NO162160B - Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. - Google Patents
Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. Download PDFInfo
- Publication number
- NO162160B NO162160B NO870095A NO870095A NO162160B NO 162160 B NO162160 B NO 162160B NO 870095 A NO870095 A NO 870095A NO 870095 A NO870095 A NO 870095A NO 162160 B NO162160 B NO 162160B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- serum
- growth medium
- medium according
- free growth
- concentration
- Prior art date
Links
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- GIXWDMTZECRIJT-UHFFFAOYSA-N aurintricarboxylic acid Chemical compound C1=CC(=O)C(C(=O)O)=CC1=C(C=1C=C(C(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 GIXWDMTZECRIJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 9
- 239000013522 chelant Substances 0.000 claims abstract 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims 2
- -1 Na-pyruvate Chemical compound 0.000 claims 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 13
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 abstract description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 27
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 20
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 7
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 4
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 3
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- FZIPCQLKPTZZIM-UHFFFAOYSA-N 2-oxidanylpropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O FZIPCQLKPTZZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- OEUUFNIKLCFNLN-LLVKDONJSA-N chembl432481 Chemical compound OC(=O)[C@@]1(C)CSC(C=2C(=CC(O)=CC=2)O)=N1 OEUUFNIKLCFNLN-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010237 hybrid technique Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000006175 metal-ion buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0037—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
- C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/20—Transition metals
- C12N2500/24—Iron; Fe chelators; Transferrin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse omfatter serumfritt medium som er
av en slik sammensetning som er angitt i krav 1, og som kan anvendes ved dyrking av celler som krever jern i vekstmediet. Oppfinnelsen kan brukes til å teste kvaliteten av andre vekstmedier i tillegg til at det muliggjør dyrking av celler i medium fri for serum.
Det har innenfor industri og forskning lenge vært et stort behov for serumfrie medier og vekstkulturer idet tilføringen av serum til slike medier gir oppløsningene, i tillegg til de stoffer som er nødvendige for celleveksten, også stoffer som innvirker uheldig på de fleste forsøk hvor nøyaktihet av resultatene er av stor betydning. Dette gjelder innenfor disipliner som cellulær immunologi, bioteknologi, "in vitro" fertilisering, organtransplantasjoner, kreftforskning og ved lagring og overføring av blod.
De medier og fysiologiske løsninger som idag benyttes i forskning, industri og ved klinisk arbeid baserer seg på inntil 100 år gamle resepter, og representerer således et "stand-still" i dette område av den biologiske forskning. De hittil anvendte media for cellekulturer består oftest av et såkalt "kommersielt basalmedium" som er tilsatt ca. 10% varmeinaktivert serum. Denne meget gamle metoden innebefatter følgende ulemper: 1) Varmebehandling som må til for å hindre serumets lytiske effekt på celler virker denaturerende på
viktige serum-komponenter.
2) Forskjellige serum-leveranser har forskjellige egenskaper ut fra deres oppfinnelse, noe som innfører uønskede variasjoner i cellekulturens oppførsel "in
vitro".
3) Serum inneholder mange ukjente stoffer med ukjent og ukontrollert innvirkning på celler. 4) Serum er en ufysiologisk væske for de aller fleste
celler idet cellene er tilpasset såkalte vevsvæsken i kroppen idet denne har et annet innhold av forskjellige stoffer enn
serum.
5) Antistoffer i serum kan binde seg til celler og innvirke på eksperimenter. 6) Serum hindrer studium av cellers syntese av serumfaktorer "in vitro" idet "bakgrunnsnivået" i serum for slike faktorer er såvidt høyt.
Ved anvendelse av det serumfrie medium ifølge oppfinnelsen og som inneholder de komponenter som er angitt i krav l's karakteriserende del, unngås de ovenfor angitte ulemper, og et slikt medium vil i tillegg være meget godt anvendelig for dyrkning og oppbevaring av celler og vev "in vitro". Dess- uten vil det fullstendige medium ifølge oppfinnelsen være nøyaktig definert, være serumfritt, proteinfritt bortsett fra evt. små mengder av et polypeptid sam f.eks. insulin som kreves av enkelte celler og som kan benyttes hvor dette er nødvendig, inneholde jern og sporelementer sam stabiliserte, chelaterte forbindelser uten transferrin og intet albumin eller lipid er tilstede. Mediet ifølge foreliggende oppfinnelse er også meget billig å produsere.
