NO167807B

NO167807B - Analogifremgangsmaate til fremstilling av 3',4'-dinitrogensubstituerte epipodofyllotoksinglukosidderivater.

Info

Publication number: NO167807B
Application number: NO882849A
Authority: NO
Inventors: Dolatrai Mohanla Vyas; Mark George Saulnier; John F Kadow
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1987-07-01
Filing date: 1988-06-28
Publication date: 1991-09-02
Also published as: AU618536B2; FI883088A7; FI883088A0; DK360888A; DK360888D0; FI87357B; NO882849L; FI87357C; US4874851A; KR900006234B1; AU1844688A; EP0297594A3; NO167807C; JPS6426592A; CA1306250C; NO882849D0; ZA883762B; KR890002215A; NZ225089A; IL86888A0

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en analogifremgangs-måte til fremstilling av terapeutisk aktive 3<1>,4'-dinitrogensubstituerte epipodofyllotoksinglukosidderivater med den generelle formel

hvor

Y er H, og

A er (ci_g)alkyl, og

B er valgt blant gruppene

hvor

1 2

R og R hver uavhengig av hverandre er valgt blant (C^ ,-) - alkyl eller fenyKC, ,-)alkyl,

R 3 og R 4 hver uavhengig av hverandre er H, (C.^ 5)alkanoyl eller halogensubstituert (C7 ,-)alkanoyl,

R 5 er pyridyl, tienyl, furyl, fenyl eller fenyl substituert med én eller flere grupper valgt blant (C, t-)alkoksy eller nitro,

6 7 ~

R og R hver er H eller (C, _)alkyl,

R <8> er (C1_5)akyl og

X er oksygen eller svovel.

Etoposid (VP-16, Ia) og teniposid (VM-26, Ib) er klinisk nyttige kreftmotvirkende midler avledet av det naturlig fore-kommende lignan podofyllotoksin (II). Nummereringssystemet som benyttes til nomenklaturformål er vist i formel II.

Etoposid og teniposid er epipodofyllotoksinderivater med

den generelle formel (I)

idet epipodofyllotoksin er epimeren av podofyllotoksin i 4-stilling. Etoposid og teniposid er aktive ved behandling av forskjellige krefttyper, også småcellet lungekreft, ikke-lymfo-cytisk leukemi og ikke-seminomatøs testikkelkreft (AMA Drug Evaluation, 5. utgave, American Medical Accosiation, 1983 , Chicago, Illinois, p. 1554-1555).

Etoposid og teniposid samt fremgangsmåter til fremstilling derav er kjent fra US-patentskrif t 3 .524.844. Etoposid-3' , 4 • - kinon (Illa) er blitt fremstilt ved elektrokjemisk oksidasjon av etoposid (J.J.M. Holthuis et al., J. Electroanal. Chem. Inter-f acial Electrochem., Vol 184(2), 1985, p. 317-329. Fremstillingen av kinonet med formelen (III) ved kjemisk oksidasjon er kjent fra US-patentskrift 4.609.64 4. Epipodofyllotoksin-3',4'-kinonderi-vater, hvor A og Y har den i forbindelse med formelen (IV) angitte betydning, tjener som utgangsmateriale ved fremstilling av de nitrogenholdige epipodofyllotoksinderivater som fremstilles ifølge den foreliggende oppfinnelse.Ayres & Lim i Cancer Chemother Pharmacol, 1982, 7:99-101 angir podofyllotoksin med formelen

Strukturformlene som representerer B-substituenten omfatter alle diastereoisomere og/eller tautomere former hvor slike kan eksistere.

Utgangsmaterialet, 3' , 4 *-kinonet, kan fremstilles ved omsetning av et 4 *-demetylepipodofyllotoksin-p-D-glukosidderivat med formelen (I) med et oksidasjonsmiddel. Fremgangsmåten er beskrevet i ovennevnte US-patentskrift 4.609.644.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kjennetegnes ved

a) en forbindelse med formelen (1)

omsettes med minst én molekvivalent av en forbindelse med formelen H-NOR^, hvor R^ har den ovenfor angitte betydning2 , og mins2t molekvivalent av en forbindelse med formelen H2NOR , hvor R har den ovenfor angitte betydning, eller et syreaddisjons salt derav, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (2) 12 • 1 hvor A, Y, R og R har den ovenfor angitte betydning, og hvor R og R 2 kan være like eller forskjellige,

b) at en forbindelse med den generelle formel (2) eventuelt hydrogeneres i nærvær av en edelmetallkatalysator til dannelse av

en forbindelse med den generelle formel (3)

