BRPI0717134A2

BRPI0717134A2 - Derivados de pirazol [1,5-a] pirimidina e seu uso de terapêutico

Info

Publication number: BRPI0717134A2
Application number: BRPI0717134-0A
Authority: BR
Inventors: Peter Buehlmayer; Werner Breitenstein; Pascal Furet; Bernard Pirard; Matt Anette Von; Thomas Zoller
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2006-09-28
Filing date: 2007-09-26
Publication date: 2013-10-15
Also published as: RU2009115784A; MX2009002995A; KR20090073120A; AU2007302245A1; US20100029636A1; JP2010504927A; CN101516888A; EP2074127A1; WO2008037459A1; CA2664375A1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE PIRAZOLO [1,5-A] PIRIMIDINA E SEU USO TERAPÊUTICO".

A presente invenção refere-se aos derivados de pirazolo- pirimidina, ao processo para sua produção, seus usos e composições farma- cêuticas que os contêm.

Mais particularmente, a invenção provê um composto da fórmula

I

em que

cada um de Ri e R2, independentemente, é Η; OH; NH2; NO2; C1^alquila; Ci- 4alcóxi; aril-C^alcóxi; NR11SO2Ri2; NR13COR14; NR15COOR16; ou NR17CONR18Rig; desde que pelo menos um de R1 e R2Seja diferente de H; R3 é H; halogênio; C1^alquila; ou C1^alcoxi;

R4 é H; opcionalmente C1^alquila substituída; ou Ci_4alcóxi opcionalmente substituído por NH2, NH(C1^aIquiIa) ou N(C1^aIquiIa)2; cada um de R5a, Rsb e R6, independentemente, é H; OH; ORc em que Rc é Ci^alquila; ou um resíduo de fórmula (a)

-(CH2)-N X (a)

desde que pelo menos um de R5a, Rsb e R6 seja diferente de H; R11 é H; ou opcionalmente Ci^alquila substituída;

R12 é C1-Salquila; C3.8cicloalquila; opcionalmente arila substituída ou aril-Ci_ 4alquila; heterociclila; opcionalmente heteroarila substituída ou Iieteroaril-C1. 4alquila;

R13 é H; ou opcionalmente C1^alquila substituída;

R14 é opcionalmente C1-Salquila substituída; opcionalmente C3.8cicloalquila substituída; opcionalmente arila substituída ou aril-C^alquila; ou opcional- mente heteroarila substituída ou heteroaril-Ci-4alquila; R15 é H; ou Ci_4alquita;

Ri6 é opcionalmente Ci.8alquila substituída; C3-6alquenila; C3^alquinila; C3.8cicloalquila opcionalmente substituída; arila ou aril-C^alquila opcional- mente substituída; ou heteroaril-Ci-4 alquila opcionalmente substituída; cada um de Ri7 e Ri8, independentemente, é H; ou C1^alquila; Ri9 é Ci.8alquila opcionalmente substituída por halogênio ou ciano; C3. scicloalquila; arila ou aril-Ci-4alquila, cada anel opcionalmente substituído por halogênio, halo-C^alquila, ha Io-C ^alcoxi e/ou heterociclila; ou opcional- mente heteroarila ou heterociclila substituída;

ou Ri8 e R19 formam junto com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão li- gados um resíduo de heterociclila opcionalmente substituído; η é 0 ou 1;

X é CR 20R21 em que cada um de R2O e R21, independentemente, é H ou Ci- 4alquila; O; ou N-R22

em que R22 é H; opcionalmente C1^alquila substituída; opcionalmente aril- Ci-4alquila substituída; opcionalmente heteroaril-Ci.4alquila substituída; op- cionalmente heterociclila substituída; SO2-Ci^aIquiIa; CO-R23- em que R23 é Ci_4alquila opcionalmente substituída por halogênio, heterociclila, heteroarila, amino e/ou COOH, ou R23 é opcionalmente arila substituída, heteroarila ou heterociclila; ou CO-CHR24-NR25R26 em que R24 é H, C1-Salquila opcional- mente substituída por OH, NH2, NH(C1^aIquiIa), N(C1^aIquiIa)2, COOH, car- bamoíla, CONH(C1^aIquiIa), CON(C1^aIquiIa)2 ou opcionalmente arila ou heteroarila substituída, R25 é H ou Ci_4alquila, e R26 é H, C1^alquila, C1. 4alcóxi-carbonila ou aril-C^alcoxicarbonila em que a arila pode ser opcio- nalmente substituída, desde que

i. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NCH3 e η é O, depois ou R2 é diferente de NH-SO2-CH3 ou NH-S02-4- fluoro-fenila ou R1 é diferente de NH-S02-2,3-dicloro-fenila ou R3 ou R4 é diferente de H; ii. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NCH3 e η é 0, depois ou R2 é diferente de NH-CO-CH3 ou R3 ou R4 é diferente de H;

In. quando ou R5a, Rsb ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é 0, depois ou R2 é diferente de NH-COOCi.2alquila ou R3 ou R4 é diferente de H;

iv. quando ou R5a, R5b ou R5 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é 0, depois ou Ri é diferente de -NH-CO-NH-(3-CF3-4- morfolino-fenila) ou R2 é diferente de NH-CO-NH-(3-CF3-fenila) ou R3 ou R4

é diferente de H;

v. quando um de Ri e R2 é OH1 e o outro é H1 R4 é H e somente um de R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) e o restante sendo cada um H, depois o resíduo de fórmula (a) é diferente de 4-metil-piperazinila;

vi. quando um de Ri e R2 é OH1 o outro é H e somente um de

R5a, R5b ou R6 é uma 4-metil-piperazinila, o restante sendo cada um H, de- pois R4 é opcionalmente Ci^alquila substituída; e

vii. quando R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é 0, e Ri é H, depois R2 é diferente de NH2 ou R3 ou R4 é diferente de H;

ou um sal do mesmo.

Qualquer alquila pode ser linear ou ramificada. Arila pode ser fenila ou naftila, preferivelmente fenila. Aril-Ci^alquila pode ser, por exem- plo, benzila ou fenetila, preferivelmente benzila. Aril-Ci^alcóxi pode ser, por exemplo, benzilóxi.

O halogênio pode ser F, Cl ou Br. Halo-Ci.4alquila ou halo-Ci.

4alcóxi pode ser C1^alquila ou Ci_4alcóxi substituído por um ou mais halogê- nios, por exemplo, CF3 ou OCF3.

Heteroarila pode ser um sistema aromático mono- ou bicíclico compreendendo de 1 a 3 heteroátomos selecionado de N, O e S, por exem- pio furila, tienila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila, triazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, indolila, benzotienila, benzofurila, benzimidazolila, benzotiazolila ou indazolila. Heterociclila é um anel heterocíclico não-aromático de 5, 6 ou 7 elementos que pode ser ligado através de C ou N. Os exemplos são por e- xemplo pirrolidinila, morfolinila, piperazinila ou piperidila. Heterocielila pode ser substituída por, por exemplo, C1^alquila em um átomo de anel C e/ou N, quando R4 é C1^alquila substituída, ele pode ser C1^alquila

substituída por halogênio, ciano, Ci.4alcóxi, amino, C1^alquilamino ou di-(Ci_ 4alquila)-amino, e opcionalmente interrompido por -NH-. Preferivelmente o substituinte, quando presente, é ligado a um átomo de carbono de terminal.

Quando R11 ou R13 é alquila opcionalmente substituída, ele pode ser substituído, por exemplo, por NH2, C1^alquilamino ou di-(C1. 4alquila)amino.

Quando R12 é arila, aril-C^alquila, heteroarila ou Iieteroaril-C1. 4alquila substituída, o anel de arila ou heteroarila pode ser substituído por um ou mais substituintes selecionados de halogênio, CN, C1^alquila, halo- C1^alquila, C1^alcoxi, halo-C^alcóxi, amino e heteroarila. Preferivelmente a arila ou heteroarila, quando substituída, tem um ou dois substituintes como indicado acima.

Quando R14 é opcionalmente C1-Salquila ou C3.8cicloalquila subs- tituída, ele pode ser substituído por exemplo por halogênio, ciano ou C1. 4alcóxi. Preferivelmente para o grupo alquila o substituinte é ligado a um á- tomo de carbono de terminal. Quando R14 é C3-8cicloalquila, arila, aril-C^ 4alquila, heteroarila ou heteroaril-C^alquila substituída, ele pode ser substi- tuído por um ou mais substituintes selecionados de por exemplo halogênio, C1^alquila e halo-C^alquila. Quando R14 é heteroarila ou Iieteroaril-C1. 4alquila substituída, o substituinte pode ser ligado a um átomo de anel de C e/ou N da heteroarila; no último caso, ele é preferivelmente C1^alquila. Hete- roarila ou heteroaril-C^alquila substituída pode ser mono- ou dissubstituída.

Quando R^ é C1-Salquila substituída, ele pode ser substituído por exemplo por halogênio, ciano ou C1^alcoxi. Preferivelmente o substituin- te é ligado a um átomo de carbono terminal. Quando R16 é arila, aril-C^ 4alquila ou heteroaril-Ci^alquila substituída, ele pode ser substituído por um ou mais substituintes selecionados, por exemplo, de halogênio, Iialo-C1- 4alquila e C1^alquila.

Quando Ri9 é heteroarila substituída, o substituinte pode ser li- gado a um átomo de anel de C e/ou N da heteroarila, e pode ser, por exem- plo, halogênio, halo-C^alquila ou Ci^alquila.

Quando R22 é opcionalmente C^alquila substituída, ele pode

ser substituído por OH ou Ci.4alcóxi, preferivelmente no terminal C. Quando R22 é opcionalmente heterociclila substituído, ele pode ser substituído por exemplo por C1^alquila, em um átomo de C ou de N, por exemplo piperidini- Ia opcionalmente N-substituída por CH3. Quando R22 é opcionalmente hete- roaril-Ci_4alquila substituída, ele pode ser anel substituído por C1^alquila, por exemplo metila.

Quando R23 é C1^alquila substituída por heterociclila, ele pode ser substituído no terminal de átomo C, por exemplo -CH2-heterociclila. Quando R23 é opcionalmente arila substituída, ele pode ser substituído por exemplo por OH, amino,C1^alquil- amino, di-( C^alquilaJ-amino ou amino substituído por arilóxi-carbonila ou arilC.4alcóxi-carbonila. Opcionalmente heterorila substituída como R23 pode ser heteroarila opcionalmente substitu- ída por C1^alquila. Opcionalmente heterociclila substituído como R23 pode ser heterociclila com um átomo de anel N opcionalmente substituído por ari- lóxi-carbonila ou arilC^alcóxi-carbonila.

Quando R24 é C1^alquila substituída, ele pode ser por exemplo mono-substituído, preferivelmente no átomo do terminal C. Quando R24 é C1. 4alquila substituída por arila ou heteroarila, tal arila pode opcionalmente ser substituída, por exemplo, por OH e tal heteroarila pode opcionalmente ser substituída, por exemplo, por C1^alquila.

Quando R26 é aril-C.4alcóxi-carbonila, arila pode opcionalmente ser substituída, por exemplo, por OH.

Compostos preferidos de fórmula I são aqueles em que Ri ou R2, preferivelmente Ri , é NHCOORi6, em que Ri6 é C3.8alquila, por exemplo C4.6alquila, ou opcionalmente fenila ou fenila-C^alquila substituída.

Para os compostos da fórmula I os significados a seguir são pre- feridos independentemente, coletivamente ou em qualquer combinação ou subcombinação:

(i) cada um de R5a, R5b e R6l independentemente, é Η; OH; ou um resíduo de fórmula (a), em que o dito resíduo de fórmula (a) é como defi- nido aqui acima, desde que pelo menos um de R5a, R5b e R6 seja diferente

de H;

(ii) cada um de R5a, R5b e R6, independentemente, é H; ou um resíduo de fórmula (a), em que o dito resíduo de fórmula (a) é como definido aqui acima, desde que pelo menos um de R5a, R5b e R6Seja diferente de H;

(iii) R2 é H, OH, C1^alquila, ou C1^alcoxi; preferivelmente H, OH ou C1^alcoxi;

(iv) R1 é NR11SO2Ri2; NR13COR14; NR15COOR16; ou NR17CONR18R1Q em que as variáveis R11 a R19 têm os significados providos acima;

(v) R1 é preferivelmente NHCOOR16, em que R16 é C3.8alquila, por exemplo C4-6alquila, ou opcionalmente fenila ou fenila-C^alquila substi- tuída.

Os compostos da fórmula I podem existir em forma livre ou em forma de sal, por exemplo sais de adição com, por exemplo, ácidos orgâni- cos ou inorgânicos, por exemplo trifluoroacético ou ácido clorídrico. Quando os compostos da fórmula I têm centros assimétricos na

molécula, por exemplo quando R22 é CO-CHR24-NR25R26 em que R24 é dife- rente de H, vários isômeros ópticos são obtidos. A presente invenção tam- bém abrange enantiômeros, racematos, diastereoisômeros e misturas dos mesmos. Além disso, quando os compostos da fórmula I incluem isômeros geométricos, a presente invenção abrange compostos-cis, compostos-trans e misturas dos mesmos. Considerações similares aplicam-se em relação aos materiais de partida que exigem átomos de carbono assimétricos ou ligações não-saturadas como mencionado acima.

A presente invenção também provê um processo para a produ- ção de um composto da fórmula I, compreendendo a) reação de um composto da fórmula Il RJ H1N em que R5a, R5b e R6 são como definido acima, com um composto da fórmula Ill

Ill

em que de Ri a R4 são como definido acima e Rv é por exemplo OH ou ami- no substituído, por exemplo N(CH3)2; ou

b) conversão de um composto da fórmula I em outro composto

da fórmula I

e recuperação do composto da fórmula I resultante em forma livre ou em forma de um sal, e, quando requerido, converter o composto da fórmula I obtido em forma livre na forma de sal desejada, ou vice versa.

As etapas do processo a) e b) podem ser desempenhadas de acordo com os métodos conhecidos na técnica, ou como descrito abaixo nos exemplos.

exemplos de conversão de um composto da fórmula I em outro composto da fórmula I podem incluir por exemplo

i) para a produção de um composto da fórmula I em que Ri ou R2 é ami- no que reduz um composto da fórmula I em que Ri ou R2 é NO2, por exemplo por hidrogenação.

ii) para a produção de um composto da fórmula I, em que Ri ou R2 é NRi1SO2R12, NRi3COR14, NR15COOR16, ou NR17CONR18R19 , reagir um composto da fórmula I em que R1 ou R2 é amino, com um agente de acilação apropriado. A reação pode ser realizada de acordo com os métodos conhecidos na técnica ou, por exemplo, como descrito nos exemplos.

jjj) para a produção de um composto da fórmula I que compreende um resíduo de fórmula (a) em que R22 é CO-R23 ou CO-CHR24-NR25R2C, reagir um composto da fórmula I em que R22 é H com um agente de a- cilação apropriado. A reação pode ser realizada de acordo com os mé- todos conhecidos na técnica ou, por exemplo, como descrio nos exem- plos.

Os compostos da fórmula II, usados como materiais de partida, podem ser produzidos, por exemplo, como descrito nos esquemas de reação

a seguir:

NaOMe1 EtOH Tolueno

HCOOEt

G H2NNH2-H2O

AcOH

10

em que R5a, Rsb e R6 são como definido acima.

Os compostos da fórmula III, usados como materiais de partida, podem ser produzidos, por exemplo, como descrito no esquema de reação a seguir:

rtMo

^r1

OMe vxN^OMe

Ill

R3

Tolueno

R, R,

R4COCl, Plridina

R4COOMe, NaOMe

R3

R4 = H

R2 Ill

R4

Ri a R4 sendo como definido acima.

Até o ponto em que a produção dos materiais de partida não é particularmente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser prepa- rados analogamente aos métodos conhecidos na técnica ou como descrito nos exemplos daqui em diante.

Os exemplos a seguir ilustram a invenção sem qualquer limita- ção.

Exemplo 1: 3-[4-(4-Metil-piperazin-1-ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5- a] pirimidin-7-ilamina A) [4-(4-Metil-piperazin-1 -ila)-fenila]-acetonitrila

Ί

N

Sob uma atmosfera de argônio 4-bromofenila acetonitrila (9,04g a 46,1 mM), N-metil-piperazina (5,55g a 55,4 mM), e (2-bifenila)di-/- butilfosfina (2,08g a 6,97 mM) são dissolvidos em 1,2-dimetoxietano (77 ml). Acetato de paládio (II) (543 mg a 2,42 mM) e potassiofosfato (13,9g a 65,6 mM) são adicionados e a mistura da reação agitada a 90°C por 23 horas. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, água e acetato de etila são adicionados, as camadas são separadas e a camada aquosa é extraída di- versas vezes com acetato de etila. As fases orgânicas combinadas são Ia- vadas com salmoura, e secas sobre Na2SO4. O solvente é removido in vá- cuo e o resíduo é purificada por cromatografia (etilacetato/etanol/amônia = 95 : 9.5 : 0,5) para dar o produto desejado como um pó marrom, M+H+ = 216.

B) 3-Hidróxi-2-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-acrilonitrila

N

Sódio (597 mg a 26,0 mM) é dissolvido em etanol (34 ml), [4-(4- metil-piperazin-1-ila)-fenila]-acetonitrila (3,73g a 17,3 mM) e formato de etila (1,92g a 26,0 mM) são adicionados e a mistura de reação agitada a 75°C por 1,5 hora. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, dietil éter é adicio- nado e o produto é isolado por filtragem como um pó marrom, M+H+ = 244.

