NL8104048A

NL8104048A - Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

Info

Publication number: NL8104048A
Application number: NL8104048A
Authority: NL
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1976-02-13
Filing date: 1981-09-01
Publication date: 1982-01-04
Also published as: NL179134C; NL8104046A; NL178874B; NL178873C; NL8104050A; NL177827C; NL179134B; NL178874C; NL8104049A; NL178873B; NL178844C; NL177827B; NL8104047A; NL178844B

Description

«.

- 1 - ί

Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

De uitvinding betreft een werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking,

Een dergelijke werkwijze waarbij men een proline 5 in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, kan bekend worden geacht uit de Duitse "Offenlegungsschriften" 2.108.043 en 2,124.451. Volgens deze "Offenlegungsschriften" kan men voor de bestrijding van bloeddrukverhoging bepaalde peptiden toepassen met eindstandige prolinegroepen. Gebleken was namelijk, 10 dat deze peptiden in staat zijn het enzym af te remmen, dat angio-tensine I, welke stof in het lichaam geproduceerd wordt, omzet in angiotensine II, welke stof een bloeddrukverhogende werking heeft.

Volgens de uitvinding brengt men een verbinding met de formule 1 van het formuleblad, waarin R een hydroxy- of 15 aminogroep of een lagere alkoxygroep, en R^ elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R£ een lagere alkyl-, fenyl-, gesubstitueerde fenylgroep, waarin de fenylsubstituent een halo-geenatoom, lagere alkyl- of lagere alkoxygroep is, een fenyl-lagere 20 alkyl-, difenyl-lagere alkyl-, trifenyl-lagere alkyl-, lagere alky1-

thiomethyl-, fenyl-lager: alkylmethyl-, lagere alkanoylamidomethyl-groep, Μ M

It 11 R--M-C-, R_NH-C-, R,-S- of R_ voorstelt, R, een waterstof-, 5 5 6 7 3 hydroxy- of lagere alkylgroep is, R,. lagere alkyl, fenyl of fenyl-25 lager alkyl voorstelt, R. een lagere alkyl-, fenyl-, gesubstitueerde

O

fenyl-, waarin de fenylsubstituent halogeen, lagere alkyl of lagere alkoxy-, hydroxy-lagere alkyl- of amino (carboxy)-lagere alkyl is en R_, een groep met de formule 29, M 0 of S, m = 1 en n en p elk 0, 1 of 2 is, of een zout daarvan in een voor therapeutische toe-30 passing geschikte vorm brengt.

Gevonden werd namelijk, dat deze veel eenvoudigere prolines, die geen peptiden zijn, eveneens geschikt zijn om volgens 8104048 it- __ - 2 - hetzelfde mechanisme te hoge bloeddruk effectief te bestrijden. Van belang is verder, dat zij deze werking ook uitoefenen bij orale toediening.

De lagere alkylgroepen, voorgesteld door de 5 bovengenoemde symbolen, omvatten rechte en vertakte koolwaterstof-resten van methyl tot heptyl, bijvoorbeeld methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t.butyl, pentyl, isopentyl en derge-lijke. De lagere alkoxygroepen zijn van hetzelfde type met 1-7 koolstof atomen, verbonden met het zuurstofatoom, bijvoorbeeld methoxy, 10 ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, t.butoxy en dergelijke. De groepen met 1-4 koolstofatomen en in het bijzonder met 1 of 2 koolstofatomen genieten de voorkeur. Fenylmethyl is de fenyl-lagere alkylgroep, die de voorkeur geniet.

De lagere alkanoylgroepen zijn die met de acyl-15 resten van de lagere (C2-C^) vetzuren, bijvoorbeeld acetyl, propio- nyl, butyryl, isobutyryl en dergelijke. De lagere alkanoylgroepen met tot 4 koolstofatomen, in het bijzonder acetyl, genieten de voorkeur.

De uitdrukking "halogeen" omvat de vier gebruikelijke halogenen, maar chloor en broom genieten de voorkeur. De 20 gesubstitueerde fenylgroepen bevatten de substituent bij voorkeur op de 4-plaats van de ring. De hydroxy-lagere alkylgroepen bevatten een hydroxygroep aan een alkylketen op dezelfde wijze als die welke hierboven zijn beschreven, bij voorkeur aan het eindstandige kool-stofatoom, bijvoorbeeld hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, etc. De 25 amino(carboxy)lagere alkylgroepen bevatten één aminogroep en één carboxygroep aan een lagere alkylgroep, zoals die welke hierboven zijn beschreven, bij voorkeur beide aan één koolstofatoom, bijvoorbeeld aan het eindstandige koolstofatoom, zoals in de voorkeurs 2-amino-2-carboxyethylgroep.

