[go: up one dir, main page]

BG64581B1 - Антагонисти на витронектинов рецептор - Google Patents

Антагонисти на витронектинов рецептор Download PDF

Info

Publication number
BG64581B1
BG64581B1 BG103299A BG10329999A BG64581B1 BG 64581 B1 BG64581 B1 BG 64581B1 BG 103299 A BG103299 A BG 103299A BG 10329999 A BG10329999 A BG 10329999A BG 64581 B1 BG64581 B1 BG 64581B1
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
oxo
tetrahydro
benzazepine
propyloxy
acetic acid
Prior art date
Application number
BG103299A
Other languages
English (en)
Other versions
BG103299A (bg
Inventor
James Callahan
Russell COUSINS
Richard Keenan
Chet Kwon
William Miller
Irene UZINKAS
Original Assignee
Smithkline Beecham Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Corporation filed Critical Smithkline Beecham Corporation
Publication of BG103299A publication Critical patent/BG103299A/bg
Publication of BG64581B1 publication Critical patent/BG64581B1/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D223/16—Benzazepines; Hydrogenated benzazepines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Съединенията са полезни за лечение на остеопороза, ангиогенеза, туморен растеж, метастази, атеросклероза, рестеноза и възпаления. Те имат структура с бензодиазепинилово ядро и са антагонисти на витронектинов рецептор.