C) 4-[4-(4-Metil-piperazin-1 -ila)-fenila]-2H-pirazolo-3-ilamina

H1JVH

IlN

Para uma solução de [4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-

acetonitrila (3,65g a 13,8 mM) um mono-hidrato de hidrazina de ácido acéti- co (53 ml) (1,72g a 34,4 mM) é adicionado. A mistura da reação é agitada a 125°C por 1,5 hora, resfriada até a temperatura ambiente, água (103 ml) e HCI fumado (10,7 ml) são adicionados e a mistura agitada a 1100C por 1 hora. A mistura de reação é resfriada até 0°C, a amônia concentrada (80 ml) é adicionada e o produto extraído diversas vezes com CH2CfeZMeOH = 9:1. As camadas orgânicas combinads são secas sobre ^SO4 e o solvente é removido in vácuo para dar o produto como um pó marrom, M+H+ = 258. D) 3-Dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)-acrilonitrila

do a uma solução de 4-nitrofenila acetonitrila (2,50g a 15,4 mM) em tolueno (50 ml) e agitada a 120°C por 1,5 hora. Depois de resfriar até a temperatura ambiente é adicionado hexano, a mistura de reação agitada por 10 minutos. O precipitado é coletado por filtragem, lavado com hexano e seco in vácuo para dar o produto como cristais verdes, M+H+ = 218. E) 3-[4-(4-Metil-piperazin-1-ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a] pirími- din-7-ilamina

4-[4-(4-Metil-piperazin-1-ila)-fenila]-2H-pirazolo-3-ilamina (1,50g a 5,83 mM) e 3-dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)-acrilonitrila (1,27g a 5,83 mM) em ácido acético e (11,3 ml) e HCI a 1,25 M em etanol (11,3 ml) são agitados a 120°C por 26 horas. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, metanol (40 ml) é adicionado e a mistura de reação agitada por 20 minutos. O precipitado é coletado por filtragem, lavado com metanol e seco in vácuo para render o produto com cristais vermelhos, M+H+ = 430.

Através do procedimento acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos a seguir podem ser preparados: Exemplo 2:

Dimetilacetal de dimetilformamida (6,67g a 30,8 mM) é adiciona-

M+H+= 461 Exemplo 3:

M+H+ = 461

Exemplo_4: 6-(4-Amino-fenila)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-

O composto do exemplo 1 (1,00g a 2,33 mM) é dissolvido em

metanol/THF = 3:2 (750 ml), paládio sobre 10% de carbono (0,28 g, 10%) é adicionado e a mistura de reação hidrogenada à temperatura ambiente por 18 horas. A mistura de reação é filtrada sobre celite e o solvente é removido do filtrado in vácuo. Dietileter é adicionado ao resíduo, e o produto é isolado por filtragem, lavado com éter e seco para produir o produto desejado como cristais marrons, M+H+ = 400.

Seguindo o procedimento dos exemplos acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos a seguir podem ser prepara- dos:

Exemplo 5:

M+H+ = 431 Exemplo 6: M+H+ = 431 Exemplo 7:

M+H+ = 431 Exemplo 8:

M+H+= 417 Exemplo 9:

O

λ—N \

M+H+ = 401

Exemplo 10: isobutil éster de ácido (4-{7-Amino-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]-pirazolo[1,5-a] pirimidin-6-il}-fenila)-carbâmico

Para uma solução do composto do exemplo 4 (115 mg a 0,29 mM) em piridina/CH2CI2 = 1:1 (2 ml) isobutil cloroformato (48 mg a 0,35 mM) é adicionado e a mistura de reação agitada à temperatura ambiente por 1 hora. Isobutil cloroformato (48 mg a 0,35 mM) é adicionado novamente, a mistura de reação agitada a 60°C por 1 hora, isobutil cloroformato (48 mg, 0,35 mM) é adicionado por uma terceira vez e a mistura de reação agitada a 60°C por 30 minutos. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, acetato de etila e solução de NaHCO3 saturado são adicionados e as camadas são separadas. A fase aquosa é extraída diversas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e o solvente é removido in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (H2O com 0,1% de TFA1 100%, 3 minutos; para H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 22 minutos inerte; H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 5 minutos) para dar o produto desejado como cristais amarelos, MH+ = 501.

Seguindo o procedimento dos exemplos acima mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula Xi podem ser preparados

Xi

em que R, Ri e R2 têm os significados como indicado na tabela 1 abaixo.

Tabela 1 Exemplo R Ri R2 M+H+ 11 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) p-tolila H 535 12 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) butila H 501 13 3-(4-metil-piperazin-1-ila) pentila H 515 14 4-(4-metil-piperazin-1-ila) pentila H 515 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) butila H 501 16 4-(4-metil-piperazin-1-ila) benzila H 535 17 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) hexila H 529 18 4-(4-metil-piperazin-1-ila) ^-fluoro-fenila H 535 19 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) p-tolila H 535 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,4-xilila H 549 21 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-fluoro-fenila H 539 22 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) isobutila H 501 23 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-cloro-fenila H 554/556 24 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-propil-fenila H 563 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) fenila H 521 Exemplo R 26 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 27 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 28 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 29 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 31 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 32 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 33 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 34 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 36 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 37 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 38 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 39 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 40 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 41 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 42 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 43 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 44 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 45 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 46 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 47 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 48 4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

49 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

50 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

51 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

52 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

53 4-morfolino

54 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

55 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

56 4-morfolino

57 4-morfolino

Ri R2 M+H^ 2,4-xilüa H 549 fenila H 521 propila H 487 butina-3-il H 497 benzila H 535 2-cloro-benzila H 568/57 2-cloro-benzila H 568/57 isobutila H 501 propila H 487 butina-2-ila H 497 naftila H 571 2-metóxi-etila H 503 2,2-dimetil- propila H 515 isopropila H 487 isopropila H 487 naftila H 571 butina-3-ila H 497 etila H 473 2,2-dimetil- propila H 515 etila OCH3 503 2-etil-hexila H 557 isobutila OCH3 531 metila H 459 2-etil-hexila H 557 b ut ila H 503 metila H 459 4-cloro-fenila H 554/556 propila H 474 propina-2-ila H 483 propina-2-ila H 483 Isobutila H 488 etila H 460 Exemplo R Ri R2 M+H+ 58 3-morfolino etila H 460 59 3-morfolino propila H 474 60 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-cloro-fenila H 554/556 61 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-cloro-fenila H 554/556 62 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) isobutila OCH; 3 531 63 3-morfolino isobutila H 488 64 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-trifluoro-metil- fenila H 589 65 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,3-dimetilfenila H 549 66 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclo-hexila H 527 67 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclo-hexila H 527 68 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) cis-2-metil-ciclo- hexila H 541 69 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) cis-2-metil-ciclo- hexila H 541 70 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1-ciclo-hexil- etila H 555 71 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1-ciclo-hexil-etil H 555 72 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) butina-2-ila H 497 73 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) hexila H 529 74 4-(4-metil-piperazin-1-ila) trans-2-metil- ciclo-hexila H 541 75 3-(4-metil-piperazin-1-ila) trans-2-metil- ciclo-hexila H 541 76 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-butila H 515 77 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etilfenila H 549 78 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etilfenila H 549 7P 4-M-metil-piperazin-1-ila) 4-terc-butilfenila H 577 80 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) m-tolila H 535 81 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,3-dimetilfenila H 549 82 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-isopropilfenila H 563 83 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-isopropilfenila H 563 84 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-sec-butilfenila H 577 85 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-sec-butilfenila H 577 86 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) o-tolila H 535 Exemplo R Ri R2 M 87 3-(4-metil-piperazin-1-ila) o-tolila H 535 88 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-metilpentila H 529 89 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-metilpentila H 529 90 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclo-hexil- metila H 541 91 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclo-hexil- metila H 541 92 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-pentila H 529 93 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-pentila H 529 94 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,3-dimetilbutila H 529 95 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,3-dimetilbutila H 529 96 3-(4-metil-piperazin-1-ila) m-tolila H 535 97 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-tert-butilfenila H 577 98 4-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclopentil- metila H 527 99 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1-ciclopentil- etila H 541 100 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclopentil- metila H 527

101 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) trans-2-metil- ciclopentila H 527 102 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) trans-2-metil- ciilopentila H 527 103 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-tert-butil-ciclo- hexila H 583 104 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-terc-butil- ciclo-hexila H 583 105 4-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclobutil-metila H 513 106 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclopentila H 513 107 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclopropil- metila H 499 108 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclopropil- metila H 499 109 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclobutil-metila H 513 110 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etil-ciclo- hexila H 555 Exemplo

R

Ri

R2

M+H+

111 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-etil-ciclo- hexila H 555 112 4-(4-metil-piperazin-1-ila) cis-4-metil-ciclo- hexila H 541 113 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) cis-4-metil-ciclo- hexila H 541 114 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1-ciclopentil- etila H 541 115 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) Ciclopentila H 513 116 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-butila H 515 117 4-(4-metil-piperazin-1-ila) trans-4-metil- ciclo-hexila H 541 118 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) trans-4-metil- ciclo-hexila H 541 119 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,6-dimetil- ciclo-hexila H 555 120 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,6-dimetil- ciclo-hexila H 555

Exemplo 121: 1-(4-{7-Amino-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5- a] pirimidin-6-il}-fenila)-3-(2-cloro-fenila)-uréia

.N NH,

Uma suspensão de 6-(4-amino-fenila)-3-[4-(4-metil-piperazin-1- ila)-fenila]-pirazolo [1,5-a] pirimidin-7-ilamina (exemplo 4, 115 mg a 0,29 mM) em N-metil-pirrolidina (1,7 ml) é resfriada até O0C e 4-nitrofenilcloroformato (68 mg a 0,34 mM) é adicionado. A mistura de reação é agitada a 5°C poi 3,5 horas, depois 2-cloroanilina (89 mg a 0,70 mM) é adicionada e a mistura de reação é agitada a 120°C por 3 horas. Depois de resfriar até a temperatu- ra ambiente, acetato de etila e solução de NaHCOa saturado são adiciona- dos e as camadas são separadas. A fase aquosa é extraída diversas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre NaaSO4, e o solvente é removido in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (H2O com 0,1% de TFA, 100%, 3 minutos; para H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 22 minutos inerte; H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 5 minutos) para dar o produto desejado como cristais amarelos, M+H+ = 553, 555.

Seguindo o procedimento dos exemplos acima mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X2 podem ser preparados

NH-CO-NHRi

em que R e R1 têm os significados como indicado na tabela 2 abaixo. Tabela 2

Exemplo R

122 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

123 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

124 3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

125 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

126 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

127 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

128 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

129 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

130 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

131 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

132 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

133 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

134 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

135 3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

136 4-(4-metil-piperazin-1-ila)

137 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

138 3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

Ri

ciclo-hexila

2-cloro-fenila

2,3-dicloro-fenila

2-cloro-fenila

p-tolila

4-fluoro-fenila

etila

ciclopentila

2-metilciclo-hexila

(R)-l-ciclo-hexil- etiia

(R)-l-ciclo-hexil- etila

ciclo-hexilmetila

(S)-l-ciclo-hexil- etila

4-n-propil-fenila

M+H+ 526

553/555

587/589

553/555

534

538

472

512

540

55*

554

540 540

554

562 Exemplo R R1 M+H+

139 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-n-propil-fenila 562

140 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etilfenila 548

141 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-metilciclo-hexila 540

142 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-etoxifenila 564

143 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-i-propil-fenila 562

144 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-i-propil-fenila 562

145 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3,4-dimetilfenila 548

146 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3,4-dimetilfenila 548

147 4-(4-metil-piperazin-1-ila) ^M-ciclo-hexil- 554

148 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etilfenila 548

149 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-etoxifenila 564

150 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ^3ϋ°Γ0ΓΤ1θίίΙ" 588

151 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ^u0f0metil" 588

4-

152 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) .. ... . . 563

' dimetilaminofenila

153 3-(4-metil-piperazin-1-ila) Ir ... . f ., 563

' dimetilaminofenila

154 3-(4-metil-piperazin-1-ila) fe^/"0'"'1''1' 603

155 4-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-1-indan-1-ila 560

156 3-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-1-indan-1-ila 560

157 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-metoxifenila 550

158 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-metoxifenila 550

159 4-(4-metil-piperazin-1-ila) (S)-1-indan-1-ila 560

160 4-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-l-fenil-etila 548

161 3-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-l-fenil-etila 548

162 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) (R)-l-p-tolila-etila 562

163 3-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-l-p-tolila-etil 562

(R)-1-(1,2,3,4-

164 4-(4-metil-piperazin-1-ila) tetra-hidro- 574

naftalen-1-ila Exemplo

R

165

166

167

168

169

170

171

172

173

174

175

176

177

178

179

180 181

182

183

184

185

186

187

188 189

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila)

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila)

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila)

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

4-(4-metil-piperazin-1-ila)

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-(4-metil-piperazin-1-ila)

Ri

(R)-1-(1,2,3,4- tetra-hidro- naftalen-1-ila

(S)-l-fenil-etila

(S)-1-(1,2,3,4- tetra-hidro- naftalen-1-ila

ciclopropilmetila

(S)-l-fenila-etila

(S)-1 -p-tolila-etila

2,2,6,6-tetrametil- piperidin-4-ila

3-morfolin-4-il- propila

ciclopropilmetila

3-morfolin-4-il- propila

ciclopentilmetila

(S)-l-metil-hexila

2-ciclo-hex-1-enil- etila

ciclo-heptila

Ciclo-heptila

ciclopentilmetila

Ciclopentilmetila

n-pentila

M+I-T

574 548 574

574

498 548 562 562

583

571

498

571

526 526 542 542

552

540 540 554 554 514 514 Exemplo R R1 M+H+

190 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclopentiletila 540 191 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-ciclopentiletila 540 192 4-(4-metil-piperazin-1-ila) n-hexila 528 193 3-(4-metil-piperazin-1-ila) n-hexila 528 194 4-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-l-metil-hexila 542 195 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) (R)-l-metil-hexila 542 196 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-ciclo-hexil-etila 554 197 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-ciclo-hexil-etila 554 198 3-(4-metil-piperazin-1-ila) (R)-indan-l-ila 560

Usando o mesmo procedimento quanto para o exemplo 121, mas usando os materiais de partida apropriados, possível obter os compos-

em que R, e NR1R2 têm os significados como indicado abaixo.

Exemplo R NR1R2 MH+ 199 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) piperidina 512 200 3-(4-metil-piperazin-1-ila) piperidina 512 201 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -metil-1 -p-tolila-amina 548 202 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1 -metil-1 -p-tolila-amina 548 203 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 1 -ciclo-hexil-1 -metil- amina 540 204 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1-ciclo-hexil-1-metil- amina 540

exemplo 205: N-(4-{7-Amino-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -ila)-fenila]-pirazolo[1,5- a] pirimidin-6-il}-fenila)-butiramida Para uma suspensão de 6-(4-amino-fenila)-3-[4-(4-metil- piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo [1,5-a] pirimidin-7-ilamina (exemplo 4, 112 mg a 0,28 mM) em piridina/CH2CI2 (1:1, 2 ml) cloreto de buturila (37 mg a 0,35 mM) é adicionado à temperatura ambiente e agitado por 1 hora. O cloreto de buturila (37 mg, 0,35 mM) é adicionado novamente e a mistura de reação agitada por mais 1 hora à temperatura ambiente. Acetato de etila e solução de NaHCOa saturada são adicionados e as camadas são separadas. A fase aquosa é extraída diversas vezes com acetato de etila. As camadas orgâni- cas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e o sol- vente é removido in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (H2O com 0,1% de TFA, 100%, 3 minutos; para H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 22 minutos inerte; H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 1:9, 5 minutos) para dar o produto desejado como cristais amarelos, M+H+ = 471.

Seguindo o procedimento dos exemplos acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X3 podem ser preparados

X3

em que R, Ri e R2 têm os significados como indicado na tabela 3 abaixo.

Tabela 3

Exemplo R R1 R2 M+H+ 206 3-(4-metil-piperazin-1-ila) benzila H 519 207 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) benzila H 519 208 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -metil-indol-2-ila OCH3 588 209 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1 -metil-indol-2-ila H 558 210 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-trifluoro-metil-fenila H 573 Exemple 3 R Ri R2 M+H+ 211 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-tienila H 511 212 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-cloro-fenila H 538/54 0 213 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -metil-indol-2-ila OCH3 588 214 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-tienila H 511 215 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-cloro-fenila H 538/54 0 216 3-(4-metil-piperazin-1-ila) propila H 471 217 4-(4-metil-piperazin-1-ila) propila H 471 218 4-(4-metil-piperazin-1-ila) fenila H 505 219 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-furila H 495 220 3-(4-metil-piperazin-1-ila; 2,3-dicloro-fenila H 572/57 4 221 3-(4-metil-piperazin-1-ila; 3-piridila H 506 222 3-(4-metil-piperazin-1-ila; 2-trifluoro-metil-fenila H 573 223 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,3-xilila H 533 224 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) isobutila H 485 225 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,3-xilila H 533 226 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-tolila H 519 227 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -metil-indol-2-ila H 558 228 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-metoxibenzila H 549 229 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3,4-dimetoxibenzila 579 230 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-metoxibenzila 549 231 í-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-metoxibenzila 549 232 l-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-metoxibenzila 549 233 ' H4-metil-piperazin-1-ila) 3,4-dimetoxibenzila 579 234 ; 5-(4-metil-piperazin-1-ila) ^ Mrifluoro-metil-fenila H 573 235 A Í-^-metil-piperazin-l-ila) ^ l-trifluoro-metil-fenila H í 573 236 4 k^-metil-piperazin-l-ila) í !-feniletila l· H f 533 237 3 -(4-metil-piperazin-1-ila) 2 !-feniletila F H í 533 238 3 -(4-metil-piperazin-1-ila) 2 ,5-dimetoxibenzila h H £ >79 239 4 -(4-metil-piperazin-1-ila) 2 ,5-dimetoxibenzila h ^ 5 >79 240 3 -(4-metil-piperazin-1 -ila) -clorofenila h i 5 39 Exemplo 1241

R

Ri

R2

242

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-clorofenila

H

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclo-hexil-etila

H

M+H4 539

539

243

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclo-hexil-etila

H

539

244

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclo-hexila

H

511

245

246

247

3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclo-hexila

H

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-ciclopentil-etila

H

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclopentil-etila

H

511 525

525

248

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclopentila

H

497

249

252

3-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclopentila

H

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 1-fenil-propila

H

497

|250 |4-(4-metil-piperazin-1-ila) |tiofen-2-il-metila H 525 251 3-(4-metil-piperazin-1-ila) ltiofen-2-il-metila H 525