30 De nieuwe verbindingen met de algemene formule 1 kunnen op een op zichzelf bekende wijze worden bereid.

In het algemeen worden de verbindingen volgens de uitvinding bereid door een verbinding met de formule 3 te acy-leren met een zuur met de formule 4 of een chemisch equivalent 35 daarvan.

8104048 - 3 - %

Het eindprodukt kan niet alleen worden verkregen door direkte acy-lering met een zuur met de formule 4 maar eveneens via tussenpro-duktenr zoals (a) ω-halogeenalkaanzuren met de formule 5, waarin X broom, chloor of jodium is, of (b) een tosyloxyalkaanzuur, dat 5 wil zeggen een zuur met de formule 5, waarin X tosyloxy (ch3 -<£> - SO^0-}, is of (c) een gesubstitueerd acrylzuur met de formule 6. Het produkt van deze acylering wordt vervolgens onderworpen aan een omlegging of een additie met het anion van een thiol of thiozuur met de formule 7.

10 Wanneer het zuur met de formule 4 als acyleer middel wordt gebruikt kan de acylering worden bewerkstelligd in tegenwoordigheid van een koppelingsmiddel, zoals dicyclohexylcar-bodiimide of dergelijke, of het zuur kan worden geactiveerd door vorming van zijn gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuur-15 chloride, zuurester of toepassing van het Woodward-reagens K, N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinoline, of dergelijke. In verband met de acyleringsmethodes wordt verwezen naar Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Vol. XV, part II, pag. 1 e.v. (1974).

20 Volgens een voorkeursmethode ter bereiding van verbindingen met de formule 1, wordt een zuur of ester met de formule 3 gekoppeld met een halogeenalkaanzuur met de formule 5, waarin X halogeen, bij voorkeur chloor of broom, voorstelt. Dit kan worden bewerkstelligd door toepassing van één van de bekende 25 procedures, waarbij het zuur 4 voor de reactie met het zuur 3 wordt geactiveerd door vorming van een gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuurchloride of actieve ester of door toepassing van Woodward-reagens K, EEDQ (N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1.2-dihydroxychinoline) of dergelijke 30 Het produkt van deze reactie is een verbinding met de formule 10, Het produkt met de formule 10 wordt onderworpen aan een verplaatsingsreactie met het anion van een thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 11. Wanneer R een estergroep is (dat wil zeggen dat R voorstelt een lager 35 alkoxygroep) kan de estergroep uit een ester met de formule 11 8104048 V 'Si - 4 - worden verwijderd door behandeling met trifluorazijnzuur en ani-sool, waarbij het overeenkomstige vrije zuur wordt verkregen. Ook door alkalische hydrolyse kan het overeenkomstige zuur worden verkregen.

5 Een variatie op deze procedure omvat de toepas sing van een acrylzuur met de formule 6 als uitgangsmateriaal. Dit acrylzuur wordt eerst omgezet in de zuurhalogenidevorm en vervolgens in reactie gebracht met een verbinding met de formule 3 onder vorming van een verbinding met de formule 13 en dit tussenprodukt 10 wordt onderworpen aan de additiereactie met het thiol of thiozuur 7, zoals hierboven beschreven.

Een tosyloxyalkaanzuur met de formule 14 kan eveneens worden gebruikt als het middel voor de acylering van het zuur met de formule 3, waarna het acyleringsprodukt wordt onder-15 worpen aan de verplaatsingsreactie, etc., zoals hierboven beschreven.

Het acrylzuur met de formule 6 kan anderzijds eerst in reactie worden gebracht met het thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 15, dat wordt omge-20 zet in zijn zuurhalogenide, bijvoorbeeld met thionylchloride, en vervolgens wordt gekoppeld met de verbinding met de formule 3, waarna verder de boven beschreven procedure wordt gevolgd.