Hovedproblemet ved tidligere serum-fri definerte medium (se N.N. Iscove og F. Melchers, "Complete Replaoement of Serum by Albumin, Transferrin, and Soybean Lipid in cultures of Lipopolysaccharide-reactive B Lympho-cytes", J.Exp. Med., Vol. 147, s. 923-933 (1978); R.G.Ham, "Importance of the Basal Nutrient Medium in the Design of Hormonally Defined Media, Cold Spring Harbor Conference on Cell Proliferation, Vol.9, s.39-60 (1982); D.Barnes og G.Sato "Methods for Growth of Cultured Cells in Serum-Free Medium" Anal. Biochem. 102, s. 255-270 (1980) er at de ikke er lempelige ved anvendelse på en tilfeldig valgt cellekultur på grunn av to omstend-igheter: 1) Tilstedværelsen av fysiologiske megder bikarbonat og Ca<2+>/Mg<2+->ioner vil utfelle jern og trivalente sprometaller fra nesten ethvert kjent chelatorsystem ved 37'C og pH 7-8 (bortsett fra transferrin). Denne slutning stammer fra Søkers personlige arbeid (ikke publisert). 2) Konsentrasjonen av spormetaller innebefattende toksiske stoffer i et medium, er ikke kontrollert og vil variere meget avhengig av sammensetn-ingen og de individuelle egenskaper til vann og forurensninger. Det eneste løsningen på dette problem er å fremskaffe en fullstendig stabil metallionbuffer som omfatter en balansert oppløsning av alle de nødvendige spormetaller, og således blir toksiske metaller absorbert i bufferen (den toksiske effekt blir balansert bort).
Idet transferrin er kostbart og spesifikt for hvert dyre-slag, ble mediet ifølge oppfinnelsen dannet, basert på en Fe/ sporelement-buffer av syntetiske ikke-protein chelatorer og hvor hovedproblemet, utfelling av metaller ved 37°C (se ovenfor) , bl.e løst ved tilsetning av bestemte chelatorer som i blanding har svært forskjellige og unike egenskaper sammenlignet med hver chelator alene.
Det andre problemet, nemlig presentasjon av jem til cellemembranen
og cellen, ble løst ved tilsetning av aurintrikarboksylsyre til mediet. Selv cm EDTA/citrat gjør en metalloppløsning fullstendig stabil, vil forskjellige animalske og humane celler ikke vokse på
grunn av jemmangel. Det er funnet at kombinasjonen EDTA/citrat/ aurintrikarboksylsyre gir enestående chelaterende cg jempresenterende egenskaper sam tidligere ikke er beskrevet. (I denne forbindelse bør det ikke være av betydning at EDTA alene tidligere har blitt birukt sam jern-chelator for vekst av planteceller ved pH 5,0 under betingelser hvor metallutfelling ikke representerer noe problem; se P.Kruse og M.K.Petterson,"Tissue Culture Methods and Applications", Acad.Press
(19873); J.R.Stein,"Handbook of Phycological Metods", Cambridge University Press (1973).)
I forhold til cellevekst er det funnet at et blandings-forhold mellom EDTA og sitronsyre (citrat) på 1:3 var mest fordelaktig. Det skal også kort nevnes at cellevekst i medier vanligvis foregår ved pH 7,4, men at pH i det endelige medium ifølge foreliggende oppfinnelse også kan være forskjellig fra dette, avhengig av de enkelte cellers vekstkrav. pH for det serumfrie vekstmedium ifølge oppfinnelsen vil generelt ligge innenfor 7,0-7,8.
Vekstmedium ifø?ge oppfinnelsen kan fremskaffes eksempelvis ved å tilsette en konsentrert oppløsning av de enkelte bestanddeler til rent vann (det er av stor viktighet å benytte vann av størst mulig renhet, som f.eks. Travenol® sterilt vann, ved fremstilling av mediet ifølge oppfinnelsen. Et eksempel på en slik konsentrert blanding er gitt nedenfor, hvor det fremstilles en blanding som kan benyttes i luuu x konsentrasjon:
pH i blandingen justeres fortrinnsvis til 4,5 - 5,0.
Eventuell tilsetning av spormetaller kan eksempelvis bli foretatt ved hjelp av en stamløsning som kan fremstilles som følger. Den angitte løsning vil ha 100 000 ganger konsentrasjon av det som anvendes i mediet. Ved dannelse av oppløsningen angitt nedenfor, bør Zn, Cu og chelatorer (EDTA og citrat) tilsettes før justering av pH til 5,0 med 5 - 10 N NaOH, hvoretter de ytterligere komponenter tilsettes. Den endelige pH bør ligge mellom 4,0 og 4,5. Det er selvfølgelig underforstått at en slik blanding av sporelementer kan inneholde andre elementer enn dem som er angitt i tabellen ovenfor, avhengig av de krav som stilles av de anvendte vevs- og celletyper. j
Mediet ifølge foreliggende oppfinnelse kan, i tillegg til
de bestanddeler som tidligere er angitt, også inneholde vekstfremmende og nødvendige forbindelser for cellevekst. Slike forbindelser kan omfatte f.eks. det o/erflateaktive middel Pluronic F6&<®> (20 mg/l), D-glukose (2,5 g/l), L-glutamin (2 mM), Na-pyruvat (1 mM), Insulin (0,5 mg/l) eller etanolamin (20 uM) . Alle i parantes angitte konsentrasjoner refererer seg til slutt-konsentrasjoner.