547

253

4-(4-metil-piperazin-1-ila) ciclopentil-metil

H

511

254

3-(4-metil-piperazin-1 -ila) ciclopentil-metila

H

511

|255 |4-(4-metil-piperazin-1-ila) |trans-2-fenila-

ciclopropila

545

[256 |3-(4-metil-piperazin-1-ila) trans-2-fenila-

ciclopropila

257

H

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -fenóxi-etila

H

545

549

258

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1-fenóxi-etila

H

549

259

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-t-butilciclo-hexila

H

567

260

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-t-butilciclo-hexila

H

567

261

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-ciclo-hexila

H

525

262

3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-metil-ciclo-hexila

H

525

263

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-fenila-propila

H

547

264

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-fenila-propila

H

547

265

4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

2-metil-benzila

H

533

266

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

2-metil-benzila

H

533

267

4-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-metil-benzila

H

533

268

3-(4-metil-piperazin-1 -ila)

3-metil-benzila

H

533

269

4-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-metil-benzila

H

533

270

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

4-metil-benzila

H

533

271

3-(4-metil-piperazin-1-ila)

1-fenila-propila

H

547 Exemplo 1272

R

Ri

R2

|4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,3-di- |H

hidrobenzofuran-2-ila

M+I-T 547

273

4-(4-metil-piperazin-1-ila) benzofuran-2-ila

H

545

274 4-(4-metil-piperazin-1-ila) n-hexila

|3-(4-metil-piperazin-1-ila) n-hexila

H

513

275

|4-(4-metil-piperazin-1-ila) ln-pentila

H

513

276

|3-(4-metil-piperazin-1-ila) ln-pentila |4-(4-metil-piperazin-1-ila) Irvheptila

H

499

277

H

499

278

j3-(4-metil-piperazin-1-ila) n-heptila

H

527

279

[4-(4-metil-piperazin-1-ila) |croman-3-ila

H

527

280

|3-(4-metil-piperazin-1-ila) |croman-3-ila 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2,3-di

hi/-(r/->l·

H

561

281

H

561

282

pi^ u 1

lhidrobenzofuran-2-ila

H

547

283

288

3-(4-metil-piperazin-1-ila) benzofuran-2-ila

H

(284 |4-(4-metil-piperazin-1-ila) li,2,3,4-tetra-hidro- |H

naftalen-2-ila

|4-(4-metil-piperazin-1-ila) 1-etil-pentila

|3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1-etil-pentila

H

545 559

(285 |3-(4-metil-piperazin-1-ila) 1,2,3,4-tetra-hidro- |H 559

naftalen-2-ila

)286 |4-(4-metil-piperazin-1-ila) |ciclo-hexil-metila Ih 525

287 |3-(4-metil-piperazin-1 -ila) Iciclo-hexil-metila \H 525

527

289

H

527

290

4-(4-metil-piperazin-1-ila) indan-2-ila

H

545

291

3-(4-metil-piperazin-1 -ila) indan-2-ila

H

545

292

293

2Ô4

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-ciclo-hexil-propila H

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-ciclo-hexil-propila H

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclopropil-etila

h

553

497

295

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 2-ciclopropil-etila

H

497

296

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-metil-1 H-inden-2-ila

4-(4-metil-piperazin-1 -ila) n-butila

H

557

297

H

4-(4-metil-piperazin-1-ila) 5-oxo-hexila

485

298

3-(4-metil-piperazin-1-ila) 5-oxo-hexil

H

527

299

H

3-(4-metil-piperazin-1-ila) n-butila

527

300

H

485 Exemplo R Ri R2 M+H+ 301 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-metilciclo-hexil- metila H 539 302 3-(4-metil-piperazin-1-ila) 4-metilciclo-hexil- metila H 539 303 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,4,4-trimetilpentila H 541 304 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2,4,4-trimetilpentila H 541 305 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-tetra-hidrofuran-2-il- etila H 527 306 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-oxopentila H 513 307 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 4-oxopentila H 513 308 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1 -metil-pentila H 513 309 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 1-metil-pentila H 513 310 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 2-tetra-hidrofuran-2-il- etila H 527 311 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-metil-1H-inden-2-ila H 557 312 4-(4-metil-piperazin-1-ila) 3-fenila-propila H 547 313 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-fenila-propila H 547 314 3-(4-metil-piperazin-1-ila) benzofuran-2-il-metila H 559 315 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-metil-pentila H 513 316 3-(4-metil-piperazin-1 -ila) 3-metil-pentila H 513 317 4-(4-metil-piperazin-1 -ila) benzofuran-3-il-metila H 559

Procedimento genérico: síntese paralela de N-(3-{7-Amino-3-[3- (4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)- sulfonami-

das

Para um arranjo de tubos de vidro é adicionado 6-(3-amino-

fenila)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

(50 mg, 0,40 mmol, equivalente 1), piridina (0,8 ml) e um dos 17 cloretos de sulfonila (0,80 mmol, equivalente 2) em cada tubo. Todos os tubos são pre- enchidos com argônio e fechados. As misturas de reação resultantes são agitadas à temperatura ambiente por 60 horas. Depois uma solução de 33% de metilamina em etanol (30,6 Dl) é adicionada em cada tubo e a agitação continua à temperatura ambiente por 1 hora. Os solventes são evaporados e os resíduos resultantes são individualmente novamente dissolvidos em uma mistura de metanol (3 ml), acetonitrila (0,5 ml) e duas gotas de água conten- do 1 % de TFA. Cada solução é individualmente filtrada sobre uma membra- na de 0,45 μιη de PTFA e os filtrados são depois purificados por procedi- mento de HPLC/MS preparativa.

Exemplo 318: brometo de 4-(3-{7-Amino-6-[3-(2-cloro-benzenossulfo-

nilamino)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il}-fenila)-1-benzil-1-metil-

piperazin-1-ium

Para um tubo de vidro é adicionado N-(3-{7-amino-3-[3-(4-metil- piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)-2-cloro-

benzenossulfonamida (30 mg, 0,052 mmol, equivalente 1), K2CO3 (11,4 mg, 0,082 mmol, equivalente 1,6) e uma solução de brometo de benzila (60 Dl, 0,031 mmol, equivalente 0,6) em DMF (0,3 ml). A mistura de reação é agita- da a 6'υ durante 10 minutos, seguida pela adição ae uma solução de bro- meto de benzila (50 ül, 0,026 mmol, equivalente 0,5) em DMF (0,2 ml). A agitação continuou por 1 hora e 30 minutos a 8°C e depois por 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura de reação é diluída com DMF (2 ml), filtra- da sobre uma membrana de PTFA a 0,45 pmeo filtrado é purificada por um procedimento de HPLC/MS preparativa. A secagem por congelamento das frações coaguladas dá um pó branco. M+H+ 664.3. Seguindo o procedimento dos exemplos acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X4 podem ser preparados

X4

em que ReRi têm os significados como indicado na tabela 4 abaixo. Tabela 4

Exemplo R Ri M+H+ 319 3- 4-meti -piperazin- -ila) 2-cloro-fenila 574 320 3- 4-meti -piperazin- -ila) 3-ciano-fenila 565 321 3- 4-meti -piperazin- -ila) 3-trifluorometil-fenila 608 322 3- 4-meti -piperazin- -ila) 2-trifluorometil-fenila 608 323 3- 4-meti -piperazin- -ila) 3-tienila 546 324 3- 4-meti -piperazin- -ila) propila 506 325 3- 4-meti -piperazin- -ila) 1,2-dimetil-4-imidazolila 558 326 3- 4-meti -piperazin- -ila) 4-metóxi-fenila 570 327 3- 4-meti -piperazin- -ila) 4-metil-benzila 568 328 3- 4-meti -piperazin- -ila) 4-tolila 554 329 3- 4-meti -piperazin- -ila) 4-pirazolila-fenila 606 330 3- 4-meti -piperazin- -ila) fenetila 568 331 3- 4-meti -piperazin- -ila) 4-etil-fenila 568 332 3- 4-meti -piperazin- -ila) benzotiazol-6-ila 597 333 3- 4-meti -piperazin-' -ila) 2,4-dimetil-5-tiazolila 575 exemplo 334" isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{3-[4-(fS)-2-amino-3-

metil-butirila)-piperazin-1-il]-fenil}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-

carbâmico NH

A

Ό

V

Isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{3-[4-((S)-2- benziloxicarbonilamino-3-metil-butiril)^iperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5- a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico (54mg, 0,075mMol) é dissolvido em tetra- hidrofurano/metanol 1:1. 4mg de Paládio (10%) em carbono são adicionados e a mistura é hidrogenada por 65 horas à temperatura ambiente sob pressão normal. A mistura de reação é filtrada, o solvente é removido in vácuo e o produto é isolado por liofilização de terc. Butanol (M+H+ 585,8, pó branco).

O material de partida pode ser preparado como a seguir: a) benzil éster de ácido 4-(3-Cianometil-fenila)-piperazina-1-carboxílico

(3-bromo-fenila)-acetonitrila (5,1g, 25,5 mMoIs) é dissolvido em dimetoxieta- no (54ml). Depois da adição de benziléster de ácido piperazina-1-carboxílico (11,4g, 51 mMoIs), fosfato de potássio (10,8g, 51mMols), (2-bifenila)di-terc butilfosfina (2,28g, 7,6mMols) e paládio-ll-acetato (573mg, 2,55mMols) da mistura é refluxado por 20 horas. Depois de refrigerar até a temperatura am- biente a mistura é filtrada e um filtrado marrom é evaporado in vácuo para dar um óleo marrom. A mistura bruta é separada por cromatografia instantâ- nea (gradiente de acetato de etila/hexano 1:9 a 1:1) rendendo o produto puro como um óleo amarelo escuro (M+H+ 336,2).

b) benzil éster de ácido 4-[3-(1-Ciano-2-oxo-etila)-fenila]-piperazina-1- carboxílico

o

O

benzil éster de ácido 4-(3-Cianometil-fenila)-piperazina-1-carboxílico (5,9g, 17,6mMols) é dissolvido em tolueno (59ml). Depois da adição de formato de etila (2,122ml, 26,4mMols) e metilato de sódio (1,425 g, 26,4 mMols) a mis- tura é agitada a 38°C por 3 horas. A suspensão original ligeiramente amarela vira marrom. A mistura é evaporada para secagem, o resíduo é tratado com tolueno (50ml) e evaporado in vácuo três vezes. O produto bruto (M+H+ 364,2) é usado sem purificação na etapa seguinte, c) benzil éster de ácido 4-[3-(5-Amino-1H-pirazolo-4-ila)-fenila]-piperazina-1- carboxílico

benzil éster de ácido 4-[3-(1-Ciano-2-oxo-etila)-fenila]-piperazina-1- carboxílico (500mg, 1,38mMol) é dissolvido em tolueno (3ml) e tratado com ácido acético (0,24ml, 4,13 mMols). A suspensão marrom esverdeada torna- se bege. A temperatura da reação sobe para 30°C. Mono-hidrato de hidrazi- na (138mg, 2,75mMols) é adicionado (a temperatura da reação sobe para 40°C). A mistura é aquecida para refluxo por 1,5 hora e depois resfriada até a temperatura ambiente. Carbonato de sódio aquoso saturado (20ml) e diclo- rometano (30ml) são adicionados. As camadas são separadas, a camada orgânica é lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e evaporada in vá- cuo. A mistura bruta é separada por cromatografia instantânea (gradiente de diclorometano/metanol 1:0 a 7:3). O produto é recebido como um sólido a- morfo ligeiramente amarelo (M+H+ 378.3).

d) benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-isobutoxicarbonilamino-fenila)- pirazolofl ,5- ]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazina-1-carboxílico

benzil éster de ácido 4-[3-(5-amino-1H-pirazolo-4-ila)-fenila]-piperazina-1- carboxílico (1,52g, 4,04 mMols), isobutil éster de ácido [4-((Z)-1-ciano-2-

O dimetilamino-vinila)-fenila]-carbâmico (1,16 g, 4,04 mMols) são dissolvidos em HCI (a 1,25M, 8,4 ml) etanólico e 7,4 ml de ácido acético. A mistura é aquecida para refluxo por 16 horas, resfriada até a temperatura ambiente, despejada em carbonato de sódio aquoso saturado (50 ml) e extraída com

diclorometano. A camada orgânica é seca sobre sulfato de sódio e evapora- da in vácuo. A mistura bruta é separada por cromatografia instantânea (ciclo- hexano/acetato de etila gradiente 9:1 a 1:1. A evaporação das frações cor- respondentes rende o produto desejado como sólido amorfo amarelo M+H+ 620.3).

d e) isobutil éster de ácido {4-[7-Amino-3-(3-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-6-il]-fenila}-carbâmico

benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-isobutoxicarbonilamino-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazina-1-carboxílico (1,5g, 2,4 mMols) são dissolvidos em metanol (24ml).Depois da adição de paládio (10%, 257 mg) sobre carbono a mistura é hidrogenada à temperatura ambiente sob pressão normal até todo o material de partida ser usado. A mistura de rea- ção é filtrada e evaporada in vácuo rendendo o produto como um sólido a- morfo ligeiramente amarelo (M+H+ 486.2).

f) isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{3-[4-((S)-2-benziloxicarbonilamino-3- metil-butirila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-

carbámico

isobutil éster de ácido {4-[7-amino-3-(3-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5-

N a]pirimidin-6-il]-fenila}-carbâmico (51 mg, O1ImMoI), Z-(L)-valina (33mg, 0,13mMol) e N-hidroxibenzotriazol HOBt (18mg, 0,13mMol), trietilamina (0,019ml, 0,13mMol) são dissolvidos em 4ml de tetra-hidrofurano, refrigerado até O0C e depois tratado com N-(3-dimetilaminopropila)-N'-etil-carbodi-imida (0,024ml, 0,13mMol). A mistura de reação é agitada à temperatura ambiente por 20 horas e depois evaporada in vácuo. O resíduo é tratado com carbona- to de potássio aquoso saturado e extraído com acetato de etila. A camada orgânica é lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e evaporada in vá- cuo. O produto bruto é separado por cromatografia instantânea (diclorome- tano/metanol 1:0, gradiente para 93:7). O produto é isolado por liofilização para terc-butanol (M+H+ 719,7, pó branco).

Exemplo 335: isobutil éster de ácido [4-((Z)-1-Ciano-2-dimetilamino-vinila)- fenila]-carbâmico

(4-amino-fenila)-acetonitrila (1,33g, 9,8 mMoIs) é dissolvido em piridina (21ml). Isobutil cloroformato (1,5g, 10,8 mMoIs) é adicionado e a mistura é agitada à temperatura ambiente por 1 hora e depois a 60°C por 1,5 hora. A mistura de reação é evaporada sob pressão reduzida. A mistura bruta é se- parada por cromatografia instantânea (gradiente acetato de etila/hexano 1:9 a 3:7) rendendo o produto que solidifica durante a noite à temperatura ambi- ente. O produto é tratado com ciclo-hexano e aquecido até 50°C por 30 mi- nutos. Filtragem e secagem rendem o produto como um sólido amarelo (M+H+ 233.1).

b) isobutil éster de ácido [4-((Z)-1-Ciano-2-dimetilamino-vinila)-fenila]- carbâmico

isobutil éster de ácido (4-cianometil-fenila)-carbâmico (1,79g, 7,7 mMoIs) é

a) isobutil éster de ácido (4-Cianometil-fenila)-carbâmico dissolvido em tolueno (16ml). Depois da adição de N,N-dimetilformamida- dimetilacetal (1,84g, 15 mMols) a mistura é refluxada por duas horas. Além disso, Ν,Ν-dimetilformamida-dimetilacetal (1g) é adicionado e a mistura de reação é refluxada durante a noite (tempo total da reação 20 horas). Resfri- ando para a temperatura ambiente rende uma suspensão marrom que é dilu- ída com acetato de etila (200 ml) e depois evaporada in vácuo para dar um sólido marrom. A mistura bruta é separada por cromatografia instantânea (acetato de etila/hexano 1:9 a 1:1 gradiente) provendo o produto como um sólido laranja (M+H+ 288.1).

materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X5 podem ser preparados

Seguindo o procedimento dos exemplos acima, mas usando os

5

R

em que R e Ri têm significados como indicado na tabela 5 abaixo. Tabela 5

Exemplo

Posição

na fenila

R

M+H+

336

337

4

H

CO-O-isobutila 487 CO-O-isobutila 623

336 339

4

CO-CH2-NHCH3 CO-O-isobutila 557

CO-O-isobutila 584

340

4

CO-O-isobutila 616

341

3

H

CO-O-isobutila 486 Posição Exemplo na fenila

342

343

344

345

346

347

348

349

350

351

352

3 3

R

CO-CH2-NH2

?l /

NH,

I

χ

F

,(CH2)4-NH2

Rl M+

CO-O-isobutila 543

CO-O-isobutila 558

CO-O-isobutila 615

NH,

-OH

NH1

N H,

OH

NH,

H

P. ^Nv

CO-O-isobutila 574

CO-O-isobutila 558

CO-O-isobutila 616

CO-O-isobutila 584

NH2 CO-O-isobutila 600

NH-

CO-(CH2)3-NH2

1

CO-O-isobutila 572 CO-O-isobutila 586

NH„

\\ /

-OH

CO-O-isobutila 650

NH, Posição Exemplo na fenila

353 3

354

355

R

NH

NH,

Rl

MH

2 CO-O-isobutila 614

o

OH CO-O-isobutila 587

CO-O-isobutila 586

356

357

358

359

360

361

362

363

364

365

366

367

368

4

3 3

3 3 3 3

3 3

3 3 3

NH2

CO-(CH2)3-NH2 CH3

NH2

CO-CH3

CO-CH2-3-piridila

CO-3-piridila

CO-4-imidizolila

W //

NH,

CO-4-piridila

NH-CO-O //

CO-2-piridila CH3

4-r

OH NH-CO-O

CO-O-isobutila 572 S02-naftila 591

CO-O-isobutila 634

S02-2-cloro- 602 fenila

CO-O-isobutila 606

CO-O-isobutila 592

CO-O-isobutila 581

CO-O-isobutila 634

CO-O-isobutila 591 CO-O-isobutila 758

CO-O-isobutila 592 CO-O-isobutila 532 CO-O-isobutila 708

369

SO2-CH3

CO-O-isobutila 564 Posição Exemplo na fenila

370 3

371

R

Ri

M+I-T

372

373

374

375

376

377

378

379

380

381

382

383

384

3 3 3 3

3 3

NH,

NH—CO-O O

NH,

NH—CO-O //

CH3 H

CH3

—c—' o

3

4-amino-benzoíla .o

O H //

Il

CH3

fenilacetila

Ch—

o

-Λ

CO-O ι

J.....O (

N

I

CO-O

CH,

benzoíla

SO (

385

N

I

CO-O

trifluoro-acetila

CO-O-isobutila 749

CO-O-isobutila 735

SCVetiIa 493

H 384

3-metil-benzoíla 518

CO-O-isobutila 691

CO-O-isobutila 605 CO-O-isobutila 677

N(CH3)-S02-2- 588 cloro-fenila

CO-O-isobutila 605

CO-O-isobutila 692

CO-O-isobutila 718

4-fluoro- 523 benzoíla

CO-O-isobutila 590

CO-O-isobutila 718

CO-O-isobutila 582 Posição Exemplo na fenila

386 3

R

Ri

M+H4

387

388

4 4

H

CO-O-isobutila 739

H 458,2

-COO-isobutila 585,4

Os compostos a seguir podem ser obtidos usando o procedi- mento como descrito acima e usando os materiais de partida apropriados: Exemplos 389 e 390:

N

I

CO-CH.