Description

Област на техниката 5
Изобретението се отнася до фармацевтично активни съединения, които инхибират витронектиновите рецептори и са полезни за лечение на възпаления, рак и сърдечносъдови заболява- 10 ния като атеросклероза и рестеноза, и където костната резорбция е остеопороза.
Предшестващо състояние на техниката
Интегрините са суперфамилия от рецептори на клетъчната адхезия, които представляват трансмембранни гликопротеини, експресирани върху различни клетки. Тези рецептори на повърхностната клетъчна адхезия включват gpllb/ Ша (фибриногеновия рецептор) и ανβ3 (витронектиновия рецептор). Фибриногеновият рецептор gpIIb/IIIa се експресира върху повърхността на тромбоцитите и е медиатор на агрегацията на тромбоцитите и образуването на хемостати- 25 чен съсирек на мястото на кървяща рана. Philips et al., Blood, 1988,71,831. Витронектиновият рецептор ανβ3 се експресира върху много клетки, включително тези на ендотелия, на гладки мускули, о стеокласти и туморни клетки и по такъв 3 0 начин има разнообразни функции. Рецепторът ανβ3, експресиран върху мембраната на остеокластните клетки, е медиатор на адхезията на остеокластите към костната матрица, ключов етап в процеса на костната резорбция. Ross et al., J. 35 Biol. Chem., 1987,262,7703. Болест, характеризираща се c прекомерна костна резорбция, е остеопорозата. Рецепторът ανβ3, експресиран върху клетките на гладкия мускул на аортата, е медиатор на тяхната миграция към неоинтимата, 40 процес, който може да доведе до рестеноза след перкутанна коронарна ангиопластия. Brown et al., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. В допълнение, Brooks et al., Cell, 1994,79,1157 са показали, че антагонист на ανβ3 е способен да предиз- 45 вика регресия на тумор чрез възбуждане на апоптоза на ангиогенните кръвоносни съдове. По такъв начин средства, които блокират витронектиновия рецептор, биха били полезни за лечението на болести като остеопороза, рестеноза и рак.
Известно е, че витронектиновият рецептор се отнася до три различни интегрини, означени ανβ(, ανβ3 и ανβ5. Horton et al., Int. J. Exp. Pathol., 1990,71,741. ανβ, свързва фибронектина и витронектина. ανβ3 свързва широко разнообразие от лиганди, включително фибрин, фибриноген, ламинин, тромбоспондин, витронектин, фактора на Willebrand, остеопонтин и костния сиалопротеин I. ανβ5 свързва витронектин. За витронектиновия рецептор ανβ3 е показано, че участва в адхезията на клетки от различни клетъчни типове, включително ендотелийните клетки на микросъдовете (Davis et al., J. Cell. Biol. 1993, 51, 15 206) и е потвърдена неговата роля в ангиогенезата. Brooks et al., Science, 1994, 264, 569. Този интегрин се експресира върху кръвоносните съдове в човешка гранулационна тъкан в рани, но не и в нормална кожа.
За витронектиновия рецептор е известно, че се свързва с протеините на костната матрица, които съдържат трипептидния мотив Arg-Gly-Asp (или RGD). Така, Horton et al., Exp. Cell Res. 1001, 195, 368, описват, че RGD-съдържащите пептиди и антитяло за антивитронектинов рецептор (23С6) инхибират дентиновата резорбция и разпространение на клетките от остеокласти. В допълнение, Sato et al., J. Cell Biol. 1990, 1713, описват, че ехистагин, пептид от змийска отрова, който съдържа RGD-последователност, е способен да инхибира костната резорбция в тьканна култура и инхибира свързването на остеокластите с костта.
Публикувани са сходни съединения във WO 96/00574, отнасящи се до производни с вигронекгиново рецепторно антагонистично действие и във WO 94/14776, където са описани фибронекгинови антагонисти, които производни имат ограничен спектър на действие.
Намерено е, че някои съединения са силни инхибитори на α¥β3 и ανβ5 рецептори. По-специално, открито е, че такива съединения са посилни инхибитори на витронектиновия рецептор, отколкото на фибриногенния рецептор.
Техническа същност на изобретението
Изобретението се отнася до антагонисти на витронектинов рецептор с формула
в която
R1 означава А-См алкил, евентуално заместен с каквато и да е достъпна комбинация от един или повече R10 или R7;
А е Н или Аг;
R7 е -COR8;
всеки R8 е независимо OR’;
R10 е Н или халоген;
R2 означава
където G е NH и Rb и Rc са свързани заедно, като образуват шестчленен ароматен карбоцикличен пръстен или
където Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава СН;или
където Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава CR*, Q4 е CR* или N; или
където s означава 0, 1 или 2;
We-CHj-CI/-;
R’ е Н, Cw алкил или Аг-См алкил R” е R’, -C(O)R’ или -C(O)OR;
Ry е Н, -OR*, -NR*R* или алкил;
всеки R* е независимо Н или См алкил;
и означава 0 или 1 и ν означава 0 или 1 или техни фармацевтично приемливи со5 ли, които са фармакологично активни и са полезни за лечение на възпаление, рак и сърдечносъдови заболявания като атеросклероза и рестеноза, и заболявания, при които костната резор10 бция е фактор като остеопороза.
Изобретението се отнася и до фармацевтичен състав, съдържащ съединение с формула I и фармацевтично приемлив носител.
Изобретението се отнася и до използване 15 на съединенията с формула I за получаване на лекарствени средства за лечение на заболявания с посредник витронектинов рецептор. В поспециален аспект тези лекарствени средства са полезни за лечение на атеросклероза, рестено20 за, възпаление, рак и заболявания, при които костната резорбция е фактор като остеопороза.
Новите съединения от настоящото изобретение са по-силни инхибитори на витронектиновия, отколкото на фибриногенния рецептор. Те25 зи съединения съдържат бензазепиново ядро, в което N-съдържащият заместител е върху ароматния шестатомен пръстен на бензазепина и алифатният заместител, съдържащ киселинна част, е върху седематомния пръстен на бензазе30 пина. Предполага се, че бензазепиновата пръстенна система взаимодейства благоприятно с витронектиновия рецептор и ориентира страничните вериги на заместителите върху шест- или седематомните пръстени така, че те също могат 35 да взаимодействат благоприятно с рецептора. За предпочитане е между киселинната група и алифатния заместител на седематомния пръстен на бензапина и азота на азотсъдържащия заместител върху ароматния шестатомен пръстен на бен40 запина да съществуват около 12 до 14 участващи ковалентни връзки през най-късия междумолекулен път.
В изобретението се включват и фармацевтично приемливи присъединителни соли и ком45 плекси на съединенията съгласно изобретението. В случаите когато съединенията съгласно изобретението могат да имат един или повече хирални центрове, освен ако не е определено конкретно, настоящото изобретение включва всяко 50 уникално нерацемично съединение, което може да се синтезира или да се раздели чрез общоприети техники. В случаите, в които съединенията имат ненаситени въглерод-въглеродни двойни връзки, както цис (Z), така и транс (Е) изомерите са в обхвата на настоящото изобретение. В случаите, когато съединенията могат да съществуват в тавтомерни форми като кето-енолни тавтомери като
всяка тавтомерна форма се разглежда като включена в настоящото изобретение, независимо дали съществува в равновесие или е затворена в една форма чрез подходящо заместване с R’.
Съединенията с формула I инхибират свързването на витронектин и други RGD-съдьржащи пептиди към витронектиновия рецептор. Инхибиране на витронектиновия рецептор върху остеокластите инхибира резорбцията на остеокластното костно вещество и е полезно за лечение на заболявания, в които резорбцията на костно вещество е свързана с патология като остеопорози и остеоартрити.
В друг аспект настоящото изобретение се отнася до метод за стимулиране образуването на костно вещество, което се състои в прилагане на съединение, което причинява увеличаване на освобождаването на остеокалцин. Увеличената продукция на костно вещество е ясно подобрение в болестното състояние, при което има дефицит на минерализирана костна маса или е желателно повторно моделиране на костта, като оздравяване на счупване и предотвратяване на счупвания на костта. Болести и метаболитни разстройства, които водят до загуба на структурата на костта, също ще се подобряват от такова лечение. Например, хиперпаратироидизъм, болест на Pget, хиперкалцинемия при злокачествено образувание, остеолитични увреждания предизвикани от костна метастаза, загуба на кост, дължаща се на имобилизация или дефицит на полов хормон, болест на Behcet, остеомалация, хиперостоза и остеопетроза биха могли да бъдат благоприятно повлияни от прилагане на съединение съгласно настоящото изобретение.
В допълнение, тъй като съединенията съгласно настоящото изобретение инхибират витро нектиновите рецептори на множество от различни типове клетки, тези съединения могат да бъдат полезни за лечение на възпалителни смущения, като ревматоиден артрит и псориазис, и сърдечносъдови заболявания, като атеросклероза и рестеноза. Съединенията с формула I съгласно настоящото изобретение могат да се използват за лечение или предпазване от други болести, включително, но без ограничение само до тях, тромбоемболични смущения, астма, алергии, синдром на респираторен дистрес у възрастни, болест трансплантат срещу гостоприемник, отхвърляне на трансплантиран орган, септичен шок, екзема, контактен дерматит, възпалително заболяване на тънките черва, и други автоимунни заболявания. Съединенията съгласно настоящото изобретение могат също да бъдат полезни за лечение на рани.
Съединенията съгласно настоящото изобретение са полезни също за лечение, включително предотвратяване на ангиогенни разстройства. Терминът ангиогенно разстройство, както се използва тук, включва състояния с ненормална неоваскуларизация. Когато развитието на нови кръвоносни съдове е причина за или съдейства за патология, свързана с една болест, инхибирането на ангиогенезата ще намали вредния ефект от болестта. Пример за такава болестна цел е диабетната ретинопатия. Когато развитието на нови кръвоносни съдове е необходимо за поддържане на развитието на разрушителна тъкан, инхибирането на ангиогенезата ще намали доставянето на кръв към тъканта и с това съдейства за намаляването на тъканната маса, базираща се на изискването за кръвоснабдяване. Примерите включват развитието на тумори, при които неоваскуларизацията е постоянно изискване, за да се развива тумора и за установяването на метастази при твърди тумори. По такъв начин съединенията съгласно настоящото изобретение инхибират ангиогенезата на туморни тъкани, като с това предотвратяват туморни метастази и растежа на туморите.
По такъв начин съгласно метода от настоящото изобретение, инхибирането на ангиогенезата, като се използват съединенията съгласно настоящото изобретение, може да подобри симптомите на заболяването и в някои случаи може да лекува болестта.
Друга терапевтична цел на съединенията съгласно настоящото изобретение са очни заболявания, характеризиращи се с неоваскуларизация. Такива очни болести включват неоваскуларни разстройства на роговицата, като трансплантация на корнея, херпесен кератит, луетичен кератит, птеригиум и неоваскуларен панус, свързани с използването на контактни лещи. Допълнителни очни заболявания включват също свързана с възрастта дегенерация на макулата, предполагаема очна хистоплазмоза, ретинопатия при недоносено ст и неоваскуларна глаукома.
Настоящото изобретение се отнася също така и до използване на съединенията с формула I за получаване на лекарствени средства за инхибиране на туморен растеж заедно с антинеоплазмено средство като топотекан и цисплатин.
Представители на новите съединения съгласно настоящото изобретение са следните:
(±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензепин-4оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4-амино-2-пиридиламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4-метокси-2-пиридиламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-имидазолиламино)-1 -пропилокси]-3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-[2-( 1,4,5,6-тетрахидропиримидинил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-[6-(метиламино)пиридил]етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(2-бензимидазолил)етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(4-аза-2-бензимидазолил)етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(бензимидазол-2-ил)-1 -етокси]3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4оцетна киселина;
(±)-8-[3-[4-аминопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиримидин-2-иламино)1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(К)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[(1,4,5,6-тетрахидропиримидин-2-ил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1 пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[1Ч-(пиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбанил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-флуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахвдро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(4-флуорометилбензил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-метил-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2ил)-14-(метил)амино)]- 1-пропилокси]-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-(карбоксиметил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[14-(пиридин-2-ил)-М(бензоил)амино)]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-имидазолин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-1 -етокси]2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4,5,6,7-тетрахидро-1Н-1,3-диазепин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутилацетил)амино] -1 -пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5 -тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-οκοο-8-[3-[Ν-(πΗρΗΛΗΗ-2-Ηπ)-Ν(изобутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(S)-3 -оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-1Ч(метил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4 -оцетна киселина;
(S)-3 -оксо-8-[3 -(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(К)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(S)-3-okco-8-[3 -(1,4,5,6-тетрахидропиримид-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-3-оксо-2-(2-фенилетил)-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)-1 етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)-1 етокси]-3-оксо-2-(4-трифлуорометил)бензил]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
или техни фармацевтично приемливи соли.
Предпочитани съединения съгласно изобретението са:
(8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
или техни фармацевтично приемливи соли.
В случаите, когато съединенията съгласно настоящото изобретение могат да имат един или повече хирални центъра, освен ако не е уточнено, настоящото изобретение включва всяко уникално нерацемично съединение, което може да се синтезира или да се раздели чрез общоприети техники. Съгласно настоящото изобретение (S) конфигурацията на съединенията с формула I е предпочитана.
В случаите, в които съединенията имат ненаситени въглерод-въглеродни двойни връзки, както цис (Z) така и транс (Е), изомерите са в обхвата на настоящото изобретение. Значението на който и да е заместител при който и да е от случаите, е независимо от другото или от което и да е друго значение на заместител при който и да е друг случай.
В настоящото изобретение се включват също пролекарства на съединенията съгласно изобретението. Пролекарства се считат които и да са ковалентно свързани носители, които освобождават основното активно съединение съгласно формула I in vivo. Така друг аспект на настоящото изобретение са нови пролекарства с фор6 мула II, които са също междинни съединения за получаване на съединенията с формула I
в която (П) (О)и
J NR--СК2--W-г т 5 V* където Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава
CR», Q4 е CRy или N; или
R1 означава А-С^ алкил, евентуално заместен с каквато и да е достъпна комбинация от един или повече R10 или R7;
А е Н или Аг;
R7 е -COR8;
всеки R8 е независимо OR’;
R10 е Н или халоген;
R2 означава
където G е NH и Rb и Rc са свързани заедно, като образуват шестчленен ароматен карбоцикличен пръстен или
където Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава СН;или
()s^,NR9 където s означава 0, I или 2;
We-CHj-CHj-;
R’ е Н, С,^ алкил или Аг-С^ алкил R” е R’, -C(O)R’ или -C(O)OR;
Ry е Н, -OR*, -NR»R* или алкил; всеки R* е независимо Н или С1Ц алкил; и означава 0 или 1 и ν означава 0 или 1 или техни фармацевтично приемливи соли.
Представители на новите продукти съгласно настоящото изобретение са:
метилов (±)-3-оксо-8-[3-(2-пиридин-2иламино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензепин-4-ацетат и етилов (±)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензепин-4-ацетат и тяхна фармацевтич но приемлива сол.
Друг аспект на изобретението са нови междинни съединения с формула III
(ΠΙ) в която: 45
R* означава Α-Οθ^ алкил, евентуално заместен с каквато и да е достъпна комбинация от един или повече R10 или R7;
А е Н или Аг;
R’e-COR8; 50 всеки R8 е независимо OR’;
R10 е Н или халоген;
We-CHj-CH,-;
Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава CRy, Q4 е CRy или N; или
R’ е Н, См алкил или Аг-См алкил
R” e R’, -C(O)R’ или -C(O)OR;
R> е H, -OR«, -NR«R« или алкил; всеки Rg е независимо H или См алкил; u означава 0 или 1 и или тяхна фармацевтично приемлива сол. За описване на съединенията съгласно изобретението са използвани абревиатури и символи, обичайно използвани в областта на пептидите и химията. Обикновено абревиатурите за аминокиселините следват ШРАС-ШВ Joint Commission on Biochemical Nomenclature Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984).
См алкил, както е използван тук, означава в даден случай заместена алкилова група с 1 до 4 въглеродни атома и включва метил, етил, норм-пропил, изопропил, норм-бутил, изобугил и трет-бутил, С1Ч5 алкил включва и пентил, нормпентил, изопентил, неопентил и хексил и техни обикновени алифатни изомери. См алкил и См алкил допълнително означава, че не присъства алкилова група (т.е., че присъства ковалентна връзка).
Който и да е от заместителите См алкил или С^ алкил, С2^ алкенил, С2^ алкинил или С,^ оксоалкил може да бъде в даден случай заместен с групата R*, която може да бъде върху всеки един от въглеродните атоми, водещо до стабилна структура, и е възможно чрез общоприети техники на синтез. Подходящи групи за R* са См алкил, OR’, SR’, См алкилсулфонил, См алкилсулфоксил, -CN, N(R’)2, CHjNiR’)^ -NO2, -CFj, -CO2R’, -CON(R’)2, -COR’, -NR’C(O)R’, F, Cl, Br, I или CF3S(O)r-, където r e 0, 1 или 2.
Халоген или хало означава F, Cl, Br и I.
Аг или арил, както е използван тук, означава фенил или нафтил, или фенил или нафтил, заместени с един до три заместителя като тези дефинирани по-горе за алкил, по-специално См алкил, С1Ч алкокси, См алктио, CF3, NHj, OH, F, Cl, Br или I.
Het или хетероцикъл означава в даден случай заместен пет или шест атомен моноцикличен пръстен или девет или десет атомен бициклнчен пръстен, съдържащ един до три хетероатома, избрани от групата азот, кислород и сяра, които са стабилни и могат да се получат чрез общоприети химически синтези. Примери за хетероцикли са бензофурил, бензимидазол, бензопиран бензотиофен, фуран, имидазол, индолин, морфолин, пиперидин, пиперазин, пирол, пиролидин, тетрахидропиридин, пиридин, тиазол, тиофен, хинолин, изохинолин и тетра- и перхидрохинолин и -изохинолин. Всяка приемлива комбинация до три заместителя върху Het пръстена като тези, дефинирани по-горе за алкил, които могат да се получат чрез химически синтези и са стабилни, са в обхвата на настоящото изобретение.
С3.7 циклоалкил означава в даден случай заместена карбоциклена система с три до седем въглеродни атома, която може да съдържа до две ненаситени въглерод-въглеродни връзки. Обикновено С3.7 циклоалкил са циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклохексил, циклохексенил и циклохептил. Всяка комбинация от до три заместителя, като тези, дефинирани по-горе за алкил, върху циклоалкиловия пръстен, която може да се получи чрез общоприети химически синтези и е стабилна, е в обхвата на настоящото изобретение.
Когато Rb и R' са свързани заедно, като образуват пет- или шестатомен ароматен или неароматен карбоциклен или хетероциклен пръстен, кондензиран с пръстена, с който Rb и Rc са свързани, образуваният пръстен обикновено е пет- или шестатомен хетероцикъл, избран от тези, изброени по-горе за Het или могат да бъдат фенилов, циклохексилов или циклопентилов пръстен. За предпочитане Rb и Rc могат да бъдат -D1=D2-D3=D4, където D1-D4 са независимо СН, N или CR', с ограничението, че не повече от два D1-D4 са N. Особено е за предпочитане, когато Rb и Rc са свързани заедно и образуват група-СН=СН-СН=СН-.
Някои съкращения относно радикалови групи: t-Bu се отнася до трет-бутилов радикал, Вос се отнася до трет-бутилоксикарбонилов радикал, Fmoc се отнася до флуоренилметоксикарбонилов радикал, Ph се отнася до фенилов радикал, Cbz се отнася до бензилоксикарбонилов радикал, Вп се отнася до бензилов радикал, Ме се отнася до метил, Et се отнася до етил, Ас се отнася до ацетил, Aik означава См алкил, Nph се отнася до 1- или 2-нафтил и сНех се отнася до циклохексил, Tet се отнася до 5-тетразолил.
Някои съкращения относно реагенти: DCC се отнася до дициклохексилкарбодиимид, DMAP се отнася до диметиламинопиридин, DIEA се отнася до диизопропилетиламин, EDC се отнася до 1-(3-диметиламинопропил)-3-етилкарбодии мид хидрохлорид, HOBt i се отнася до 1-хидроксибензотриазол, THF се отнася до тетрахидрофуран, DIEA се отнася до диизопропилетиламин, DEAD се отнася до диетилов азодикарбоксилат, PPhj се отнася до трифенилфосфин, DIAD се отнася до диизопропилов азодикарбоксилат, DME се отнася до диметоксиетан, DMF се отнася до диметилформамид, NBS се отнася до Nбромосукцинимид, Pd/C се отнася до катализатор паладий върху въглен, РРА се отнася до полифосфорна киселина, DPPA се отнася до дифенилфосфорилазид, ВОР се отнася до бензотриазол-1 -илокси-трис(диметиламино)фосфониев хексафлуорофосфат, HF се отнася до флуороводородна киселина, TEA се отнася до триетиламин, TFA се отнася до трифлуорооцетна киселина, РСС се отнася до пиридиниев хлорохромат.
Съединенията с формула I обикновено се получават чрез взаимодействие на съединение с формула IV със съединение с формула V
NR—CR'2—W—ОН (VI)
В която R’, R’, R”, W, Q1, Q2, Q3 и Q4 са дефинирани при формула I с всякакви защитени реактивоспособни функционални групи;
и след това отстраняване на защитните групи и в даден случай образуване на фарма15 цевтично приемлива сол.
За предпочитане, за съединенията с формула VI, Q1, Q2, Q3 и Q4 са CH, W е -СН2-СН2-, R’ е Н и R” е Н, См алкил или -С(О)ОСМ алкил. Подходящо взаимодействието между съедине20 ние с формула IV със съединение с формула VI се провежда в присъствие на диетилов азодикарбоксилат и трифенилфосфин в апротен разтворител.
Някои съединения с формула I се получа25 ват чрез взаимодействие на съединение с формула IV със съединение с формула VII, (IV)
R2-L* (V) 30 в които R1 и R2 са дефинирани при формула I, с всякакви защитени реактивоспособни функционални групи, и L1 е ОН или халоген;
и след това отстраняване на защитните 35 групи и в даден случай образуване на фармацевтично приемлива сол.
Някои съединения с формула I се получават чрез взаимодействие на съединение с формула IV със съединение с формула VI 40
О
(VH) в която R1, R”, R”, W, Q1, Q2, Q3 и ν са дефинирани при формула I, с всякакви защитени реактивоспособни функционални групи;
и след това отстраняване на защитните групи и в даден случай образуване на фарма9 цевтично приемлива сол.
За предпочитане за съединенията с формула VII, Q1, Q2 и Q3 са CH, W е -СН2СН2-, ν е 0, R’ е Н и R” е Н или С1А алкил. Взаимодействието между съединение с формула IV със съеди нение с формула VII се провежда в присъствие на диетилов азодикарбоксилат и трифенилфосфин в апротен разтворител.
Съединения с формула I се получават по 5 общоприети методи съгласно схеми I-VII.
СХЕМА I
(4)
а) 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пири- 40 дин-И-оксид, DEAD, (Ph)3P, DMF; b) циклохексен, 10% Pd/C, 2-пропанол; с) 1,0 N LiOH, THF, Н2О, след това подкисляване.
Съединение (1-1), получаването на което следва общата процедура, очертана в Bondinell 45 et al. (WO 1993/000095), взаимодейства c 2-[(3хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-Ь1-оксид в реакция на свързване от Mitsunobu-тип (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981, 128), като се получава съединение (1-2). Взаимо- 50 действието се провежда посредством комплекс, образуван между диетилов азодикарбоксилат и трифенилфосфин и се извършва в апротен разтворител, например THF, СН2С12 или DMF. Остатъкът пиридин-Ь/-оксид на съединение (1-2) се редуцира до съответния пиридин (1-3) при условия на хидрогениране с пренос, като се използва паладиев катализатор, за предпочитане метал паладий върху активен въглен, в инертен разтворител, например метанол, етанол или 2-пропанол. Циклохексен, 1,4-циклохексадиен, мравче10 на киселина и соли на мравчена киселина като калиев формиат или амониев формиат, са използвани обикновено като реагенти за пренасяне на водород в този тип реакция. Метиловият естер на съединение (1-3) се хидролизира, като се из- 5 ползва водна основа, например LiOH във воден THF или NaOH във воден метанол или етанол, и междинно получената карбоксилатна сол се подкислява с подходяща киселина, например TFA или НС1, като се получава карбоксилната киселина (1-4). Алтернативно, междинната карбоксилатна сол може да се изолира, ако се желае, или карбоксилатна сол на свободната киселина може да се получи по методи, добре известни на специалистите от тази област.
Съединенията с формула I могат да се получат и по алтернативни методи, известни на специалистите от тази област. Например, етерното свързване на съединения с формула I може да се осъществи чрез взаимодействие на алкохолна група на съединение с формула 1-схема I с Ю-съединение, съдържащо изместваща се група като хлоро, бромо или йодо. Други реакции за образуване на етер могат да се използват и са лесно очевидни за специалистите от тази област.
СХЕМА II
а) 2-[Ь1-(3-хидрокси-1 -пропил)-Ν-(τρετбутоксикарбонил)амино]-пиридин-Ь1-оксид, DEAD, (Ph)jP, DMF; b) LiHMDS, 4-трифлуорометилбензилбромид,ОМР;с)циклохексен, 10% Pd/C, 2-пропанол; d) 1,0 NaOH, MeOH; e) HCV диоксан.
Съединение (П-1), получено както е описано в схема I, взаимодейства с 2-[Ν-(3-χηλрокси-1 -пропил )-М-(трет-бутоксикарбонил)аминопиридин-М-оксид в реакция на свързване от Mitsunobu-тип, както е описана в детайли на схема I. Полученият продукт (П-2) може да се алкилира на 2-ро място (бензазепинова номерация) при стандартни условия на алкилиране, известни на специалистите от тази област. Например, съединение (П-2) може да взаимодейства с основа като натриев хидрид, LDА, или литиев хексаметилдисилазид, в подходящ разтворител, обичайно THF, DMF, DME или техни смеси, като се осъществява депротониране на амида N-Н. Третиране на полученото анионно съединение с подходящо електрофилно съединение като алкилили бензилхалогенид, води до N-алкилиране, като се получава продукт, например (П-З). Ν-οκ5 сидът (П-З) може да се редуцира, както е описано на схема I, като се получава съединение (П-4), което може да се осапуни до съединение (П-5), както е описано на схема I. Депротонирането на съединение (П-5) до получаване на съе10 динение (П-6) се провежда при стандартни кисели условия, както е описано в Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis: (published by Wiley-Interscience). Такива условия са добре известни на специалистите от тази област. Алтер15 нативно, превръщането на съединение (П-З) до съединение (П-6) може да се осъществи чрез редуваща се последователност, например първо премахване на защитата Вос от съединението (П-
3), последвано от редукция HaN-оксида и накрая 20 осапунване.
СХЕМА III
\—COjCHj
(4)
а) 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-И-оксид, DEAD, (Ph)3P, DMF; b) LiHMDS, CH3I, DMF; c) циклохексен, 10% Pd/C, пропанол; 1,0 N NaOH, МеОН, след това подкисляване.
Съединение (Ш-2), получено както е описано в схема I, може да се алкилира едновременно на 2-ро място (бензазепинова номерация) и азотния атом прикрепен към пиридиновия пръстен, при стандартни условия на алкилиране, добре известни на специалистите от тази област. Например съединение (Ш-2) може да се обрабо ти с поне 2 молни еквивалента основа като натриев хидрид, LDA или литиев хексаметилдисилазид, в подходящ разтворител, обичайно THF, DMF, DME или техни смеси, за да се осъществи де-протониране. Третирането на полученото анионно съединение с излишък от подходящо електрофилно съединение като алкил- или бензилхалогенид, води до бис-алкилиране, като се получава продуктът, например (Ш-З). Превръщането на съединение (Ш-З) до съединение (Ш-5) се извърша по методите, описани на схема I и П.
СХЕМА IV
а) циклохексен, 10% Pd/C, 2-пропанол; b) HCl/диоксан; c) трет-бутилацетилхлорид, Et3N, CH2C12; 1,0 N NaOH, MeOH, след това подкисляване.
Съединение (IV-2), получено от съединение (IV-1) по процедурата, очертана в схеми IIII, може да се ацилира при азотния атом, прикрепен към пиридиновия пръстен съгласно стандартни условия на ацилиране, добре известни на специалистите от тази област. Например, взаимодействие на (IV-2) с ацилиращо средство, като трет-бутилацетилхлорид, в присъствие на киселинен акцептор, обикновено триетиламин, диизопропилетиламин или пиридин, в подходящ разтворител, често CHjCl2, като се получава (IV5 3). Известни са други методи за ацилиране на амин и могат да се намерят в стандартни цитирани книги като “Compendium of Organic Synthetic Methods”, vol. I-VI (published by Wiley-lnterscience). Осапунването на (IV-3) е описано в схеми Ι-ΙΠ, 10 като се получава (IV-4).
СХЕМА V
а) 3-(4-нитробензилоксикарбониламино)1-пропанол, DEAD, (Ph)3P, DMF, CH2C12; b) H2, Pd/C, EtOH; c) 2-метилтио-2-имидазолин хидрохлорид, (H3o-Pr)2NEt, диметилацетамид, 100°C;
d) 1,0 N LiOH, THF, HjO, след това подкисляване.
Съединение (V-1), получено както е описано в схема I, взаимодейства със защитен 3амино-1-пропанол като 3-(трет-бутоксикарбониламино)-1 -пропанол, 3 -(бензилоксикарбониламино)-1-пропанол или 3-(4-нитробензилоксикарбониламино)-1 -пропанол, в реакция на свързване от Mitsunobu-тип, както е описано на схема I. От полученото съединение (V-2) се премахва защитата, като се получава съединение (V-
3). Както е добре известно на специалистите от тази област, условията за премахване на защитата се избират въз основа на функционалността и наличната защитна група в съединение (V-2). Например, р-нитро-Cbz групата, налична в съе- динение (V-2), се отстранява чрез хидрогенолиза в присъствие на паладиев катализатор, обикновено паладий върху въглен или Pd(OH)2 върху въглен, в подходящ разтворител, обикновено 5 метанол, етанол, етилацетат, или техни смеси. Ако се желае, хидрогенолизата може да се извърши в присъствие на киселина, например НС1, като се получава съответната амониева сол на съединение (V-2). Взаимодействието на съединение 10 (У-3)с2-метилтио-2-имидазолинхидройодидв присъствие на основа, например диизопропилетиламин, в подходящ разтворител като МеОН, EtOH, DMF или диметилацетамид, води до получаване на съединение (V-4). Подобни усло15 вия за провеждане на съответна трансформация са описани във WO 95/32710. Осапунването на съединение (V-5) се осъществява, както е описано в схема I.
(3)
(4)
(5)
а) 3-(трет-бутоксикарбониламино)-1-пропанол, DEAD, (Ph3P, DMF, THF; b) TFA, CH2C12;
c) 2-бромопиримидин, NaHCO3, EtOH, обратен хладник; d) H,, Pd/C, HC1, MeOH; e) K2CO3, H2O.
Съединение (VI-3), получено от съедине- 5 ние (VI-1) чрез процедурата, очертана в схема V, взаимодейства с 2-халогенопиримидин, обикновено 2-хлоропиримидин или 2-бромопиримидин, в присъствие на подходящ киселинен акцептор, обичайно натриев хидрогенкарбонат, триетиламин, диизопропилетиламин или пиридин, в подходящ разтворител като етанол, DMF или диметилацетамид, като се получава съединение (IV-4). Пиримидиновият пръстен на съе10 динение (IV-4) се редуцира до съответния 1,4,
5,6-тетрахидропиримидинов пръстен съгласно условия, съобщени за извършване на такава трансформация (виж например WO 95/32710). Така съединение (IV-4) се подлага на хидрогениране в присъствие на паладиев катализатор, за предпочитане паладий върху активен въглен, в подходящ разтворител като метанол или етанол. Взаимодействието обичайно се извършва при кисели условия; прибавянето на минерална киселина като НС1 обикновено се предпочита. Съединение (IV-5) се получава след алкализиране на филтрираната реакционна смес с К2С03 hHjO.
СХЕМА VII
a) NaH, 4-(трифлуорометил)бензилбромид, DMF; b) Н2, Pd(OH)2/C, МеОН.
Съединение (VII-1), получено съгласно общи процедури, описани в Bondinell et al., РСТ публикация WO 93/00095, публикуван януари 7, 1993 и Bondinell et al., РСТ публикация WO 1994/ 014776, взаимодейства с 4-(трифлуорометил) бензилбромид в присъствие на подходяща основа, обикновено натриев хидрид или литиев бис(триметилсилил)амид, в апротен разтворител, за предпочитане DMF, THF или техни смеси, като се получава бис-алкилиран продукт (VII-2). 4(трифлуорометил)бензиловият етер (VII-2) може удобно да се отстрани чрез хидрогенолиза, като се получава фенол (VII-3). Методи за хидрогенолиза на бензинови етери са добре известни на специалистите от тази област и са описани в подходящи книги, например в Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis” (published by Wiley-Interscience). Фенолът (VII-3) след това се използва за получаване на съединения с формула I, като се използват методи, описани в предходните схеми.
Амидните свързващи реагенти, както са използвани тук, означават реагенти, които могат да се използват за образуване на пептидни връзки. Обичайни свързващи методи използват карбодиимиди, активирани анхидриди и естери и ацилхалогениди. Реагенти като EDC, DCC, DPPA, РРА, ВОР реагент, HOBt, N-хидроксисукцинимид и оксалилхлорид са обичайни.
Методите на свързване за образуване на пептидни връзки са общо добре познати в тази област. Методите на пептидни синтези общо са изложени от Bodansky et al., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984, Ali et al. in J. Med. Chem., 29, 984 (1986) and J. Med. Chem., 30,2291 (1987) са най-общо илюстрация на техниката и са включени тук за справка.
Обикновено аминът или анилинът се свързва през неговата свободна аминогрупа в подходящ субстрат карбоксилна киселина, като се използва подходящ карбодиимид като свързващ агент, като Ν,Ν’-дициклохексилкарбодиимид (DCC), в даден случай в присъствие на катализатори като 1-хидроксибензотриазол (HOBt) и диметиламинопиридин (DMAP). Подходящи са също и други методи, като образуване на активни естери, анхидриди или киселинни хлориди, свободна карбоксилна група от подходящо защитена киселина и последващо взаимодействие със свободния амин на подходящо защитен амин, в даден случай в присъствие на основа. Например, защитена Вос-аминокиселина или Cbz-амидинобензоена киселина се обработва в подходящ безводен разтворител като метиленхлорид или тетрахидрофуран (THF), в присъствие на основа като N-метилморфолин, DMAP или триалкиламин, с изобутилхлороформиат, като се образува “активен анхидрид”, който след това взаимодейства със свободния амин на втората защитена аминокиселина или анилин.
Полезни междинни съединения за получаване на съединения с формула I, в която R2 е бензимидазол, са описани в Nestor et al., J. Med. Chem. 1984, 27, 320. Типични методи за получаване на бензимидазолови съединения, полезни като междинни съединения в настоящото изобретение, са също общоприети в тази област и могат да се намерят например в ЕР-А 0 381 033.
Присъединителните с киселина соли на съединенията се получават по стандартен начин в подходящ разтворител от изходното съединение и излишък на киселина като солна, бромоводородна, флуороводородна, сярна, фосфорна, оцетна, трифлуорооцетна, малеинова, янтарна или ме тансулфонова. Някои съединения образуват вътрешни соли или амфотерни йони, които могат да бъдат приемливи. Катионни соли се получават чрез третиране на изходното съединение с излишък от алкален реагент като хидроксид, карбонат или алкоксид, съдържащ подходящ катион; или с подходящ органичен амин. Катиони като Li+, Na+, К+, Са”, Mg'” и NH4 са конкретни примери за катиони налични във фармацевтично приемливи соли.
Настоящото изобретение осигурява също фармацевтичен състав, който съдържа съединение съгласно формула I и фармацевтично приемлив носител. Съответно, съединения с формула I могат да се използват за приготвяне на лекарствено средство. Фармацевтични състави на съединения с формула I, получени както е описано по-горе, могат да се приготвят като разтвори или лиофилизирани прахове за парентерално прилагане. Праховете могат да се преустроят чрез прибавяне на подходящ разредител или друг фармацевтично приемлив носител преди употреба. Течните форми могат да бъдат буферни, изотонични, водни разтвори. Примери за подходящи разредители са нормални изотонични физиологични разтвори, стандартна 5%-на декстроза във вода или буферен разтвор на натриев или амониев ацетат. Такива форми са по-специално подходящи за парентерално прилагане, но също могат да се използват за орално прилагане, или съдържат в измерена доза инхалиращо средство или небулизиращо средство за инсуфлация. Може да е желателно да се прибавят ексципиенти като поливинилпиролидон, желатин, хидроксицелулоза, акация, полиетиленгликол, манитол, натриев хлорид или натриев цитрат.
Алтернативно, тези съединения могат да се капсулират, таблетират или приготвят в емулсия или сироп за орално приложение. Могат да се добавят фармацевтично приемливи твърди или течни носители, за да се увеличи или стабилизира съставът, или да се улесни получаването на състава. Твърди носители са нишесте, лактоза, калциев сулфат дихидрат, тера алба, магнезиев стеарат или стеаринова киселина, талк, пектин, акация, агар или желатин. Течни носители са сироп, маслинено масло, физиологичен разтвор и вода. Носителят може да включва също материал със забавено освобождаване като глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат като такива или с восък. Количеството на твърдия носител варира, но за предпочитане е между около 20 mg до около 1 g за дозирана единица. Фармацевтичните форми се приготвят, като се следват общоприети техники във фармацията като смилане, смесване, гранулиране и таблетиране, когато е необходимо за таблетни форми; или смилане, смесване и пълнене за твърди желатинови капсули. Когато се използва течен носител формите са сироп, еликсир, емулсия или водни или неводни суспензии. Такава течна готова форма може да се прилага директно р.о. или напълнена в мека желатинова капсула.
За ректално прилагане съединенията съгласно изобретението могат също да се обединят с ексципиенти като кокосово масло, глицерин, желатин или полиетиленгликоли и формоват в супозитории.
Съединенията, описани тук, са антагонисти на витронектиновия рецептор и са полезни за лечение на болести, при които лежащата в основата им патология се приписва на лиганда или клетка, които взаимодействат с витронекгинов рецептор. Например, тези съединения са полезни за лечение на болести, при които загубата на костна матрица създава патология. По такъв начин съединенията съгласно настоящото изобретение са полезни за лечение на остеопороза, хиперпаратироидизъм, болест на Paget, хиперкалцемия при злокачествени образувания, остеолитични увреждания причинени от метастази в костите, загуба на кост, дължаща се на имобилизация или дефицит на сексуален хормон. За съединенията съгласно изобретението се приема също, че са полезни като противотуморни, антиангиогенни, противовъзпалителни и антиметастазни средства и могат да бъдат полезни за лечение на атеросклероза и рестеноза.
Съединението се прилага на пациента или орално или парентерално, по такъв начин, че концентрацията на лекарството да бъде достатъчна да инхибира костната резорбция или друга такава индикация. Фармацевтичният състав, съдържащ съединението, се прилага в орална доза между от около 0,1 до около 50 mg/kg по начин, съответстващ на състоянието на пациента. За предпочитане е оралната доза да бъде около 0,5 до около 20 mg/kg. За остра терапия се предпочита парентералното приложение. Венозно вливане на пептида в 5 %-на декстроза във вода или физиологичен разтвор или подобна форма с подходящ ексципиент е най-ефективно, макар че мускулна болусна инжекция също е полезна. Обикновено парентералната доза е около 0,01 до около 100 mg/kg; за предпочитане, между 0,1 и 20 mg/kg. Съединенията се прилагат от 1 до 4 пъти дневно в концентрации да се достигне общата дневна доза от около 0,4 до около 400 mg/ kg/ден. Точната концентрация и метода, по който съединенията се прилагат, лесно се определя от рутинираните специалисти в областта, като се сравнява кръвното ниво на средството с концентрацията, която се изисква, за да се постигне терапевтичен ефект.
Настоящото изобретение се отнася и до метод за лечение на остеопороза или за инхибиране на загубата на кост, който се състои в прилагане на етапи или във физическа комбинация съединение с формула I и други инхибитори на костната резорбция, като бифосфонати (т.е. алендронат), хормонзаместваща терапия, антиестрогени или калцитонин. В допълнение, настоящото изобретение осигурява метод за лечение като се използва съединение от настоящото изобретение и анаболно средство, като костен морфогенен протеин, ипрофлавон, полезно за предотвратяване на загубата на кост и/или за увеличаване на костната маса.
Настоящото изобретение се отнася и до метод за инхибиране на растежа на тумори, който се състои в прилагане на етапи или във физическа комбинация, на съединение с формула I и антинеоплазмено средство. Съединения, аналогични на класа на камптотецина, като топотекан, иринотекан, и 9-аминокамтотецин и кординационни комплекси на платината, като цисплатин, ормаплатин и тетраплатин се добре познати групи от антинеоплазмени средства. Съединения аналози на камптотециновия клас са описани в US №№ 5 004 758, 4 604 463, 4 473 692, 4 545
880,4 342 776, 4 513 138, 4 399 276, ЕР патентна заявка публикация №№ 0 418 099 и 0 088 642, Wani et 1., J. Med. Chem. 1986, 29, 2358, Wani et al., J. Med. Chem. 1980,23, 554, Wani et al., J. Med. Chem., 1987, 30, 1774 и Nitta et al., Proc. 14111 International Congr. Chemotherapy, 1985, Anticancer Section, 28, цялото описание на всяка от които е включено тук за справка. Координационният платинов комплекс, цисплатин е достъпен под наименованието PlatinolR от Bristol
Myers-Squibb Corporation. Полезни форми на цисплатина са описани в US №№ 5 562 925 и 4 310 515, цялото описание на които е включено тук за справка.
В метода за инхибиране растежа на тумори, който се състои в прилагане на етапи или във физическа комбинация, на съединение с формула I и антинеоплазмено средство, координационното платиново съединение, например цисплатин, може да се прилага, като се използва бавно венозно вливане. Предпочитаният носител е разтвор на декстроза/физиологичен разтвор, който съдържа манитол. Разпределението на дозите от платиновото координационно съединение може да бъде на база от около 1 до около 500 mg за квадратен метър (mg/m2) от повърхността на тялото за един курс на лечение. Вливания на платиновото координационно съединение могат да се назначават веднъж или два пъти на седмица и седмичното лечение може да се повтори няколко пъти. Като се използва съединение от класа на камптотециновите аналози в парентерално приложение, курсът на лечение, най-общо използван, е от около 0,1 до около 300,0 mg/ m2 телесна повърхност на ден, в продължение на около пет последователни дни. Особено за предпочитане курс на терапия, използван за топотекан, е от около 1,0 до около 2,0 mg/m2 повърхност на тялото за около пет последователни дни. За предпочитане курсът на лечение се повтаря поне веднъж на интервал от около 7 до около 28 дни.
