BRPI9703099B1 - derivado de carboidrato, e, composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

patente de invenção "derivado de carboidrato, composição farmacêutica, e, uso do derivado". a invenção refere-se a derivados de carboidratos a fórmula i (i) em que r^ 1^ é h ou ch~ 2~oso~ 3~^ -^ são independentemente h, alquila (1-6c) ou so~ 3~^ -^; r^ 4^ é oso~ 3~^ -^ ou nhso~ 3~^ -^; n é 0 ou 1; p é 1 ou 2; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. os compostos da invenção tem atividade antitrombótica e podem ser usados para inibir a proliferação de céulas músculo liso.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção "DERIVADO DE CARBOIDRATO, E, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA". A invenção refere-se a ura derivado de carboidrato tendo atividade antritrombótica, uma composição farmacêutica contendo o mesmo, assim como o uso de referido derivado de carboidrato para a fabricação de um medicamento.

Os derivados de carboidrato tendo atividade antritrombótica são conhecidos, por exemplo os derivados de glicosaminoglicano descritos em EP 84 999. Outros derivados de carboidrato relacionados com glicosaminoglicano são descritos em EP 529 715, tendo melhoradas propriedades farmacológicas. Estes derivados de carboidrato são isentos de grupos funcionais característicos de glicosaminoglicanos, sendo isentos de grupos hidroxila, grupos N-sulfato e N-acetila.

Verificou-se agora que os derivados de carboidrato desta invenção tendo a fórmula I em que R1 é H ou CH20S03, R3 e R3 são independentemente H, alquila (1-6C) ou SOp, R4 é 0S03, ou NHSOp, n é 0 ou 1, p e 1 ou 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, tem uma atividade anti-Xa que é substancialmente maior do que a de sacarídeos não tendo o grupo como glicerol ou como glicol na posição 4 da terminação não redutora. O fator Xa desempenha um papel importante na cascata de coagulação de sangue. Ele catalisa a formação de trombina que regula a última etapa na cascata de coagulação. A função inicial de trombina é a divagem de fibrinogene para gerar monômeros de fibrina, que forma um gel insolúvel, um coágulo de fibrina, por reticulação.

Os compostos da presente invenção são utilizável para o tratamento e prevenção de doenças mediadas com trombina ou associadas com trombina. Isto inclui vários estados trombóticos e protrombõticos em que a cascata de coagulação é ativada que inclui, mas não são limitados a trombose de veia profunda, embolismo pulmonar, tromboflebite, oclusão arterial de trombose ou embolismo, reoclusão arterial durante ou após angioplastia ou trombólise, restenose após dano arterial ou procedimentos cardiológicos invasivos, trombose venosa pós-operatória ou embolismo, aterosclerose aguda ou crônica, infarto do miocãrdio, câncer e metãstase, e doenças neuro-degenerativas. Os derivados de carboidratos da invenção também podem ser usados como inibidores de proliferação de célula do músculo liso e para o tratamento de angiogenese, câncer e infecções de retrovlrus, como HIV.

Além disso, os compostos da invenção podem ser usados como anticoagulantes e revestimentos anticoagulantes, em circuitos de sangue extracorpóreos, como necessário em diálise e cirurgia.

Os compostos da invenção também podem ser usados como anticoagulantes in vitro ou ex vivo.

Os derivados de carboidratos de acordo com a invenção tem a fórmula I, em que R2 é alquila (1-6C), R3 é SÜ3~ , R4 é OSO3- e R1, n e p são como previaraente descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

Os derivados de carboidratos mais preferidos tem fórmula I, em que R2 é metila. Os derivados de carboidrato particularmente preferidos tem a fórmula I, em que n é 1 e p é 1 . Mais preferidos são os derivados de carboidratos de fórmula I, em que R1 é CH2OSO3” . O termo alquila (1-6) significa um grupo alquila não ramificado e ramificado tendo 1 a 6 átomos de carbono, como metila, etila, isopropila, t-butila, isopentila, hexila, e outros. Os grupos alquila preferidos são grupos alquila (1-4C), como metila, etila, (iso) propila, n-butila e t-butila. 0 grupo alquila mais preferido é metila.