Exemplo 392:

CO-CH,

Exemplo 393: isobutil éster de ácido [4-(7-amino-3-{4-[4-(1-metil-piperidin-4- ila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico A) {4-[4-(1-Metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-acetonitrila

-Cr

o

o Para uma mistura de (4-bromo-fenila)-acetonitrila (196 mg, 1 mmol), K3PO4 (318 mg, 1,5 mmol), 1-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazina (220 mg, 1,2 mmol), (2-bifenila)di-terc-butilfosfina (45 mg, 0,15 mmol) em 1,2- dimetoxietano (3 ml) é adicionado sob acetato de paládio(ll) em atmosfera de argônio (22 mg, 0,1 mmol). A mistura é sacudida sob argônio em um frasco firmemente fechado por 20 horas a 90°C. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, H2O e acetato de etila são adicionados e a mistura filtrada através de um envoltório de celite. A camada aquosa é separada e extraída duas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combina- das são lavadas com H2O, secas sobre Na2SO4. O solvente é removido in vácuo e o resíduo purificada por HPLC preparativa (YMC-Pack Pro coluna C18; 10 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minutos, circulação 20 ml/minutos) para dar o produto desejado como um sólido, [M+H]+ = 299.2; tR (HPLC, coluna CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,63 min. B) 2-ciano-2-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-etenolato de sódio

50°C. Depois de refrigerar até a temperatura ambiente {4-[4-(1-metil- piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-acetonitrila (3,0 g, 10 mmols) e formato de etila (1,2 ml, 15 mmols) e a mistura de reação agitada a 60°C por 2 horas. Depois de refrigerar ate a temperatura ambiente, dietiléter é adicionado, o precipitado filtrado, lavado com dietiléter e seco in vácuo para produzir o produto como um sólido marrom escuro. [M-H]" = 325,3; tR (HPLC,coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,35 min.

C) 4-{4-[4-(1-Metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-2H-pirazolo-3-ilamina

Na+

O

O sódio (345 mg, 15 mmols) é dissolvido em etanol (25 ml) a

^,JrVN η

-O^?

Uma mistura do composto de exemplo 393B (2,4 g, 6,9 mmols)

mono-hidrato de hidrazina (0,95 ml, 19,5 mmols) e o ácido acético (30 ml) é agitado a 125°C por 2 horas. Depois de refrigerar até a temperatura ambien- te, H2O (60 ml) e HCI concentrado (6 ml) são adicionados e a mistura é agi- tada por 1 hora à temperatura de refluxo. A mistura é refrigerada até a tem- peratura ambiente, basificada com solução de NH4OH concentrada, diluída com H2O e camada aquosa extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos são descartados e a camada aquosa extraída duas vezes com n- butanol. As camadas de butanol combinadas são evaporadas in vácuo e o resíduo evaporado com tolueno para dar o produto como um sólido marrom escuro. [M+H]+ = 341.3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 0-100% CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,75 minutos.

D) Cloridrato de 3-{4-[4-(1-Metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-6-(4- nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

mmol), 3-dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)-acrilonitrila (173,8 mg, 0,8 mmol), ácido acético (3 ml), etanol (5 ml) e HCI a ~1,25 M em etanol (2,55 ml, ~3,2 mmols) é agitada a 85°C por 18 horas. Depois de refrigerar até a temperatu- ra ambiente, a mistura de reação é filtrada, o resíduo lavado com etanol e dietil éter e seca in vácuo a 60°C para render o produto como um sólido mar- rom escuro. [M+H]+ = 513,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,95 minutos. E) cloridrato de 6-(4-Amino-fenila)-3-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazin- 1 -il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

Uma mistura do composto do exemplo 393C (272,4 mg, 0,8 r

Cl

Uma mistura do composto do exemplo 393 D (316,9 mg, 0,58

mmoO- DMF (12 ml), H2O (18 ml) e 10% de Pd/C (100 mg) é hidrogenada à temperatura ambiente por 16 horas 200 kPa (~2 bar) de pressão de hidrogê- nio). A mistura de reação é filtrada através de um envoltório de celite, o resí- duo lavado com DMF e H2O e o filtrado evaporado in vácuo para render o produto bruto como um sólido cinza escuro. Para a análise, parte do produto bruto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; Ο- Ι 00% de CH3CN + 0.1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de minutos, 20 ml/minutos de fluxo) para render o produto desejado como um sólido marrom, [M+H]+ = 483,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB, de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,17 minutos. F) isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico

mg, 0,18 mmol), DMF (2 ml) e piridina (3 ml) é adicionado isobutil clorofor- mato (28,4 Dl, 0,22 mmol). Depois de 75 minutos à temperatura ambiente, uma segunda porção de isobutil cloroformato (28,4 Dl1 0,22 mmol) é adicio- nada e a agitação é continuada por 16 horas. A mistura de reação é evapo- rada in vácuo e o resíduo distribuído entre uma solução de NaOH a 2N e acetato de etila. O acetato de etila extraído é separado e a camada aquosa extraída duas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combina- das são lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO^ e o solvente é removi- do in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC- Pack Pro C18; 10-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de

:N NH.

15

Para uma mistura agitada do composto do exemplo 393E (96,5 CF3COOH dentro de 20 minutos, 20 ml/minutos de fluxo). As frações puras combinadas são basificadas com sólido K2CO3, concentradas in vácuo e a fase aquosa restante extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgâni- cos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para pro- duzir o produto desejado como um sólido bege, [M+H]+ = 583,7; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 3,51 minutos.

Exemplo 394: etil éster de ácido [4-(7-amino-3-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico

NH2

nO

O

O composto é preparado por analogia ao procedimento descrito acima para o exemplo 393 F) usando cloroformato de etila em vez de cloro- formato de isobutila. Sólido bege. [M+H]+ = 555,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,87 minutos.

Exemplo 395: etil éster de ácido [4-(7-amino-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico A) {4-[4-(2-Metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-acetonitrila

rr^N

C

I

) O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito

no exemplo 393 A) usando 1-(2-metóxi-etila)-piperazina em vez de 1-(1- metil-piperidin-4-ila)-piperazina. O produto bruto é purificada por cromatogra- fia instantânea (sílica-gel; CH2CI2/CH3OH) para dar o produto desejado. [M+Hf = 260,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0.1% CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minu- tos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 3,11 minutos.

B) 2-ciano-2-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-etenolato de sódio

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393 B) usando {4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}- acetonitrila em vez de {4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}- acetonitrila. [M-H]" = 286,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 3,07 minutos. C) 4-{4-[4-(2-Metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-2H-pirazolo-3-ilamina

(=N

.NH

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito

no exemplo 393 C) usando 2-ciano-2-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]- fenilaj-etenolato de sódio em vez de 2-ciano-2-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)- piperazin-1-il]-fenila}-etenolato de sódio. Sólido marrom. [M+H]+ = 302,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 0 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,91 min.

D) 3-{4-[4-(2-Metóxi-etila)-piperazin-1 -il]-fenila}-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina

NO,

Uma mistura de 4-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-2H- pirazolo-3-ilamina (336 mg, 1,11 mmol), 3-dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)- acrilonitrila (242 mg, 1,11 mmol), ácido acético (4,2 ml), etanol (7 ml) e de HCI a -1,25 M em etanol (3,55 ml, -4,44 mmols) é agitado a 85°C por 18 horas. A mistura de reação é evaporada in vácuo e o resíduo distribuído en- tre solução de K2CO3 saturada e acetato de etila. A camada aquosa é sepa- rada e extraída duas vezes com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para render o produto bruto como um sólido escuro. [M-H]" = 472,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 3,01 minutos.

E) 6-(4-Amino-fenila)-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazo- lo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (340 mg, 0,2 mmol), DMF (10 ml), THF (10 ml) e 10%"de Pd/C (100 mg) é hidrogenada à temperatura ambiente por 14 horas (pressão do hidrogênio: (~2 bar). A mistura de reação é filtrada através de um envoltório de celite, o resíduo lavado com DMF e THF e o filtrado evaporado in vácuo. O resíduo bruto é distribuído entre CH2CI2 e solução de K2CO3 meio saturada, a fase aquosa separada e extraí- da duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos combinados são lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para render o produto desejado como um sólido escuro. [M+Hf = 444,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H?0 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 2,41 minutos.

F) etil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]- fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico

o

Uma mistura de 3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-6- O

Para uma mistura agitada de 6-(4-amino-fenila)-3-{4-[4-(2- metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (88,7 mg, 0,2 mmol) e piridina (3 ml) é adicionado cloroformato de etila (21 Dl1 0,22 mmol). Depois de 75 minutos à temperatura ambiente, uma segunda porção de cloroformato de etila (21 Dl, 0,22 mmol) é adicionado e a agitação é con- tinuada por 45 minutos. A mistura de reação é evaporada in vácuo e o resí- duo distribuído entre uma solução de NaOH a 2N e acetato de etila. O extra- to de acetato de etila é separado e a camada aquosa extraída duas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e o solvente é removido in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; de 0 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de minutos, 20 ml/minutos de fluxo). As frações puras combinadas são basi- ficadas com K2CO3 sólido, concentrado in vácuo e a fase aquosa restante extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para produir o produto desejado como um sólido bege. [M+H]+ = 516,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucle- osil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 3,17 minutos. Exemplo 396: isobutil éster de ácido [4-(7-amino-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolof1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico

Para uma mistura agitada de 6-(4-amino-fenila)-3-{4-[4-(2- metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (88,7 mg, 0,2 mmol) e piridina (3 ml) é adicionado isobutil cloroformato (28,4 Dl, 0,22 mmol). Depois de 75 minutos à temperatura ambiente, a mistura de reação é evaporada in vácuo e o resíduo distribuído entre uma solução de NaOH a 2N e acetato de etila. O extrato de acetato de etila é separado e a camada a- quosa extraída duas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, e o solvente é removido in vácuo. O produto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; 10-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 30 minutos, 20 ml/min de fluxo). As frações puras combinadas são basificadas com K2CO3 sólido, concentrada in vácuo e a fase aquosa restante extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgâni- cos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para pro- duzir o produto desejado como um sólido acastanhado. [M+H]+ = 544,8; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 3,81 min.

Exemplo 397: 4-{7-amino-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-pirazo- lo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenol A) [4-(4-Metil-piperazin-1 -ilmetila)-fenila]-acetonitrila

K2CO3 (14,87 g, 107,6 mmols) em dimetilacetamida (100 ml) é agitada à temperatura ambiente por 10 minutos. Depois da adição de (4-bromometil- fenila)-acetonitrila (11,3 g, 53,8 mmols) a agitação é continuada por 12 ho- ras. A mistura é evaporada in vácuo e o resíduo distribuído entre H2O e ace- tato de etila. A camada orgânica é seca sobre Na2SO4 e o solvente removido in vácuo para render o produto como um óleo laranja. [M+H]+ = 230,1; ír (H- PLC1 coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB ; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 1,73 min.

B) 2-[4-(4-Metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-3-oxo-propionitrila

r

Uma suspensão de N-metil-piperazina (6,6 ml, 59,4 mmols) CfcH

N-V

/

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 170 B) usando [4-(4-metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-acetonitrila em vez de {4-[4-(1-metil^iperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-acetonitrila. De- pois da conclusão da reação, a mistura é evaporada in vácuo. O resíduo é tratado com H2O1 o pH ajustado para ~4 pela adição de ácido acético. A ca- mada aquosa é lavada com CH2CI2 e evaporada in vácuo para produzir o produto como um sólido amarelo. [M+H]+ = 258,1; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 2,38 minutos.

C) 4-[4-(4-Metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-2H-pirazolo-3-ilamina

O

H,N

Uma mistura de 2-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-3-oxo- propionitrila (8,1 g, 31,4 mmols), mono-hidrato de hidrazina (3,82 ml, 78,6 mmols) e ácido acético (76 ml) é agitada a IOO0C por 3,5 horas. Depois de resfriar até temperatura ambiente, água (165 ml) e HCI fumado (16,5 ml) são adicionados e a mistura é agitada a 110°C por 0.5 hora. A mistura de reação é resfriada até a temperatura ambiente e basificada pela adição de amônia concentrada. A camada aquosa é extraída três vezes com CH2CI2. As ca- madas orgânicas combinadas são secas sobre Na2SO4 e o solvente é remo- vido in vácuo para dar o produto como um óleo laranja que cristaliza à tem- peratura ambiente. [M+H]4 = 272,1. D) 3-Hidróxi-2-(4-hidróxi-fenila)-acrilonitrila

N<

R = H1 Na

Sódio (690 mg, 30,0 mmols) é dissolvido em etanol (17 ml) a 50°C. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, (4-hidróxi-fenila)- acetonitrila (2,66 g, 20 mmols) e formato de etila (2,41 ml, 30 mmols) são adicionados e a mistura de reação é agitada a 70°C por 2 horas. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, o precipitado é filtrado. O filtrado é eva- porado para produzir o sal de sódio verde do produto. (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3COOH/H2O + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 3,64 minutos. O precipitado da filtragem é dissolvido em H2O1 o pH ajustado para ~4 pela adição de ácido acético e a fase aquosa extraída duas vezes com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para render o como como um óleo marrom.

[M-H]" =160,0

E) 4-{7-Amino-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimi- din-6-il}-fenol

I= N

/νV" NH

ei' "

N

I

Uma mistura de 4-[4-(4-metil-piperazin-1-ilmetila)-fenila]-2H- pirazolo-3-ilamina (120 mg, 0,44 mmol), sal de sódio de 3-hidróxi-2-(4- hidróxi-fenila)-acrilonitrila (90 mg, 0,44 mmol), ácido acético (2 ml), etanol (4 ml) e HCI a —1.25 M em etanol (1,76 ml, ~2,2 mmols) é agitada em refluxo por 16 horas. Depois de resfriar até a temperatura ambiente, o precipitado é filtrado, lavado com etanol e seco in vácuo para produzir o sal de HCI do produto. [M+H]+ = 415,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,99 minutos. O filtrado é evaporado e o resíduo distribuído entre solução de K?C03 saturada e CH2CI2. A camada orgânica é seca sobre Na2SO4, evaporada e o resíduo purificada através de HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; de 10 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minutos, 20 ml/min de fluxo). As frações puras combinadas são basificadas com K2CO3 sólido, concentradas in vácuo e a fase aquosa restante extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para produzir o produto desejado como um sólido bege. [M+H]+ = 415,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 2,92 minutos.

Exemplo 398: etil éster de ácido [4-(7-amino-3-{4-[4-(2-hidróxi-etila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico A) cloridrato de 2-(4-{4-[7-Amino-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3- il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393D) usando 2-{4-[4-(5-amino-1H-pirazolo-4-ila)-fenila]- piperazin-1-il}-etanol em vez de 4-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]- fenila}-2H-pirazolo-3-ilamina. Sólido esverdeado. [M+H]+ = 460,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 3,37 minutos.

B) cloridrato de 2-(4-{4-[7-Amino-6-(4-amino-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3- il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393 E) usando cloridrato de 2-(4-{4-[7-amino-6-(4-nitro-fenila)- pirazolof1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol em vez de cloridra- to de 3-{4-[4-(1-metil-piperidin-4-ila)-piperazin-1-il]-fenila}-6-(4-nitro-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina. O produto bruto é tratado com metanol quente, filtrado, o resíduo lavado com metanol e CH2CI2 e seco in vácuo pa- ra render o produto desejado como um sólido bege escuro. [M+H]+ = 430,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/minuto de fluxo): 2,46 minutos. C) etil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-(2-hidróxi-etila)-piperazin-1-il]- fenila}^irazolo[1,5-a]pirimidin-6-iia)-fenila]-carbâmico

HO

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393 F) mas usando cloridrato de 2-(4-{4-[7-amino-6-(4-amino- fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol e clorofor- mato de etila. O produto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC- Pack Pro C18; de O a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minutos, 20 ml/min de fluxo). As frações puras com- binadas são basificadas com K2CO3 sólido, concentradas in vácuo e a fase aquosa restante extraída duas vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para produzir o produto desejado como um sólido bege. [M+H]+ = 502,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 3,20 minutos.

Exemplo 399: isobutil éster de ácido (4-{7-amino-5-metil-3-[4-(4-metil- piperazin-1-ila)-fenila]pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)-carbâmico A) 2-(4-Nitro-fenila)-3-oxo-butironitrila

^yNO2

Para uma solução agitada de (4-nitro-fenila)-acetonitrila (2,2 g, 13,6 mmols) em piridina (17 ml) é adicionado cloreto de acetila (1,22 ml, 17,2 mmols) em uma porção. A mistura é agitada por 20 horas à temperatura ambiente e depois evaporada. H2O é adicionado ao resíduo, o pH é ajustado para ~4 através da adição de HCI a 2 N e a camada aquosa extraída três vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos combinados são lavados com H2O, secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para render o produto co- mo um resíduo marrom escuro. [M-H]" = 203,1; tR (HPLC, coluna CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; de 5 a 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 4,67 min.