Het zuur of de ester met de formule 3 kan eveneens worden geacyleerd met een "beschermde" vorm van een ω-mercap-25 toalkaanzuur met de formule 16, waarin Rg de "beschermende" groep is. Dergelijke "beschermende" groepen kunnen in de hierboven beschreven vorm zijn.

Na de acylering kan de beschermende groep uit het produkt worden verwijderd volgens één van de hierboven beschreven 30 bekende methodes.

Verdere details met betrekking tot de voorkeursmethodes voor de bereiding van de verbindingen volgens de uitvinding zijn aangegeven in de onderstaande specifieke voorbeelden.

Volgens een modificatie van de werkwijze, die 35 in het bijzonder de voorkeur geniet, wordt het zuur of de ester met 8104048 - 5 - de formule 3 geacyleerd met een halogeenalkanoylhalogenide met de formule 17, waarin elke X onafhankelijk voorstelt een halogeen, bij voorkeur chloor of broom, R voorstelt waterstof, lager alkyl of fenyl-lager alkyl en n 0, 1 of 2 is. Deze reactie wordt bewerk-5 stelligd in een alkalisch medium, bijvoorbeeld een verdunde alkali-metaalhydroxyde-oplossing, alkalimetaalhydrogeencarbonaat- of alkalimetaalcarbonaat-oplossing bij verlaagde temperatuur, bijvoorbeeld ongeveer 0-15° c. Het reactieprodukt wordt onderworpen aan een ver-plaatsingsreactie met het anion van het thiol of thiozuur met de 10 formule 7, eveneens in een alkalisch medium, bij voorkeur een alkalimetaalcarbonaat-op lossing, en vervolgens op de gebruikelijke wijze opgewerkt. Wanneer een zuur met de formule 3 als uitgangsmateriaal wordt gebruikt kan het als het vrije carbonzuur verkregen eindprodukt vervolgens worden omgezet in zijn ester, bijvoorbeeld door vereste-15 ring met een diazoalkaan, zoals diazomethaan, een l-alkyl-3-p-tolyl-triazeen, zoals l-n-butyl-3-p-tolyltriazeen of dergelijke. De behandeling van een ester, bij voorkeur de methylester, met een alcoholische ammonia-oplossing zet het vrije zuur om in het amide, dat wil zeggen in een produkt, waarin R voorstelt NH2· 20 Volgens een andere methode wordt een ester, bij voorkeur de t-butylester, met de formule 3 in een watervrij medium, zoals dichloormethaan, tetrahydrofuran, dioxan of dergelijke, behandeld met een thioalkaanzuur met de formule 18 in tegenwoordigheid van dicyclohexylcarbodiimide, N.N’-carbonylbisimidazool, ethoxy-25 acetyleen, difenylfosforylazide of analoge koppelingsmiddelen bij een temperatuur van ongeveer 0-10° C. De estergroep (R) kan vervolgens worden verwijderd, bijvoorbeeld door behandeling met tri-fluorazijnzuur en anisool bij kamertemperatuur. Produkten met de formule 1, waarin R„ de groep M voorstelt bereidt men

^ II

30 R5-M-C- door reactie van een verbinding met de formule 12 met een gehalo-geneerde verbinding met de formule 19 of door reactie van een verbinding met de formule 10 met een alkalimetaalzout of aardalkali-metaalzout van een verbinding met de formule 20, waarin Me een 35 alkalimetaal of aardalkalimetaal voorstelt.

8104048 * ^ - 6 -

Een produkt met de formule 1, waarin de groep M voorstelt wordt bereid door reactie van een verbin- t»

R5-NH-C

ding met de formule 12 met een geschikt gesubstitueerd isocyanaat 5 of isothiocyanaat met de formule 21. Anderzijds kunnen dezelfde pro-dukten worden verkregen door koppeling van een zuur met de formule 22 met een aminozuur met de formule 3.

Verbindingen met de formule 1, waarin voorstelt lager alkyl, fenyl, gesubstitueerd fenyl, fenyl-lager alkyl, 10 trifenyl-lager alkyl, lager alkylthiomethyl of fenyl-lager alkyl- thiomethyl, worden verkregen door reactie van een verbinding met de formule 12 met het overeenkomstige halogenide R^X of door reactie van een verbinding met de formule 10 met het overeenkomstige thiol R2SH op dezelfde wijze als hierboven beschreven.