hvor A, og Y har den ovenfor angitte betydning, og

c) at en forbindelse med den generelle formel (3) eventuelt omsettes med

(i) minst én molekvivalent av en forbindelse med formelen

L-R"^ og minst én molekvivalent av en forbindelse med formelen

4 3 4

L-R , hvor L er en.fraspaltbar gruppe, og R og R er like eller forskjellige og er valgt blant (C^_5)alkyl eller halogensubstituert (C2_5)alkyl, i nærvær av en syreakseptor til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (4)

hvor A og Y har den ovenfor angitte betydning, eller med

(ii) minst 2 molekvivalenter av en forbindelse med formelen R<5>C(0)H, hvor R<5> har den ovenfor angitte betydning, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (5)

hvor A, Y og R^ har den ovenfor angitte betydning, eller med (iii) nitritt i nærvær av en syre til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (6)

hvor A og Y har den ovenfor anigtte betydning, eller med

(iv) en forbindelse med formelen (R6C(O-alk)3, hvor R<6> har den ovenfor angitte betydning, i nærvær av en syre til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (7)

hvor A, Y og R har den ovenfor angitte betydning, eller med

fi 7 fi 7 (v) en forbindelse med formelen R C(0)C(0)R , hvor R og R har den ovenfor angitte betydning, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (8)

hvor A, Y, R 6 og R 7 har den ovenfor angitte betydning, eller med fraspal(vtbia) r en grufpoprbei, nodeg lR se 8 mhead r dfoen rmeovleen nfLo £r ,-PaOng_ 2.R itQt, e, hbveor tyL dneinr ge, n i nærvær av en syreakseptor til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (9)

hvor A, Y, R g og X har den ovenfor angitte betydning.

Bis-oksimetere med formelen (2) fremstilles ved omsetning av et 3<*>,4<*->kinon med formelen (1) med en overskuddsmengde av det O-substituerte hydroksy lamin eller syr eaddi sjons salt derav i et egnet organisk løsningsmiddel, såsom pyridin. Omsetningen utføres fortrinnsvis ved høyere temperatur i et tidsrom som er til-strekkelig til omdannelse av utgangsmaterialet til bis-oksimeteren, hvorved en slik reaksjonstid typisk er 24 timer eller mer. De således dannede forbindelser kan isoleres og renses på konvensjonell måte, f.eks. flashkromatografi, eller alternativt kan de reduseres direkte uten forutgående isolering til den tilsvarende 3' , 4 1 -diaminoforbindelse med formelen (3).

Diaminet med formelen (3) kan fremstilles ved reduksjon av bis-oksimeteren med formelen (2), og som nevnt ovenfor kan enten en renset forbindelse med formelen (2) eller et råprodukt anvendes. Reduksjonen av bis-oksieteren utføres ved hydrogener ing i nærvær av en egnet edelmetallkatalysator, såsom Pt, Pd, Ni, Ru eller Rh.

Diaminoforbindelsene med formelen (3) kan dessuten derivat-iseres for å frembringe f.eks. amider, iminer eller hetero-cykliske forbindelser som angitt ovenfor for formelen (1). Omsetningen utføres vanligvis i inerte organiske løsningsmidler, såsom tetrahydrofuran, diklormetan eller kloroform, under be-tin geiser som er egnet for å oppnå de ønskede forbindelser. Forbindelser kan isoleres og renses på kjent måte, såsom ved re-krystallisasjon eller forskjellige kromatografiske metoder.

Amidderivåtene med formelen (4) kan fremstilles ved konvensjonelle acyleringsmetoder som er velkjente for fagfolk. Egnete acyleringsmidler omfatter f.eks. karboksylsyrer, fortrinnsvis i nærvær av et kondensasjonsmiddel som dicykloheksyl-karbodiimid (DCC), syrehalogenider, symmetriske eller asymme-triske anhydrider eller reaktive estere eller amider. Ved fremstilling av amidderivater under anvendelse av et syrehalo-genid eller et anhydrid utføres omsetningene fortrinnsvis ved en temperatur under romtemperatur, fortrinnsvis i området fra -20°C til ca. 10°C. I overensstemmelse med det som er anført ovenfor oppnås bisacylerte derivater når acyleringsmidlet ved omsetningen anvendes i en molar mengde som utgjør minst to ganger mengden av diaminforbindelsen med formelen (VII), fortrinnsvis i nærvær av en base, hvorved egnete baser f.eks. er pyridin, trietylamin, diisopropyletylamin eller dimetylaminopyridin. Når acyleringsmidlet anvendes i en mengde som er ekvivalent med mengden diamin-forbindelse og uten base oppnås en blanding av 3'- og 4<1->mono-acylerte derivater.