B) cloridrato de 5-Metil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)-

pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

0 composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393D) mas usando 4-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-2H- pirazolo-3-ilamina e 2-(4-nitro-fenila)-3-oxo-butironitrila. Tempo de Reação: 120 horas. Sólido bege escuro. [M+H]+ = 444,6; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 2,96 min.

C) cloridrato de 6-(4-Amino-fenila)-5-metil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393 E) mas usando cloridrato de 5-metil-3-[4-(4-metil-piperazin- 1-ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina. O produto bruto é tratado com metanol e CH2CI2, filtrado, o resíduo lavado com meta- nol e CH2CI2 e seco in vácuo para render o produto desejado como um sóli- do bege. [M+H]+ = 414,6; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 2,13 min.

D) isobutil éster de ácido (4-{7-Amino-5-metil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)-carbâmico

O

N-/

/

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito

no exemplo 393 F), mas usando cloridrato de 6-(4-amino-fenila)-5-metil-3-[4- (4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina. O produto bruto é tratado com metanol, o sólido filtrado, lavado com metanol e éter e seco in vácuo para produzir o produto desejado como um sólido bege. [M+Hf = 514,6; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5- 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 3,45 min.

Exemplo 400: isobutil éster de ácido, sal trifluoro acético de ácido (4-{7-

amíno-5-metil-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-

il}-fenila)-carbâmico

A) cloridrato de 5-Metil-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

no exemplo 393D) mas usando 4-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-2H- pirazolo-3-ilamina e 2-(4-nitro-fenila)-3-oxo-butironitrila. Tempo de Reação: 140 horas. Sólido bege escuro [M+Hf = 444,6; tR (HPLC, coluna de CC

125/4 Nucleosil 100-5 C18 AE; 5-100% de CH3CN -f 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 3,11 min.

B) cloridrato de 6-(4-Amino-fenila)-5-metil-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

NH.

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito O composto é preparado em analogia ao the procedimento des- crito no exemplo 393 E) mas usando cloridrato de 5-metil-3-[3-(4-metil- piperazin-1 -ila)-fenila]-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina. O produto bruto é tratado com metanol e CH2CI2, filtrado, o resíduo lavado com metanol e CH2CI2 e seco in vácuo para render o produto desejado como um sólido bege. [M+H]+ = 414,6; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + ,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 2,21 min.

C) sal trifluoro de ácido acético, isobutil éster de ácido (4-{7-Amino-5-metil-3- [3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)- carbâmico

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393F) mas usando cloridrato de 6-(4-amino-fenila)-5-metil-3-[3- (4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina. Sólido Iigei- ramente bege depois da evaporação das frações puras depois da purificação de HPLC. [M+H]+ = 514,7; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH fpr 8 minutos, 1,5 ml/min de fluxo): 3,56 min.

Exemplo 401: 4-{7-Amino-5-metoximetil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]- prazol[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenol

A) 2-(4-benzilóxi-fenila)-4-metóxi-3-oxo-butironitrila

/-Vo

O \J

\

Sódio (517 mg, 22,5 mmols) é dissolvido em etanol (12,5 ml) a 50°C. Depois de resfriar até a temperatura ambiente (4-benzilóxi-fenila)-acetonitrila (3,34 g, 15 mmols) é adicionado seguido por metil éster de ácido metóxi acético (1,49 ml, 15 mmols). A mistura é agitada durante 20 horas a 80°C em frasco fechado. Depois de resfriar, o pH é ajustado para ~4 através da adição de HCI a 2 Ν. A mistura é evaporada, o resíduo tratado com H2O e a camada aquosa extraída duas vezes com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2S04 e evaporados in vácuo para render o produto como um sólido bege escuro. tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucle- osil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 6,05 minutos.

B) 6-(4-benzilóxi-fenila)-5-metoximetil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]- pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

3-ilamina (1,69 g, 6,57 mmols), 2-(4-benzilóxi-fenila)-4-metóxi-3-oxo- butironitrila (1,94 g, 6,57 mmols), ácido acético (18 ml), etanol (36 ml) e ~1,25 M de HCI em etanol (21 ml, ~26,3 mmols) é agitada por 20 horas a 80°C. A mistura é evaporada in vácuo, e o resíduo distribuído entre solução de K2CO3 saturada e acetato de etila. A camada aquosa é separada e extra- ída duas vezes com acetato de etila. Os extratos combinados são lavados com salmoura, secos sobre Na2SO4 e evaporados. Metanol é adicionado ao resíduo e o sólido que é dessa maneira formado é filtrado e seco in vácuo para produzir o produto como um sólido marrom escuro. [M+H]+ - 535,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de flu- xo): 4,63 min.

C) 4-{7-Amino-5-metoximetil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5- a]pirimidin-6-il}-fenol

Uma mistura de 4-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-2H-pirazolo- Uma mistura de 6-(4-benzilóxi-fenila)-5-metoximetil-3-[4-(4-metil-piperazin-1- ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (150 mg, 0,28 mmol), THF (3 ml), dioxano (2 ml) e Pd/C a 10% (20 mg) é hidrogenada à temperatura ambiente por 16 horas (pressão do hidrogênio: -0,2 mPa (~2 bar). A mistura de rea- ção é filtrada através de um envoltório de celite, o resíduo lavado com THF e o filtrado evaporado in vácuo. O resíduo bruto é purificada através de croma- tografia instantânea (SiO2, CH2CI2/CH3OH) para render o produto desejado como um sólido amarelo. [M+Hf = 445,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nu- cleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1.5 ml/min de fluxo): 2,97 min.

Exemplo 402: 4-(7-amino-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}- pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenol

A) 6-(4-benzilóxi-fenila)-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazo- lo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito

no exemplo 395D) mas usando 2-(4-benzilóxi-fenila)-3-oxo-propionitrila. [M+H]+ = 535,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5- 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 4,38 min B) 4-(7-Amino-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]piri- midin-6-ila)-fenol

Uma mistura de 6-(4-benzilóxi-fenila)-3-{4-[4-(2-metóxi-etila)- piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (66,4 mg, 0,124 mmol) em CF3COOH (3 ml) é agitada por 1 hora à temperatura ambiente, evapora- da in vácuo e o resíduo evaporado uma vez com tolueno. O produto é purifi- cada por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; 10-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minu- tos, 20 ml/min de fluxo). As frações puras combinadas são basificadas com K2CO3 sólido, concentradas in vácuo e a fase aquosa restante extraída três vezes com CH2CI2. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e evaporados in vácuo para produzir o produto desejado como um sólido amarelo. [M-H]" = 443,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100- 5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 2,71 min. Exemplo 403: cloridrato de 2-(4-{4-[7-amino-6-(4-benzilóxi-fenila)- pirazolo[1,5a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol A) 2-(4-benzilóxi-fenila)-3-oxo-propionitrila

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito

no exemplo 401 A).

Sólido bege: [M+Hf = 252,1; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 6,09 min B) cloridrato de 2-(4-{4-[7-amino-6-(4-benzilóxi-fenila)-pirazolo[1,5a]pirimidin- 3-il]-fenila}-piperazin-1-ila)-etanol

HS

Cl

O composto é preparado em analogia ao procedimento descrito no exemplo 393D) mas usando 2-{4-[4-(5-amino-1H-pirazolo-4-ila)-fenila]- piperazin-1-il}-etanol e 2-(4-benzilóxi-fenila)-3-oxo-propionitrila. [M+H]+ = 521,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 4,64 min

Exemplo 404: {7-amino-6-(4-hidróxi-fenila)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il}-acetonitrila

A) cloridrato de 4-{7-Amino-5-bromometil-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenila]pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenol

H

\

Br

Uma mistura de 6-(4-benzilóxi-fenila)-5-metoximetil-3-[4-(4-metil-piperazin-1- ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina (1,65 g, 3,1 mmols), ácido bro- mídrico (33%) (1,75 ml) em ácido acético (5 ml) é gitada por 16 horas a 110°C em um frasco firmemente fechado. Depois de resfriar até 5°C o preci- pitado é filtrado, lavado com éter e seco in vácuo para render o produto co- mo um sólido bege. [M+Hf = 493,1/495,1; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1 % de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 3,65 min.

B) {7-Amino-6-(4-hidróxi-fenila)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenila]-pirazo- lo[1,5-a]pirimidin-5-il}-acetonitrila

N'

Uma mistura de bromidrato de 4-{7-amino-5-bromometil-3-[4-(4- metil-piperazin-1 -ila)-íenilajpirazolo[1 ,ò-a]pirimidin-6-il}-tenol (1,31 g, 2,3 mmols) KCN (650 mg, 10 mmols) em DMA (10 ml) e H2O (8 ml) é agitada por 5 horas a 100°C. Depios da evaporação in vácuo, o resíduo é tratado com H2O, o precipitado filtrado, lavado com etanol e éter e seco in vácuo. O produto bruto é purificada por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; 10-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minutos, 20 ml/min de fluxo). A fração pura é basificada com NaOH a 4Ν e extraída com acetato de etila. O extrato orgânico é seco sobre

Na2SO4 e evaporado in vácuo para produzir o produto desejado como um

sólido acastanhado. [M+H]+ = 440,2; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil

100-5 C18 AB; 5-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de

CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 3,76 min.

Exemplo 405: 4-{7-amino-5-[(2-dimetilamino-etilamino)-metil]-3-[4-(4-metil-

piperazin-1-ila)-fenila]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenol

metil-piperazin-1-ila)-fenila]pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenol (78 mg, 0,136 mmol), 2-dimetilamino-etilamina (104 Dl, 0,95 mmol), N-etil-diisopropilamina (62 Dl, 0,36 mmol) em dimetilacetamida (1,3 ml) é aquecida por 15 minutos a 100°C (micro-ondas). A mistura é evaporada in vácuo e o resíduo purifica- da por HPLC preparativa (coluna de YMC-Pack Pro C18; 10-100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH dentro de 20 minu- tos, 20 ml/min de fluxo). As frações puras são combinadas, basificadas com K2CO3 sólido, concentradas in vácuo e a camada aquosa extraída duas ve- zes com CH2CI2. Os extratos orgânicos são secos sobre Na2SO4 e evapora- dos in vácuo para produzir o produto desejado como um sólido castanho. [M+H]+ = 501,3; tR (HPLC, coluna de CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB; 5- 100% de CH3CN + 0,1% de CF3C00H/H20 + 0,1% de CF3COOH por 8 min, 1,5 ml/min de fluxo): 2,91 min.

Exemplo 406: 6-(4-Amino-fenila)-3-(4-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina

Uma mistura de bromidrato de 4-{7-amino-5-bromometil-3-[4-(4- 500 mg de benzil éster de ácido 4-{4-[7-Amino-6-(4-nitro-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazina-1-carboxílico são hidrogenadas sob pressão normal à temperatura ambiente em N-metilpirrolidona na pre- sença de 400 mg de paládio sobre carvão vegetal. A mistura é filtrada e e- vaporada in vácuo. O produto é recebido por cromatografia instantânea da mistura bruta (40g de sílica-gel 60, sistema de solvente de diclorometa- no/metanol gradiente. Sólido ligeiramente amarelo, (M+H)+ = 386,4.

O material de partida de benzil éster de ácido 4-{4-[7-Amino-6- (4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazina-1-carboxilico pode ser preparado como a seguir:

65g de benzil éster de ácido 4-[4-(5-Amino-1H-pirazolo-4-ila)- fenila]-piperazina-1-carboxílico e 42,5g de (Z)-3-Dimetilamino-2-(4-nitro- fenila)-acrilonitrila são absorvidos em 344 ml de Etanol e 298 ml de ácido acético. A mistura é aquecida para refluxo por 5 horas e resfriada até a tem- peratura ambiente. A mistura é tratada com 30% de NaOH aquoso e Na2CO3 aquoso saturado a fim de neutralizar o meio e depois alcançar um pH ligei- ramente básico. A mistura é filtrada, lavada com água, éter, etilacetato dessa maneira removendo uma impureza azul. 100 mg do produto bruto são sepa- radas por cromatografia (12g de coluna de Redisept, cloreto de metileno- gradiente de etilacetato). Em adição ao produto desejado o etilcarbamato correspondente é formado (o qual pode ser separado por cromatografia ou clivado por hidrólise acídica na etapa seguinte). Produto desejado: (M+H)+ = 549,2. Etilcarbamato: (M+H)+ = 488.

Exemplo 407: isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-((S)-2-amino-3- metil-butirila)-piperazin-1-il]-fenila}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenila]- 44 mg de isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-((S)-2- benziloxicarbonilamino-3-metil-butirila)-piperazin-1-il]-fenila}^irazolo[1,5^ a]pirimidin-6-ila)-fenila]-carbâmico em tetra-hidrofurano são hidrogenadas sob pressão normal à temperatura ambiente na presença de 6 mg 10% de paládio sobre carvão vegetal. A mistura é filtrada e evacuada in vácuo. O resíduo congelada a partir de terc-butanol. (M+H)+ = 585,5

O material de partida pode ser preparado como a seguir: a) benzil éster de ácido 4-(4-Cianometil-fenila)-piperazina-1-carboxílico

10,2g de 4-Bromo-fenilacetonitrila são dissolvidos em 107 ml de dimetoxetano e tratados com 1-carbobenzilóxi-piperazina. Fosfato de potás- sio (22,7 g), (2-Bifenila)di-terc-butilfosfina (4,6 g) e acetato de Paládio (II) são adicionados. A mistura é aquecida para refluxo por 20 horas sob uma atmos- fera de Argônio. Depois de resfriar a mistura é filtrada e o marrom filtrado é evaporado in vácuo. O produto bruto é separado por cromatografia (400g de sílica-gel 60, eluente de ciclo-hexano/gradiente de etilacetato). As frações que contêm o produto são evaporadas in vácuo para dar um óleo castanho. (M+H)+ = 336.

b) benzil éster de ácido 4-[4-(1-Ciano-2-oxo-etila)-fenila]-piperazina-1- carboxílico

11,7g de benzil éster de ácido 4-(4-Cianometil-fenila)-piperazina- 1-carboxílico são dissolvidas em 73 ml de tolueno. 4,2 ml de etilformiato e 2,83g de NaOMe (pó) são adicionados e a mistura é agitada a 38°C por 4 horas. Depois da evaporação in vácuo, a mistura é tratada com metanol três vezes e evaporada para dar um sólido castanho. O produto bruto é usado na etapa seguinte sem purificação. (M+H)+ = 364.

c) benzil éster de ácido 4-[4-(5-Amino-1H-pirazolo-4-il)-fenila]-piperazina-1- carboxílico

Para uma suspensão de 14,8g de benzil éster de ácido 4-[4-(1- Ciano-2-oxo-etila)-fenila]-piperazina-1-carboxílico em 86 ml de tolueno são adicionados 7 ml de ácido acético e 4,1 ml de mono-hidrato de hidrazina. A mistura é aquecida para refluxo por 3 horas rendendo uma mistura de rea- ção castanho escuro. Depois de resfriar 50 ml de solução aquosa saturada de carbonato de sódio e 50 ml de água são adicionados. A mistura é resfria- da até 5°C, filtrada. O resíduo bege do sólido é lavado com água e seco a 50°C in vácuo. O material adicional é recebido depois da separação da fase de tolueno do filtrado bifásico, evaporação in vácuo e separação por croma- tografia instantânea (120g de sílica-gel, cloreto de metileno/metanol gradien- te) rendendo um sólido amarelo. (M+H)+ = 378.

d) benzil éster de ácido 4-{4-[7-Amino-6-(4-isobutoxicarbonilamino-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenila}-piperazina-1-carboxílico 2,51g de benzil éster de ácido 4-[4-(5-Amino-1H-pirazolo-4-ila)-

fenila]-piperazina-1-carboxílico e 1,91g de isobutil éster de ácido [4-((Z)-1- Ciano-2-dimetilamino-vinila)-fenila]-carbâmico são dissolvidos em 19 ml de ácido acético e 13,9 ml de uma solução a 1,25 M de HCI em etanol. A mistu- ra é agitada a 90°C por 4,5 horas. A mistura é despejada em 180 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de sódio e extraída 3 vezes com clo- reto de metileno. Depois de secar com sulfato de sódio a solução é evapora- da in vácuo para dar um sólido bege. O produto bruto é purificada por cro- matografia instantânea (120g de sílica-gel, eluente de ciclo-hexano/gradiente de etilacetato). (M+H)+ = 620. e) isobutil éster de ácido {4-[7-Amino-3-(4-piperazin-1-il-feni!a)-pirazo!o[1,5- a]pirimidin-6-il]-fenil}-carbâmico

2,7g de benzil éster de ácido 4-{4-[7-Amino-6-(4- isobutoxicarbonilamino-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1 - carboxílico são hidrogenados em metanol-tetra-hidrofurano (1:1) sob pres- são normal à temperatura ambiente na presença de 460 mg de Paládio so- bre carvão vegetal. A mistura é filtrada e evaporada in vácuo para dar o pro- duto bruto que é usado na etapa seguinte sem purificação. (M+H)+ = 486. f) isobutil éster de ácido [4-(7-Amino-3-{4-[4-((S)-2-benziloxicarbonilamino-3- metil-butirila)-piperazin-1-il]-fenil}-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-ila)-fenil]- carbâmico

Uma mistura de 41 mg de isobutil éster de ácido {4-[7-Amino-3- (4-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il]-fenil}-carbâmico, 27 mg de Cbz-L-valina, 15 mg de hidroxibezotriazol e 16 microlitros de trietilamina em 3 ml de tetra-hidrofurano são resfriados até 0°C e tratados com 20 mg de N-(Dimetilaminopropila)-N'-etil-carbodi-imida. Depois de agitar à temperatura ambiente durante a noite, a mistura é despejada em 20 ml de carbonato de sódio aquoso saturado e extraída com acetato de etila. A camada orgânica é seca, evaporada in vácuo e purificada por cromatografia instantânea (4g de sílica-gel, eluente de metilenocloreto/gradiente de metanol). (M+H)+ = 719,8, sólido amorfo. Derivados de orto-metila

Em analogia ao exemplo 1 os compostos de orto-metilado (R3 = Me) são feitos partindo de (Z)-3-Dimetilamino-2-(2-metil-4-nitro-fenila)- acrilonitrila que é preparada de acordo com o esquema a seguir:

K,CO.