Os contra-ions que compensam as porções carregadas são contra-ions farmaceuticamente aceitáveis, como hidrogênio, ou mais preferivelmente ions de metal alcalino ou alcalino terroso, como sódio, cálcio ou magnésio.

Os derivados de carboidrato de acordo com esta invenção podem ser preparados por copulação de uma porção semelhante a glicerol protegida ou semelhanze a glicol para o grupo 4-hidroxi, de terminação não redutora de um outro tetrassacarideo protegido, que pode ser produzido de acordo com o processo descrito por Westerduin P., Bioorg. e Med.

Chem., .2, 1267-1280, 1994. A seguir os grupos de proteção são removidos, seguido por sulfatação do composto, resultando em um derivado de carboidrato de fórmula I.

Para o tratamento de trombose venosa ou para a inibição de proliferação de células de músculo liso, os compostos da invenção podem ser administrados enteralmente ou parenteralmente, e para humanos preferivelmente em uma dosagem diária de 0,001-10 mg por peso do corpo. Misturados com auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo como descrito na referência padrão, Gennaro et al. , Remington's Pharmaceutical Sciences, (18th ed., Mack Publishing Company, 1990, ver especialmente Parte 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture), os compostos, quando ativos oralmente, bucalmente ou sublingualmente, podem ser comprimidos em unidades de dosagem sólida, como pílulas, comprimidos, ou serem processados em cápsulas ou supositórios. Por meio de líquidos farmaceuticamente apropriados, os compostos podem ser aplicados como uma preparação de injeção, na forma de uma solução, suspensão, emulsão ou como uma pulverização, por exemplo pulverização nasal.

Para fazer unidades de dosagem, por exemplo comprimidos, o uso de aditivos convencionais, como cargas, colorantes, aglutinantes poliméricos e outros é contemplado. Em geral, qualquer aditivo farmaceuticamente aceitável que não interfere com a função de compostos ativos pode ser usado.

Os veículos apropriados com os quais as composições podem ser administradas incluem lactose, amido, derivados de celulose e outros, e misturas dos mesmos, usados em quantidades apropriadas. A invenção é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos. (Nos exemplos, faz-se referência aos fluxogramas 1 e 2. Os intermediários e produtos finais são indicados por referência ao número correspondente nos fluxogramas). EXEMPLO 1 Preparação de composto 7 e 8 Preparação de 2 A uma solução resfriada (0°C), solução d 2-benziloxietanol 1 (2,84 ml} e sulfeto de clorometil metila (1,59 ml) em éter dimetílico de etileno glicol (25 ml) foi adicionado hidreto de sódio, 60% de dispersão em óleo mineral, (1,2 g) sob atmosfera de nitrogênio, e a mistura agitada durante 20 h em temperatura ambiente. Metanol foi adicionado à mistura de reação e agitação continuada durante 15 min. A mistura foi diluída com acetato de etila (100 ml), subsequentemente lavada com carbonato de hidrogênio de sódio e água e a camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel para dar 2,5 g de 2.

Preparação de 3 A síntese de 3 foi descrita em Bioorganic e Medicinal Chemistry, vol 2, no. 11, pp 1267-1280, 1994 (P.

Westerduin et al.).