15 Een verbinding met de formule 1, waarin R2 een lagere alkanoylaminomethylgroep voorstelt, kan worden bereid door condensatie van een verbinding met de formule 12 met een overeenkomstig hydroxymethyl-lager alkanoylamide met de formule 23 in tegenwoordigheid van een zure katalysator, zoals trifluorazijnzuur. 20 Een verbinding met de formule 1, waarin R^ de groep R^-S voorstelt, kan worden bereid onder toepassing van bekende methodes voor de synthese van gemengde disulfiden, bijvoorbeeld door reactie van een verbinding met de formule 12 met een thiosul-finaat met de formule 24, thiosulfonaat met de formule 25, sulfenyl-25 halogenide met de formule 26, thiosulfaat met de formule 27 of sulfenylthiocyanaat met de formule 28.

In het speciale geval waarin R7 een groep met de formule 29 voorstelt en R, , R^ en R^ dezelfde betekenissen bezitten als<fe overeenkomstige substituenten in de formule 1 en p 30 0 is kunnen de symmetrische disulfiden worden verkregen door direkte oxydatie van een verbinding met de formule 12 met jodium. Wanneer p 1 of 2 is kunnen dergelijke produkten worden verkregen door trapsgewijze oxydatie van de overeenkomstige verbinding, waarin p 0 is.Gemengde disulfiden worden verkregen onder toepassing van de in 35 de voorbeelden beschreven modificatie.

8104048 - 7 -

Produkten met de formule 1 bezitten één of meer asymmetrische koolstof atomen. Wanneer R^, R^ of R^ een andere betekenis bezitten dan waterstof is het koolstofatoom, waaraan deze substituent is vastgehecht, asymmetrisch. Deze koolstofatomen zijn 5 in de formule 1 aangegeven door een sterretje. De verbindingen bestaan daarom in stereo-isomere vormen of in racemische mengsels daarvan. Al deze vormen en mengsels vallen binnen het raam van de uitvinding. Bij de boven beschreven syntheses kunnen als uitgangsmaterialen het racemaat of één van de enantiomeren worden gebruikt. 10 Wanneer het racemisch uitgangsmateriaal wordt gebruikt bij de synthese kunnen de in het produkt verkregen stereo-isomeren worden gescheiden onder toepassing van gebruikelijke chromatografische of gefractioneerde kristallisatie-methodes. In het algemeen is het L-isomeer met betrekking tot het koolstofatoom van het aminozuur 15 de isomere vorm, die de voorkeur geniet. Ook het D-isomeer met betrekking tot het a-koolstofatoom in de acyl-zijketen (dat wil zeggen het koolstofatoom, dat draagt) geniet de voorkeur.

De verbindingen volgens de uitvinding vormen basische zouten met verschillende anorganische en organische basen, 20 welke zouten eveneens binnen het raam van de uitvinding vallen. Dergelijke zouten omvatten ammoniumzouten, alkalimetaalzouten, zoals natrium- en kaliumzouten (die de voorkeur genieten), aardalkali-metaalzouten, zoals de calcium- en magnesiumzouten, zouten met organische basen, bijvoorbeeld het dicyclohexylaminezout, benzathi-25 ne-, N-methyl-D-glucamine-, hydrabamine-zouten, zouten met aminozuren, zoals arginine, lysine en dergelijke. De niet-toxische, fysiologisch aanvaardbare zouten genieten de voorkeur, hoewel andere zouten eveneens bruikbaar zijn, bijvoorbeeld bij de isolatie of zuivering van het produkt, zoals in de voorbeelden geïllustreerd 30 voor het geval van het dicyclohexylaminezout.

De zouten worden op gebruikelijke wijze gevormd door reactie van de vrije zuurvorm van het produkt met één of meer equivalenten van de geschikte base, die het gewenste kation verschaft, in een oplosmiddel of medium, waarin het zout onoplosbaar 35 is, of in water en verwijdering van het water door vriesdrogen.

8104048

W

- 8 - %

Door neutralisatie van het zout met een onoplosbaar zuur, zoals een kationuitwisselaarhars in de waterstofvorm (bijvoorbeeld polystyreen-sulfonzuurhars zoals Dowex 50) of met een waterig zuur en extractie met een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat, dichloor-5 methaan of dergelijke, kan de vrije zuurvorm worden verkregen en desgewenst een einder zout worden gevormd.