125 °C

4N HCI in EtOH

Refluxo

T

Xileno, 120 °C

W02005054238 Exemplos:

NH-R1

em que R e Ri têm os significados como indicado na Tabela X& abaixo. Tabela Xe

Ex rosiçao na fenila R Ri M+H 408 3 Metila -COO-isobutila 514,4 409 3 Metila -COO-tolila 548,4 410 3 Metila -COO-4-Fluorofenila 552,3 411 4 Metila -COO-isobutila 514,5 412 4 Metila -COO-tolila 548,6 413 4 Metila -COO-4-Fluorofenila 552,4

Exemplo 414: isobutil éster de ácido (4-{7-Amino-3-[3-(4-metil-piperazin-1- ila)-fenil]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-3-metil-fenila)-carbâmico

80 mg de 6-(4-Amino-2-metil-íenila)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)- fenil]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina em 5 ml de N-metilpirrolidona são tra- tados com 50,6 microlitros de cloroisobutilformiato. Depois de agitar à tem- peratura ambiente por 1 hora, o etilacetato é adicionado e a mistura é extraí- da com carbonato de sódio aquoso. A fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio e evaporada in vácuo para dar um óleo amarelo. Purificação por cro- matografia (12g Redisep, eluente de diclorometano/gradiente de metanol) rende o produto desejado como um pulverizador branco. (M+H)+ = 514,4

O material de partida pode ser preparado como a seguir: a) (Z)-3-Dimetilamino-2-(2-metil-4-nitro-fenila)-acrilonitrila

4,2g de (2-Metil-4-nitro-fenila)-acetonitrila são dissolvidos em 30 ml xileno e tratados com 6,35 ml de Ν,Ν-dimetilformamida-dimetilacetal. A mistura é aquecida até 120°C por 3,5 horas, resfraida, diluída com hexano e filtrada. O material sólido é lavado com hexano e, depois de remover o sol- vente, purificada por cromatografia ( 120g RediSep, eluente de ciclo- hexano/diclorometano) para dar um pulverizador amarelo. (M+H)+ = 232,2 b) 6-(2-Metil-4-nitro-fenila)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina

1,4g de (Z)-3-Dimetilamino-2-(2-metil-4-nitro-fenila)-acrilonitrila e 1,56g de 4-[3-(4-Metil-piperazin-1-ila)-fenil]-2H-pirazolo-3-ilamina em 14 ml de 1,25M HCI em etanol e 14 ml de ácido acético são aquecidos até 130°C durante a noite. Depois de resfriar, o metanol é adicionado e a mistura é agi- tada por 20 minutos à temperatura ambiente, depois filtrada para dar um só- lido amarelo. O produto é usado a etapa sdeguinte sem purificação adicio- nal. (M+H)+ = 444,6

c) 6-(4-Amino-2-metil-fenila)-3-[3-(4-metil-piperazin-1 -ila)-fenil]-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina

1,87g de 6-(2-Metil-4-nitro-fenila)-3-[3-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-pirazo- lo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina em 200 ml de metanol/tetra-hidrofurano (1:1) é hidrogenado sob pressão normal a temperatura ambiente na presença de 400 mg a 10% de paládio em carvão vegetal. A mistura é filtrada, lavada com metanol e seca in vácuo. O pó amarelo é usado na etapa seguinte sem purificação. (M+H)+ = 414,6

Os exemplos com a porção de N-Metil-piperazina na posição 4 são preparados de uma maneira análoga usando 4-[4-(4-Metil-piperazin-1- ila)-fenil]-2H-pirazolo-3-ilamina, por este meio provendo os respectivos in- termediários de nitro e amino:

6-(4-Amino-2-metil-fenila)-3-[4-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina, (M+H)+ = 414,5 que é recebido de 6-(2-Metil-4-nitro- fenila)-3-[4-(4-metií-piperazin-1-ila)-fenil]-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina, (M+H)+ = 444,1

Exemplos com dois grupos de Metil-piperazina:

X7

NH-R1

M

Tabela X7

Ex

415

416

417

Ri

H

O

A-O

(M+H)+

498,5

608,5

610,7

O

Os exemplos 416 e 417 são preparados através da acilação do exemplo 415 em analogia ao exemplo 1.

O exemplo 415 pode ser preparado como a seguir: 6-(4-Amino-fenila)-3-[3,5-bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-pirazolo[1,5- a]pirimidin-7-ilamina

315 mg de 3-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-6-(4-nitro- fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina são dissolvidas em 50 ml de meta- nol/dimetilformamida (1:1). Depois da adição de 600 mg de Pd em carvão vegetal a mistura é hidrogenada à temperatura ambiente sob pressão normal durante a noite e depois o catalisador é removido por filtragem. O solvente é removido in vácuo rendendo o produto como um sólido castanho. (M+H)+ = 498,5

O material de partida 3-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-6- (4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilamina pode ser preparado como a seguir: a) (3,5-Dicloro-fenila)-acetonitrila

2,Og de 1,3-Dicloro-5-clorometil-benzeno em 51 ml de diclorome- tano-água (2:1) são tratados com 3,4g de cianeto de tetrabutilamônio e 1,9g de iodeto de sódio. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante a noite, as duas camadas são separadas, a camada orgânica é lavada com diclorometano, seca e evaporada in vácuo. O produto bruto é purificada por cromatografia instantânea (80g de coluna RediSept de sílica-gel, ciclo- hexano-acetato de etila gradiente) rendendo um óleo amarelo. 1H-NMR (DMSO-d6): 4,1 ppm (s, prótons benzilicos) e outros.

b) [3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-acetonitrila

1 ,Og de (3,5-Dicloro-fenila)-acetonitrila em 27 ml de dimetoxieta- no são tratados com 2,15g de N-metilpiperazina, 4,56g de fosfato de potás- sio, 0,96g de (2-Bifenila)di-terc-butilfosfina e 0,24g de acetato de paládio(ll). A mistura é agitada a 84°C por 18 horas. A mistura resfriada é filtrada e o filtrado marrom escuro é evaporado in vácuo. O produto bruto é purificada por cromatografia instantânea (80g de coluna RediSept de sílica-gel, diclo- rometano (metanol gradiente) resndendo um óleo marrom viscoso. (M+H)+ = 314,3

c) 2-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-3-oxo-propionitrila

1,65g de [3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-acetonitrila em 18

ml de tolueno são tratadas com 0,64g de etilformiato e 0,43g de metilato de sódio (pó). A mistura é agitada a 38°C por 3 horas e evaporada para seca- gem. O produto é usado na etapa seguinte sem purificação. (M+H)+ = 342,4

d) 4-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-2H-pirazolo-3-ilamina

1,96g de 2-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-3-oxo-propioni-

trila em 57 ml de tolueno é tratados com 1,88 ml de ácido acético e depois com 1,15g de mono-hidrato de hidrazina. A mistura é aquecida para refluxo por 3 horas rendendo uma solução amarela. Depois de resfriar o resíduo marron é tratado com 100 ml de solução de hidróxido de sódio a 1M e 100 ml de diclorometano. A fase aquosa é separada, re-extraída com diclorome- tano, os extratos orgânicos combinados são secos e evaporados in vácuo. A purificação da mistura bruta é feita por cromatografia instantânea (120g de coluna RediSept de sílica-gel, diclorometano/metanol gradiente contendo 1 % de amônia aquosa concentrada. O produto é recebido como um sólido a mor- to bege. (M+H)+ = 356,5

e) 3-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5-aJpi- rimidin-7-ilamina

0,5g de 4-[3,5-Bis-(4-metil-piperazin-1-ila)-fenil]-2H-pirazolo-3- ilamina, 0,34g de (Z)-3-Dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)-acrilonitrila em 2,81 rnl de ácido clorídrico 1,25M em etanol e 2,5 ml de ácido acético são aquecidos para refluxo por 20 horas. Depois de resfriar a mistura é tratada com exces- so de 1M de solução de hidróxido de sódio, extraída para diclorometsi- no/metanol (9:1), a camada orgânica é seca e evaporada in vácuo. O produ- to bruto é purificada por cromatografia instantânea (30g de sílica-gel, diclo- rometano/metanol gradiente contendo 1% de amônia aquosa concentrada) - (M+H)+ = 528,5 Exemplo 418:

Butil éster de ácido {4-[7-Amino-3-(3-piperazin-1-il-fenila>- pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il]-fenil}-carbâmico

a) benzil éster de ácido 4-(3-Cianometil-fenila)-piperazina-1-carboxílico

cf

ro

13,Og de 3-Bromo-fenilacetonitrila, 28,9g de 1-carbobenzilóxi-piperazina, 27,6g de fosfato de potássio, 5,8g de (2-Bifenila)di-terc-butilfosfina e 1,5g de acetato de paládio (II) são aquecidas para refluxo em 144 ml de dimetoxieta- no por 20 horas sob uma atmosfera de argônio. A mistura é resfraida até a temperatura ambiente, filtrada e o filtrado marrom escuro é evaporado in vá- cuo. O produto bruto é purificada por cromatografia instantânea (1000g de sílica-gel, ciclo-hexano/acetato de etila). (M+H)+ = 336,4

b) benzil éster de ácido 4-[3-(1-Ciano-2-oxo-etila)-fenil]-piperazina-1- carboxílico ο

800 mg de benzil éster de ácido 4-(3-Cianometil-fenila)-

piperazina-1-carboxílico em 8 ml de tolueno são tratadas com 288 mg de formiato de etila e 193 mg de metílato de sódio (pó). A mistura é agitada a 38°C por 3 horas. A suspensão marrom, espessa é diluída com tolueno a fim de permitir agitação continuada. Depois de uma hora adicional, a mistura é evaporada in vácuo. O produto bruto é usado na etapa seguinte sem purifi- cação. (M+H)+ = 364

c) benzil éster de ácido 4-[3-(5-Amino-1H-pirazolo-4-ila)-fenil]-piperazina-1- carboxílico

18,8g de benzil éster de ácido 4-[3-(1-Ciano-2-oxo-etila)-fenil]-piperazina-1- carboxílico são absorvidos em 83 ml de tolueno e 8,5 ml de ácido acético. Depois da adição de 5,18g de mono-hidrato de hidrazina, a mistura é aque- cida para refluxo por 3 horas. A solução de reação amarela é resfriada, tra- tada com carbonato de sódio aquoso saturado, água e acetato de etila. A camada orgânica é separada e lavada com bicarbonato de sódio aquoso, seca e evaporada in vácuo. O produto bruto é purificada por cromatografia instantânea (450g de sílica-gel, diclorometano/metanol 95:5) rendendo um sólido amorfo amarelo. (M+H)+ = 378,6

d) benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-nitro-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1 -carboxílico 1 ,Og de benzil éster de ácido 4-[3-(5-Amino-1H-pirazolo-4-ila)- fenil]-piperazina-1-carboxílico é dissolvido em 4,6 ml de ácido acético, depois tratado com 576 mg de (Z)-3-Dimetilamino-2-(4-nitro-fenila)-acrilonitrila e 5,3 ml de uma solução de 1,25M HCI em etanol. A mistura é aquecida para re- fluxo por 5,5 horas. A solução da reação é resfriada até a temperatura ambi- ente e despejada em 50 ml de carbonato de sódio aquoso saturado. Depois da extração com acetato de etila, a camada orgânica é seca, filtrada (o resí- duo lavado com acetato de etila) e evaporada in vácuo. O produto bruto é usado na etapa seguinte sem purificação. (M+H)+ = 551,0 e) benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-amino-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1-carboxilico

74,3g de benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-nitro-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1-carboxílico são suspensas em 800 ml de tetra-hidrofurano e tratada com 160,2g hidrato de cloreto de esta- nho (II). A mistura é aquecida para refluxo por 1 hora, resfriada, concentrada in vácuo, diluída com acetato de etila e tratada com de solução de hidróxido de sódio aquoso a 4N até um pH básico (cerca de 9) ser alcançado. A mistu- ra é vigorosamente agitada e tratada com acetato de etila. As duas fases são separadas, a fase orgânica é lavada com água, as fases orgânicas combinadas são secas com sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vá- cuo, dessa maneira rendendo uma espuma amarela. (M+H)+ = 520,4 f) benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-butoxicarbonilamino-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1-carboxílico

benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-amino-fenila)-pirazolo[1,5-a]piri- midin-3-il]-fenil}-piperazina-1-carboxílico (1,00 g, 1,93 mM) em N-metil- pirrolidinona (14 ml) é resfriado até 5°C e cloroformiato de butila (315 mg, 2,31 mM) é adicionado. A mistura de reação é agitada a 5°C por 22 horas.

Depois de aquecer até a temperatura ambiente, o acetato de etila e a solu- ção de NaHCO3 saturada são adicionados e as camadas são separadas. A fase aquosa é extraída diversas vezes com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas são secas sobre Na2SO4, e o solvente é removido in vácuo. O produto bruto é usado na etapa seguinte sem purificação adicional.

MH+= 621.

g) butil éster de ácido {4-[7-Amino-3-(3-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-6-il]-fenil}-carbâmico

H

Benzil éster de ácido 4-{3-[7-Amino-6-(4-butoxicarbonilamino-fenila)- pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il]-fenil}-piperazina-1-carboxílico (905 mg, 1,46 mM) é dissolvido em DMF (233 ml), paládio sobre carbono a 10% (255 mg, 10%) é adicionado e a mistura de reação hidrogenada à temperatura ambiente por 23 horas. A mistura de reação é filtrada sobre celite e o solvente é removido do filtrado in vácuo. O resíduo é purificada por cromatografia (acetato de eti- la/etanol/amônia = 90 : 9 : 1) para dar o produto desejado como cristais inco- lores, MH+ = 487.

Seguindo o procedimento do exemplo acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X9 podem ser preparados

em que R tem o significado como indicado na Tabela X9 abaixo. Tabela Xg

Exemplo R MH+ 419 isobutila 487 420 pentila 501 421 ciclo-hexila 513

Exemplo 422:

Butil éster de ácido (4-{7-Amino-3-[3-(4-etil-piperazin-1-ila)-fenil]- pirazolo[1,5-a]pirimidin-6-il}-fenila)-carbâmico

butil éster de ácido {4-[7-Amino-3-(3-piperazin-1-il-fenila)-pirazolo[1,5- a]pirimidin-6-il]-fenil}-carbâmico (100 mg, 0,21 mM) e brometo de etila (27 mg, 0,25 mM) são dissolvidos em DMF (2 ml) e 3 gotas de trietilamina são adicionadas. A mistura de reação é agitada a 30°C por 20 horas. 5 gotas de água são adicionadas e a mistura de reação purificada por HPLC preparativa (H2O/CH3CN com 0,1% de TFA, 9,5:0,5, 2,5 min; para H20/CH3CN com 0,1% de TFA, 3:7, durante 45 minutos) para dar o produto desejado como cristais bege, MH+ = 515.

Seguindo o procedimento do exemplo acima, mas usando os materiais de partida apropriados, os compostos da fórmula X10 podem ser preparados

em que R e R1 têm os significados como indicado na tabela X10 abaixo. Tabela Xm

Exemplo R Ri MH+ 423 3-(4-etil-piperazin-1-ila) pentila 529 424 3-[4-(3-piperidin-1-il-propila)-piperazin- 1-ila] pentila 626 425 3-(4-isopropil-piperazin-1-ila) pentila 543 426 3-[4-(2-pyrrolidin-1-il-propila)- piperazin-1-ila] butila 584 427 3-[4-(3-piperidin-1-il-propila)-piperazin- 1-ila] butila 612 428 3-[4-(2-pirrolidin-1-il-propila)-piperazin- 1-ila] pentila 594

Biologia/Farmacologia

Os compostos da fórmula I e seus sais farmaceuticamnte aceitá- veis exibem propriedades farmacológicas valiosas quando testados em en- saios in vitro, e são dessa maneira úteis como produtos farmacêuticos. Em particular, os compostos da invenção exibem Lck (Proteína Tirosina Cinase Específica de Linfócito) inibem a atividade, por exemplo co- mo demonstrado de acordo com os métodos de teste a seguir. 1. Ensaio de Lck Cinase Bioquímica Ensaios enzimáticos para as cinases Lck, c-Src e Hck da família

de Src são usados. Os ensaios de cinases homogêneas são baseados na tecnlogia de transferência de energia de ressonância de fluorescência de tempo transformado (TR-FRET), mais especificamente eles usam a tecnolo- gia de LANCE. Seus construtos das cinases de tipo selvagem marcadas são usados. Uma tirosina biotinilada contendo peptídeo que serve como substra- to. A fosforilação desse peptídeo pelas cinases é quantificada com um anti- corpo de antifosfotirosina europium-rotulada (Eu-PT66) como doador de e- nergia e um conjugado de estreptavidina-aloficocianina (SA-APC) como a- ceptor de energia. O ensaio é estabelecido como formato de 384 cavidades. Mais especificamente, os compostos a serem testados são dis-

solvidos em DMSO puro para dar uma concentração final de 10 mM. Para a geração de curvas de respostas dependentes de concentração os compos- tos são diluídos em 90% de DMSO/10% de H20 usando um PIateMate 2x2 (MATRIX) em placas de polipropileno de 384 cavidades de tal modo que a concentração mais alta é de 40 μΜ. Essas diluições são armazenadas a 4°C (lacradas) e podem ser usadas por até uma semana. A diluição de 1:5 final em tampão de diluição é preparada imediatamente antes do início do ensaio. Pelo menos 8 concentrações diferentes de composto de teste ampliando 3 para 4 unidades de Iog são usadas para determinação dos valores de IC50 . 5 pL dessas pré-diluições são transferidos para um Optiplate negro de 384 cavidades usado para o ensaio de cinase que é realizado em um volume total de 20 pL. Isso leva a uma concentração final de 4,5% de DMSO no en- saio. Os reagentes a seguir são seqüencialmente adicionados em cada ca- vidade de um Optiplate negro de 384 cavidades (PerkinEImer): 5 pL com- posto em tampão de diluição (18% de DMSO) são colocados em cavidades usando Platemate. Depois 2x210 pL 2 χ mistura de reação (como especifi- cado para Lck, c-Src e Hck1 respectivamente) usando um místurador Multi- drop384 na batedeira. Depois 5 pL ern tampão de diluição de enzima (80 ng/mL tanto para Lck1 c-Src ou Hck) usando um misturador de pipeta de mul- ticanais na batedeira. A incubação é a temperatura ambiente por 120 minu- tos antes da reação ser interrompida pela adição de 10 pL de tampão de parada usando um misturador 384 Multidrop na batedeira. O ensaio é de- senvolvido pela adição de 45 pL de mix de deteção usando um Multidrop 384 e incubado por pelo menos 60 minutos à temperatura ambiente no escu- ro. As placas são medidas usando um EnVision 2102 Multilabel Reader ou como "backup" um Wallac Victor2 1420 Multilabel Counter (excitação a 320 nm, emissão a 615 nm e 665 nm). Os principais dados gerados em um en- saio de TR-FRET são i) intensidades de fluorescência a 665 nm (APC) cor- respondendo ao sinal de FRET e ii) intensidades de fluorescência a 615 nm correspondendo ao sinal de Eu 3+. Se ocorrer extinção da flurescência de Eu3+, então uma diminuição do sinal de 615 nm (Eu 3+) e do sinal de 665 nm (APC) será observada. Se necessário, essa extinção pode ser corrigida pelo seguinte cálculo QCV (valor de extinção corrigido): QCV = RFU(665 nm)x1000/ [RFU(665 nm) + RFU(615 nm)]. Os dados são analisados usando os programas Excel ajuste 4,0® ou Graphpad Prism 3.03®.