Фармацевтичният състав може да бъде приготвен в готова форма с двете средства - съединението с формула I и антинеоплазменото средство в един и същ контейнер, но се предпочита приготвяне на форми в различни контейнери. Когато двете средства се предоставят във форма на разтвор, те могат да се съдържат в инфузионно/инжекционна система за едновременно прилагане, или в тандемно подреждане.
За удобно приложение на съединението с формула I и антинеоплазменото средство в същото или в различни времена, е приготвен прибор, който съдържа в един контейнер като кутия, картонен или друг контейнер, индивидуални бутилки, торбички, флакони или други контейнери, като всеки има ефективно количество от съединението с формула I за парентерално приложение, както е описано по-горе, и ефек тивно количество антинеоплазмено средство за парентерално приложение, както е описано погоре. Такъв прибор може да съдържа, например, двете фармацевтични средства в отделни контейнери или в един и същ контейнер, в даден случай като лиофилизирани количества и контейнери с разтвори за възстановяване. Вариант на това включва разтвора за възстановяване и лиофилизираната проба в две камери на един контейнер, които могат да бъдат смесени преди употреба. С такова устройство антинеоплазменото средство и съединението от настоящото изобретение могат да се опаковат отделно, като в два контейнера или да се лиофилизират заедно като прах в един контейнер.
Когато двете средства се доставят във форма на разтвор, те могат да се съдържат в инфузионно/инжекционна система за едновременно приложение или в тандемно подреждане. Например, съединението с формула I може да бъде в ι.ν. инжектируема форма или инфузионна торбичка, свързани в серии посредством тръбички, с антинеоплазменото средство във втора инфузионна торбичка. Като се използва такава система, пациентът получава първоначална инжекция от болусен тип или инфузия от съединението с формула I, последвана от инфузия от антинеоплазменото средство.
Съединенията могат да се изпитат в един или няколко биологични опити за определяне на концентрацията на съединението която се изисква, за да има даден фармакологичен ефект.
Инхибиране на витронектиново свързване
Твърдо-фазово [’HJ-SK&F-107260 свързване с ανβ3: ανβ3 (0,1-0,3 mg/ml) от човешка плацента или човешки тромбоцити в буфер Т (съдържащ 2 тМ СаС12 и 1% октилглюкозид), се разреждат с буфер Т, съдържащ 1 тМ СаС12, 1 тМ МпС12, 1 тМ MgCl2 (буфер А) и 0,05 % NaN3, и след това незабавно се прибавят към 96-ямкови ELISA плаки (Coming, New York, NY) по 0,1 ml на ямка. 0,1-0,2 gg от ανβ3 се прибавя във всяка ямка. Плаките се инкубират една нощ при 4°С. По време на експеримента плаките се промиват веднъж с буфер А и се инкубират с 0,1 ml 3,5 % говежди серумен албумин в същия буфер в продължение на 1 h при стайна температура. След инкубацията ямките се аспирират напълно и се промиват с 0,2 ml буфер А.
Съединенията се разтварят в 100 % DMSO, като се получава 2 тМ съхраняван разтвор, който се разрежда със свързващ буфер (15 mM TrisHCI (pH 7,4), 100 тМ NaCl, 1 тМ СаС12,1 тМ МпС12,1 тМ MgCl2) до крайна концентрация на съединението 100 μΜ. Този разтвор след това се разрежда до изискваната крайна концентрация на съединението. Различни концентрации от небелязаните антагонисти (0,001-100 μΜ) се прибавят към ямките на три повторения, последвани от прибавяне на 5,0 пМ [3H]-SK&F-107260 (65-86 Ci/mmol).
Плаките се инкубират 1 h при стайна температура. След инкубацията ямките се аспирират напълно и се промиват веднъж с 0,2 ml леденостуден буфер А по начин от ямка в ямка. Рецепторите се солубилизират с 0,1 ml 1% SDS и свързването [3H]-SK&F-107260 се определя чрез броене в течностна сцинтиграфия с прибавяне на 3 ml Ready Safe в брояч за течна сцинтиграфия Beckman LS, с 40 % ефективност. Неспецифичното свързване на [3H]-SK&F-107260 се определя в присъствие на 2 μΜ SK&F-107260 и по същество е по-малко от 1% от общо включената лиганда. 1СМ концентрацията се определя чрез нелинейно рутинно нагаждане на крива от най-малките квадрати, което се модифицира от LUNDON-2 програма. К = ICM (1+L/Kd), където L и К са концентрацията и дисоциационната константа на [3H]-SK&F-107260, респективно.
Съединенията от настоящото изобретение показват витронектиново свързване със SK&F 107260 в обхват на концентрациите от около 4,0 до около 0,0003 μιηοΐ.
Съединенията съгласно настоящото изобретение се изпитват също за in vitro и in vivo костна резорбция в анализи, стандартни за областта за оценка на инхибирането на образуване на костно вещество, като опитът с образуване на вдлъбнатина, описан в ЕР 528 587, който може да бъде изпълнен, като се използват човешки остеокласти, вместо остеокласти от плъхове и моделът с оваректомизирани плъхове, описан от Wronski et al., Cells and Materials 1991, sup. 1, 69-74.
Анализ на миграцията на клетки от съдов гладък мускул
Използват се клетки от гладкия мускул на аортата от плъхове или хора. Миграцията на клетки се следи в камера за клетъчна култура
Transwell чрез използване на поликарбонатна мембрана с пори от 8 um (Costar). Долната повърхност на филтъра се покрива с витронектин. Клетките се суспендират в DMEM, допълнена с 0,2 % говежди серумен албумин в концентрация
2,5-5,0 х 106 клетки/ml и се обработват предварително с различни концентрации от изпитваното съединение в продължение на 20 min при 20°С. Разтворителят самостоятелно се използва за контрола. 0,2 ml от клетъчната суспензия се поставят в горното отделение на камерата. Долното отделение съдържа 0,6 ml DMEM, допълнена с 0,2 % говежди серумен албумин. Инкубирането се извършва при 37°С в атмосфера от 95% въздух/5% СО2 за 24 h. След инкубацията, немигриралите клетки по горната повърхност на филтъра се отстраняват чрез внимателно остъргване. След това филтърът се фиксира в метанол и се оцветява с 10 % багрило на Giemsa. Миграцията се измерва или чрез а) изброяване броя на клетките, които са мигрирали към долната повърхност на филтъра или Ь) чрез екстрахиране на оцветените клетки с 10% оцетна киселина, последвано от определяне на абсорбцията при 600 пМ.
Модел на тиропаратироидектомизиран плъх
Всяка експериментална група се състои от 5-6 възрастни мъжки плъхове Sprague-Dawley (телесно тегло 250-400 g). Плъховете се тиропаратироидектомизират (от доставчика, Taconics Farms) 7 дни преди употребата им. Всички плъхове получават заместваща доза тироксин всеки 3 дни. С получаването на плъховете се измерват концентрациите на циркулиращ йонизиран калций в цялата кръв непосредствено, след като е изтеглена чрез опашна венопункция в хепаринизирани епруветки. Плъховете се включват, ако концентрацията на йонизиран Са (измерена с калциев pH анализатор Ciba-Coming модел 634) е < 1,2 mM/Ι. Всеки плъх се снабдява с раздвояващ се венозен и артериален катетър за доставяне на изпитвания материал и за събиране на кръвни проби, респективно. След това плъховете се поставят на несъдържаща калций диетична храна и дейонизирана вода. Измерват се калциевите концентрации от основното ниво и на всеки плъх се прилага или контролен носител или човешки паратироцден хормонен 1-34 пептид (hPTH 1-34), доза 1,25 g/kg/h във физио логичен разтвор /0,1 % говежди серумен албумин, Bachem, Са) или смес от hPTH 1-34 и изпитвания материал, чрез непрекъснати венозни вливания през венозния катетър, като се използва външна помпа-спринцовка. Калцемичният отговор на всеки плъх се измерва на двучасови интервали през време на периода на вливанията от 6-8 h.
Анализи на резорбция и адхезия на човешки остеокласти
Анализи на вдлъбнатина на резорбция и адхезия са развити и стандартизирани, като се използват нормални човешки остеокласти, произлезли от остеокластомна тъкан. Анализ 1 се развива за измерване на обема на остеокластна вдлъбнатина посредством лазерна конфокална микроскопия. Анализ 2 се развива за по-голямо пресято количество, при което колагенни фрагменти (освободени през време на резорбцията) се измерват чрез конкурентна ELISA.
Анализ 1 (при използване на лазерна конфокална микроскопия) * Аликвотни части от суспензия от клетки, произлезли от човешка остеокластома, се изваждат от съхранение под течен азот, затоплят се бързо до 37°С и се промиват х 1 в RPMI1640 среда чрез центрофугиране (1000 o6./min, 5 min при 4°С).
* Средата се аспирира и се замества с миши анти-HLA-DR антитяло, разредено 1:3 в среда RPMI-1640. Суспензията се инкубира 30 min върху лед и се разбърква често.
* Клетките се промиват 2 х със студена среда RPMI-1640, последвано от центрофугиране (1000 o6./min, 5 min при 4°С) и след това клетките се прехвърлят в стерилна центрофужна епруветка. Броят на моноядрените клетки се изброява в подобрена броячна камера на Neubauer.
* Достатъчно магнетични сферички (5/ моноядрена клетка), покрити с кози анти-миши IgG (Dynal, Great Neck, NY) се изваждат от бутилката за съхранение и се поставят в 5 ml прясна среда (тя отмива токсичните азидни консерванти). Средата се отстранява чрез имобилизация на сферичките върху магнит и се заменя с прясна среда.
* Сферичките се смесват с клетките и суспензията се инкубира 30 min върху лед. Суспензията се разбърква често.
* Покриващите сферичките клетки се имо билизират върху магнит и останалите клетки (богата на остеокласти фракция) се отдекантират в стерилна 50 ml центрофужна епруветка.
* Към клетките, покриващи сферичките, се прибавя прясна среда, за да се изместят задържани остеокласти. Този процес на промиване се повтаря 10 х. Клетките, покриващи топчетата, се отстраняват.
* Жизнените остеокласти се изброяват в броячна камера, като се използва флуоресцеин диацетат за маркиране на живите клетки. За прибавяне на пробата, към камерата се използва пластмасова пастьорова пипета с широк свободен отвор.
* Остеокластите се пелетират чрез центрофугиране и гъстотата се довежда до подходящия брой в ЕМЕМ среда (броят на остеокластите се променя от тумор до тумор), допълва се с 10% телешки зародишен серум и 1,7 g/Ι натриев хидрогенкарбонат.
* 3 ml аликвотни части от клетъчната суспензия (за третирано съединение) се декантират в 15 ml центрофужни епруветки. Клетките се пелетират чрез центрофугиране.
* Към всяка епруветка се прибавят 3 ml от подходящото съединение за третиране (разредени до 50 uM в ЕМЕМ среда). Включват се също подходящи контроли с носителя, положителен контрол (мише моноклонално антитяло [87МЕМ1] към анти-витронектинов рецептор), разредени до 100 ug/ml) и изотипен контрол (IgG2a, разреден до 100 ug/ml). Пробите се инкубират при 37°С в продължение на 30 min.
* 0,5 ml аликвотни части от клетките се посяват върху стерилни дентинови изрезки в 48ямкови плака и се инкубират при 37°С в продължение на 2 h. Всяко третиране се отсява на четворни повторения.
* Изрезките се промиват в шест смени с топъл PBS (10 ml/ямка в 6-ямкова плака) и след това се поставят в прясна среда, съдържаща третираното съединение или контролна проба. Пробите се инкубират при 37°С в продължение на 48 h.
Резистентна на тартрат кисела фосфатаза (TRAP) процедура (селективно оцветяване за клетки от остеокластовия произход) * Костни изрезки, съдържащи прикрепените остеокласти, се промиват с фосфатен буфериран физиологичен разтвор и се фиксират в
2% глутералдехид (в 0,2 М натриев какодилат) в продължение на 5 min.
* След това те се промиват с вода и се инкубират за 4 min в TRAP буфер при 37°С (0,5 mg/ml нафтол AS-ΒΙ фосфат, разтворен в Ν,Νдиметилформамид и смесен с 0,25 М цитратен буфер (pH 4,5), съдържащ 10 mM натриев цитрат.
* След промиване в студена вода, изрезките се потапят в студен ацетатен буфер (0,1 М, pH 6,2), съдържаща 1 mg/ml силно червено гранатово, и се инкубира при 4°С в продължение на 4 min.
* Излишъкът от буфера се аспирира и изрезките се сушат на въздуха, след което се промиват с вода.
* TRAP позитивните остеокласти (керемиденочервена утайка) се изброяват чрез широкополева микроскопия и след това се отстраняват от дентиновата повърхност чрез сонотехника.
* Обемът на вдлъбнатината се измерва, като се използва конфокален микроскоп Nikon/ Lasertec ILM21W.
Анализ 2 (При използване на ELISA - отчитане)
Човешки остеокласти се обогатяват и се приготвят за изследване на съединенията, както е описано в първоначалните 9 етапа на Анализ 1. За яснота тези етапи са повторени тук по-долу.
* Аликвотни части от суспензия от клетки, произлезли от човешка остеокластома, се изваждат от съхранение в течен азот, затоплят се бързо при 37°С и се промиват х1 в среда RPMI1640 чрез центрофугиране (1000 o6./min, 5 min при 4°С).
* Средата се аспирира и се замества с миши анти-HLA-DR антитяло, разредено 1:3 в среда RPMI-1640. Суспензията се инкубира 30 min върху лед и се разбърква често.
* Клетките се промиват х2 със студена RPMI-1640, последвано от центрофугиране (1000 o6./min, 5 min при 4°С) и клетките се прехвърлят в стерилна 15 ml центрофужна епруветка. Броят на моноядрените клетки се изброява в подобрена броячна камера на Neubauer.
* Достатъчно магнитни сферички (5/ моноядрена клетка), покрити с кози анти-миши IgG (Dynal, Great Neck) се изваждат от бутилката за съхранение и се поставят в 5 ml прясна среда (това отмива токсичните азидни консерванти). Средата се отстранява чрез имобилизиране на сферичните върху магнит и се замества с прясна среда.
* Сферичните се смесват с клетките и суспензията се инкубира 30 min върху лед. Суспензията се разбърква често.
* Клетките, покриващи сферичните, се имобилизират върху магнит и оставащите клетки (обогатена на остеокласти фракция) се декантират в стерилна 50 ml центрофужна епруветка.
* Към клетките, покриващи сферичните, се прибавя прясна среда, за да се изтласкат задържани остеокласти. Процесът на промиване се повтаря х 10. Клетките, покриващи сферичните, се отстраняват.
* Жизнените остеокласти се изброяват в броячна камера, като се използва флуоресцеин диацетат да се маркират клетките. За прибавяне на пробата към камерата се използва пластмасова пастьорова пипета с голям свободен отвор.
* Остеокластите се пелетират чрез центрофугиране и гъстотата се довежда до подходящия брой в среда ЕМЕМ (броят на остеокластите се мени от тумор на тумор), допълнена с 10 % серум от телешки зародиш и 1,7 g/Ι натриев хидрогенкарбонат.
Обратно на метода, описан по-горе, в анализ 1, съединенията се изследват в 4 дози, за да се получи ICjo, както е описано по-долу:
* Остеокластните препарати се инкубират предварително 30 min при 37°С с изпитваното съединение (4 дози) или контроли.
* След това те се посяват върху изрезки от говежда кортикална кост в ямките на 48-ямкова плака за тъканни култури и се инкубират в продължение на още 2 h при 37°С.
* Костните изрезки се промиват на шест смени в топъл физиологичен разтвор с фосфатен буфер (PBS), за да се отстранят неслепналите клетки, и след това се връщат в ямките на 48ямковата плака, съдържаща прясно съединение или контроли.
* Плаката за тъканна култура след това се инкубира 48 h при 37°С.
* Надутаечните течности от всяка ямка се аспирират в индивидуални епруветки и се изследват с конкурентна ELISA, която открива стелопептид от тип I колаген, който се освобождава през време на процеса на резорбция. Това е търговско достъпна ELISA (Osteometer, Dennmark), която съдържа заешко антитяло, което специфично реагира с 8-аминокиселинна последователност (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-GlyArg), намираща се в карбокси-терминалния телопептид на а 1 -веригата на тип I колаген. Резултатите се изразяват като % инхибиране на резорбцията в сравнение с контрола от носителя.
Анализ на адхезията на човешки остеокласти
Човешки остеокласти се обогатяват и се приготвят за изследване на съединенията, както е описано по-горе в първите 9 етапа на анализ 1. За яснота тези етапи са повторени тук по-долу.
* Аликвотни части от суспензия от клетки, произлезли от човешка остеокластома, се изваждат от съхранение в течен азот, затоплят се бързо до 37°С и се промиват х1 в среда RPMI1640 чрез центрофугиране (1000 o6./min, 5 min, при 4°С).
* Средата се аспирира и се замества с мише анти-HLA-DR антитяло, след това се разрежда 1:3 в среда RPMI-1640. Суспензията се инкубира 30 min върху лед и се разбърква често.
* Клетките се промиват х2 със студена RPMI-1640, последвано от центрофугиране (1000 o6./min, 5 min, при 4°С) и след това клетките се прехвърлят в стерилна 15 ml центрофужна епруветка. Броят на моноядрените клетки се изброява в подобрена броячна камера на Neubauer.
* Достатъчно магнитни сферички (5/на моноядрена клетка), покрити с кози анти-миши IgG (Dynal, Great Neck, NY) се изваждат от бутилката за съхранение и се поставят в 5 ml прясна среда (това отмива токсичните азидни консерванти). Средата се отстранява чрез имобилизиране на сферичките върху магнит и се замества с прясна среда.
* Сферичките се смесват с клетките и суспензията се инкубира 30 min върху лед. Суспензията се разбърква често.
* Сферичките, покрити с клетки, се имобилизират върху магнит и останалите клетки (богата на остеокласти фракция) се декантират в стерилна 50 ml центрофужна епруветка.
* Прибавя се прясна среда към покритите с клетки сферички, за да се изтласкат всички задържани остеокласти. Този процес на промиване се повтаря х10. Сферичките, покрити с клетки, се отстраняват.
* Жизнеспособните остеокласти се изброяват в броячна камера, като се използва флуоресцеин диацетат за маркиране на живите клетки. За прибавяне на пробата към камерата се използва пластмасова пастьорова пипета с широк свободен отвор.
* Остеокластите се пелетират чрез центрофугиране и гъстотата се довежда до подходящия брой в ЕМЕМ среда (броят на остеокластите се мени от тумор на тумор), допълват се с 10% серум от телешки зародиш и 1,7 g/l натриев хидрогенкарбонат.
* Остеокластите, произлезли от остеокластома, се инкубират предварително със съединението (4 дози) или контроли при 37°С в продължение на 30 min.
* След това клетките се посяват върху изрезки, покрити с остеопонтин (човешки или остеопонтин от плъхове, 2,5 ug/ml), и се инкубират в продължение на 2 h при 37°С.
* Неслепналите клетки се отстраняват чрез енергично промиване на изрезките във физиологичен разтвор с фосфатен буфер и оставащите върху изрезките клетки се фиксират в ацетон.
* Остеокластите се оцветяват за резистентна на тартрат кисела фосфатаза (TRAP), селективен маркер за клетки от този фенотип (виж етапи 15-17), и се изброяват чрез светлинна микроскопия. Резултатите се изразяват като % инхибиране на адхезията в сравнение с контроли с носителя.
Изследване на клетъчната адхезия
Клетки и клетъчна култура
Човешки ембрионални бъбречни клетки (НЕК 293 клетки) се получават от АТСС (Каталожен № CRL 1573). Клетките се отглеждат в минимална есенциална среда на Earl (ЕМЕМ), съдържаща сол на Earl, 10% серум от говежди зародиш, 1% глутамин и 1% пеницилин-стрептомицин.
Конструкции и трансфекции
3,2 kb EcoRI-Kpnl фрагмент на αν субединица и 2,4 kb Xbal-Xhol фрагмент на β3 субединица се вмъкват в EcoRI-EcoRV клониращи сайтове HapCDN вектор (Aiyar et al., 1994), който съдържа CMV промотор и G418 избираем маркер, чрез лигиране на тъпия край. За стабилна експресия 80 х 106 НЕК 293 се електротрансформират с αν+ β3 конструкции (20 pg ДНК за всяка субединица), като се използва Gene Pulser (Hensley et al., 1994) и се поставят на 100 mm плаки (5xl05 клетки/плака). След 48 h, растежната среда се допълва с 450 ng/ml генетицин (G418 сулфат, GIBCO-BRL, Betesda, MD). Клетките се поддържат в селекционната среда, докато колониите станат достатъчно големи за изследване.
Имуноцитохимичен анализ на трансфектирани клетки
За да се провери дали НЕК 293 трансфектантите експресират витронектиновия рецептор, клетките се имобилизират върху стъклени микроскопски стъкла чрез центрофугиране, фиксират се в ацетон за 2 min при стайна температура и се сушат на въздуха. Специфичната реактивоспособност с 23С6, моноклонално антитяло, специфично за ανβ3 комплекса се показва, като се използва стандартен индиректен имунофлуоресцентен метод.
Изследване на клетъчната адхезия
96-ямкови ELISA плаки (Coming) се покриват предварително за една нощ при 4°С с 0,1 ml човешки витронектин (0,2 ng/ml в RPMI-cpeда). По време на експеримента плаките се промиват веднъж със среда RPMI и се блокират с 3,5% BSA в RPMI среда в продължение на 1 h при стайна температура. Трансфектирани 293 клетки се суспендират отново в RPMI среда, допълват се с 20 mM Hepes, pH 7,4 и 0,1 % BSA при гъстота 0,5x10® клетки/ml. 0,1 ml от клетъчната суспензия се прибавя към всяка ямка и се инкубира 1 h при 37°С, в присъствието или отсъствието на различни ανβ3 антагонисти. След инкубацията се прибавя 0,025 ml 10% формалдехиден разтвор, pH 7,4, и клетките се фиксират при стайна температура 10 min. Плаките се промиват 3 пъти с 0,2 ml RPMI среда и адхериралите клетки се оцветяват с 0,1 ml 0,5 % толуидиново синьо в продължение на 20 min при стайна температура. Излишното оцветяване се отстранява чрез екстензивно промиване с дейонизирана вода. Толуидиновото синьо, включено в клетките, се елуира чрез прибавяне на 0,1 ml 50% етанол, съдържащ 50 mM НС1. Клетъчната адхезия се определя количествено при оптическа гъстота при 600 шп върху уред за отчитане на микротитьрни плаки (Tietertek Multiscan МС, Sterling, VA).
Анализ на свързване на ανβ3 в твърда фаза Витронектинов рецептор ανβ3 се пречиства от човешка плацента. Рецепторният препарат се разрежда с 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 100 тМ NaCI, 1 тМ СаС12, 1 тМ МпС12 (буфер А) и се прибавя незабавно към 96-ямкови ELISA плаки по 0,1 ml/на ямка. Прибавят се по 0,1 -0,2 pg ανβ3 за ямка. Плаките се инкубират в продължение на една нощ при 4°С. По време на експеримента ямките се промиват веднъж с буфер А и се инкубират с 0,1 ml 3,5 % говежди серумен албумин в същия буфер в продължение на 1 h при стайна температура. След инкубацията ямките се аспирират напълно и се промиват два пъти с 0,2 ml буфер А.
В [’HJ-SK&F-107260 конкурентно изследване, различни концентрации от немаркирани антагонисти (0,001-100 μΜ) се прибавят към ямките, последвано от прибавяне на 5,0 пМ [Ή]SK&F-107260. Плаките се инкубират 1 h при стайна температура. След инкубацията ямките се аспирират напълно и се промиват веднъж с 0,2 ml леденостуден буфер А по начина от ямка в ямка. Рцепторите се солубилизират с 0,1 ml 1% SDS и свързването [3H]-SK&F-107260 се определя чрез течностно сцинтилационно броене с прибавяне на 3 ml Ready Safe в течностен сцинтилационен брояч Beckman LS 6800, с 40 % ефикасност. Неспецифичното свързване на [3H]-SK&F107260 се определя в присъствието на 2 μΜ SK&F-107260 и е по същество по-малко от 1% от общо включената радиолиганда. 1СЯ (концентрацията на антагониста, която инхибира 50 % от свързването на [3H]-SK&F-107260) се определя чрез нелинейно, рутинно нагаждане на крива от най-малките квадрати, който е модифициран от програма LUNDON-2. (дисоциационната константа на антагониста) се изчислява съгласно равенството на Cheng and Prusoff: К; = IC^ / (1+L/ Kd), където L и Kd са концентрацията и дисоциационната константа на [3H]-SK&F-107260, респективно.
Инхибиране на свързването GPIIb-IIIa с MewaTOpRGD
Пречистване на GPIIb-IIIa
Десет единици остарели промити човешки тромбоцити (получени от Червения кръст) се лизират чрез внимателно разбъркване в 3% октилппокозид, 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 140 тМ NaCI, 2 тМ СаС12 при 4°С, в продължение на 2 h. Лизатът се центрофугира при 100,000 g в продължение на 1 h. Получената над утаечна теч ност се прибавя към 5 ml лентил лектин сефарозе 4В колона (Е. Y. Labs) предварително еквилибрирана с 20 mM Tris-HCl, pH 7,4,100 тМ NaCl, 2 тМ СаС12,1% октилгликозид (буфер А). След 2 h инкубация колоната се промива с 50 mi студен буфер А. Задържаните от лектина GPIIb-IIIa се елуират с буфер А, съдържащ 10% декстроза. Всички процедури се извършват при 4°С. Полученият GPIIb-Ша е с повече от 95 % чистота, както се доказва чрез SDS електрофореза на полиакриламиден гел.
Включване на GPIIb-Ша в липозоми
Смес от фосфатидилсерин (70%) и фосфатидилхолин (30%) (Avanti Polar Lipids) се суши към стените на стъклена епруветка под поток от азот. Пречистен GPIIb-Ша се разрежда до крайна концентрация 0,5 mg/ml и се смесва с фосфолипидите в съотношение протеин:фосфолипид 1:3 (т/т). Сместа се суспендира отново и се обработва със сонотехника в баня в продължение на 5 min. След това сместа се диализира една нощ, като се използва отрязана диализна епруветка с 12,000-14,000 молекулно тегло спрямо 1000-кратен излишък от 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 100 тМ NaCl, 2 тМ СаС12 (с 2 смени). Липозомите, съдържащи GPIIb-Ша, се центрофугират при 12000 g в продължение на 15 min и се ресуспендират в диализен буфер в крайна протеинова концентрация приблизително 1 mg/ml. Липозомите се съхраняват при -70°С, докато е необходимо.
Конкурентно свързване с GPIIb-IIIa
Свързването с фибриногенния рецептор (GPIIb-Ша) се изследва чрез метода на индиректно конкурентно свързване, като се използва [3H]-SK&F-107260 като лиганда от RGD-тип. Анализът на свързването се извършва в 96-ямкови филтрационен плаков ансамбъл (Milipore Corporation, Bedford, МА), като се използват 0,22 urn хидрофилни дурапорни мембрани. Ямките се покриват предварително с 0,2 ml от 10 gg/ml полилизин (Sigma Chemical Co, St. Louis, МО) при стайна температура за 1 h, за да се блокира неспецифичното свързване. Различни концентрации от немаркирани бензазепини се прибавят към ямките в четири еднакви повторения. [3H]-SK&F107260 се прилага към всяка ямка в крайна концентрация от 4,5 пМ, последвано от прибавяне на 1 gg от липозомите, съдържащи пречистен GPIIb-IIIa от тромбоцити. Смесите се инкуби рат 1 h при стайна температура. Свързаният с GPIIb-Ша [3H]-SK&F-107260 се разделя от несвързания чрез филтриране, като се използва филтрираща хартия Millipore, последвано от промиване с леденостуден буфер (2 пъти, всеки по 0,2 ml). Свързаната радиоактивност, оставаща върху филтъра, се изброява в 1,5 ml Ready Solve (Beckman Instruments, Fullerton, СА) в сцинтилационен брояч в течност, Beckman (Модел LS 6800) с 40% ефективност. Неспецифичното свързване се определя в присъствието на 2 μΜ небелязан SK&F-107260 и по същество е по-малко от 0,14 % от общата радиоактивност, приложена към пробите. Всички данни са средни от четирикратни повторения.
Данните за конкурентното свързване се анализират чрез процедура на нагаждане на нелинейни най-малки квадрати. Този метод дава 1СМ на антагонистите (концентрацията на антагонист, която инхибира специфичното свързване на [3H]-SK&F-107260 50% при равновесие). IC^ е свързана с равновесната дисоциационна константа (К;) на антагониста на основата на равенството на Cheng and Prusoff: Kf = IC^/il+L/Kj), където L е концентрацията на [3H]-SK&F-107260, използвана в опита за конкурентно свързване (4,5 пМ) и Kd е дисоциационната константа на [3Н]SK&F-107260, която е 4,5 пМ, както е определено с анализ на Scatchard.
Предпочитаните съединения съгласно настоящото изобретение имат афинитет към витронектиновия рецептор, отнесена към фибриногеновия рецептор, по-голяма от 10:1. Най-предпочитаните съединения имат съотношение на активност, по-голямо от 100:1.
Ефикасността на съединенията с формула I самостоятелно или в комбинация с антинеоплазмени средства може да бъде определена, като се използват няколко модела на трансплантирани миши тумори. Виж US №№ 5 004 758 и 5 633 016 за подробности по тези модели.
Примери за изпълнение на изобретението
Примерите, които следват, не са предназначени по никакъв начин да ограничават обхвата на настоящото изобретение, но са дадени да илюстрират как да се получат и използват съединенията от настоящото изобретение. За специалистите от областта са очевидни много други изпълнения.
Обща част
Спектрите на Ή ядрения магнитен резонанс (NMR) се регистрират или при 250 или 400 MHz. Химичните отмествания са дадени в милионни части (d) по посока на вътрешния стандарт тетраметилсилан (IMS). Съкращенията за NMR данните са както следва: s = синглет, d = дублет, t = триплет, q = квартет, m = мултиплет, dd = дублет от дублети, dt = дублет от триплети, арр = привиден, br = широк. J посочва константата на свързване в NMR, измерена в херци. CDClj е деутериохлороформ, DMSO-d6 е хексадеутериодиметилсулфоксид и CD3OD е тетрадеутериометанол. Инфрачервените (IR) спектри са регистрирани по трансмисионен начин и положенията на ивиците са дадени в обратни сантиметри (cm1). Масспекгрите са получени, като се използват електроспрей (ES) или FAB йонизационни техники. Елементните анализи са извършвани или в собствената лаборатория или от Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ. Температурите на топене са определени на Thomas-Hoover апарат за точка на топене и не са коригирани. Всички температури са посочени в Целзиеви градуси. За тънкослойна хроматография са използвани плаки с Analtech Silicagel GF и Е. Merck Silicagel 60 F-254. Флаш и гравити хроматография се извършват на Е. Merck Kieselgel 60 (230-400 mesh) силикагел. Аналитичната или препаративната HPLC са изпълнени на Rainin или Beckman хроматографи. ODS се отнася за хроматографски носител дериватизиран с октадецилсилил силикагел. 5 μ Apex-ODS показва дериватизиран с октадецилсилил хроматографски носител силикагел, който има номинален размер на частиците 5 μ, произведен от Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQR e ODS хроматографски носител и е запазена марка на YMC Co. Ltd., Kyoto, Japan. PRP-1 е полимерен (стирен-дивинилбензенов) хроматографски носител и е запазена търговска марка на Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite“ e средство за подпомагане филтрирането, съставено от промит с киселина инфузорен силициев диоксид, и е запазена търговска марка на Manville Corp., Denver, Colorado.
Получаване 1
Получаване на метилов (±)-8-хидрокси3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетаг
a) 4-бромо-З-бромометиланизол
Смес от 2-бромо-5-метокситолуен (20 g, 0,10 mol), N-бромосукцинимид (19,6 g, 0,11 mol), бензоилпероксид (1 g, 4 mmol) и метиленхлорид (200 ml) се облъчва 18 h с високоватова флуидна лампа за извършване на внимателно кипене под обратен хладник. След това сместа се охлажда до -10°С в продължение на няколко часа и разтворът се декантира от утаения сукцинимид. Разтворът се концентрира и остатъкът се кристализира из хлороформ/хексан, като се получава съединението съгласно заглавието (19,7 g, 70%) като бледожълти призми. Ή NMR (CDC13) δ 7,45 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,9, 3 Hz, 1H), 4,55 (s, 2H),
3,80 (s, 3H).
b) 3-бис(трет-бутоксикарбонил)аминометил-4-бромоанизол
Смес от 4-бромо-З-бромометиланизол (24 g, 86 mmol) и калиев ди-трет-бутилиминодикарбоксилат (24 g, 94 mmol) в диметилформамид (200 ml) се разбърква под аргон при стайна температура в продължение на 18 h. След това реакционната смес се концентрира под вакуум и остатъкът се разпределя между етилацетат и вода. Органичната фаза се промива с вода и разтвор на натриев хлорид, суши се (MgSOJ и се концентрира. Остатъкът се прекристализира из хексан, като се получава съединението съгласно заглавието (15 g, 42 %) като бяло твърдо вещество: Ή NMR (CDC13) δ 7,40 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,68 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 1,44 (s, 18H).
c) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2бис(трег-бутоксикарбонил)аминометил-4-метоксифенил]-3-бутеноат
В колба от 500 ml се зареждат 3-бис(третбутоксикарбонил)аминометил-4-бромоанизол (15 g, 36 mmol), диметилитаконат (7,5 g, 47 mmol), три-о-толилфосфин (1 g, 3 mol), паладиев ацетат (0,4 g, 2 mmol), диизопропилетиламин (12,8 ml, 72 mmol), и пропионитрил (150 ml). Сместа се очиства с аргон (няколко евакуации/аргонова струя цикли), след това се нагрява до кипене под обратен хладник, под аргон в продължение на 1 h. Реакционната смес се оставя да се охлади до стайна температура, след това се излива в леденостуден етилов етер (500 ml). Получената утайка се отстранява чрез филтриране и филтра тьт се концентрира. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силикагел (10-20% етилацетат в хексан), като се получава съединението съгласно заглавието (11,8 g, 66 %) като бледожълто масло: Ή NMR (CDC13) δ 7,94 (s, Ш),
7,15 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,1 Hz, 1H),
6,76 (s, 1H), 4,73 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,38 (s, 2H), 1,45 (s, 18H).
d) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2бис(трет-бутоксикарбонил)аминометил-4-метоксифенил]бутаноат
Съд под налягане се зарежда с метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-бис(трет-бутоксикарбонил)аминометил-4-метоксифенил]-3-бутеноат (11,8 g), етилацетат (120 ml) и 10 % паладий върху въглен (1 g) и се разклаща под 45 psi водород в продължение на 18 h. След това сместа се филтрира и филтратът се концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието (12 g, 100%) като безцветно масло: ‘HNMR(CDC13) δ 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,71 (m, 2H), 4,81 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,05 (m, 2H), 2,73 (m, 2H), 2,42 (dd, J = 16,0,4,8 Hz, 1H), 1,44 (s, 18H).
e) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2(аминометил)-4-метоксифенил]бутаноат
Разтвор на метилов (±)-3-карбометокси-
4-[2-бис(трет-бутоксикарбонил)аминометил-4метоксифенил]бутаноат (12 g) в хлороформ (100 ml) и трифлуорооцетна киселина (50 ml) се разбърква под аргон при стайна температура в продължение на 4 h. След това разтворът се концентрира под вакуум, като се получава съединението съгласно заглавието (10 g, 100 %) като вискозно масло: MS (ES) m/e 296,2 (М+Н)+.
f) Метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на метилов (±)-3-карбометокси-
4-[2-(аминометил)-4-метоксифенил]бутаноат (10 g, 24 mmol) и триетиламин (17 ml, 120 mmol) в толуен (100 ml) се нагрява под обратен хладник в продължение на 18 h. Реакционната смес след това се концентрира и остатъкът се разпределя между етилацетат и вода. Водният слой се екстрахира два пъти с етилацетат и обединените органични екстракти се промиват с разтвор на натриев хлорид, сушат се (MgSO4) и се концентрират, като се получава съединението съгласно заглавието (4,8 g, 76 %) като жълто-кафяво твърдо вещество: MS (ES) m/e 264,2 (М+Н)+.
g) Метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,
4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Безводен алуминиев хлорид (7,6 g, 57 mmol) се прибавя на порции към разбъркван разтвор на метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат (3,0 g, 11 mmol) и етантиол (4,2 ml, 57 mmol) в метилен хлорид (100 ml) при 0°С под аргон. Получената смес се оставя да се затопли до стайна температура и се разбърква една нощ, след това се концентрира. Остатъкът се обработва с лед-вода и полученото твърдо вещество се събира чрез филтриране и се суши, като се получава съединението съгласно заглавието (2,64 g, 91 %) като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 250,2 (М+Н)+.
Получаване 2
Получаване на метилов (±)-8-хидрокси-
2- метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
a) 3-[№(трет-бутоксикарбонил)-№метиламино]метил-4-бромоанизол
Бързо се прибавя 40%-ен воден метиламин (49 ml, 563 mmol) към разтвор на 4-бромо-
3- бромометиланизол (15,76 g, 56,29 mmol) в THF (280 ml) при стайна температура. След 2,5 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се разпределя между EtjO (560 ml) и 1,0 N NaOH (100 ml). Слоевете се разделят и органичният слой се суши (MgSO4) и концентрира до жълто масло: ТСХ (5% МеОН/СНС13) Rf 0,32.
Маслото се разтваря в СНС13 (280 ml) и се прибавя ди-трет-бутилдикарбонат (1,29 g,
56,29 mmol). Реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на 45 min, след това се концентрира. След хроматография върху силикагел (5% EtOAc/толуен) се получава съединението съгласно заглавието (16,81 g, 90%) като светложълто масло: ТСХ (5% EtOAc/ толуен) Rf0,43; Ή NMR (400, CDC13) смес от ротамери; δ 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,65-6,80 (m, 2H), 4,40-4,55 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,81-
2,97 (m, 3H), 1,37-1,60 (m, 9H); MS (ES) m/e 352/354 (M+Na)+.
b) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-[Ъ1(трет-бутоксикарбонил)-Н-метиламино]метил-4метоксифенил]бутаноат
Разтвор на 3-р4-(трет-бутоксикарбонил)№метиламино]метил-4-бромоанизол (4,95 g, 15 mmol), диметилитаконат (3,08 g, 19,5 mmol), па ладиев ацетат (168 mg, 0,75 mmol), три-о-толилфосфин (457 mg, 1,5 mol) и диизопропилетиламин (5,2 ml, 30 mmol) в пропионитрил (75 ml) се нагрява под обратен хладник в продължение на 45 min, след това се концентрира на ротационен изпарител. Остатъкът се разрежда с ЕЦО (150 ml) и сместа се филтрира през целит, за да се отстранят неразтворените вещества. Филтратът се концентрира и остатъкът се концентрира отново из ксилен. С хроматография върху силикагел (градиент: 20% EtOAc/хексан, след това 1:1 EtOAc/хексан) се отстранява фосфинът и основните вещества; всички други вещества с Rf 0,40 - 0,70 се събират заедно и се концентрират, като се получава мътно жълто масло: ТСХ (30% EtOAc/хексан) Rf 0,41 (главен продукт).
Маслото се разтваря в МеОН (75 ml) и се прибавя внимателно 10% Pd/C. Сместа се разклаща под водород (50 psi) в продължение на
2,5 h, след това се филтрира през целит, за да се отстрани катализаторът. Филтратът се концентрира и остатъкът се подлага отново на реакционните условия. След още 2,5 h сместа се филтрира през целит, за да се отстрани катализаторът, и филтратът се концентрира, като се получава светложълто масло. То се концентрира отново из СНС13/ хексан, след това се хроматографира върху силикагел (градиент: 20 % EtOAc/хексан, след това 1:1 EtOAc/хексан), като се получава съединението съгласно заглавието (4,53 g, 74 %) като светложълто масло: ТСХ (30% EtOAc/толуен) Rf 0,46; Ή NMR (400, CDC13) смес от ротамери; δ 7,03 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,65-6,80 (m, 2H),
4,46 (br s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 2,62-3,12 (m, 7H), 2,35-2,50 (m, 1H), 1,47 35 (br s, 9H); MS (ES) m/e 432 (M+Na)+.
c) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-(метиламино)-метил-4-метоксифенил]бутаноат
TFA (55 ml) се прибавя наведнъж към разтвор на метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-рЧ(трет-бутоксикарбонил)-Н-метиламино]метил-4метоксифенил]бутаноат (4,53 g, 11,6 mmol) в безводен CHjCl2 (55 ml) при 0°С и реакционната смес се затопля до стайна температура. След 1 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се 45 концентрира повторно из толуен (2 х 100 ml), като се получава съединението съгласно заглавието (11,06 mmol, количествено) като бледожълто масло. MS (ES) m/e 310 (М+Н)+.
d) Метилов (±)-8-метокси-2-метил-3-ок- 50 со-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат Разтвор на метилов (±)-3-карбометокси4-[2-(метиламино)метил-4-метоксифенил]бутаноат (11,06 mmol) и диизопропилетиламин (5,8 5 ml, 33,18 mmol) в толуен (110 ml) се нагрява под обратен хладник 25 h, разбърква се при стайна температура в продължение на 4 дни, след това се нагрява под обратен хладник още 24 h. След концентриране и хроматография върху си10 ликагел (5% МеОН в 1:1 EtOAc/CHCl3) се получава съединението съгласно заглавието (2,28 g, 94 %) като светложълто твърдо вещество: TLC 5% МеОН в 1:1 EtOAc/CHCl3) Rf 0,63; Ή NMR (250, CDC13) δ 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, 15 J = 8,4,2,7 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 3,50-3,90 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,73-3,16 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,41 (dd, J = 16,7, 5,4 Hz, 1H); MS (ES) m/e 300 (M+Na)+, 278 (M+H)+.
е) Метилов (±)-8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат Безводен алуминиев хлорид (1,35 g, 10,15 mmol) се прибавя изцяло наведнъж към разтвор на метилов (±)-8-метокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,
5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат(562п^, 2,03 mmol) и етантиол (0,75 ml, 10,15 mmol) в безводен СН2С12 (20 ml) при 0°С, под аргон. Сместа се затопля до стайна температура и се разбърква в продължение на 4,5 h, след това се охлажда отново до 0°С. Прибавя се леденостудена вода (20 ml) и сместа се разбърква енергично 5 min, след това се екстрахира с СНС13 (3 х 20 ml). Обединените СНС13 слоеве се сушат (MgSO4) и се концентрират, като остава остатък. Водният слой се филтрира чрез изсмукване, за да се събере твърдата утайка. Тази утайка и остатъкът от СНС13 разтвор се обединяват в 1:1 МеОН/СНС13 и разтворът се концентрира, като остава белезникаво твърдо вещество. То се смес40 ва с горещ метанол и сместа се оставя да се охлади до стайна температура. Твърдото вещество се събира чрез филтриране с изсмукване и се промива последователно със студен метанол и EtjO. След сушене във висок вакуум при 40°С се получава съединението съгласно заглавието (467,9 mg, 88%), като безцветно твърдо вещество: ТСХ (5 % МеОН/СНС13) Rf0,17; Ή NMR (250, DMSO-d6) δ 9,29 (s, 1H), 6,89 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,50-6,70 (m, 2H), 5,16 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,84 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,60-3,85 (m, 1H),
3,56 (s, ЗН), 2,30-3,00 (m, 4H), 2,86 (s, ЗН); MS (ES) m/e 286 (M+Na)+, 264 (M+H)+.
Получаване 3
Получаване на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-пиридин-Н-оксид
а) 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-И-оксид
Смес от 2-хлоропиридин-1Ч-оксид (16,6 g, 0,1 mol), З-амино-1-пропанол (15,3 ml, 0,2 mol), NaHCO3 (42 g, 0,5 mol) и трет-амилов алкохол (100 ml) се нагрява под обратен хладник. След 21 h реакционната смес се охлажда, разрежда се с СН2С12 (300 ml) и се филтрира при изсмукване, за да се отстранят неразтворените вещества. Филтратът се концентрира и отново концентрира из толуен, като се получава жълто масло. След хроматография върху силикагел (20 % MeOH/CHClj) се получава съединението съгласно заглавието (15,62 g, 93%), като жълто твърдо вещество: ТСХ (20% МеОН/СНС13) Rf0,48; Ή NMR (250, CDC13) δ 8,07 (dd, J = 6,6,1,2 Hz, 1H), 7,34 (br, t, 1H), 7,10-7,30 (m, 1H), 6,64 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 6,40-6,60 (m, 1H), 4,49 (br s, 1H), 3,65-3,90 (m, 2H), 3,35-3,60 (m, 2H), 1,75-2,00 (m, 2H); MS (ES) m/e 169 (M+H)+.
Получаване 4
Получаване на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-4-нитропиридин-И-оксид
а) 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-4нитропиридин-К-оксид
Съгласно процедурата от получаване 3, с изключение на това, че вместо 2-хлоропиридинN-оксид хидрохлорид се използва 2-хлоро-4нитропиридин-Н-оксид (виж Jain Р.С., Chatterjee
S.K., Anand N., Indian Journal of Chemistry 1966, 403), се получава съединението съгласно заглавието като оранжево твърдо вещество; MS (ES) m/e 214,2 (М+Н)+.
Получаване 5
Получаване на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-4-метоксипиридин-Н-оксид
а) 2- [(3 -хидрокси-1 -пропил)амино]-4метоксипиридин -N-оксид