Bis-iminoforbindelsene med formelen (5) kan dannes ved omsetning av diaminoforbindelsene med formelen (4) med et overskudd av aldehyd ved romtemperatur, fortrinnsvis i nærvær av en syrekatalysator, såsom p-toluensulfonsyre, fortrinnsvis under fjerning av vann, og ved hensiktsmessige metoder til fjerning av vann omfatter anvendelse av et avvanningsmiddel, såsom molekylsikter, eller anvendelse av azeotrop destillasjon. Forbindelser med formelen (5) er ofte labile, og en foretrukket fremgangsmåte til isolering av disse er kromatografi på nøytralt aluminiumoksid.

Diazotering av 4',5'-diaminoforbindelser med formelen (4) frembringer således det tilsvarende triazolderivat med formelen (2a). Imidazolderivater med formelen (2b) kan fremstilles ved omsetning av diaminoforbindelsene med trialkylortoestere. Omsetning av diaminoforbindelsene med en 1,2-dioksoalkan frembringer pyrazinderivater med formelen (2c). Omsetning av diaminoforbindelsene med dihalogenalkylfosfat eller dihalogenalkyl-tiofosfat i nærvær av en organisk base, såsom pyridin, frembringer henholdsvis det tilsvarende cykliske fosfamid- eller tiofosfamidderivat med formelen (2d).

Representative forbindelser som fremstilles ifølge den foreliggende oppfinnelse er vurdert med hensyn til antitumoraktivitet ved in vitro cytotoksisitetprøving overfor humane og murine tumorcellelinjer samt overfor transplanterbar murin P388 1eukemi.

P3 8 8 Leukemi

I CDF.-hunnmus ble det intraperitonealt implantert et tumorinokulum som bestod av 10 ascitesceller fra P3 8 8 murin leukemi, og de ble behandlet med forskjellige doser av en test-forbindelse. For hvert dosenivå ble det benyttet 4 mus, og til en kontrollgruppe behandlet med saltvann ble det benyttet 10 mus. Forbindelsene ble administrert ved intraperitoneal injeksjon på 5. og 8. dag (1. dag er dagen for tumorimplantering). Antitumoraktivitet ble uttrykt som % T/C, noe som er forholdet mellom den gjennomsnittlige overlevelsestid for gruppen som er behandlet med et preparat og den gjennomsnittlige overlevelsestid for kontroll-gruppen som er behandlet med saltvann. En forbindelse med en T/C-%verdi på 12 5 eller mer anses vanligvis for å ha vesentlig antitumoraktivitet ved ?388-testen. Forsøket varte i 31 dager, hvoretter antallet overlevende dyr ble opptalt. Tabell I viser resultatene av ovennevnte vurdering, hvorved den maksimale T/C-%verdi og dosen som viser den maksimale virkning er angitt.

Cytotoksisk forsøk

In vitro cytotoksisitetsforsøket omfattet dyrking av forskjellige pattedyr-tumorceller, også humane'tumorceller, på mikrotiterplater under anvendelse av konvensjonelle vevskultur-metoder. Den konsentrasjon av hver forbindelse som var nødvendig for å inhibere cellevekst med 50% (IC^Q) ble deretter bestemt ved hjelp av en firedobbelt seriefortynningsmetode. Verdien av metoden er undersøttet av en rapport offentliggjort i "Proceedings of the American Association for Cancer Research", 1984, 25:18 91 (Abst. No. 328). Tumorceller av følgende typer ble anvendt for hver prøvet forbindelse: B16-F10 murin melanoma, KB human nasof aryngyl, Moser human tykktarm, SW900 human lunge, M109 murin lunge samt 3 humane tykktarmtumorcellelinjer, nemlig HCT-116, HCT-VM og HCT-VP, hvorav de to sistnevnte er resistente overfor henholdsvis teniposid (VM) og etoposid (VP). IC5Q-verdier under 50 0 |ig/ml er en positiv indikator på antitumorakt ivitet. Tabell II viser IC5Q-verdier for forskjellige forbindelser fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse overfor ovennevnte cellelinjer.

Av de data som er vist ovenfor fremgår det at selv om noen av de undersøkte analoger ikke oppviser aktivitet mot in vivo P388 leukemi, kan de alle betraktes som aktive mot forskjellge faste tumorer ved in vitro cytotoksisitetsforsøk.

Forbindelsene som fremstilles ifølge den foreliggende oppfinnelse kan følgelig anvendes ved en fremgangsmåte til inhiber-ing av tumorcellevekst, og denne fremgangsmåte omfatter administrering av en virksom tumor-inhiberende dose av en antitumor-forbindelse med formelen (IV) til en tumorbærende vert.

Farmasøytiske preparater inneholder en virksom tumor-inhiberende mengde av antitumor-forbindelse med formelen (IV) og en farmasøytisk akseptabel bærer. Disse preparater kan ha en vil-kårlig farmasøytisk form som er egnet for den ønskede admini-streringsmåte. Eksempler på slike preparater omfatter faste preparater'til oral administrering, såsom tabletter, kapsler, piller, pulver eller granulater, flytende preparater til oral administrering såsom løsninger, suspensjoner, siruper eller eliksirer samt preparater til parenteral administrering, såsom sterile løsninger, suspensjoner eller emulsjoner. De kan også utformes som sterile faste preparater, som kan løses i sterilt vann, fysiologisk saltvann eller et annet sterilt, injiserbart medium umiddelbart før anvendelse.