Verdere experimentele details zijn aangegeven in de voorbeelden, die voorkeursuitvoeringsvormen beschrijven en eveneens dienen als model voor de bereiding van andere leden van de 10 groep.

De verbinding volgens de uitvinding remmen de omzetting van het decapeptide angiotensine I in angiotensine II en zijn daarom bruikbaar voor het verlagen van de met angiotensine in verband staande hypertensie. Door inwerking van het enzyme renine 15 op angiotensinogeen, een pseudoglobuline in bloedplasma, wordt angiotensine I gevormd, Angiotensine I wordt door angiotensine omzettend enzym (ACE) omgezet in angiotensine II. Dit laatste is een actieve bloeddruk verhogende stof, die beschouwd wordt als de oorzaak van verschillende vormen van hypertensie bij verschillende 20 zoogdiersoorten, bijvoorbeeld ratten en honden. De verbindingen volgens de uitvinding blokkeren de omzetting angiotensine (renine)—* angiotensine I —> angiotensine II door remming van het angiotensine omzettend enzym en vermindering of eliminering van de vorming van het bloeddruk verhogende angiotensine II. Door toediening van een 25 preparaat, bevattende één of meer verbindingen met de formule 1 en/ of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan, kan de door angiotensine veroorzaakte hypertensie bij daaraan lijdende zoogdieren worden verminderd. Eén enkele dosis of bij voorkeur 2-4 dagelijkse deel-doses op basis van ongeveer 0,1-100 mg per kg per dag en bij voor-30 keur ongeveer 1-50 mg per kg per dag is geschikt voor het verlagen van de bloeddruk, zoals blijkt uit de dierproeven, beschreven door S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh en B. Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol, Med., 143, 483 (1973). De stof wordt bij voorkeur oraal toegediend, maar een parenterale toediening, zoals een subcutane, 35 intramusculaire, intraveneuze of intraperitoneale toediening, kan 8104048 - 9 - eveneens «orden toegepast.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor het verlagen van de bloeddruk worden gebruikt in de vorm van preparaten, zoals tabletten, capsules, of elixirs voor orale toe-5 diening. Ongeveer 10-500 mg van een verbinding of mengsel van verbindingen met de formule 1 of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan worden gemengd met fysiologisch aanvaardbare vehikels, dragers, excipiëntia, bindmiddelen, conserveermiddelen, stabili-seermiddelen, smaakmiddelen, etc. onder vorming van een eenheids-10 doseringsvorm als vereist in de farmaceutische praktijk. De hoeveelheid actieve stof in deze preparaten is zodanig, dat een geschikte dosis binnen het boven aangegeven traject wordt verkregen.

Voorbeelden van toevoegsels, die opgenomen kunnen worden in tabletten, capsules en dergelijke, zijn de volgende:een 15 bindmiddel, zoals tragacanthgom, acaciagom, maïszetmeel of gelatine, een excipiënt, zoals dicalciumfosfaat, een desintegreermiddel, zoals maïszetmeel, aardappelzetmeel, alginezuur en dergelijke, een smeermiddel, zoals magnesiumstearaat, een zoetmiddel, zoals saccharose, lactose of saccharine, en een smaakmiddel zoals pepermunt, olie 20 van wintergroen of kersen. Wanneer de eenheidsdoseringsvorm een capsule is kan deze behalve de materialen van het bovengenoemde type bovendien een vloeibare drager, zoals een vette olie, bevatten. Verschillende andere materialen kunnen aanwezig zijn als bekledingen of voor het verder modificeren van de fysische vorm van de eenheids-25 dosis. Zo kunnen bijvoorbeeld tabletten worden bekleed met schellak, suiker of beide. Een stroop of elixir kan de actieve verbinding,sac-eharose als zoetmiddel, methyl- of propyl-parabens als conserveermiddelen, een kleurstof en een smaakmiddel, zoals kersen- of sinaasappelaroma, bevatten.

30 Steriele preparaten voor injectie kunnen volgens gebruikelijke farmaceutische proce-dures worden bereid door oplossen of suspenderen van de actieve stof in een vehikel, zoals water voor injectie, een in de natuur voorkomende plantaardige olie, zoals sesamolie, kokosnootolie, pindaolie, katoenzaadolie, etc., of een 35 synthetis vet-vehikel, zoals ethyloleaat of dergelijke. Indien nodig 8104048 - 10 - kunnen buffer, conserveermiddelen, anti-oxydantia en dergelijke worden opgenomen.