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-4-нитропиридин-К-оксид (0,275 g, 1 mmol) и 0,5 М NaOMe в МеОН (16 ml, 8 mmol) се нагрява под обратен хладник под аргон в продължение на 3 h. След това реакционната смес се оставя да се охлади и се прибавя ледена оцетна киселина (0,5 ml, 8 mmol). Разтворът се концен трира до сухо и остатъкът се смесва с СН2С12. Неразтворените вещества се отстраняват чрез филтриране и филтратът се концентрира. След хроматография върху силикагел (5-15% МеОН/ СН2С12) се получава съединението съгласно заглавието (0,23 g, 90%) като безцветно масло: MS (ES) m/e 199,0 (М+Н)+.
Получаване 6
Получаване на (±)-8-хидрокси-3-оксо-2(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2бензазепин-4-ацетат
а)3-[Н-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2,2,2трифлуороетил)амино]метил-4-бромоанизол
2,2,2-трифлуороетиламин (4,9 ml, 62,5 mmol) се прибавя бързо към разтвор на 4-бромо-3-бромометиланизол (7,00 g, 25 mmol) в безводен DMSO (25 ml) при стайна температура. Реакционната смес се затопля до приблизително 30-35°С. След 2 h, реакционната смес се разрежда с леденостудена 0,5 N NaOH (100 ml) и се екстрахира с ЕЦО (3 х 100 ml). Обединените Et2O слоеве се промиват последователно с Н2О (2 х 25 ml) и разтвор на натриев хлорид (25 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до светложълто масло: ТСХ (толуен) Rf 0,43.
Маслото се разтваря в безводен CHjClj (48 ml) в облодънна колба и се прибавя ди-трет-бутидцикарбонат (10,48 g, 48,04 mmol). Колбата, съдържаща реакционния разтвор, се поставя на ротационен изпарител и се върти под вакуум при 50°С в продължение на 16 h. Полученият остатък се разрежда с хексан (100 ml) и към разтвора се прибавя малко количество чист твърд продукт (получен от предварителен опит посредством хроматография, като се използва за елуент 10% EtOAc/хексан). Сместа се оставя да стои при стайна температура в продължение на няколко часа, след това се поставя в хладилник за една нощ. Продуктът се събира чрез филтриране с изсмукване и се промива с хексан. Сушене под вакуум води до получаване на съединението съгласно заглавието (7,19 g, 75%) като безцветно твърдо вещество. Матерните луги се концентрират и се хроматографират върху силикагел (10% EtOAc/хексан), като се получава съединението съгласно заглавието (1,42 g; общо =
8,61 g, 90%): ТСХ (10% EtOAc/толуен) Rr0,48; т.т. 86-89°С; Ή NMR (250, CDC13) δ 7,44 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,64-6,82 (m, 2H), 4,52-4,70 (m, 2H),
3,61-4,00 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 1,22-1,68 (m,
9Н).
b) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-[Ь1(трет-бутоксикарбонил)-№(2,2,2-трифлуороетил)амино]метил-4-метоксифенил]бутаноат
Разтвор на 3-[Ъ1-(трет-бутоксикарбонил)N-(2,2,2-трифлуороетил)амино]метил-4-бромоанизол (9,17 g, 23,03 mmol), диметилитаконат (4,73 g, 29,94 mmol), паладиев ацетат (259 mg,
1,15 mmol), три-о-толилфосфин (701 mg,
2,30 mol) и диизопропилетиламин (8,0 ml, 46,06 mmol) в пропионитрил (115 ml) се дезоксигенира (3 х цикли евакуация/продухване с аргон), след това се нагрява под обратен хладник, под аргон. След 2 h реакционната смес се концентрира и повторно концентрира из аргон. След хроматография върху силикагел (30% EtOAc/ хексан, нанасяне на пробата с С1/С12) отстранява фосфина и основните вещества; всички други вещества с Rf 0,55 - 0,70 се събират заедно и се концентрират като остава жълто масло. То се смесва с 20% EtOAc/хексан (200 ml) и се оставя да стои при стайна температура в продължение на 1 h и след това се държи в хладилник една нощ. Сместа се филтрира, за да се отстрани жълтата утайка, и филтратът се концентрира, като се получава 9,93 g (91 %) жълто масло. ТСХ (30% EtOAc/хексан) Rf 0,55 (главен продукт).
Маслото се разтваря в EtOAc (100 ml) и се прибавя 10% Pd/C (4,44 g, 4,18 mmol). Сместа се разклаща под водород (50 psi) в продължение на 3,5 h, след това се филтрира през целит, за да се отстрани катализаторът. Филтратът се концентрира и остатъкът се хроматографира върху силикагел (градиент: 20% EtOAc/хексан), като се получава съединението съгласно заглавието (7,98 g, 73% за двата етапа) като безцветно масло: ТСХ (20% EtOAc/толуен) Rf 0,35; Ή NMR (250, CDClj) δ 7,05 (d, J = 8,4 Hz, 1H),
6,76 (dd, J = 8,4, 2,7 Hz, 1H), 6,60-6,72 (m, 1H), 4,50-4,80 (m, 2H), 3,45-3,95 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,63 (s, 6H), 2,85-3,09 (m, 2H), 2,58-2,80 (m, 2H), 2,33-2,50 (m, 1H), 1,20-1,70 (m, 9H); MS (ES) m/e 500 (M+Na)+.
c) Метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-(2,
2,2-трифлуороетиламино)метил-4-метоксифенил]бутаноат
TEA (55 ml) се прибавя наведнъж към разтвор на метилов (±)-3-карбометокси-4-[2-Р4(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2,2,2-трифлуоро етил)амино]метил-4-метоксифенил]бутаноат (7,98 g, 16,71 mmol) в безводен СН2С12 (42 ml) при 0°С, под аргон и реакционната смес се затопля до стайна температура. След 1 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се концентрира отново из ксилен. След сушене под вакуум при 40°С се получава съединението съгласно заглавието (8,70 g, количествено) като жълто твърдо вещество: MS (ES) m/e 378 (М+Н)+.
d) Метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2-(2,2, 2-трифлуорометил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (±)-3-карбометокси-4[2-(2,2,2-трифлуороетиламино)метил-4-метоксифенил]бутаноат (16,71 mmol), трипропиламин (9,5 ml, 50,13 mmol) и ксилен (170 ml) се нагрява под обратен хладник. След 63 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се хроматографира върху силикагел (2:1 EtOAc/хексан, нанасяне с СН2С12). Съединението съгласно заглавието (5,33 g, 92% за двата етапа) се получава като светложълто твърдо вещество: ТСХ (40% EtOAc/хексан) Rf 0,49; Ή NMR (250, CDC13) δ 7,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 8,5 Hz, 2,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 3,60-4,30 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 2,81-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J = 16,9, 5,5 Hz, 1H); MS (ES) m/e 368 (M+Na)+, 346 (M+H)+.
e) Метилов (±)-8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахвдро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на ВВг3 в СН2С12 (1,0 М, 60 ml, 60 mmol) се прибавя на капки в течение на 30 min към разтвор на метилов (±)-8-метокси-3-оксо2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-ацетат (5,16 g, 14,94 mmol) в безводен CHjClj (60 ml) при -5°С до -10°С под аргон. След допълнително 1 h при -5 до -10°С, реакционната смес се охлажда напълно до -10°С и реакцията се спира чрез внимателно прибавяне на капки от МеОН (60 ml). Реакционната смес се разбърква при -10 до 0°С, след това се концентрира на ротационен вакуумизпарител. Остатъкът се концентрира отново из МеОН (2х) след това от EtOAc, след това се филтрира през слой силикагел (елуент EtOAc). След концентриране на филтрата остава жълто твърдо вещество, което се разтрива с горещ хексан. Съединението съгласно заглавието се получава (4,74 g, 96 %) кагго белезникаво твърдо вещество: ТСХ (1:1 EtOAc/ хексан) Rf 0,40; Ή NMR (400, DMSO-d6) δ 9,28 (s, 1H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,62 (dd, J = 8,3,
2,5 Hz, 1H), 6,57 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,27 (d, J =
16,7 Hz, 1H), 4,22-4,38 (m, 1H), 4,07-4,22 (m, 1H), 4,07 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,72-3,83 (m, 1H),
3,58 (s, 3H), 2,94 (dd, J = 17,0, 3,8 Hz, 1H), 2,72 (dd, J = 16,7, 9,1 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 17,0, 14 Hz, Ш), 2,49 (dd, J = 16,7, 5,0 Hz, 1H, частично засенчен от остатъчен сигнал на разтворителя); MS (ES) m/e 354 (M+Na)+.
Получаване 7
HPLC разделяне на енантиомерите на метилов (±)-8-хидрокси-3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов (Я)-(+)-8-хидрокси-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат и метилов (8)-(-)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-бензазепин-4-ацетат се разделя на неговите енантиомери чрез хирална HPLC, като се използват следните условия. Колона с Diacel Chiralpak AS® (21,2 х 250 mm), EtOH подвижна фаза, 7 ml/min скорост на изтичане, откриване чрез UV при 254 nm, 70 mg инжектиране; за метилов (К)-(+)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетата = 21,5 min;
за метилов (8)-(-)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат=39,1 min. Получаване 8
Разделяне чрез HPLC на енантиомерите на метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов (К)-(+)-8-метокси-3-оксо-2,3,
4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат и метилов (8)-(-)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат се разделя на неговите енантиомери чрез хирална HPLC, като се използват следните условия: Колона Diacel ф
Chiralpack AS (21,2 х 250 mm), подвижна фаза CHjCN, скорост на изтичане 15 ml/min, доказване с UV при 254 nm, инжектиране 500 mg; за метилов (К)-(+)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат = 10,2 min; t* за метилов (8)-(-)-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат= 19,0 min.
Получаване 9
Получаване на метилов (8)-(-)-8-метокси-
-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацегаг
а) Метилов (8)-(-)-8-хидрокси-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на метилов (S)-(-)-8-mctokch-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (15,0 g, 0,057 mol) в СНС13 (160 ml) се прибавя на капки в течение на 30 min към разтвор на борен трибромид (20,53 ml, 0,217 mol) в СНС13 (160 ml) при -8°С под аргон, като се поддържа температурата между -5°С и 0°С. Реакционната смес се разбърква 30 min при около -8°С и след това се прибавя МеОН (200 ml) отначало на капки, като температурата се поддържа при около 0°С. Реакционната смес се концентрира, като се получава вискозно масло, което се концентрира отново из МеОН (100 ml). Маслото се разтваря в HjO/MeOH и малко количество тъмно твърдо вещество се отстранява чрез филтриране. Филтратът се неутрализира (до pH 7) с 50% натриев хидроксид, като се утаява бяло твърдо вещество. pH на суспензията се довежда до 4,5 чрез прибавяне на малко количество оцетна киселина и твърдото вещество се събира и се суши във вакуум, като се получава съединението съгласно заглавието (9,7 g, 68%). Продуктът се анализира за хирална чистота чрез HPLC: Колона ф
Chiralpack AS (4,6 х 50 mm), подвижна фаза 100% EtOH, скорост на изтичане 0,5 ml/min, проявяване с UV при 215 nm; tR = 7,5 min (S-енантиомер, 99 %); = 4,4 min (R-енантиомер, 1%).
Получаване 10
Получаване на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]-4,6-диметилпиридин-Н-оксид
а) 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]-4,6диметилпиридин-Н-оксид
Съгласно процедурата от получаване 4, с изключение на това, че вместо 2-хлоропиридинN-оксид хидрохлорид се използва 2-хлоро-4,6диметилпиридин-N-оксид (виж Brown, Е. V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565), се получава съединението съгласно заглавието като бистро масло; MS (ES) m/e 197,2 (М+Н)+.
Получаване 11
Получаване на 6-(метиламино)-2-пиридилетанол
а) 2-(трет-бугоксикарбониламино)-6-пиколин
Към разбъркван разтвор на 2-амино-6-пиколин (4,33 g, 40 mmol), Et3H (6,2 ml, 40 mmol) и CHjClj (50 ml) при 0°C се прибавя ди-трет-бутилдикарбонат (9,6 g, 44 mmol). След разбъркване при стайна температура една нощ, реакционната смес се концентрира под вакуум, разрежда се с HjO и се екстрахира с СН2С12 (2 х 50 ml). След сушене (MgSO4) и концентриране се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 209 (М+Н)+.
b) 2-[(трет-бутоксикарбонил)метиламино]-6-пиколин
Към суспензия от NaH (60 % дисперсия в минерално масло, 0,44 g, 11 mmol) в DMF (20 ml) при 0°С се прибавя разтвор на 2-(трет-бутоксикарбониламино)-6-пиколин (2,1 g, 10 mmol) в DMF (30 ml). Реакционната смес се разбърква при 0°С в продължение на 15 min; след това се прибавя метилйодид (1,6 g, 11 mmol). Реакционната смес се концентрира под вакуум, разрежда се с HjO и се екстрахира с СН2С12 (3 х 50 ml). След сушене (MgSO4) и концентриране се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 223 (М+Н)+.
c) Етилов 6-[(трет-бутоксикарбонил)метиламино]-2-пиридилацетат
LDA (18 mmol) се получава в THF (30 ml), охлажда се до -78°С и се прибавя 2-[(трет-бутоксикарбонил)метиламино]-6-пиколин (2 g, 9 mmol), като се образува интензивно червен разтвор. След 15 min се прибавя диетилкарбонат (18 ml, 15 mmol). Оцветеният като бургундско червено разтвор се разбърква при -78°С допълнително още 15 min, след това реакцията се спира с наситен разтвор на NH4C1. Сместа се затопля до стайна температура и се екстрахира с EtOAc (3 х 30 ml). Обединените органични слоеве се промиват с разтвор на натриев хлорид, сушат се (MgSO4), филтрират се и се концентрират. След хроматография върху силикагел се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 294 (М+Н)+.
d) Етилов 6-(метиламино)-2-пиридилацетаг
Разтвор на етилов 6-[трет-бутоксикарбонил)-метиламино]-2-пиридилацетат (0,6 g, 2 mmol) и 4М НС1/диоксан (5 ml, 20 mmol) се разбърква една нощ при стайна температура, след това се концентрира. Повторно концентриране из толуен води до получаване на съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 195 (М+Н)+.
е) 6-(метиламино)-2-пиридилетанол
Към механично разбъркван разтвор на LiAlH4 в THF (1,0 М, 20 ml, 20,4 mmol) се прибавя на капки разтвор на етилов 2-(метиламино)-6-пиридилацетат (0,38 g, 2 mmol) BTHF (10 ml). След като завърши прибавянето, реакционната смес се затопля до 0°С и реакцията се спира с 10%-ен разтвор на NaOH. Твърдите вещества се отстраняват чрез филтриране и филтратът се концентрира под вакуум. Остатъкът се разтваря в СН2С12 и разтворът се суши (MgSO4) и се концентрира. Повторно концентриране из толуен (3 х) води до получаване на съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 153 (М+Н)+.
Получаване 12
Получаване на 3-[(трет-бутоксикарбонил) амино]-1 -пропанол
а) 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропанол
Разтвор на ди-трет-бутилдикарбонат (10,91 g, 50 mmol) в CHjCl2 (50 ml) се прибавя на капки към разтвор на З-амино-1 -пропанол (11,5 ml, 150 ml) в СН2С12 (250 ml) при0°С. Мътният разтвор се затопля до стайна температура и се разбърква 1 Ь, след това се концентрира на ротационен изпарител. Остатъкът се смесва с (100 ml) и се екстрахира с EtjO (3 х 100 ml). След сушене (MgSO4) и концентриране се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 4,80 (br s, IH), 3,50-3,80 (m, 2H), 3,13-3,42 (m, 2H), 3,03 (br t, IH), 1,55-1,80 (m, 2H), 1,45 (s, 9H); MS (ES) m/e 198 (M+Na)+.
Получаване 13
Получаване на 3-(4-нитробензилоксикарбониламино)-1 -пропанол
а) 3-(4-нитробензилоксикарбониламино)1-пропанол
Към разбъркван под аргон при стайна температура разтвор от З-амино-1-пропанол (0,77 g,
1,1 mmol) и триетиламин (2,85 ml, 7 mmol) в THF (5 ml) се прибавя суспензия от 4-нитробензилхлороформиат (2 g, 1 mmol) в THF (20 ml). Получената смес се разбърква при стайна температура две денонощия и след това се концентрира. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силикагел (0-2% МеОН/CHjClj), като се получава съединението съгласно заглавието (0,80 g, 34 %) като бледожълто масло: MS (ES) m/e 254,3 (M+H)+.
Получаване 14
Получаване на 2-[Т4-(3-хидрокси-1-пропил)-1Ч-(трет-бутоксикарбонил)амино]пиридинN-оксид
а) 2-[Ъ1-(3-хидрокси-1 -пропил)-И-(третбутоксикарбонил)амино]пиридин-N-оксид
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]пиридин-М-оксид (8,0 g, 47,6 mmol) в третВиОН (80 ml) се обработва с ди-трет-бутилдикарбонат (11,4 g, 55,3 mmol). След 18 h разтворът се концентрира и остатъкът се разпрашава с хексан. Полученото твърдо вещество се суши под вакуум, като се получава съединението съгласно заглавието (12,5 g, 98 %) като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 269,3 (М+Н)+.
Получаване 15
Получаване на метилов (±)-8-[3-[Ν-(1-οκсопиридин-2-ил)-1Ч-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов (±)-8-[3-[1Ч-(1-оксопиридин2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че вместо 2-[(3-хидрокси-
1- пропил)амино]пиридин-Ь1-оксид се използва
2- [Ъ1-(3-хидрокси-1 -пропил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]пиридин-М-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като светлооранжева пяна: MS (ES) m/e 500,4 (М+Н)+.
Получаване 16
Получаване на 2-[(3-хидрокси-1 -пропил) амино]-4-метилпиридин-М-оксид
Смес от 2-хлоро-4-метилпиридин-М-оксид (12,1 g, 0,068 mol) (Brown E.V., J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565), З-амино-1-пропанол (10,33 ml, 0,14 mol), NaHCO3 (28 g, 0,34 mol) и трет-амилов алкохол (70 ml) се нагрява под обратен хладник. След 16 h реакционната смес се охлажда, разрежда се с СН2С12 (300 ml) и се филтрира чрез изсмукване, за да се отстранят неразтворимите вещества. Филтратът се концентрира и повторно се концентрира из толуен, като остава жълто масло. След прекристализиране из CHjCIj/EtjO се получава съединението съгласно заглавието (10,87 g, 88 %), като жълто твърдо вещество: ТСХ (15% MeOH/CHjClj) Rf 0,44; Ή NMR (400, CDC13) δ 7,92 (d, J = 6,7,
1H), 7,28 (br t, 1H), 6,43 (s, 1H), 6,33 (dd, J =
6,6, 2,1 Hz, 1H), 3,73 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,47 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,82-1,88 (m, 2H); MS (ES) m/e 183 (M+H)+.
Получаване 17
Получаване на метилов (8)-8-хидрокси-
3-оксо-2-[4-(трифлуорометил )бензил]-2,3,4,5тетрахвдро-1Н-2-бензазепин-4-ацетатчрез алкилиране на метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
a) Метилов (8)-3-оксо-8-[4-трифлуорометил)-бензилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Към разтвор на метилов (8)-8-хидрокси-
3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-2-1Н-бензазепин-4ацетат (0,31 g, 1,24 mmol) и 4-(трифлуорометил)бензил бромид (0,89 g, 3,72 mmol) в DMF (10 ml) се прибавя NaH (60 % суспензия в масло, 0,11 g, 2,75 mmol). След разбъркване при стайна температура в продължение на 4 h, количеството от DMF се отстранява под вакуум. Остатъкът се разпределя между наситен NaHCO3 и EtOAc. Водната фаза се екстрахира с етилацетат и обединените органични екстракти се промиват с наситен NaCl, сушат се над Na2SO4 и се концентрират, като се получава бистро масло (0,90 g). След радиална хроматография (5% ацетон/ СН2С12, силикагел, 6 mm плака) се получава съединението съгласно заглавието (0,53 g) като бяла пяна. MS (ES) m/e 566,1 (М+Н)+.
b) Метилов (S)-8-xrmpoKCH-3-OKco-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Колба на Parr за хидрогениране се зарежда с метилов (8)-3-оксо-8-[4-(трифлуорометил)бензилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,78 g, 1,38 mmol) и катализатор на Pearlman (20 mg) в МеОН (20 ml). След хидрогениране при 50 psi в продължение на 24 h реакционният съд се продухва и катализаторът се отстранява чрез филтриране. Отстраняване на разтворителя води до получаване на бяла пяна (0,60 g). След радиална хроматография (5% ацетон/СНзС^, силикагел, 6 mm плака) се получава съединението съгласно заглавието (0,42 g) като бяла пяна. Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 7,5, 3,4 Hz, 1H), 6,39 (d, J =
3,4 Hz, 1H), 5,05 (m, 2H), 4,35 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (m, 1H),
2,95 (m, 4H), 2,45 (dd, J = 17,1, 5,1 Hz, 1H).
Получаване 18
Получаване на метилов (Б)-8-хидрокси-
3- оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат чрез енантиоселективна синтеза
a) 4-бромо-З-бромометиланизол
Към разбъркван разтвор на 4-бромо-З-метиланизол (100 g, 497 mmol) в сух дихлорометан (500 ml) се прибавя N-бромосукцинимид (97 g, 545 mmol), последван от бензоилпероксид (6 g, 25 mmol). Реакционната смес се нагрява под обратен хладник внимателно със 150-ватова флуидна лампа с рефлектор поставен приблизително на 12 инча от реакционната колба. След 24 h реакционната смес се концентрира чрез ротационен изпарител до половината от обема си и се оставя да престои 4 h. Бялата утайка, която се образува, се филтрира и се промива с малък обем дихлорометан. Филтратът се концентрира до сухо и оставащото твърдо вещество се разпрашава с хексан и се филтрира. След сушене под вакуум се получава съединението съгласно заглавието (100,25 g, 72 %) като бели игли: GC tR = 6,56 min (HP 530 μτη χ 20 m метилсиликонова колона, носител Не, скорост на носителя 20 ml/min, начална температура 100°С, начално време 1 min, скорост 10°C/min, крайна температура 200°С, крайно време 1 min); Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,44 (d, J = 10 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,73 (dd, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H).
b) 3-[Ъ1-(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4-бромоанизол
Към разбъркван разтвор на 4-бромо-Збромометил-анизол (35 g, 125 mmol) в безводен DMSO (50 ml) и сух THF (50 ml) се прибавя
4- трифлуорометилбензиламин (30 g, 171 mmol), последван от триетиламин (18 ml, 129 mmol). След разбъркване 18 h при стайна температура, реакционната смес се концентрира, разрежда се с воден 1 N NaOH (250 ml) и се екстрахира с EtjO (2 х 250 ml). Обединените органични слоеве се промиват с разтвор на натриев хлорид, сушат се (Na2SO4) и се концентрират до сухо. Остатъкът, който се получава, се пречиства чрез флаш хроматография върху силикагел (10 до 20 % EtOAc/CHCl3), като се получава съединението съгласно заглавието (34,17 g, 73 %). ТСХ (20%
EtOAc/CHCl3)RfO,63; 'HNMR(400MHz,CDCl3) δ 7,59 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,70 (dd, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,84 (s, 2H),
3,79 (s, 3H), 1,75 (br s, 1H).
c) 3-|ф4-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(4трифлуорометил-бензил)аминометил]-4-бромоанизол
Към разбъркван разтвор на 3-[Ν-(4-τρΗφлуорометил-бензил)аминометил]-4-бромоанизол (34,17 g, 91 mmol) в сух THF (100 ml) се прибавя ди-трет-бутилдикарбонат (22 g, 101 mmol). Реакционната смес се разбърква под аргон в продължение на 18 h (наблюдава се енергично отделяне на газ). След концентриране и хроматография върху силикагел (5 до 10% EtOAc/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (41,09 g, 95%) като бистро масло: ТСХ (силициев диоксид, 20% EtOAc/хексан) Rf 0,44; Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,39-7,33 (m, 2H),
6,83 и 6,72 (2 s, 1H), 6,71 (dd, 1H), 4,54 и 4,50 (2 s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).
d) Метилов 2-|Т4-(трет-бутоксикарбонил)№(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксицинамат
Разтвор на 3-[И-(трет-бутоксикарбонил)Н-(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4бромоанизол (37,8 g, 78 mmol), метилацетат (35 ml, 390 mmol), паладиев ацетат (0,88 g, 3,9 mmol), три-о-толилфосфин (2,38 g, 7,8 mol) и диизопропилетиламин (31 ml, 178 mmol) в ацетонитрил (200 ml) се дезоксигенира (3 цикъла вакуумиране/аргон продухване), след това се нагрява под обратен хладник под аргон (маслена баня до 80°С). След 6 h се прибавя още паладиев ацетат (0,88 g, 3,9 mmol) и три-о-толилфосфин (2,38 g,
7,8 mmol) и реакционната смес се разбърква под обратен хладник в продължение на още 18 h. Реакционната смес се концентрира до сухо и остатъкът се смесва с 1:1 ЕцО/петролев етер (300 ml) и се оставя да стои 4 h. Сиво оцветената утайка се филтрира и се промива с малък обем 1:1 EtjO/ петролев етер (100 ml). Органичният червен филтрат се концентрира и пречиства чрез флаш хроматография върху силикагел (15% етилацетат/ хексан). Полученият остатък се смесва с хексан и сместа се оставя да стои няколко часа, след това се филтрира, за да се отстрани жълтата утайка. След концентриране на филтрата остава съе динението съгласно заглавието (34,52 g, 92%) като гъсто жълто масло: ТСХ (силициев диоксид, 20% EtOAc/хексан) Rf 0,45; Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,80 (br s, 1H), 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,29 (br s, 2H),
6,83 (dd, 1H), 6,72 (br s, 1H), 6,23 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 4,58 и 4,53 (2 br s, 2H), 4,46 и 4,37 (2 br s, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 1,49 (s, 9H).
e) Метилов 2-[И-(трет-бугоксикарбонил)Н-(трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксидихидроцинамат
Към 10% Pd/C (5 g, 4,7 mmol, предварително овлажнен с DMF), се прибавя разтвор на метилов 2-[Т4-(трет-бутоксикарбонил)-№(трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксицинамат (34,52 g, 72 mmol) в метанол (100 ml). Сместа се разклаща под водород (50 psi) в апарат на Parr в продължение на 7 Ь, след това се филтрира през слой Celite , за да се отстрани катализаторът. Филтратът се концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието
34,15 g, 98%) като безцветно масло: Ή NMR (400 MHz, CDClj) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (br s, 2H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,76 (dd, 1H),
6,66 (s, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,40 (br s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 2,79 (br s, 2H), 2,47 (t, 2H),
1,48 (s, 9H).
f) 2-[14-трет-бутоксикарбонил)-Н-(4-трифлуорометил-бензил)аминометил]-4-метоксвдихидроканелена киселина
Към разбъркван разтвор на 2-[Ν-(τρβτ-6γтоксикарбонил)-Н-(4-трифлуоробензил)аминометил] -4-метоксидихидроканелена киселина (34,15 g, 71 mmol) в диоксан (150 ml) се прибавя воден IN NaOH (85 ml, 85 mmol). Мътната реакционна смес се разбърква при стайна температура в продължение на 4 h. Полученият хомогенен разтвор се неутрализира с водна IN НС1 (85 ml, 85 mmol) и се екстрахира с етилацетат (2 х 250 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (250 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират, като се получава съединението съгласно заглавието (34,60 g, 100%) като гъсто бистро масло: ТСХ (95:4:1) СНС13/МеОН/НОАс) Rr 0,49; Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,30 (br s, 2H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,65 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,47 (br s, 2H), 4,42 (br s, 2H), 3,76 (s, 3H), 2,81 (br s, 2H), 2,53 (t, 2H),
1,47 (s, 9H).
g) Амид (К)-4-бензил-2-оксазолидинонил 2-[Н-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина
Към разбъркван разтвор на 2-[Ν-τρβτ-6γтоксикарбонил)-Н-(4-трифлуорометилбензил) аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина (34,60 g, 71 mmol) и пиридин (6,9 ml, 85 mmol) в сух дихлорометан (200 ml) под аргон се прибавя флуорид на циануровата киселина (4,4 ml, 48 mmol) през спринцовка. Реакционната смес се разбърква в продължение на 4 h при стайна температура. Получената плътна суспензия се филтрира през слой Celite и се промива с малък обем сух дихлорометан (50 ml). Бистрият филтрат се излива в делителна фуния и се промива с леденостудена вода (500 ml). След сушене (MgSO4) и концентриране остава суров киселинен флуорид (34,70 g, 100%), който се използва по-нататък без следващо пречистване.
Към разбъркван разтвор на (К)-4-бензил2-оксазолидинон (13,8 g, 78 mmol) в сух THF (300 ml) под аргон при -78°С се прибавя през спринцовка разтвор на норм-BuLi в хексан (2,5 М, 30 ml, 75 mmol). Реакционната смес се разбърква при -78°С в продължение на 15 min, след което през спринцовка се прибавя разтвор на горния киселинен флуорид (34,70 g, 71 mmol) в сух THF (100 ml). Реакционната смес се разбърква в продължение на 1 h при -78°С, след което се прибавя наситен NH4C1 и се екстрахира с етилацетат (2 х 200 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (400 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до сухо. След пречистване посредством флаш хроматография върху силикагел (20% етилацетат/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (40,34 g, 90%) като гъсто бистро масло: ТСХ (20% EtOAc/хексан) Rf 0,21; Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,58 (d, J =
8,1 Hz, 2H), 7,33-7,26 (m, 5H), 7,16 (m, 3H), 6,77 (dd, 1H), 6,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,60-4,40 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 3,76 (s, 3H),
3,27 (dd, 1H), 3,21-3,10 (m, 2H), 2,88 (br s, 2H),
2,72 (dd, 1H), 1,48 (s, 9H).
h) (К)-4-бензил-2-оксазолидинонил 3-[2|Ъ1-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксифенил]-2-(8)метоксикарбонилметилпропионамид
Към разбъркван разтвор на амид на (R)35
4-бензил-2-оксазолидинонил 2-[Ν-(τρβτ-6/Γθκсикарбонил)-Н-(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина (40,30 g, 64 mmol) в сух THF (300 ml) при 78°С през спринцовка се прибавя разтвор на литиев бис(триметилсилил)амид (70 ml, 1М в THF, 70 mmol). След 30 min през спринцовка се прибавя метилбромоацетат (30 ml, 317 mmol). След други 30 min при -78°С, реакционната смес се оставя да се затопли до -20°С и се разбърква още 6 h. Реакцията се спира с NH4C1 (400 ml) и се екстрахира с етилацетат (2 х 200 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (300 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до сухо. След пречистване с флаш хроматография върху силикагел (20% етилацетат/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (38,62 g, 86%) като бяло твърдо вещество: HPLC (Alex Ultrasphere™Si 5u, 20% EtOAc/хексан) показва приблизително 20% наличен неалкилиран изходен продукт. HPLC на суровата реакционна смес показва 90% проведена реакция; Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,40-7,11 (m, 8H),
6.71 (dd, 1H), 6,63 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,57434 (m, 6H), 4,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 3,85 (t, 1H),
3.72 (s, 3H), 3,61 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,86-2,71 (m, 2H), 2,70 (dd, 1H), 2,44 (m, 1H), 1,48 и 1,46 (2s, 9H).
i) Метилов (8)-8-метокси-3-оксо-2-(4трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-ацетат
Към разбъркван разтвор на (К)-4-бензил2-оксазолидинонил 3-[2-рЧ-(трет-бутоксикарбонил)-№(4-трифлуорометилбензил)аминометил]-
4-метоксифенил]-2-(8)-метоксикарбонилметилпропионамид (38,0 g, 54 mmol) в THF (300 ml) и вода (100 ml), на капки при 0°С за период от 30 min се прибавя разтвор на 30% HjO2 (18,9 ml) и LiOH.H2O (2,3 g, 55 mmol) във вода (62 ml). Мътният разтвор се разбърква още 1 h при 0°С. Полученият хомогенен разтвор се обработва бавно с разтвор на натриев сулфит (34,3 g, 272 mmol) във вода (175 ml) при 0°С, след това се подкислява с ледено охладен разтвор на концентрирана НС1 (35 ml) във вода (150 ml). Реакционната смес се екстрахира с етилацетат (2 х 200 ml) и обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (400 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до сухо. Получе- ният остатък се обработва с 4,0 М НС1 в диоксан (400 ml) с разбъркване при стайна температура (наблюдава се бавно отделяне на газ). След 1 h реакционната смес се концентрира и повтор5 но се концентрира из 1:1 СНС13/толуен (2х), след което остатъкът (37,65 g) се смесва със сух THF (400 ml). Към този разтвор с разбъркване под аргон при 0°С в колба на Dewar се прибавя триетиламин (15,3 ml, 109 mmol) и NaHCO3 (22,9 g, 1 ο 273 mmol), последван от дифенилфосфорилазид (13 ml, 60 mmol). След разбъркване в продължение на 24 h при 0°С, реакционната смес се концентрира до сухо. Остатъкът се смесва с етилацетат (400 ml) и се промива последователно с 15 вода (300 ml) и воден разтвор на натриев хлорид (300 ml). След сушене (MgSO4), концентриране и флаш хроматография върху силикагел (35% етилацетат/хексан), се получава съединението съгласно заглавието (16,87 g, 74%) като 20 бистро гъсто масло: ТСХ (40% EtOAc/хексан) Rf0,50;MS (ES)m/e422,3 (М+Н)+; 'HNMR(400 MHz, CDC13) δ 7,52 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,75 (dd, 1H), 6,36 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 16,5 Hz, 25 1H), 4,96 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 4,48 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (d, J = 16,5 Hz, 1H),
3,73 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,08 (dd, 1), 3,02 (dd, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,48 (dd, 1H).
j) Метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-(430 трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на борен трибромид в СН;С12 (1,0 М, 160 ml, 160 mmol) се прибавя на капки за период от 30 min към разтвор на метилов (S)-83 5 метокси-3-оксо-(4-трифлуорометил-бензил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (16,67 g, 39,6 mmol) в безводен СН2С12 (150 ml) при -20°С под аргон. След още 1,5 h при -15 до -20°С, реакционната смес се охлажда повторно 40 до -20°С и реакцията се спира чрез внимателно прибавяне на метанол на капки (160 ml). Реакционната смес се разбърква при -10 до 0°С в продължение на 1 h, след което се концентрира на ротационен изпарител. Остатъкът се концен45 трира повторно из МеОН (2х). След пречистване чрез флаш хроматография върху силикагел (50 до 100 % етилацетат/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (14,87 g, 92%) като бяло твърдо вещество: [a]D -81,8° (с, 1,0, 50 МеОН); ТСХ (силициев диоксид, 50% EtOAc/ хексан) Rf 0,54; MS (ES) m/e 408,2 (M+H)+; Ή NMR (400 MHz, CDC13 + 2% DMSO-d6) δ 7,53 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,70 (dd, 1H), 6,41 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,01 (d, J =
15,6 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,73 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (dd, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,47 (dd, 1H).
Получаване 19
HPLC разделяне на енантиомери на метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов ^)-(+)-8-метокси-3-оксо-2(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат и метилов (8)-(-)-8-метокси-3оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат
Метилов (±)-8-метокси-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат се разделя на неговите енантиомери чрез хирална HPLC, като се използват следните условия: Diacel Chiralcel OJ® колона (21,2 х 250 mm), подвижна фаза метанол, 15 ml/min скорост на потока, uv откриване при 250 шп, 400 mg впръскване; tR за метилов (R)-(+)-8-MeTOKси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат = 4,9 min; tR за метилов (8)-(-)-8-метокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4ацетат = 6,6 min.
Получаване 20
HPLC разделяне на енантиомери на метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил )-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов (Д)-(+)-8-хидрокси-3-оксо-2(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат и метилов (Б)-(-)-8-хидрокси-
3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат
Метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацетат се разделя на енантиомери чрез хирална HPLC, като се използват следните условия: Diacel Chiralcel OD* колона (21,2 х 250 mm), 20% етанол в хексан като подвижна фаза, 10 ml/min, uv откриване при 254 шп, 100 mg впръскване; tR за (К)-(+)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4ацетат = 14,4 min; tR за (8)-(-)-8-хидрокси-3-ок со-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро2-бензазепин-4-ацетат = 18,5 min.
Получаване 21
Получаване на (8)-8-хидрокси-3-оксо-2(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат чрез енантиоселективна синтеза
a) 4-бромо-З-бромометиланизол
Към разбъркван разтвор на 4-бромо-З-метиланизол (100 g, 497 mmol) в сух дихлорометан (500 ml) се прибавя N-бромо-сукцинимид (97 g, 545 mmol) и след това бензоилпероксид (6 g, 25 mmol). Реакционната смес се нагрява внимателно под обратен хладник с 150 W лампа с рефлектор, разположени приблизително на 12 инча от реакционната колба. След 24 h реакционната смес се концентрира на ротационен изпарител до половината обем и се разбърква в продължение на 4 h. Бялата утайка, която се образува, се филтрира и се промива с малък обем дихлорометан. Филтратът се концентрира до сухо и останалото твърдо вещество се разпрашава с хексан и се филтрира. След сушене под вакуум се получава съединението съгласно заглавието (100,25, 72%) като бели игли: ГХ tR = 6,56 (HP 530 pm х 20 m метилсиликонова колона, He носител изтичане 20 ml/min, 100°С начална температура, 1 min начално време, 10°C/min скорост, 200°С крайна температура, 1 min крайно време); HNMR(400MHz, COD13) δ 7,44 (d, J=10 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,73 (dd, 1H),
4,55 (s, 2H), 3,80 (s, 3H).
b) 3-[14-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-бромоанизол
2,2,2-трифлуороетиламин (24 g, 242 mmol) се прибавя бързо към разбъркван разтвор на 4бромо-3-бромометиланизол (33,6 g, 120 mmol) в безводен DMSO (120 ml) при стайна температура. Реакционната смес се затопля приблизително до 30-35°С. След разбъркване в продължение на 18 h реакционната смес се разрежда с ледено охладен 1Н NaOH (200 ml) и се екстрахира с EtOAc (2 х 300 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (300 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират, като се получава съединението съгласно заглавието (41,35 g, 96%) като бледо жълто масло: ТСХ (толуен) Rf 0,32; Ή NMR (400 MHz, CDClj) δ 7,43 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 3 Hz, 1H), 6,71 (dd, 1H), 3,93 (br s, 2H), 3,80 (s,
ЗН), 3,18 (m, 2Н), 1,86 (br s, 1H).
c) 3-[Н-(трет-бутоксикарбонил)-М-(2,2,2трифлуороетил)аминометил]-4-бромоанизол
Към 3-р4-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-бромоанизол (41,35 g, 137 mmol) се прибавя ди-трет-бутилдикарбонат (36 g, 165 mmol, втечнен чрез затопляне в гореща водна баня). Реакционната смес се промива с малък обем дихлорометан (~ 20 ml) и се разбърква под аргон при 50°С на маслена баня в продължение на 18 h (наблюдава се бавно отделяне на газ). След концентриране на ротационен изпарител под вакуум, полученият остатък се разрежда с хексан (100 ml) и в разтвора се прибавят зародиши от малко количество чист твърд продукт (получен при предишно взаимодействие чрез хроматография върху силикагел, като се използва 10% EtOAc/хексан като елуент). Сместа се оставя да стои при стайна температура няколко часа, след което се премества в хладилник за една нощ. Продуктът се събира чрез вакуумфилтриране и се промива с хексан. След сушене под вакуум се получава съединението съгласно заглавието (48,54 g, 88%) като безцветно твърдо вещество: ТСХ (10% EtOAc/толуен) Rf 0,52; Ή NMR (400 MHz, CDClj) δ 7,44 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,75 (dd, 1H), 6,71 (s, 1H), 4,65 и 4,58 (2s, 2H), 3,90 и
3,78 (2 m, 2H), 3,77 (8,3H), 1,51 и 1,42 (2s, 9H),
d) Метилов 2-[Н-(трет-бутоксикарбонил)Н-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-метоксицинамат
Разтвор на 3-[14-(трет-бутоксикарбонил)Н-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-бромоанизол (48,19 g, 121 mmol), метилацетат (55 ml, 605 mmol), паладиев ацетат (1,36 g, 6,1 mmol), три-о-толилфосфин (3,69 g, 12 mol) и диизопропилетиламин (49 ml, 278 mmol) в ацетонитрил (200 ml) се деоксигенира (3 х цикъла евакуиране/аргон продухване), след което се нагрява под обратен хладник под аргон на маслена баня при 80°С. След 6 h се прибавят още паладиев ацетат (1,36 g, 6,1 mmol) и три-о-толилфосфин (3,69 g, 12 mmol) и реакционната смес се разбърква под обратен хладник в продължение на още 18 Ь. Реакционната смес се концентрира до сухо и към остатък са прибавя 1:1 ЕцО/петролев етер (300 ml) и се оставя да стои в продължение на 4 h. Сиво оцветената утайка се филтрира и се промива с малък обем 1:1 ЕцО/петролев етер (~ 100 ml). Червеният органичен филтрат се концентри ра и се пречиства чрез флаш хроматография върху силикагел (15% етилацетат/ хексан). Полученият остатък се смесва с хексан и сместа се оставя да стои в продължение на 2 h, след което се филтрира, за да се отстрани жълтата утайка. След концентриране на филтрата остава съединението съгласно заглавието (45,85,94%) като жълто масло: ТСХ (20%ЕЮАс/хексан) Rf 0,50; Ή NMR(400 MHz, COD13) δ 7,84 (d, J =16 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,86 (dd, 1H),
6,74 и 6,72 (2s, 1H), 6,26 (d, J =16 Hz, 1H), 4,74 и 4,70 (2s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,80 и
3,66 (2m, 2H), 1,51 и 1,45 (2s, 9H).
e) Метилов 2-[И-(трет-бутоксикарбонил)Н-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-метоксвдихидроцинамат
Към 10% Pd/C (5 g, 4,7 mmol, предварително овлажнен с DMF) се прибавя разтвор на метилов 2-[N-(TpeT-6yTOKCHKap6oHHn)-N-(2,2,2трифлуороетил)амино]метил]-4-метоксицинамат (45,85 g, 113 mmol) в метанол (100 ml). Сместа се разклаща под водород (50 psi) в апарат на Parr в продължение на 6 Ь, след което се филтрира през слой Celite , за да се отстрани катализаторът. Филтратът се концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието (43,71 g, 95%) като безцветно масло: Ή NMR, (400 MHz, CDC13) δ 7,11 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,65 (s, 1H), 4,63 и 4,60 (2s, 2H), 3,84 и
3,70 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,86 (t, 2H), 2,53 (t, 2H), 1,50 и 1,44 (2s, 9H).
f) 2-[Н-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2,2,2грифлуороетил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина
Към разбъркван разтвор на метилов 2-[N(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2,2,2-трифлуороетил) аминометил]-4-метоксидихидроцинамат (43,71 g, 108 mmol) в диоксан (200 ml) се прибавя воден разтвор на IN NaOH (130 ml, 130 mmol). Мътната реакционна смес се разбърква при стайна температура в продължение на 4 h. Полученият хомогенен разтвор се неутрализира с IN НС1 (130 ml, 130 mmol) и се екстрахира с етилацетат (2 х 250 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид s(250 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират, като се получава съединението съгласно заглавието (45,01 g, 100%) като гъсто бистро масло: ТСХ (95:4:1 СНС13, MeOH, HOAc) Rf 0,49.
g) Амид на (К)-4-бензил-2-оксазолидинил
2-^-(трет-бутоксикабонил)-К-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина
Към разбъркван разтвор на 2-[Ν-(τρβτбутоксикарбонил)-К-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина (45,0 g, 108 mmol) и пиридин (10 ml, 124 mmol) в сух дихлорометан (400 ml) под аргон се прибавя флуорид на цианурова киселина (6,8 ml, 74 mmol) през спринцовка. Реакционната смес се разбърква в продължение на 4 h при стайна температура. Получената плътна суспензия се филтрира през слой Celite и филтърният слой се промива с малък обем сух дихлорометан (50 ml). Бистрият филтрат се излива в делителна фуния и се промива с ледено охладена вода (750 ml). След сушене (MgSO4) и концентриране остава суров киселинен флуорид (43,32 g, 100%), който се използва без по-нататьшно пречистване.
Към разбъркван разтвор на (К)-4-бензил2-оксазолидинон (21 g, 119 mmol) в сух THF (400 ml) под аргон при -78°С се прибавя през спринцовка разтвор на норм-BuLi в хексан 2,5 М, 113 mmol). Реакционната смес се разбърква при -78°С в продължение на 15 min, след това през спринцовка се прибавя разтвор на горния киселинен флуорид (43,32 g, 108 mmol) в сух THF (100 ml). Реакционната смес се разбърква в продължение на lh при -78°С, след което реакцията се прекъсва с наситен NH4C1 и се екстрахира с етилацетат (2 х 250 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (500 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до сухо. След пречистване чрез флаш хроматография върху силикагел (20% етилацетат/, хексан) като се получава съединението съгласно заглавието (55,27 g, 91%) като гъсто бистро масло: ТСХ (силициев диоксид, 20% EtOAc/хексан) Rf0,24; Ή MHz, (400 MHz, CDC13) δ 7,34-7,26 (m, ЗН), 7,19-7,16 (m, ЗН), 6,78 (dd, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,68-4,63 (m, 3H), 4,21-4,11 (m, 2H), 3,87 и 3,74 (2m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H), 3,17 (m, 2H), 2,93 (m, 2H), 2,75 (dd, 1H), 1,50 и 1,45 (2s, 9H).