Optimal dose og kur for en gitt pattedyrvert kan lettvint bestemmes av fagfolk. Det er åpenbart at den faktisk anvendte dose kan variere i overensstemmelse med den spesielle sammen-setning av preparatet, den særlig anvendte forbindelse, admini-streringsmåten og det spesielle sted, verten og sykdommen som skal behandles. Det må tas hensyn til mange faktorer som kan modifisere virkningen av preparatet, såsom alder, vekt, kjønn, diett, administreringstidspunktet, administreringsveien, ut-skillelseshastigheten, pasientens tilstand, legemiddelkombina-sjoner, reaksjonssensibiliteter og hvor alvorlig sykdommen er.

De etterfølgende eksempler tjener til belysning av oppfinnelsen .

I eksemplene ble smeltepunkter registrert i et Thomas-Hoover kapilært smeltepunktsapparat og er ukorrigerte. "'"H NMR-spektrer ble registrert enten i et Bruker "VM-360" eller Varian "VX2-20 0"-spektrofotometer (under anvendelse av CDCl^ som intern referanse). Kjemiske forskyvninger ble registrert i$ -enheter og koplingskonstanter i Hertz. Oppdelingsmønstre benevnes på følgende måte: s=singlett, d=dublett, t=triplett, q=kvartett, m=multiplett, bp=bred topp og dd=dobbel dublett. Infrarøde spektre ble bestemt enten ved et Beckman "Model 4240"- eller Perkin-Elmer "180 0" infrarødt fouriertransformasjons-spektrofotometer og er angitt i resiproke centimeter (cm ^). Tynnsjiktskromatografi ble utført på belagte silikagelplater (60F-254) under anvendelse av UV-lys og/eller jodlamper for å gjøre dem synlige. Massespektre med høy og lav oppløsning ble registrert ved hjelp av henholdsvis KRATOS MS 50 og KRATOS MS 2 5RFA spektrofotometer. "Flashkromatografi" er metoden som er beskrevet av W.C. Still et al., i J. Org. Chem., Vol 43, 1978, p. 2923, og ble utført under anvendelse av enten E. Merck silikagel (20 0-400 mesh) eller Woelm silikagel (32-63 nm). Avdampning av løsningsmidler ble foretatt ved senket trykk. Uttrykket "ETOP" representerer strukturfrag-mentet

Eksempel 1 4'-dehydroksy-3'-demetoksy-etoposid-3',4'-bis-O-bensyloksim 2,80 g (17,5 mmol) fast O-benzylhydroksylamin-hydroklorid ble tilsatt til en løsning av 2,50 g (4,37 mmol) etoposid-3<*>,4'-kinon i 75 ml pyridin. Blandingen ble omrørt ved 54°C i 43 timer, og deretter ved 60-70°C i ytterligere 15 minutter. Pyridin ble fjernet ved senket trykk, og resten ble løst i 250 ml CH2C12 og ekstrahert med en blanding av 200 ml H20 og 70 ml 1 N HC1. Det vandige sjikt ble ekstrahert med ytterligere CH2C12, 2 x 15 ml, og de kombinerte ekstrakter ble vasket med 100 ml H20 og 150 ml saltvann og tørket over Na2S04. Etter avdampning av løsnings-midlet ble det oppnådd 3,7 g av et gul-orangefarget faststoff, som ble renset ved flashkromatografi på silikagel. Eluering med 1% CH3OH i CH2C12 ga 2,10 g (61,4%) av den rene tittelforbindelse som et gul-orangefarget faststoff, smp. 152-156°C.. <1>H NMR (DCD13) 5: 7,38-7,11 (m, 10H), 6,76 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,02 (d, 1H), 5,96 (d, 2H), 5,90 (d, 1H), 5,46 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 4,82 (d, 1H, J=3,5 Hz), 4,73 (q, 1H, J=5 Hz), 4,61 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,42 (dd, 1H), 4,30-4,24 (m, 2H), 4,14 (dd, 1H, J=3,9 og 10,4 Hz), 3,79 (s, 3H), 3,74-3,69 (m, 1H), 3,57-3,51 (m, 1H), 3,43-3,37 (m, 1H), 3,32-3,29 (m, 2H), 3,23 (dd, 1H, J=5,5 og 14,1 Hz), 2,89-2,82 (m, 1H), 2,64 (d, 1H, J=2 Hz, OH), 2,30 (d, 1H, J=2,3 Hz, OH), 1,37 (d, 3H, J=5 Hz). Eksempel 2 4'- dehydroksy- 3'- demetoksy- etoposid- 3', 4'- bis- O- metyloksim