De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet beperkt door de volgende voorbeelden.

5 Voorbeeld I

l-/"~3->/ £ (Ethoxy) thiocarbonyl_/thio__/propanoyl_/-L-azetidine-2-carbonzuur.

Waterig 2 N. natriumhydroxyde (25 ml) en 3-broom-10 propionylchloride (8,5 g) worden toegevoegd aan een oplossing van L-azetidine-2-carbonzuur (6,45 g) in N. natriumhydroxyde (50 ml), afgekoeld en geroerd in een ijsbad. Na 5 min. wordt het ijsbad verwijderd en het roeren bij kamertemperatuur voortgezet. Na 3 uren wordt ethylxanthogeenzuurkaliumzout (9,6 g) toegevoegd en het meng-15 sel wordt gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. De oplossing wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat, De organische laag wordt droogge-dampt en het residu gechromatografeerd over een kolom silicagel met een mengsel van benzeen-azijnzuur (7:1) als oplosmiddel, waarbij de 20 titelverbinding wordt verkregen.

Voorbeeld_II

1-(3-Methylthiopropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

Methyl-3-methylthiopropionaat (51 g) wordt ver-25 zeept met een IQ %'s natriumhydroxyde-oplossing (150 ml, 30 min. bij 100° C). De afgekoelde oplossing wordt geëxtraheerd met ether en vervolgens aangezuurd. Het aldus verkregen ruwe zuur wordt gedestilleerd en omgezet in het zuurchloride met thionylchloride.

Een oplossing van L-azetidine-2-carbonzuur (10,1 30 g) in N.natriumhydroxyde (100 ml) wordt afgekoeld in een ijsbad en 3-methylthiopropaanzuurchloride (6,9 g) wordt druppelsgewijze onder heftig roeren over een periode van 10 min. toegevoegd. Na 5 uren wordt het reactiemengsel aangezuurd en geëxtraheerd met ethylether, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Het dicyclo-35 hexylammoniumzout, wordt bereid door toevoeging van dicyclohexyl- 8104048 - 11 -

amine aan een oplossing van het vrije zuur in ethylacetaat. Voorbeeld_III

1- / 3-(Ethyldithio)propanoyl_/-L-azetidine-2-carbonzuur.

5 3-Mercaptopropanoyl-L-azetidine-2-carbonzuur (9,3 g) wordt toegevoegd aan een oplossing van ethylthiosulfinaat (8,4 g) in methanol (100 ml) en het reactiemengsel wordt heftig geroerd bij kamertemperatuur gedurende 4 uren. De methanol wordt in 10 vacuo verwijderd, waarbij 1-(3-ethyldithiopropanoyl)-L-azetidine- 2- carbonzuur wordt verkregen.

Een oplossing van ethylthiosulfinaat (8,4 g) in ethanol (50 ml) wordt toegevoegd aan een waterige oplossing van 3- mercaptopropanoyl-L-azètidine-2-carbonzuur (9,3 g), die op een 15 pH van 6-7 wordt gehouden door voorzichtig toevoegen van natrium- hydroxyde. Het mengsel wordt heftig geroerd bij kamertemperatuur totdat de reactie op thiol negatief is. Het mengsel wordt verdund met water, ingesteld op pH 8 en geëxtraheerd met ethylacetaat, de waterige fase aangezuurd tot pH 3 en weer geëxtraheerd met ethyl-20 acetaat. Dit laatste extract wordt gewassen met water, gedroogd en drooggedampt, waarbij 1-/ 3-(ethyldithio)propanoyl_y-L-azetidine- 2-carbonzuur wordt verkregen.

Voorbeeld IV

1.1(Dithiobisacetyl)-bis-L-azetidine-2-carbonzuur.

