% ar atmosférico) Cada solução de composto de teste é nebulizada pro período de tempo de 10 minutos em uma câmara de dosagem em forma de torta capaz de conter seis ratos. Em momentos pré-determinados após a inalação do composto, o ensaio de Einthoven é executado.

Trinta minutos antes do início da avaliação pulmonar, os animais são anestesiados com inactina (tiobutabarbital, 120 mg/kg IP). A veia jugular é cateterizada com cateteres de polietileno (PE-50) preenchidos com solução salina e utilizados para infusão de MCh. A traquéia é então dissecada e canulada com uma agulha 14G e utilizada para a ventilação do rato durante a avaliação pulmonar. Uma vez que a cirurgia é completada, os ratos são ventilados utilizando-se um conjunto de pistão respiratório a um volume de curso de 1 mL/100 g de massa corpórea, mas não excedendo o volume de 2,5 mL, e a uma taxa de 90 ciclos por minutos.

As mudanças em pressão que ocorrem com cada respiração são medidas. Os valores de base são coletados por pelo menos 2,5 minutos e então os ratos são testados de forma não cumulativa com aumentos incrementais de 2 vezes do de 20/09/2018, pág. 114/127

110/112 croncoconstritor MCh (5, 10, 20, 40 e 80 pg/mL) . O MCh é infundido pro 2,5 minutos de uma bomba de seringa a uma taxa de 2 mL/kg/minuto. Os animais são eutanaziados ao término dos estudos.

Mudanças na pressão de ventilação (cm de H2O) em animais tratados são expressas como percentual de inibição de resposta de MCh relativa a animais de controle. Neste ensaio, um percentual maior de valor de inibição indica que o composto de teste possui um efeito broncoprotetor. Espera-se que compostos exemplares da invenção que são testados neste ensaio a uma dose de 100 pg/mL exibam inibição superior a 35%, espera-se que alguns exibam inibição superior a 70% e, de alguns, espera-se que exibam inibição superior a 90%.

Determinação de ID50 em 1,5 h

Antagonistas muscarínicos padrão foram avaliados no ensaio de Einthoven com ratos 1,5 h após a dose. A ordem de potência (ID50) para os cinco padrões testados foi determinada como sendo: ipratrópio (4.4 pg/mL)> tiotrópio (6 pg/mL)> des-metil-tiotrópio (12 pg/mL) > glicopirrolato (15 pg/mL) > LAS-34237 (24 pg/mL). A potência do composto teste é, de forma similar, determinada em 1,5 h após a dose.

Determinação de ID50 em 6 h e 24 h

Padrões tiotrópio e ipratrópio foram também avaliados 24 h e/ou 6 h após a dose no ensaio de Einthoven com ratos. O ipratrópio (10 e 30 pg/mL) foi cerca de 3 vezes menos potente 6 h após a dose comparado a sua potência em 1,5 h. A perda de atividade observada neste momento (6 h) é consistente com sua duração relativamente curta de ação na clínica. O tiotrópio mostrou um início lento de efeito com de 20/09/2018, pág. 115/127

111/112 pico de broncoproteção sendo atingido 6 h após a dose. Seus valores de potência em 6 h e 24 h não foram significativamente diferentes um do outro e foram cerca de 2 vezes mais potentes em comparação com sua potência em 1,5 h. O inicio da ação do composto de teste, assim como os valores de potência em 6 h e 24 h, são determinados de forma similar.

Ensaio 4

Ensaio Antisialagogo em Rato

Os ratos (Sprague-Dawnley, machos, 250 a 350 g) são dosados, anestesiados e canulados conforme descrito no Ensaio 3. Em momentos determinados e após a cirurgia, os animais são colocados em seu lado dorsal a uma inclinação de 20° com suas cabeças em uma inclinação para baixo. Uma gaze pré-pesada é inserida na boca do animal e o agonista muscarínico pilocarpino (PILO) (3 mg/kg, IV) é administrado. A saliva produzida durante 10 minutos após PILO é medida gravimetricamente determinando-se o peso da gaze antes e depois do PILO. Efeitos antissialagogos são expressos como percentual de inibição de salivação em relação a animais de controle.

Determinação de IDso em 1 h, 6 h e 24 h

O ensaio antissialagogo de rato foi desenvolvido para avaliar a exposição sistêmica e calcular o índice de seletividade pulmonar (LSI) dos compostos de teste. O padrão, tiotrópio, foi avaliado neste modelo em 1, 6 e 24 h após dose. Descobriu-se que tiotrópio é mais potente em inibir salivação induzida por pilocarpino 6 h após a dose. Esta descoberta é consistente com os efeitos do pico observado no ensaio de Einthoven.

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Este modelo é uma versão modificada do procedimento descrito em Rechter, Estimation of anticholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpine-induced salivation Ata Pharmacol Toxicol 24,243-254 (1996). O peso médio de saliva em animais tratados com veículo, em cada momento de pré-tratamento, é calculado e usado para computar o % de inibição de salivação, no momento do prétratamento correspondente, em cada dose.

Espera-se que compostos exemplares da invenção que são testados neste ensaio exibam valores de ID50 inferiores a 100 gg/mL (medidos em 24 horas), com alguns compostos espera-se que exibam um valor de ID50 inferior a 30 gg/mL,

alguns menos	de 20 gg/mL e	alguns	menos de	15 gg/mL.
A relação entre	ID50	antissialagogo	e	ID50
broncoprotetor é usada	para	computar	0	índice	de
seletividade	de pulmão aparente	do composto	de teste.
Geralmente,	os compostos	que	possuem	um	índice	de
seletividade	pulmonar aparente maior que	cerca	de 5	são

preferidos.

Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência aos aspectos específicos ou modalidades desta, deve ser compreendido por aqueles habilitados na técnica que várias mudanças podem ser feitas ou equivalentes podem ser substituídos sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo da invenção. Adicionalmente, à extensão permitida por estatutos e regulamentações de patente aplicáveis, todas as publicações, patentes e pedidos de patente aqui citados estão desta forma incorporados por referencia em sua totalidade à extensão como se cada documento estivesse individualmente aqui incorporado por referência.

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Claims (5)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto caracterizado pelo fato de possuir a fórmula:

   N—alquileno de Ci-3-Q (Hb).

   em que Q é ciclohexil, cicloheptil, fenil, benzodioxolil, benzofuranil, benzotiofenil, furanil, indolil, pirazolil, piridinil, tiazolil ou tiofenil; Q é opcionalmente substituído com 1 a 2 grupos R⁸ independentemente selecionados a partir de halo, alquil de Ci-4-, alquileno de C0-4-OH, ciano, -C (O) O-alquil de C1-4, -0alquil de C1-4, -S-alquil de C1-4 e -CONH2; e os grupos alquil em R⁸ são opcionalmente substituídos com 1 a 5 átomos de flúor ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
2. 2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Q é furanil ou tiofenil.
3. 3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir de:
4. 4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-N-furan2-ilmetilpiperazina-l-carboxamidina; e

   4-( (R)-2-ciclopentil-2-hidroxi-2-fenilacetil)-Ntiofen-2-ilmetilpiperazina-l-carboxamidina.

   4. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender qualquer um dos compostos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

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5. 5. Uso de um das reivindicações para a produção de composto como definido em qualquer de 1 a 3, caracterizado pelo fato de um medicamento.

   uma ser

   Petição 870180132510, de 20/09/2018, pág. 119/127