3,0 g (35 mmol) fast metoksylamin-hydroklorid ble tilsatt til en løsning av 5,0 g (8,73 mmol) etoposid-o-kinon i 50 ml pyridin under omrøring ved romtemperatur under N2. Den mørkerøde løsning forandret seg ved tilsetningen umiddelbart til en mørk orangefarget løsning. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet i 24

timer ved 60°C og deretter i ytterligere 24 timer ved 75°C. Pyri-dinet ble fjernet ved inndampning i vakuum. Flashkromatografi på silikagel under eluering med 4% MeOH i CH2C12 ga 4,73 g av et gul-orange faststoff (86%), smp. 205-210°C.

IR (KBr): 3480 (b), 2920, 1780, 1495 cm"<1>.

<1>H NMR (CDC13) s: 6,79 (s, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,00 (m, 3H), 5,83 (s, 1H), 4,88 (d, J=3,2 Hz, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,64 (d, J"=7,0 Hz, 1H), 4,50-4,05 (m, 4H) , 4,20 (s, 3H) , 3,95 (s, 3H) , 3,79 (s, 3H), 3,75-3,20 (m, 6H), 2,94 (m, 1H), 1,38 (d, J=5,0 Hz, 3H).

MS (FAB) m/e: 631 (M+H)<+>.

Eksempel 3

4'- dehydroksy- 3'- demetoksy- 3', 4'- diamino- etoposid

En løsning av 2,00 g (2,55 mmoi) 4'-dehydroksy-3'-demetoksy-étoposid-3<1>,4'-bis-O-benzyloksim i 100 ml alkohol av reagenskvalitet og 65 ml etylacetat ble behandlet med 20% pal-ladiumhydroksid-på-karbon og hydrogenert ved 448,5 kPa i 1,5 timer. Blandingen ble filtrert gjennom et lag'av "Celite" og vasket med etylacetat. Filtratet ble konsentrert og renset ved flashkromatografi på silikagel. Eluering med 2% CH^OH i CH2C12 etterfulgt av 5% CH3OH i CH7C12 ga 1,12 g (76,7%) av den rene tittelforbindelse som et off-white faststoff, smp. 235-240°C (dekomponering, blir mørkere ved 200°C). Behandling med eter ga. en analytisk prøve.

IR (KBr): 3420, 1775, 1505, 1485, 1230, 1165, 1095, 1075, 1040, 1005, 930 cm<-1>.

<X>H NMR (CDC13) 6: 6,78 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,35 (d, 1H, J=l,3 Hz), 5,95 (d, 2H), 5,70 (d, IH, J=l,3 Hz), 4,86 (d, 1H, J=3,3 Hz), 4,73 (q, 1H, J=5 Hz), 4,63 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,52 (d, 1H, J=5,l Hz), 4,38 (dd, 1H), 4,20-4,13 (m, 2H), 3,79-3,73 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,59-3,53 (m, 1H), 3,41 (dd, 1H), 3,35-3,31 (m, 2H), 3,20 (dd, 1H, J=5,l og 14,1 Hz), 2,98-2,88 (m, 1H), 1,38 (d, 3H, J=5 Hz).

Analyse for C28<H>32<N>2°11<:>

Beregnet: C: 58,73%, H: 5,63%, N: 4,89%.

Funnet: C: 57,37%, H: 5,77%, N: 4,78%.

Eksempel 4

4'-dehydroksy-3<1->demetoksy-3',4'-bis-acetylamino-etoposid

68 ul (0,71 mmol) eddiksyreanhydrid ble dråpevis og under omrøring med en magnetrører tilsatt til en løsning av 0,200 g (0,35 mmol) av diamino-etoposidet fra eksempel 3 og 60 ul (0,74 mmol) pyridin i 5 ml CH2C12 ved 2°C under ^-atmosfære. Omrør-ingen ble fortsatt i 4 timer, hvoretter tynnsjiktsanalyse (5% MeOH i C<H>2C12) viste nærvær av en ny, mindre polar forbindelse og fravær av utgangsmaterialet. Reaksjonsblandingen ble helt i vann, ekstrahert med 3 porsjoner CH2C12, tørket over MgS04 og renset ved flashkromatografi under eluering med 4% MeOH i CH2C12 på silikagel, hvorved det ble oppnådd 0,111 g (76%) av et off-white faststoff (langsom dekomponering til et skum ved over 217°C).

IR (KBr): 3440 (b), 2930, 1780, 1679, 1490 cm"<1>).