h) (Я)-4-бензил-2-оксазолидинил 3-[2-[N(трет-бутоксикарбонил)-К-(2,2,2-трифлуороетил) аминометил]-4-метоксифенил-2-(Б)-метоксикарбонил метил пропионамид
Към разбъркван разтвор на амид на (R)-
4-бензил-2-оксазолидинонил 2-рЧ-(трет-бутоксикарбонил)-М-(2,2,2-1рифлуороетил)аминометил]-4-метоксидихидроканелена киселина (55,2 g, 100 mmol) в сух THF (300 ml) при -78°С се прибавя разтвор на литиев бис(триметилсилил)амид (115 ml, 1М в THF, 115 mmol) през спринцовка. След 30 min през спринцовка се прибавя метилбромоацетат (47 ml, 497 mmol). След други 30 mm при -78°С реакционната смес се оставя да се затопли до -20°С и се разбърква още 6 h. Реакцията се спира с наситен NH4C1 (400 ml) и сместа се ексрахира с етилацетат (2 х 250 ml). Обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (400 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до сухо. След пречистване чрез флаш хроматография върху силикагел (20% етилацетат/ хексан) се получава съединението съгласно заглавието (52,44 g, 75%) като бяло твърдо вещество: HPLC (Alex (Alex Ultrasphere™-Si 5 u, 20% EtOAc/хексан) показва наличие на приблизително 6-7% неалкилиран изходен продукт. HPLC на суровата реакционна смес дава de от 86% за реакцията; Ή NMR, (400 MHz, CDC13) 7,35-7,13 (m, 6H), 6,73 (dd, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,69-4,53 (m, 4H), 4,04 (d, 1H), 3,87 (m, t, 1H), 3,85-3,72 (m, 2H), 3,75 (m, 3H), 3,64 (s, 3H), 3,31 (dd, 1H), 2,95 (dd, 1H), 2,92-2,71 (m, 2H), 2,71 (dd, 1H), 2,50 (m, 1H), 1,50 и 1,47 (2 br s, 9H).
i) Метилов (8)-8-метокси-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Към разбъркван разтвор на (И)-4-бензил2-оксазолидинонил 3-[2-|Т4-(трет-бутоксикарбонил)-\-(2,2,2-трифлуороетил)аминометил]-4-метоксифенил]-2-(8)-метоксикарбонилметилпропионамид (52,40 g, 75 mmol) в THF (300 ml) и вода (100 ml) на капки при 0°С за период от 30 min се прибавя разтвор на 30% Н2О2 (26 ml) и LiOH.H2O (3,2 g, 75 mmol) във вода (85 ml). Мътният разтвор се разбърква в продължение на 1 h при 0°С. Полученият хомогенен разтвор се обработва бавно с разтвор на натриев сулфит (46 g, 365 mmol) във вода (240 ml) при 0°С, след това се подкислява с ледено охладен разтвор на концентрирана НС1 (45 ml) във вода (200 ml). Реакционната смес се екстрахира с етилацетат (2х 300 ml) и обединените органични слоеве се промиват с воден разтвор на натриев хлорид (600 ml), сушат се (MgSO4) и се концентрират до су хо. Полученият остатък се обработва с 4,ОМ НС1 в диоксан (500 ml) при разбъркване при стайна температура (наблюдава се бавно отделяне на газ). След 1 h реакционната смес се концентрира и повторно се концентрира из 1:1 СНС13/толуен (2х), след това остатъкът (48,89 g) се смесва със сух DMF (500 ml). Към този разтвор при разбъркване под аргон при 0°С в колба на Dewar се прибавя триетиламин (21 ml, 150 mmol) и NaHCO3 (31,5 g, 375 mmol), последвано от дифенилфосфорилазид (18 ml, 83,5 mmol). След разбъркване в продължение на 24 h при 0°С, реакционната смес се концентрира до сухо. Остатъкът се смесва с етилацетат (500 ml) и се промива последователно с вода (400 ml) и воден разтвор на натриев хлорид (400 ml). След сушене (MgSO4), концентриране и флаш хроматография върху силикагел (30% етилацетат/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (21,81 д, 84%) като бяло твърдо вещество: [a]D -132,6° (с, 1,0, МеОН); ТСХ (40% EtOAc/хексан) Rf 0,56; хирална HPLC (Chiracel OD, 20% EtOH/хексан) к’ = 2,05; обратният енантиомер от рацемичния стандарт има к’ = 1,86 (не се открива); MS (ES) m/e 346,2 (М+Н)+; 'HNMR, (400 MHz, CDC13) 5 7,03 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,79 (dd, 1H), 6,61 (d, J = 2,6 HZ, 1H), 5,35 (d, J=
16,7 Hz, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,99 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,01 (m, 2H), 2,91 (dd, 1H), 2,47 (dd, 1H). Анализ: Изчислено за C16H18F3NO4: C 55,65, H 5,25, N 4,06. Намерено: C 55,62, H 5,27, N 4,04.
j) Метилов (8)-8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат Разтвор на борен трибромид в СН2С12 (1,0М, 250 ml, 250 mmol) се прибавя на капки за период от 30 min към разтвор на метилов (S)-
8-метокси-2-метил-3-оксо-2-(2,2,2.трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат (21,5 g, 62,3 mmol) в безводен CHjClj (230 ml) при -20°С под аргон. След още 1,5 h при -15° до -20°С, реакционната смес се охлажда отново до -20°С и реакцията се спира внимателно чрез прибавяне на капки на МеОН (250 ml). Реакционната смес се разбърква при -10 до 0°С в продължение на 1 h, след това се концентрира на ротационен изпарител. Остатъкът се концентрира повторно из МеОН (2х). След пречистване чрез флаш хроматография върху силикагел (50% етилацетат/хексан) се получава съединението съгласно заглавието (19,38 g, 94%) като бяло твърдо вещество: [a]D -130,5° (с, 1,0, МеОН); ТСХ (силициев диоксид, 40% EtOAc/хексан) Rf 0,40; MS (ES) m/e 332,1 (M+H Ή NMR (40, CDC13+ 2% DMSO-d6) δ 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H),
6,71 (dd, 1H), 6,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 4,21-3,98 (m, 2H), 3,96 (d, J =
16,7 Hz, 1H), 3,82 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,98 (dd, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,46 (dd, 1H). Анализ: Изчислено за C1JH16F3NO4: C 54,38, H 4,87, N 4,23. Намерено: C 54,40, H 4,96, N 4,22.
Получаване 22.
Получаване на метилов (8)-8-хидрокси-
3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-ацетат през енантиоселективна синтеза
a) 3-Р^-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2-фенилетил)-амино]метил-4-бромоанизол
Наведнъж се прибавя 2-фенилетиламин (19,0 ml, 150 mmol) към разтвор на 4-бромо-Збромометиланизол (14,0 g, 50,0 mmol) в безводен THF (200 ml) при стайна температура. След 18 h сместа се концентрира. Остатъкът се разтваря в 2М NaOH (300 ml) и се екстрахира с СН2С12 (3 х 200 ml). Обединените CHjCl2 слоеве се сушат върху MgSO4 и се концентрират. Суровият продукт се филтрира през слой силикагел, като се използва 50% EtOAc/хексан като елуент. Филтратът се концентрира под намалено налягане, като се получава жълто масло: MS (ES) m/e 320 (М+Н)+.
Горното жълто масло се разтваря в безводен ТНР (200 ml) и наведнъж се прибавя дитрет-бутилдикарбонат (13,0 g, 60,0 mmol) при стайна температура. След 1 h разтворът се концентрира. След флаш хроматография върху силикагел (10% EtOAc/хексан) се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество (20,8 g, 100% от 4-бромо-
3- бромометиланизол): Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,51-7,10 (m, 6H), 6,85-6,60 (m, 2H), 4,52-4,33 (m, 2H), 3,71 (s, ЗН), 3,52-3,31 (m, 2H), 2,92-
2,73 (m, 2H), 1,61-1,33 (m, 9H).
b) 4-[2-[Н-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2фенилетил)-амино]метил-4-метоксифенил]пропионова киселина
Разтвор на 3-[Ъ1-(трет-бутоксикарбонил)Н-(2-фенилетил)амино]метил-4-бромоанизол (20,0,48,0mmol), бензилакрилат (23,0 g, 144 mmol) паладиев ацетат (540 mg, 2,40 mmol), три-о-толилфосфин (1,46 g, 4,80 mmol) и диизопропилетиламин (17,0 ml, 96,0 mmol) в пропионитрил (250 ml) се деоксигенира (цикъл от 3 х евакуиране/аргон продухване), след което се нагрява под обратен хладник под аргон. След 48 h реакционната смес се охлажда до стайна температура, филтрира се през слой Celite и се концентрира. След флаш хроматография върху силикагел (10% EtOAc/хексан) се получава жълто масло, което се разтваря в 10% EtOAc/хексан (100 ml) и се оставя да стои при 4°С в продължение на 72 h. Жълтата утайка се отстранява чрез филтриране, след което разтворът се концентрира, като се получава жълто масло (14,98 g, 62%): Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 8,00-7,85 (m, 1H),
7,61-7,01 (m, 11H), 6,85-6,76 (m, 2H), 6,75-6,67 (m, 1H), 6,32 (m, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,60-4,41 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,52-3,20 (m, 2H), 2,93-
2,71 (m, 2H), 1,55-1,33 (m, 9H).
Горното масло се разтваря в МеОН (150 ml) и се прибавя 10% Pd/C (6,40 g, 6,00 mmol) при 0°С. Сместа се затопля до стайна температура, разклаща се под водород (50 psi) в продължение на 7 h, след което се филтрира през слои Celite , за да се отстрани катализаторът. Филтратът се концентрира под намалено налягане, като се получава съединението съгласно заглавието като гъсто жълто масло (10,35 g, 83%): Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,35-7,02 (m, 6H), 6,85-6,76 (m, 2H), 6,75-6,73 (m, 1H), 6,69-6,68 (m, 1H), 4,42-4,25 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,44-
3,25 (m, 2H), 2,92-2,73 (m, 4H), 2,59-2,50 (m, 2H), 1,60-1,33 (m, 9H).
c) (К)-1,1-диметилетил-[[5-метокси-2-[3оксо-3-[2-оксо-4-(фенил метил )-3-оксазолидинил] пропил ]фенил] метил]-(2-фенилетил)карбамат
Към разтвор на 4-[2-|Ъ1-(трет-бутоксикарбонил)-Н-(2-фенилетил)амино]метил-4-метоксифенил]пропионова киселина (10,35 g, 25,0 mmol) в CHjClj (125 ml) се прибавя пиридин (2,4 ml, 30,0 mmol), след това флуорид на цианурова киселина (1,4 ml, 15,0 mmol) при стайна температура. След 2 h сместа се филтрира през слой Celite , промива се със студена вода (100 ml), след това с воден разтвор на натриев хлорид (100 ml), суши се над MgSO4 и се концентрира.
Към разтвор на (К)-4-бензил-2-оксазоли динон (5,30 g, 30,0 mmol) в безводен THF (125 ml) се прибавя норм-BuLi (11,0 ml, 2,5 М разтвор в хексан, 27,5 mmol) при -78°С. След 15 min на капки се прибавя горният киселинен флуорид в безводен ТНР (25 ml) за период от 5 min. След 1 h сместа се излива в 300 ml вода и се екстрахира с EtOAc (3 х 200 ml). Обединените EtOAc слоеве се сушат над MgSO4 и се концентрират. След флаш хроматография върху силикагел (30% EtOAc/хексан) се получава съединението съгласно заглавието като гъсто масло (12,12 g, 85%): 1Н NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,41-7,12 (m, UH), 6,65 (m, 1H), 6,60 (m, Ш), 4,70-4,62 (m, 1H), 4,50-4,35 (m, 2H), 4,21-4,10 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,50-2,61 (m, 10H), 1,55-
1,41 (m, 9H).
d) [R-(R*,S*)]-MermiOB3-[[4-MeTOKCH-2[[[(1,1 -диметилетокси)карбонил]-(2-фенилетил)амино]метил]фенил]-метил]-у-оксо-4-(фенил метил)-3-оксазолидинбутаноат
Към разтвор на (К)-1,1-диметилетил-[[5метокси-2-[3-оксо-3-[2-оксо-4-(фенилметил)-3оксазолидинил]пропил]фенил]-метил]-(2-фенилетил)карбамат (12,12 g, 21,0 mmol) в безводен THF (100 ml) се прибавя литиев бис(триметилсилил)амид (22,0 ml, 1М в THF, 22,0 mmol) при -78°С. След 15 min се прибавя метилбромоацетат (9,9 ml, 105 mmol), след което сместа се затопля до -20°С. След 3 h сместа се излива в 200 ml вода и се екстрахира с EtOAC (3 х 500 ml). Обединените EtOAc слоеве се сушат над MgSO4 и се концентрират. След флаш хроматография върху силикагел (25% EtOAc/хексан) се получава
9,91 g 3:2 смес (HPLC, 20% EtOAc/хексан) от съединението съгласно заглавието и (R)-1,1 -диметилетил-[[5-метокси-2-[3-оксо-3-[2-оксо-4(фенилметил)-3-оксазолидинил]пропил]фенил]метил]-(2-фенилетил)карбамат съответно. Тази смес се използва без по-нататъшно пречистване: MS (ES) т/е 667 (M+Na)+.
e) Метилов (8)-8-метокси-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат
Към разтвор на [R-(R*,S*)]-MernnoB3[[4метокси-2-[[[( 1,1 -диметилетокси)карбонил]-(2фенилетил)амино]метил]-фенил]метил]-у-оксо-
4-(фенилметил)-3-оксазолидинбутаноат(9,91 g,
15,4 mmol) в THF (75 ml) се прибавя разтвор на литиев хидроксид монохидрат (646 mg, 15,4 mmol) и Н2О2 (5,2 ml, 30 % във вода, 46,2 mmol) във вода (25 ml) при 0°С за период от 10 min. След 1,5 h се прибавя разтвор на NajSOj (9,7 g, 77 mmol) във вода (100 ml). Сместа се подкислява до pH 4, като се използва 2М НС1 и се екстрахира с EtOAc (3 х 200 ml). Обединените EtOAc слоеве се сушат над MgSO4 и се концентрират. Полученият остатък се разтваря в 4,0 М НС1 в диоксан (75 т1).След 45 min сместа се концентрира, след което се концентрира повторно из толуен (200 ml).
Горният остатък се разтваря в безводен DMF (75 ml). Към този разтвор се прибавя NaHСО3 (6,50 g, 77,0 mmol) и триетиламин (4,3 ml,
30,8 mmol) при стайна температура. Сместа се охлажда до 0°С и се прибавя дифенилфосфорилазид (5 ml, 23,1 mmol). След 16 h сместа се концентрира. Получената паста се разтваря в EtOAc (500 ml), промива се с вода (2 х 300 ml), суши се над MgSO4 и се концентрира. След флаш хроматография върху силикагел (40% EtOAc/ хексан) се получава съединението съгласно заглавието (2,61 g, 33% от [R-(R*,S*)]-MeranoBp[[4метокси-2-[[[( 1,1 -диметил етокси)карбонил]-(2фенилетил)амино]метил]-фенил]метил]-у-оксо-
4-(фенилметил)-3-оксазолидинбутаноат като бистро масло: MS (ES) m/e 390 (M+Na)+.
f) Метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-
4-ацетат
Към разтвор на метилов (8)-8-метокси-3оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат (2,61 g, 7,1 mmol) в CHjCl2 (40 ml) се прибавя BBr3 (21,3 ml, 1М в CHjClj, 21,3 mmol) при -20°С. След 45 min към сместа се прибавя МеОН (200 ml) и се концентрира. Остатъкът се филтрира през слой силикагел като, се използва 50% EtOAc /хексан като елуент. Полученото оранжево твърдо вещество се прекристализира из MeOII/HjO, като се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество (2,16 g, 81%); MS (ES) m/e 376 (M+Na)+.
Пример 1.
Получаване на (±)-8-[3-(2-пиридиламино)1 -пропилокси]-3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-8-[3-[2-(Ь1-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)ами но]пиридин-1Ч-оксид (1,4 g, 8 mmol) в безводен DMF (8 ml) се прибавя на капки към разтвор на метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (1,7 g, 7 mmol), трифенилфосфин (2,76 g, 11 mmol) и диетилазодикарбоксилат (2,33 ml, 14 mmol) в безводен DMF (4 ml) и сух THF (10 ml) при стайна температура под аргон. Полученият разтвор се разбърква 18 h, след което се концентрира под вакуум. След хроматография върху силикагел (2%10% CHjOH/CHjCIj) се получава съединението съгласно заглавието (1,2 g); (MS) (ES) m/e 400,2 (M+H)+. Нереагиралият метилов (±)-8-хидрокси-
3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетат (0,4 g) също се възстановява.
b) Етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (±)-8-[3-[2-(1Ч-оксопиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат(1,2 g, 3 mmol),
1,2 g 10% паладий върху въглен (1,2 g), циклохексен (3 ml, 15 mmol) и етанол (20 ml) се нагрява под обратен хладник в продължение на 18 h. Сместа се филтрира и филтратът се концентрира. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силикагел (2%-5% CHjOH/CHjCIj), като се получава съединението съгласно заглавието (0,72 g, 64%) като бяла пяна: MS (ES) m/e 398,2 (М+Н)+.
c) (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропил окси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Смес от етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,7 g, 2 mmol), литиев хидроксид монохидрат (0,12 g, 3 mmol), THF (5 ml), вода (5 ml) и MeOH (2 ml) се разбърква при стайна температура в продължение на 18 h, след което се концентрира. Остатъкът се разпределя между етилацетат и вода и слоевете се разделят. Водната фаза се довежда предпазливо до pH 4 с 3N НС1 и се оставя да стои. Получените кристали се събират чрез филтриране й се сушат, като се получава съединението съгласно заглавието (0,4 g, 65% като жьлтокафяво твърдо вещество: MS m/e 370,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C20H23N3O4.0,25H2O: С 64,25, Н 6,34, N 11,24. Намерено: С 64,02, Н 6,37, N11,20.
Пример 2.
Получаване на (±)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[3-[2-(4-нитро-Ь1-оксопиридил )амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно горната процедура на пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]-4-нитропиридинN-оксид вместо 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-М-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като оранжева пяна: MS (ES) m/e 445,2 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[2-(4-нитро-М-оксопиридин)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(Nоксопиридил)амино]-1 -пропило кси] -3 -оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг,се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 399,3 (М+Н)+.
c) (±)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 385,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C20H24N4O4. 1,25Н2О: С 59,03, Н 6,56, N 13,76. Намерено: С 58,80, Н 6,49, N 13,62.
Пример 3.
Получаване на (±)-8-[3-[(4-метокси-2-пиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-8-[3-[2-(4-метокси-Ь1-оксопиридил)-амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,
4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси-1 -пропил )амино]-4-метоксипиридин-Ь1оксид вместо 2-[(3-хидрокси-1-пропил)ами но]пиридин-М-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 430,3 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-8-[3-[(4-метокси-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[2-(4-метокси-М-оксопиридил)амино]-1пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2(Л-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бледожълто масло: MS (ES) m/e 414,4 (М+Н)+.
c) (±)-8-[3-[(4-метокси-2-пиридил)амино] -1 -пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[(4-метокси-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 400,3 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C21H25N,O5.0,75H2O: С 61,08, Н 6,47, N 10,18. Намерено: С 61,15, Н 6,20, N 10,12.
Пример 4.
Получаване на (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]-1-пропилокси] -2-метил-3-оксо-2,3,4,5 -тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-8-[3-[2-(Ь1-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,
4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на 2-[(-3-хидрокси-1 -пропил) амино]пиридин-Ь1-оксид (252,3 mg, 1,5 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,24 ml, 1,5 mmol) в безводен DMF (7,5 ml) се прибавя бавно на капки към разтвор на метилов (±)-8-хидрокси-2-метилЗ-оксо-2, 3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетат (197,5 mg, 0,75 mmol) и трифенилфосфин (413,1 mg, 1,58 mmol) в безводен DMF (7,5 ml) при стайна температура. Добавянето изисква 15 min и е леко екзотермно. След 2 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се концентрира повторно из ксилен. След хроматография върху силикагел (2:2:1 ЕЮАс/СНС1}/МеОН) се получава продукт с Rf 0,48 (ТСХ в 2:2:1 EtOAc/CHClj/MeOH), като мътно, почти безцветно масло. Това масло се хроматографира повторно върху силикагел (абсолютен етанол) като се получава съединението съгласно заглавието (243,9 mg, 79%) като белезникава пяна: ТСХ (абсолютен етанол) Rf 0,33; Ή NMR (250, CDC13) δ
8,12 (app.dd, 1H), 7,10-7,23 (m, 1H), 6,90-7,10 (m, 2H), 6,78 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,45-6,72 (m, 3H), 5,28 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 3,95-4,25 (m, 2H), 3,60-3,90 (m, 1H), 3,76 (d, J = 16,3 Hz, 1H),
3,71 (s, 3H), 3,51 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,73-3,15 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 2,41 (dd, J = 16,7, 5,4 Hz, 1H), 2,05-2,28 (m, 2H); MS (ES) m/e 414 (M+H)+.
b) Метилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидpo- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (±)-8-[3-[2-(Ν-οκοοπηридил)амино] -1 -пропилокси] -2-метил-З -оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (243,9 mg, 0,59 mmol), циклохексен (0,60 ml,
5,9 mmol) и
10% Pd/C (63 mg, 0,06 mmol) в 2-пропанол (6 ml) се нагрява под обратен хладник. След
21,5 h реакционната смес се охлажда до стайна температура и се филтрира през Celite . Филтратът се концентрира и остатъкът се концентрира повторно из толуен. След хроматография върху силикагел (5% МеОН в 1:1 EtOAc/CHCl3) се получава съединението съгласно заглавието (212,8 mg, 91%) като безцветно масло: ТСХ (5% МеОН в 1:1 EtOAc/CHCl3) Rf 0,39; Ή NMR (250 MHz, CDC13 δ 8,03-8,13 (m, 1H), 7,35-7,48 (m, 1H), 7,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 8,4,2,5 Hz, 1H), 6,63 (d, J -2,5 Hz, 1H), 6,52-6,62 (m, 1H),
6,40 (d. J = 8,5 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 16,3 Hz, 1H),
4,62-4,82 (m, 1H), 3,95-4,20 (m, 2H), 3,60-3,90 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,50 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 2,75-3,15 (m, 3H), 3,03 (s, 3H), 2,40 (dd, J = 16,7,
5,3 Hz, 1H), 2,00-2,22 (m, 2H); MS (ES) т/е 398 (M+H)+.
c) (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Прибавя се 1,0 N LiOH (0,80 ml, 0,80 mmol) към разтвор на метилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (207,5 mg, 0,52 mmol) в THF (2,6 ml) и вода 1,8 ml) при стайна температура. Първоначално мътният раз твор става хомогенен за 1 mm. След 18 h реакционната смес се подкислява с TFA (0,12 ml 1,56 mmol) и се концентрира. След ODS хроматография (20% CH3CN/HjO, съдържащ 0,1% TFA), концентриране и лиофилизация се получава съединението съгласно заглавието (252,4 mg, 83%) като леко жълто, хигроскопично твърдо вещество: HPLC (PRP-1®, 20% CH3CN/H2O, съдържаща 0,1% TFA) К’ = 2,4; Ή NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,83-7,93 (m, 1H), 7,76-7,83 (m, 1H), 7,00-7,11 (m, 2H), 6,83-6,91 (m, 1H), 6,80 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 5,30 (d, J -16,5 Hz, 1H), 4,05-4,18 (m, 2H), 3,94 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 3,77-3,90 (m, 1H), 3,57 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,03 (dd, J = 17,0,4,2 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,83 (dd, J = 17,0, 9,1 Hz, 1H), 2,72 (dd, J - 17,0, 13,5 Hz, 1H), 2,44 (dd, J = 17,0, 4,7 Hz, 1H), 2,11-
2,23 (m, 2H); MS (ES) m/e 384 (M+H)+. Анализ: Изчислено за C21H2JN304.1,5CF3C02H: C 49,57, H 5,11, N 7,23. Намерено: C 49,65, H 4,95, N
7,15.
Пример 5
Получаване на (±)-8-[3-(2-имидазолиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съединението съгласно заглавието се получава най-общо, като се следват процедурите, описани в примери 1-4.
Пример 6
Получаване на (±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-тетрахидро-пиримидинил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
а) Метилов (±)-8-[3-(трет-бутоксикарбониламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-1-пропанол (0,14 g, 0,8 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,13 ml, 0,8 mmol) в безводен DMF (2 ml) се прибавя на капки към разтвор на метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,10 g, 0,4 mmol) и трифенилфосфин (0,21 g, 0,8 mmol) в безводен DMF (1,4 ml) в сух THF (2 ml) при стайна температура под аргон. Полученият разтвор се разбърква в продължение на 18 Ь, след което се концентрира под вакуум. След хроматография върху силикагел (1%-3% МеОН/ CHjClj) се получава съединението съгласно заглавието (0,11 g); MS (ES) m/e 407,3 (M+H)+.
b) Метилов (±)-8-(3-амино-1-пропилокси)-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4- ацетат, сол с трифлуорооцетна киселина
Разтвор на метилов (±)-8-[3-(трет-бутоксикарбонил-амино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,
5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,70 g) в СН2С12 (7 ml) и TFA (2 ml) се разбърква под аргон при 0°С в продължение на 1 h, след което се концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието (0,75 g, 100%) като безцветно стъкловидно вещество; MS (ES) m/e 321,4 (М+Н)+.
c) Метилов (±)-8-[3-(пиримидин-2-иламино)-1 -пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (±)-8-(3-амино-1-пропилокси)-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, сол с трифлуорооцетна киселина (0,75 g, 2 mmol), 2-бромопиримидин (0,5 g, 3 mmol), NaHCOj (1,4 g, 17 mmol) и EtOH (10 ml) се нагрява под обратен хладник. След 24 h сместа се филтрира и неразтворимият продукт се промива с МеОН. Филтратът и промивките се обединяват и концентрират и остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силикагел (1%6% МеОН/СН2С12), като се получава съединението съгласно заглавието (0,54 g, 82%) като бяла пяна: MS (ES) m/e 385,5 (М+Н)+.
d) (±)-8-[3-[(1,4,5,6-тетрахидропиримидин-2-ил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Смес от метилов (±)-8-[3-(пиримидин-2иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,36 g, 0,94 mmol), 4М НС1 в диоксан (0,25 ml, 1 mmol), 10% паладий върху въглен (0,24 g, 0,24 mmol) и МеОН (5 ml) се разбърква под бутилка с водород. След 18 h сместа се филтрира и филтратът се концентрира. Остатъкът се разпределя между EtOAc и воден разтвор на KjCOj. Утаява се твърдо вещество, което се събира чрез филтриране и след сушене е съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e
375,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C19H26N4O4. 2,5^0: С 54,40, Н 7,45, N 13,35. Намерено: С 54.68, Н 7,12, 13,39.
Пример 7
Получаване на (±)-8-[3-(6-амино-2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съединението съгласно заглавието се получава най-общо, като се следват процедурите, описани в примери 1-4.
Пример 8
Получаване на (±)-8-[2-[6-(метиламино) пиридил]-етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил|-1-етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 6-(метиламино)-2-пиридилетанол вместо 2-[(3-хидрокси1 -пропил)амино]пиридин-Ш-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 384
b) (±)-8-[2-[6-(Метиламино)пиридин-2ил]-1-етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 -етокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро)-1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 370 (М+Н)+.
Пример 9
Получаване на (±)-8-[2-(2-бензимидазолил)етокси] -3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-(2-(бензимидазол-2-ил)1-етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-(бензимидазол-2-ил)-1-етанол вместо 2-[(3-хидрокси-1пропил)амино]пиридин-М-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) т/е 394,4 (М+Н)+,
416,3 (M+Na)+.
b) (±)-8-[2-(бензимидазол-2-ил)-1 -етокси] -З-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[2-(бензимидазол-2-ил)-1 -етокси]-3-оксо-2,3,
4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]-1-пропил окси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахвдро)-Ш-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бял прах: MS (ES) m/e 380,4 (М+Н)+, 402,3 (M+Na)+.
Пример 10
Получаване на (±)-8-[2-(4-аза-2-бензимидазолил)етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съединението съгласно заглавието се получава най-общо, като се следват процедурите, описани в пример 9.
Пример 11
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
a) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацегаг
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]пиридин-М-оксид (252,3 mg, 1,5 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,24 ml, 1,5 mmol) в безводен DMF (7,5 ml) се прибавя бавно на капки за период от 3-4 min към разтвор на метилов 25 (±)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2.2-трифлуороетил)-,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (284,5 mg, 0,75 mmol) итрифенилфосфин (413,1 mg, 1,58 mmol) в безводен DMF (7,5 ml) при стайна температура. След 17 h реакционната 30 смес се концентрира и остатъкът се концентрира повторно из ксилен/СНС13. След хроматография върху силикагел (градиент: EtOAc (500 ml), след това 5% МеОН/СНС 13) се получава съединението съгласно заглавието (253,6 mg, 70%) като бе- 35 лезникава пяна: Ή NMR (250 MHz, CDC13) δ 8,11 (dd, J = 6,4, 1,4 Hz, 1H),7,10-7,23 (m, 1H), 6,93-
7,10 (m, 2H), 6,81 (dd, J = 8,4, 2,6 Hz, 1H) 6,45-
6,70 (m, 3H), 5,34 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 3,75430 (m, 6H), 3,71 (s, 311), 3,51 (q, 1 - 6.4 Hz, 211), 40 2,80-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J = 16,8, 5,5 Hz,), 2,07-2,28 (m, 2H); MS (ES) m/e 482,2 (M+H)+.
b) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Смес от метилов (±)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (253,6 mg, 0,53 mmol), циклохексен (0,54 ml, 5,3 mmol), паладиево черно (11,3 mg, 0,11 mmol) и изопропанол (5,3 ml) се нагрява под обратен хладник. След 0,5 h се прибавя 10% Pd/C (28,2 mg, 0,03 mmol) и след 14,5 5 h Pd черно (11,3 mg, 0,11 mmol) и циклохексен (0,27 ml, 2,65 mmol). След още 48 h реакционната смес се филтрира на горещо през Celite и филтърният слой се промива с гореща смес 1:1 МеОН/СНС13. След концентриране и повторно 10 концентриране из ксилен остава жълто масло.
След хроматография върху силикагел (5% МеОН в 1:1 EtOAc/CHCl3) се получава съединението съгласно заглавието (194,0 mg, 79%) като слабо жълто масло: ТСХ (5% МеОН в 1:1 EtOAc / 15 CHCl3) Rf0,53; 1Н NMR (250, CDC13) 5 8,08 (dd J= 5,0, 1,0 Hz, 1H), 7,37-7,48 (m, 1H), 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,79 (dd, J = 8,4,2,5 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,52-6,62 (m, 1H), 6,40 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,34 (d, J =16,6 Hz, 1H), 4,60-4,80 20 (m, 1H), 3,75-4,30 (m, 6H), 3,71 (s, 3H), 3,50 (q,
J = 6,4 Hz, 2H), 2,80-3,15 (m, 3H), 2,46 (dd, J = 16,8, 5,4 Hz, 1H), 2,00-2,25 (m, 2H);MS (ES) m/ e 466 (M+H)+.
c) (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)1-пропилокси]-2-(2.2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Прибавя се 1,0 N LiOH (0,44 ml, 0,44 mmol) към разтвор на метилов (±)-8-[3-(2-пиридил амино)- 1-пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (159,5 mg, 0,34 mmol) в THF (1,7 ml) и вода (1,3 ml) при стайна температуара. Жълтият мътен реакционен разтвор става хомогенен за 10 min. След 24 h реакционната смес се концентрира до сухо и жълтият остатък се разтваря във вода (4 ml). Разтворът се филтрира, след това се неутрализира внимателно (pH » 7) с 1,0 N НС1. Утайката се събира, промива се изобилно с вода и се суши на висок вакуум при 40-45°С, като се получава съединението съгласно заглавието (130,0 mg, 83%) като белезникаво твърдо вещество: HPLC (PRP-1®, 25% CH3CN/H2O, съдържаща 0,1% TFA) k’ - 3,1 Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,91-8,00 (m, 1H), 7,28-7,40 (m, 1H), 45 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,76-6,87 (m, 2H), 6,516,60 (m, 1H), 6,39-6,50 (m, 2H), 5,30 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 4,10-4,30 (m, 3H), 4,02 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,70-3,82 (m, 1H), 3,20-3,45 (m, 2H, частично припокриване със сигнал от остатъчен раз50 творител), 2,99 (dd, 1Н), 2,59-2,74 (m, 2Н), 2,39 (dd, J = 16,9,4,8 Hz, 1H), 1,90-2,03 (m, 2H); MS (ES) m/e 452 (M+H)+. Анализ: Изчислено за C22H24F3N3O4.0,5 H20 C 57,39, Η 5,47, N9,13. Намерено: С 57,39, Н 5,18, N 9,00.
Пример 12
Получаване на (±)-8-[3-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[3-(4,6-диметил-1-оксопиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-метил-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси- 1 -пропил )амино]-4, б-диметилпиридин-Nоксид вместо 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-Ь1-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 442,3 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-8-[3-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-(3-(4,6-диметил-1 -оксопиридин-2-иламино)-1 пропил окси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5 -тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(Л-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бледожълто твърдо вещество: MS (ES) m/e 426,3 (М+Н)+
c) (±)-8-[3-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-(3-((4,6-диметилпиридин-2-ил)амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8[3-(2-пиридиламино)]-1 -пропилокси]-3-оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетаг, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 412,2 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C23H29N3O4.055HCl. 0,25 Н2О: С 63,62, Н 6,96, N 9,68. Намерено: С 63,62, Н 6,96, N 9,69.
Пример 13
Получаване на (±)-8-[2-(2-аминотиазол-4 ил)-1 -етокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[2-(2-аминотиазол-4ил)-1 -етокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-(2-аминотиазол-4-ил)етанол (WO 1995/032710) вместо 2[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]пиридин-Н-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 390 (М+Н)+.
b) (±)-8-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-1 -етокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-1 -етокси]-2-метил-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)]-
1- пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 376 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за ClgH2lN3O4S. 1,3CF3CO2H .0,36 HjO: С 46,62, Η
4,3-8, Ν 7,93. Намерено: С 46,45, Η 4,57, Ν 8,27.
Пример 14
Получаване на (±)-8-[3-(4-аминопиридин-
2- иламино)-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,
4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[3-(4-нитро-1 -оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3 -оксо-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]-4-нитропиридин-Н-оксид вместо 2-[(3-хидрокси-1 -пропил )амино]-пиридин-И-оксид и се използва метилов (±)-8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 459 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-8-[3-(4-аминопиридин-2иламино)-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,
4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-(4-нитро-1 -оксопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахид ро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-(4-нитро-Ь1-оксопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) ml е 413 (М+Н)+.
с) (±)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5 -тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 399 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C21H26N4O4.1,5CF3CO2H .0,125 Н2О: С 50,62, Н 4,91, N 9,83. Намерено: С 50,63, Н 5,26, N 9,90.
Пример 15
Получаване на (±)-8-[3-(пиримидин-2-иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Смес от метилов (±)-8-[3-(пиримидин-2иламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,071 g, 0,18 mmol) и литиев хидроксид монохидрат (0,009 g, 2 mmol) в THF (5 ml) и вода (2 ml) се разбърква при стайна температура в продължение на 18 h, след което се концентрира. Остатъкът се разтваря във вода и pH се коригира до 4 с 3N НС1. Полученото твърдо вещество се събира чрез филтриране и се суши, като се получава съединението съгласно заглавието (0,05 g, 73%) като бяло твърдо вещество: MS (ES) 371,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за Cl9H22NO4.0,5 Н2О: С
60,15, Н 6,11., N 14,77. Намерено: С 60,14, Н 6,06, N 14,71.
Пример 16
Получаване на (1<)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (К)-8-[3-[2-(4-нитро-1-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси-1 -пропил )амино]-4-нитропиридин-1Ч-ок сид вместо 2-[(3-хидрокси-1 -пропил )амино]пиридин-И-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като оранжева пяна: MS (ES) m/e 445,3 (М+Н)+
b) Метилов (К)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (R)-
8-[3-[2-(4-амино-\-оксопиридил)амино]-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8[3-[2-(М-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 390 (М+Н)+.
c) (К)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (R)-
8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси|-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество: [a]D 23 +74.97° (с 1,45, МеОН); MS (ES) m/e 385,4 (М+Н)’. Анализ: Изчислено за C20H24N4O4. HCl.1,5 Н2О: С 53,63, Н 6,30, N 12,50. Намерено: С 53,87, Н 6,13, N 12,42.
Пример 17
Получаване на (8)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (S)-8-[3-[2-(4-hhtpo-N-okcoпиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]-4-нитропиридин-14-оксид вместо 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-М-оксид, се получава съединението съгласно заглавието като оранжева пяна: MS (ES) m/e 445,3 (М+Н)+.
b) Метилов (8)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (S)-
8-[3-[2-(4-амино-Ь1-оксопиридил)амино]-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2(4-оксопиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) m/e 399,4 (М+Н)+.
с) (8)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (S)-
8-[3-[(4-амино-2-пиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5 -тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество: [a]D 23 -77,5° (с 1,45, МеОН); MS (ES) m/e 385,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C20H,4N4O4. 1,125 Н2О: 1,125 Н2О: С 59,36, Η 6.54,N 13,84.HaMepeHo:C59,31,H6,74,N 13,73.
Пример 18
Получаване на етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
а) Етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на (±)-8-[3-[(4-амино-2-пиридил) амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,27 g, 0,7 mmol) и 4 М НС1 в диоксан (0,2 ml, 8 mmol) в етанол (10 ml) се нагрява под обратен хладник. След 72 h реакционната смес се концентрира и остатъкът се разпределя между EtOAc и воден разтвор на К3СО3. Органичната фаза се промива с воден разтвор на натриев хлорид, суши се (MgSO4) и се концентрира. Остатъкът се разтваря в толуен (5 ml) и триетиламин (0,35 ml, 2,5 mmol) и полученият разтвор се нагрява под обратен хладник. След 18 h реакционната смес се концентрира под вакуум като се получава съединението съгласно заглавието (0,20 g, 69%) като жълтокафява пяна: MS (ES) m/e 413,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C22Hj3N4O4.0,25 HjO: С 63,37, Н 6,89,N 13,44. Намерено: С 63,32. Н7,17,N 13,05.
Пример 19
Получаване на (±)-8-[3-[(2-имидазолин-2ил)амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,
5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Получаване на метилов (±)-8-[3-(4-нитробензилокси-карбониламино)-1 -пропилокси]2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 3-(4-нитробензилоксикарбониламино)-1-пропанол вместо
2- [(3-хидрокси-1 -пропил )амино]пиридин-М-оксид и се използва метилов (±)-8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4- ацетат вместо метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e 500,3 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-8-[3-амино-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (±)-8-[3-(4-нитробензилоксикарбонил-амино)-1 -пропилокси]-2-метил-
3- оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат (1,4 g, 3, mmol), 10% паладий върху въглен (0,55 g, 0,6 mmol) и EtOH (20 ml) се разбърква при стайна температура под бутилка с водород. След 18 h сместа се филтрира и филтратът се концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието (0,89 g, 99%) като жълтокафяво твърдо вещество: MS (ES) m/e 321,4 (М+Н)+.
c) Метилов (±)-8-[3-[(2-имидазолин-2ил)амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,
5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин~4-ацетат
Смес от метилов (±)-8-[3-амино-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат (0.3 g, 1 mmol), 2-метилтиоимидазолин (0,46 g, 2 mmol), диизопропилетиламин (0,42 ml, 2 mmol) и диметилацетамид (3 ml) се нагрява до 100°С под аргон. След 2 h реакционната смес се концентрира под вакуум и остатъкът се разпределя между СНС13 и вода. Органичната фаза се суши (MgSO4) и концентрира и остатъкът се пречиства чрез препаративна HPLC, като се получава съединението съгласно заглавието (0,24 g, 51%) като жълто масло: MS (ES) m/e 389,4 (М+Н)+.
d) (±)-8-[3-[(2-имидазолин-2-ил)амино)1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Метилов (±)-8-[3-[(2-имидазолин-2-ил) амино]-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат се осапунва съгласно процедурата от пример 1(c). След пречистване посредством препаративна HPLC се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 375,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C21H26N4O4. 1,96CF3CO2H: С 46,08, Н 4,73, N 9,39. Намерено: С 46,37, Н 4,53, N 9,01.
Пример 20
Получаване на (±)-8-[3-[(4,5,6,7-тетрахидро-1 Н-2-диазепин-2-ил)амино]-1-пропилокси]2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[3-[(2-диазепин-2-ил) амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 19(c), с изключение на това че се използва 2-метилтио-
1,3-диазепин вместо 2-метилтиоимидазолин, се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 417,4 (М+Н)+,
b) (±)-8-[3-[(2-диазепин-2-ил)амино]-1пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 19(d), с изключение на това, че се използва (±)-8-[3-[(2диазепин-2-ил)амино]-1 -пропилокси]-2-мегил-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[(2-имидазолин-2ил)амино]-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 403,4 (М+Н)+.
Пример 21
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(4-метил-1оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2, 2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(a), с изключение на това, че се използва 2-[(3-хидрокси- 1 -пропил)амино]-4-метилпиридин-1Ч-оксид вместо 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-Ь1-оксид и се използва метилов (±)-3-оксо-8-хидрокси-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5 тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e
496,3 (М+Н)*.
b) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетаг
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3-оксо-8-[3-(4-метил-1 -оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,
4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(1Ч-оксопиридил)амино]1 -пролилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 480,2 (Μ+Η)ζ
c) (±)-3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 466,2 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C23H26F3N3O4. 0,5 Н2О: С 58,22, Н 5,74, N 8,86. Намерено: С 58,54, Н 5,58, N 8,64.
Пример 22
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-[1Ч-(пиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-1Ч(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Съгласно процедурата на пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил-14-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(Ь1-оксопиридил)амино]-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2 бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна: MS (ES) т/ е 484,4 (М+Н)+.
Ь) (±)-3 -оксо-8- [3 - [1Ч-пиридин-2-ил)-Н(трет-бутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[К-(пиридин-2-ил)-К-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бял прах: MS (ES) m/e 470,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C25H3ONaN3O6. 3,25 HjO: С 54,59, Н 6,69, N 7,64. Намерено: С 54,47, Н 6,32, N 7,95.
Пример 23
Получаване на (±)-8-[3-[Ь1-(1-оксопиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
a) (±)-8-[3-[Ν-(1 -оксопиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
Съгласно процедурата на пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бял прах: Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,6-8,3 (m, 8H), 3,7-4,6 (m, ЗН),
3,3-3,6 (m, 5H), 1,8-3,0 (m, 5H), 1,6 (s, 6H), 1,3 (s, ЗН); MS (ES) m/e 486,4 (M+H)+
Пример 24
Получаване на (±) -3-оксо-8-[3-р4-(пиридин-2-ил)-№(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-3-okco-8-[3-[N-(1-okcoiihридин-2-ил)-и-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуоро-метилбензил)-2,3,
4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на метилов (±)-3-okco-8-[3-[N-(1оксопиридин-2-ил)-№(трет-бутоксикарбонил) амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,4 g, 0,8 mmol) в DMF (5 ml) се охлажда до -20°С (СС14/баня от сух лед) и на капки се прибавя (TMS)2NLi (1,0 М разтвор в THF, 0,9 ml, 0,9 mmol). След 10 min се прибавя разтвор на 4-трифлуорометилбензил бромид (0,211 g, 0,88 mmol) в DMF (0,5 ml). Разтворът се разбърква под атмосфера от аргон при -20°С в продължение на 10 min, след това при стайна температура в продължение на 18 h. Разтворът се концентрира и остатъкът се смесва с EtOAc и се промива последователно с 5% NaHCO3 (2х), Н^О (lx), 5% лимонена киселина (2х), Н2О (1х) и воден разтвор на натриев хлорид (1х). Слоят EtOAc се суши (MgSO4) и концентрира като се получава съединението съгласно заглавието (0,42 g, 80%); MS (ES) m/e 658,3 (M+H)+.