Para todas as três cinases os valores de Km para ATP (trifosfato de adenosina) foram determinados: 4,6±2,2 μΜ para Lck1 2,3±0,9 μΜ para c- Src e 0,9±0,2 μΜ para Hck. A linearidade da reação sobre o tempo relevante e com respeito às concentrações de enzima relevantes é demonstrada. A concentração dos compostos de teste resultando em 50% de inibição da re- ação da cinase (valor de IC50) é determinada a partir da curva completa da resposta de concentração com pelo menos 8 concentrações de compostos diferentes. Nesse ensaio os compostos da fórmula I têm valores de IC50 va- riando de 0,01 nM a 1 μΜ. Os compostos dos Exemplos 10, 28, 65, 77, 126, 127 e 172 mostram valores de IC50 de 10, 16, 25, 25, 15, 18 e 34 nM, res- pectivamente no ensaio de Lck. 2. Ensaio de Lck Celular

O efeito dos compostos a serem testados na fosforilação depen- dente de Lck da proteína de sinalização de ZAP70 da célula T é assessado em células T de Jurkat E6-1. H2O2 é usado para estimular a fosforilação das proteínas de sinalização em células T de Jurkat. Para determinar o grau de dependência de Lck de estimulação de H2O2, o efeito de H2O2 sobre ZAP70 e fosforilação LAT é avaiado no Jurkat E6-1 e o mutante J.CAM1.6 que não expressa a cinase Lck funcional. As células J.CAM1.6 exibem fosforilação não-detectável de ZAP70 Y493 nem o substrato de ZAP70 LAT mediane ativação com 0,035% de H2O2 como assessado por "Western blotting". A estimulação de células T de Jurkat E6-1 com 0,035% de H2O2 resulta em fosforilação intracelular significativa de ZAP70 Y493 que é quantificada por citometria de fluxo usando anticorpo anti-ZAP70 pY493.

Mais especificamente, Jurkat E6-1 crescem em RPMI 1640 con- tendo 10% de FBS e 10 ml/l de NAA-, Pen/Strep e soluções de Hepes. Quando um número de células de ca 1 χ células de 106 /ml é alcançado (a contagem de células determinada por CASI), 200 ml de células são sedi- mentadas por centrifugação (1300 rpm, 5 min) e novamente suspensas em 200 ml RPMI 1640 contendo 0,2% de FBS e 0,035% de Hepes (37°C) e in- cubadas durante a noite (16 a 19 horas). As células são centrifugadas (1300 rpm, 5 min) e o pélete é novamente suspenso em RPMI 1640/0,2% de FBS (RT) para ajustar para 4 χ 106 células /ml (CASI count). 100 μΙ por cavidade dessa suspensão de células são adicionados para uma placa PP de cavida- de de 96 de profundidade. Os compostos são dissolvidos em DMSO ou re- cebidos em uma solução de DMSO de 10 mM. Pré-diluições em série em DMSO (1:4) são feitas em uma placa de microtitulação de polipropileno. 5 μΙ da solução do composto de DMSO como controle de solvente são adiciona- dos a 1000 μΙ RPMI 1640 contendo 10% de FBS e 10 mM de Hepes. 10% de FBS são escolhidos para reforçar a ligação da proteína potencial dos compostos experimentais. Uma alíquota de 25 μΙ da solução do compos- to/RPMI 1640 é adicionada para cada célula contendo cavidade. As células são incubadas com compostos a 37°C por 1 hora em uma incubadora umidi- ficada. Sete concentrações diferentes são usadas para determinar os valo- res de IC50. H2O2 (210 μΙ) de uma solução de estoque a 30% é adicionada para 30 ml de RPMI 1640 contendo 0,2% de FBS, e 10 mM de Hepes. Essa solução de ativação é feita sucintamente antes da ativação das células. 25 μΙ dessa solução são adicionados (0,035% (11,4 mM) da concentração final por cavidade para ativar as células de Jurkat. As placas são imediatamente vor- texadas e incubadas em banho de água a 37°C por 5 minutos. 10% em p/v de para-formaldeído quente (PF, 37°C, 37 μΙ/cavidade) é adicionado para interromper a ativação celular (2% de concentração de PF). As células são fixadas a 37°C por 10 minutos e centrifugadas (1800 rpm, 5 min). A sobre- nadante é removida por aspiração. As placas são resfriadas sobre gelo por 1 a 2 minutos depois do que as células são permeabilizadas usando 1 ml /cavidade de congelmento por gelo 90% de metanol (diluído com H2O dest.). As amotras são armazenadas a -20°C por 16 horas. No dia seguinte 500 μΙ PBS/2% de FBS é adicionado por cavidade. A placa é então centrifugada (1800 rpm, 5 min). As amostras são lavadas 2 χ com 1,5 ml de PBS/1% de FBS para re-hidratar as células. As células permeabilizadas são depois colo- ridas com 0,2 μΙ de anticorpo específico ZAP70 Y493 antifosfo tipo coelho em 50 μΙ PBS/2% de FBS por 40 min a temperatura ambiente seguido por uma etapa de lavagem com 1500 μΙ PBS/1% de FBS (1900 rpm, 5 min). O anticorpo anti-ZAP70 pY493 ligado é detectado usando 1 μΙ por amostra do anticorpo secundário anticoelho IgG FITC (BD) em 50 μΙ PBS/2% de FBS. As placas são incubadas por 30 a 35 minutos à temperatura ambiente se- guidos por uma etapa de lavagem com 1,6 ml de PBS 2% de FBS (1800 rpm, 5 min). As placas das células são novemente suspensas em 150 μΙ de PBS/1% de FBS e transferidas para um placa de cavidade 96 de 350 μΙ para análise citometrica de fluxo. As amostras são analisadas usando um FACS Calibur equipado com um dispositivo de autoamostra (HTS). Em geral, 10000 células Jurkat retidas são medidas por amostra. O sinais de dispersão de luz (FSC/SSC) como também a fluorescência de FITC são adquiridos.

A concentração de compostos de teste resultando em 50% de inibição da reação de cinase Lck intracelular (valor de IC5o) é determinada a partir de uma curva de resposta de concentração completa com pelo menos 7 concentrações de compostos diferentes cobrindo 3 a 4 unidades de log. Neste ensaio os compostos da invenção têm valores de IC50 variando de 0,1 nM a 1 μΜ. Os Compostos dos exemplos 11, 19 e 173 mostram valores de

IC5O de 8, 59 e 27 nM, respectivamente.

2. Reação de Linfócitos Misturados Aloaênicos ÍMLR)

Os compostos da invenção exibem atividade de inibição da célu- Ia T. Mais particular, os compostos da invenção impedem a ativação e/ou proliferação da célula T em por exemplo solução aquosa, por exemplo como demonstrado de acordo com o método de teste a seguir. O MLR de duas vias é realizado de acordo com os procedimentos padrão ( J. Immunol. Mé- todos, 1973, 2, 279 e Meo T. et al., Immunological Métodos, New York, Aca- demic Press, 1979, 227-39). Resumidamente, as células do baço de camun- dongos CBA e BALB/c (1,6 χ 105 células de cada cepa por cavidade em pla- cas de microtitulação de cultura de tecido de fundo chado, 3,2 χ 105 no total) são incubadas em meio RPMI contendo 10% de FCS, 100 U/ml de penicili- na, 100 pg/ml de etreptomicina (Gibco BRL1 Basel, Switzerland), 50 μΜ de 2- mercapto-etanol (Fluka, Buchs, Switzerland) e compostos diluídos serial- mente. Sete etapas de diluição de três pregas em duplicatas por composto de teste são realizadas. Depois de quatro dias de incubação, 1 pCi de 3H- timidina é adicionado. As células são colhidas depois de um período adicio- nal de incubação de cinco horas, e 3H-timidin incorporada é determinada de acordo com os procedimentos padrão. Os valores de base (controle baixo) do MLR são a proliferação de células sozinhas de BALB/c. Os controles bai- xos são subtraídos de todos os valores. Os controles altos sem qualquer amostra são tomados como 100% de proliferação. A inibição percentual por amostras é calculada, e as concentrações requeridas para 50% de inibição (valores de IC50) são determinadas. Nseste ensaio, os compostos da inven- ção têm valores de IC50 na faixa de 0,01 nM até 1 μΜ. O composto dos e- xemplos 30 e 44 mostram o valor de IC50 de 0,3 e 0,19 DM1 respectivamen- te.

3. Modelo In Vivo: Camundonqo SEB/IL-2 O composto a ser testado é administrado para camundongos

BALB/c seguido por exemplo 1 hora mais tarde, por uma administração in- travenosa de 3 pg por camundongo de SEB para induzir uma elevação no sangue de níveis de IL-2. Duas horas depois da administração de SEB1 os camundongos são sangrados e os níveis de IL-2 são medidos no soro usan- do métodos padrão. Sob condições de controle (veículo somente) as con- centrações de IL-2 medidas estão na maior parte da faixa de 2000 a 8000 pg/ml. Neste ensaio, Os compostos da fórmula I inibem a secreção de IL-2 quando administrados oralmente, por exemplo, em uma dose de 50 a 120 mg/kg; por exemplo, O composto do exemplo 10 inibe a secreção de IL-2 por 59% a por exemplo 100 mg/kg po.

Os compostos da fórmula I são dessa maneira úteis na preven- D ção ou tratamento de distúrbios ou doenças em que a Lck desempenha um papel, por exemplo doenças ou distúrbios mediados por células imunes, in- cluindo por exemplo linfócitos T, células NK, linfócitos B, por exemplo rejei- ção aguda ou crônica de órgão ou alo- ou xeno enxertos de tecidos, aterios- clerose, oclusão vascular devido à lesão vascular tal como angioplastia, res- tenose, fibrose (especialmente pulmonar, mas também outros tipos de fibro- se, tal como fibrose renal), angiogênese, hipertensão, insuficiência cardíaca, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença de CNS tal como mal de Al- zheimer ou esclerose lateral amiotrófica, câncer, doença infecciosa tal como AIDS, choque séptico ou síndorme de angústia respiratória de adulto, lesão por isquemia/reperfusão por exemplo infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, isquemia do intestino, insuficiência renal ou choque hermorrágico, ou choque traumático.

Os compostos da fórmula I são tmabém úteis no tratamento e/ou prevenção de doenças ou distúrbios inflamatórios agudos ou crônicos ou doenças autoimunes por exemplo sarcoidose, pulmão fibroide, penumonia intersticial idiopática, doença obstrutiva das vias aéreas, incluindo condições tais como asma, asma intrínseca, asma extrínseca, asma por poeira, particu- larmente asma crônica ou inveterada (por exemplo asma tardia e hipersen- sibilidade das vias aéreas), bronquite, incluindo asma brônquica, asma infan- til artrite, reumatoide, osteoartrite, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus de sín- drome nefrótico, tiroidite de Hashimoto, esclerose múltipla, miastenia grave, diabetes mellitus tipo I e complicações associadas a isso, diabetes mellitus tipo Il de adulto logo no início, uveíte, síndrome nefrótico, nefrose dependen- te de esteroide e resistente à esteroide, pústula palmoplantar, encefalomieli- te alérgica, glomerulonefrite, psoríase, artrite psoríatica, eczema atópico (dermatite atópica), dermatite alérgica por contato, dermatite por contato irri- tante e dermatites eczematosas adicionais dermatite seborreica, líquen pla- no, pênfigo, penfigóde bolhoso, epidermólise bolhosa, urticária, angioeder- mas, vasculites, eritemas, eosinofilias cutâneas, acne, alopecia areata, facili- te eosinofílico, aterosclerose, conjuntivite, querato-conjuntivite, queratite, conjuntivite vernal, uveíte associada à doença de Behcet, queratite herpéti- ca, córnea conical, síndrome de Sjoegren, distrofia epitelial da cornea, que- ratoleucoma, penfigus ocular, úlcera de Mooren, esclerite, oftalmopatia de Graves, inflamção intraocular grave, inflamação de mucosa ou dos vasos sangüíneos tais como doenças mediadas por B4 leucotrieno, úlceras gástri- cas, lesão vascular causada por doenças isquêmicas e trombose, doença intestinal isquêmica, doença intestinal inflamatória (por exemplo doença de Crohn ou colite ulcerativa), enterocolite necrotizante, doenças renais incluin- do nefrite intersticial, síndrome de Goodpasture, síndrome urêmico hemolíti- co e nefropatia diabética, doenças nervosas selecionadas de miosite múlti- pla, síndrome de Guillain-Barre, doença de Meniere e radicuIopatia, doença do colágeno incluindo escleroderma, granuloma de Wegener, síndrome de Sjogren, doenças do fígado autoimunes crônicas incluindo hepatite autoimu- ne, cirrose biliar primária e colangite esclerosante), ressecação parcial do fígado, necrose aguda do fígado (por exemplo, necrose causada por toxinas, hepatite viral, choque ou anoxia), cirrose, hepatite fulminante, psoriasis pus- tular, doença de Behcet, hepatite crônica ativa, síndrome de Evans, polino- se, hipoparatiroidismo idiopático, doença de Addison, gastrite atrófica autoi- mune, hepatite lupoide, nefrite tubulointersticial, nefrite, membranosa ou fe- bre reumática. Os compostos da fórmula I são úteis para tratar tumores, por exemplo onde cinases Src, em particular Lck, desempenham um papel na proliferaçãon/diferenciação de células tais como leucemia linfobástica T, câncer de mama, câncer genitourinário, câncer do pulmão, câncer gastroin- testinal, câncer epidermoide, melanoma, câncer ovariano, câncer do pân- creas, neuroblastoma, câncer da cabeça e/ou pescoço, câncer da bexiga, ou em um sentido mais amplo, câncer renal, cerebral ou gástrico; em particular (i) um tumor da mama; um tumor epidermoide, tal como um tumor epider- moide da cabeça e/ou pescoço ou um tumor da boca; um tumor do pulmão, por exemplo um tumor do pulmão de célula pequena ou célula não pequena; um tumor gastrointestinal, por exemplo, um tumor colorretal; ou um tumor genitourinário, por exemplo, um tumor da próstata (especialmente um tumor da próstata refratário a hormônio); ou (ii) uma doença proliferativa que é re- fratária ao tratamento com outros quimioterapêuticos; ou (iii) um tumor que é refratário ao tratamento com outros quimioterapêuticos devido à resistência a multifármacos. Eles ão também úteis para tratar tumores de sangue e sis- tema linfático (por exemplo, doença de Hodgkin, Iinfoma de não-Hodgkin, Iinfoma de Burkitt, Iinfomas relacionados a AIDS, doenças imunoproliferati- vas malignas, mieloma múltiplo e neoplasmas das células de plasma malíg- nos, leucemia linfoide, leucemia mieloide aguda ou crônica, leucemia linfocí- tica aguda ou crônica, leucemia monocítica, outras Ieucemias de tipo de cé- lula especificada, leucemia de tipo de célula não-especificada, outros neo- plasmas malignos não especificados de tecidos linfóide, hematopoiético e relacionados, por exemplo alinfoma de célula grande difusa, Iinfoma de célu- Ia T ou Iinfoma da célula T cutâneo). Câncer mieloide inclui por exemplo leu- cemia mieloide aguda ou crônica.

Onde um tumor, uma doença tumoral, um carcinoma ou um cân- cer são mencionados, também a metástase no órgão ou tecido original e/ou em qualquer outro local estão implícitos alternativamente ou em adição, qualquer que seja o local do tumor e/ou metástase.

Para os usos acima a dosagem requerida vai naturalmente vari- ar dependendo do modo de administração, a condição particular a ser trata- da e o efeito desejado. Em geral, os resultados satisfatórios são indicados para ser obtidos sistemicamente em dosagens diárias de cerca de 0,2 a 2,5 mg/kg por peso do corpo. Uma dosagem diária indicada para mamíferos maiores, por exemplo seres humanos, é na faixa de cerca de 2 mg a cerca de 2 g, convenientemente administradas, por exemplo, em doses divididas até quatro vezes por dia ou em forma retardada. Formas de dosagem unitá- ria apropriada para administração oral compreendem de cerca de 0,5 mg e 1g de ingrediente ativo.