Preparação de 4 Uma mistura de 3 (125 mg) , 2 (64 mg) e peneiras moléculas em pó (4A) em diclorometano (1,5 ml) foi agitada sob urna atmosfera de nitrogênio durante 15 min. A solução foi resfriada (5°C) e uma solução recentemente preparada contendo N-iodosuccinimida (68 mg) e ácido trifluorometano sulfônico (2,7 μΐ) em 1,5 ml de 1,2-dicloroetano-dioxano (1/1, v/v) foi introduzido. Após 10 min, a mistura de reação vermelha foi filtrada, diluída com diclorometano, lavada sucessivamente com tiossulfato de sódio aquoso e carbonato de hidrogênio de sódio aquoso. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de exclusão de tamanho em um Sephadex LH-20, colocado em suspensão em diclorometano ~ metanol {2/1, v/v) para dar 108 mg de 4. Preparação de 5 A uma solução resfriada (-5°C) de 4 {105 mg) em tetraidrofurano {7,3 ml} de uma solução aquosa a 30 % de peróxido de hidrogênio (3, 8 ml) foi adicionado e após 10 min de agitação uma solução de hidróxido de lítio (1,25 m, 1,7 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 2 h a -5°C, após o que a temperatura foi elevada a 0°C. Após 20 h de agitação, a temperatura foi elevada a 20°C e agitação continuou durante 24 h. A mistura de reação foi resfriada (0°C } , subsequentemente metanol (7,0 ml) e hidróxido de sódio aquoso (4M, 2,0 ml) foi adicionado. Após agitar 1 h, a temperatura foi elevada novamente a 20°C e a agitação continuou durante mais 20 h. A mistura foi resfriada (0°C) , acidulado a pH 3 com ácido clorídrico (2 N) e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com sulfito de sódio aquosa (5%) secada sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel para dar 80 mg de 5.

Preparação de 6 A uma solução de 6 (80 mg) em uma mistura de água (7 ml) e 2-metil-2-propanol (7 ml) 80 mg de paládio em carvão (10%} foi adicionado. A mistura de reação foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio durante 16 h. O catalisador foi removido por filtragem e enxaguado com misturas de 2-metil-2- propanol/ãgua. O filtrado e lavagens foram concentrados em vácuo e liofilizados para dar 38 mg de 6. Preparação de 7 e 8 Uma solução de 6 (3 8 mg) em agua (0,8 ml) foi eluida com água sobre uma coluna Dowex 50WX8H+ e as frações reunidas foram evaporadas até secura. Após evaporação com N,N-dimetilformamida o resíduo foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (2,5 ml), colocada sob uma atmosfera de nitrogênio e complexo de trióxido de enxofre trietilamina (287 mg) foi adicionado. A mistura foi agitada durante a noite a 50°C , resfriada a Q°C, e uma solução aquosa de carbonato de hidrogênio de sódio (533 mg) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 1 h a 20°C, concentrada a um volume pequeno e dessolubilizada em uma coluna Sephadex G-25 suspensa em água: acetonitrila 9:1 (v/v) . 0 produto bruto foi eluído em uma coluna Dowex BOWXSNa*· e purificado por cromatografia de coluna de troca aniônica (HPLC, Mono-Q 5/5, gradiente de cloreto de sódio), para dar 12 mg de 7. { [cc] 20D = + 31,1 (c = 1; água)} e 18 mg de 8 { [a] 2DD = 3 4,8 (c = 0,93; água)}. EXEMPLO 2 Preparação de composto 16 Preparação de 10 Uma solução de cloreto de benzoila (26,3 ml) em dioxano seco (26 ml) foi adicionada em gotas durante lha uma mistura resfriada (-20°C) de glicerol (10 g) e piridian (109 ml). A mistura resultante foi agitada durante 16 h a 0°C após o que água foi adicionada. Após 15 min de agitação, a mistura foi concentrada em um quinto de seu volume, diluída com diclororaetano e lavada com água, carbonato de hidrogênio de sódio aquoso e água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. O óleo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel para dar 21 g de 10.

Preparação de 11 Sulfeto de metila (1,45 ml) foi adicionado a uma solução de 10 (600 mg) em acetonitrila: diclorometano (1:1, v/v, 8 ml). A mistura de reação foi resfriada a 0°C e uma mistura de peróxido de benzoila seco (3,63 g) em acetonitrila: diclorometano (1:1, v/v, 10 ml) foi adicionado em gotas. Após agitar durante 15 h a 20°C, a mistura foi diluída com diclorometano e lavada com carbonato de hidrogênio de sódio aquoso e água. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. Após purificação por cromatografia em sílica gel, 400 mg de 11 foram isolados. Preparação de 12 Composto 12 foi preparado de modo análogo aos procedimentos descritos por P. Westerduin et al. Bioorganic and Medicinal Chemistry, vol 2, no. 11, pp. 1267-1280.