En tilsetningsblanding av de angitte forbindelser (med unntak av etanolamin som er flytende ved romtemperatur)
kan fremstilles som tørr-produkt, og som sådan kan dette lagres over lang tid, opp til flere år. Etanolamin kan om nødvendig tilsettes mediet i den ønskede konsentrasjon ved anvendelse av blandingen. Etanolamin brukes som oftest ved forsøk med hybridomceller under fremstilling av monoklonale antistoff.
Et foretrukket basalmedium hvori medietilsetningen ifølge foreliggende oppfinnelse kan tilsettes, er RPMI 1640 w/
2,5 g/l NaHC03 og 20 mM HEPES (N-2-hydroksyetylpiperazin-N-N'-2-etansulfonsyre).
Foretrukne cellekulturer hvor det serumfri mediet ifølge foreliggende oppfinnelse har vist seg spesiellt anvendelig er med L 929 muse fibroblast cellelinje, HELA human tumor cellelinje, forskjellige muse- og humane B hybridomceller, som alle danner monoklonale antistoff i mengder som tilsvarer vekst i serum-inneholdende kulturer og humane monocytter som differensierer til utviklede makrofager i løpet av 7 dager under opprettholdelse av sine komplement-reseptorer. En spesielt foretrukket anvendelse av foreliggende oppfinnelse utføres med hurtigvoksende celletyper for kvali-tetsprøving av andre typer medier. Ved å blande den serumfrie medietilsetning ifølge oppfinnelsen med PRMI 1640 og tilsette mediet som skal undersøkes i forholdet serumfri medietilsetning + RPMI 1640 : ukjent medium= 1 : 1, og deretter tilsette de hurtigvoksende celler i et antall på
ca. 30 000 celler/ml, vil det uten toksiske forbindelser tilstede i mediet som skal undersøkes kunne observeres en økning i celleantallet etter 4 dager på ca. 10 ganger flere celler enn det opprinnelige antallet. Dersom toksiske, forbindelser derimot er tilstede i det ukjente mediet, vil det ikke observeres cellevekst. Dette omfatter således en meget enkel kvalitetstest som er ekstremt følsom fordi den foretas uten serum, og falske resultater unngås fordi en unngår at serum binder og maskerer toksiske urenheter.
En spesiell type hurtigvoksende celler er en hybridom celletype laget ved fusjon av ^ 2^ 1 tumor med muse B-lymfocytter. Denne hybridom celletype er deponert hos European Collection of Animal Cell Cultures, ECACC, Storbritannia, 20 november 1986, ECACC 86112001. Denne cellelinje har vist seg spesielt anvendelig ved kvalitetstesting av andre vekstmedier som angitt ovenfor.
Den deponerte cellelinje ble fremstilt i henhold til myeloma hybrid teknikken introdusert av Kohler G. og Milstein C., 1975 i Nature (London) 256, 495.
Utgangscellene var ^ 2^ 1 meyloma og Balb/c B-lymfocytter, alle typer fra mus.
Hybridomceller er kjent for sine krav til mediumskvalitet. Cellelinjen 1E6 ble valgt ut som den raskeste voksende hybridom av 20 undersøkte linjer. Linjen ble brukt i et eksperimentelt overvåkningsforsøk av forskjellige kommersielt tilgjengelige media fra velkjente
forhandlere. Kun to av ni undersøkte medier ble funnet
å være av akseptabel kvalitet. Seks andre medier viste 60 - 100 % cytotoksisitet. Den serum-frie hybridom-
test er mer sensitiv enn andre bio-assays som innebefatter tilsetning av serum (detoksifiserende effekt) under dyrkning.
Foreliggende oppfinnelse kan også bli brukt for å identi-fisere toksisiteten til potensielt toksiske substanser ved å undersøke deres effekt på veksten av lE6-celler ifølge oppfinnelsen sammen med det serum-frie medium.