Os compostos da invenção podem ser administrados por qual- quer via convencional, em particular parenteralmente, por exemplo na forma de soluções ou suspensões injetáveis, enteralmente, por exemplo oralmente, por exemplo na forma de comprimidos ou cápsulas, topicamente, por exem- plo na forma de loções, géis, unguentos ou cremes, ou em uma forma nasal ou de supositório. A administração tópica é por exemplo para a pele. Uma forma adicional de administração tópica é para o olho. As composições far- macêuticas que compreendem um composto da invenção, em associação ao pelo menos um veículo ou diluente farmacêutico aceitável, podem ser fabri- cadas de maneira convencional misturando com um veículo ou diluente far- maceuticamente aceitável. Os compostos da fórmula I podem ser administrados em forma

livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo como indicado acima. Tais sais podem ser preparados de maneira convencional e exibir a mesma ordem de atividade como os compostos livres.

De acordo com anterior, a presente invenção também provê:

(1) Um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuti-

camente aceitável, para uso como um produto farmacêutico;

(2) Um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuti- camente aceitável, para uso como um inibidor de Lck, por exemplo para uso em qualquer uma das indicações particulares anteriormente estabelecidas;

(3) Uma composição farmacêutica, por exemplo par uso em

qualquer uma das indicações anteriormente estabelecidas, compreendendo um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitá- vel, junto com um ou mais diluentes ou veículos do mesmo farmaceutica- mente aceitáveis.

(4) Um método para o tratamento de qualquer uma das indica-

ções particulares anteriormente estabelecidasem um sujeito com necessida- de do mesmo que compreende administrar para o sujeito uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável;

(5) O uso de um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição em que a ativação de Lck desempenha um papel ou está implicada; por exemplo como discutido acima.

Os compostos da fórmula I podem ser administrados como um ingrediente ativo único ou em conjunto com, por exemplo como um adjuvan- te para, outros fármacos por exemplo em regimes de imunossupressivos ou imunomoduladores ou outros agentes antinflamatórios, por exemplo para o tratamento ou prevenção de rejeição de alvo- ou xeno enxerto aguda ou crô- nica ou distúrbios inflamatórios ou autoimunes, um agente quimioterapêutico ou um agente antinfectivo, por exemplo, um agente antiviral tal como por exemplo uma gente antirretroviral ou um antibiótico. Por exemplo, os com- postos da fórmula I podem ser usados em combinação com um inibidor de calcineurina, por exemplo ciclosporina A, ISA 247 ou FK 506; um inibidor de mTOR, por exemplo rapamicina, 40-0-(2-hidroxietila)-rapamicina, CCI779, ABT578, biolimus-7, biolimus-9, TAFA-93, AP23573, AP23464, ou AP23841; uma ascomicina tendo propriedades imunossupressivas, por exemplo ABT- 281, ASM981, etc.; corticosteroides; inibidores de catepsina S; ciclofosfami- da; azatioprina; metotrexato; leflunomida; mizoribina; ácido micofenólico; mofetil micofenolato; 15-deoxispergualina ou um imunossupressor homólo- go, análogo ou derivado do mesmo; um inibidor de PKC, por exemplo como descrito em WO 02/38561 ou WO 03/82859, por exemplo o composto dos exemplos 56 ou 70; um inibidor de cinase JAK3, por exemplo N-benzil-3,4- di-hidróxi-benzilideno-cianoacetamida □-ciano-(3,4-di-hidróxi)-]N-

benzilcinamamida (Tyrphostin AG 490), prodigiosina 25-C (PNU156804), [4- (4'-hidroxifenila)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P131), [4-(3'-bromo-4'- hidróxi-fenila)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P154), [4-(3',5'-dibromo- 4'-hidroxilfenila)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] WHI-P97, KRX-211, 3- {(3R,4R)-4-metil-3-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-ila)-amino]-piperidin-1- il}-3-oxo-propionitrila, em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo monocitrate (também chamado CP-690,550), ou um composto como descrito em WO 04/052359 ou WO 05/066156; um agonista receptor ou modulador de S1P, por exemplo FTY720 opcionalmente fosfori- lado ou um análogo do mesmo, por exemplo 2-amino-2-[4-(3- benziloxifeniltio)-2-clorofenil]etil-1,3-propanediol opcionalmente fosforilado ou ácido 1 -{4-[1-(4-ciclo-hexil-3-trifluorometil-benzilóxi-imino)-etil]-2-etil-benzil}- azetidina-3-carboxílico ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis; anticor- pos monoclonais para receptores de leucócitos, por exemplo, MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD11a/CD18, CD25, CD27, CD28, CD40. CD45, CD58, CD80, CD86, CD137, ICOS, CD150 (SLAM)1 0X40, 4-1BB ou para seus ligantes, por exemplo CD154, ou antagonistas dos mesmos; outros compostos imunomodulatórios, por exemplo uma molécula de ligação re- combinante tendo pelo menos uma porção do domínio extracelular de Ο- Ι 5 TLA4 ou um mutante da mesma, por exemplo pelo menos uma porção ex- tracelular de CTLA4 ou um mutante da mesma ligada a uma seqüência de proteína não CTLA4, por exemplo CTLA4lg (por exemplo designada ATCC 68629) ou um mutante da mesma, por exemplo LEA29Y; inibidores de molé- cula de adesão, por exemplo antagonistas de LFA-1, antagonistas de ICAM- 1 ou -3, antagonistas de VCAM-4, ou antagonistes de VLA-4, por exemplo natalizumab (ANTEGREN®); ou anticorpos de antiquimiocina ou anticorpos de receptor de antiquimiocina ou antagonistas de receptor de quimiocina de peso molecular baixo, por exemplo anticorpos de anti MCP-1.

Um composto da fórmula I pode também ser usado em combi- nação com outros agentes antiproliferativos. Tais agentes antiproliferativos incluem, mas não estão limitados a:

(i) inibidores de aromatase, por exemplo esteroides, especial- mente exemestano e formestano e, em particular, não-esteroides, especial- mente aminoglutetimida, vorozol, fadrozol, anastrozol e, muito especialmen-

te, letrozol;

(ii) antiestrógenos, por exemplo cloridrato de tamoxifeno, fulves- tranto, raloxifeno e raloxifeno; (iii) inibidores de topoisomerase I, por exemplo topotecan, irino- tecan, 9-nitrocamptotecina e o conjugado de camptotecina macromolecular PNU-166148 (composto A1 em W099/17804);

(iv) inibidores de topoisomerase II, por exemplo as antraciclinas doxorubicinas (incluindo formulação lipossomal, por exemplo CAELYX®),

epirubicina, idarubicina e nemorubicina, e antraquinonas mitoxantrona e Io- soxantrona, e as podofilotoxinas etoposide e teniposide;

(v) agentes ativos de microtúbulo, por exemplo os taxanos pacli- taxel e docetaxel, os vinca alcalóides, por exemplo, vinblastina, especial-

) mente sulfato de vinblastina, vincristina especialmente sulfato de vincristina, e vinorelbina, discodermolida e epotilonas, tais como epotilona BeD;

(vi) agentes alquilantes, por exemplo ciclofosfamida, ifosfamida e

melfalan;

(vii) inibidores de desacetilase de histona;

(viii) inibidores de farnesil transferase;

(ix) inibidores de COX-2, por exemplo celecoxib (Celebrex®), rofecoxib (Vioxx®) e Iumiracoxib (COX189);

(x) inibidores de MMP;

(xi) inibidores de mTOR;

(xii) antimetabólitos antineoplásticos, por exemplo 5-fluororacila, tegafur, capecitabina, cladribina, citarabina, fosfato de fludarabina, fluororidi- na, gencitabina, 6-mercaptopurina, hidroxiureia, metotrexato, edatrexato e sais de tais compostos, e além desses ZD 1694 (RALTITREXED®), LY231514 (ALIMTA®), LY264618 (LOMOTREXOL®) e OGT719;

(xiii) compostos de platina, por exemplo, carboplatina, cis-platina e oxaliplatina,

(xiv) compostos de diminuição da atividade de proteína cinase e ainda os compostos antiangiogênicos, por exemplo (i) compostos que dimi- nuem a atividade do Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF) (b) o Fator de Crescimento Epidérmico (EGF), c-Src, proteína cinase C, Fator de Crescimento derivado de Plaqueta (PDGF), Bcr-Abl tirosina cinase, c-kit, Flt- 3 e Fator de Crescimento Receptor do tipo Insulina I (IGF-IR) e cinases de- pendentes de Ciclina (CDKs); (ii) Imatinib, midostaurin, Iressa® (ZD1839), CGP 75166, vatalanib, ZD6474, GW2016, CHIR-200131, CEP-7055/CEP- 5214, CP-547632 e KRN-633; (iii) talidomida (THALOMID), celecoxib (Cele- brex), SU5416 e ZD6126;

(xv) agonistas de gonadorelina, por exemplo abarelix, goserelina

e acetato de goserelina;

(xvi) antiandrógenos, por exemplo bicalutamida (CASODEX®);

(xvii) bengamidas;

(xviii) bisfosfonatos, por exemplo, ácido etridônico, ácido clodrô-

D nico, ácido tiludrônico, ácido pamidrônico, ácido alendrônico, ácido ibandrô-

nico, ácido risedrônico e ácido zoledrônico;

(xix) anticorpos antiproliferativos, por exemplo trastuzumab (Her- ceptin®), Trastuzumab-DMI, erlotinib (Tarceva®), bevacizumab (Avastin®), rituximab (Rituxan®), PR064553 (anti-CD40) e 2C4 Anticorpo;

> (xx) temozolomida (TEMODAL®).

A estrutura dos agentes ativos identificados pelos códigos n°s., nomes genéricos ou comerciais podem ser tirados da edição atual do com- pêndio padrão "The Merck Index" ou de bancos de dados, por exemplo Pa- tentes Internacionais (por exemplo IMS World Publications).

De acordo com o anterior, a presente invenção provê em ainda um aspecto adicional:

(6) Um método como definido acima compreendendo coadminis- tração, por exemplo concomitantemente ou em seqüência, de uma quanti- dade terapeuticamente efica de a) um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, e b) uma segunda substância de fár- maco, a dita segunda substância de fármaco sendo por exemplo para uso em qualquer uma das indicações particulares anteriormente estabelecidas.

(7) Uma combinação compreendendo uma quantidade terapeuti- camente eficaz de um inibidor de Lck1 por exemplo um composto da fórmula I ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, e uma segunda subs- tância de fármaco, a dita substância sendo por exemplo como descrito aci- ma. Onde um inibidor de Lck1 por exemplo um composto da fórmula I, é administrado em conjunto com outros imunossupressivos/imuno- modulatórios, agente antinflamatório ou antineoplástico, por exemplo como descrito acima, as dosagens do fármaco ou agente, coadministrado natural- mente, vai variar dependendo do tipo de cofármaco ou co-agente emprega- do, ou o fármaco específico ou agente usado, ou a condição que está sendo tratada e assim por diante.

Claims

1. Composto da fórmula I <formula>formula see original document page 87</formula> em que cada um de Ri e R2, independentemente, é Η; OH; NH2; NO2; C1^alquila; C1. 4alcóxi; aril-C^alcóxi; NR11SO2R12; NR13COR14; NR15COOR16; ou NR17CONR18R19; desde que pelo menos um de R1 e R2Seja diferente de H; R3 é H; halogênio; C1^alquila; ou C1^alcoxi; R4 é H; C1^alquila opcionalmente substituída; ou C1^alccixi opcionalmente substituído por NH2, NH(C1^aIquiIa) ou N(C1^aIquiIa)2; cada um de R5a, R5b e R6, independentemente, é H; OH; ORc em que Rc é C1-4 alquila; ou um resíduo da fórmula(a) <formula>formula see original document page 87</formula> providos de modo que pelo menos um de R5a, R5b e R6 seja diferente de H; R11 é H; ou C1^alquila opcionalmente substituída; R12, é C1-Salquila; C3.8cicloalquila; arila ou aril-C^alquila opcionalmente substituída; heterociclila; heteroarila ou heteroaril-Ci^alquila opcionalmente substituída; R13 é H; ou C1^alquila opcionalmente substituída; R14 é C1-Salquila opcionalmente substituída; C3.8cicloalquila opcionalmente substituída; arila ou aril-C^alquila opcionalmente substituída; ou heteroarila ou heteroaril-C^alquila opcionalmente substituída; R15 é H; ou C1^alquila; R16 é C1-Salquila opcionalmente substituída; C3.6alquenila; C3-6alquinila; C3. 8cicloalquila opcionalmente substituída; arila ou aril-C^alquila opcionalmen- te substituída; ou heteroaril-CM alquila opcionalmente substituída; cada um de R17 e R18, independentemente, é H; ou C1^alquila; Ri9 é Ci.8alquila opcionalmente substituída por halogênio ou ciano; C3. ecicloalquila; arila ou aril-C^alquila, cada um opcionalmente substituído por anel de halogênio, halo-C^alquila, halo-CMalcóxi e/ou heterociclila; ou he- teroarila ou heterociclila opcionalmente substituído; ou R18 e R19 formam junto com o átomo de nitrogênio, ao qual eles estão ligados, um resíduo de heterociclila opcionalmente substituída; η é O ou 1; X é CR 20R21 em que cada um de R2O e R21, independentemente, é H ou C1.4alquila; O; ou N-R22 em que R22 é H; C1^alquila opcionalmente substituída; aril-C^alquila opcio- nalmente substituída; heteroaril-C^alquila opcionalmente substituída; hete- rociclila opcionalmente substituída; SO2-C1^aIquiIa opcionalmente substituí- da; CO-R23- em que R23 é C1^alquila opcionalmente substituída por halogê- nio, heterociclila, heteroarila, amino e/ou COOH, ou R23 é arila, heteroarila ou heterociclila opcionalmente substituídas; ou CO-CHR24-NR25R26 em que R24 é H, C1-Salquila opcionalmente substituída por OH1 NH2, NH(C1^aIquiIa)l N(C1^aIquiIa)2, COOH, carbamoíla, CONH(C1^aIquiIa)l CON(C1^aIquiIa)2 ou arila ou heteroarila opcionalmente substituídas, R25 é H ou Ci^alquila, e R26 é H, Ci^alquila1 C^alcóxi-carbonila ou aril-C^alcoxicarbonila em que arila pode ser opcionalmente substituída, provido de modo que i. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo da fórmula (a) em que X é NCH3 e η é O1 então ou R2 é diferente de NH-SO2-CH3 ou NH-S02-4- fluoro-fenila ou Ri é diteiente de NH-S02-2,3-dicloro-fenila ou R3 ou R4 é diferente de H; ii. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NCH3 e η é O, então ou R2 é diferente de NH-CO-CH3 ou R3 ou R4 é dife- rente de H; iii. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é O, então ou R2 é diferente de NH-COOC1^aIquiIa ou R3 ou R4 é diferente de H; iv. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é O, então ou Ri é diferente de-NH-CO-NH-(3-CF3-4- morfolino-fenila) ou R2 é diferente de NH-CO-NH-(3-CF3-fenila) ou R3 ou R4 é diferente de H; v. quando um de R1 e R2 é OH1 o outro é H, R4 é H e somente um de R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) e o restante sendo cada um H, depois o resíduo de fórmula (a) é diferente de 4-metil-piperazinila; vi. quando um de R1 e R2 é OH1 o outro é H e somente um de R5a, R5b ou R6 é uma 4-metil-piperazinila, o restante sendo cada um H1 de- pois R4 é C1^alquila opcionalmente substituída; e vii. quando ou R5a, R5b ou R6 é um resíduo de fórmula (a) em que X é NH ou NCH3 e η é O, e R1 é H, então R2 é diferente de NH2 ou R3 ou R4 é diferente de H; ou um sal do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que cada um de R5a, R5b e R6, independentemente, é H; OH; ou um resíduo de fórmula (a), desde que pelo menos um de R5a, R5b e R6Seja diferente de H1 em que o dito resíduo de fórmula (a) é como definido na reivindicação 1.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que cada um de R5a, R5b e R6, independentemente, é H; ou um resíduo da fórmula (a), em que o dito resíduo da fórmula (a) é definido na reivindicação 1, desde que pelo menos um de R5a, R5b e R6Seja diferente de H.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é NR11SO2R12; NR13COR14; NR15COOR16; ou NR17CONR18R19 em que as va- riáveis R11 a Ri9 são como definido na reivindicação 1.

5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é NR11SO2R12; NR13COR14; NR15COOR16; ou NR17CONR18R19 em que as va- riáveis R11 a R19 têm os significados providos na reivindicação 1, e em que cada um de R5a, R5b e R6, independentemente, é H; ou um resíduo da fórmu- la (a), em que o dito resíduo da fórmula (a) é como definido na reivindicação 1, desde que pelo menos um de R5a, R5b e R6 seja diferente de H.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que R2 é H1 OH1 C1^alquila, ou Ci^alcóxi; e mais preferivelmente H, OH ou Ci_4alcóxi.

7. Processo para a produção do composto da fórmula I como definido na reivindicação 1, compreendendo a) reação de um composto da fórmula Il <formula>formula see original document page 90</formula> em que R5a, Rõb e R6 são como definidos acima, com o composto da fórmula Ill <formula>formula see original document page 90</formula> Ill em que Ri a R4 são como definidos acima e Rv é OH ou amino substituído; ou b) conversão do composto da fórmula I em outro composto da fórmula I e recuperar o composto da fórmula I resultante em uma forma livre ou de um sal, e, onde necessário, converter o composto da fórmula I obtido em forma livre na forma de sal desejada, ou vice versa.

8. Composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como produto far- macêutico.

9. Composição farmacêutica compreendendo composto da fór- mula I como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente acei- tável do mesmo, junto com um ou mais diluentes farmaceuticamente aceitá- veis ou veículos do mesmo.

10. Composto de fórmula I de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condi- ção em que a ativação de Lck desempenha um papel ou está implicada.

11. Combinação compreendendo uma quantidade terapeutica- mente eficaz do composto da fórmula I como definido na reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma segunda substância do fármaco.

12. Composto da fórmula I, sua preparação, seu uso como um produto farmacêutico e composições farmacêuticas que o contêm, substan- cialmente como definido ou descrito anteriormente aqui.