Durante as etapas de reação para dar 12, os ácidos urônicos foram protegidos por grupos benzila em vez de grupos metila.

Preparação de 13 O composto 13 foi preparado de modo similar ao para composto 4 por copulação do composto 11 ao composto 12 .

Preparação de 14 Uma suspensão de hidrogênio carbonato de sódio (142 mg) em água (2 ml) e Pd/C (400 mg) foi adicionada a uma solução de 13 (480 mg) em 2-metil-2-propanol (60 ml) . A mistura foi colocada em uma atmosfera de hidrogênio durante 16 h. O catalisador foi removido por filtragem e lavado com 2-meti1-2-propanol/água. O filtrado combinado e lavagens foram concentrados em vácuo para dar 315 mg de 14, que foi usado sem outra purificação.

Preparação de 15 O composto 14 (315 mg) foi dissolvido em 0,35 N, hidrogênio sódio-, aquoso (10 ml) . A mistura de reação foi agitada durante a noite após o que o pH foi ajustado a 8,5 com IN ácido clorídrico. A mistura foi dessolubilizada em uma coluna Sephadex G25 colocada em suspensão em uma mistura de ãgua: acetonitrila: trietilamina 90:10:1 (v/v/v). As frações apropriadas foram reunidas e concentradas em vácuo. O produto foi novamente submetido a hidrogenólise em um modo similar ao descrito para composto 14 . Após trabalho e concentração do filtrado e lavagens, a mistura foi dessolubilizada em Sephadex G25 colocada em suspensão em uma mistura de água: acetonitrila: trietilamina 90:10:0,1 (v/v/v). As frações apropriadas foram reunidas, concentradas em vácuo, eluídas em uma coluna Dowex 50WX8Na+ com ãgua e finalmente liofilizado para dar 165 mg de 15.

Preparação de 16 Uma solução de 15 (165 mg) foi evaporada com N,N-dimetilformamida e dissolvida em N,N-dimetilformamida (11,0 ml). Complexo de trióxido de enxofre trietilamina (1,31 g) foi adicionado à mistura de reação. Após agitar durante 16 a 50°C, a mistura foi resfriada (0°C) em carbonato de hidrogênio de sódio aquoso (2,43 g) foi adicionado e a agitação continuou durante 1 h a 20°C , após o que a solução foi concentrada em vácuo. 0 resíduo foi dessolubilizado em coluna Sephadex G-25 colocado em suspensão em agua-acetonitrila 9:1 (v/v) e as frações apropriadas reunidas e concentradas em vácuo. Após eluição em uma coluna Dowex 50WX8Na+, o produto foi purificado em coluna Q-Sefarose usando um gradiente de cloreto de sódio, para dar 160 mg de 16 . { [a] 20d = + 24,0 (c = 0,77 , H20) } .

REIVINDICAÇÕES

Claims (7)

1. Derivado de carboidrato, caracterizado pelo fato de ter a fórmula I em que R1 é H ou CH20S03“; R2 e R3 são independentemente H, alquila (1-6C) ou S03“; R4 é 0S03"; n é 1 ; p é 1 ou 2; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Derivado de carboidrato, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é R2 é alquila (1-6C) , R3 é S03~, R4 é 0S03_, e R1, n e p são como previamente descritos.

3. Derivado de carboidrato de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R2 é metila.

4. Derivado de carboidrato de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que n é 1 e p é 1.

5. Derivado de carboidrato de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-4, caracterizado pelo fato de que R1 é CH20S03_.

6. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender o derivado de carboidrato definido em qualquer uma das reivindicações 1-5 e auxiliares farmaceuticamente apropriados.

7. Derivado de carboidrato, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, caracterizado pelo fato de ser para uso em terapia.