Kvaliteten av vekst-medier ble undersøkt i et sammen-ligningsforsøk med muse-embryo-testen. Muse-embryo-testen omfatter at to in vivo befruktede museembryoer dyrkes 4-5 dager i medium-prøvene. Dersom mer enn 80%
av embryoene utvikler seg til blastocytter, kan mediet aksepteres.
Celle-kultur-forsøket omfatter hybridom cellelinjen 1E6 og RPMI-16.4 0/SSR medium (RPMI/SSR) . Forsøket ble utført i henhold til følgende trinn:
Trinn 1: Bland RPMI/SSR og undersøk mediumprøven
1:1 (uten serum).
Trinn 2: Tilsett hybridomceller ved 1,5 x 10 celler/ml,
inkubér 4 dager.
Trinn 3: Tell cellene. Dersom ingen toksiske substanser er tilstede, bør tellingen være ca. 3 x IO<5 >celler/ml.
I et forsøk for å undersøke toksisiteten av lidokain, ble forbindelsen undersøkt for inhibering av cellevekst på cellelinjen 1E6. Resultatene er gitt nedenfor.
Det kan sluttes fra forsøkene at lidokain i en konsentrasjon på 0,01 mg/ml eller høyere ble funnet å være toksisk. Ingen toksisitet ble funnet ved must-embryo-testen.
Dette viser at testen som benytter hybridom og vekstmedium ifølge oppfinnelsen, er overlegen enhver test som vanligvis foretas idag.
Det kan også konkluderes at muse-embryo-testen er meget insensitiv sammenlignet med celle-hybridom-testen.
LIDOKAIN TOKSISITETSTEST
MEDIUMKVALITETSTEST.
Flytende medium (lx)
Pulverformig medium + vann VANNKVALITETSTEST.
Vekstmediet ifølge foreliggende oppfinnelse sammen med nevnte hurtigvoksende hybridom celletype kan således inne-befattes i et test-kit omfattende f.eks. serumserstatningen ifølge oppfinnelsen, nedfrosne celler (f.eks. på tørris) samt eventuelt medium (RPMI 1640) og kulturutstyr av plast eller annet egnet materiale.
Claims (11)
1. Serumfritt vekstmedium bestående av et basalmedium for cellekulturer, såsom RPMI 1640/HEPES/NaHCO3, samt eventuelt sporstoffelementer som er nødvendige for cellevekst, såsom Zn, Cu, Mn, Ni, Al, Cr, Co og/eller Se,
hvilket vekstmedium er bufret i et pH-område innenfor 7,0-7,8, karakterisert ved at vekstmediet ytterligere består av et ikke-toksisk jernchelat hvori jern foreligger i konsentrasjonsområdet 1-10 uM, samt et overskudd av en eller fler i og for seg kjente, ikke-toksiske chelatorer og sitronsyre/citrat i en konsentrasjon som er minst tre ganger så stor som den totale konsentrasjon av chelator, samt aurintrikarboksylsyre i konsentrasjonsområdet 0,5-6 uM.
2. Serumfritt vekstmedium ifølge krav 1, karakterisert ved at aurintrikarboksylsyren foreligger i et konsentrasjonsintervall på 2,4 - 3,6 uM.
3. Serumfritt vekstmedium ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at eventuelle sporstoffelementer foreligger i en mengde slik at konsentrasjonen av chelator/chelatorblanding er 300 - 300000 ganger større enn konsentrasjonen av de enkelte sporstoffelementer.
4. Serumfritt vekstmedium ifølge kravene 1-3, karakterisert ved at det inneholder ett eller flere overflateaktive midler.
5. Serumfritt vekstmedium ifølge ethvert av kravene 1-3, karakterisert ved at det inneholder ytterligere vekstfaktorer såsom D-glukose, L-glutamin, Na-pyruvat, insulin og etanolamin.
6. Serumfritt vekstmedium ifølge krav 5, karakterisert ved at det ytterligere inneholder vekst
faktorer såsom vitaminer og ikke-proteiniske hormoner.
7. Serumfritt vekstmedium ifølge kravene 1-6, karakterisert ved at det inneholder et basalmedium med konsentrasjonene 2,5 g/l NaHCO^ og 20 mM HEPES.