<1>H NMR (CDC13) s: 8,84 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,95 (d, J=5,8 Hz, 2H), 4,94 (d, J=3,3 Hz, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,64 (d, J=7,7 Hz, 1H), 4,39 (t,

J=9,3 Hz, 1H), 4,24 (t, J=9,2 Hz, 1H), 4,15 (m 1H), 3,88 (s, 3H), 3,73 (t, J=8,7 Hz, 1H), 3,53 (t, J=9,6 Hz, 1H), 3,40 (t, J=8,2 Hz, 1H), 3,40-3,10 (m, 3H), 2,71 (bs, 1H, (sukker-OH)), 2,42 (bs, 1H, (sukker-OH)), 2,24 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,37 (d, J=5,l Hz, 3H) .

MS (FAB) m/e = 657 (M+H)<+>.

Når den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 følges under anvendelse av de nedenfor angitte acyleringsmidler istedet for eddiksyreanhydrid oppnås de tilsvarende bis-acylerte forbindelser.

Når den generelle fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel 4 gjentas under anvendelse av det nedenfor angitte acylerings-middel i en molar mengde som tilsvarer mengden 3',4'-diamino-etoposid og uten pyridin oppnås en blanding av de tilsvarende 4'-og 3'-monacylerte derivater.

Eksempel 10 4'- dehydroksy- 3'- demetoksy- 3', 4'- bis-( 4- pyridylmetylen) amino-etoposid

En løsning av 181 mg (0,316 mmol) av 3',4'-diamino-etoposidet i eksempel 3 i 35 ml tørt CH2C12 under N2 ble behandlet med 2,25 g aktiverte 4A molekylsikter og 4,56 g (42,6 mmol) 4-pyridinkarboksaldehyd. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 26 dager og deretter overført direkte til toppen av en 2 cm søyle fylt med 16,51 cm nøytralt aluminiumoksid. Eluering i rekkefølge med 200 ml 50% EtOAc i CH2C12, 70% EtOAc i CH2Cl2, EtOAc og 10-15% CH^OH i EtOAc fjernet overskudd av aldehyd og andre foru-rensninger. Til slutt ble tittelforbindelsen eluert med 130 ml CH^OH. Etter inndampning i vakuum ble faststoffene løst i 75 ml EtOAc og 2 ml CH^OH, filtrert og inndampet. Det resulterende gule faststoff ble løst i 2-3% CH^OH i CH2C12 og filtrert gjennom et 0,45 um filter, hvorved det ble oppnådd en klar, gul løsning. Rotasjonsinndampning og tørking ved 0,1 mm Hg ga 145 mg (61%) av den rene tittelforbindelse som et gul-orangefarget faststoff. 360 MHz H NMR-spektret viste en ca. 65:35 blanding av isomerer, som med forbehold ble benevnt 3<*->Z, 4'-E og 3'-E, hvorved 4'-E ute-lukkende er basert på steriske betraktninger.

Partiell 1H NMR (CDC13) 5: 8,73-8,66 (m, 4H), 8,40 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,65-7,57 (m, 4H), 6,96 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,28 (d, 1H), 6,01-5,94 (m, 2H), 4,17 (s, 3H), 1,24 (d, 3H), 1,23 (d, 3H).

Når den generelle fremgangsmåte i eksempel 10 gjentas med de. nedenfor angitte aldehyder istedet for 4-pyridinkarboksaldehyd oppnås de tilsvarende bis-iminoforbindelser.

Eksempel 17 4- dehydroksy- 3'- demetoksy- etoposid- 3', 41- triazol

26,8 mg (0,388 mmol) natriumnitritt ble tilsatt til en løs-ning av 169,1 mg (0,2953 mmol) av 3•,4<1->diamino-etoposidet fra eksempel 3 i 4 ml tørr tetrahydrofuran og 0,75 ml iseddik. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, helt i 100 ml kald, mettet, vandig natriumkarbonatløsning og ekstrahert med 2 x 50 ml. CB^Cl,,. De kombinerte ekstrakter ble vasket med 50 ml saltvann og tørket over Na2S04. Rotasjonsinndampning etterfulgt av krystalli-sasjon fra 3-5 ml CI^Clj ga 128,1 mg (74,3%) av den rene tittelforbindelse som et fargeløst faststoff, smp. 245-250°C.

IR (KBr): 3445, 1775, 1625, 1605, 1507, 1488, 1455, 1400, 1345, 1240, 1165, 1100, 1085, 1045, 1010, 945, 880, 772, 705 cm-"1".

UV (CH3OH) xmaks. 287 nm (log = 3,909).

<2>H NMR (CDC13) 6: 7,25 (d, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,66 (d, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,98 (s, 2H), 4,91 (d, 1H, J=3,3 Hz), 4,78 (d, 1H, J=5,3 Hz), 4,73 (q, 1H, J=4,9 Hz), 4,65 (d, 1H, J=7,5 Hz), 4,42 (dd, 1H), 4,20-4,14 (m, 2H), 4,04 (s, 3H), 3,73 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,44 (m, 1H), 3,40-3,32 (m, 3H), 2,94 (m, 1H), 1,38 (d, 3H, J=4,9 Hz).