25 1-(2-mercaptoacetyl)-L-azetidine-2-carbonzuur (0,87 g) wordt opgelost in water (20 ml) en de pH wordt met N. natriumhydroxide ingesteld op 6,5. Een ethanolische oplossing van jodium wordt druppelsgewijze toegevoegd onder handhaving van de pH 30 op 6,5 door voorzichtige toevoeging van N. natriumhydroxyde. Wanneer een blijvende gele kleur is verkregen wordt de toevoeging van jodium gestaakt en de kleur verwijderd met een kleine hoeveelheid natrium-thiosulfaat. Het reactiemengsel wordt aangezuur met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische 35 fase wordt gewassen met water, gedroogd en drooggedampt, waarb-ij 8104048 5 - 12 - 1.1(dithiobisacetyl)-bis-L-azetidine-2-carbonzuur wordt verkregen. Het dicyclohexylammoniumzout wordt bereid door toevoeging van di-cyclohexylamine aan een oplossing van het vrije zuur in acetonitril.

8104048

Claims

1. Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R een hydroxy- of 5 aminogroep of een lagere alkoxygroep, en R^ elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep, R2 een lagere alkyl-, fenyl-, gesubstitueerde fenylgroep, waarin de fenylsubstituent een halogeenatoom, lagere alkyl- of lagere alkoxygroep is, een fenyl-lagere alkyl, difenyl-10 lagere alkyl-, trifenyl-lagere alkyl-, lager alkylthiomethyl-, fenyl-lager alkylmethyl-, lagere alkanoylamidomethylgroep, Μ M If II R^-M-C-, R5-NH-C-, Rg-S- of R^ voorstelt, R^ een waterstof-, hydroxy- of lagere alkylgroep is, Rg lagere alkyl, fenyl of fenyl-15 lager alkyl voorstelt, Rg een lagere alkyl-, fenyl-, gesubstitueerde fenyl-, waarin de fenylsubstituent halogeen, lagere alkyl of lagere alkoxy-, hydroxy-lagere alkyl- of amino(carboxy)-lagere alkyl is en een groep met de formule 29, M O of S, m - 1 en n en p elk 0, 1 of 2 is, of een zout daarvan in een voor therapeutische 20 toepassing geschikte vorm brengt.

2, Werkwijze ter bereiding van een verbinding, die geschikt is om bij de werkwijze volgens conclusie 1 te worden toegepast, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R, Rj, R2, R3, R4, m en n dezelfde betekenis hebben als in 25 conclusie 1, op een voor dergelijke verbindingen gebruikelijke wijze bereidt. 30 8104048 V '·*. . Reg.nr.: 115»773 RJl Ri ,i . 1 ,1 l , Rg—S—(CHI — CH—COOH X — (CM),,-CH—COX 16 17 R, Μ M I il II R2-S-(CHi)M—CH- COOH 18 Rr-M-C-Xg Rr-M-C-S-Me^g M RL R-f Rt—N = C=M III 9

21 Rf NH — C S (CH)m CH COOH R J_S_R ^ 24 .lager alkyl— CO — NHCHgOH 0 0*5 I1 • Ri-S-S-Rt RiS —X ¢5 25 26 Rt—S —SOjH (¾— S — SCN 27 * 28 R, (HC)-CH2 Rt Ri ι« I I r R-OC — HC- N-CO - CH -(CH\ —SioL· * * J* K lF 29 E,R, Squibb 4 Son», Inc. te Fiinceton, New Jersey, Ver. ST .v. Amerika 8104048 Rj · ^Reg.nr.: 115.778 R* Rj '»*?—(crt„ ,1 . I I I* 1 R2—S-fCH)-CH — CO— N— CH--C0R V ' ^ ' Y) ^ ?* "ΐ ~ ('H)* 3 HN -=- CH — COR p Rt / » 1 4 R*—S—(chJ^—CH—COOH * RA Rt . R4 Rt X—(Ch)^— CH—COOH 5 CHs-C —COOH g Ri — SH - R\5 Rj „,c-(C«J„ ]0 X—(CH)·* CH—CO N- CH-COR R5 RA Ri HjC-(CH)^ Ri—(ch)„—CH — CO—N —CH—COR ψ 11 r, H*c-(a}„ H S—(ChJ„— CH — CO — N—CH—COR R 12 |* ' Rij Rf H2c (ch)-wi CH — C— CO— N- CH—COR 13 f A Ri ™3-^y-S0!°-(CH\—CH-C00H R R-

14 I 1 15 — S — CH - CH — COOH E.R. Squibb & Sonsj Ine. 8 1 0 4 0 '4 S te Princeton, · New Jersey, Ver.St.V.Amerika