8. Serumfritt vekstmedium ifølge kravene 1-7, karakterisert ved at at den anvendte chelator er EDTA.
9. Konsentrat av serumfritt vekstmedium for anvendelse til fremstilling av vandig serumfritt vekstmedium ifølge kravene 1-6, karakterisert ved at det består av'et konsentrat av de enkelte bestanddeler, fortrinnsvis 1000 gangers konsentrat bestående av 2,4 - 3,6 mM Fe-EDTA og 0,2 - 1,2 mM Na2~EDTA samt 32 - 48 mM sitronsyre/citrat, 0,5 - 6 mM, fortrinnsvis 2,4 - 3,6 mM aurintrikarboksylsyre, samt eventuelt metallioner innenfor konsentrasjonsintervallene 0,08 - 0,12 mM Zn<2+>, 0,016 - 0,024 mM Cu<2+>, 0,0008 - 0,0012 mM Mn<2+>, 0,00016 - 0,00024 mM Ni2+, 0,0016 - 0,0024 mM Al3+, 0,0008 - 0,0012 mM Cr<3+>, 0,00016 - 0,00024 mM Co<2+> og 0,008 - 0,012 mM Se<4+>, hvilken blanding bufrer i pH-området 4,5 - 5,0.
10. Konsentrat av serumfritt vekstmedium ifølge krav 9, karakterisert ved at det foreligger som tørrstoffblanding.
11. Anvendelse av serumfritt vekstmedium ifølge kravene 1-7 for undersøkelse av vekstmediumkvalitet, fortrinnsvis ved bruk av cellelinjen ECACC 86112001, deponert ved The European Collection for Animal Cell Cultures den 20. november 1986.
Priority Applications (18)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO870095A NO162160C (no) | 1987-01-09 | 1987-01-09 | Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. |
| DK678687A DK169765B1 (da) | 1987-01-09 | 1987-12-22 | Serumfrit vækstmedium-additiv, koncentrat af dette, disses anvendelse ved kvalitetskontrol af fulde vækstmedier samt hydridomacellelinje til anvendelse hermed |
| KR1019870014892A KR880009124A (ko) | 1987-01-09 | 1987-12-24 | 혈청비함유 배지 및 그 용도 |
| FI875793A FI87230C (fi) | 1987-01-09 | 1987-12-31 | Serumfritt vaextmedium och dess anvaendning |
| IL8502688A IL85026A (en) | 1987-01-09 | 1988-01-05 | Serum-free growth medium comprising an iron-chelate and an aurin tricarboxylic acid and use thereof |
| AU10115/88A AU596491B2 (en) | 1987-01-09 | 1988-01-07 | Serum-free growth medium and use thereof |
| BR8800040A BR8800040A (pt) | 1987-01-09 | 1988-01-07 | Meio de crescimento isento de soro,linhagem de celula e uso do meio |
| EP19880300121 EP0274445B1 (en) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | A serum-free growth medium additive and a use thereof |
| JP236888A JPH0697996B2 (ja) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | 無血清増殖培地 |
| CA 556106 CA1321961C (en) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | Serum-free growth medium and use thereof |
| ES8800030A ES2008411A6 (es) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | Medio de crecimiento exento de suero y su uso. |
| NZ22313988A NZ223139A (en) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | Serum - free cell line culture medium |
| DE88300121T DE3882540T2 (de) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | Serumfreie Kulturmittelzutat und ihre Verwendung. |
| IT1902488A IT1215675B (it) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | E suo uso. terreno di coltura esente da siero |
| AT88300121T ATE92098T1 (de) | 1987-01-09 | 1988-01-08 | Serumfreie kulturmittelzutat und ihre verwendung. |
| US07/142,069 US5045467A (en) | 1987-01-09 | 1988-01-11 | Serum-free growth medium and use thereof |
| US07/484,557 US5045454A (en) | 1987-01-09 | 1990-02-23 | Serum-free growth medium and use thereof |
| JP5256094A JP2524313B2 (ja) | 1987-01-09 | 1994-02-28 | 新規な細胞株及びこれを用いる供試培地の品質試験方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO870095A NO162160C (no) | 1987-01-09 | 1987-01-09 | Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO870095D0 NO870095D0 (no) | 1987-01-09 |
| NO870095L NO870095L (no) | 1988-07-11 |
| NO162160B true NO162160B (no) | 1989-08-07 |
| NO162160C NO162160C (no) | 1989-11-15 |
Family
ID=19889567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO870095A NO162160C (no) | 1987-01-09 | 1987-01-09 | Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5045467A (no) |
| EP (1) | EP0274445B1 (no) |
| JP (2) | JPH0697996B2 (no) |
| KR (1) | KR880009124A (no) |
| AT (1) | ATE92098T1 (no) |
| AU (1) | AU596491B2 (no) |
| BR (1) | BR8800040A (no) |
| CA (1) | CA1321961C (no) |
| DE (1) | DE3882540T2 (no) |