MS (FAB) m/e = 584 (M+H)<+>, 378 (M-sukker)<+>.

Analyse for C28H29<N>3°11<:>

Beregnet: C: 57,63%, H: 5,01%, N: 7,20%.

Funnet C: 57,81%, H: 4,90%, N: 7,11%.

Eksempel 18

4'-dehydroksy-3'-demetoksy-etoposid-3',4'-imidazol

En løsning av 182 mg (0,318 mmol) av 3',4'-diamino-etoposidet fra eksempel 3 i 10 ml CH2C12 ble behandlet med 500 mg (4,7 mmol) trimetylortoformiat og 1,3 mg p-toluensulfonsyre-mono-hydrat, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 6 dager. Den resulterende tittelforbindelse ble ved filtrering oppsamlet som et off-white faststoff (28,7 mg, 15,5%). Det resterende filtrat ble behandlet med 2 ml trimetylortoformiat og 8 mg p-toluensulfonsyre-monohydrat og omrørt ved romtemperatur i 12 dager. Etter opparbeidelse med etylacetat og vandig natriumkarbonat ga flashkromatografi av det resulterende råmateriale ved anvendelse av 5% og deretter 10% CH3OH i CH2C12 ytterligere 53,6 mg (28,9%) ren tittelforbindelse.

IR (KBr): 3435, 1775, 1633, 1603, 1490, 1390, 1340, 1240, 1165, 1100, 1080, 1040, 1010, 940, 703 cm"<1>.

<1>H NMR (dg-DMSO) 6: 8,08 (bred s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,48 (d, 1H), 6,02 (s, 2H), 5,24 (m, 2H), 4,95 (d, 1H), 4,72-4,68 (m, 2H), 4,56 (d, 1H), 4,29-4,22 (m, 2H), 4,08 (dd, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H), 3,38-3,03 (m, 4H), 2,95-2,85 (m, 1H), 1,23 (d, 3H, J=5 Hz).

UV (CH3OH) xmaks. 243 (sh) og 282 (log = 3,765) nm.

MS (FAB) m/e = 583 (M+H)<+>, 378 (M-sukker)<+>.

Eksempel 19

4'-dehydroksy-3'-demetoksy-etoposid-3',4'-(2-metylimidazol)

Ved gjentagelse av fremgangsmåten i eksempel 18 under anvendelse av trimetylortoacetat istedet for trimetylortoformiat ble tittelforbindelsen oppnådd.

Eksempel 20

4'- dehydroksy- 3'- demetoksy- etoposid- 3', 4'-( 2, 3- dimetylpyrazin)

En løsning av 225 mg (0,393 mmol) av 3 *,4'-diamino-etoposidet fra eksempel 3 i 15 ml tørt CH2C12 ble behandlet dråpevis i 1 minutt med 56 mg (0,65 mmol) rent 2,3-butandion. Etter 5-10 minutter ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0°C og produktet oppsamlet ved filtrering og vasket med kaldt CH2CI2 og tørket, hvorved det ble oppnådd 163 mg (66,7%) av den analytisk rene tittelforbindelse som et hvitt faststoff.

IR (KBr): 3450, 1776, 1620, 1575, 1508, 1490, 1387, 1342, 1236, 1203, 1165, 1117, 1095, 1080, 1040, 1007, 936, 892, 878, 700 cm"<1>.

<1>H NMR (dg-DMSO) 5: 7,14 (d, 1H, J=l,2 Hz), 7,08 (s, 1H),

6,68 (d, 1H, J=l,2 Hz), 6,58 (s, 1H), 6,04 (s, 2H), 4,97 (s, 1H, J=3,4 Hz), 4,80 (d, 1H, J=5,6 Hz), 4,71 (q, 1H, J=5 Hz), 4,55 (d, 1H, J=7,8 Hz), 4,31-4,21 (m, 2H), 4,08 (dd, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,53-3,46 (m, 2H), 3,40-3,05 (m, 4H), 2,92-2,83 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,56 (s, 3H), 1,23 (d, 3H, J=5 Hz).

UV (CH30H) xmaks. (log ) 259 (4,661), 292 (3,778), 326 (3,681).

Analyse for C32H34<N>2°11<:>

Beregnet: C: 61,73%, H: 5,50%, N: 4,50%.

Funnet: C: 61,33%, H: 5,24%, N: 4,45%.