b) Метилов (±)-3-0KC0-8-[3-[N-(nHpnuHH-
2- ил )-№(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуоро-метилбензил)-2,3,4,5тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-[Ъ1-(1-оксопиридин-2-ил)-№(третбутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-[2(Н-оксопиридил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-2-бензазепин-4-ацета^ се получава съединението съгласно заглавието (0,321 g, 78%) като безцветно масло: MS (ES) m/e 642,3 (М+Н)+.
c) (±)-3-оксо-8-[3-Р4-(пиридин-2-ил)-№ (трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуоро-метилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-[1М-(пиридин-2-ил)-№(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуоро-метилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 628,43 (М+Н)+ Анализ: Изчислено за C33H36F3N3O6.0.5H2O: С 62,25,
Η 5,86, Ν 6,60. Намерено: С 62,01, Η 5,92, Ν 6,81.
Пример 25
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин2-иламино)-1-пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина
а) (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)1-пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуоро-метилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина (0,158 g, 0,25 mmol) се обработва с 4М НС1 (3 ml) при стайна температура в продължение на 1 h, след което разтворът се концентрира. След ODS хроматография (градиент 5-60% CH3CN/HjO, съдържаща 0,1% TFA за период от 1 h), концентриране и лиофилизиране се получава съединението съгласно заглавието (0,117 g, 82%): MS (ES) m/e
528,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C^H^NjO^ 1CF3CO2H.1,5HjO: С 53,89, Н 4,82, N 6,28. Намерено: С 53,55, Н 4,55, N 6,04
Пример 26
Получаване на (±)-2-метил-3-оксо-8-[3[Т4-(пиридин-2-ил)-Ь1-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
a) Метилов (±)-8-[3-[2-(Ь1-оксопиридил)1Ч-(метил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на метилов (±)-8-[3-[2-(N-okcoпиридил)амино-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (1,5 g,
3,8 mmol) в DMF (10 ml) се охлажда до -20°С под атмосфера от аргон и на капки се прибавя (TMS)2NLi (1,0 М разтвор в THF, 8 ml, 8 mmol). Реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на 18 h, след което се концентрира. След хроматография върху силикагел (10% MeOH/CHjCl2) се получава съединението съгласно заглавието (1 g, 62%): MS (ES) m/e 428,4 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-2-метил-3-оксо-8-[3-[М(пиридин-2-ил)-Ь1-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)8 - [3 -[2-(Ь1-оксипиридил)-М-(метил)амино]-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5тетрахидрю-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,7 g, 73%) като безцветно масло: MS (ES) m/e412,4 (М+Н)+,
с) (±)-2-метил-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин2-ил)-М-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-метил-3-оксо-8-[3-[Н-(пиридин-2-ил)-Ь1-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава сурово съединението съгласно заглавието: След пречистване с помощта на ODS хроматография (5-60% CHjCN/HjOp съдържаща 0,1 TFA за период от 1 h), концентриране и лиофилизиране се получава съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 398,4 (М+Н)+ Анализ: Изчислено за C22H27N3O4.1,5 CF3CO2H .0,25HjO: С 52,40, Н 5,10, N 7,33. Намерено: С 52,09, Н 5,26, N 7,20.
Пример 27
Получаване на (±)-2-бензил-3-оксо-8-[3(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-[Л(1 -оксопиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(a), с изключение на това, че се използва бензилбромид вместо 4-трифлуорометил-бензилбромид, се получава съединението съгласно заглавието (0,105 g, 20%); MS (ES) m/e 590,4 (M+H)+.
b) Метилов (±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-[Нпиридин-2-ил)-ЬГ-(трет-бутоксикарбонил)амино]1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-бензил-3-оксо-8-[3-[Ъ1-(1-оксопиридин-2-ил)Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3-[Т4-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трег-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)52
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг, се получава съединението съгласно заглавието (0,045 g, 44%): MS (ED) m/e 574,4 (М+Н)+.
c) (±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-[14-(пиридин2-ил)-14-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-бензил-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,044 g, количествено): MS (ES) m/e 560,3 (М+Н)+.
d) (±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва (±)-2-бензил-3 -оксо-8-[ 3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина вместо (±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина, се получава съединението съгласно заглавието (0,014 g, 40%): MS (ES) m/e 460,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C27H29N3O4.CF3CO2H ,Н2О: С 57,14, Н 5,62, N 6,89. Намерено: С 57,44, Н 5,32, N 6,87.
Пример 28
Получаване на (±)-2-(карбоксиметил)-3оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-
2.3.4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-2-(трит-бутоксикарбонилметил)-3-оксо-8-[3-[Ъ1-( 1 -оксопиридин-2-ил)-1Ч(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(a), но с изключение на това, че се използва трет-бутилбромоацетат вместо 4-трифлуорометилбензил бромид, се получава съединението съгласно заглавието (1,0 g, 80%): MS (ES) m/e 614,4 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-2-(трет-бутоксикарбонилметил)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-М-(третбутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-(трет-бутоксикарбонилметил)-3-оксо-8-[3-[Ь1(1 -оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3оксо-8-[3-|ТЧ-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,72 g, 77%): MS (ED) m/e 598,4 (М+Н)+.
c) Метилов (±)-2-(карбоксиметил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-(трет-бутоксикарбонилметил)-3-оксо-8-[3-рЧ(пиридин-2-ил)-ЬЦтрет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина, се получава съединението съгласно заглавието (0,57 g, количествен): MS (ES) m/e 442,3 (М+Н)+.
d) (±)-2-(карбоксиметил)-3-оксо-8-[3(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(c), е изключение на това, че се използва метилов (±)2-(карбоксиметил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-ил)1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,30 g, 56%): MS (ES) m/e 428,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C22H25N3O6.21^0: С 57,01, Н 6,31, N 9,07. Намерено: С 57,27, Н 6,24, N 8,86.
Пример 29
Получаване на (±)-2-(4-аминобензил)-3оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-2-(4-нитробензил)-3-оксо8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(a), но с изключение на това, че се използва 4-нитробензилбромид вместо 4-трифлуорометилбензилбромид, се получава съединението съгласно заглавието (0,284 g, 69%); MS (ES) m/e 635,3 (M+H)+.
b) Метилов (±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-[М-(1-оксопиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-(4-нитробензил)-3-оксо-8-[3-[М-(1-оксопиридин-2-ил)- Ш-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2,3,4,5 -тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3[N-(1 -оксопиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил )-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,104 g, 40%); MS (ED) m/e 589,3 (M+H)+.
c) (±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-[К(пиридин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-рЧ-(1-оксопиридин-2-ил)-1*1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,08 g, 79%); MS (ES) m/e 575,4 (M+H)+.
d) (±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва (±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-1Ч(трет-бутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина вместо (±)-3-оксо-8-[3-[Ъ1-(пиридин-2ил)-1Ч-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -про-пилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина, се получава съединението съгласно заглавието (0,029 g, 44%): MS (ES) m/e 475,4 (М+Н)+. Ана лиз: Изчислено за C27HioN404 ^CFjCOjH . 1,51^0: С 51,03, Н 4,83, N 7,68. Намерено: С 50,92, Н 4,78, N 7,64.
Пример 30
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-[К-(пиридин-2-ил)-Ь1-(бензоил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-ил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва метилов (±)3-okco-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-Ь1-(третбутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-ацетат вместо (±)-3-оксо-8-[3[1Ч-(пиридин-2-ил)-1Ч-(трет-бутоксикарбонил) амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина, се получава съединението съгласно заглавието (1,9 g, 90%): MS (ES) m/e 558,3 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2ил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил )-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-( 1 -оксопиридин-2-ил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-флуорометилбензил)-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-okco-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)Н-(трет-бутоксикарбонил)амино-1 -пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,40 g, 88%): MS (ED) m/e 542,3 (М+Н)+.
c) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-[Ъ1-(пиридин2-ил)-Ь/-(бензоил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-ацетат
Бензоилхлорид (0,094 ml, 0,8 mmol) се прибавя на капки към разтвор на метилов (±)-3оксо-8-[3-(пиридин-2-ил)амино-1 -пропилокси]2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,4 g, 0,74 mmol) и диизопропилетиламин (0,5 ml, 2,9 mmol) в СН2С12 (10 ml). След 18 h разтворът се концентрира и остатъкът се пречиства чрез хроматог рафия върху силикагел (1:1 EtOAc/хексан), като се получава съединението съгласно заглавието (0,293 g, 61%): MS (ES) m/e 646,2 (М+Н)+.
d) (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-Ь1(бензоил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-Ь1-(бензоил)амино] -1 -пропил окси] -2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат, се получава сурово съединението съгласно заглавието. След пречистване посредством ODS хроматография (10-80% CHjCN/H2O, съдържаща 0,1% TFA, за период от 1 h), концентриране и лиофилизация, се получава съединението съгласно заглавието (0,025 g, 10%): MS (ES) m/e 632,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C35H32F3H3O5 .0,85CF3CO2H: С 60,50, Н 4,54, N 5,74. Намерено: С 60,22, Н 4,35, N 5,77.
Пример 31
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-1Ч-(трет-бутилацетил)амино]-1пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(1-оксопиридин-2-ил)-14-(трет-бутилацетил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,
4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на трет-бутилоцетна киселина (0,228 ml, 1,2 mmol) в CHjCl2 (10 ml) се обработва с оксалилхлорид (1 ml, 11,4 mmol), след това с DMF (0,0005 ml, 0,06 mmol). Реакционната смес се разбърква при стайна температура в продължение на 1,5 h, след което се концентрира. Остатъкът се смесва с CHjClj (5 ml) и на капки се прибавя към разтвор на метилов (±)-3-оксо-8-[3-( 1 -оксопиридин-2-ил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат(0,35 g, 0,6 mmol) и Et3N (0,5 ml, 2,4 mmol) в CHjC^ (10 ml). След 18 h разтворът се промива последователно с вода (lx), 5% NaHCO3 (2х), вода (1х), 5% лимонена киселина (2х) и наситен разтвор на натриев хлорид (1х). Органичният слой се концен трира, като се получава съединението съгласно заглавието (0,4 g, 97%): MS (ES) m/e 656,4 (М+Н+.
b) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-Р4-(пиридин-
2- ил)-М-(трет-бутилацетил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- okco-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-М-(третбутилацетил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3[N-(1 -оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,22 g, 56%): MS (ED) m/e 642,3 (М+Н)+.
c) (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутилацетил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-[Н-(пиридин-2-ил)-1Ч-(трет-бутилацетил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-
4- ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава сурово съединението съгласно заглавието. След пречистване с помощта на ODS хроматография (10-80% CHjCN/HjO, съдържаща 0,1% TFA за период от 1 h), концентриране и лиофилизация, се получава съединението съгласно заглавието (0,022 g, 10%): MS (ES) m/e 626,4 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C^HjgFjNjO,. 1Н2О: С 63,44. Н 5.26, N 6,53. Намерено: С 63,24, Н 5,96, N 6,39.
Пример 32
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-1Ч-(изобутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,
4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-[Ь1-(1-оксопиридин-2-ил)-М-(изобутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно метода от пример 30(c), с из ключение на това, че се използва изобутилхлороформиат вместо бензоилхлорид, се получава съединението съгласно заглавието (0,47 g, 80%): MS (ES) m/e 658,3 (М+Н)+.
b) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-
2- ил)-М-(изобутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-[М-(1-оксопиридин-2-ил)-14-(изобутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3-|14-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,4 g, 63%): MS (ED) m/e 642,3 (М+Н)+.
c) (±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-Н(изобутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 1(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2-ил)-Ь1-(изобутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо етилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава сурово съединението съгласно заглавието. След пречистване с помощта на ODS хроматография (10-80% CH3CN/H2O, съдържаща 0,1% TFA за период от 1 h), концентриране и лиофилизация, се получава съединението съгласно заглавието (0,008 g, 20%): MS (ES) m/e 628,3 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C33H36F3N3O6,0,25CF3CO2H . 0,5^0: С 60,49, Н 5,64, N 6,32. Намерено: С
60,78, Н 5,50, N 6,28.
Пример 33
Получаване на (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-бензазепин-4оцетна киселина
а) Метилов (S)-3-okco-8-[3-[N-(1-okcoiihридин-2-ил)-К-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-бензазепин-
4- ацетат
Съгласно процедурата на пример 1(a), с изключение на това, че се използва метилов (S)8-хидрокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-хидрокси-
3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (3,0 g, 83%); MS (ES) m/e 500.3 (M+H)+.
b) Метилов (S)-3-0KC0-8-[3-[N-(l-0KC0miрвдин-2-ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,
4.5- тетрахидро- Ш-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(a), с изключение на това, че се използва (S)-3-okco8-[3 -[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-14-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3-[1Ч-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1(трет-бутоксикарботил)амино]-1 -пропилокси]-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат,се получава съединението съгласно заглавието (2,3 g, 72%): MS (ES) m/e 658,2 (М+Н)+.
c) Метилов (8)-3-оксо-8-[3-[Л-(пиридин-
2- ил)-М-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 24(b), с изключение на това, че се използва метилов (S)-
3- оксо-8-[3-[М-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1-(третбутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3-[Л-(1-оксопиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (1,1 %, 50%): MS (ED) m/e
642,1 (М+Н)+.
d) (S)-3-OKCo-8-[3-[N-(mipHiiHH-2-mi)-N(трет-бутоксикарбонил)амино-1 -пропилокси]-2(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 24(c), с изключение на това, че се използва (S)-3-okco8-[3-[14-(пиридин-2-ил)- Ш-(трег-бутоксикарбонил)амино]-1-пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4- ацетат вместо метилов (±)-3-оксо-8-[3-[1Ч-(пиридин-2-ил)-Ь1-(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,8 g, 60%): MS (ES) m/e 628,1 (М+Н)+
е) (3)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-
1- пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва (S)-3-okco8-[3-РЧ-(пиридин-2-ил)^-(трет-бутокси-карбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометил-бензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо (±)-3-оксо-8-[3-[Ъ1-(пиридин-2-ил)-№(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина, се получава сурово съединението съгласно заглавието. След пречистване посредством ODS хроматография (30% CHjCN/HjO, съдържаща 1,0% TFA за период от 1 h), концентриране и лиофилизация се получава съединението съгласно заглавието (0,657 g, 72%): [a]D -42° (с 1,0, МеОН); MS (ES) m/e 528,1 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C2gH2gF3N3O4.2CF3CO2H. 3,75Н2О: С 46.69, Н 4,59, N 5,10. Намерено: С 46,47, Н 4,58, N 5,48.
Пример 34
Получаване на метилов (±)-3-оксо-8-[3(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
а) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-
2- бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 1(b), с изключение на това, че вместо етанол се използва заместен изопропанол, се получава съединението съгласно заглавието (0,35 g, 76%: MS (ES) m/e 384,4 (M+H)+.
Пример 35
Получаване на (S)-3-okco-8-[3-(1,4,5,6тетрахидро-пиримид-2-иламино)-1 -пропилокси]2-[4-(трифлуорометил)-бензил]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (8)-8-[3-(4-нитробензилоксикарбонил-амино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидроШ-бензазепин-4-ацетат
Към метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-бензазепин-4-ацегат (0,14 g, 0,34 mmol) и Ph3P (0,13 g, 0,50 mmol) в С1/С12 (2 ml) при
0°С на капки се прибавя разтвор на 3-(4-нитробензилкарбониламино)-1-пропанол (0,13 g, 0,51 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,08 ml, 0,50 ml). Когато прибавянето завърши, ледената баня се отстранява и реакционната смес се разбърква при стайна температура. След 18 h разтворителят се отстранява и продуктът се изолира чрез флаш хроматография върху силикагел (100% СНС13 до 5% МеОН/СНС13) като се получава съединението съгласно заглавието (0,12 g) като бистро Ή NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,18 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,65 (m, 1H), 7,50 (m, 5H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,30 (m, 1H), 5,23 (m, 3H), 4,95 (d, J =
16,4 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,95 (m, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,45 (m, 2H),
3,15-2,90 (m, 3H), 2,50 (dd, J = 19,2, 5,5 Hz, 1H), 1,95 (m, 2H).
b) Метилов (8)-8-[3-амино-1-пропилокси)-3-оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,
4.5- тетрахидро- 1Н-бензазепин-4-ацетат
Към метилов (8)-8-[3-(4-нитробензилоксикарбонил-амино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-бензазепин-4-ацетат (0,12 g, 0,19 mmol) в МеОН (2 ml) се прибавя 10% Pd/C (20 mg). Реакционният съд се продухва с водород и след това се снабдява с бутилка, заредена с водород. След 4,5 h водородът се продухва и катализаторът се отстранява чрез филтриране през Celite . След отстраняване на разтворителя се получава съединението съгласно заглавието (0,09 g) като бледожьлт остатък. Този продукт се използва без понататъшно пречистване. MS (ES) m/e465,3 (М+Н)+.
c) Метилов (8)-3-оксо-8-[3-(пиримидин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на метилов (8)-8-(3-амино-1-пропилокси)-3-оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,09 g, 0,19 mmol), 2-бромопиримидин (0,09 g, 0,57 mmol) и диизопропилетиламин (0,17 ml, 0,98 mmol) в DMF (2 ml) се нагрява при 80°С в продължение на 18 Ь. Реакционната смес се оставя да се охлади до стайна температура и се концентрира, като се получава жълт остатък. След флаш хроматография върху силикагел (2% МеОН/EtOAc) се получава съединението съглас но заглавието (42 mg) като бистро масло. MS (ES) m/e 543,1 (М+Н)+.
d) Метилов (S)-3-okco 8-(3-(3,4,5,6-тетрахидропиримид-2-иламино)-1 -пропилокси)-2[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-етрахидро1 Н-2-бензазепин -4-ацетат
Апарат на Рап· за хидрогениране се зарежда с метилов (8)-3-оксо-8-[3-(пиримидин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-етрахидро-1 Н-2-бензазепин-
4- ацетат (42 mg, 0,08 mmol), ледена оцетна киселина (2 ml), концентрирана НС1 (0,2 ml) и Pd/C (10 mg). Сместа се разклаща под водород (40 psi) в продължение на 5 h, след това водородът се продухва и катализаторът се отстранява чрез филтриране през Celite . След изпаряване на разтворителя се получава сурово съединението съгласно заглавието (52 mg) като черен остатък. Той се използва без по-нататъшно пречистване. MS (ES) m/e 547,2 (М+Н)+
e) (8)-3-оксо-8-[3-(3,4,5,6-тетрахидро-пиримид-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Към суровия метилов (S)-3-okco-8-[3(3,4,5,6-тетрахидропиримид-2-иламино)-1 -пропилокси)-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,
5- етрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат от пример 35d в EtOH (1 ml) се прибавя IN NaOH (0,25 ml, 0,25 mmol). След разбъркване при стайна температура в продължение на 8,5 h реакцията се спира чрез прибавяне на IN НС1 (0,25 ml, 0,25 mmol). След отстраняване на разтворителя се получава бледожълто твърдо вещество. Препаративна HPLC с обърната фаза (Hamilton PRP-1®, 30% CHjCN/HjO, съдържаща 0,1% TFA), води до получаване на съединението съгласно заглавието (18,1 mg) като бял прах. MS (ES) m/e 533,3 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C27H31N4F3O4 ,2Н2О ,2CF3CO2H: С 46,74, Н 4,68, N 7,03. Намерено: С 46,34, Н 4,31, N 6,82.
Пример 36
Получаване на (±)-3-оксо-8-[3-[Н-(пиридин-2-ил)-Н-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (±)-3-okco-8-[3-[N-(1-okcoiihридин-2-ил)-№(метил)амино]-1 -пропилокси]-2[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 25(a), с изключение на това, че се използва метилов (±)3-okco-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-№(третбутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо (±)-3-оксо-8[3-|Ъ1-(пиридин-2-ил)-^трет-бутоксикарбонил) амино]-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина, се получава НС1 солта. Продуктът се превръща в свободна основа чрез разпределяне между EtOAc и 5% NaHCO3. Слоят EtOAc се отделя и концентрира, като се получава съединението съгласно заглавието (4,1 g, 100%): MS (ES) m/e 558,3 (M+H)+.
b) Метилов (±)-3-okco-8-[3-[N-( 1 -оксопиридин-2-ил)-№(метил)амино]-1 -пропилокси]-2[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 26(a), с изключение на това, че се използва метилов (±)3-оксо-8-[3-[Н-(1-оксопиридин-2-ил)-И-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)-бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(Ν-οκсопиридил)амино]-1-пропилокси]-3-оксо-2,3,4,
5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, като се получава съединението съгласно заглавието (3.0 g, 94%): MS (ES) m/e 572,3 (М+Н+).
c) Метилов (±)-3-оксо-8-[3-р4-(пиридин2-ил)-Н-(метил)амино]-1-пропилокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-
2- бензазепин-4-ацетат
Съгласно процедурата от пример 4(b), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3- оксо-8-[3-рЧ-(1-оксопиридин-2-ил)^-(метил)амино]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4- ацетат вместо метилов (±)-8-[3-[2-(N-okcoiihридил)амино]-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетаг, се получава съединението съгласно заглавието (0,32 g, 60%): MS (ES) 556,2 (М+Н)+.
d) (±)-3-оксо-8-[3-р4-(пиридин-2-ил)-№ (метил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно процедурата от пример 4(c), с изключение на това, че се използва метилов (±)-
3-оксо-8-[3-№-(пиридин-2-ил)^-(метил)ами но] -1 -пропилокси] -2 -(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-
1- пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието (0,02 g, 15%); MS (ES) m/e 542,1 (M+H)+. Анализ: Изчислено за C29HMN,O4F3 ,CF3CO2H. Н2О: С 55,28,Н 4,94, N
6,24. Намерено: С 55,45, Н 4,68, N 6,14.
Пример 37
Получаване на (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-
2- иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
a) Метилов (8)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетаг
Към разбъркван разтвор на метилов (S)8-хидрокси-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат (19 g 57.4 mmol) в сух THF (400 ml) и сух DNF (200 ml) под аргон се прибавя 2-(3-хидроксипропиламино)пиридин Nоксид (11,6 g, 69 mmol) и триетилфосфин (18,0 g, 69 mmol). След като цялото количество твърдо вещество се разтвори напълно (~30 min), реакционната смес се охлажда до 0°С в ледена баня и през спринцовка се прибавя диизопропилазодикарбоксилат (14,3 ml, 69 mmol). Реакционната смес се оставя да се затопли до стайна температура и се разбърква в продължение на 18 h. След концентриране и флаш хроматография върху силикагел (8:2:1 CHjClj/EtOAc/EtOH) се получава съединението съгласно заглавието (20,83 g, 75%) като твърда пяна. От продукта могат да се получат допълнителни 5,73 g чрез рециклиране на извлечения изходен продукт от горната реакционна смес, като общо се получава 26,56 g (96%) от съединението съгласно заглавието: MS (ES) m/e 482,2 (М+Н)+; Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,09 (dd, J = 6,5, 1,3 Hz, IH), 7,29 (t, IH), 7,18 (t, IH), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, IH), 6,84-6,79 (m, 3H), 6,59 (t, IH), 5,32 fd, J = 16,5 Hz, IH), 4,28-4,14 (m, 2H), 4,16 (d J = 16,5 Hz, IH), 4,02 (t, 2H), 3,84 (m, IH), 3,58 (s, 3H), 3,40 (dd, 2H), 3,01 (dd, IH), 2,73 (dd, IH), 2,70 (dd, IH), 2,52 (dd, IH), 2,02 (ddd, 2H).
b) Метилов (Б)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4- ацегаг
Към разбъркван разтвор на (S)-3-okco-8[3-(1 -оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-
2- (2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н5 2-бензазепин-4-ацетат (26,56 g, 55 mmol) в изо- пропанол (500 ml) се прибавя 10% паладий върху активен въглен (8 g, 7,5 mmol, предварително навлажнен внимателно в изопропанол под аргон) и циклохексен (55,7 ml 550 mmol). Реак10 ционната смес след това се нагрява под обратен хладник под аргон на маслена баня при 90°С. След 6 h се прибавя допълнително количество 10% паладий върху активен въглен (8 g, 7,5 mmol, предварително навлажнен внимателно в изопро15 панол под аргон)и циклохексен (55,7 ml, 550 mmol). След допълнителни 18 h реакционната смес се филтрира на горещо през Celite и филтърният слой се промива с 1:1 МеОН/СНС13 (400 ml). Филтратът се концентрира под вакуум и ос20 татъкът се пречиства чрез флаш хроматография върху силикагел (95:5 СНС13/МеОН), като се получава съединението съгласно заглавието (19,50 g, 76%) като бяла лепкава пяна: ТСХ (силициев диоксид, 5% МеОН в СНС13) Rf 0,52; MS (ES) 25 m/e 466,3 (M+H)+ Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (d,d IH), 7,34 (t, IH), 7,02 (d, J = 9,2 Hz. IH), 6,81 (m, 2H), 6,54 (t, IH), 6,46 (m, 2H),
5,31 (d, J = 16,5 Hz, IH), 4,23-4,13 (m, 2H), 4,17 (d, J = 16,5 Hz, IH), 4,02 (t, 2H), 3,82 (m IH), 30 3,58 (s, 3H), 3,36 (m, 2H),3,01 (dd, IH), 2,72 (dd, IH), 2,68 (dd, IH), 2,50 (dd, IH), 1,96 (ddd, 2H).
c) (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)1-пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,535 тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Към разбъркван разтвор на метилов (S)-
3- оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат (19,50 g, 42 mmol) в диоксан (150 ml) се прибавя воден INNaOH (75 ml, 75 mmol). Мътната реакционна смес се разбърква при стайна температура в продължение на 2 h, след това полученият хомогенен разтвор се неутрализира с водна IN НС1 (75 ml, 75 mmol). 45 Разтворът се концентрира почти до сухо на ротационен изпарител до утаяване на продукта. Надутаечната течност се декантира и полученото смолисто твърдо вещество се разтваря повторно в метанол. Бистрият разтвор след това се кон50 центрира повторно на ротационен изпарител. По лученото твърдо вещество се разпрашава с малък обем вода, филтрира се и се суши под вакуум, като се получава съединението съгласно заглавието (16,38 g, 86%) като бял прах. HPLC (Hamilton PRP-1®, 25% CH3CN/H2O, съдържаща 0,1% TFA) к = 3,1; [a]D -112,3° (c, 1,0, МеОН); MS (ES) m/e 452,3 (M+H;) Ή NMR (400 MHz, DMSO-dj) δ 7,95 (dd, 1H), 7,34 (dt. 1H), 7,02 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,81 (m, 2H), 6,58 (m, 1H), 6,47 (m, 2H), 5,30 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 4,27-
4,13 (m,2H),4,15 fd, J= 16,5 Hz, lH),4,02(t,lH),
3,78 (m, 1H), 3,37 (m, 2H), 3,00 (dd, 1H), 2,69 (dd, 1H), 2,65 (dd, 1H), 2,41 (dd, 1H), 1.96 (ddd, 2H). Анализ: Изчислено за C22H24F,N3O4: C 58,53, H 5,36, N 9.31, Намерено: C 58,37, H 5,42, N 9,20.
Пример 38
Получаване на ^)-3-оксо-8-[3-(пиридин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов ^)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил-2,3,4,5 -тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетат
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1-пропил)амино]пиридин-№оксид (0,33 g, 2 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,3 ml, 2 mmol) в безводен DMF (10 ml) бавно на капки се прибавя разтвор на метилов (R)-8-xHflpoKCH-3-OKCO-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,3 g, 1 mmol) и трифенилфосфин (0,485 g, 26 mmol) в безводен CHjClj (10 ml) при стайна температура. След 17 h реакционната смес се концентрира. Хроматография върху силикагел (градиент: 0,5%-5% МеОН/СН^СЦ) води до получаване на съединението съгласно заглавието (0,35 g, 80%) като безцветно масло: MS (ES) m/e 482,3 (М+Н)+,
b) Метилов ^)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Смес от ^)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,35 g, 0,7 mmol), циклохексен (0,75 ml, 7 mmol), 10% Pd/C (88 mg, 0,07 mmol) и изопропанол (9 ml) се нагряват под обратен хладник под аргон. След 18 h се прибавя допълнително количество 10% Pd/C (36 mg, 0,03 mmol) и цик лохексен (0,75 ml, 7 mmol). След 36 h реакционната смес се филтрира на горещо през Celite® и филтърният слой се промива с EtOAc. След концентриране се получава жълто масло. Хроматография върху силикагел (1%-5% МеОН в CHjClj) води до получаване на съединението съгласно заглавието (0,26 g, 77%) като безцветно масло: MS (ES) m/e 466,2 (М+Н)+.
с) ^)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-
1- пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
LiOH. Н2О (25 mg, 0,6 mmol) се прибавя към разтвор на метилов (К)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4ацетат (0,25 g, 0.54 mmol) в THF (5 т1)и вода (2 ml) при стайна температура. След 18 h реакционната смес се концентрира до сухо и остатъкът се разтваря във вода (4 ml). Разтворът внимателно се довежда до pH « 4 с 3,0 N НС1. Утайката се събира и се суши под висок вакуум при 40-45°С, като се получава съединението съгласно заглавието (0.15 g. 62%) като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 452.1 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C22H24F3N3O4. 0,5 Н2О: С 57,38, Н 4,57, N 9,12. Намерено: 57,72, Н 5,24, N 8,92.
Пример 39
Получаване на (8)-8-[3-(4-мегилпиридин-
2- иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (S)-8-[3-(4-Meran- 1-оксипиридин-2-иламино)-1 -пропилокси)-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил )-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1 -пропил)амино]-4-метилпиридин-Н-оксид (0,60 g, 3.6 mmol) и диетилов азодикарбоксилат (0.6 ml 3.6 mmol) в безводен СН2С12 (12 ml) се прибавя на капки за период от 3-4 min към разтвор на метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил )-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,60 g, 1,8 mmol) и трифенилфосфин (0,95 g,
3,6 mmol) в безводен СН2С12 (6 ml) при стайна температура. След 17 h реакционната смес се концентрира. След силикагелна хроматография (градиент: 1 %-5% MeOH/CHjClj) се получава съединението съгласно заглавието (0,45 g, 49%) като белезникава пяна: MS (ES) m/e 496,3 (М+Н)+.
b) Метилов (8)-8-[3-(4-метилпиридин-2 иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-
4-ацетат
Смес от метилов (8)-8-[3-(4-метил-1-оксипиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-ацетат (0.45 g, 0,9 mmol), циклохексен (0,93 ml, 9 mmol), 10% Pd/C (0,2 g, 0,18 mmol) и изопропанол (9 ml) се нагрява под обратен хладник под аргон. След 18 h се прибавя допълнително 10% Pd/C (0,2 g, 0,18 mmol) и циклохексен (0,27 ml, 2.65 mmol). След 36 h реакционната смес се филтрира на горещо през Celite и филтърният слой се промива с горещ EtOAc. След концентриране остава жълто масло. Хроматография върху силикагел (1%-3% МеОН в CHjClj) осигурява съединението съгласно заглавието (0,32 g, 74%) като бяла пяна: MS (ES) m/e 480,2 (М+Н)+.
с) (8)-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)1-пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
LiOH.HjO (33 mg, 0.79 mmol) се прибавя към разтвор на метилов (8)-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,32 g, 0,67 mmol) в THF (5 ml) и вода (2 ml) при стайна температура. След 18 h реакционната смес се концентрира до сухо и остатъкът се разтваря във вода (4 ml). Разтворът се екстрахира с етилацетат, след това внимателно се коригира pH » 5 с 3,0 N НС1. Утайката се събира и се суши при висок вакуум при 40-45°С, като се получава съединението съгласно заглавието (0,22 g, 71 %) като белезникаво твърдо вещество: MS (ES) m/e 466,1 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C23Hj6F3N3O4: С 59,35, Н 5,63, N 9,03. Намерено:С 59,35, Н 5,63, N 9,03. Намерено: С 58,97, Н 5,55, N 8,73.
Пример 40
Получаване на (8)-8-[2-[6-(метиламино) пиридин-2-ил]-1 -етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)-1 -етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетаг
Съгласно метода от пример 37(a), с из ключение на това, че се използва 6-(метиламино)-2-пиридилетанол вместо 2-[(3-хидрокси-1пропил)амино]пиридин-Ь1-оксид, и вместо (R)8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат се използва (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-
4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като безцветно масло: MS (ES) m/e
466,2 (М+Н)+.
b) (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2ил]-1 -етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Съгласно метода от пример 37(c), с изключение на това, че се използва метилов (S)8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 -етокси]-3оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат вместо метилов (И)-8-[3-(2-пиридиламино)-1-пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат, се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество: MS (ES) m/e 452,2 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C22H24F3N3O4.0.7H2O: С 56,94, Н 5,52, N 9.05. Намерено: С 56,80, Н 5,19, N 8,85.
Пример41
Получаване на (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2-фенилетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
a) Метилов (8)-3-оксо-8-[3-(1-оксопиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2-фенилетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Разтвор на 2-[(3-хидрокси-1 - пропил)амино]пиридин-М-оксид (336 mg 2.0 mmol) и диетилов азодикарбоксилат (0.3 ml, 2.0 mmol) в безводен DMF (10 ml) се прибавя към разтвор на метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2-фенилетил )-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат (350 mg, 1,0 mmol) и трифенилфосфин (525 mg, 2.0 mmol) в безводен DMF (10 ml) при стайна температура. След 24 h сместа се концентрира. Флаш хроматография върху силикагел (градиент: EtOAc (500 ml), след това 5% МеОН/ СНС13) осигурява съединението съгласно заглавието като оранжева пяна (288 mg,. 57%): MS (ES) m/e 504 (М+Н)+.
b) Метилов (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2иламино)-1 -пропилокси]-2-(2-фенилетил)-2,3,4,
5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Смес от метилов (S)-3-okco-8-[3-(1-okcoпиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-(2-фенилетил )-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4ацетат (288 mg, 0.57 mmol), циклохексен (0,6 ml,
5,8 mmol), 10% Pd/C (62 mg, 0.58 mmol) и 2пропанол (6 ml) се нагрява под обратен хладник под аргон. След 31 h сместа се филтрира на горещо през слой Celite®, филтърният слой се промива с гореща смес 1:1 МеОН/СНС 13 (200 ml) и филтратът се концентрира. След флаш хроматография върху силикагел (5% МеОН/СНС 13) и след това втори път флаш хроматография върху силикагел (50% THF/циклохексан) се получава съединението съгласно заглавието като белезникава пяна (133 mg, 48%): MS (ES) m/e 488 (М+Н)+.
с) (S)-3 -оксо-8-[3 -(пиридин-2-иламино)1-пропилокси]-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Прибавя се 1.0 N LiOH (0.3 ml, 0,3 mmol) към разтвор на метилов (8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2-фенилетил)-
2.3.4.5- тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (133 mg. 0,27 mmol) в THF (1.5 ml) и вода (1,2 ml) при 0°С. Сместа се оставя да се затопли до стайна температура за период от 18 h. Сместа се промива с EtjO (2x5 ml), след което се прилага слаб вакуум за отстраняване на органичните разтворители. Водният слой се пропуска през 0,45 pm Acrodisk, филтър, след което внимателно се подкислява до pH 6, като се използва 10% НС1 във вода при 0°С. Утайката се събира, промива се с вода и се суши под вакуум при 50°С, като се получава съединението съгласно заглавието като бяло твърдо вещество (62 mg, 48%): MS (ES) m/e474 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за CjgH^NjO^ 0,75HjO: С 69,05, Н 6,75, N 8,63, Намерено С 69,05, Н 6,66, N 8,55.
Пример 42
Получаване на (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил )-2,3,
4.5- тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Диизопропилов азодикарбоксилат (0,3 ml,
1,5 mmol) се прибавя към разтвор на (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахид ро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат (350 mg, 1,0 mmol), 6-(метиламино)-2-пиридилетанол (228 mg 1,5 mmol) и трифенилфосфин (393 mg, 1,5 mmol) в безводен THF (10 ml) при 0°С. Сместа се оставя да се затопли до стайна температура за период от 72 h, след което се концентрира. След флаш хроматография върху силикагел (50% EtOAc/ хексан), последвана от втора флаш хроматография върху силикагел (25% EtOAc/хексан), се получава съединението съгласно заглавието като бяла пяна (250 mg, 51%: MS (ES) m/e 488 (M+H).
b) (8)-8-[2-(6-(метиламино)пирдин-2ил]етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина
Прибавя се 1,0 N LiOH (0.62 ml, 0,62 mmol) към разтвор на метилов (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-ацетат (250 mg, 0,51 mmol) в THF (2,5 ml) и вода (1,9 ml) при 0°С и реакционната смес се разбърква в продължение на 18 h. Сместа се промива с Et2O (2x5 ml), след което се прилага слаб вакуум за отстраняване на органичните разтворители. Водният слой се пропуска през 0,45 pm Acrodisk филтър, след което внимателно се подкислява до pH 6, като се използва 10% НС1 във вода при 0°С. Утайката се събира, промива се с вода, суши се под вакуум при 50°С, като се получава съединението съгласно заглавието (134 mg, 55%) като бяло твърдо вещество: ms (es) M/E 474 (М+Н)+. Анализ: Изчислено за C28H3IN3O4 0.75^0: С 69,05, Н 6,73, N 8,63. Намерено: С 69,23, Н 6,59, N 8,55.
Пример 43
Получаване на (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 -етокси|-3-оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил] -2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина
а) Метилов (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 -етокси]-3-оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-ацетат
Към разтвор на метилов (8)-8-хидрокси-
3-оксо-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0.18 g, 0.44 mmol) и Ph3P (0,23 g, 0,88 mmol) в CH2C12 (2 ml) се прибавя разтвор на 6-(метиламино)-2пиридилетанол (0,13 g 0.88 mmol) и диетилазодикарбоксилат (0,14 ml. 0,89 mmol) в CHjC^ (2 ml). След 2 дни при стайна температура раз творителят се отстранява под намалено налягане. След радиална хроматография върху силикагел (6 mm плоча, 5% МеОН/ СНС13) се получава бистро масло (0.63 g), което съдържа смес от съединението съгласно заглавието, заедно с нереагирал метилов (8)-8-хидрокси-3-оксо-2-[4(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат. Продуктът след това се пречиства чрез радиална хроматография върху силикагел (6 mm плоча 50% EtOAc хексан) като се получава съединението съгласно заглавието (0,12 g) като бистро масло: MS (ES) m/e
542.3 (М+Н)+
b) (8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2ил]-1-етокси]-3-оксо-2-[4-(трифлуорометил) бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина
Към разтвор на метилов (S)-8-[2-[6-(Meтиламино)-пиридин-2-ил]-1 -етокси]-3-оксо-2[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-ацетат (0,12 g, 0,22 mmol) в EtOH (2 ml) се прибавя 1 N NaOH (0,50 ml). След 3,5 h при сгайна температура, основният обем от разтворителя се отстранява под намалено налягане, като се получава бял остатък. Той се разтваря във вода и разтворът се неутрализира до pH = 7 с IN НС1. Получената утайка се събира и се суши под вакуум, като се получава съединението съгласно заглавието (28,1 mg) като бяло твърдо вещество: [a]D -74,0° (с, 0.05 EtOH); MS (ES) т/е 528,3 (М+-Н)+. Анализ: Изчислено за CjgHjgFjN^ .0.5Н2О: С 62,68, Н 5,45, N 7,83. Намерено: С 62,60, Н 5,35. N 7,66.
Пример 44
Състав на парентерална дозирана единица Приготвя се препарат като стерилен сух прах, съдържащ 20 mg от съединението от пример 1, както следва: 20 mg от съединението се разтмаря в 15 ml дестилирана вода. Разтворът се филтрира при стерилни условия в 25 ml многодозна ампула и се лиофилизира. Прахът се възстановява чрез прибавяне на 20 ml 5%-на декстроза във вода (D5W) за интравенозна или интрамускулна инжекция. Дозите след това се определят чрез инжекционен обем. Последващо разреждане може да се извърши чрез прибавяне на измерен обем от тази доза в друг обем от D5W за инжекция или измерена доза може да се прибави към друг механизъм за дозиране на лекарственото средство като във флакон или сак за IV капкова инфузия или друга инжекционноинфузионна система.
Пример 45
Състав на орална дозирана единица
Капсула за орално прилагане се приготвя чрез смесване и смилане на 50 mg съединение от пример 1 с 75 mg лактоза и 5 mg магнезиев стеарат. Полученият прах се пресява и пълни в твърди желатинови капсули.
Пример 46
Състав на орална дозирана единица
Таблети за орално прилагане се приготвят чрез смесване и гранулиране на 20 mg захароза, 150 mg калциев сулфат дихидрат и 50 mg от съединението от пример 1 с 10% желатинов разтвор. Влажните гранули се пресяват, сушат, смесват с 10 mg нишесте, 5 mg талк и 3 mg стеаринова киселина и се таблетират.
Посоченото по-горе описание включва осъществяването и използването на изобретението. Настоящото изобретение не се ограничава до конкретните изпълнения, описани тук, а включва всички техни модификации в обхвата на следващите претенции. Различните цитати от списания, патенти и други публикации, които са цитирани тук, се отнасят до нивото на техниката и са включени тук изцяло за справка.

Claims (7)

1. Антагонисти на витронекгинов рецептор с формула в която:
R* означава А-С^алкил, евентуално заместен с каквато и да е достъпна комбинация от един или повече R10 или R7;
А е Н или Аг;
R7 е -COR8;
всеки R8 е независимо OR’;
R10 е Н или халоген;
R2 означава в която G е NH и Rb и Rc са свързани заедно, като образуват шестчленен ароматен карбоцикличен пръстен или
R. (Ok >
в която Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава СН; или (О)и CR2—W— °VQ4 в която Q1, Q2 и Q3 всеки от тях означава CRy, Q4 е CRy или N; или в която s означава 0,1 или 2;
We-CHj-CHj-;
R’ е Н, Cw алкил или Аг-См алкил
R” е R’, -C(O)R’ или -C(O)OR;
Ry е Н, -OR8,-NR»R* или С|Ч> алкил; всеки R« е независимо Н или См алкил; и означава 0 или 1 и ν означава 0 или 1 или техни фармацевтично приемливи соли.
2. Съединение съгласно претенция 1 (±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензепин-4оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4-амино-2-пиридиламино)-1 пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина;
(±)-8-[3 -(4-метокси-2-пиридиламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-пиридиламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-имидазолиламино)-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-тетрахидропиримидинил)амино]-1 -пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3 -(6-амино-2-пиридиламино)-1 пропилокси] -3 -оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(2-бензимидазолил)етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(4-аза-2-бензимидазолил)етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-
4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(бензимидазол-2-ил)-1 -етокси]-
3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4оцетна киселина;
(±)-8-[3-[4-аминопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиримидин-2-иламино)1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
ф)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[(1,4,5,6-тетрахидропиримидин-2-ил)амино]-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[3-(4-аминопиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[К-(пиридин-2-ил)-Н(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-[М-(1-оксопиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-3оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-М(трет-бутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-флуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н64
2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(4-флуорометилбензил)-2,3,4,5теграхидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-метил-3-оксо-8-[3-[Ь1-(пиридин-2ил)-М-(метил)амино)]-1-пропилокси]-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-бензил-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-(карбоксиметил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-ил амино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-2-(4-аминобензил)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[1Ч-(пиридин-2-ил)-М(бензоил)амино)]-1 -пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(2-имидазолин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[2-(2-аминотиазол-4-ил)-1 -етокси]2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4,6-диметилпиридин-2-иламино)-1-пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-8-[3-(4,5,6,7-тетрахидро- 1Н-1,3-диазепин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-метил-3-оксо-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-М(трет-бутилацетил)амино]-1 -пропнлокси]-2-(4трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро-1Н2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-М(изобутоксикарбонил)амино]-1 -пропилокси]-2(4-трифлуорометилбензил)-2,3,4,5-тетрахидро1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(4-трифлуорометилбензил)-
2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(±)-3-оксо-8-[3-[М-(пиридин-2-ил)-Т4(метил)амино]-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(в)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил )-2,3,4,5тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(11)-3-оксо-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1пропилокси]-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[3-(4-метилпиридин-2-иламино)-1 пропилокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-3-оксо-8-[3-(1,4,5,6-тетрахидропиримид-2-иламино)-1 -пропилокси]-2-[4-(трифлуорометил)бензил]-2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-3-оксо-2-(2-фенилетил)-8-[3-(пиридин-2-иламино)-1 -пропилокси]-2,3,4,5-тетрахидро- 1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(Б)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3-оксо-2-(2-фенилетил)-2,3,4,5-тетрахидро-1 Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(8)-8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил]-1 етокси]-3-оксо-2-(2,2,2-трифлуороетил)-2,3,4,5тетрахидро- 1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
(S)- 8-[2-[6-(метиламино)пиридин-2-ил)1 -етокси]-3-оксо-2-(4-трифлуорометил)бензил]-
2,3,4,5-тетрахидро-1Н-2-бензазепин-4-оцетна киселина;
или тяхна фармацевтично приемлива сол.
3. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че съдържа съединение съгласно претенции 1 или 2 и фармацевтично приемлив носител.
4. Метод за получаване на съединения с формула (I) съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че съединение с формула (IV) взаимодейства със съединение с формула (V) (IV)
R2-lJ (V) в които R1 и R2 имат посочените във формула (I) значения, с всякакви защитени реактивоспособни функционални групи и L1 е ОН или халоген;
и след това защитните групи се отстраняват и евентуално се образува фармацевтично приемлива сол.
5. Използване на съединение съгласно претенции 1 и 2 за получаване на лекарствено средство.
6. Използване на съединение с формула (I)
5 съгласно претенция 5 за производство на лекарствено средство за лечение на остеопороза.
7. Използване на съединение с формула (I) съгласно претенция 5 за производство на лекарствено средство за инхибиране на ангиогенеза.
BG103299A 1996-10-02 1999-03-31 Антагонисти на витронектинов рецептор BG64581B1 (bg)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2732096P 1996-10-02 1996-10-02
US4377697P 1997-04-11 1997-04-11
PCT/US1997/018001 WO1998014192A1 (en) 1996-10-02 1997-10-01 Vitronectin receptor antagonists