| DK (1) | DK169765B1 (no) |
| ES (1) | ES2008411A6 (no) |
| FI (1) | FI87230C (no) |
| IL (1) | IL85026A (no) |
| IT (1) | IT1215675B (no) |
| NO (1) | NO162160C (no) |
| NZ (1) | NZ223139A (no) |
Families Citing this family (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1307486C (en) * | 1987-10-29 | 1992-09-15 | Michael T. Largen | Hybridoma production |
| SE8801537D0 (sv) * | 1988-04-26 | 1988-04-26 | Ellco Food Ab | Cellodlingsmedium samt forfarande for dess framstellning |
| JPH03180175A (ja) * | 1989-12-07 | 1991-08-06 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 無血清培地 |
| US5378612A (en) * | 1990-05-11 | 1995-01-03 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Culture medium for production of recombinant protein |
| WO1993000423A1 (en) * | 1991-06-21 | 1993-01-07 | Novo Nordisk A/S | Iron chelate culture medium additive |
| GB9215834D0 (en) * | 1992-07-24 | 1992-09-09 | Celltech Ltd | Cell culture |
| DE4313620A1 (de) * | 1993-04-26 | 1994-10-27 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung |
| US5434185A (en) * | 1993-05-17 | 1995-07-18 | The University Of Kentucky Research Foundation | Method for inhibiting angiogenesis with aurintricarboxylic acid, its analogues or salts |
| US5405772A (en) * | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
| US5846529A (en) * | 1993-08-23 | 1998-12-08 | Nexell Therapeutics, Inc. | Infusion of neutrophil precursors for treatment of neutropenia |
| US6037174A (en) * | 1993-08-23 | 2000-03-14 | Nexell Therapeutics, Inc. | Preparation of serum-free suspensions of human hematopoietic cells or precursor cells |
| US5395822A (en) * | 1993-09-20 | 1995-03-07 | Izumi; Yukitoshi | Use of pyruvate to prevent neuronal degeneration associated with ischemia |
| US5593880A (en) * | 1994-02-10 | 1997-01-14 | Viratest International, Inc. | Dual-state nutritional medium for the transport and maintenance of cells |
| US5908782A (en) * | 1995-06-05 | 1999-06-01 | Osiris Therapeutics, Inc. | Chemically defined medium for human mesenchymal stem cells |
| CA2248142A1 (en) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Life Technologies, Inc. | Hematopoietic cell culture nutrient supplement |
| US6043092A (en) * | 1996-03-18 | 2000-03-28 | University Of Pittsburgh | Cell culture media for mammalian cells |
| US6511848B2 (en) * | 1996-04-17 | 2003-01-28 | Winfried Albert | Process for producing and multiplying lymphocytes |
| AU4330597A (en) * | 1996-08-30 | 1998-03-19 | Life Technologies, Inc. | Serum-free mammalian cell culture medium, and uses thereof |
| US6833271B2 (en) * | 1996-12-04 | 2004-12-21 | Medi-Cult A/S | Serum-free cell culture media |
| GB9625175D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Medi Cult As | Serum-free cell culture media |
| US5804420A (en) * | 1997-04-18 | 1998-09-08 | Bayer Corporation | Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium |
| WO2000047040A1 (en) * | 1999-02-11 | 2000-08-17 | The Schepens Eye Research Institute, Inc. | Growth medium for human corneal endothelial cells |
| DE60037819T2 (de) * | 1999-08-27 | 2009-01-08 | Invitrogen Corp., Carlsbad | Metallbindende verbindungen und deren verwendung in zusammensetzungen für zellkulturmedien |
| US6767741B1 (en) * | 1999-08-27 | 2004-07-27 | Invitrogen Corporation | Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions |
| GB0003231D0 (en) * | 2000-02-11 | 2000-04-05 | Medi Cult As | Cell culture media |
| US20030096414A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-05-22 | Invitrogen Corporation | Culture medium for cell growth and transfection |
| AU2002310321A1 (en) * | 2001-06-04 | 2002-12-16 | Corixa Corporation | Compositions and methods for high-level, large-scale production of recombinant proteins |
| US7087369B2 (en) * | 2003-12-17 | 2006-08-08 | The Regents Of The University Of California | Cornea preservation medium |
| US20080096800A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-24 | Biodel, Inc. | Rapid mucosal gel or film insulin compositions |
| US20080085298A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-10 | Biodel, Inc. | Rapid Mucosal Gel or Film Insulin Compositions |