Eksempel 21

4'- dehydroksy- 3'- demetoksy- etoposid- 3', 4'- etyltiofosfamid

49 ul (0,37 mmol) etyldiklortiofosfat ble tilsatt til en løsning av 0,2 0 (0,35 mmol) av 3',4'-diamino-etoposidet fra eksempel 3 og 0,12 ml (1,4 mmol) pyridin i 4 ml C^C^ ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble kokt ved tilbakeløp i 2,5 timer og oppbevart ved 10°C natten over. Flashkromatografi på silikagel under anvendelse av 3% MeOH i C^Clj ga 0,030 g (13%) av et off-white faststoff (tynnsjiktskromatografi Rf like over R^) for utgarigs-diamino-etoposidet) som en bladning av diastereo-merer.

IR (KBr): 3420, 2922, 1780, 1640, 1601, 1490 cm"<1>.

XE NMR (CDC13) & : 8,61 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,31 (m, 1H), 6,79, 6,78 (s, 1H), 6,50, 6,49 (s, 1H), 5,97 (m, 2H), 5,86, 5,83 (s, 1H), 5,59-5,42 (m, 2H), 4,88 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 4,54 (m,

2H), 4,40 (m, 1H), 4,17 (m, 2H), 3,97 (m, 2H), 3,73, 3,72 (m,

2H), 3,44 (m, 1H), 3,31 (m, 1H), 3,27 (m, 3H), 2,87 (m, 1H), 1,36 (d, J=2,4 Hz, 3H), 1,22 (m, 3H).

MS (FAB) m/e = 678 M<+>.

Eksempel 22 4'-dehydroksy-3'-demetoksy-etoposid-3',4'-etylfosfamid

Fremgangsmåten i eksempel 21 ble gjentatt under anvendelse av etyldiklorfosfat istedet for etyldiklortiofosfat, hvorved tittelforbindelsen ble fremstilt.

Claims

1. Analogi fremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 31,41-dinitrogensubstituerte epipodofyllotoksinglukosidderivater med den generelle formel

hvor 1 2

R og R Lhver uavhengig av hverandre er valgt blant (C, alkyl eller fenyl (C, ,.) alkyl, 3 4

R og R hver uavhengig av hverandre er H, (C^_5)alkanoyl eller halogensubstituert (C2_5)alkanoyl, R^ er pyridyl, tienyl, furyl, fenyl eller fenyl substituert

med én eller flere grupper valgt blant (C, c)alkoksy eller nitro,

fi 7 1""3

R og R hver er H eller (C,alkyl, 8

R er (C1_5)akyl og

X er oksygen eller svovel,

karakterisert ved at a) en forbindelse med formelen (1)

omsettes med minst én molekvivalent av en forbindelse med formelen H-NOR<1>, hvor R<1> har den ovenfor angitte betydning, og minst en molekvivalent av en forbindelse med formelen H2NOR 2 , hvor R<7 >har den ovenfor angitte betydning, eller et syreaddisjonssalt derav, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (2) 12 1 hvor A, Y, R og R har den ovenfor angitte betydning, og hvor R og R 2 kan være like eller forskjellige, b) at en forbindelse med den generelle formel (2) eventuelt hydrogeneres i nærvær av en edelmetallkatalysator til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (3)

hvor A, og Y har den ovenfor angitte betydning, og c) at en forbindelse med den generelle formel (3) eventuelt omsettes med (i) minst én molekvivalent av en forbindelse med formelen L-R^ og minst én molekvivalent av en•forbindelse med formelen 4 '34 L-R , hvor L er en fraspaltbar gruppe, og R og R er like eller forskjellige og er valgt blant (C1_5)alkyl eller halogensubstituert (C Z _ — o-)alkyl, i nærvær av en syreakseDtor til dannelse av en

forbindelse med den generelle formel (4)

hvor A og Y har den ovenfor angitte betydning, eller med (ii) minst 2 molekvivalenter av en forbindelse med formelen R^C(0)H, hvor R"* har den ovenfor angitte betydning, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (5)

hvor A, Y og R har den ovenfor angitte betydning, eller med (iii) nitritt i nærvær av en syre til dannelse av en for

bindelse med den generelle formel (6)

hvor A og Y har den ovenfor anigtte betydning, eller med 6 6 (iv) en forbindelse med formelen (R CfO-alk)^, hvor R har den ovenfor angitte betydning, i nærvær av en syre til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (7)

hvor A, Y og R g har den ovenfor angitte betydning, eller med

r -j rr -i (v) en forbindelse med formelen R C(0)C(0)R , hvor R og R har den ovenfor angitte betydning, til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (8)

hvor A, Y, R<6> og R<7> har den ovenfor angitte betydning, eller med (vi) en forbindelse med formelen L--PO-R 8, hvor L er en fraspaltbar gruppe, og R 8har den ovenfor angitte betydning, i nærvær av en syreakseptor til dannelse av en forbindelse med den generelle formel (9)

hvor A, Y, R<8> og X har den ovenfor angitte betydning.