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG103299A BG103299A (bg) 2000-01-31
BG64581B1 true BG64581B1 (bg) 2005-08-31

Family

ID=26702318

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG103299A BG64581B1 (bg) 1996-10-02 1999-03-31 Антагонисти на витронектинов рецептор

Country Status (36)

Country Link
EP (1) EP0957917B1 (bg)
JP (2) JP4491072B2 (bg)
KR (1) KR100589578B1 (bg)
CN (1) CN1114403C (bg)
AP (1) AP1463A (bg)
AR (1) AR008878A1 (bg)
AT (1) ATE312089T1 (bg)
AU (1) AU733417B2 (bg)
BG (1) BG64581B1 (bg)
BR (1) BR9712248B1 (bg)
CA (1) CA2267224C (bg)
CO (1) CO4900046A1 (bg)
CY (1) CY2576B1 (bg)
CZ (1) CZ299076B6 (bg)
DE (1) DE69734833T2 (bg)
DK (1) DK0957917T3 (bg)
DZ (1) DZ2320A1 (bg)
EA (1) EA002419B1 (bg)
ES (1) ES2252775T3 (bg)
HU (1) HU229221B1 (bg)
ID (1) ID19623A (bg)
IL (1) IL129243A (bg)
MA (1) MA24361A1 (bg)
MY (1) MY137606A (bg)
NO (1) NO320194B1 (bg)
NZ (1) NZ334953A (bg)
PE (1) PE10499A1 (bg)
PL (1) PL190859B1 (bg)
RO (1) RO119881B1 (bg)
SA (1) SA98180936B1 (bg)
SK (1) SK285029B6 (bg)
TR (1) TR199900737T2 (bg)
TW (1) TW487702B (bg)
UA (1) UA60311C2 (bg)
UY (2) UY24735A1 (bg)
WO (1) WO1998014192A1 (bg)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA60311C2 (uk) * 1996-10-02 2003-10-15 Смітклайн Бічам Корпорейшн Антагоністи рецептора вітронектину, спосіб одержання цих сполук та фармацевтична композиція
TW527355B (en) 1997-07-02 2003-04-11 Bristol Myers Squibb Co Inhibitors of farnesyl protein transferase
CA2303846A1 (en) * 1997-09-24 1999-04-01 Smithkline Beecham Corporation Vitronectin receptor antagonist
HUP0003931A2 (hu) * 1997-09-24 2001-10-28 Smithkline Beecham Corp. Vitronektin receptor antagonisták, valamint a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
US6372719B1 (en) 1998-03-04 2002-04-16 Jay Cunningham ανβ3 integrin antagonists in combination with chemotherapeutic agents
DE19842415A1 (de) * 1998-09-16 2000-03-23 Merck Patent Gmbh Pharmazeutische Zubereitung
PL350291A1 (en) * 1998-12-23 2002-12-02 Searle & Co Method of using a cyclooxygenase-2 inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
AU747503B2 (en) * 1999-02-03 2002-05-16 Merck & Co., Inc. Benzazepine derivatives as alpha-V integrin receptor antagonists
CA2372150C (en) * 1999-04-30 2011-08-30 The Regents Of The University Of Michigan Therapeutic applications of pro-apoptotic benzodiazepines
AU6523200A (en) * 1999-08-06 2001-03-05 Smithkline Beecham Corporation Vitronectin receptor antagonists useful for the treatment of strokes
US6514964B1 (en) 1999-09-27 2003-02-04 Amgen Inc. Fused cycloheptane and fused azacycloheptane compounds and their methods of use
DE10027514A1 (de) * 2000-06-06 2002-01-03 Basf Ag Liganden von Integrinrezeptoren
DE10028575A1 (de) 2000-06-14 2002-03-14 Basf Ag Integrinliganden
FR2806082B1 (fr) * 2000-03-07 2002-05-17 Adir Nouveaux composes bicycliques antagonistes des recepteurs de la vitronectine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
ATE530183T1 (de) 2001-01-29 2011-11-15 Ortho Mcneil Pharm Inc Substituierte indole und ihre verwendung als integrin-antagonisten
WO2002083125A1 (en) * 2001-04-10 2002-10-24 Smithkline Beecham Corporation Method of inhibiting adhesion formation
SE0101386D0 (sv) 2001-04-20 2001-04-20 Astrazeneca Ab New compounds
CA2445679A1 (en) 2001-05-03 2002-11-14 Paul J. Coleman Benzazepinone alpha v integrin receptor antagonists
CN100560131C (zh) 2001-10-22 2009-11-18 斯克里普斯研究学院 抗体靶向化合物
GB0215867D0 (en) * 2002-07-09 2002-08-14 Glaxosmithkline Spa Novel method and compounds
US7368566B2 (en) * 2003-04-04 2008-05-06 Smithkline Beecham Corporation Process and intermediates for preparing benzazepines
AU2012216372B2 (en) * 2004-04-02 2015-01-22 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for treating and preventing disease associated with alphaVbeta5 integrin
EP1734996B1 (en) * 2004-04-02 2013-05-22 The Regents of The University of California Methods and compositions for treating and preventing disease associated with alpha v beta 5 integrin
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
JP2008524334A (ja) * 2004-12-21 2008-07-10 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 方法および処方
BRPI0619057A2 (pt) * 2005-11-29 2011-09-20 Smithkline Beecham Corp formulação farmacêutica de uso tópico, uso de um ou mais compostos, e, compostos
EP2730282A1 (en) 2007-11-08 2014-05-14 The General Hospital Corporation Methods and compositions for the treatment of proteinuric diseases
JP5359879B2 (ja) * 2007-11-16 2013-12-04 宇部興産株式会社 ベンズアゼピノン化合物
WO2009111679A2 (en) * 2008-03-06 2009-09-11 Smithkline Beecham Corporation Process
JP2012517447A (ja) 2009-02-10 2012-08-02 ザ スクリプス リサーチ インスティチュート 化学的にプログラムされたワクチン接種法
CA2757396A1 (en) 2009-03-30 2010-10-07 Ube Industries, Ltd. Medical composition for treatment or prophylaxis of eye diseases
JP5572996B2 (ja) * 2009-05-15 2014-08-20 宇部興産株式会社 ベンズアゼピノン化合物を有効成分として含有する医薬
US10087252B2 (en) 2009-07-24 2018-10-02 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for treating and preventing disease associated with αvβ5 integrin
AU2010322286B2 (en) 2009-11-17 2014-06-05 The Regents Of The University Of Michigan 1,4-benzodiazepine-2,5-diones and related compounds with therapeutic properties
EP2325194A1 (en) * 2009-11-24 2011-05-25 Glycotope GmbH Process for the purification of glycoproteins
MX2016015467A (es) 2014-05-30 2017-03-23 Pfizer Derivados de carbonitrilo como moduladores selectivos del receptor de androgenos.
JP7693709B2 (ja) * 2020-04-26 2025-06-17 ジャンスー・エンファ・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッド １，５－ジヒドロ－２，４－ベンゾジアゼピン－３－オン誘導体及びその使用
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1994014776A2 (en) * 1992-12-21 1994-07-07 Smithkline Beecham Corporation Bicyclic fibrinogen antagonists
NZ290008A (en) * 1994-06-29 1998-08-26 Smithkline Beecham Corp Vitronectin receptor antagonists, comprising a fibrinogen antagonist analogue linked to a heterocycle
ZA955391B (en) * 1994-06-29 1996-02-09 Smithkline Beecham Corp Vitronectin receptor antagonists
EP0777657A1 (en) * 1994-08-22 1997-06-11 Smithkline Beecham Corporation Bicyclic compounds
WO1996026190A1 (en) * 1995-02-22 1996-08-29 Smithkline Beecham Corporation Integrin receptor antagonists
UA60311C2 (uk) * 1996-10-02 2003-10-15 Смітклайн Бічам Корпорейшн Антагоністи рецептора вітронектину, спосіб одержання цих сполук та фармацевтична композиція

Also Published As

Publication number Publication date
CN1238689A (zh) 1999-12-15
DZ2320A1 (fr) 2002-12-28
DE69734833D1 (de) 2006-01-12
WO1998014192A1 (en) 1998-04-09
NO320194B1 (no) 2005-11-14
ATE312089T1 (de) 2005-12-15
ES2252775T3 (es) 2006-05-16
JP4491072B2 (ja) 2010-06-30
ID19623A (id) 1998-07-23
HUP9903769A3 (en) 2000-07-28
EA002419B1 (ru) 2002-04-25
UA60311C2 (uk) 2003-10-15
AP1463A (en) 2005-09-10
NO991590D0 (no) 1999-03-31
SK285029B6 (sk) 2006-04-06
KR100589578B1 (ko) 2006-06-15
EP0957917A1 (en) 1999-11-24
RO119881B1 (ro) 2005-05-30
AU733417B2 (en) 2001-05-17
NZ334953A (en) 2000-01-28
AU4746297A (en) 1998-04-24
SK42599A3 (en) 1999-12-10
BG103299A (bg) 2000-01-31
IL129243A0 (en) 2000-02-17
SA98180936B1 (ar) 2006-05-30
CO4900046A1 (es) 2000-03-27
PE10499A1 (es) 1999-03-27
BR9712248A (pt) 1999-08-24
PL332674A1 (en) 1999-09-27
JP2001501936A (ja) 2001-02-13
MA24361A1 (fr) 1998-07-01
HU229221B1 (en) 2013-09-30
JP2010006838A (ja) 2010-01-14
EA199900356A1 (ru) 2000-02-28
EP0957917A4 (en) 2002-05-15
NO991590L (no) 1999-05-31
UY24735A1 (es) 1998-03-30
CA2267224A1 (en) 1998-04-09
CN1114403C (zh) 2003-07-16
IL129243A (en) 2004-07-25
CA2267224C (en) 2007-03-13
EP0957917B1 (en) 2005-12-07
DK0957917T3 (da) 2006-04-18
MY137606A (en) 2009-02-27
AR008878A1 (es) 2000-02-23
TR199900737T2 (xx) 1999-07-21
PL190859B1 (pl) 2006-02-28
CZ299076B6 (cs) 2008-04-16
CY2576B1 (en) 2008-07-02
HUP9903769A2 (hu) 2000-03-28
DE69734833T2 (de) 2006-07-13
TW487702B (en) 2002-05-21
AP9901493A0 (en) 1999-03-31
HK1023730A1 (en) 2000-09-22
KR20000048816A (ko) 2000-07-25
CZ113299A3 (cs) 2000-03-15
UY24935A1 (es) 2001-07-31
BR9712248B1 (pt) 2010-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG64581B1 (bg) Антагонисти на витронектинов рецептор
US6239138B1 (en) Vitronectin receptor antagonist
AU9577498A (en) Vitronectin receptor antagonist
AU9578798A (en) Vitronectin receptor antagonist
WO1999015508A1 (en) Vitronectin receptor antagonists
US6825188B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
US6458814B1 (en) Vitronectin receptor antagonists
US20020019387A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
US20020128257A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
US6576643B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
HK1023730B (en) Vitronectin receptor antagonists
MXPA00002896A (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA00002895A (en) Vitronectin receptor antagonist