| US20080090753A1 (en) | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
| US8273553B2 (en) | 2004-11-02 | 2012-09-25 | Ares Trading S.A. | Production of growth hormone in serum-free cell culture medium for mammalian cells |
| SI1807504T1 (sl) | 2004-11-02 | 2011-05-31 | Ares Trading Sa | Brezserumski celiäśni kultivacijski medij za celice sesalcev |
| DK2368975T3 (en) | 2004-12-23 | 2015-01-05 | Medimmune Llc | Non-tumorigenic MDCK cell line for the propagation of viruses |
| JP4944112B2 (ja) | 2005-08-26 | 2012-05-30 | アレス トレーディング ソシエテ アノニム | グリコシル化されたインターフェロンベータの調製方法 |
| WO2007080919A1 (ja) | 2006-01-13 | 2007-07-19 | Japan Science And Technology Agency | 動物細胞を無血清培養するための培地用添加剤、キット及びこれらの利用 |
| PT2495307T (pt) * | 2006-07-13 | 2018-05-10 | Wyeth Llc | Produção do fator ix de coagulação com padrão melhorado de glicosilação |
| AU2007347716B2 (en) | 2006-09-15 | 2013-06-20 | Medimmune, Llc | MDCK cell lines supporting viral growth to high titers and bioreactor process using the same |
| US8361741B2 (en) | 2007-08-29 | 2013-01-29 | Millipore Corporation | Serum-free growth medium for Acholeplasma laidlawii and methods for retention testing sterilizing grade filters |
| CA2738024A1 (en) | 2008-09-24 | 2010-04-01 | Medimmune, Llc | Methods for purification of viruses |
| JP5660572B2 (ja) * | 2008-11-11 | 2015-01-28 | 国立大学法人広島大学 | 分化誘導培地用添加剤およびその利用 |
| US9060927B2 (en) | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
| DK2545928T3 (en) | 2010-03-10 | 2016-10-03 | Two Cells Co Ltd | CELL PREPARATION CONTAINING MESENYKYMAL STEM CELLS AND METHOD OF PRODUCING THEREOF |
| CN109370980B (zh) | 2012-05-02 | 2023-05-09 | 生命技术公司 | 高产量瞬时表达系统 |
| CA2942770A1 (en) * | 2014-03-23 | 2015-10-01 | Advantech Bioscience Farmaceutica Ltda. | Enhancement of recombinant protein expression with copper |
| TW201630622A (zh) | 2014-12-16 | 2016-09-01 | 美國禮來大藥廠 | 速效胰島素組合物 |
| US10119117B2 (en) | 2016-01-28 | 2018-11-06 | Nanogen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd | Universal, glycosylation enhancer, completely chemically defined medium formulation |
| US20200377918A1 (en) * | 2017-03-31 | 2020-12-03 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Perfusion medium |
| CN110835622B (zh) * | 2018-08-16 | 2021-04-27 | 上海药明生物技术有限公司 | 用于调节哺乳动物细胞乳酸代谢的培养基及其应用 |
| WO2025033487A1 (ja) * | 2023-08-09 | 2025-02-13 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 血清または血清代替物の品質管理方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4466917A (en) * | 1981-02-12 | 1984-08-21 | New York University | Malaria vaccine |
| US4544632A (en) * | 1981-06-12 | 1985-10-01 | Yuichi Yamamura | Human T cell lines and method of producing same |
| IL74298A (en) * | 1982-05-13 | 1985-09-29 | Israel State | Material obtainable from"green islands"for the prevention of virus replication in plants,its isolation and its use for plant immunization |
| US4604284A (en) * | 1983-09-20 | 1986-08-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Homogeneous immune interferon fragment |
| EP0156169B1 (en) * | 1984-02-29 | 1991-12-18 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | An aqueous solution of a tissue plasminogen activator dissolved therein at an increased concentration and a method |
| JPS6158584A (ja) * | 1984-08-30 | 1986-03-25 | Ube Ind Ltd | 細胞増殖促進剤及び細胞増殖促進方法 |
| JP2967117B2 (ja) * | 1989-03-14 | 1999-10-25 | 旭化成工業株式会社 | 電子線硬化型導電性ペースト組成物 |
-
1987
- 1987-01-09 NO NO870095A patent/NO162160C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-12-22 DK DK678687A patent/DK169765B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-12-24 KR KR1019870014892A patent/KR880009124A/ko not_active Ceased
- 1987-12-31 FI FI875793A patent/FI87230C/fi not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-01-05 IL IL8502688A patent/IL85026A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-07 AU AU10115/88A patent/AU596491B2/en not_active Ceased
- 1988-01-07 BR BR8800040A patent/BR8800040A/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-01-08 JP JP236888A patent/JPH0697996B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-01-08 CA CA 556106 patent/CA1321961C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-01-08 IT IT1902488A patent/IT1215675B/it active
- 1988-01-08 EP EP19880300121 patent/EP0274445B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-08 ES ES8800030A patent/ES2008411A6/es not_active Expired
- 1988-01-08 DE DE88300121T patent/DE3882540T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-08 NZ NZ22313988A patent/NZ223139A/xx unknown
- 1988-01-08 AT AT88300121T patent/ATE92098T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-11 US US07/142,069 patent/US5045467A/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-02-23 US US07/484,557 patent/US5045454A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-02-28 JP JP5256094A patent/JP2524313B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0274445A2 (en) | 1988-07-13 |
| NO870095D0 (no) | 1987-01-09 |
| DK169765B1 (da) | 1995-02-20 |
| DE3882540T2 (de) | 1993-11-18 |
| JPH06292570A (ja) | 1994-10-21 |
| US5045467A (en) | 1991-09-03 |
| CA1321961C (en) | 1993-09-07 |
| IL85026A0 (en) | 1988-06-30 |
| DE3882540D1 (de) | 1993-09-02 |
| IT1215675B (it) | 1990-02-22 |
| KR880009124A (ko) | 1988-09-14 |
| IT8819024A0 (it) | 1988-01-08 |
| JPH0697996B2 (ja) | 1994-12-07 |
| ATE92098T1 (de) | 1993-08-15 |
| NO870095L (no) | 1988-07-11 |
| EP0274445A3 (en) | 1989-12-13 |
| US5045454A (en) | 1991-09-03 |
| ES2008411A6 (es) | 1989-07-16 |
| FI875793A0 (fi) | 1987-12-31 |
| FI87230C (fi) | 1992-12-10 |
| NZ223139A (en) | 1991-09-25 |
| DK678687A (da) | 1988-07-10 |
| JPS63279786A (ja) | 1988-11-16 |
| EP0274445B1 (en) | 1993-07-28 |
| JP2524313B2 (ja) | 1996-08-14 |
| DK678687D0 (da) | 1987-12-22 |
| FI87230B (fi) | 1992-08-31 |
| BR8800040A (pt) | 1988-08-02 |
| FI875793L (fi) | 1988-07-10 |
| AU1011588A (en) | 1988-07-14 |
| NO162160C (no) | 1989-11-15 |
| AU596491B2 (en) | 1990-05-03 |
| IL85026A (en) | 1992-09-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO162160B (no) | Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav. | |
| Rabinovitch et al. | Use of the local anesthetic lidocaine for cell harvesting and subcultivation | |
| CN104839146B (zh) | 组合物及其用途、胎盘保存制剂及其制备方法 | |
| CN109511651A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞无血清冻存液的制备方法 | |
| CN104046590B (zh) | 一种稀少精子体外培养液 | |
| Grant et al. | Tissue 3 Vicia Faba | |
| CN109430246A (zh) | 一种无血清干细胞冻存液及干细胞冻存方法 | |
| Gilula et al. | Plasma membrane alteration associated with malignant transformation in culture. | |
| Jung et al. | Correlation between diameter and DNA or protein synthetic activity in rabbit blastocysts | |
| EP0939797A1 (en) | Defined systems for epithelial cell culture and use thereof | |
| US20100158873A1 (en) | Method for extracting and selecting cells | |
| Franke et al. | In vitro cultivation of Dipetalonema viteae third-stage larvae: evaluation of culture media, serum, and other supplements | |
| Petite et al. | Cryopreserved neuronal cells in long-term cultures of dissociated rat cerebral cortex: survival and morphometric characteristics as revealed by immunocytochemistry | |
| US4879222A (en) | Method of isolating tumor-secreted products using a novel protein-free medium | |
| Gómez-Lechón et al. | Cryopreservation of rat astrocytes from primary cultures | |
| Roberts | Protein‐bound sulfhydryl groups in Coleus wound meristems | |
| HENNEY et al. | Estimation of protein and DNA synthesis in allograft organ cultures as a measure of cell viability | |
| US20190161737A1 (en) | Process for continuous cell culture of cancer cells and cancer stem cells | |
| Tsiftsoglou et al. | Dimethyl sulfoxide-induced differentiation of Friend erythroleukemia cells in the absence of cytokinesis | |
| Connelly | The influence of hormones and other substances on lens regeneration in vitro | |
| Herrmann et al. | Cytogenetic analysis of thyroid tumors after cryopreservation | |
| Sheridan et al. | Potentiation of anchorage-independent colony formation by sodium polyanethol sulphonate | |
| Pandey et al. | Assessment of Langerhans cells using modified ATPase histochemistry technique: a pilot study | |
| Killian et al. | Effects of aphidicolin on premature condensation of sperm chromosomes in fertilized sea urchin eggs | |
| CN118480498A (zh) | 一种牛腔前卵泡和小腔卵泡的体外培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |